CN109022527A - 一种具有降血压作用的藜麦多肽及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有降血压作用的藜麦多肽及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：采用碱提酸沉法从脱脂藜麦粉中提取藜麦蛋白，经复合酶解、超滤、脱盐，最后真空浓缩、冷冻干燥得到藜麦降血压活性肽。本发明的方法通过以藜麦为原料，采用食品级胃蛋白酶和胰蛋白酶复合酶解藜麦蛋白制备降血压活性肽，生产工艺简单，食用安全性高，且该藜麦活性肽能够有效抑制血管紧张素转化酶活性，降血压效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域，特别涉及一种具有降血压作用的藜麦多肽及其制备方法。
背景技术
藜麦是一种原产于南美洲的粮食作物，因其广谱的环境适应性和极高的营养价值受到世界各地的普遍关注。近年来，我国山西、吉林、青海、甘肃、河北、西藏、黑龙江、内蒙古、四川、山东、江苏、安徽、贵州等地区先后进行了藜麦的大规模引种栽培。藜麦籽粒中蛋白质平均含量为12％～23％，必需氨基酸含量高于普通谷物，可作为食物中的优质蛋白质来源。蛋白质在人体内需经胃蛋白酶、胰蛋白酶等酶代谢消化后变成小分子肽，方可被人体吸收利用。研究藜麦多肽的活性作用，对明确藜麦的生物功能活性，充分利用藜麦蛋白资源，开发藜麦功能产品具有重要意义。
高血压是一种常见的心血管疾病，血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂能阻止具有强烈收缩血管作用的血管紧张素Ⅱ的生成，是现今治疗高血压的主要有效药物。天然食品来源的ACE抑制肽是生物活性肽研究领域的一大热点，采用不同蛋白酶降解蛋白质来制备ACE抑制肽，具有生产成本相对较低，反应条件温和，产品安全性较高等特点，是目前制备ACE抑制肽最常用的生产方法。
目前已从牛奶蛋白、鱼类蛋白、大豆蛋白等食物资源中分离出具有ACE抑制活性的多肽，但有关藜麦多肽降血压活性的研究鲜有报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种一种具有降血压作用的藜麦多肽及其制备方法，该方法能够快速、高效地制备具有降血压作用的藜麦多肽，其生产工艺简单、食用安全性高。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
一种具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，包括以下步骤：采用碱提酸沉法从脱脂藜麦粉中提取藜麦蛋白，经复合酶解、超滤、脱盐，最后真空浓缩、冷冻干燥得到藜麦降血压活性肽。
优选地，上述技术方案中，所述制备方法包括以下步骤：
1)蛋白提取：将原料脱脂藜麦粉与适量的水混合，调节pH至9～10，恒温振荡提取1-2h，离心，取上清液；调节上清液pH至4～5，静置、离心，取沉淀；沉淀加少量水溶解后调节pH至中性，冷冻干燥，得藜麦蛋白粗提物；
2)蛋白酶解：取步骤1)的藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2，加入胃蛋白酶，在30℃～50℃水浴振荡30～60min，得到藜麦蛋白胃蛋白酶水解液；调节藜麦蛋白胃蛋白酶水解液的pH至8，加入胰蛋白酶(胰蛋白酶发挥活性的最适pH)，在30℃～50℃水浴振荡30～60min，95℃加热10min灭活蛋白酶，离心取上清液，得到藜麦多肽粗提液；
3)超滤脱盐：将步骤2)得到的藜麦多肽粗提液依次通过滤膜和超滤膜，透过液脱盐后，经真空浓缩、冷冻干燥得到藜麦多肽。通过滤膜以除去可能残留的蛋白质、多糖等大分子物质，再通过超滤膜，得到分子量小于5kDa的多肽溶液(大分子量多肽的生理活性较差)。
优选地，上述技术方案中，所述步骤1)中，所述脱脂藜麦粉与所述水的质量比为1：(10～15)。所述的碱提酸沉pH值由藜麦蛋白粗提物的得率优化确定。
优选地，上述技术方案中，所述步骤2)所述的胃蛋白酶和胰蛋白酶均为食品级酶。
优选地，上述技术方案中，所述步骤2)的酶解时间由酶解液的ACE抑制活性选择确定。
优选地，上述技术方案中，所述步骤3)所述的滤膜为0.45μm滤膜。
优选地，上述技术方案中，所述步骤3)的超滤膜截留分子量由滤液的ACE抑制活性选择确定。
优选地，上述技术方案中，所述步骤3)的超滤膜的截留分子质量5kDa。
一种具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法制备得到的藜麦多肽
一种具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法制备得到的藜麦多肽的应用，应用于制备具有降血压功能的药品或食品。
本发明上述技术方案，具有如下有益效果：
本发明提供了一种能够快速高效地制备藜麦降血压活性肽的方法，其是以藜麦为原料，采用食品级胃蛋白酶和胰蛋白酶复合酶解藜麦蛋白制备降血压活性肽，生产工艺简单，食用安全性高，且该藜麦活性肽能够有效抑制血管紧张素转化酶活性，降血压效果显著。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施例进行详细描述，以便于进一步理解本发明。
以下实施例中所有使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。以下实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
实施例1
一种具有降血压作用的藜麦多肽，其制备方法如下：
(1)藜麦籽粒清水冲洗至没有泡沫，烘干粉碎，正己烷脱脂，取100g置于锥形瓶中，加入1200mL蒸馏水，调节pH至9.86，在室温条件下磁力搅拌提取两次，每次30min；合并两次滤液，调节pH至4.91，于4℃静置30min，离心，取沉淀；加少量水使沉淀溶解，调节pH至7.02，冷冻干燥得到藜麦蛋白粗提物。
(2)取藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2.04，以1:20的比例加入食品级胃蛋白酶，40.3℃水解30min，再调节pH至8.10，加入食品级胰蛋白酶，40.1℃水解30min，95℃水浴加热5min，迅速冷却后离心，取上清液。
(3)将藜麦多肽粗提液过0.45um滤膜后，通过超滤膜截留分子质量小于5kDa的藜麦多肽，透析脱盐，经真空浓缩、冷冻干燥即得藜麦降血压活性肽。
实施例2
一种具有降血压作用的藜麦多肽，其制备方法如下：
(1)藜麦籽粒清水冲洗至没有泡沫，烘干粉碎，正己烷脱脂，取200g置于锥形瓶中，加入2000mL蒸馏水，调节pH至9.53，在室温条件下磁力搅拌提取两次，每次30min；合并两次滤液，调节pH至4.26，于4℃静置30min，离心，取沉淀；加少量水使沉淀溶解，调节pH至6.97，冷冻干燥得到藜麦蛋白粗提物。
(2)取藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2.11，以1:20的比例加入食品级胃蛋白酶，36.7℃水解40min，再调节pH至8.07，加入食品级胰蛋白酶，37.1℃水解40min，95℃水浴加热5min，迅速冷却后离心，取上清液。
(3)将藜麦多肽粗提液过0.45um滤膜后，通过超滤膜截留分子质量小于5kDa的藜麦多肽，透析脱盐，经真空浓缩、冷冻干燥即得藜麦降血压活性肽。
实施例3
一种具有降血压作用的藜麦多肽，其制备方法如下：
(1)藜麦籽粒清水冲洗至没有泡沫，烘干粉碎，正己烷脱脂，取200g置于锥形瓶中，加入2500mL蒸馏水，调节pH至9.5，在室温条件下磁力搅拌提取60min；离心，取上清液，调节上清液pH至4.5，于4℃静置30min，离心，取沉淀；加少量水使沉淀溶解，调节pH至7，冷冻干燥得到藜麦蛋白粗提物。
(2)取藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2，以1:15的比例加入食品级胃蛋白酶，40℃水解45min，再调节pH至8，加入食品级胰蛋白酶，40℃水解45min，95℃水浴加热10min，迅速冷却后离心，取上清液。
(3)将藜麦多肽粗提液过0.45um滤膜后，通过超滤膜截留分子质量小于5kDa的藜麦多肽，透析脱盐，经真空浓缩、冷冻干燥即得藜麦降血压活性肽。
实施例4
一种具有降血压作用的藜麦多肽，其制备方法如下：
(1)藜麦籽粒清水冲洗至没有泡沫，烘干粉碎，正己烷脱脂，取200g置于锥形瓶中，加入2000mL蒸馏水，调节pH至9，在室温条件下磁力搅拌提取1h；离心，取上清液；调节上清液pH至4，于4℃静置30min，离心，取沉淀；加少量水使沉淀溶解，调节pH至6.97，冷冻干燥得到藜麦蛋白粗提物。
(2)取藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2，以1:20的比例加入食品级胃蛋白酶，30℃水解60min，再调节pH至8，加入食品级胰蛋白酶，50℃水解30min，95℃水浴加热10min，迅速冷却后离心，取上清液。
(3)将藜麦多肽粗提液过0.45um滤膜后，通过超滤膜截留分子质量小于5kDa的藜麦多肽，透析脱盐，经真空浓缩、冷冻干燥即得藜麦降血压活性肽。
实施例5
一种具有降血压作用的藜麦多肽，其制备方法如下：
(1)藜麦籽粒清水冲洗至没有泡沫，烘干粉碎，正己烷脱脂，取200g置于锥形瓶中，加入3000mL蒸馏水，调节pH至10，在室温条件下磁力搅拌提取2h，离心，取上清液；调节上清液pH至5，于4℃静置30min，离心，取沉淀；加少量水使沉淀溶解，调节pH至7，冷冻干燥得到藜麦蛋白粗提物。
(2)取藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2，以1:20的比例加入食品级胃蛋白酶，50℃水解30min，再调节pH至8，加入食品级胰蛋白酶，50℃水解30min，95℃水浴加热10min，迅速冷却后离心，取上清液。
(3)将藜麦多肽粗提液过0.45um滤膜后，通过超滤膜截留分子质量小于5kDa的藜麦多肽，透析脱盐，经真空浓缩、冷冻干燥即得藜麦降血压活性肽。
下面通过体外实验检测上述所制备的藜麦多肽的降血压活性(ACE酶抑制活性)，以具体说明本发明的有益效果；
表1藜麦多肽样品的ACE抑制活性
| 样品 | IC50(mg/mL) |
| 实施例1 | 0.187 |
| 实施例2 | 0.203 |
| 实施例3 | 0.201 |
| 实施例4 | 0.195 |
| 实施例5 | 0.199 |
实验结果证明(如表1所示)，藜麦蛋白经复合酶解、超滤后得到的小分子肽能有效抑制ACE活性。
因此，根据本发明制备方法制备得到的藜麦多肽，可作为有效活性成分进一步开发成具有降血压作用的功能食品或药品。
虽然本发明已以实施例公开如上，然其并非用于限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种不同的选择和修改，因此本发明的保护范围由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (10)
1.一种具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：采用碱提酸沉法从脱脂藜麦粉中提取藜麦蛋白，经复合酶解、超滤、脱盐，最后真空浓缩、冷冻干燥得到藜麦降血压活性肽。
2.根据权利要求1所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
1)蛋白提取：将原料脱脂藜麦粉与适量的水混合，调节pH至9～10，恒温振荡提取1-2h，离心，取上清液；调节上清液pH至4～5，静置、离心，取沉淀；沉淀加少量水溶解后调节pH至中性，冷冻干燥，得藜麦蛋白粗提物；
2)蛋白酶解：取步骤1)的藜麦蛋白粗提物，加水溶解，调节pH至2，加入胃蛋白酶，在30℃～50℃水浴振荡30～60min，得到藜麦蛋白胃蛋白酶水解液；调节藜麦蛋白胃蛋白酶水解液的pH至8，加入胰蛋白酶，在30℃～50℃水浴振荡30～60min，95℃加热10min灭活蛋白酶，离心取上清液，得到藜麦多肽粗提液；
3)超滤脱盐：将步骤2)得到的藜麦多肽粗提液依次通过滤膜和超滤膜，透过液脱盐后，经真空浓缩、冷冻干燥得到藜麦多肽。
3.根据权利要求2所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述脱脂藜麦粉与所述水的质量比为1：(10～15)。
4.根据权利要求2所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)所述的胃蛋白酶和胰蛋白酶均为食品级酶。
5.根据权利要求2所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)的酶解时间由酶解液的ACE抑制活性选择确定。
6.根据权利要求2所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3)所述的滤膜为0.45μm滤膜。
7.根据权利要求2所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的超滤膜截留分子量由滤液的ACE抑制活性选择确定。
8.根据权利要求7所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的超滤膜的截留分子质量5kDa。
9.根据权利要求1-8任一所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法制备得到的藜麦多肽。
10.根据权利要求1-4任一所述的具有降血压作用的藜麦多肽的制备方法制备得到的藜麦多肽的应用，应用于制备具有降血压功能的药品或食品。
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