CN109045345A - 一种生物止血粉及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生物止血粉及其制备方法，属于生物医药领域。本发明以木薯淀粉为原料，形成疏松多孔状的结构，加速血小板的凝聚，促进凝血，缩短止血时间；以γ‑聚谷氨酸和氯化钙为原料，通过与钙离子的螯合，制备得到出血位点的螯合添加剂γ‑聚谷氨酸，在伤口部位钙离子的存在有助于促进凝血进一步的加快；以胶原蛋白，加入交联剂京尼平将肝素钠与胶原进行结合，得到表皮促生长添加剂，能够促进出血点伤口的愈合和细胞活化重建，具有优异的修复功能；加入壳聚糖与十二醛，生成席夫碱，减少了介孔添加物残留在血液中的可能性，保证了安全性能，从而降低了对伤口的刺激作用。本发明解决了目前止血粉止血效果差，止血速度慢的问题。

Description

一种生物止血粉及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其是一种生物止血粉及其制备方法。

背景技术

止血是医院各科室手术中的一个重要环节，对于手术的成功和患者的安危起着相当大的作用。正常的止血机理主要包括3个方面：小血管的收缩、血小板的激活和凝血***的启动。其中，小血管的收缩是创伤后止血的最早反应，血管受损后血管平滑肌通过轴突反射使血管收缩、血流减慢，有利于血液凝固和止血。血小板具有粘附于伤口和异物表面的生理功能，在止血初期具有重要意义。粘附的血小板被激活则可能引起更多的血小板聚集，并从其内部释放出大量的促凝物，进而在局部形成血小板血栓来止血。由于环境因素或是人体自身因素，正常止血机理对于人体受伤大面积出血并不能挽救伤员即将消逝的生命。因此，研究迅速止血的止血材料是重要的研究课题。传统的止血材料主要包括急救包、止血带、纱布等。这些辅料只对创面起物理保护作用，功能和效果单一，止血效果欠佳，止血速度不够快，且容易黏连创面。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：针对目前止血粉止血效果差，止血速度慢的问题，提供一种生物止血粉及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

一种生物止血粉，按质量份数计，包括如下组分：10~15份淀粉、4~8份螯合添加剂、2~5份表皮促生长添加剂、15~20份多孔粉末、3~7份介孔添加物。

所述淀粉为：取木薯淀粉按质量比1~3：10~15加入去离子水，升温至75~85℃搅拌混合，冷却至室温，于-60~-50℃真空保温18~24h，重复真空保温过程2~4次，干燥，即得淀粉。

所述螯合添加剂的制备方法，包括如下步骤：

取γ-聚谷氨酸按质量比1~5：80~100加入去离子水，升温至40~45℃搅拌混合，再加入γ-聚谷氨酸质量50~60%的氯化钙搅拌混合，得混合物，取混合物按质量比1~3：8~10加入无水乙醇，静置，取沉淀旋转蒸发，冷冻干燥，即得螯合添加剂。

所述表皮促生长添加剂的制备方法，包括如下步骤：

取胶原蛋白按质量比按质量比1~4：10~20加入MES缓冲液中，于25~30℃搅拌混合，再加入胶原蛋白质量40~50%的京尼平和胶原蛋白质量1~3倍的肝素钠，于2~5℃搅拌混合，再升温至35~40℃搅拌混合，冷冻干燥，即得表皮促生长添加剂。

所述多孔粉末的制备方法，包括如下步骤：

取壳聚糖按质量比1~3：80~100加入醋酸搅拌混合，得混合液，取混合液按质量比2~5：10~20加入无水乙醇，加入混合液质量30~50%的十二醛搅拌混合，调节pH至4~4.5，再加入混合液质量20~30%的硼氢化钠搅拌混合，静置，调节pH至7~7.2，抽滤，取抽滤渣经去离子水洗涤，再经乙醇索氏萃取，取萃取物旋转蒸发、冷冻干燥，即得多孔粉末。

所述介孔添加物的制备方法，包括如下步骤：

取十六烷基三甲基氯化铵按质量比1~3：90~100加入去离子水，升温至65~70℃搅拌混合，通入氮气清洗40~50min，得混合液a，按质量份数计，取2~5份辛烷、1~3份甲基丙烯酸甲酯、0.4~0.7份赖氨酸、30~50份正硅酸乙酯、0.5~0.8份偶氮二异丁腈，通入氮气保护，于65~70℃搅拌混合，冷却至室温，静置，离心，取沉淀于550~660℃煅烧，研磨粉碎过200目筛，收集过筛颗粒，即得介孔添加物。

一种生物止血粉的制备方法，包括如下步骤：

按质量份数计，取10~15份淀粉、4~8份螯合添加剂、2~5份表皮促生长添加剂、15~20份多孔粉末、3~7份介孔添加物混合，粉碎过200目筛，收集过筛颗粒a，即得。

本发明与其他方法相比，有益技术效果是：

（1）本发明以木薯淀粉为原料，经反复冷冻，形成疏松多孔状的结构，在接触到血液中的水分时，吸水膨胀，产生的挤压作用可以作用于出血位点，进行压迫和堵塞，加速血小板的凝聚，促进凝血，缩短止血时间； （2）本发明以γ-聚谷氨酸和氯化钙为原料，通过与钙离子的螯合，制备得到出血位点的螯合添加剂γ-聚谷氨酸是具有水溶性、可生物降解、对人体和环境无毒的氨基酸类物质，对人体没有致敏性，比较安全，其结构上的羧基可以与血液中的Fe3+结合形成血栓，同时钙离子作为人体凝血机制的一个重要凝血因子，在伤口部位钙离子的存在有助于促进凝血进一步的加快； （3）本发明以胶原蛋白，加入交联剂京尼平将肝素钠与胶原进行结合，得到表皮促生长添加剂，其中的肝素钠能够改善创面微循环，有效防止血栓形成，还可以保护并协同机体在创伤局部分泌的表皮生长因子，成纤维细胞生长因子发挥促愈合的作用，通过与胶原的复配，进行表皮细胞的重建，肝素和胶原酶形成复合物，调控胶原纤维的重新排列，使胶原纤维排列更加整齐，使创面逐渐上皮化，能够促进出血点伤口的愈合和细胞活化重建，具有优异的修复功能； （4）本发明加入壳聚糖与十二醛，进行还原胺反应，生成席夫碱，再经硼氢化钠还原得到多孔粉末，形成疏松多孔的结构，海绵的孔道结构有利于氧气和二氧化碳通过，为伤口的愈合创造良好的环境，再加入十六烷基三甲基氯化铵为模版，正硅酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯、赖氨酸等生成的含硅物质，经煅烧脱模版剂，形成介孔硅，其比较面积大，形成的孔径对血液的吸附流通具有较好的作用，能够大量吸附血液，促进凝血作用，壳聚糖表面带正电荷，而形成的介孔添加物带负电荷，形成吸附，减少了介孔添加物残留在血液中的可能性，保证了安全性能，从而降低了对伤口的刺激作用。

具体实施方式

淀粉的制备方法为：

取木薯淀粉按质量比1~3：10~15加入去离子水，升温至75~85℃搅拌混合1~3h，冷却至室温，于-60~-50℃真空保温18~24h，重复真空保温过程2~4次，干燥，即得淀粉；

螯合添加剂的制备方法为：

取γ-聚谷氨酸按质量比1~5：80~100加入去离子水，升温至40~45℃搅拌混合20~30min，再加入γ-聚谷氨酸质量50~60%的氯化钙，于500r/min搅拌混合18~24h，得混合物，取混合物按质量比1~3：8~10加入无水乙醇，静置1~3h，取沉淀旋转蒸发，冷冻干燥，即得螯合添加剂；

表皮促生长添加剂的制备方法为：

取胶原蛋白按质量比按质量比1~4：10~20加入pH5.6、质量分数为5%的MES缓冲液中，于25~30℃搅拌混合30~50min，再加入胶原蛋白质量40~50%的京尼平和胶原蛋白质量1~3倍的肝素钠，于2~5℃搅拌混合30~40min，再升温至35~40℃搅拌混合1~3h，冷冻干燥，即得表皮促生长添加剂；

多孔粉末的制备方法为：

取壳聚糖按质量比1~3：80~100加入质量分数为1%的醋酸，搅拌混合20~30min，得混合液，取混合液按质量比2~5：10~20加入无水乙醇，加入混合液质量30~50%的十二醛，搅拌混合1~3h，调节pH至4~4.5，再加入混合液质量20~30%的硼氢化钠，搅拌混合2~4h，静置30~50min，调节pH至7~7.2，抽滤，取抽滤渣经去离子水洗涤，再经乙醇索氏萃取，取萃取物旋转蒸发、冷冻干燥，即得多孔粉末；

介孔添加物的制备方法为：

取十六烷基三甲基氯化铵按质量比1~3：90~100加入去离子水，升温至65~70℃搅拌混合1~3h，通入氮气清洗40~50min，得混合液a，按质量份数计，取2~5份辛烷、1~3份甲基丙烯酸甲酯、0.4~0.7份赖氨酸、30~50份正硅酸乙酯、0.5~0.8份偶氮二异丁腈，通入氮气保护，于65~70℃搅拌混合2~4h，冷却至室温，静置8~10h，离心，取沉淀于550~660℃煅烧4~6h，研磨粉碎过200目筛，收集过筛颗粒，即得介孔添加物；

一种生物止血粉的制备方法，包括如下步骤：

按质量份数计，取10~15份淀粉、4~8份螯合添加剂、2~5份表皮促生长添加剂、15~20份多孔粉末、3~7份介孔添加物混合，粉碎过200目筛，收集过筛颗粒a，即得。

实施例1

淀粉的制备方法为：

取木薯淀粉按质量比1：10加入去离子水，升温至75℃搅拌混合1h，冷却至室温，于-60℃真空保温18h，重复真空保温过程2次，干燥，即得淀粉；

螯合添加剂的制备方法为：

取γ-聚谷氨酸按质量比1：80加入去离子水，升温至40℃搅拌混合20min，再加入γ-聚谷氨酸质量50%的氯化钙，于500r/min搅拌混合18h，得混合物，取混合物按质量比1：8加入无水乙醇，静置1h，取沉淀旋转蒸发，冷冻干燥，即得螯合添加剂；

表皮促生长添加剂的制备方法为：

取胶原蛋白按质量比按质量比1：10加入pH5.6、质量分数为5%的MES缓冲液中，于25℃搅拌混合30min，再加入胶原蛋白质量40%的京尼平和胶原蛋白质量1倍的肝素钠，于2℃搅拌混合30min，再升温至35℃搅拌混合1h，冷冻干燥，即得表皮促生长添加剂；

多孔粉末的制备方法为：

取壳聚糖按质量比1：80加入质量分数为1%的醋酸，搅拌混合20min，得混合液，取混合液按质量比2：10加入无水乙醇，加入混合液质量30%的十二醛，搅拌混合1h，调节pH至4，再加入混合液质量20%的硼氢化钠，搅拌混合2h，静置30min，调节pH至7，抽滤，取抽滤渣经去离子水洗涤，再经乙醇索氏萃取，取萃取物旋转蒸发、冷冻干燥，即得多孔粉末；

介孔添加物的制备方法为：

取十六烷基三甲基氯化铵按质量比1：90加入去离子水，升温至65℃搅拌混合1h，通入氮气清洗40min，得混合液a，按质量份数计，取2份辛烷、1份甲基丙烯酸甲酯、0.4份赖氨酸、30份正硅酸乙酯、0.5份偶氮二异丁腈，通入氮气保护，于65℃搅拌混合2h，冷却至室温，静置8h，离心，取沉淀于550℃煅烧4h，研磨粉碎过200目筛，收集过筛颗粒，即得介孔添加物；

一种生物止血粉的制备方法，包括如下步骤：

按质量份数计，取10份淀粉、4份螯合添加剂、2份表皮促生长添加剂、15份多孔粉末、3份介孔添加物混合，粉碎过200目筛，收集过筛颗粒a，即得。

实施例2

淀粉的制备方法为：

取木薯淀粉按质量比3：15加入去离子水，升温至85℃搅拌混合3h，冷却至室温，于-50℃真空保温24h，重复真空保温过程4次，干燥，即得淀粉；

螯合添加剂的制备方法为：

取γ-聚谷氨酸按质量比5：100加入去离子水，升温至45℃搅拌混合30min，再加入γ-聚谷氨酸质量60%的氯化钙，于500r/min搅拌混合24h，得混合物，取混合物按质量比3：10加入无水乙醇，静置3h，取沉淀旋转蒸发，冷冻干燥，即得螯合添加剂；

表皮促生长添加剂的制备方法为：

取胶原蛋白按质量比按质量比4：20加入pH5.6、质量分数为5%的MES缓冲液中，于30℃搅拌混合50min，再加入胶原蛋白质量50%的京尼平和胶原蛋白质量3倍的肝素钠，于5℃搅拌混合40min，再升温至40℃搅拌混合3h，冷冻干燥，即得表皮促生长添加剂；

多孔粉末的制备方法为：

取壳聚糖按质量比3：100加入质量分数为1%的醋酸，搅拌混合30min，得混合液，取混合液按质量比5：20加入无水乙醇，加入混合液质量50%的十二醛，搅拌混合3h，调节pH至4.5，再加入混合液质量30%的硼氢化钠，搅拌混合4h，静置50min，调节pH至7.2，抽滤，取抽滤渣经去离子水洗涤，再经乙醇索氏萃取，取萃取物旋转蒸发、冷冻干燥，即得多孔粉末；

介孔添加物的制备方法为：

取十六烷基三甲基氯化铵按质量比3：100加入去离子水，升温至70℃搅拌混合3h，通入氮气清洗50min，得混合液a，按质量份数计，取5份辛烷、3份甲基丙烯酸甲酯、0.7份赖氨酸、50份正硅酸乙酯、0.8份偶氮二异丁腈，通入氮气保护，于70℃搅拌混合4h，冷却至室温，静置10h，离心，取沉淀于660℃煅烧6h，研磨粉碎过200目筛，收集过筛颗粒，即得介孔添加物；

一种生物止血粉的制备方法，包括如下步骤：

按质量份数计，取15份淀粉、8份螯合添加剂、5份表皮促生长添加剂、20份多孔粉末、7份介孔添加物混合，粉碎过200目筛，收集过筛颗粒a，即得。

实施例3

淀粉的制备方法为：

取木薯淀粉按质量比2：13加入去离子水，升温至80℃搅拌混合2h，冷却至室温，于-55℃真空保温22h，重复真空保温过程3次，干燥，即得淀粉；

螯合添加剂的制备方法为：

取γ-聚谷氨酸按质量比3：85加入去离子水，升温至43℃搅拌混合25min，再加入γ-聚谷氨酸质量55%的氯化钙，于500r/min搅拌混合22h，得混合物，取混合物按质量比2：9加入无水乙醇，静置2h，取沉淀旋转蒸发，冷冻干燥，即得螯合添加剂；

表皮促生长添加剂的制备方法为：

取胶原蛋白按质量比按质量比3：17加入pH5.6、质量分数为5%的MES缓冲液中，于27℃搅拌混合40min，再加入胶原蛋白质量45%的京尼平和胶原蛋白质量2倍的肝素钠，于3℃搅拌混合35min，再升温至37℃搅拌混合2h，冷冻干燥，即得表皮促生长添加剂；

多孔粉末的制备方法为：

取壳聚糖按质量比2：90加入质量分数为1%的醋酸，搅拌混合25min，得混合液，取混合液按质量比3：17加入无水乙醇，加入混合液质量40%的十二醛，搅拌混合2h，调节pH至4.3，再加入混合液质量25%的硼氢化钠，搅拌混合3h，静置40min，调节pH至7.1，抽滤，取抽滤渣经去离子水洗涤，再经乙醇索氏萃取，取萃取物旋转蒸发、冷冻干燥，即得多孔粉末；

介孔添加物的制备方法为：

取十六烷基三甲基氯化铵按质量比2：95加入去离子水，升温至68℃搅拌混合2h，通入氮气清洗45min，得混合液a，按质量份数计，取3份辛烷、2份甲基丙烯酸甲酯、0.5份赖氨酸、40份正硅酸乙酯、0.6份偶氮二异丁腈，通入氮气保护，于68℃搅拌混合3h，冷却至室温，静置9h，离心，取沉淀于600℃煅烧5h，研磨粉碎过200目筛，收集过筛颗粒，即得介孔添加物；

一种生物止血粉的制备方法，包括如下步骤：

按质量份数计，取13份淀粉、6份螯合添加剂、3份表皮促生长添加剂、17份多孔粉末、5份介孔添加物混合，粉碎过200目筛，收集过筛颗粒a，即得。

对比例1：与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少淀粉。

对比例2：与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少螯合添加剂。

对比例3：与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少表皮促生长添加剂。

对比例4：与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少多孔粉末。

对比例5：与实施例2的制备方法基本相同，唯有不同的是缺少介孔添加物。

对比例6：青岛市某公司生产的生物止血粉。

将上述为进一步说明本发明所制备的生物止血粉具有更优异的止血活性，进行以下两个对比实验，具体操作如下：

实施例生物止血粉与对比例止血粉做小鼠断尾止血效果对比实验，具体操作如下：①分别称取0.1g实施例制得的生物止血粉样品和0.1g对比例止血粉，分别置于展示瓶中，灭菌备用；②取五只同批次的小鼠，称重，量尾长；③用手术剪去小鼠尾长的三分之一后，立即将断尾伤口***展示瓶中，同时计时。计算血流停止时的小鼠出血量。

将实施例生物止血粉与对比例止血粉做体外凝血效果对比实验：

①大鼠称取重量，根据重量计算所需麻醉剂的量，腹腔注射10%水合氯醛；

②大鼠麻醉之后，打开胸腔，用注射器采集心脏血液，注入抗凝管中，备用；

③将称好的实施例生物止血粉和对比例止血粉各4mg加入试管中，再向其中加入1.8mL抗凝全血溶液，最后向其中加入0.18mL的CaCl₂溶液，开始计时；

④观察血液变化，直至血液出现明显凝固状态，停止计时，记录下凝血时间，每个样品测三个平行样。得到的结果如下表1所示：

表1：

综合上述，本发明的生物止血粉效果更好，值得推广使用。

Claims (7)

1.一种生物止血粉，其特征在于，按质量份数计，包括如下组分：10~15份淀粉、4~8份螯合添加剂、2~5份表皮促生长添加剂、15~20份多孔粉末、3~7份介孔添加物。

2.根据权利要求1所述的生物止血粉，其特征在于，所述淀粉为：取木薯淀粉按质量比1~3：10~15加入去离子水，升温至75~85℃搅拌混合，冷却至室温，于-60~-50℃真空保温18~24h，重复真空保温过程2~4次，干燥，即得淀粉。

3.根据权利要求1所述的生物止血粉，其特征在于，所述螯合添加剂的制备方法，包括如下步骤：

取γ-聚谷氨酸按质量比1~5：80~100加入去离子水，升温至40~45℃搅拌混合，再加入γ-聚谷氨酸质量50~60%的氯化钙搅拌混合，得混合物，取混合物按质量比1~3：8~10加入无水乙醇，静置，取沉淀旋转蒸发，冷冻干燥，即得螯合添加剂。

4.根据权利要求1所述的生物止血粉，其特征在于，所述表皮促生长添加剂的制备方法，包括如下步骤：

取胶原蛋白按质量比按质量比1~4：10~20加入MES缓冲液中，于25~30℃搅拌混合，再加入胶原蛋白质量40~50%的京尼平和胶原蛋白质量1~3倍的肝素钠，于2~5℃搅拌混合，再升温至35~40℃搅拌混合，冷冻干燥，即得表皮促生长添加剂。

5.根据权利要求1所述的生物止血粉，其特征在于，所述多孔粉末的制备方法，包括如下步骤：

取壳聚糖按质量比1~3：80~100加入醋酸搅拌混合，得混合液，取混合液按质量比2~5：10~20加入无水乙醇，加入混合液质量30~50%的十二醛搅拌混合，调节pH至4~4.5，再加入混合液质量20~30%的硼氢化钠搅拌混合，静置，调节pH至7~7.2，抽滤，取抽滤渣经去离子水洗涤，再经乙醇索氏萃取，取萃取物旋转蒸发、冷冻干燥，即得多孔粉末。

6.根据权利要求1所述的生物止血粉，其特征在于，所述介孔添加物的制备方法，包括如下步骤：

取十六烷基三甲基氯化铵按质量比1~3：90~100加入去离子水，升温至65~70℃搅拌混合，通入氮气清洗40~50min，得混合液a，按质量份数计，取2~5份辛烷、1~3份甲基丙烯酸甲酯、0.4~0.7份赖氨酸、30~50份正硅酸乙酯、0.5~0.8份偶氮二异丁腈，通入氮气保护，于65~70℃搅拌混合，冷却至室温，静置，离心，取沉淀于550~660℃煅烧，研磨粉碎过200目筛，收集过筛颗粒，即得介孔添加物。

7.一种如权利要求1~6任意一项所述的生物止血粉的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

按质量份数计，取10~15份淀粉、4~8份螯合添加剂、2~5份表皮促生长添加剂、15~20份多孔粉末、3~7份介孔添加物混合，粉碎过200目筛，收集过筛颗粒a，即得。