CN108956842A - 一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法 - Google Patents
一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，在4块薄层板上，4种不同的检视条件下，鉴别了6味药材，检视了10余种中药成分斑点；各斑点清晰，它们相互交叉，但不同层次的成分，又互不干扰。该水提取制剂中薄层鉴别增订率为100％。全部鉴别只需样品0.5g、提取溶剂与展开剂67ml、时间3小时。方法简便、快捷、高效的全药味薄层鉴别，目前还未见相同报道。为当归建中汤冻干粉的质量控制，提供了简便、快捷的薄层鉴别方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法。
背景技术
在中药复方制剂中，特别是传统水煎煮的复方制剂，依据相似相容的提取原则，制剂中脂溶性的成分大部分是很难提取到的，水溶性成分提取的较多，相互干扰严重，水提取之后，原药材项下以脂溶性成分的薄层鉴别，有的已无法采用，必须寻找水溶性成分的鉴别特征点，限于技术的难度，所以其水提取制剂的薄层鉴别增订率低，定量测定指标少。以2015年版中国药典一部为例，收载的水煎煮的乙肝宁颗粒，由十三味中药组成，仅增订了4味药材的薄层鉴别。不但鉴别增订率低，且鉴别方法也非常繁琐、复杂，4项鉴别的完成需要样品85g或15g(含乳糖)、仅前处理溶剂386ml、时间10～12小时。4项鉴别要制备4种供试品溶液，在4块薄层板上，4次展开完成；收载的二丁颗粒，由4味药材组成，仅增订了一项薄层鉴别。其前处理需要样品15g或3g(含乳糖)、处理溶剂82ml、时间2小时；收载的儿宝颗粒，由十一味药材组成，增订了4味药材的薄层鉴别。且鉴别方法也非常繁琐、复杂，4项鉴别要制备3种供试品溶液，在4块薄层板上，4次展开完成。共需要样品80g、仅前处理溶剂295ml、时间8小时。如果加上展开剂和展开时间，花费的总有机溶剂和时间就更多了。等等，类似例子举不胜举。
综上，薄层鉴别基本都是一个品种，如有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。这样，一个含6～7项薄层鉴别和二项含量测定的质量标准检测完成，一般要花费一周的时间，如遇复试，时间翻倍，检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找水提取制剂的简便、快捷检测方法、提高检测效率、降低检测成本，是中药质量控制必须突破的难关。
当归建中汤是国家中医药管理局公布的经典名方，由当归、桂枝、甘草、白芍、生姜和大枣六味药材，其处方配比和提取工艺如下：
处方：当归四两，桂心三两，甘草二两(炙)，芍药六两，生姜三两，大枣十二枚(擘)。
制法：右六味，咀，以水一斗，煮取三升，取煮取液，浓缩，冷冻干燥，得冻干粉(名词解释：右是指按古代从右向左，从上向下的书写格式，将右侧处方中的药材，捣碎的意思，咀是指捣碎的意思)。
为确保制剂的质量，对当归建中汤进行了薄层鉴别研究。
发明内容
本发明就是针对目前一个品种，如有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。通过展开剂的不同组合与其比例、显色剂、薄层载体以及检测条件等参数研究，创建了采用同一供试品溶液，在4块薄层板上，4种不同的检视条件下，鉴别了6味药材，检视了10余种中药成分斑点的一测多评薄层鉴别新模式。各斑点清晰，它们相互交叉，但不同层次的成分，又互不干扰。本制剂中薄层鉴别增订率为100％。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
A.取当归建中汤冻干粉0.5g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取干姜对照药材0.1g，加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；再取6-姜辣素对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材溶液5～6μl、对照品溶液2～3μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比5∶3.5∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比1∶8的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至干姜斑点清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点(图1)；
B.取白芍对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为对照药材溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5μl、对照药材溶液5～8μl、A项下的供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比12.5∶2.2∶1∶0.3的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比1∶8的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下或暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的颜色主斑点(图2、3)；
C.取当归对照药材0.1g，加甲醇4ml超声处理20分钟，取上清液作为对照药材溶液；另取桂枝0.3g,加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇0.5ml，使溶解，作为桂枝对照药材溶液；吸取当归对照药材溶液2～3μl、桂枝对照药材15μl、A项下的供试品溶液10～12μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点(图4)；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与桂枝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点(图5)；
D.取大枣对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；再取甘草对照药材0.1g，加甲醇3ml超声处理20分钟，离心，上清液作为甘草对照药材溶液；吸取甘草对照药材溶液2～3μl、大枣对照药材4～5μl、A项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-己酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同的绿色荧光主斑点(图6)；日光下检视，在与大枣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点(图7)。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再用不同组分、不同配比、不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但通过不同的显色手段，使其在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。实现简便、快捷、低成本、高效率的薄层愿望。
本发明的创新点及有益效果如下：
用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，在4块薄层板上，4种不同的检视条件下，鉴别了6味药材，检视了10余种中药成分斑点；各斑点清晰，它们相互交叉，但不同层次的成分，又互不干扰。做到了水提取复方制剂中薄层鉴别增订率为100％。全部鉴别只需样品0.5g、提取溶剂与展开剂67ml、时间3小时。方法简便、快捷、高效，同一供试品溶液，完成全药味的薄层鉴别，目前还未见相同报道。
2.以体积比5∶3.5∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开干姜，其创新之处就在于本展开剂为碱性的，可以与复方制剂中当归和甘草中的阿魏酸、甘草酸等酸性成分成盐，减缓其吸附、解吸附能力，使待鉴别的成分得到净化，一个六味中药组成的复方制剂，不需任何处理步骤，直接同甲醇超声的滤液，在其展开的薄层板上仅呈现了生姜的两个主斑点，斑点清晰，无背景干扰。利用展开剂的组分、比例、酸碱特性，排除干扰的技术，具有创新性和实用性。
3.以体积比8∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开当归和桂枝，展开后，当归直接置紫外光灯365nm下检视亮蓝色荧光主斑点；桂枝置紫外光灯254nm下检视棕褐色主斑点；仅利用当归和桂枝中待检测成分的自身性质，即能做出准确的检测判断，不需进行任何显色反应，绿色环保，为首次报道。
4.以体积比1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-己酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开甘草和大枣，展开的都是水溶性的成分，这些成分和10％硫酸溶液反应后，甘草在紫外光灯365nm下检视，呈现出绿色荧光主斑点，而大枣无荧光斑点；大枣在日光下检视呈现一个棕褐色主斑点，而甘草又基本无斑点；不同的检视条件下检视各药材的特征斑点，斑点清晰，易判断。而且大枣的水溶性成分斑点含量高，对照药材取样量少，只需0.2g，为药典取样量的1/10之一，干扰成分随之也降到1/10,使最终展开的薄层板上检视到的主斑点只有甘草和大枣，具有创造性和实用性，为首次报道。
5.与背景技术项下例举的传统薄层鉴别相比，不但做到了制剂中味味药材有鉴别，且该鉴别完成，只需样品0.5g、提取溶剂与展开剂67ml、时间3小时。方法简便、快捷、低成本、高相率，无有机溶剂蒸发、浓缩，带来的环境污染。具新颖性、创新性和实用性，产生了节资、增效、全方位监督生产投料的显著有益效果。
附图说明
图1为当归建中汤冻干粉香草醛硫酸乙醇溶液显色后，暗室内通过灯光检视的生姜TLC图。
图2为当归建中汤冻干粉香草醛硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的白芍TLC图。
图3为当归建中汤冻干粉香草醛硫酸乙醇溶液显色后，暗室内通过灯光检视的白芍TLC图。
图4为当归建中汤冻干粉紫外光灯365nm下检视的当归TLC图。
图5为当归建中汤冻干粉紫外光灯254nm下检视的桂枝TLC图。
图6为当归建中汤冻干粉硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯254nm下检视的甘草TLC图。
图7为当归建中汤冻干粉硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的大枣TLC图。
图1中，1.2.3样品4.干姜对照药材5.6-姜辣素。
图2、3为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3样品4.空白样品5.白芍对照药材6.芍药苷对照品
图4、5为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.桂枝空白2.桂枝对照药材3.4.5样品6.当归对照药材7.当归空白。
图6、7为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.大枣空白2.大枣对照药材3.4.5样品6.甘草对照药材7.甘草空白。
本发明具体实施方式如下：
A.取当归建中汤冻干粉0.5g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取干姜对照药材0.1g，加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；再取6-姜辣素对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材溶液5～6μl、对照品溶液2～3μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比5∶3.5∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比1∶8的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至干姜斑点清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点；
B.取白芍对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为对照药材溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5μl、对照药材溶液5～8μl、A项下的供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比12.5∶2.2∶1∶0.3的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比1∶8的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下或暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的颜色主斑点；
C.取当归对照药材0.1g，加甲醇4ml超声处理20分钟，取上清液作为对照药材溶液；另取桂枝0.3g,加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇0.5ml，使溶解，作为桂枝对照药材溶液；吸取当归对照药材溶液2～3μl、桂枝对照药材15μl、A项下的供试品溶液10～12μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与桂枝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
D.取大枣对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；再取甘草对照药材0.1g，加甲醇3ml超声处理20分钟，离心，上清液作为甘草对照药材溶液；吸取甘草对照药材溶液2～3μl、大枣对照药材4～5μl、A项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-己酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同的绿色荧光主斑点；日光下检视，在与大枣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
Claims (2)
1.一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法，其特征在于：
A.取当归建中汤冻干粉0.5g，加甲醇2ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取干姜对照药材0.1g，加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；再取6-姜辣素对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材溶液5～6μl、对照品溶液2～3μl、供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比5∶3.5∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比1∶8的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至干姜斑点清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点；
B.取白芍对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，上清液作为对照药材溶液；另取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5μl、对照药材溶液5～8μl、A项下的供试品溶液8～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比12.5∶2.2∶1∶0.3的醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以体积比1∶8的5％的香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下或暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点；
C.取当归对照药材0.1g，加甲醇4ml超声处理20分钟，取上清液作为对照药材溶液；另取桂枝0.3g,加水30ml，小火煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇0.5ml，使溶解，作为桂枝对照药材溶液；吸取当归对照药材溶液2～3μl、桂枝对照药材15μl、A项下的供试品溶液10～12μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶4∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与桂枝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；
D.取大枣对照药材0.2g，加甲醇2ml，超声处理20分钟，离心，上清液作为对照药材溶液；再取甘草对照药材0.1g，加甲醇3ml超声处理20分钟，离心，上清液作为甘草对照药材溶液；吸取甘草对照药材溶液2～3μl、大枣对照药材4～5μl、A项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比1∶2∶4∶0.5的三氯甲烷-己酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同的绿色荧光主斑点；日光下检视，在与大枣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种当归建中汤冻干粉全味药材的快速薄层鉴别方法，其特征在于所述的冻干粉每1g相当原生药材3.5～4.2g。
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