CN108892563A - 一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物1‑10份，槲皮素0.002‑3份，***钠0.005‑5份，聚乙二醇982‑998.993份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为(1‑2):(4‑6)的纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉。本发明提供的产硒促进剂的制备方法开辟了微藻高产有机硒的工业培养新途径，取材简单、操作便捷、成本低；所用产品绿色、环保、安全，植物来源黄酮类物质可作为一种天然植物刺激素，促进藻细胞的光合代谢反应，提高了小球藻的生长潜能以及小球藻细胞内碳源底物的累积，从而提高其生长速率，解决了微藻快速生长的工业化培养问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物质资源化与生物能源领域，尤其涉及一种促进小球藻快速产有机硒的促进剂及其制备方法。
背景技术
人和动物以及植物的生长发育离不开微量元素，而硒则是人体必需的重要微量元素之一，为其生命活动的维持提供不可或缺的营养元素。小球藻属于微藻，可将吸收的无机硒有效地转化为以硒核酸、硒蛋白、硒多糖等形式存在的有机硒，以及单质***钠颗粒。植物源的有机硒毒性低，其功能不仅可被用于提高人体抗氧化能力，减少细胞中不饱和酸的氧化反应发生，还可以通过参与免疫反应，提高B细胞和T细胞的增殖活性，阻止人体代谢产生有毒代谢物，为人类正常生理代谢提供有利的抗氧化屏障。
植物源的黄酮类物质槲皮素含有多个酚羟基，已通过一定的体外氧化模型验证其具有抗氧化清除细胞内自由基活性的作用以及抗菌、抗病毒、抗癌抗肿瘤的药理活性。大部分植物源的黄酮类物质可作为一种天然植物刺激素对藻细胞造成胁迫压力，从而影响微藻细胞内部有机硒的生化代谢过程。
小球藻生产速率高于许多陆生植物，易于大规模培养，经济价值高，可用于生产生物柴油、蛋白质，以及次级代谢物类胡萝卜素、虾青素、尤其不饱和脂肪酸等。作为绿色可持续发展的生物能源，需要开发出便捷低成本的工业条件来提高小球藻的产有机硒潜能和生物量。研究发现给予小球藻培养基添加外源生物刺激素后，可对其造成胁迫压力从而提高其产有机硒潜力，高效率的生产力在一定程度上抵消养殖培养小球藻光合反应所必需的有机碳源成本，为后续高密度培养小球藻，获得高附加值的一系列代谢产物的开发提供研究基础。
因此，目前小球藻工业化生产上急需开发一种高效、环保的小球藻产有机硒的培养方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：
一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物1-10份，槲皮素0.002-3份，***钠0.005-5份，聚乙二醇982-998.993份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为(1-2):(4-6)的纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉。
进一步地，所述微纳生物硅粉末的制备方法的步骤包括：以氧气和氨气为气体源，利用温度为300-800℃、功率为1-3KW的等离子体在真空条件下对二氧化硅粉末进行间歇性辐照处理，并保持总有效辐照时间达20-60分钟，制得微纳生物硅粉末。
进一步地，所述氧气和氨气的体积比为(1-2):(4-6)。
进一步地，所述间歇性辐照处理方式为：辐照处理5-7分钟，停5-15分钟。
进一步地，所述二氧化硅粉末为150-300微米级的二氧化硅粉末。
进一步地，所述黄连木提取物干粉的制备方法的步骤包括：将采集的黄连木叶片置于烘箱中进行100-140℃进行杀菌后收集叶片，烘干后粉碎过筛，再对其加热进行70-90℃超声波提取1-3次，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，再对其4500-5500rpm离心10-30min，同时用滤膜过滤除菌，保留上清冷冻干燥即得黄连木提取物干粉。
进一步地，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物5份，槲皮素0.005份，***钠0.14份，聚乙二醇994.855份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为1.5:5的纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉。
进一步地，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物1份，槲皮素0.015份，***钠0.42份，聚乙二醇998.565份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为2:4的纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉。
这种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，步骤包括：
(1)分别制备微纳生物硅粉末和黄连木提取物干粉，在黄连木提取物干粉中加入纳米二氧化硅粉末得到微纳生物硅和干粉调节剂混合物；
(2)将微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素与聚乙二醇充分震荡混匀，制得小球藻产硒促进剂。
进一步地，所述步骤(2)中充分震荡混匀方式为：4000-9000rpm转速下处理30-90分钟。
本发明的优点在于：
(1)利用微纳生物硅/干粉、***钠、植物源生物刺激素、聚乙二醇，促进小球藻产有机硒。制备出一种植物源纳米复合材料，植物源的黄酮类物质可作为一种天然植物刺激素，调控藻细胞产有机硒代谢过程，提高其抗氧化性能和产有机硒潜能，从而影响藻细胞生物量累积；
(2)制备方法简单、操作简便、成本低廉，可进行规模化生产。
(3)该产品天然、绿色、环保、安全、无副作用，且可使小球藻产有机硒转化率提高1.6倍左右，有效提高小球藻的光合作用有机硒转化效率及其工业化应用的潜能。
附图说明
图1为本发明实施例1-4和对照组中小球藻产硒促进剂对小球藻产硒转化率影响的效果对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
实施例1
一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，包括以下重量份数的原料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物5份，槲皮素0.005份，***钠0.14份，聚乙二醇994.855份；其中，微纳生物硅和干粉调节剂混合物由纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉按照质量比1.5:5混合而成。
这种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，步骤包括：
(1)以体积比为1:4氧气和氨气为气体源，利用温度为400℃、功率为1KW的等离子体在真空条件下对200微米级的二氧化硅进行间歇性辐照处理，即辐照处理5分钟，停10分钟，保持总有效辐照时间达40分钟，制得微纳生物硅粉末；
(2)将采集的黄连木叶片置于烘箱中进行120℃进行杀菌后收集叶片，烘干后粉碎过筛，再对其加热进行80℃超声波提取2次，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，再对其5000rpm离心20min，同时用滤膜过滤除菌，保留上清冷冻干燥即得黄连木提取物干粉。再加入纳米二氧化硅粉末按照上述质量比进行混合，得微纳生物硅和干粉调节剂混合物；
(3)将上述重量份数的微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素与聚乙二醇充分震荡混匀，在5000rpm转速下处理80分钟，制得小球藻产硒促进剂。
数据表明加入产硒促进剂的处理组与空白对照相比，第7天对小球藻的产有机硒转化率可达到普通处理组的1.43倍。
实施例2
一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，包括以下重量份数的原料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物1份，槲皮素0.015份，***钠0.42份，聚乙二醇998.565份；其中，微纳生物硅和干粉调节剂混合物由纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉按照质量比2:4混合而成。
这种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，步骤包括：
(1)以体积比为1:4氧气和氨气为气体源，利用温度为400℃、功率为1KW的等离子体在真空条件下对200微米级的二氧化硅进行间歇性辐照处理，即辐照处理5分钟，停10分钟，保持总有效辐照时间达40分钟，制得微纳生物硅粉末；
(2)将采集的黄连木叶片置于烘箱中进行100℃进行杀菌后收集叶片，烘干后粉碎过筛，再对其加热进行80℃超声波提取2次，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，再对其4500rpm离心30min，同时用滤膜过滤除菌，保留上清冷冻干燥即得黄连木提取物干粉。再加入纳米二氧化硅粉末按照上述质量比进行混合，得微纳生物硅和干粉调节剂混合物；
(3)将上述重量份数的微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素与聚乙二醇充分震荡混匀，在5000rpm转速下处理80分钟，制得小球藻产硒促进剂。
数据表明加入产硒促进剂的处理组与空白对照相比，第7天对小球藻的产有机硒转化率可达到普通处理组的1.62倍。
实施例3
一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，包括以下重量份数的原料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物3份，槲皮素0.035份，***钠0.70份，聚乙二醇996.265份；其中，微纳生物硅和干粉调节剂混合物由纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉按照质量比2.5:5.5混合而成。
这种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，步骤包括：
(1)以体积比为2:6氧气和氨为气体源，利用温度为800℃、功率为3KW的等离子体在真空条件下对二氧化硅(300微米级)进行间歇性辐照处理，即辐照处理6分钟，停10分钟，保持总有效辐照时间达60分钟，制得微纳生物硅粉末；
(2)将采集的黄连木叶片置于烘箱中进行120℃进行杀菌后收集叶片，烘干后粉碎过筛，再对其加热进行60℃超声波提取2次，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，再对其8000rpm离心10min，同时用滤膜过滤除菌，保留上清冷冻干燥即得黄连木提取物干粉。再加入纳米二氧化硅粉末按照上述质量比进行混合，得微纳生物硅和干粉调节剂混合物；
(3)将上述重量份数的微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素与聚乙二醇充分震荡混匀，在6000rpm转速下处理60分钟，制得小球藻产硒促进剂。
数据表明加入产硒促进剂的处理组与空白对照相比，第7天对小球藻的产有机硒转化率可达到普通处理组的1.65倍。
实施例4
一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，包括以下重量份数的原料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物9份，槲皮素0.02份，***钠0.98份，聚乙二醇990份；其中，微纳生物硅和干粉调节剂混合物由纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉按照质量比1:6混合而成。
这种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，步骤包括：
(1)以体积比为2:6氧气和氨为气体源，利用温度为800℃、功率为3KW的等离子体在真空条件下对二氧化硅(300微米级)进行间歇性辐照处理，即辐照处理6分钟，停10分钟，保持总有效辐照时间达60分钟，制得微纳生物硅粉末；
(2)将采集的黄连木叶片置于烘箱中进行120℃进行杀菌后收集叶片，烘干后粉碎过筛，再对其加热进行60℃超声波提取2次，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，再对其8000rpm离心10min，同时用滤膜过滤除菌，保留上清冷冻干燥即得黄连木提取物干粉。再加入纳米二氧化硅粉末按照上述质量比进行混合，得微纳生物硅和干粉调节剂混合物；
(3)将上述重量份数的微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素与聚乙二醇充分震荡混匀，在6000rpm转速下处理60分钟，制得小球藻产硒促进剂。
数据表明加入产硒促进剂的处理组与空白对照相比，第7天对小球藻的产有机硒转化率可达到普通处理组的1.58倍。
图1表示实施例1-4和对照组中小球藻产硒促进剂对小球藻产硒转化率影响的效果对比图，图中对照组为不采用该产硒促进剂的处理组藻细胞所对应的对照组，处理组为采用实施例1-4制备的小球藻生长促进剂的实验组；
结果表明：实施例中制备得到的小球藻产硒促进剂可有效提高小球藻产有机硒的转化效率。
本实施例中微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素、聚乙二醇，促进了小球藻有机硒转化率。将此小球藻产硒促进剂加入到其生长所需的培养基中，通过促进藻细胞的光合代谢反应，提高了小球藻的生长潜能以及小球藻细胞内碳源底物的累积，从而提高其产硒转化效率。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，其特征在于，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物1-10份，槲皮素0.002-3份，***钠0.005-5份，聚乙二醇982-998.993份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为(1-2):(4-6)的微纳生物硅粉末和黄连木提取物干粉。
2.根据权利要求1所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，其特征在于，所述微纳生物硅粉末的制备方法的步骤包括：以氧气和氨气为气体源，利用温度为300-800℃、功率为1-3KW的等离子体在真空条件下对二氧化硅粉末进行间歇性辐照处理，并保持总有效辐照时间达20-60分钟，制得微纳生物硅粉末。
3.根据权利要求2所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，其特征在于，所述氧气和氨气的体积比为(1-2):(4-6)。
4.根据权利要求2所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，其特征在于，所述间歇性辐照处理方式为：辐照处理5-7分钟，停5-15分钟。
5.根据权利要求2所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，其特征在于，所述二氧化硅粉末为150-300微米级的二氧化硅粉末。
6.根据权利要求1所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，其特征在于，所述黄连木提取物干粉的制备方法的步骤包括：将采集的黄连木叶片置于烘箱中进行100-140℃进行杀菌后收集叶片，烘干后粉碎过筛，再对其加热进行70-90℃超声波提取1-3次，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，再对其4500-5500rpm离心10-30min，同时用滤膜过滤除菌，保留上清冷冻干燥即得黄连木提取物干粉。
7.根据权利要求1所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，其特征在于，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物5份，槲皮素0.005份，***钠0.14份，聚乙二醇994.855份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为1.5:5的纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉。
8.根据权利要求1所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂，其特征在于，包括以下重量份材料：微纳生物硅和干粉调节剂混合物1份，槲皮素0.015份，***钠0.42份，聚乙二醇998.565份；所述微纳生物硅和干粉调节剂混合物包括重量份比为2:4的纳米二氧化硅和黄连木提取物干粉。
9.一种制备如权利要求1-8任一项所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的方法，其特征在于，步骤包括：
(1)分别制备微纳生物硅粉末和黄连木提取物干粉，在黄连木提取物干粉中加入纳米二氧化硅粉末得到微纳生物硅和干粉调节剂混合物；
(2)将微纳生物硅和干粉调节剂混合物、***钠、槲皮素与聚乙二醇充分震荡混匀，制得小球藻产硒促进剂。
10.根据权利要求9所述的一种提高小球藻产有机硒的产硒促进剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中充分震荡混匀方式为：4000-9000rpm转速下处理30-90分钟。
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