CN108884149A - Hiv-1 gp41中和抗体及其用途 - Google Patents

Hiv-1 gp41中和抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN108884149A
CN108884149A CN201680077520.XA CN201680077520A CN108884149A CN 108884149 A CN108884149 A CN 108884149A CN 201680077520 A CN201680077520 A CN 201680077520A CN 108884149 A CN108884149 A CN 108884149A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
seq
antigen
binding fragment
hiv
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680077520.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108884149B (zh
Inventor
邝达平
权英道
I·格奥尔基耶夫
G·奥菲克
张宝山
K·麦基
J·马可索拉
荘國瑜
S·奥德尔
T·金丁
L·夏皮罗
R·贝勒
M·拉奥特
M·阿索肯
R·施瓦兹
J·库珀
K·卡尔顿
M·本德尔
M·康纳斯
A·勃固
L·库卓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
US Department of Health and Human Services
Columbia University in the City of New York
Original Assignee
US Department of Health and Human Services
Columbia University in the City of New York
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by US Department of Health and Human Services, Columbia University in the City of New York filed Critical US Department of Health and Human Services
Priority to CN202210669835.0A priority Critical patent/CN115010805A/zh
Publication of CN108884149A publication Critical patent/CN108884149A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108884149B publication Critical patent/CN108884149B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
    • G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
    • G01N2333/162—HIV-1, HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, DC4-Binding site
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Abstract

本发明公开了特异结合HIV‑1 Env的中和抗体和这些抗体的抗原结合片段。还提供了编码这些抗体的核酸、载体和宿主细胞。公开了采用这些抗体检测HIV‑1的方法。另外，公开了这些抗体、抗原结合片段、核酸和载体防止和/或治疗HIV‑1感染的用途。

Description

HIV-1 GP41中和抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年11月3日提交的美国临时申请No.62/250,360的优先权，通过引用将其全文并入本文。
发明领域
本文涉及特异结合人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gp41的抗体和抗原结合片段以及它们例如在治疗患有HIV-1感染的受试者中的用途。
背景技术
尽管为开发抗HIV-1治疗剂作出了不懈努力，但HIV-1感染和由此产生的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)仍然对全球公共健康构成威胁。包膜病毒HIV-1在各种各样的保护性机制后躲避体液识别。主要的HIV-1包膜蛋白(HIV-1 Env)为大约160kD的糖蛋白(gp160)。在感染期间，宿主细胞的蛋白酶将gp160切割成gp120和gp41。gp41为整合膜蛋白，而gp120从成熟的病毒突出。gp120和gp41一起组成HIV-1包膜刺突(envelope spike)，其为中和病毒的靶。已鉴定了结合HIV-1 Env的广谱中和抗体(broadly neutralizing antibodies)，包括10E8抗体，其特异结合gp41的近膜外区(membrane proximal external region，MPER)，并可中和高百分比的HIV-1株。但是，需要开发另外的HIV-1中和抗体，其具有用于商业生产的不同识别和中和特征(profile)。
发明内容
本文公开了特异结合gp41并中和HIV-1的分离的抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，该分离的抗体或抗原结合片段包括相对于10E8抗体包含一个或更多个氨基酸替换(例如在互补决定区(CDRs)和/或框架区中)的重链和轻链可变区，所述氨基酸替换赋予相对于10E8抗体的改善的中和性、溶解性和自体反应性性质的组合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或抗原结合片段包括重链可变区(VH)，其包括SEQ ID NO:75(10E8v4 S100cF)所示VH的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区(VL)，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示VL的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3，其中所述抗体或抗原结合片段特异结合gp41并中和HIV-1。在一些实施方案中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:7、8、77、10、11和12所示的氨基酸序列(10E8v4 S100cF IMGT CDRs)。在一些实施方案中，所述分离的抗体或抗原结合片段的VH和VL分别包括SEQ ID NO:75和6(10E8v4 S100cF)所示的氨基酸序列，或分别包括SEQ ID NO:76和6(10E8v4 V5R S100cF)所示的氨基酸序列，其中所述抗体或抗体结合片段特异结合gp41并中和HIV-1。
在另外的实施方案中，所述分离的抗体包括包含SEQ ID NO:5所示VH的HCDR1、HCDR2和HCDR3的VH，和包含SEQ ID NO:6所示VL的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3的VL，其中所述VH分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处包括精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及所述VL分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处包括丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及其中所述单克隆抗体或抗原结合片段特异结合gp41并中和HIV-1。
还公开了组合物，其包括所述抗体和抗原结合片段、编码所述抗体和抗原结合片段的核酸、包括所述核酸的表达载体，以及包括所述核酸的分离的宿主细胞。在一些实施方案中，所述核酸分子可为双顺反子表达构建体，其编码所述抗体或抗原结合片段的VH和VL。
所公开的抗体和抗原结合片段在公认的HIV-1感染体外模型中有效力地中和HIV-1。因此，公开了用于在受试者中治疗或抑制HIV-1感染的方法。所述方法包括向受试者，例如有HIV-1感染风险或患有HIV-1感染的受试者，施用治疗有效量的所公开的抗体、抗原结合片段、核酸分子、载体或组合物的一种或更多种。
本文公开的抗体、抗原结合片段、核酸分子、载体和组合物可用于各种另外的目的，例如在受试者中检测HIV-1感染或诊断HIV-1感染，或在样品中检测HIV-1。
根据以下参照附图对几个实施方案的详细描述，本公开的前述和其它特征和优点将变得更加明显。
附图简要说明
图1A-1F为抗体重链和轻链可变结构域的序列比对。图1A和1B显示10E8(SEQ IDNO:1)、HC6-S74Y(SEQ ID NO:13)、HC6-S74Y-511(SEQ ID NO:3)、H6(SEQ ID NO:14)、H6-511(SEQ ID NO:15)和H6-511-4mut(SEQ ID NO:5)重链可变结构域的kabat编号和IMGT(图1A)或kabat(图1B)CDR定位。图1C和1D显示10E8(SEQ ID NO:2)、rL3(SEQ ID NO:4)和rL3-6mut(SEQ ID NO:6)轻链可变结构域的kabat编号和IMGT(图1C)或kabat(图1D)CDR定位。图1E显示用于10E8(SEQ ID NO:1)、10E8v4(SEQ ID NO:5)、10E8v4 S100cF(SEQ ID NO:75)和10E8v4 V5R S100cF(SEQ IDNO:76)的VH的kabat编号和IMGT CDR定位。图1F显示用于10E8(SEQ ID NO:2)和10E8v4(SEQ ID NO:6)的VL的kabat编号和IMGT CDR定位，其也用于10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF的VL。
图2为图表和考马斯亮蓝染色凝胶的图像，阐述10E8抗体和包括HC6-S74Y VH和rL3 VL或者HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL的10E8变体在磷酸盐缓冲盐水中的浊度(在OD350处测量的)。将高度可溶的VRC01抗体用作对照。
图3为阐述10E8抗体，以及包括HC6-S74Y VH和rL3 VL或者HC6-S74Y-511 VH和rL3VL的10E8变体对一组代表性的HIV-1假病毒的中和的表格。采用TZM-bl细胞假病毒中和测定确定中和性；显示出了IC80值。
图4A为阐述10E8抗体和包括H6 VH和L10 VL、H8 VH和L10 VL、H8 VH和L19 VL、H6-511 VH和L10 VL或者H8-511 VH和L10 VL的10E8变体在磷酸盐缓冲盐水中的浊度(在OD350测量处的)的图表。将高度可溶的VRC01抗体用作对照。
图4B为阐述10E8抗体和包括H6-511 VH和L10 VL或者H8-511 VH和L10 VL的10E8变体对一组代表性的HIV-1假病毒的中和的表格。采用TZM-bl细胞假病毒中和测定确定中和性；显示出了IC50值。
图5为条带图(ribbon diagram)，阐述结合至MPER肽的10E8抗体的一部分结构。突出显示了重链可变区结构域的“4mut”残基D28、N31、T52，以及Y98(kabat编号)。
图6为阐述10E8抗体和所示10E8变体在磷酸盐缓冲盐水中的浊度(在OD350处测量的)的图表。将高度可溶的VRC01抗体用作对照。
图7为阐述10E8抗体和包括H6-511 VH和rL3 VL或者H6-511-4mut(具有N28D、D31N、S52T和H98Y替换的H6-511)VH和L10 VL的10E8变体对一组代表性的HIV-1假病毒的中和的表格。采用TZM-bl细胞假病毒中和测定确定中和性；显示出了IC50值。
图8为阐述10E8抗体和包括HC6-S74Y-511 VH和L10 VL、HC6-S74Y VH和L10 VL或者10E8 VH和L10 VL的10E8变体在磷酸盐缓冲盐水中的浊度(在OD350处测量的)的图表。将高度可溶的VRC01抗体用作对照。
图9为阐述10E8抗体和包括与所示VL结构域配对的10E8 VH的10E8变体在磷酸盐缓冲盐水中的浊度(在OD350处测量的)的图表。与10E8 VH配对的具有S1A、Y2S、T8P、G9A、G16K、R17Q替换的rL3 VL(“rL3-6mut”)具有10E8变体的最小浊度。将高度可溶的VRC01抗体用作对照。
图10为阐述10E8抗体和包括H6-511-4mut VH和rL3 VL或者H6-511-4mut VH和rL3-6mut VL的10E8变体在磷酸盐缓冲盐水中的浊度(在OD350处测量的)的图表。将高度可溶的VRC01抗体用作对照。
图11为阐述10E8抗体和包括H6-511 VH和rL3 VL、H6-511-4mut VH和rL3或者H6-511-4mut VH和rL3-6mut VL的10E8变体对一组代表性的HIV-1假病毒的中和的表格。采用TZM-bl细胞假病毒中和测定确定中和性；显示出了IC50和IC80值。
图12为阐述开发经修饰10E8抗体的流程图。
图13A-13C显示了10E8抗体或包括HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL、HC6-S74Y-511 VH和rL3或者H6-511-4mut和rL3-6mut VL的10E8变体的动力学浓度测定的结果。采用离心浓缩器浓缩3毫升的所示抗体(OD 0.35)(图13A)，并测量所得到的浓缩物的体积(图13B)和蛋白浓度(图13C，OD280)。
图14为一系列图表，显示包含10E8抗体和包括HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL、HC6-S74Y-511 VH和rL3或者H6-511-4mut和rL3-6mut VL的10E8变体的溶液的动态散射测定的结果。该10E8抗体为多分散的，表明存在蛋白聚集体。包括HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL、HC6-S74Y-511 VH和rL3或者H6-511-4mut和rL3-6mut VL的抗体为单分散的。
图15为一组免疫荧光图像，阐述10E8抗体和包括HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL、HC6-S74Y-511 VH和rL3-6mut VL或者H6-511-4mut和rL3-6mut VL的10E8变体不是自体反应性的。通过间接免疫荧光确定了对HIV-1阴性的人上皮(HEp-2)细胞的反应性。
图16A-16F为一系列表格，阐述10E8抗体和包括HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL(Var1)、HC6-S74Y-511 VH和rL3-6mut VL(Var5)或者H6-511-4mut和rL3-6mut VL(Var4)的10E8变体对一组200个HIV-1假病毒的中和。显示了IC50(图16A-16C)和IC80(图16D-16F)值。
图17为显示单次抗体注射后10E8抗体或10E8变体抗体的浓度在灵长类(猕猴)血清中随时间变化的图表。
图18A-18D为一系列图表，阐述10E8、10E8v4和10E8v5的大小排阻层析(图18A)，在VL kabat位置32处具有氨基酸替换的几种10E8v4变体的大小排阻层析(图18B和18C)，以及在VL kabat位置32处具有氨基酸替换的几种10E8v4变体的浊度(图18D)。
图19显示了一系列表格，阐述包括10E8v4 S100cW抗体在内的几种广谱中和HIV-1的抗体对一组HIV-1病毒的中和的IC50和IC80值。
图20为一系列图表和带状图，阐述10E8v4 HCDR3的改变可将大小排阻层析曲线改善为单峰。
图21为一系列图表，显示针对10E8v4-DS和10E8v4-100cW-DS抗体的大小排阻层析结果。
图22显示针对10E8v4的改善HIV-1中和的某些氨基酸替换在匹配有10E8v4抗体的Cryo-EM HIV-1 Env结构内的定位。一组突变在10E8v4结合至HIV-1 Env时处于10E8v4的近膜区中(对VL的D7W、D26R和G68R替换)，另一组在10E8v4的不接近细胞膜的区域中(对VH的D72R、E1R D28W和P52bR替换)。
图23A-23F显示了一系列表格，阐述几种不同10E8变体抗体对一组代表性的HIV-1假病毒的中和。这些10E8变体包括表10中的那些(见实施例5)。采用TZM-bl细胞假病毒中和测定确定中和性；显示了IC50(图23A、23C和23D)和IC80(图23B、23E、23F)值。
图24为一系列图表，显示来自包括S100cF、S100cH、S100cL、S100cR、S100cW或S100cY替换的10E8v4变体的溶解性测定的结果，通过采用标准离心浓缩器浓缩后测量这些抗体溶液的体积和蛋白浓度来进行。
序列
列在所附序列表中的核酸和氨基酸序列采用用于核苷酸碱基的标准字母缩写和用于氨基酸的三字母代码显示，如37C.F.R.1.822中所定义的。仅显示了每条核酸序列的一条链，但互补链被理解为包含在对所显示链的任何引用中。该序列表作为2016年11月1日生成的，命名为“Sequence.txt”的文件形式的ASCII文本文件(～165kb)提交，并通过引用并入本文。在所附的序列表中：
SEQ ID NO:1为10E8 VH的氨基酸序列。
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRLNSINFLYLEMNNLRMEDSGLYFCARTGKYYDFWSGYPPGEEYFQDWGRGTLVTVSS
SEQ ID NO:2为10E8 VL的氨基酸序列。
SYELTQETGVSVALGRTVTITCRGDSLRSHYASWYQKKPGQAPILLFYGKNNRPSGVPDRFSGSASGNRASLTISGAQAEDDAEYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:3为HC6-S74Y-511 VH的氨基酸序列。
EVRLAESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRDNYKNTLYLEMNNLRTEDSGLYFCARTGKYYDFWSGYPPGEEYFQDWGRGTLVIVSS
SEQ ID NO:4为rL3 VL的氨基酸序列。
SYELTQDTGVSVALGRTVTITCRGDSLRSHYASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:5为H6-511-4mut VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWSGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:6为rL3-6mut VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRSHYASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:7-12为10E8抗体的IMGT CDR的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13为HC6-S74Y VH的氨基酸序列。
EVRLAESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRLNYINFLYLEMNNLRMEDSGLYFCARTGKYYDFWSGYPPGEEYFQDWGRGTLVIVSS
SEQ ID NO:14为H6 VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFNFDDAWMTWVRQPPGKGLEWVGRISGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRLNSINFLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKHYDFWSGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:15为H6-511 VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFNFDDAWMTWVRQPPGKGLEWVGRISGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKHYDFWSGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:16为H8 VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGRLVRPGGSLRLSCSASGFNFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAASVKGRFTISRMNSINFFYLEMNNLKIEDTGLYFCARTGKHYAFWGGYPPGEEYLEDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:17为H8-511 VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGRLVRPGGSLRLSCSASGFNFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAASVKGRFTISRDNYKNTFYLEMNNLKTEDTGLYFCARTGKHYAFWGGYPPGEEYLEDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:18为L10 VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRSHYVSWYQKKPGQAPVLVFYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTIAGAQAEDDADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:19为L19 VL的氨基酸序列。
ASELTQDPTVSVALGQTVTITCRGDSLRNYYTSWYQQKPGQAPVLLIYPKHNRPPGISDRFSASSSGNTASLTITGAQTEDEGDYYCSSRDKSGSRLVTFGRGTKLTVV
SEQ ID NO:20为编码连接至IgG1恒定区的HC6-S74Y-511 VH的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggtgtacattctgaagtgcggctggctgagagcggcggggggctggtcaaacctggcgggtcactgcggctgtcctgttctgcctccggcttcgattttgataacgcatggatgacatgggtgcgacagccacctggaaaggggctggagtgggtcggcagaatcactggacctggcgaagggtggtctgtggactacgcagctccagtcgagggacgattcaccattagtagagataactacaagaatacactgtatctggagatgaacaatctgaggactgaagacagcggcctgtatttctgcgcccgcaccgggaaatactatgatttttggtctgggtacccacccggagaggaatattttcaggactggggacggggcaccctggtgatcgtcagctccgcgtcgaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga
SEQ ID NO:21为编码连接至IgG1恒定区的H6-511-4mut VH的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggtgtacattctgaggttagactggtggagtcaggaggggggcttgtgaagcccggtgggtctctccgcctgagctgttctgcctccggctttgatttcgataacgcctggatgacctgggtcaggcagcctccaggtaagggactggagtgggtgggaagaatcacaggtccaggcgagggctggtccgtggactacgcggaatctgttaaagggcggtttacaatctcaagggacaataccaagaataccttgtatttggagatgaacaacgtgagaactgaagacaccggatattacttctgtgccagaacaggcaaatactacgacttctggtccggctatccccctggcgaggaatattttcaagactggggtcagggaacccttgttatcgtgtcctccgcgtcgaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa
SEQ ID NO:22为连接至IgG1恒定区的H6-511-4mut VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWSGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:23为连接至IgG1恒定区的HC6-S74Y-511 VH的氨基酸序列。
EVRLAESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRDNYKNTLYLEMNNLRTEDSGLYFCARTGKYYDFWSGYPPGEEYFQDWGRGTLVIVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:24为编码rL3 VL的示例性核酸序列。
tcatacgaactgactcaggacactggcgtctctgtggcactggggaggactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactacgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctcagtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcgagtgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttcatag
SEQ ID NO:25为编码rL3-6mut VL的示例性核酸序列。
accaccatgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactacgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctcagtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcgagtgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgancagtggaangtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgt
SEQ ID NO:26为来自HIV-1的HXB2株的HIV-1 Env的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27-33为VRC01、VRC07、VRC07-523和VRC07-544抗体的VH和VL结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:34为MPER肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:35为H6-511-4mut-S100cW VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWWGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:36为H6-511-4mut-DS VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWSGCPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:37为H6-511-4mut-S100cW-DS VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWWGCPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:38为HC6-S74Y-511-S100cW VH的氨基酸序列。
EVRLAESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRDNYKNTLYLEMNNLRTEDSGLYFCARTGKYYDFWWGYPPGEEYFQDWGRGTLVIVSS
SEQ ID NO:39为HC6-S74Y-511-DS VH的氨基酸序列。
EVRLAESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRDNYKNTLYLEMNNLRTEDSGLYFCARTGKYYDFWSGCPPGEEYFQDWGRGTLVIVSS
SEQ ID NO:40为HC6-S74Y-511-S100cW-DS VH的氨基酸序列。
EVRLAESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAAPVEGRFTISRDNYKNTLYLEMNNLRTEDSGLYFCARTGKYYDFWWGCPPGEEYFQDWGRGTLVIVSS
SEQ ID NO:41为rL3-6mut-DS VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRCHYASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:42为rL3-6mut-Y32W VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRSHWASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:43为rL3-6mut-Y32F VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRSHFASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:44为编码HC6-S74Y-511 VH的示例性核酸序列。
gaagtgcggctggctgagagcggcggggggctggtcaaacctggcgggtcactgcggctgtcctgttctgcctccggcttcgattttgataacgcatggatgacatgggtgcgacagccacctggaaaggggctggagtgggtcggcagaatcactggacctggcgaagggtggtctgtggactacgcagctccagtcgagggacgattcaccattagtagagataactacaagaatacactgtatctggagatgaacaatctgaggactgaagacagcggcctgtatttctgcgcccgcaccgggaaatactatgatttttggtctgggtacccacccggagaggaatattttcaggactggggacggggcaccctggtgatcgtcagctcc
SEQ ID NO:45为编码H6-511-4mut VH的示例性核酸序列。
gaggttagactggtggagtcaggaggggggcttgtgaagcccggtgggtctctccgcctgagctgttctgcctccggctttgatttcgataacgcctggatgacctgggtcaggcagcctccaggtaagggactggagtgggtgggaagaatcacaggtccaggcgagggctggtccgtggactacgcggaatctgttaaagggcggtttacaatctcaagggacaataccaagaataccttgtatttggagatgaacaacgtgagaactgaagacaccggatattacttctgtgccagaacaggcaaatactacgacttctggtccggctatccccctggcgaggaatattttcaagactggggtcagggaacccttgttatcgtgtcctcc
SEQ ID NO:46为编码rL3 VL的示例性核酸序列。
tcatacgaactgactcaggacactggcgtctctgtggcactggggaggactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactacgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:47为编码rL3-6mut VL的示例性核酸序列。
accaccatgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactacgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:48为编码HC6-S74Y-511 VH的表达载体的示例性核酸序列。
SEQ ID NO:49为编码H6-511-4mut VH的表达载体的示例性核酸序列。
SEQ ID NO:50为编码rL3 VL的表达载体的示例性核酸序列。
SEQ ID NO:51为编码rL3-6mut VL的表达载体的示例性核酸序列。
SEQ ID NO:52-57为IMGT CDR的氨基酸序列。
SEQ ID NO:58为rL3-6mut-DS-Y32W VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRCHWASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:59为rL3-6mut-DS-Y32F VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRCHFASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:60-63分别为编码10E8v4-DS VH、10E8v4-DS(或10E8v4-100cW-DS)VL、10E8v4-100cW VH或10E8v4-100cW-DS VH的表达载体的示例性核酸序列。
SEQ ID NO:64为编码H6-511-4mut-S100cW VH(Seq_35)的示例性核酸序列。
atgggctggtcctgtattatcctgttcctggtcgcaactgctactggcgtccattcagaagtgaggctggtcgagagcggcggcggcctggtgaagccaggaggaagcctgcgactgagctgctccgcctctggcttcgactttgataacgcttggatgacatgggtgcgacagccccctggaaaaggcctggagtgggtcggaagaatcaccggccccggagagggatggagtgtggactacgcagaatcagtcaagggccggttcaccattagccgggataacaccaaaaatacactgtatctggagatgaacaatgtcaggactgaagacaccgggtactatttctgtgcccgcaccggaaagtactatgatttttggtggggctacccacccggagaagaatactttcaggactggggacagggaacactggtcatcgtcagcagc
SEQ ID NO:65为编码H6-511-4mut-DS VH(Seq_36)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggtgtacattctgaggttagactggtggagtcaggaggggggcttgtgaagcccggtgggtctctccgcctgagctgttctgcctccggctttgatttcgataacgcctggatgacctgggtcaggcagcctccaggtaagggactggagtgggtgggaagaatcacaggtccaggcgagggctggtccgtggactacgcggaatctgttaaagggcggtttacaatctcaagggacaataccaagaataccttgtatttggagatgaacaacgtgagaactgaagacaccggatattacttctgtgccagaacaggcaaatactacgacttctggtccggctgcccccctggcgaggaatattttcaagactggggtcagggaacccttgttatcgtgtcctcc
SEQ ID NO:66为编码H6-511-4mut-S100cW-DS VH(Seq_37)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggtgtacattctgaggttagactggtggagtcaggaggggggcttgtgaagcccggtgggtctctccgcctgagctgttctgcctccggctttgatttcgataacgcctggatgacctgggtcaggcagcctccaggtaagggactggagtgggtgggaagaatcacaggtccaggcgagggctggtccgtggactacgcggaatctgttaaagggcggtttacaatctcaagggacaataccaagaataccttgtatttggagatgaacaacgtgagaactgaagacaccggatattacttctgtgccagaacaggcaaatactacgacttctggtggggctgcccccctggcgaggaatattttcaagactggggtcagggaacccttgttatcgtgtcctcc
SEQ ID NO:67为编码HC6-S74Y-511-S100cW VH(Seq_38)的示例性核酸序列。
gaagtgcggctggctgagagcggcggggggctggtcaaacctggcgggtcactgcggctgtcctgttctgcctccggcttcgattttgataacgcatggatgacatgggtgcgacagccacctggaaaggggctggagtgggtcggcagaatcactggacctggcgaagggtggtctgtggactacgcagctccagtcgagggacgattcaccattagtagagataactacaagaatacactgtatctggagatgaacaatctgaggactgaagacagcggcctgtatttctgcgcccgcaccgggaaatactatgatttttggtgggggtacccacccggagaggaatattttcaggactggggacggggcaccctggtgatcgtcagctcc
SEQ ID NO:68为编码HC6-S74Y-511-DS VH(Seq_39)的示例性核酸序列。
gaagtgcggctggctgagagcggcggggggctggtcaaacctggcgggtcactgcggctgtcctgttctgcctccggcttcgattttgataacgcatggatgacatgggtgcgacagccacctggaaaggggctggagtgggtcggcagaatcactggacctggcgaagggtggtctgtggactacgcagctccagtcgagggacgattcaccattagtagagataactacaagaatacactgtatctggagatgaacaatctgaggactgaagacagcggcctgtatttctgcgcccgcaccgggaaatactatgatttttggtctgggtgcccacccggagaggaatattttcaggactggggacggggcaccctggtgatcgtcagctcc
SEQ ID NO:69为编码HC6-S74Y-511-S100cW-DS VH(Seq_40)的示例性核酸序列。
gaagtgcggctggctgagagcggcggggggctggtcaaacctggcgggtcactgcggctgtcctgttctgcctccggcttcgattttgataacgcatggatgacatgggtgcgacagccacctggaaaggggctggagtgggtcggcagaatcactggacctggcgaagggtggtctgtggactacgcagctccagtcgagggacgattcaccattagtagagataactacaagaatacactgtatctggagatgaacaatctgaggactgaagacagcggcctgtatttctgcgcccgcaccgggaaatactatgatttttggtgggggtgcccacccggagaggaatattttcaggactggggacggggcaccctggtgatcgtcagctcc
SEQ ID NO:70为编码rL3-6mut-DS VL(Seq_41)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggtgccactacgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:71为编码rL3-6mut-Y32W VL(Seq_42)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactgggcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:72为编码rL3-6mut-Y32F VL(Seq_43)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactttgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:73为编码rL3-6mut-DS-Y32W VL(Seq_58)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactgggcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:74为编码rL3-6mut-DS-Y32F VL(Seq_59)的示例性核酸序列。
atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgcaaccggttctgtgaccgcatccgaactgactcaggaccctgccgtctctgtggcactgaagcagactgtgactattacttgccgaggcgactcactgcggagccactttgcttcctggtatcagaagaaacccggccaggcacctgtgctgctgttctacggaaagaacaataggccatctggcatccccgaccgcttttctggcagtgcatcagggaaccgagccagtctgaccattaccggcgcccaggctgaggacgaagccgattactattgcagctcccgggataagagcggctccagactgagcgtgttcggaggaggaactaaactgaccgtcctc
SEQ ID NO:75为H6-511-4mut-S100cF VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWFGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:76为H6-511-4mut V5R S100cF VH的氨基酸序列。
EVRLRESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWFGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSS
SEQ ID NO:77为H6-511-4mut-S100cF VH(IMGT)的HCDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO:78为编码H6-511-4mut-S100cF VH(Seq_75)的示例性核酸序列。
gaggttagactggtggagtcaggaggggggcttgtgaagcccggtgggtctctccgcctgagctgttctgcctccggctttgatttcgataacgcctggatgacctgggtcaggcagcctccaggtaagggactggagtgggtgggaagaatcacaggtccaggcgagggctggtccgtggactacgcggaatctgttaaagggcggtttacaatctcaagggacaataccaagaataccttgtatttggagatgaacaacgtgagaactgaagacaccggatattacttctgtgccagaacaggcaaatactacgacttctggttcggctatccccctggcgaggaatattttcaagactggggtcagggaacccttgttatcgtgtcctcc
SEQ ID NO:79为编码H6-511-4mut V5R S100cF VH(Seq_76)的示例性核酸序列。
gaggttagactgcgggagtcaggaggggggcttgtgaagcccggtgggtctctccgcctgagctgttctgcctccggctttgatttcgataacgcctggatgacctgggtcaggcagcctccaggtaagggactggagtgggtgggaagaatcacaggtccaggcgagggctggtccgtggactacgcggaatctgttaaagggcggtttacaatctcaagggacaataccaagaataccttgtatttggagatgaacaacgtgagaactgaagacaccggatattacttctgtgccagaacaggcaaatactacgacttctggttcggctatccccctggcgaggaatattttcaagactggggtcagggaacccttgttatcgtgtcctcc
SEQ ID NO:80-81分别为编码H6-511-4mut-S100cF和H6-511-4mut V5R S100cFVH区的表达载体的核酸序列。
SEQ ID NO:82为连接至IgG1恒定区的H6-511-4mut-S100cF VH的氨基酸序列。
EVRLVESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWFGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:83为连接至IgG1恒定区的H6-511-4mut-V5R S100cF VH的氨基酸序列。
EVRLRESGGGLVKPGGSLRLSCSASGFDFDNAWMTWVRQPPGKGLEWVGRITGPGEGWSVDYAESVKGRFTISRDNTKNTLYLEMNNVRTEDTGYYFCARTGKYYDFWFGYPPGEEYFQDWGQGTLVIVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:84为连接至Igλ恒定区的rL3-6mut VL的氨基酸序列。
ASELTQDPAVSVALKQTVTITCRGDSLRSHYASWYQKKPGQAPVLLFYGKNNRPSGIPDRFSGSASGNRASLTITGAQAEDEADYYCSSRDKSGSRLSVFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
具体实施方式
I.术语概述
除非另有说明，否则技术术语按常规用法使用。分子生物学中常用术语的定义可以在2009年由Jones&Bartlett Publishers出版的Benjamin Lewin,Genes X；2008年由Wiley-VCH在16卷中出版的Meyers等(编辑)，The Encyclopedia of Cell Biology andMolecular Medicine，以及其它类似的参考书中找到。
用在本文时，单数形式的“a”、“an”和“the”指单数以及复数，除非上下文另有明确说明。例如，术语“an antigen”包括单数或复数抗原并且可认为等同于短语“at least oneantigen”。用在本文时，术语“包括(comprises)”指“包括(includes)”。还应当理解，除非另有说明，为核酸或多肽给定的任何和所有的碱基大小或氨基酸大小，以及所有的分子量或分子质量值，都是近似的，出于说明的目的而提供。尽管可使用类似于或者等同于本文中所描述的那些的方法和材料，但本文描述特别适合的方法和材料。如有矛盾，以包括术语解释的本说明书为准。此外，所述材料、方法，以及实施例仅是阐释性的，无意进行限制。为了方便查看各种实施方案，提供以下的术语解释。
10E8:特异结合gp41的MPER上表位的中和抗体。该10E8抗体及其与gp41的结合先前已有描述，参见，例如，Huang等Nature,491:406-412,2012，通过引用将其全文并入本文。该10E8抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1和2所示。
施用(administration)：通过所选的途径将组合物引入受试者中。施用可为局部或全身的。例如，如果所选的途径为静脉内的，则通过将该组合物引入该受试者的静脉内来施用该组合物。示例性施用途径包括，但不限于，口服、注射(例如皮下、肌内、皮内、腹膜内和静脉内)、舌下、直肠、透皮(例如，局部的)、鼻内、***，以及吸入途径。
氨基酸替换(amino acid substitution)：肽中的一个氨基酸用不同的氨基酸代替。
抗逆转录病毒试剂：特异抑制逆转录病毒复制或感染细胞的试剂。抗逆转录病毒药物的非限定性实例包括进入抑制剂(例如，恩夫韦地(enfuvirtide))、CCR5受体拮抗剂(例如，阿普维若(aplaviroc)、维克维若(vicriviroc)、马拉维若(maraviroc))、逆转录酶抑制剂(例如，拉米夫定(lamivudine)、齐多夫定(zidovudine)、阿巴卡韦(abacavir)、替诺福韦(tenofovir)、恩曲他滨(emtricitabine)、依法韦仑(efavirenz))、蛋白酶抑制剂(例如，洛匹那韦(lopivar)、利托那韦(ritonavir)、雷特格韦(raltegravir)、地瑞那韦(darunavir)、阿扎那韦(atazanavir))、成熟抑制剂(例如，α干扰素、贝韦立马(bevirimat)和维韦康(vivecon))。
抗逆转录病毒治疗(ART):涉及向HIV-1感染个体施用至少一种抗逆转录病毒试剂(例如，一种、两种、三种或四种抗逆转录病毒试剂)的用于HIV-1感染的治疗性处理。ART方案的一个实例包括用替诺福韦、恩曲他滨和依法韦仑的组合进行治疗。在一些实例中，ART包括高效抗逆转录病毒治疗(HAART)。HAART方案的一个实例包括用替诺福韦、恩曲他滨和依法韦仑的组合进行治疗。
抗体：特异结合并识别分析物(抗原)如HIV-1 gp41的免疫球蛋白，抗原结合片段，或其衍生物。该术语“抗体”在本文中以其最广义使用，涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，以及抗体片段，只要它们显示出期望的抗原结合活性即可。
抗体的非限定性实例包括，例如，完整的免疫球蛋白和本领域已知的保留了抗原结合亲和性的其变体和片段。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双体抗体(diabodies)；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv)；以及从抗体片段形成的多特异性抗体。抗体片段包括抗原结合片段抗原结合片段，它们或者由全抗体的修饰产生，或者为采用重组DNA方法学(参见，例如，Kontermann和Dubel(Ed)，AntibodyEngineering,Vols.1-2,2nd Ed.,Springer Press,2010)从头合成的那些。
单链抗体(scFv)为基因工程分子，其含有通过适合的多肽接头连接的一个或更多个抗体的VH和VL结构域，作为基因融合的单链分子(参见，例如,Bird等，Science,242:423-426,1988；Huston等,Proc.Natl.Acad.Sci.,85:5879-5883,1988；Ahmad等,Clin.Dev.Immunol.,2012,doi:10.1155/2012/980250；Marbry,IDrugs,13:543-549,2010)。VH结构域和VL结构域在scFv中的分子内定向对于scFv来说不是决定性的。因此，可以使用具有两种可能的排列的scRFv(VH结构域-接头结构域-VL-结构域；VL结构域-接头结构域-VH-结构域)。
在dsFv中，VH和VL经突变以引入二硫键来稳定链的缔合。也包括二体抗体，其为二价的、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单一多肽链上表达，但采用过短而不允许相同链上的两结构域配对的接头，从而强制这些结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见，例如Holliger等,Proc.Natl.Acad.Sci.,90:6444-6448,1993；Poljak等,Structure,2:1121-1123,1994)。
抗体还包括基因工程形式，例如嵌合抗体(例如人源化的鼠抗体)和杂缀合(heteroconjugate)抗体(例如双特异性抗体)。还参见，Pierce Catalog and Handbook,1994-1995(Pierce Chemical Co.,Rockford,IL)；Kuby,J.,Immunology,3rd Ed.,W.H.Freeman&Co.,New York,1997。
结合与参照抗体相同的表位的抗体指在竞争测定中阻断该参照抗体与其抗原结合的50％或更多的抗体，反之，在竞争测定中参照抗体阻断该抗体与其抗原的结合的50％或更多。抗体竞争测定为已知的，并且本文提供了示例性竞争测定。
抗体可以具有一个或更多个结合位点。如果存在不止一个结合位点，则这些结合位点可以是彼此相同的或者可以是不同的。例如，天然出现的免疫球蛋白具有两个相同的结合位点，单链抗体或Fab片段具有一个结合位点，而双特异性或双功能抗体具有两个不同的结合位点。
典型地，天然出现的免疫球蛋白具有通过二硫键相互连接的重链和轻链。免疫球蛋白基因包括k、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及众多的免疫球蛋白可变结构域基因。有两种类型的轻链，λ和κ。有5中主要的重链类别(或同种型)，其决定了抗体分子的功能活性：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。
每个重链和轻链含有恒定区和可变区(参见，例如，Kindt等，Kuby Immunology,6thed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007))。提及“VH”或“VH”指抗体重链的可变区，包括抗原结合片段(例如Fv、scFv、dsFv或Fab)的可变区。提及“VL”或“VL”指抗体轻链的可变区，包括Fv、scFv、dsFv或Fab的可变区。在几个实施方案中，该VH和VL组合，以特异结合抗原。在另外的实施方案中，仅需要VH。例如，天然出现的骆驼科(camelid)抗体仅由重链构成，它们在不存在轻链时是有功能的和稳定的(参见，例如，Hamers-Casterman等,Nature,363:446-448,1993；Sheriff等,Nat.Struct.Biol.,3:733-736,1996)。所公开的抗体的任一个包括异源恒定区。例如，抗体包括不同于天然恒定区的恒定区，该恒定区例如包括一个或更多个修饰(例如“LS”突变)，以增加半衰期。
该VH和VL含有被三个也称为“互补决定区”或“CDR”的超变区中断的“框架区”(参见，例如，Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1991)。不同的轻链或重链的框架区的序列在物种内是相对保守的。抗体的框架区，即组成的轻链和重链的组合框架区，用于CDR在三维空间定位和对齐。
这些CDR主要负责对抗原表位的结合。给定CDR的氨基酸序列边界可容易地采用数种公知的方案中的任一种来确定，包括Kabat等，(“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,”5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991；“Kabat”编号方案)，Al-Lazikani等,(JMB 273,927-948,1997；“Chothia”编号方案)，以及Lefranc等(“IMGT unique numbering for immunoglobulinand T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,”Dev.Comp.Immunol.,27:55-77,2003；“IMGT”编号方案)。每条链的CDR通常称为CDR1、CDR2和CDR3(从N末端到C末端)，还通过具体CDR所在的链来识别。因此，VH CDR3为来自其所存在于其中的抗体的VH的CDR3，而VL CDR1为来自其所存在于其中的抗体的VL的CDR1。轻链CDR有时也称为LCDR1、LCDR2和LCDR3。重链CDR有时也称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
“单克隆抗体”为从大体上均一的抗体群体(即除了可能的变体抗体外，例如，含有天然发生的突变或在单克隆抗体制备期间出现的(这些变体一般以小量存在)，构成该群体的单个抗体是相同的和/或结合相同的表位)获得的抗体。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。因此，修饰语“单克隆的”表明该抗体特征为从大体上均一的抗体群体获得的，而不应解释为需要通过任何特定方法产生该抗体。例如，该单克隆抗体可以通过各种技术生成，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法，以及利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述制备单克隆抗体的这些方法和其它示例性方法。在一些实例中，单克隆抗体是从受试者分离的。单克隆抗体可具有保守氨基酸替换，其对抗原结合或其它免疫球蛋白功能基本上无影响。(参见，例如，Harlow&Lane,Antibodies,A Laboratory Manual,2nd ed.Cold Spring Harbor Publications,New York(2013)。)在一些实施方案中，任何本文公开的抗体都可为单克隆抗体。
“人源化”抗体或抗原结合片段包括人框架区和一个或更多个来自非人(例如小鼠、大鼠或合成的)抗原或抗原结合片段的CDR。提供CDR的该非人抗体或抗原结合片段称为“供体”，提供框架区的该人抗体或抗原结合片段成为“受体”。在一个实施方案中，在人源化免疫球蛋白中全部的CDR都来自供体免疫球蛋白。恒定区不必存在，但如果它们存在的话，它们可与人免疫球蛋白恒定区基本上一致，例如至少约85-90％、例如约95％或更高的一致。因而，除了可能的CDR之外，人源化抗体或抗原结合片段的所有部分与天然人抗体序列的对应部分基本上一致。
“嵌合”抗体为这样的抗体，其包括衍生自两个不同抗体并通常是不同物种的序列。在一些实例中，嵌合抗体包括来自一个人抗体的一个或更多个CDR和/或框架区和来自另一人抗体的CDR和/或框架区。
“完全人抗体”或“人抗体”为这样的抗体，其包括来自(或衍生自)人基因组的序列，并且不包括来自其它物种的序列。在一些实施方案中，人抗体包括来自人基因组的CDR、框架区和(如果存在的话)Fc区。可采用基于源自人基因组的序列生成抗体的技术，例如通过噬菌体展示或采用转基因动物，来识别和分离人抗体(参见，例如，Barbas等Phagedisplay:A Laboratory Manuel.1st Ed.New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,2004.Print.；Lonberg,Nat.Biotech.,23:1117-1125,2005；Lonenberg,Curr.Opin.Immunol.,20:450-459,2008)。
中和HIV-1的抗体或抗原结合片段：以抑制与HIV-1 Env(例如结合其靶受体)相关的生物学功能的方式特异结合HIV-1 Env(例如，结合gp41)的抗体或抗原结合片段。在几个实施方案中，中和HIV-1的抗体或抗原结合片段降低HIV-1的感染滴度。在一些实施方案中，特异结合HIV-1 Env的抗体或抗原结合片段可中和两种或更多种(例如3、4、5、6、7、8、9、10或更多种)HIV-1株。
针对HIV-1的广谱中和抗体不同于其它的针对HIV-1抗体，在于它们中和循环中高百分比的诸多类型HIV-1。因此，HIV-1广谱中和抗体为通过结合并抑制相关HIV-1抗原(例如与该抗原的抗原性表面共有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的抗原)的功能来降低HIV-1感染滴度的抗体。在一些实施方案中，针对HIV-1的广谱中和抗体不同于其它的针对HIV-1的抗体，在于它们中和循环中高百分比的诸多类型HIV-1(例如至少80％、至少85％、至少90％或至少95％)。
抗体自身反应性(self-reactivity)或自体反应性(autoreactivity)：抗体的性质，借此抗体与自身表位，即受试者产生的蛋白和/或脂类的表位反应。不具有自身反应性的抗体基本上不与受试者的细胞的细胞膜上存在的表位或脂类结合。确定抗体是否与自身表位反应的方法为本领域普通技术人员所知。在一个实例中，采用HEp-2细胞染色(心磷脂结合测定)或抗核抗原(ANA)测定来评价抗体自身反应性。该抗ANA测定包括例如抗ANA测定或ANA细胞染色测定。在几个实施方案中，所公开的抗体不是自身反应性的(或自体反应性的)，或者为最低自身反应性的。在非限定性实例中，所公开的抗体大体上不会具有比10E8抗体更高的自身反应性。例如，所公开的抗体或抗原结合片段与10E8抗体相比可具有不超过10％的更高自体反应性，例如通过采用HEp-2细胞染色、心磷脂结合、抗ANA测定或ANA细胞染色测定所测量的。在另一非限定性实例中，所公开的抗体不具有超过背景水平的自身反应性，如通过采用抗ANA测定法或ANA细胞染色测定所测量的。
生物样品：从受试者获得的样品。生物样品包括可用于在受试者中检测疾病或感染(例如，HIV感染)的所有临床样品，包括但不限于，细胞，组织，和体液，例如血液、血液衍生物和组分(例如血清)、脑脊液；以及活检或手术切除的组织，例如未固定的、冷冻的或在***或石蜡中固定的组织。在具体实例中，生物样品是从患有或怀疑患有HIV-1感染的受试者获得的。
双特异性抗体：由两个不同抗原结合结构域构成并由此结合两个不同抗原性表位的重组分子。双特异性抗体包括两个结构域的化学或基因上连接的分子。该抗原结合结构域可采用接头(linker)连接。该抗原结合结构域可为单克隆抗体、抗原结合片段(例如，Fab、svFv)或它们的组合。双特异性抗体包括一个或更多个恒定结构域，但不必包括恒定区。
足以形成免疫复合物的条件：允许抗体或抗原结合片段结合其关联表位的条件，其结合程度可检测地高于和/或实质上排除结合大体上所有其它表位。足以形成免疫复合物的条件依赖结合反应的形式，并通常为免疫测定规程中采用的那些或体内遇到的那些条件。对于免疫测定形式和条件的描述，参见Harlow&Lane,Antibodies,A LaboratoryManual,2nd ed.Cold Spring Harbor Publications,New York(2013)。这些方法中使用的条件为“生理条件”，其包括参考在活哺乳动物或哺乳动物细胞内的条件(例如，温度、渗透压、pH)。尽管已意识到一些器官经受极端条件，但生物体内和细胞内环境一般处于pH 7左右(例如，pH 6.0至pH 8.0，更典型的为pH 6.5至7.5)，含有作为主要溶剂的水，以及在高于0℃和低于50℃的温度下存在。渗透压在支持细胞存活和增殖的范围内。
可通过技术人员已知的常规方法检测免疫复合物的形成，例如免疫组织化学、免疫沉淀、流式细胞术、免疫荧光显微镜、ELISA、免疫印迹(例如，Western印迹)、磁共振成像、CT扫描、X射线和亲和层析。所选抗体的免疫结合性质可以采用本领域已知的方法定量。
缀合物(Conjugate)：连接在一起，例如通过共价键连接在一起的两个分子的复合物。在一个实施方案中，抗体连接至效应分子；例如，特异结合HIV-1 Env的抗体共价连接至效应分子。该连接可通过化学或重组手段形成。在一个实施方案中，该连接是化学的，其中抗体模块(moity)和效应分子之间的反应产生在两分子之间形成的共价键，以形成一个分子。可任选地在抗体和效应分子之间包括肽接头(短肽序列)。因为缀合物可从具有独立功能性的两个分子如抗体和效应分子制备，所以它们有时也称为“嵌合分子”。
保守变体：“保守”氨基酸替换为基本上不影响或减弱蛋白功能(例如蛋白与靶蛋白相互作用的能力)的那些替换。例如，HIV特异性抗体与参照抗体序列相比包括多至1、2、3、4、5、6、7、8、9个或多至10个保守替换，并保留对HIV-1抗原的特异结合活性和/或HIV-1中和活性。该术语保守变体还可包括用取代的氨基酸代替未取代的亲本氨基酸。
此外，普通技术人员将意识到，在编码的序列中改变、添加或删除单个氨基酸或小百分比的氨基酸(例如小于5％，在一些实施方案中小于1％)的各个替换、删除或添加为保守性变动，其中该改变导致氨基酸被化学上类似的氨基酸替换。
提供功能上类似氨基酸的保守氨基酸替换表为本领域普通技术人员所公知。以下的6组为被认为是彼此保守替换的氨基酸的实例：
1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；
2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；以及
6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
非保守替换为降低HIV特异性抗体的活性或功能(例如特异结合gp41的能力)的那些。例如，如果氨基酸残基对蛋白的功能是关键性的，则甚至保守替换也可能破坏活性。因此，保守替换不改变目的蛋白的基础功能。
接触：置于直接的物理联系中；包括在固体和液体形式中，其可发生在体内或体外。接触包括一个分子和另一分子的接触，例如一个多肽如抗原的表面上的氨基酸与另一多肽如抗体接触。接触还可包括接触细胞，例如将抗体置于与细胞直接物理联系。
对照：参照标准。在一些实施方案中，对照为阴性对照，例如从未感染HIV-1的健康患者获得的样品。在其它实施方案中，对照为阳性对照，例如从诊断为HIV-1感染的患者获得的组织样品。在另外实施方案中，对照为历史对照或标准参考值或范围值(例如之前测试的对照样品，例如具有已知的诊断或结果的HIV-1患者组，或代表基线或正常值的样品组)。
测试样品和对照之间的差异可为增加，或反之，降低。该差异可为定性差异或定量差异，例如统计学显著差异。在一些实例中，差异为相对于对照增加或降低至少约5％，例如至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约100％、至少约150％、至少约200％、至少约250％、至少约300％、至少约350％、至少约400％或至少约500％。
简并变体：在本公开上下文中，“简并变体”指编码蛋白(例如，特异结合gp41的抗体或其可变区)的多核苷酸，其包括作为遗传密码的结果而为简并的(degenerate)的序列。有20种天然氨基酸，其大多数由不止一个密码子指定。因此，包括所有的简并核苷酸序列，只要由该核苷酸序列编码的结合gp41的抗体氨基酸序列不变。
可检测标记物：直接或间接缀合至第二分子如抗体、以促进对该第二分子的检测的可检测分子(也称为标签)。例如，可检测标记物能够通过ELISA、分光光度法、流式细胞术、显微术或诊断成像技术(例如CT扫描、MRI、超声、纤维光学检查，以及腹腔镜检查)检测。可检测标记物的具体非限定性实例包括荧光团、化学发光剂、酶学连接(enzymaticlinkages)、放射性同位素和重金属或化合物(例如用于通过MRI检测的超顺磁性氧化铁纳米晶体)。在一个实例中，“标记抗体”指在该抗体分子中并入另一分子。例如，标签为可检测标记物，例如并入放射性标记的氨基酸或将可通过标记的亲和素(例如，含有可通过光学或比色法检测的荧光标记物或酶学活性的链霉亲和素)检测的生物素基模块附着至多肽。标记多肽和糖蛋白的各种方法在本领域是已知的，可以使用。标记多肽的标签的实例包括但不限于如下：放射性同位素或放射性核素(例如35S或131I)、荧光标签(例如异硫氰酸荧光素(FITC)、若丹明、镧系磷光体)、酶学标签(例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光标记物、生物素基集团、由第二报告子识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)或磁性剂如钆螯合物。在一些实施方案中，标签附着有不同长度的间隔臂以减少潜在的空间位阻。使用可检测标记物的方法和对适合于各种目的的可检测标记物的选择的指导例如在Sambrook等(Molecular Cloning:A Laboratory Manual,4th ed,Cold Spring Harbor,New York,2012)和Ausubel等(In Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York,through supplement 104,2013)中有讨论。
检测：确定某事物的存在(existence,presence)或事实。检测的通用方法为技术人员所知，并且可由本文公开的规程和试剂进行补充。例如，本文包括在受试者中检测表达gp41的细胞的方法。
效应分子：准备具有或产生期望的效果的分子；例如，对该效应分子所靶向的细胞的期望效果。效应分子包括，例如多肽和小分子。在一个非限定性实例中，该效应分子为毒素。技术人员会理解，一些效应分子可以具有或产生不止一种期望的效果。
表位：抗原决定簇。这些是在分子上具有抗原性即引起特定免疫应答的特定化学基团或肽序列。抗体特异结合多肽上的特定抗原表位。在一些实例中，所公开的抗体特异结合gp41上的表位。
表达：核酸序列的转录或翻译。例如，当编码核酸序列(例如基因)的DNA被转录为RNA或RNA片段(在一些实例中其被加工成mRNA)时，其可被表达。当编码核酸序列(例如基因)的mRNA被翻译成氨基酸序列如蛋白或蛋白片段时，其也可以被表达。在具体实例中，当异源基因被转录为RNA时，其被表达。在另一实例中，当异源基因的RNA被翻译成氨基酸序列时，其被表达。表达的调节包括对转录、翻译、RNA运输和加工、中间分子如mRNA的降解的控制或通过蛋白分子在产生后的活化、失活、区室化(compartmentalization)或降解。
表达控制序列：调节与其可操作地连接的异源核酸序列的表达的核酸序列。当表达控制序列控制并调节核酸序列的转录和翻译(视情况)时，则表达控制序列可操作地连接至核酸序列。因此表达控制序列包括适当的启动子、增强子、转录终止子、蛋白编码基因前的起始密码子(ATG)、内含子剪接信号、维持该基因的正确阅读框以允许mRNA的正确翻译，以及终止密码子。术语“控制序列”旨在最低限度包括其存在可影响表达的组分，并且还可包括额外的组分，它们的存在是有利的，例如前导序列和融合伴侣序列。表达控制序列包括启动子。
启动子为足以引导转录的最小序列。还包括那些启动子元件，它们足以赋予启动子依赖的基因表达在细胞特异的、组织特异的或通过外来信号或试剂可诱导的方面是可控的；这些元件可以位于基因的5'或3'区。包括组成型和诱导型启动子(参见，例如Bitter等,Methods in Enzymology 153:516-544,1987)。例如，当在细菌***中克隆时，可以使用诱导型启动子，例如噬菌体λ的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac杂种启动子)。在一个实施方案中，当在哺乳动物细胞***中克隆时，可使用衍生自哺乳动物细胞基因组(例如金属硫蛋白启动子)或衍生自哺乳动物病毒(例如逆转录病毒长末端重复；腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)的启动子。通过重组DNA或合成技术产生的启动子也可以用于提供对核酸序列的转录。
多核苷酸可***表达载体中，该表达载体含有促进所***的基因序列在宿主中有效转录的启动子序列。该表达载体通常含有复制起点、启动子，以及允许对转化细胞进行表型筛选的特异核酸序列。
表达载体：包括包含可操作地连接至待表达核酸序列的表达控制序列的重组多核苷酸的载体。表达载体包括用于表达的足够的顺式作用元件；其它的用于表达的元件可由宿主细胞提供或者位于体外表达***中。表达载体包括本领域已知的所有表达载体，例如并入重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸露的或包含在脂质体中)和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒，以及腺相关病毒)。
Fc区：包括抗体除第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的恒定区的多肽。Fc区通常指IgA、IgD和IgG的后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的后三个恒定区免疫球蛋白结构域。Fc区还可以包括这些结构域N末端的柔性铰链的部分或全部。对于IgA和IgM，Fc区可以包括或可以不包括尾片(tailpiece)，并且可以通过或可以不通过J链结合。对于IgG，Fc区包括免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3，以及Cγ2和Cγ3之间的铰链的较低部分。尽管Fc区的边界可以变动，但人IgG重链Fc区通常定义为包括其羧基末端的残基C226或P230，其中该编号遵循如Kabat中的EU指数。对于IgA，Fc区包括免疫球蛋白结构域Cα2和Cα3，以及Cα1和Cα2之间的铰链的较低部分。所公开的抗体的任一个包括异源Fc区或异源恒定结构域。例如，抗体包括不同于天然Fc区或恒定结构域的Fc区或恒定结构域，例如Fc区或恒定结构域包括一个或更多个修饰(例如“LS”突变)，以增加半衰期。
HIV-1包膜蛋白(Env):该HIV-1包膜蛋白最初合成为845至870氨基酸大小的前体蛋白，称为gp160。单独的gp160多肽形成同型三聚体，并在高尔基体内经历糖基化和加工以除去信号肽，以及通过细胞蛋白酶在大概位置511/512之间切割以产生分开的gp120和gp41多肽链，它们在该同型三聚体内作为gp120/gp41原聚体(protomer)保持关联。HIV-1 Env三聚体的胞外结构域(即，细胞外部分)经历几次结构重排，从逃避抗体识别的融合前成熟的(切割的)封闭构象，经过结合受体CD4和辅受体(CCR5或CXCR4)的中间构象，到融合后构象。
在公开的HIV-1 Env蛋白及其片段中所用的编号与Numbering Positions in HIVRelative to HXB2CG Bette Korber等,Human Retroviruses and AIDS 1998:ACompilation and Analysis of Nucleic Acid and Amino Acid Sequences.Korber等,Eds Theoretical Biology and Biophysics Group,Los Alamos National Laboratory,Los Alamos,NM中描述的HXB2编号方案相关，通过引用将其全文并入本文。
HIV-1 gp120：作为HIV-1 Env蛋白的一部分的多肽。成熟gp120包括大概HIV-1Env残基31至511，包含HIV-1 Env三聚体的大部分外部的表面暴露结构域，正是gp120结合细胞CD4受体和细胞趋化因子受体(例如CCR5)。成熟gp120多肽为高度N-糖基化的细胞外多肽，其与gp41胞外结构域相互作用以形成HIV-1 Env原聚体，该HIV-1 Env原聚体三聚形成HIV-1 Env三聚体。
HIV-1 gp41：作为HIV-1 Env蛋白的一部分的多肽。成熟gp41包括大概HIV-1 Env残基512至860，并且包括细胞质、跨膜和胞外结构域。gp41胞外结构域(包括大概HIV-1 Env残基512至644)可与gp120相互作用以形成HIV-1 Env原聚体，该HIV-1 Env原聚体三聚形成HIV-1 Env三聚体。
Gp41包括近膜外区(membrane-proximal external region，MPER)，其紧邻gp41的跨膜区的N末端。该MPER是高度疏水的(50％残基为疏水的)，并且在很多HIV-1进化枝(clade)之间是高度保守的(Zwick,M.B.等,J Virol,75(22):p.10892-905,2001)。HIV-1gp41的MPER包括10E8单克隆抗体的靶表位。
1型人免疫缺陷病毒(HIV-1):逆转录病毒，引起人免疫抑制(HIV-1病)，并导致称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的疾病综合征(disease complex)。“HIV-1疾病”指HIV-1感染(如通过抗体或western印迹研究所确定的)的人中公认的一系列体征和症状(包括机会性感染的出现)。与此疾病相关的实验室结果包括T细胞中的进行性衰退。用作动物模型的相关病毒包括猴免疫缺陷病毒(SIV)和猫免疫缺陷病毒(FIV)。用HAART治疗HIV-1在降低病毒载量方面有效并且已在感染个体中缓解HIV-1感染效果。
HXB2编号***:用于HIV-1蛋白和核酸序列的参考编号***，采用HIV-1 HXB2株序列作为用于所有其它HIV-1株序列的参考。本领域普通技术人员熟悉该HXB2编号***，该编号***阐述在“Numbering Positions in HIV Relative to HXB2CG,”Bette Korber等,Human Retroviruses and AIDS 1998:A Compilation and Analysis of Nucleic Acidand Amino Acid Sequences.Korber B,Kuiken CL,Foley B,Hahn B,McCutchan F,Mellors JW,and Sodroski J,Eds.Theoretical Biology and Biophysics Group,LosAlamos National Laboratory,Los Alamos,NM,通过引用将其全文并入本文。HXB2也称为：HXBc2，指HXB克隆2；HXB2R，在Los Alamos HIV数据库中，R表示修订的，因为其相对于原始HXB2序列稍有修订；以及HXB2CG，在GENBANKTM中，指HXB2完整基因组。本文公开的gp120和gp41多肽中所用的编号是相对于该HXB2编号方案。作为参考，HXB2的HIV-1 Env氨基酸序列显示如下：
MRVKEKYQHLWRWGWRWGTMLLGMLMICSATEKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVLVNVTENFNMWKNDMVEQMHEDIISLWDQSLKPCVKLTPLCVSLKCTDLKNDTNTNSSSGRMIMEKGEIKNCSFNISTSIRGKVQKEYAFFYKLDIIPIDNDTTSYKLTSCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGTGPCTNVSTVQCTHGIRPVVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSVNFTDNAKTIIVQLNTSVEINCTRPNNNTRKRIRIQRGPGRAFVTIGKIGNMRQAHCNISRAKWNNTLKQIASKLREQFGNNKTIIFKQSSGGDPEIVTHSFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNSTWSTEGSNNTEGSDTITLPCRIKQIINMWQKVGKAMYAPPISGQIRCSSNITGLLLTRDGGNSNNESEIFRPGGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLGVAPTKAKRRVVQREKRAVGIGALFLGFLGAAGSTMGAASMTLTVQARQLLSGIVQQQNNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAVERYLKDQQLLGIWGCSGKLICTTAVPWNASWSNKSLEQIWNHTTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWFNITNWLWYIKLFIMIVGGLVGLRIVFAVLSIVNRVRQGYSPLSFQTHLPTPRGPDRPEGIEEEGGERDRDRSIRLVNGSLALIWDDLRSLCLFSYHRLRDLLLIVTRIVELLGRRGWEALKYWWNLLQYWSQELKNSAVSLLNATAIAVAEGTDRVIEVVQGACRAIRHIPRRIRQGLERILL
(SEQ ID NO:26；登记号K03455，通过引用将2015年5月4日在数据库中存在的序列并入本文)。
IgA:属于基本上由公认的免疫球蛋白α基因编码的抗体类别的多肽。在人类中，该类别或同种型包括IgA1和IgA2。IgA抗体可作为单体、主要为二聚体形式的多聚体(称为pIgA)以及分泌性IgA存在。野生型IgA的恒定链在其C末端含有18个氨基酸延伸，称为尾片(tail piece，tp)。多聚IgA由浆细胞分泌，由称为J链的15kDa肽通过尾片中保守半胱氨酸残基连接两个IgA单体。
IgG:属于基本上由公认的免疫球蛋白γ基因编码的抗体类别或同种型的多肽。在人类中，该类别包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在小鼠中，该类别包括IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3。
免疫复合物：抗体或抗原结合片段(例如scFv)与可溶性抗原的结合形成免疫复合物。可通过技术人员已知的常规方法检测免疫复合物的形成，例如免疫组织化学、免疫沉淀、流式细胞术、免疫荧光显微镜、ELISA、免疫印迹(例如，Western印迹)、磁共振成像、CT扫描、X射线和亲和层析。所选抗体的免疫结合性质可以采用本领域已知的方法定量。
分离的：生物组分(例如核酸、肽、蛋白或蛋白复合物，例如抗体)，其已基本上与该组分在其中天然出现的生物体的细胞中的其它生物组分(即，其它染色体和染色体外DNA和RNA，以及蛋白)分开、分别产生或纯化出来。因此，分离的核酸、肽和蛋白包括通过标准纯化方法纯化的蛋白和蛋白。该术语还涵盖通过在宿主细胞中重组表达制备的核酸、肽和蛋白，以及化学合成的核酸。分离的核酸、肽或蛋白如抗体可为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％纯的。
接头：可用于将两个分子连接成一个连续分子，例如将效应分子连接至抗体的双功能分子。在一些实施方案中，所提供的缀合物包括效应分子或可检测标记物和抗体之间的接头。在一些情况下，接头为抗原结合片段(例如Fv片段)内的肽，其起到间接键合VH和VL的作用。肽接头的非限定性实例包括(G4S)1接头、(G4S)2接头或(G4S)3接头。
术语“缀合(conjugating)”、“联结(joining)”、“键合(bonding)”或“连接(linking)”可指让两个分子成为一个连续分子；例如，将两个多肽连接成一个连续多肽，或将效应分子或可检测标记物放射性核素或其它分子共价附着至多肽如scFv。在特定上下文中，这些术语包括指代将诸如抗体模块的配体联结至效应分子。该连接可通过化学或重组手段形成。“化学手段”指抗体模块和效应分子之间的反应，使得在两分子之间形成有共价键，以形成一个分子。
核酸分子：核苷酸的多聚形式，其可以包括RNA、cDNA、基因组DNA的正义和反义链，以及它们的合成形式和混合多聚体。核苷酸指核糖核苷酸、脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式。术语“核酸分子”用在本文时与“核酸”和“多核苷酸”同义。核酸分子通常为至少10个碱基长，除非另有说明。该术语包括单链和双链形式的DNA。多核苷酸可以包括通过天然存在的和/或非天然存在的核苷酸键连接在一起的天然存在的和修饰的核苷酸之一或二者。“cDNA”指与mRNA互补或相同的DNA，无论是单链还是双链形式。“编码”指多核苷酸如基因、cDNA或mRNA中特异核苷酸序列的固有性质，在生物过程中用作合成其它多聚物和大分子的模板，该多聚物和大分子具有确定的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或确定的氨基酸序列以及由此产生的生物学性质。
可操作地连接的：当第一核酸序列置于与第二核酸序列功能关系中时，第一核酸序列可操作地连接第二核酸序列。例如，诸如CMV启动子的启动子可操作地连接编码序列，如果该启动子影响该编码序列的转录或表达。一般地，可操作地连接的DNA序列为连续的，并且必要的话，在相同阅读框中联结两个蛋白编码序列。
药学上可接受的载体：药学上可接受的载体的使用是常规的。Remington'sPharmaceutical Science,22th ed.,Pharmaceutical Press,London,UK(2012)描述了适用于所公开试剂的药物递送的组合物和制剂。
通常，该载体的性质取决于所采用的具体施用模式。例如，胃肠外制剂通常包括可注射流体，其包括作为媒介(vehicle)的药学和生理学上可接受的流体，例如水、生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水溶液、甘油等。对于固体组合物(例如，粉末、药丸、片剂或胶囊形式)，常规的无毒固体载体包括例如药用级甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物学上中性载体，待施用的药物组合物还可含有小量的无毒辅助物质，例如润湿剂或乳化剂，添加的防腐剂(例如天然防腐剂(on-natural preservatives))，以及pH缓冲剂等，例如醋酸钠或脱水山梨醇单月桂酸酯。在特定实例中，该药学上可接受的载体为无菌的，并适用于例如通过注射对受试者胃肠外施用。在一些实施方案中，该活性剂和药学上可接受的载体以诸如药丸的单位剂量形式提供，或以小瓶中的可选量提供。单位剂量形式包括一次剂量或多次剂量(例如，在从其中可选择性分配试剂的计量剂量的小瓶中)。
多肽：其中单体为氨基酸残基的多聚物，这些氨基酸残基通过酰胺键联结在一起。当氨基酸为α氨基酸时，L光学异构体或D光学异构体都可使用，优选L异构体。术语“多肽”或“蛋白”用在本文时旨在涵盖任何氨基酸序列，包括修饰的序列，例如糖蛋白。多肽包括天然出现的蛋白，以及重组或合成产生的那些。多肽具有氨基末端(N末端)和羧基末端。在一些实施方案中，该多肽为公开的抗体或其片段。
多肽修饰：多肽可通过各种化学技术修饰以产生衍生物，该衍生物具有与未修饰肽实质上相同的活性和构象，并任选地具有其它期望的性质。例如，蛋白的羧酸基团，无论是羧基末端还是侧链，都可以以药学上可接受的阳离子的盐的形式提供或者酯化以形成C1至C16酯，或者转化为式NR1R2的酰胺，其中R1和R2每个独立地为H或C1-C16烷基或组合以形成杂环，例如5元或6元环。肽的氨基基团，无论是氨基末端还是侧链，都可以为药学上可接受的酸加成盐的形式，例如HCl、HBr、乙酸、安息香酸、甲苯磺酸、马来酸、酒石酸或其它有机盐，或者可以修饰为C1-C16烷基或二烷基氨基或进一步转化为酰胺。
可采用公认的技术将该多肽侧链的羟基基团转化为C1-C16烷氧基或C1-C16酯。肽侧链的苯基和酚环可用一个或更多个卤素原子如F、Cl、Br或I取代，或用C1-C16烷基、C1-C16烷氧基、羧酸及其酯或这些羧酸的酰胺取代。肽侧链的亚甲基基团可扩展为对应的C2-C4亚烷基。可用数种公认的保护基团的任何一种如乙酰胺来保护巯基。
重组：重组核酸是这样的核酸，其具有非天然存在的序列，或具有通过人工组合两个原本分开的序列节段而形成的序列。这种人工组合可通过化学合成完成，或者更经常地，通过人工操作分离的核酸节段，例如通过基因工程技术来完成。重组蛋白是这样的蛋白，其具有非天然存在的序列，或具有通过人工组合两个原本分开的序列节段而形成的序列。在几个实施方案中，重组蛋白由已引入宿主细胞如细菌或真核细胞的异源(例如重组的)核酸编码。该核酸可例如在具有能够表达由该引入的核酸编码的蛋白的信号的表达载体上引入，或者该核酸可整合进宿主染色体。
序列一致性：两氨基酸序列之间的相似性借由序列之间的相似性表示，也称为序列一致性。序列一致性常常根据百分比一致性(或相似性或同源性)来衡量；百分比越高，两序列之间就更相似。当采用标准方法比对时，多肽的同源物或变体将具有相对高程度的序列一致性。
用于比较的序列比对方法为本领域公知的。各种程序和比对算法描述在Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981；Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970；Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444,1988；Higgins和Sharp,Gene 73:237,1988；Higgins和Sharp,CABIOS 5:151,1989；Corpet等,Nucleic Acids Research 16:10881,1988；以及Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444,1988中。Altschul等,Nature Genet.6:119,1994，提出了序列比对方法和同源性计算的详细考虑。
NCBI Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)(Altschul等,J.Mol.Biol.215:403,1990)可以从数个来源获得，包括国家生物技术信息中心(NCBI,Bethesda,MD)和英特网上，其用于与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx结合使用。关于如何使用该程序来确定序列一致性的描述可在英特网上的NCBI网址获得。
特异结合多肽的抗体的VL或VH的同源物和变体的典型特征在于，在与目标氨基酸序列进行全长比对时计算得到具有至少约75％、例如至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列一致性。当通过这种方法评估时，与参比序列具有甚至更高的相似性的蛋白将显示出增加的百分比一致性，例如至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性。当比较小于全长序列的序列一致性时，同源物和变体通常在10至20个氨基酸的短窗口内具有至少80％的序列一致性，并且取决于它们与参比序列的相似性，可能具有至少85％或至少90％或95％的序列一致性。在这种短窗口上确定序列一致性的方法可在因特网上的NCBI网址处获得。本领域技术人员将会认识到，提供这些序列一致性的范围仅仅是为了指导；完全可能获得落在所提供的范围之外的非常显著的同源物。
用于描述两个或更多个核苷酸序列或氨基酸序列之间的序列关系的术语包括“参比序列”、“选自”、“比较窗口”、“一致的”、“序列一致性百分比”、“基本上一致的”、“互补的”，以及“基本上互补的”。
对于核酸序列的序列比较，通常是将一个序列用作参比序列，测试序列与其比较。当采用序列比对算法时，将测试和参比序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。使用默认程序参数。用于比较的序列比对方法为本领域公知的。用于比较的最佳序列比对可例如通过Smith&Waterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981的局部同源性算法、通过Needleman&Wunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970的同源性比对算法、通过Pearson&Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444,1988的相似性检索算法、通过这些算法的计算机执行(Wisconsin Genetics Software Package中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WI)或通过手工比对和视觉检查(参见，例如,Sambrook等(Molecular Cloning:A Laboratory Manual,4th ed,Cold SpringHarbor,New York,2012)和Ausubel等(In Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York,through supplement 104,2013)来进行。一个有用算法的实例为PILEUP。PILEUP采用简化的Feng&Doolittle,J.Mol.Evol.35:351-360,1987的渐进比对算法。所用的方法类似于Higgins&Sharp,CABIOS 5:151-153,1989描述的方法。采用PILEUP，将参比序列与其它测试序列比较以确定百分比序列一致性关系，采用如下参数：默认空位权重(3.00)、默认空位长度权重(0.10)，以及加权的末端空位。PILEUP可从GCG序列分析软件包如版本7.0(Devereaux et al.,Nuc.Acids Res.12:387-395,1984)获得。
另一适合于确定百分比序列一致性和序列相似性的算法实例为BLAST和BLAST2.0算法，它们描述在Altschul等,J.Mol.Biol.215:403-410,1990和Altschul等,NucleicAcids Res.25:3389-3402,1977中。用于进行BLAST分析的软件是可通过国家生物技术信息中心(ncbi.nlm.nih.gov)公开获得的。BLASTN程序(用于核苷酸序列)将字长(W)为11，比对(B)为50，预期(E)为10，M＝5，N＝-4，以及两条链比较用作默认值。BLASTP程序(用于氨基酸序列)将字长(W)3和预期(E)10，以及BLOSUM62打分矩阵用作默认值(参见Henikoff&Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915,1989)。寡核苷酸为在长度上多至约100个核苷酸的线性多核苷酸序列。
特异结合：当提及抗体或抗原结合片段时，指结合反应，其在各种各样蛋白群体和其它生物分子存在情况下确定靶蛋白、肽或多糖的存在。因此，在指定条件下，抗体优先结合特定的靶蛋白、肽或多糖(例如存在于病原体表面的抗原，例如HIV-1 Env)，并且不以显著量结合存在于样品或受试者中的其它蛋白或多糖。特异结合可通过本领域已知的方法确定。至于抗体抗原复合物，抗原和抗体的特异结合具有小于约10-7摩尔的KD，例如小于约10-8摩尔、10-9或甚至小于约10-10摩尔。
KD指给定相互作用的解离常数，例如多肽配体相互作用或抗原抗原相互作用。例如，对于抗体或抗原结合片段与抗原的双分子相互作用，其为双分子相互作用的单个组分的浓度除以复合物的浓度。
本文公开的抗体特异结合确定的靶(或多个靶，对于双特异性抗体的情况)。因此，特异结合gp41上表位的抗体为这样的抗体，其充分结合gp41，包括表达gp41的细胞或组织(gp41以其为衬底附着)，或生物样本中的gp41。当然会意识到，在抗体或包括抗体的缀合物(例如特异结合gp41的抗体或包括该抗体的缀合物)和非靶(例如不表达gp41的细胞)之间可能发生非特异相互作用。典型地，特异结合导致抗体和负载该抗原的蛋白或细胞之间具有比抗体和缺乏该抗原的蛋白或细胞之间更强的关联性。当与缺乏该表位的蛋白或细胞或组织相比时，特异结合典型地导致大于2倍、例如大于5倍、大于10倍或大于100倍的与包括该表位的蛋白或表达该靶表位的细胞或组织结合的抗体的量的增加。在这些条件下与蛋白的特异结合需要就其对特定蛋白的特异性来选择抗体。各种免疫测定方式适用于选择与特定蛋白有特异免疫反应的抗体或其它配体。例如，固相ELISA免疫测定被常规地用于选择与蛋白有特异免疫反应的单克隆抗体。对于可用于确定特异免疫反应性的免疫测定方式和条件的描述，参见Harlow&Lane,Antibodies,A Laboratory Manual,2nd ed.,Cold SpringHarbor Publications,New York(2013)。
受试者：活的多细胞脊椎动物生物体，一个包括人和非人哺乳动物的类别。在实例中，受试者为人。在特定实例中，受试者为新生婴儿。在另外的实例中，选择需要抑制HIV-1感染的受试者。例如，该受试者或者是未感染并有HIV-1感染风险，或者是已感染需要治疗。
治疗有效量：试剂如公开的gp41特异抗体或抗原结合片段的量，其足以防止、治疗(包括预防)、降低和/或缓解病症或疾病的症状和/或内在原因，例如防止、抑制和/或治疗HIV-1感染。在一些实施方案中，治疗有效量足以降低或消除疾病的症状，例如AIDS。例如，这可为抑制或防止HIV-1复制或可测量地改变HIV-1感染的外在症状所必要的量。通常，这种量将足以可测量地抑制HIV-1复制或感染性。理想地，治疗有效量提供治疗效果，而不在受试者中引起明显的细胞毒性效应。
在一些实施方案中，治疗有效量的所公开的结合gp41的抗体或抗原结合片段的施用可以以期望量降低或抑制HIV-1感染(例如，通过感染细胞测量的，或通过HIV-1感染受试者的数量或百分比测量的，或通过被感染受试者的存活时间延长所测量的)，例如与适当的对照比较，降低或抑制至少10％、至少20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或甚至至少100％(消除或防止可检测的HIV-1感染)。
本文公开的几种制备物以治疗有效量施用。施用至受试者的特异结合gp41的抗体或抗原结合片段的治疗有效量将随与该受试者相关的多个因素而变化，例如整体健康状况和/或受试者体重。治疗有效量可通过改变剂量并测量产生的治疗应答如病毒滴度的降低来确定。治疗有效量还可通过各种体外、体内或原位免疫测定来确定。
治疗有效量涵盖分剂量，其与之前或随后的施用组合而有助于获得治疗性应答。例如，试剂的治疗有效量可在持续数天或数周的疗程期间在单个剂量或几个剂量中例如每天施用。但是，治疗有效量可取决于所治疗的受试者、所治疗的状况的严重性和肿瘤，以及施用方式。试剂的单位剂量形式可以以治疗量或者以治疗量的倍数包装在例如小瓶或具有无菌组分的注射器中。
转化的：转化的细胞为已通过分子生物学技术引入了核酸分子的细胞。用在本文时，术语转化涵盖所有的可以将核酸分子引入该细胞的技术，包括用病毒载体转染、用质粒载体转化，以及通过电穿孔、脂转染和粒子枪加速(particle gun acceleration)。
治疗或防止疾病：防止疾病指例如在有HIV-1感染风险或具有HIV-1感染的受试者中抑制疾病或状况的完全出现。治疗疾病指在疾病或病理状况已开始出现后缓解该疾病或病理状况的体征或症状的治疗性介入。提及疾病或病理状况时，术语“缓解”指该治疗的任何可观察到的有益效果。该有益效果可例如通过以下方式来证实：例如，易感受试者中该疾病的临床症状的延迟发病，疾病的一些或全部临床症状严重性的降低，疾病的较慢进展，病毒载量的降低，受试者整体健康状况或幸福感的改善，或者本领域公知的特异于特定疾病的其它参数。“预防性”治疗为，出于降低出现病理的风险的目的，施用至未展现疾病体征的受试者的治疗。
术语“防止”不必意味着试剂完全消除疾病或症状，只要消除疾病或状况的至少一个特征即可。因此，抑制或防止感染的抗体可但不必完全消除这种感染，只要可测量地降低该感染即可，例如降低不存在该试剂时的感染的至少约50％，例如至少约70％或约80％，或甚至约90％，或者与参照试剂相比。
载体：载体包括允许其在宿主细胞中复制的核酸序列(例如，mRNA或DNA)，例如复制起点。载体还可包括一种或更多种可选择标记物和本领域已知的其它基因元件。病毒载体为重组的核酸载体，其具有至少一些核酸序列源自一种或更多种病毒。在一些实施方案中，提供了病毒载体，其包括一种或更多种编码所公开的特异结合HIV-1 gp41并中和HIV-1的抗体或抗原结合片段的核酸分子。在一些实施方案中，该病毒载体可为腺相关病毒(AAV)载体。复制缺陷病毒载体为这样的载体，由于至少一个复制关键基因功能的缺陷，其需要补充病毒基因组的一个或更多个复制所需的区域。例如，以使得该病毒载体不在典型的宿主细胞中复制，尤其是人患者中的那些可能在治疗性方法过程中被病毒载体感染的细胞。
VRC01类抗体，重链，或轻链:结合gp120上CD4的结合位点并可中和HIV-1感染的抗体类别，及其重链和轻链。VRC01类抗体的原型成员VRC01可中和超过90％的循环HIV-1分离株，平均50％抑制浓度(IC50)为～0.3μg/ml。尽管VRC01类抗体之间有总体的序列差异，但抗体-gp120共结晶结构揭示gp120的VRC01类识别在该类中是一致的。事实上，与来自多个供体的不同VRC01类抗体复合的来自不同HIV-1进化枝的HIV-1gp120的三维结构分析显示，VRC01类抗体在物理结构上共有惊人的相似性，并揭示了几个有助于gp120结合和HIV-1中和的抗体特征。VRC01类抗体的主要结构和个体发生特征允许通过抗体序列审查(interrogation)来识别该类的成员。
例如，VRC01类抗体的VH具有VH1-2种系起源，其中VRC01类VH编码序列与相应的种系基因序列有20-35％(例如25-30％)不同。该VRC01类VH在kabat位置50包括色氨酸残基(VHTrp50)，在kabat位置58包括天冬酰胺残基(VH Asn58)，以及在kabat位置71包括精氨酸残基(VH Arg71)。这些残基形成了与gp120上氨基酸的特异相互作用，有利于VRC01类的特异性和中和性质。当VRC01类抗体结合gp120时，VH Trp50与gp120 Asn280形成氢键，VH Asp58与gp120Arg456和Gly458形成氢键，VH Arg71与gp120 Asp368形成盐桥，以及VH Trp100B与gp120 Asn279形成氢键。
此外，VRC01类抗体的VL具有IGKV1-33、IGKV3-11、IGKV3-15、IGKV3-20或IGLV2-14种系起源，其中VRC01类VL编码序列与相应的种系基因序列有15-35％(例如25-30％)不同。该VRC01类VL或者包括具有2至6个氨基酸删除的LCDR1(kabat定位)，或者包括kabat位置28和30处具有甘氨酸残基的LCDR1。该删除或甘氨酸残基的存在提供了柔性，其允许在该抗体结合至CD4结合位点时该LCDR1避免与gp120的D环的结构冲突。此外，该VRC01类VL包括5个氨基酸长的LCDR3(根据kabat定位)，并包括kabat位置91处的疏水残基(例如亮氨酸或酪氨酸)，kabat位置92-95处的删除，以及kabat位置96处的谷氨酸或谷氨酰胺残基。位置91处的疏水残基靠着gp120 Loop D聚集成团，并且kabat位置96处的谷氨酸或谷氨酰胺残基与gp120 V5结构域基部保守的带正电区域相互作用。
落入VRC01类的抗体的非限定性实例包括VRC01、VRC03、VRC07、VRC07-523、VRC13、3BCN117、12A12、12A21、VRC-PG04、NIH45-46、VRC23、VRC-CH30、VRC-CH31和VRC-PG20。对这些抗体以及VRC01类抗体的描述、表征和产生是可获得的，并为本领域普通技术人员所熟悉(参见，例如，Diskin等,Science,334(6060):1289-93,2011；Kwong和Mascola,Immunity,37,412-425,2012；Li等,J.Virol.,85,8954-8967,2011；Rudicell等,J.Virol.,88,12669-12682,2012；Scheid等,Science,333(6049):1633-1637,2011；West等,PNAS,109:E2083-2090,2012；Wu等,Science,329(5993):856-861,2010；Wu等,Science,333(6049):1593-1602,2011；Zhou等,Immunity,39:245-258,2013；Georgiev等,Science,340:751-756,2013；Zhu等,PNAS,110,E4088-E4097,2013；以及WIPO公开Nos.WO2012/158948、WO2011038290、WO2012154312、WO2013142324和WO2013016468，通过引用将其每个的全文并入本文)。
VRC01、VRC07、VRC07-523(VRC07H-G54H重链和VRC01L-E1I2del-V3S轻链)和VRC07-544(VRC07H-I37V/G54H/T93A重链和VRC01-EIdel-V3S轻链)抗体描述在美国专利公开8337036和2014/0322163以及Rudicell等,J.Virol.,88:12669-12682,2014中，通过引用将其每个的全文并入。这些抗体的VH和VL序列提供如下：
VRC01 VH
QVQLVQSGGQMKKPGESMRISCRASGYEFIDCTLNWIRLAPGKRPEWMGWLKPRGGAVNYARPLQGRVTMTRDVYSDTAFLELRSLTVDDTAVYFCTRGKNCDYNWDFEHWGRGTPVIVSS(SEQ ID NO:27)
VRC01 VL
EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCRTSQYGSLAWYQQRPGQAPRLVIYSGSTRAAGIPDRFSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCQQYEFFGQGTKVQVDIK(SEQ ID NO:28)
VRC07 VH
QVRLSQSGGQMKKPGDSMRISCRASGYEFINCPINWIRLAPGKRPEWMGWMKPRGGAVSYARQLQGRVTMTRDMYSETAFLELRSLTSDDTAVYFCTRGKYCTARDYYNWDFEHWGQGTPVTVSS(SEQ ID NO:29)
VRC07 VL
EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCRTSQYGSLAWYQQRPGQAPRLVIYSGSTRAAGIPDRFSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCQQYEFFGQGTKVQVDIK(SEQ ID NO:28)
VRC07-523 VH
QVRLSQSGGQMKKPGDSMRISCRASGYEFINCPINWIRLAPGKRPEWMGWMKPRHGAVSYARQLQGRVTMTRDMYSETAFLELRSLTSDDTAVYFCTRGKYCTARDYYNWDFEHWGQGTPVTVSS(SEQ ID NO:30)
VRC07-523 VL
SLTQSPGTLSLSPGETAIISCRTSQYGSLAWYQQRPGQAPRLVIYSGSTRAAGIPDRFSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCQQYEFFGQGTKVQVDIK(SEQ ID NO:31)
VRC07-544 VH
QVRLSQSGGQMKKPGDSMRISCRASGYEFINCPINWVRLAPGKRPEWMGWMKPRHGAVSYARQLQGRVTMTRDMYSETAFLELRSLTSDDTAVYFCARGKYCTARDYYNWDFEHWGQGTPVTVSS(SEQ ID NO:32)
VRC07-544 VL
SLTQSPGTLSLSPGETAIISCRTSQYGSLAWYQQRPGQAPRLVIYSGSTRAAGIPDRFSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCQQYEFFGQGTKVQVDIK(SEQ ID NO:33)
II.几个实施方案的描述
提供了特异结合gp41上表位的分离的单克隆抗体和抗原结合片段。该抗体和抗原结合片段可为完全人源的。在几个实施方案中，该抗体和抗原结合片段可用于中和HIV-1感染。本文还公开了包括该抗体和抗原结合片段和药学上可接受的载体的组合物。还提供了编码该抗体或抗原结合片段的核酸、包括这些核酸的表达载体(例如腺相关病毒(AAV)病毒载体)。
这些抗体、抗原结合片段、核酸分子、表达载体，以及组合物可用于研究、诊断和治疗目的。例如，单克隆抗体和抗原结合片段可用于诊断或治疗患有HIV-1感染的受试者，或者可预防性施用以防止受试者中HIV-1感染。在一些实施方案中，这些抗体可用于确定受试者中的HIV-1滴度。
A.中和性单克隆抗体和抗原结合片段
亲本10E8抗体中和98％的一组200 HIV-1假型病毒，IC50小于50μg/ml(参见实施例1)。但是，如实施例1中所公开的，10E8抗体的溶解性可能对于商业生产目的而言不是最佳的。较早的修饰该10E8抗体的尝试成功地改善了溶解性和抗体的效力，但导致自体反应性增加。在一些实施方案中，本文公开的为修饰的10E8抗体和抗原结合片段，其具有10E8抗体的CDR和与亲本10E8抗体序列相比的框架区氨基酸替换，相对于10E8赋予了改善的中和性、溶解性和自体反应性性质的组合。在另外的实施方案中，该修饰的10E8抗体包括CDR中的氨基酸替换，相对于10E8赋予了改善的中和性、溶解性和自体反应性性质的组合。
以下对单克隆抗体的讨论指参照IMGT编码方案包括包含CDR的VH和VL的单克隆抗体(除非上下文另有说明)。本领域普通技术人员将理解，各种CDR编号方案(例如Kabat、Chothia或IMGT编号方案)都可用于确定CDR位置。10E8的重链和轻链的氨基酸序列和CDR位置以及它们的几个变体，根据IMGT编号方案显示在表1中。
表1.10E8和10E8变体的IMGT CDR序列。
10E8变体1(10E8v1)
如实施例中所公开的，该“10E8变体1”包括HC6-S74Y-511 VH(SEQ ID NO:3)和rL3VL(SEQ ID NO:4)，特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。该HC6-S74Y-511 VH包括10E8重链CDR以及相对于10E8 VH(SEQ IDNO:1)的Q3R、V5A、L72D、S74Y、I75K、F77T、M84T和T110I框架区氨基酸替换。该rL3 VL包括10E8轻链CDR以及相对于10E8 VL(SEQ ID NO:2)的E7D、I45V、V58I、S76T、D83E和E85D框架区氨基酸替换。
因此，在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括包含10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)并且还可在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处分别包含精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基的VH，以及包含10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置7、45、58、76、83和85处的天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基的VL。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)，分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VLCDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，分别在kabat位置7、45、58、76、83和85处的天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:4(rL3)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:4(rL3)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体3(10E8v3)
如实施例中所公开的，该“10E8变体3”包括H6-511-4mut VH(SEQ ID NO:5)和rL3VL(SEQ ID NO:4)，特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。该HH6-511-4mut VH包括10E8重链CDR以及相对于10E8 VH(SEQ IDNO:1)的Q3R、A61E、P62S、E64K、L72D、S74T、I75K、F77T、L82cV、M84T、S87T、L89Y、R105Q、T110I框架氨基酸替换。rL3 VL如上文所描述。
因此，在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VHCDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置7、45、58、76、83和85处的天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)，分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ IDNO:10、11和12)，分别在kabat位置7、45、58、76、83和85处的天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:4(rL3)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:4(rL3)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体4(10E8v4)
如实施例中所公开的，该“10E8变体4”包括H6-511-4mut VH(SEQ ID NO:5)和rL3-6mut VL(SEQ ID NO:6)，特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。H6-511-4mut VH如上文所描述。该rL3-6mut VL包括10E8轻链CDR以及相对于10E8 VL(SEQ ID NO:2)的S1A、Y2S、E7D、T8P、G9A、G16K、R17Q、I45V、V58I、S76T、D83E、E85D框架氨基酸替换。
因此，在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VHCDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)，分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ IDNO:10、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体5(10E8v5)
如实施例中所公开的，该“10E8变体5”包括HC6-S74Y-511 VH(SEQ ID NO:3)和rL3-6mut VL(SEQ ID NO:6)，特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。HC6-S74Y-511 VH和rL3-6mut VL如上文所描述。
因此,在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括包含10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)并且还可在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处分别包含精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基的VH，以及包含10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基的VL。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)，分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VLCDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
S100cW，S100cF，和V5R
如实施例中所公开的，在VH kabat位置S100c处向某些10E8抗体(例如10E8变体4抗体)掺入疏水氨基酸替换(例如S100cW或S100cF替换)产生这样的抗体，其特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。相应地，在一些实施方案中，本文描述的任何抗体(例如10E8，或10E8变体，包括变体1、3、4或5)还可包括S100cW替换。在一些实施方案中，本文描述的任何抗体(例如10E8，或10E8变体，包括变体1、3、4或5)还可包括S100cF替换。
10E8变体4 S100cF(10E8v4 S100cF)
在一些实施方案中，该结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合10E8v4抗体(VH:H6-511-4mut，SEQ ID NO:5；VL:rL3-6mut，SEQ ID NO:6)的VH和VL，在VH中具有S100cF替换。包括这样的VH和VL的抗体称为10E8v4S100cF，对应的VH和VL氨基酸序列在本文中分别作为SEQ ID NO:75和6提供。该10E8v4S100cF抗体特异结合gp41并中和HIV-1，也具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含10E8 VH CDR并带有S100cF替换的VH(例如SEQ ID NO:7、8和77)，包含10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)的VL，其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cF替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和77)和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，其中该单克隆抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cF替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和77)，分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:75(H6-511-4mut-S100cF)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列，其中该单克隆抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:75(H6-511-4mut-S100cF)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体4 V5R S100cF(10E8v4 V5R S100cF)
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括10E8v4抗体的VH和VL(VH:H6-511-4mut，SEQ ID NO:5；VL:rL3-6mut，SEQ ID NO:6)，在VH中具有V5R和S100cF替换。包括这样的VH和VL的抗体称为10E8v4 V5R S100cF，对应的VH和VL氨基酸序列在本文中分别作为SEQID NO:76和6提供。该10E8v4 V5R S100cF抗体特异结合gp41并中和HIV-1，也具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cF替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和77)和分别在kabat位置3、5、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，其中该单克隆抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cF替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和77)，分别在kabat位置3、5、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ IDNO:76(H6-511-4mut-V5R S100cF)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列，其中该单克隆抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体4 V5R S100cF的另外修饰
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括10E8v4 V5R S100cF抗体的VH和VL,还包括相对于10E8v4 V5R S100cF改善该修饰抗体的HIV-1中和广度(neutralizationbreadth)和效力、溶解性和/或自体反应性的一个或更多个氨基酸替换。该修饰的10E8v4V5R S100cF抗体特异结合gp41并中和HIV-1，也具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列，还包含相对于SEQ ID NO:76的E1R、E1W、G15R、S25W、D28W、D30W、D30R、N31W、N31R、P52bR、D72R或E81R替换之一；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，还包括相对于SEQ ID NO:6的D7W、A14R、Q17R、T18R、T20R、D26R、K51R、N53R、S65R、G68R、G77R或G100R替换(kabat编号)之一，其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。在优选的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，还包括相对于SEQ ID NO:6的G68R替换(kabat编号)，其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VH和VL还包括分别相对于SEQ ID NO:76和6的成对的替换之一：E1R和D7W；E1R和D26R；E1R和G68R；D28W和D7W；D28W和D26R；D28W和G68R；D28W和Q17R；D28W和T18R；D28W和T20R；D28W和K51R；D28W和G77R；P52bR和D7W；P52bR和D26R；P52bR和G68R；P52bR和Q17R；P52bR和T18R；P52bR和T20R；P52bR和K51R；P52bR和G77R；D72R和D7W；D72R和D26R；或D72R和G68R，其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VH还包括D72R、E1R D28W和P52bR替换，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VL还包括D7W、D26R和G68R替换，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VH还包括D72R、E1R D28W和P52bR替换，该VL还包括D7W、D26R和G68R替换，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VH和/或VL还包括列在表10中的任一替换组合的氨基酸替换，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VH和/或VL还包括列在表10中的用于10E8-1053、10E8-1054、10E8-1055、10E8-1056、10E8-1057、10E8-1058、10E8-1059、10E8-1060、10E8-1061、10E8-1062、10E8-1063、10E8-1064、10E8-1065、10E8-1066、10E8-1067、10E8-1068、10E8-1069、10E8-1070、10E8-1071、10E8-1072、10E8-1073、10E8-1074、10E8-1075、10E8-1076、10E8-1077、10E8-1078、10E8-1079、10E8-1080、10E8-1081、10E8-1082、10E8-1083、10E8-1084、10E8-1085、10E8-1086、10E8-1087、10E8-1088、10E8-1089、10E8-1090、10E8-1091、10E8-1092、10E8-1093、10E8-1094或10E8-1095抗体任一个的氨基酸替换，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQ ID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列(对应列在表10中的10E8-1073抗体)，其中该VH还包括D28Y替换，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括SEQID NO:76(H6-511-4mut-V5R S100cW)所示的氨基酸序列；和VL，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示的氨基酸序列，其中该VH还包括P52bR替换，该VL还包括D7W和G68R替换(对应列在表10中的10E8-1081抗体)，以及其中该抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
10E8变体4 S100cW
在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和52)和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和52)，分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:35(H6-511-4mut-S100cW)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:35(H6-511-4mut-S100cF)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体5 S100cW
在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括包含带有S100cW替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和52)并且还可在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处分别包含精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基的VH，以及包含10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基的VL。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和52)，分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ IDNO:38(HC6-S74Y-511-S100cW)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:38(HC6-S74Y-511-S100cW)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
DS
如实施例中所公开的，在LCDR1 kabat位置30和HCDR3 kabat位置100e之间向某些10E8抗体(例如10E8变体4抗体)掺入“DS”修饰即非天然二硫键产生这样的抗体，其特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。相应地，本文描述的任何抗体(例如10E8，或10E8变体，包括变体1、3、4或5)还可包括DS替换。
10E8变体4 DS
在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有DS替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和53)和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有DS替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和53)，分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:36(H6-511-4mut-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:36(H6-511-4mut-DS)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体5 DS
在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括包含带有DS替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和53)并且还可在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处分别包含精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基的VH，以及包含带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基的VL。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有DS替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和53)，分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:39(HC6-S74Y-511-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:39(HC6-S74Y-511-DS)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)所示氨基酸序列的VL。
S100cW-DS
如实施例中所公开的，在LCDR1 kabat位置30和HCDR3 kabat位置100e之间向某些10E8抗体(例如10E8变体4抗体)掺入“DS”修饰即非天然二硫键和S100cW替换产生这样的抗体，其特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。相应地，本文描述的任何抗体(例如10E8，或10E8变体，包括变体1、3、4或5)还可包括S100cW和DS替换。
10E8变体4 S100cW-DS
在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有s100cW和DS替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和54)和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及VL，其包括带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S-100cW和DS替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和54)，分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:37(H6-511-4mut-S100cW-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:37(H6-511-4mut-S100cW-DS)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)所示氨基酸序列的VL。
10E8变体5 S100cW-DS
在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括包含带有S100cW和DS替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和54)并且还可在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处分别包含精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基的VH，以及包含带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11、12)和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基的VL。
在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW和DS替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和54)，分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:40(HC6-S74Y-511-S100cW-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列；以及VL，其包括带有DS替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:55、11和12)，分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。
在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:40(HC6-S74Y-511-S100cW-DS)所示氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)所示氨基酸序列的VL。
VL kabat位置32处的替换
如实施例中所公开的，在某些10E8抗体(例如10E8变体4抗体)的VL的kabat位置32处掺入氨基酸替换产生这样的抗体，其特异结合gp41并具有出乎意料的优异的HIV-1中和广度和效力、溶解性，以及自体反应性的组合。相应地，本文描述的任何抗体(例如10E8，或10E8变体，包括1、3、4或5；或者，10E8或10E8变体，包括带有S100cW替换的变体1、3、4或5；或者，10E8或10E8变体，包括带有DS替换的变体1、3、4或5；或者，10E8或10E8变体，包括带有S100cW-DS替换的变体1、3、4或5)还可在VL的kabat位置32处包括氨基酸替换。在一些实施方案中，该替换可为Y32F替换。在另外的实施方案中，该替换可为Y32W替换。
在一些实施方案中，在上文“10E8变体4”部分公开的任何10E8变体的VL还可在kabat位置32处包括氨基酸替换(例如Y32F或Y32W替换)。在一些实施方案中，在上文“10E8变体5”部分公开的任何10E8变体的VL还可在kabat位置32处包括氨基酸替换(例如Y32F或Y32W替换)。在一些实施方案中，在上文“S100cW和S100cF”部分公开的任何10E8变体的VL还可在kabat位置32处包括氨基酸替换(例如Y32F或Y32W替换)。在一些实施方案中，在上文“DS”部分公开的任何10E8变体的VL还可在kabat位置32处包括氨基酸替换(例如Y32F或Y32W替换)。在一些实施方案中，在上文“S100cW-DS”部分公开的任何10E8变体的VL还可在kabat位置32处包括氨基酸替换(例如Y32F或Y32W替换)。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)和SEQ ID NO:42(rL3-6mut-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)和SEQ ID NO:43(rL3-6mut-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)和SEQ ID NO:42(rL3-6mut-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)和SEQ ID NO:43(rL3-6mut-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:35(H6-511-4mut-S100cW)和SEQ ID NO:42(rL3-6mut-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:35(H6-511-4mut-S100cW)和SEQ ID NO:43(rL3-6mut-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:38(HC6-S74Y-511-S100cW)和SEQ ID NO:42(rL3-6mut-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:38(HC6-S74Y-511-S100cW)和SEQ ID NO:43(rL3-6mut-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:36(H6-511-4mut-DS)和SEQ ID NO:58(rL3-6mut-DS-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:36(H6-511-4mut-DS)和SEQ ID NO:59(rL3-6mut-DS-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:39(HC6-S74Y-511-DS)和SEQ ID NO:58(rL3-6mut-DS-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:39(HC6-S74Y-511-DS)和SEQ ID NO:59(rL3-6mut-DS-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:37(H6-511-4mut-S100cW-DS)和SEQ ID NO:58(rL3-6mut-DS-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:37(H6-511-4mut-S100cW-DS)和SEQ ID NO:59(rL3-6mut-DS-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括分别包含SEQ ID NO:40(HC6-S74Y-511-S100cW-DS)和SEQ ID NO:58(rL3-6mut-DS-Y32W)的VH和VL。在一些实施方案中，提供了包括分别包含SEQ ID NO:40(HC6-S74Y-511-S100cW-DS)和SEQ ID NO:59(rL3-6mut-DS-Y32F)的VH和VL的抗体或抗原结合片段。
单独的重链和轻链可变区
任何以下的重链可变区可与本文公开的任何10E8轻链(或其变体)可变区“混合并匹配”，以产生特异结合gp41并中和HIV-1的抗体。此外，任何以下的轻可变区可与本文公开的任何10E8重链(或其变体)可变区“混合并匹配”，以产生特异结合gp41并中和HIV-1的抗体。
HC6-S74Y-511 VH
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQID NO:7、8和9)，和分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)，和分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:3(HC6-S74Y-511)所示氨基酸序列的VH。
H6-511-4mut VH
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQID NO:7、8和9)，和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和9)，和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQID NO:5(H6-511-4mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:5(H6-511-4mut)所示氨基酸序列的VH。
HC6-S74Y-511-S100cW VH
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和62)，和分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8VH CDR(例如SEQID NO:7、8和62)，和分别在kabat位置3、5、72、74、75、77、84和110处的精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苏氨酸和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:38(HC6-S74Y-511-S100cW)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:38(HC6-S74Y-511-S100cW)所示氨基酸序列的VH。
H6-511-4mut-S100cW VH
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和62)，和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VH，其包括带有S100cW替换的10E8 VH CDR(例如SEQ ID NO:7、8和62)，和分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处的精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基，以及与SEQ ID NO:35(H6-511-4mut-S100cW)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:35(H6-511-4mut-S100cW)所示氨基酸序列的VH。
rL3 VL
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQID NO:10、11和12)，并且还可在kabat位置7、45、58、76、83和85处分别包括天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，和分别在kabat位置7、45、58、76、83和85处的天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQID NO:4(rL3)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:4(rL3)所示氨基酸序列的VL。
rL3-6mut VL
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQID NO:10、11和12)，和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和12)，和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:6(rL3-6mut)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示氨基酸序列的VL。
带有Y32W替换的rL3-6mut VL
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括带有Y32W替换的10E8VLCDR(例如SEQ ID NO:10、11和66)，和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括带有Y32W替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和66)，和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:42(rL3-6mut-Y32W)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:42(rL3-6mut-Y32W)所示氨基酸序列的VL。
带有Y32F替换的rL3-6mut VL
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括带有Y32F替换的10E8VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和67)，和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17,45,58,76,83,和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。在另外的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括VL，其包括带有Y32F替换的10E8 VL CDR(例如SEQ ID NO:10、11和67)，和分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处的丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基，以及与SEQ ID NO:43(rL3-6mut-Y32F)有至少80％(例如至少90％或至少95％)一致性的氨基酸序列。在更多的实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:43(rL3-6mut-Y32F)所示氨基酸序列的VL。
1.所公开抗体和抗原结合片段的附加描述
在某些实施方案中，替换、***或缺失可以发生在一个或更多个CDR中，只要这些改变不明显降低该抗体结合抗原的能力即可。例如，可以在CDR中形成不明显降低结合亲和力的保守性改变(例如，本文提供的保守替换)。在本文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个CDR或者是未改动的，或者含有不超过一个、两个或三个氨基酸替换。可在VH和VL区形成氨基酸替换(例如保守氨基酸替换)，以例如增强产量或溶解性。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段的VH与公开的10E8变体VH相比包括多至10个(例如多至1个、多至2个、多至3个、多至4个、多至5个、多至6个、多至7个、多至8个或多至9个)氨基酸替换(例如保守氨基酸替换)，和/或该抗体或抗原结合片段的VL与公开的10E8变体VL相比包括多至10个(例如多至1个、多至2个、多至3个、多至4个、多至5个、多至6个、多至7个、多至8个或多至9个)氨基酸替换(例如保守氨基酸替换)。
所公开的经修饰10E8抗体在称为10E8表位的表位处特异结合gp41的MPER，该表位包括在作为NEQELLELDKWASLWNWFDITNWLWYIR(SEQ ID NO:34)提供的肽序列上。该10E8表位已通过解析与gp41肽复合的10E8抗体的结构而阐明(参见Huang等,Nature,491:406-412,2012,通过引用将其全文并入本文)。如Huang等(Nature,491:406-412,2012)和PCTPub.U.S.Pub.2014/0348785A1中所描述的，在10E8抗体的VH kabat位置28、31、33、50、52、52B、52C、53、56、58和97-100J，以及VL kabat位置91和95B处的氨基酸有利于该抗体与gp41界面的掩藏表面面积(buried surface area)。相应地，在一些实施方案中，本文公开的任何经修饰10E8抗体或抗原结合片段在10E8的VH kabat位置28、31、33、50、52、52B、52C、53、56、58和97-100J，以及VL kabat位置91和95B处包括亲本10E8抗体的对应氨基酸。这些残基分别为D、N、W、R、T、P、G、E、S、D、K、Y、Y、D、F、W、S、G、Y、P、P、G、E和E。在一些实施方案中，本文提供的任何经修饰10E8抗体或抗原结合片段的VH在kabat位置50处包括精氨酸残基和在kabat位置58处包括天冬氨酸残基。
在一些实施方案中，所公开的特异结合gp41并中和HIV-1的任何经修饰10E8抗体或抗原结合片段还可包括一个或更多个列在表3、4、9或10之一中的功能获得(gain offunction)氨基酸替换。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段还可通过中和广度(neutralizationbreadth)来区分。例如，在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段可以以小于50μg/ml的IC50中和至少80％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)的列在图16A中的HIV-1分离株。本领域普通技术人员熟悉测量HIV-1 Env特异的单克隆抗体的中和广度和效力的方法，例如这些方法包括TZM-bl细胞的单轮HIV-1 Env假病毒感染。示例性假病毒中和测定和HIV-1假病毒组例如在Li等,JVirol 79,10108-10125,2005,Seaman等,J.Virol.,84:1439-1452,2010；Sarzotti-Kelsoe等,J.Immunol.Methods,409:131-46,2014；以及WO2011/038290中有描述，通过引用将每个都并入本文。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段还可通过其在水溶液中的溶解性来区分。例如，在一些实施方案中，室温下(例如，20至22摄氏度)，该抗体或抗原结合片段(例如，包括10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF可变区)可在磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中溶解成至少1.0mg/ml(例如至少1.0mg/ml、至少2.0mg/ml、至少3.0mg/ml、至少4.0mg/ml、至少5.0mg/ml、至少6.0mg/ml、至少7.0mg/ml、至少8.0mg/ml、至少9.0mg/ml或至少10.0mg/ml)的浓度，并保持溶解至少12小时(至少24小时、至少48小时、至少一周、至少两周或更长时间)。在一些实施方案中，室温下(例如，20至22摄氏度)，该抗体或抗原结合片段(例如，包括10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF可变区)可在磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中溶解成至少10mg/ml(例如至少15mg/ml、至少20mg/ml、至少25mg/ml、至少30mg/ml、至少35mg/ml、至少40mg/ml、至少45mg/ml或至少50mg/ml)的浓度，并保持溶解至少12小时(至少24小时、至少48小时、至少一周、至少两周或更长时间)。在一些实施方案中，室温下(例如，20至22摄氏度)，该抗体或抗原结合片段(例如，包括10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF可变区)可在磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中溶解成至少10mg/ml(例如至少15mg/ml、至少20mg/ml、至少25mg/ml、至少30mg/ml、至少35mg/ml、至少40mg/ml、至少45mg/ml或至少50mg/ml)的浓度，并保持溶解至少12小时(至少24小时、至少48小时、至少一周、至少两周或更长时间)。在一些实施方案中，室温下(例如，20至22摄氏度)，该抗体或抗原结合片段(例如，包括10E8v4S100cF或10E8v4 V5R S100cF可变区)可在磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中溶解成至少20mg/ml的浓度，并保持溶解至少12小时(至少24小时、至少48小时、至少一周、至少两周或更长时间)。在一些实施方案中，室温下(例如，20至22摄氏度)，该抗体或抗原结合片段(例如，包括10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF可变区)可在磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中溶解成至少40mg/ml的浓度，并保持溶解至少12小时(至少24小时、至少48小时、至少一周、至少两周或更长时间)。在一些实施方案中，室温下(例如，20至22摄氏度)，该抗体或抗原结合片段(例如，包括10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF可变区)可在磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中溶解成至少30mg/ml的浓度，并保持溶解至少12小时(至少24小时、至少48小时、至少一周、至少两周或更长时间)。在一个实施方案中，该磷酸盐缓冲盐水包括NaCl(137mM)，KCl(2.7mM)，Na2HPO4(10mM)，KH2PO4(1.8mM)，pH 7.4。在一些实施方案中，该磷酸盐缓冲盐水还包括CaCl2(1mM)和MgCl2(0.5mM)。本领域技术人员熟悉确定蛋白是否随时间保持溶解的方法。例如，可采用标准方法测试溶解在水溶液中的蛋白的浓度。在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段还可通过其自体反应性(即，对自身抗原的结合)来区分。例如，在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段包括与10E8抗体相当的自体反应性。例如，该抗体或抗原结合片段与10E8抗体相比可具有不超过10％的更高自体反应性，如采用标准测定法测量的，例如HEp-2染色测定或心磷脂结合测定。
该抗体或抗原结合片段可为人抗体或其片段。还提供了嵌合抗体。该抗体或抗原结合片段包括任何适合的框架区，例如(但不限于)人框架区。本领域已知人框架区和可在人抗体框架区内产生的突变(参见，例如，美国专利No.5,585,089，通过引用将其并入本文)。或者，可在抗体的重链或轻链中包括异源框架区，例如但不限于，小鼠或猴框架区。(参见，例如，Jones等,Nature 321:522,1986；Riechmann等,Nature 332:323,1988；Verhoeyen等,Science 239:1534,1988；Carter等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:4285,1992；Sandhu,Crit.Rev.Biotech.12:437,1992；以及Singer等,J.Immunol.150:2844,1993)。
抗体可为任何同种型。该抗体可例如为IgM或IgG抗体，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。特异结合gp41的抗体的类别可与另一种转换。在一个方面，采用本领域公知的方法分离编码VL或VH的核酸分子，以使得其不包括任何分别编码轻链或重链恒定区的核酸序列。然后将编码VL或VH的核酸分子可操作地连接至编码来自不同类别免疫球蛋白分子的CL或CH的核酸序列。这可采用包括CL或CH链的载体或核酸分子来实现，这为本领域所已知。例如，特异结合gp41的最初为IgG的抗体，可以类别转换成IgM。类别转换可用于将一种IgG亚型转变为另一种，例如从IgG1至IgG2、IgG3或IgG4。
在一些实例中，所公开的抗体为抗体寡聚体，例如二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体等等。
(a)结合亲和力
在几个实施方案中，该抗体或抗原结合片段可以以不超过1.0×10-8M、不超过5.0×10-8M、不超过1.0×10-9M、不超过5.0×10-9M、不超过1.0×10-10M、不超过5.0×10-10M或不超过1.0×10-11M的亲和力(如通过KD测量的)特异结合gp41。KD可例如通过放射标记的抗原结合测定(RIA)来测量，其采用已知方法用目的抗体的Fab形式及其抗原进行。在一个测定中，Fab对抗原的溶液结合亲和力通过让Fab与最小浓度的(125I)标记抗原在滴定系列的未标记抗原存在下平衡，然后用抗Fab抗体包埋板捕获未结合抗原来测定(参见，例如，Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定条件，用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕获用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被多孔板(Thermo Scientific)过夜，随后用PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白室温下(大概23℃)封闭2至5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100μM或26pM[125I]-抗原与系列稀释的目标Fab混合(例如，与Presta等,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中评估抗VEGF抗体Fab-12一致)。然后让目标Fab温育过夜；但是，该温育可以持续更长时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。之后，将混合物转移至捕获板，在室温下温育(例如，1小时)。然后除去溶液，用PBS中0.1％聚山梨醇酯20洗涤板8次。当板干燥时，添加闪烁剂(MICROSCINT-20TM；Packard)，150μl/孔，并将板在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上计数10分钟。选择小于或等于最大结合的20％的每种Fab浓度用于竞争性结合测定。
在另一测定中，可采用-2000或-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,N.J.)在25℃利用表面等离子体共振，以固定的抗原CM5芯片在～10响应单位(RU)测量KD，简而言之，根据提供商的说明书，将羧甲基葡聚糖生物传感器芯片(CM5,Inc.)用N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化。用10mM醋酸钠，pH 4.8将抗原稀释至5μg/ml(～0.2μM)，然后以5l/min的流速注射，以获得偶联蛋白大概10响应单位(RU)。在注射抗原后，注射1M的乙醇胺以封闭未反应的基团。对于动力学测量，25℃下，将两倍系列稀释的Fab(0.78nM至500nM)以大约25l/min的流速注射进含有0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中。结合速率(kon)和解离速率(koff)采用简单一对一Langmuir结合模型(EvaluationSoftware版本3.2)，通过同时拟合结合和解离传感图(sensorgram)来计算。该平衡解离常数(KD)计算为比值koff/kon。参见，例如,Chen et al.,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果通过以上的表面等离子体共振测定该缔合速率(on-rate)超过106M-1s-1，则该缔合速率可通过采用荧光淬灭技术来确定，该荧光淬灭技术于25℃在逐渐增加浓度的抗原存在下测量PBS，pH 7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)的荧光发射强度的增加或降低(激发＝295nm；emission＝340nm,16nm带通)，所述抗原浓度在分光光度计中测量，例如配备停流的分光光度计(Aviv Instruments)或带有搅拌比色杯的8000-series SLM-AMINCOTM分光光度计。
(b)多特异性抗体
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包括在多特异性抗体上，例如双特异性抗体或三特异性抗体。这些多特异性抗体可通过已知的方法产生，例如交联两个或更多个相同类型或不同类型的抗体或抗原结合片段(例如scFv)。制备多特异性抗体的示例性方法包括那些在PCT公开No.WO2013/163427中描述的那些，通过引用将其全文并入本文。适当的交联剂包括异双功能的，即具有被合适分隔物分开的两个不同反应基团(例如，间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酼亚胺酯)，以及同双功能的(例如辛二酸双琥珀酰亚胺酯)。这些连接剂可从伊利诺斯州罗克福德皮尔斯化学公司(Pierce Chemical Company,Rockford,Ill)获得。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包括在特异结合gp41并且还特异结合CD3的双功能抗体上。可包括在双特异性抗体或抗原结合片段上的CD3结合结构域的实例为已知的，包括在PCT公开No.WO2013/163427中公开的那些，通过引用将其全文并入本文。
各种类型的多特异性抗体为已知的。双特异性单链抗体可由单个核酸分子编码。双特异性单链抗体的实例，以及构建这样的抗体的方法在本领域内是已知的(参见，例如，美国专利Nos.8,076,459、8,017,748、8,007,796、7,919,089、7,820,166、7,635,472、7,575,923、7,435,549、7,332,168、7,323,440、7,235,641、7,229,760、7,112,324、6,723,538，通过引用并入本文)。双特异性单链抗体的另外实例可在PCT申请No.WO 99/54440；Mack,J.Immunol.,158:3965-3970,1997；Mack,PNAS,92:7021-7025,1995；Kufer,CancerImmunol.Immunother.,45:193-197,1997；Loffler,Blood,95:2098-2103,2000；以及Bruhl,J.Immunol.,166:2420-2426,2001中找到。双特异性Fab-scFv(“二体(bibody)”)分子的产生例如在Schoonjans等.(J.Immunol.165:7050-57,2000)和Willems等(JChromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci.786:161-76,2003)中有描述。对于二体，scFv可融合至VL-CL(L)或VH-CH1链之一，例如以产生一个scFv融合至Fab链的C末端的二体。
(c)片段
本公开涵盖抗原结合片段，例如Fab、F(ab')2和Fv，其包括重链和VL并特异结合gp41。在几个实施方案中，该抗原结合片段包括来自10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF抗体的重链和轻链可变区。
这些抗体片段保留了选择性结合抗原的能力，并且为“结合抗原的”片段。这些片段的非限定性实例包括：
(1)Fab，该片段含有抗体分子的单价抗原结合片段，可通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体以得到完整轻链和一条重链的一部分来产生；
(2)Fab'，该抗体分子片段可通过用胃蛋白酶处理完整抗体，然后进行还原，以得到完整轻链和一部分重链来获得；每个抗体分子获得两个Fab'片段；
(3)(Fab')2，该抗体片段可以通过用胃蛋白酶处理完整抗体而不进行随后的还原来获得；F(ab')2是由两个二硫键保持在一起的两个Fab'片段的二聚体；
(4)Fv，基因工程片段，其含有作为两条链表达的VL和VL；以及
(5)单链抗体(例如scFv)，其被定义为含有通过适合的多肽接头连接成基因融合的单链分子的VH和VL的基因工程分子(参见，例如,Ahmad et al.,Clin.Dev.Immunol.,2012,doi:10.1155/2012/980250；Marbry,IDrugs,13:543-549,2010)。VH结构域和VL结构域在scFv中的分子内取向对于所提供的抗体(例如，对于提供的多特异性抗体)不是决定性的。因此，可以使用具有两种可能的排列的scRFv(VH结构域-接头结构域-VL-结构域；VL结构域-接头结构域-VH-结构域)。
(6)单链抗体的二聚体(scFV2)，定义为scFV的二聚体。这也称为微型抗体(miniantibody)。
制备这些片段的方法在本领域中是已知的(参见，例如，Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,2nd,Cold Spring Harbor Laboratory,New York,2013)。
在一些实施方案中，该抗原结合片段可为Fv抗体，其一般为约25kDa，含有完整的抗原结合位点，每个重链和每个轻链具有3个CDR。如果该VH和VL非连续表达，则该Fv抗体的链一般通过非共价相互作用保持在一起。但是，这些链在稀释后趋于解离，所以已开发了一些通过戊二醛、分子内二硫键或肽接头的方法来交联这些链。因此，在一个实例中，该Fv可为二硫键稳定的Fv(dsFv)，其中VH和VL通过二硫键化学连接。在另外的实例中，该Fv片段包括通过肽接头相连的VH和VL。这些单链抗原结合蛋白(scFv)可通过构建通过寡核苷酸相连的编码VH和VL结构域的核酸分子来制备。将该核酸分子***表达载体中，并随后将该表达载体引入宿主细胞如哺乳动物细胞中。该重组的宿主细胞合成具有桥接两个V结构域的接头肽的单个多肽链。产生scFv的方法在本领域内是已知的(参见Whitlow等,Methods:aCompanion to Methods in Enzymology,Vol.2,第97页,1991；Bird等,Science 242:423,1988；美国专利No.4,946,778；Pack等,Bio/Technology 11:1271,1993；Ahmad等,Clin.Dev.Immunol.,2012,doi:10.1155/2012/980250；Marbry,IDrugs,13:543-549,2010。还考虑单链抗体的二聚体(scFV2)。
可通过抗体的蛋白水解或通过在宿主细胞中表达编码该片段的DNA来制备抗原结合片段。抗原结合片段还可通过传统方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整抗体来获得。例如，可通过胃蛋白酶酶学切割抗体以提供称为F(ab')2的5S片段来产生抗原结合片段。该片段还可采用巯基还原剂进一步切割，并任选地为切割二硫键产生的巯基基团封闭基团，以产生3.5S Fab'单价片段。作为选择，采用胃蛋白酶的酶学切割直接产生两个单价Fab'片段和Fc片段(参见美国专利No.4,036,945和美国专利No.4,331,647，以及其中的参考文献；Nisonhoff等,Arch.Biochem.Biophys.89:230,1960；Porter,Biochem.J.73:119,1959；Edelman等,Methods in Enzymology,Vol.1,page 422,Academic Press,1967；以及Coligan等，章节2.8.1-2.8.10和2.10.1-2.10.4)。
也可以使用切割抗体的其它方法，例如，分开重链以形成单价轻-重链片段，进一步切割片段，或者其它的酶学、化学或基因技术，只要该片段结合由完整抗体识别的抗原。
还已从扩增自被免疫小鼠的基因组DNA的鼠VH基因库鉴定了结合抗原的单VH结构域，称为结构域抗体(dAb)(Ward等.Nature 341:544-546,1989)。能够以高亲和力结合抗原的人单免疫球蛋白可变结构域多肽也已有描述(参见，例如,PCT公开Nos.WO 2005/035572和WO 2003/002609)。本文公开的CDR也可包括在dAb中。
在一些实施方案中，来自所公开的抗体(例如HC6-S74Y-511/rL3-6mut或H6-511-4mut/rL3-6mut抗体)的一个或更多个重链和/或轻链互补决定区(CDR)在另一蛋白如骨架蛋白表面上表达。抗体的结构域在骨架蛋白表面上的表达在本领域是已知的(参见，例如，Liu等.,J.Virology 85(17):8467-8476,2011)。这种表达生成保留了对gp41的结合的嵌合蛋白。在一些具体实施方案中，将一个或更多个重链CDR移植到骨架蛋白上，例如重链CDR1、CDR2和/或CDR3的一个或更多个。一个或更多个CDR还可包括在双体或另一类型的单链抗体分子中。
(d)变体
在某些实施方案中，关注本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，有可能希望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物性质。抗体的氨基酸序列变体可以通过向编码该抗体的核苷酸序列中引入适当修饰或通过肽合成来制备。这些修饰包括例如该抗体的氨基酸序列内的删除和/或***和/或残基替换。可进行删除、***和替换的任何组合以得到最终的构建体，前提是该最终的构建体具有期望的特征，例如抗原结合。
在某些实施方案中，提供了具有一个或更多个氨基酸替换的抗体变体。用于替换突变的目标位点包括CDR和框架区。可以将氨基酸替换引入目标抗体，并对产物筛选期望的活性，例如，保留的/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
这些变体通常保留了在VH和VL区之间正确折叠和稳定所必要的氨基酸残基，并保留了残基的电荷特征以保持该分子的低pI和低毒性。可在VH和VL区形成氨基酸替换(例如保守氨基酸替换)，以例如增强产量或溶解性。
在某些实施方案中，替换、***或缺失可以发生在一个或更多个CDR中，只要这些改变不明显降低该抗体结合抗原的能力即可。例如，可以在CDR中形成不明显降低结合亲和力的保守性改变(例如，本文提供的保守替换)。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个CDR或者是未改动的，或者含有不超过一个、两个或三个氨基酸替换。
为了增加抗体的结合亲和力，VH和VL节段可例如在HCDR3区或LCDR3区随机突变，其过程类似于在天然免疫应答期间负责抗体的亲和力成熟的体内体细胞突变过程。这种体外亲和力成熟可通过采用分别互补于HCDR3或LCDR3的PCR引物扩增VH和VL区来完成。在该过程中，引物已在某些位置被“掺入(spiked)”了四种核苷酸碱基的随机混合物，使得所得到的PCR产物编码其中已向VH和/或VL CDR3区引入了随机突变的VH和VL节段。可测试这些随机突变的VH和VL节段以确定对gp41的结合亲和力。体外亲和力成熟的方法是已知的(参见，例如,Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))，和Hoogenboom等.in Methods inMolecular Biology 178:1-37(O'Brien等编辑,Human Press,Totowa,N.J.,(2001))。
用于鉴定可以用于突变的抗体的残基或区域的有用方法称为“丙氨酸扫描突变”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述的。在该方法中，靶残基(例如，带电荷残基，如arg、asp、his、lys和glu)的残基或基团被鉴定并用中性或带负电氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)代替，以确定该抗体与抗原的相互作用是否受影响。可以在展示出了功能敏感性的氨基酸位置处向最初的替换进一步引入替换。作为选择，或另外地，抗原抗体复合物的晶体结构可被用于鉴定抗原和抗原之间的接触点。这些接触残基和相邻残基可以作为替换的候选者被靶向或消除。可以筛选变体，以确定他们是否包含期望的性质。
在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段被改变以增加或降低该抗体或抗原结合片段的糖基化程度。可以通过改变氨基酸序列来形成或去除一个或更多个糖基化位点来方便地实现糖基化位点的添加或删除。
在抗体包括Fc区时，可以改变附着至该Fc区的碳水化合物。哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分枝的、双角(biantennary)的寡糖，它们通常通过同Fc区的CH2结构域的Asn297的N连接附着。参见，例如,Wright等.TIBTECH 15:26-32(1997)。该寡糖可以包括各种碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及在双角寡糖结构的“主干”中附着至GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以进行抗体中寡糖的修饰，以便生成具有某些改善的性质的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了具有碳水化合物结构的抗体变体，该碳水化合物结构缺乏附着至(直接或间接地)Fc区的岩藻糖。例如，在这种抗体中岩藻糖的量可以为从1％至80％、从1％至65％、从5％至65％或从20％至40％通过计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量相对于通过MALDI-TOF质谱测量的附着至Asn 297的全部糖结构的总和(例如，复合、杂种和高甘露糖结构)来确定岩藻糖的量，如例如WO 2008/077546中所描述的。Asn297指位于Fc区内大概位置297处的天冬酰胺残基；但是，由于抗体中小的序列变化，Asn297也可以位于位置297的上游或下游大概±3个氨基酸，即在位置294和300之间。这些岩藻糖化变体可以具有改善的ADCC功能。参见，例如美国专利公开Nos.US 2003/0157108(Presta,L.)；US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺陷”抗体变体的公开的实例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等，J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等，Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖基化的抗体的细胞系的实例包括蛋白糖基化缺陷的Lec 13 CHO细胞(Ripka等Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请No US 2003/0157108 A1,Presta,L；和WO 2004/056312 A1,Adams等,尤其是实施例11)，敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(参见，例如，Yamane-Ohnuki等.Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；以及WO2003/085107)。
还提供了带有二等分(bisected)寡糖的抗体，例如，其中附着至抗体的Fc区的双角寡糖被GlcNAc二等分。这样的抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。这些抗体变体的实例例如在WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美国专利No.6,602,684(Umana等)；以及US 2005/0123546(Umana等)中有描述。还提供了在附着至Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。这些抗体变体可以具有改善的CDC功能。这些抗体变体例如在WO 1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju,S.)；以及WO 1999/22764(Raju,S.)中有描述。
在几个实施方案中，抗体的恒定区包括一个或更多个氨基酸替换以优化抗体的体内半衰期。IgG Abs的血清半衰期通过新生儿Fc受体(FcRn)调节。因此，在几个实施方案中，抗体包括增加与该FcRn结合的氨基酸替换。几个这样的替换是本领域普通技术人员所已知的，例如在IgG恒定区的替换T250Q和M428L(参见，例如,Hinton et al.,J Immunol.,176:346-356,2006)；M428L和N434S(“LS”突变，参见，例如,Zalevsky等,NatureBiotechnology,28:157-159,2010)；N434A(参见，例如,Petkova等,Int.Immunol.,18:1759-1769,2006)；T307A、E380A和N434A(参见，例如，Petkova等,Int.Immunol.,18:1759-1769,2006)；以及M252Y、S254T和T256E(参见，例如,Dall’Acqua等,J.Biol.Chem.,281:23514-23524,2006)。所公开的抗体和抗原结合片段可连接至包括上文列出的任何替换的Fc多肽，例如该Fc多肽包含M428L和N434S替换。
在几个实施方案中，抗体的恒定区包括一个或更多个氨基酸替换以优化抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)。ADCC主要通过一组紧密相关的Fcγ受体介导。在一些实施方案中，该抗体包括一个或更多个增加与FcγRIIIa的结合氨基酸替换。几个这样的替换为本领域普通技术人员所知，例如IgG恒定区替换S239D和I332E(参见,例如,Lazar等,Proc.Natl.,Acad.Sci.U.S.A.,103:4005-4010,2006)；和S239D、A330L和I332E(参见，例如,Lazar等,Proc.Natl.,Acad.Sci.U.S.A.,103:4005-4010,2006)。
以上替换的组合也包括在内，以产生具有增加的对FcRn和FcγRIIIa的结合的IgG恒定区。该组合增加抗体半衰期和ADCC。例如，这样的组合包括在Fc区中具有以下氨基酸替换的抗体：(1)S239D/I332E和T250Q/M428L；(2)S239D/I332E和M428L/N434S；(3)S239D/I332E和N434A；(4)S239D/I332E和T307A/E380A/N434A；(5)S239D/I332E和M252Y/S254T/T256E；(6)S239D/A330L/I332E和250Q/M428L；(7)S239D/A330L/I332E和M428L/N434S；(8)S239D/A330L/I332E和N434A；(9)S239D/A330L/I332E和T307A/E380A/N434A；或(10)S239D/A330L/I332E和M252Y/S254T/T256E。在一些实例中，该抗体或其抗原结合片段被修饰，以使其对感染细胞有直接毒性，或者使用天然防御，例如补体、抗体依赖的细胞毒性或巨噬细胞吞噬作用。
在某些实施方案中，本文提供的抗体可以被进一步修饰以含有另外的本领域已知并容易获得的非蛋白性模块。适合于衍生化抗体的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限定性实例包括，但不限于，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羟甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三氧六环、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，以及葡聚糖或聚(N-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如,甘油)、聚乙烯醇，以及它们的混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性可能在制造中是有利的。聚合物可以为任何分子量，可以是分枝的或未分枝的。附着至抗体的聚合物的数量可以变化，并且如果附着不知一个聚合物，则它们可为相同或不同的分子。一般地，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可基于以下的考虑来确定，包括但不限于，抗体的准备改善的具体性质或功能，抗体衍生物是否将在明确条件下用于治疗，等等。
抗体或抗原结合片段可被衍生化或连接至另一分子(例如另一肽或蛋白)。通常，该抗原或抗原结合片段被如此衍生化，使得与gp41的结合不被该衍生化或标记不利地影响。例如，该抗体或抗原结合片段可在功能上连接(通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其它方式)至一个或更多个其它的分子实体，例如另一抗体(例如双特异性抗体或双体)、可检测标记物、效应分子，或可介导该抗体或抗原结合片段与另一分子缔合的蛋白或肽(例如链霉亲和素核心区或聚组氨酸标签)。
B.缀合物
特异结合gp41上表位的该抗体和抗原结合片段可采用本领域技术人员已知的任何数量的手段缀合至试剂，例如效应分子或可检测标记物。可以使用共价和非共价附着手段。本领域技术人员应理解，可使用各种效应分子和可检测标记物，包括(但不限于)毒素和放射性试剂如125I、32P、14C、3H和35S以及其它标签、靶模块和配体等。对具体效应分子或可检测标记物的选择取决于具体的靶分子或细胞，以及期望的生物学效应。
对具体效应分子或可检测标记物的选择取决于具体的靶分子或细胞，以及期望的生物学效应。因此，例如，该效应分子可为用来引起特定靶细胞(例如HIV-1感染细胞)死亡的细胞毒素。在其它实施方案中，该效应分子可为细胞因子，例如IL-15；包括细胞因子的缀合物可用于例如局部刺激免疫细胞。
将效应分子或可检测标记物附着至抗体或抗原结合片段的程序随效应物的化学结构而变化。多肽通常含有各种功能基团；例如羧酸，自由胺(-NH2)或巯基(-SH)，它们可用于与多肽上适当的功能基团反应，导致效应分子或可检测标记物的结合。作为选择，该抗体或抗原结合片段被衍生化以暴露或附着额外的反应性功能基团。该衍生化可以涉及任何数量的已知接头分子(例如可从Pierce Chemical Company,Rockford,IL获得的那些)的附着。该接头可为用于将抗体或抗原结合片段联结至效应分子或可检测标记物的任何分子。该接头能够与抗体或抗原结合片段和与效应分子或可检测标记物形成共价键。适当的接头是本领域技术人员所公知的，并且包括，但不限于，直链或支链碳接头、杂环碳接头或肽接头。当抗体或抗原结合片段和效应分子或可检测标记物为多肽时，接头可以通过成分氨基酸的侧链(例如通过二硫键至半胱氨酸)联结至成分氨基酸或联结至末端氨基酸的α碳氨基和羧基基团。
鉴于已报道了大量的用于将各种放射诊断化合物、放射治疗化合物、标签(例如酶或荧光分子)、毒素，以及其它试剂附着至抗体的方法，本领域技术人员能够确定用于将给定的试剂附着至抗体或抗原结合片段或其它多肽的适当方法。例如，该抗体或抗原结合片段可与效应分子缀合以制备抗体药物缀合物(ADC)，该效应分子例如为小分子量药物，例如单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、美登素(maytansine)、美登素衍生物，包括称为DM1(也称为mertansine)的美登素衍生物，或其它试剂。在几个实施方案中，提供了抗体或抗原结合片段与一个或多个小分子毒素的缀合物，这些小分子毒素例如为卡奇霉素(calicheamicin)、美登素类、多拉司他汀类(dolastatins)、奥利斯他汀(auristatins)、单端孢霉烯(trichothecene)和CC1065，以及具有毒素活性的这些毒素的衍生物。
该抗体或抗原结合片段可与可检测标记物缀合；例如，能够通过ELISA、分光光度法、流式细胞术、显微术或诊断成像技术(例如计算机断层扫描(CT)、计算机轴向断层(CAT)扫描、磁共振成像(MRI)、核磁共振成像(NMRI)、磁共振断层扫描(MTR)、超声、纤维光检查，以及腹腔镜检查)检测的可检测标记物。可检测标记物的具体非限定性实例包括荧光团、化学发光剂、酶学连接、放射性同位素和重金属或化合物(例如用于通过MRI检测的超顺磁性氧化铁纳米晶体)。例如，有用的可检测标记物包括荧光化合物，包括荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、5-二甲基胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白、镧系荧光体等。也可使用生物发光标记物，例如荧光素酶、绿色荧光蛋白(GFP)、黄色荧光蛋白(YFP)。抗体或抗原结合片段还可与可用于检测的酶缀合，例如辣根过氧化物酶、β半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。当抗体或抗原结合片段与可检测的酶缀合时，其可通过添加另外的该酶用于产生可察觉的反应产物的试剂。例如，当试剂辣根过氧化物酶存在时，添加过氧化氢和二氨基联苯胺产生有色反应产物，其为视觉上可检测的。抗体或抗原结合片段还可以与生物素缀合，并通过间接测量亲和素或链霉亲和素的结合来检测。应该指出的是，亲和素自身可与酶活荧光标签缀合。
该抗体或抗原结合片段可与顺磁性试剂例如钆缀合。顺磁性试剂例如超顺磁性氧化铁也用作标签。抗体还可与镧系(铕和镝)以及锰缀合。也可以用预定的由第二报告物识别的多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)标记抗体或抗原结合片段。
该抗体或抗原结合片段还可与放射性标记的氨基酸缀合。该放射标记物可以用于诊断和治疗目的。例如，该放射性标记物可用于通过x射线、发射光谱或其它诊断技术检测gp41和表达gp41的细胞。用于多核苷酸的标记物的实例包括，但不限于，以下的放射性同位素或放射性核素：3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I。
检测这些可检测标记物的手段是本领域技术人员所公知的。因此，例如放射性标记物可以采用胶片或闪烁计数器检测，荧光标记物可以采用光检测器检测发射光来检测。酶学标签一般通过向酶提供底物并检测酶对底物的作用产生的反应产物来检测，比色标签通过简单地观察该有色标签来检测。
缀合物中每个抗体或抗原结合片段的效应分子或可检测标记物的平均数量可在例如每个抗体或抗原结合片段从1至20个模块的范围。在某些实施方案中，缀合物中每个抗体或抗原结合片段的效应分子或可检测标记物的平均数量范围在约1至约2个、约1至约3个、约1至约8个；约2至约6个；约3至约5个；或约3至约4个。缀合物的荷载量(例如，效应分子/抗体比例)可以用不同方式控制，例如通过：(i)相对于抗体控制效应分子-接头中间体或接头试剂的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，(iii)用于半胱氨酸巯基修饰的部分或限制性还原条件，(iv)通过重组技术工程化抗体的氨基酸序列，以使半胱氨酸残基的数量和位置被修饰，用于控制接头-效应分子附着物的数量或位置。
C.多核苷酸和表达
提供了编码特异结合gp41的抗体、抗原结合片段和缀合物的氨基酸序列的核酸分子(例如，cDNA分子)。编码这些分子的核酸可容易地由本领域技术人员采用本文通过的氨基酸序列(例如CDR序列和VH和VL序列)、本领域可获得的序列(例如框架区或恒定区序列)，以及遗传密码产生。在几个实施方案中，核酸分子可编码所公开的抗体或抗原结合片段的VH、VL或VH和VL(例如在双顺反子表达载体中)。在几个实施方案中，核酸分子可在宿主细胞(例如哺乳动物细胞)中表达，以生成所公开的抗体或抗原结合片段。
本领域技术人员可容易地采用遗传密码来构建各种功能上等同的核酸，例如在序列上有差异但编码相同抗体序列或编码缀合物或融合蛋白并包括VL和/或VH核酸序列的核酸。
在非限定性实例中，分离的核酸分子编码本文公开的抗体或抗原结合片段的VH，并包括SEQ ID NO:20、21、44、45、78或79任一个所示的核酸序列。在非限定性实例中，分离的核酸分子编码本文公开的抗体或抗原结合片段的VL，并包括SEQ ID NO:24、46或47任一个所示的核酸序列。在非限定性实例中，分离的核酸分子编码本文公开的抗体或抗原结合片段的VH和VL，并分别包括SEQ ID NO:44和46、SEQ ID NO:44和47、SEQ ID NO:45和46、SEQID NO:45和47(10E8v4)、SEQ ID NO:78和47(10E8v4 S100cF)或SEQ ID NO:79和47(10E8v4V5R,S100cF)任一个所示的核酸序列。
编码特异结合gp41的抗体、抗原结合片段，以及缀合物的核酸序列可通过任何适合的方法制备，例如克隆适当的序列或通过采用一些方法直接化学合成，这些方法例如为磷酸三酯法，Narang等,Meth.Enzymol.68:90-99,1979；磷酸二酯法，Brown等,Meth.Enzymol.68:109-151,1979；二甲基亚磷酰胺法，Beaucage等,Tetra.Lett.22:1859-1862,1981；Beaucage&Caruthers,Tetra.Letts.22(20):1859-1862,1981描述的固相亚磷酰胺三酯法，例如，采用例如Needham-VanDevanter等,Nucl.Acids Res.12:6159-6168,1984中描述的自动化合成仪；以及，固体支持物法，美国专利No.4,458,066化学合成生产单链寡核苷酸(Chemical synthesis produces a single stranded oligonucleotide)。这可通过与互补序列杂交或者通过采用作为模板的单链用DNA聚合酶聚合来转化为双链DNA。
示例性核酸可通过克隆技术制备。合适的克隆和测序技术的实例，以及足以指导技术人员进行很多克隆操作的操作指南是已知的(参见，例如,Sambrook等(MolecularCloning:A Laboratory Manual,4th ed.,Cold Spring Harbor,New York,2012)和Ausubel等(In Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York,throughsupplement 104,2013)。来自生物试剂和实验设备的制造商的产品信息也提供有用信息。这些制造商包括SIGMA Chemical Company(Saint Louis,MO)，R&D Systems(Minneapolis,MN)，Pharmacia Amersham(Piscataway,NJ)，CLONTECH Laboratories,Inc.(Palo Alto,CA)，Chem Genes Corp.,Aldrich Chemical Company(Milwaukee,WI)，Glen Research,Inc.,GIBCO BRL Life Technologies,Inc.(Gaithersburg,MD)，Fluka Chemica-Biochemika Analytika(Fluka Chemie AG,Buchs,Switzerland)，Invitrogen(Carlsbad,CA)，and Applied Biosystems(Foster City,CA)，以及技术人员已知的很多其它商业来源。
可通过扩增方法制备核酸。扩增方法包括聚合酶链式反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)、基于转录的扩增***(TAS)、自动维持序列扩增***(3SR)。各种克隆方法、宿主细胞和体外扩增方法学为技术人员所公知的。
这些核酸分子可在重组的工程化细胞中表达，例如细菌、植物、酵母、昆虫和哺乳动物细胞。抗体、抗原结合片段和缀合物可作为单独的VH和/或VL链表达(需要时连接至效应分子或可检测标记物)，或者可表达为融合蛋白。表达和纯化抗体和抗原结合片段的方法是已知的并在本文中有进一步的描述(参见，例如Al-Rubeai(ed)，Antibody Expression andProduction,Springer Press,2011)。还可表达免疫粘附素。因此，在一些实例中，提供了编码VH和VL，以及免疫粘附素的核酸。该核酸序列可任选地编码先导序列。
为了生成scFv，可将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH和VL序列可作为连续的单链蛋白表达，并且VH和VL结构域通过该柔性接头联结(参见，例如，Bird等,Science 242:423-426,1988；Huston等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883,1988；McCafferty等,Nature 348:552-554,1990；Kontermann和Dubel(Ed)，Antibody Engineering,Vols.1-2,2nd Ed.,SpringerPress,2010；Harlow and Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,2nd,Cold SpringHarbor Laboratory,New York,2013)。任选地，可在接头中包括切割位点，例如弗林蛋白酶切割位点。
编码VH和/或VL的核酸任选地可编码Fc区(免疫粘附素)。该Fc区可为IgA、IgM或IgGFc。该Fc区可为优化的Fc区，如在美国公开的专利申请No.20100/093979中所描述的，通过引用将其并入本文。在一个实例中，该免疫粘附素为IgG1Fc。
该单链抗体可以为单价的，如果仅使用单一VH和VL；二价的，如果使用两个VH和VL；多价的，如果使用不止两个VH和VL。可以生成特异结合gp41和另一抗原例如但不限于CD3的双特异性或多价抗体。该编码的VH和VL任选地在VH和VL结构域之间包括弗林蛋白酶切割位点。
本领域技术人员了解可用于表达蛋白的数种表达***，包括大肠杆菌(E.coli)，其它细菌宿主，酵母，以及各种高级真核细胞，例如COS、CHO、HeLa和骨髓瘤细胞系。
编码抗体、抗原结合片段或缀合物的一个或更多个DNA序列可通过DNA转移进适合的宿主细胞而在体外表达。该细胞可以为原核的或真核的。该术语还可包括所述宿主细胞的任何后代。应理解，所有的后代可以不与亲本细胞相同，因为在复制期间可能出现突变。稳定转移(意味着外来DNA连续地保持在宿主中)的方法在本领域是已知的。表达目标抗体的杂交瘤也涵盖在本公开中。
编码本文描述的抗体和抗原结合片段的核酸的表达可通过将该DNA或cDNA可操作地连接至启动子(其为组成型的或诱导型的)、随后并入表达盒中，来完成。该启动子可为任何目标启动子，包括巨细胞病毒启动子和人嗜T细胞病毒启动子(HTLV)-1。任选地，在构建体中包括增强子，例如巨细胞病毒增强子。该表达盒可适合于在原核细胞或真核细胞中复制和整合。典型的表达盒含有可用于调节编码蛋白的DNA的表达的特异序列。例如，该表达盒包括适当的启动子、增强子、转录和翻译终止子、起始序列、蛋白编码基因前的初始密码子(即ATG)、内含子拼接信号、维持该基因正确阅读框以允许mRNA正确翻译的序列，以及终止密码子。该载体可编码可选择标记物，例如编码药物抗性(例如，氨苄青霉素或四环素抗性)的标记物。
为了获得所克隆的基因的高水平表达，希望构建最低含有强启动子以指导转录、核糖体结合位点用于翻译起始(内部核糖体结合序列)，以及转录/翻译终止子的表达盒。对于大肠杆菌，这包括诸如T7、trp、lac或λ启动子的启动子，核糖体结合位点，以及优选地转录终止信号。对于真核细胞，控制序列包括衍生自例如免疫球蛋白基因、HTLV、SV40或巨细胞病毒的启动子/增强子和多聚腺苷酸化序列，并且还可包括间接供体和/或受体序列(例如，CMV和/或HTLV间接受体和供体序列)。该表达盒可通过诸如用于大肠杆菌的转化或电穿孔以及用于哺乳动物细胞的磷酸钙处理、电穿孔或脂质转染的公知方法转移进所选的宿主细胞内。经表达盒转化的细胞可通过该表达盒内含有的基因赋予的对抗生素的抗性来进行选择，例如amp、gpt、neo和hyg基因。
当宿主为真核细胞时，可以使用这样的DNA转染方法，例如磷酸钙沉淀，常规的机械操作如微注射、电穿孔、包封在脂质体中质粒的***，或病毒载体。真核细胞还可用编码抗体、标记的抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列和编码可选择表型的第二外来DNA分子如单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共转染。另一方法是采用真核病毒载体，例如猴病毒40(SV40)或牛***瘤病毒，瞬时感染或转化真核细胞并表达蛋白(参见例如,ViralExpression Vectors,Springer press,Muzyczka ed.,2011)。本领域技术人员可容易地在包括高级真核细胞如COS、CHO、HeLa和骨髓瘤细胞系在内的细胞中采用诸如质粒和载体的用于产生蛋白的表达***。
还提供了包括本文描述的至少一种宿主细胞的细胞群。该细胞群可为异质群，其包括包含任何所描述的重组表达载体的宿主细胞，另加至少一个其它细胞，例如不包含任何重组表达载体的宿主细胞(例如，T细胞)，或不同于T细胞的细胞，例如B细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、红细胞、肝细胞、内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞、脑细胞等。作为选择，该细胞群可为大体上的均一群，其中该细胞群主要包括包含重组表达载体的宿主细胞(例如，主要由它们组成)。该细胞群还可为细胞的克隆群，其中该群的所有细胞都为包含重组表达载体的单个宿主细胞的克隆，以使该群的所有细胞都包含重组表达载体。在本发明的一个实施方案中，该细胞群为包括宿主细胞的克隆群，该宿主细胞包括本文所述的表达载体。
可对编码本文描述的多肽的核酸进行修饰而不减弱其生物活性。可进行一些修饰以有助于克隆表达或将靶向分子并入融合蛋白。这些修饰为本领域技术人员所公知，包括例如，终止密码子，在氨基末端添加的甲硫氨酸以提供起始位点，置于任一末端的另外的氨基酸以生成方便定位的限制性位点，或者另外的氨基酸以在纯化步骤中其辅助作用(例如聚His)。除了重组方法之外，本公开的免疫缀合物、效应模块和抗体也可整体或部分地采用本领域公知的标准肽合成来构建。
一旦被表达，该抗体、抗原结合片段，以及缀合物可按照本领域的标准操作纯化，包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱层析等(通常参见，Simpson ed.,Basic methods in ProteinPurification and Analysis:A laboratory Manual,Cold Harbor Press,2008)。该抗体、抗原结合片段，以及缀合物不必是100％纯的。一旦被纯化(视需要，部分地或直至均一)，如果准备治疗上使用，则该多肽应该基本上图内毒素。
用于从哺乳动物细胞和细菌细胞如大肠杆菌表达抗体、抗原结合片段和缀合物和/或重折叠已形成适当的活性形式的方法已有描述，为公知的，并可应用于本文公开的抗体。参见，例如，Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,2nd,Cold SpringHarbor Laboratory,New York,2013,Simpson ed.,Basic methods in ProteinPurification and Analysis:A laboratory Manual,Cold Harbor Press,2008，以及Ward等,Nature 341:544,1989。
除了重组方法，这些抗体、抗原结合片段和/或缀合物还可全部或部分地采用标准肽合成来构建。多肽的固相合成可通过将C末端氨基酸序列附着至不溶性支持物、接着顺序添加序列中的剩余氨基酸来完成。用于固相合成的技术由Barany&Merrifield,ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology.Vol.2:Special Methods in PeptideSynthesis,Part A.pp.3-284；Merrifield等,J.Am.Chem.Soc.85:2149-2156,1963,以及Stewart等,Solid Phase Peptide Synthesis,2nd ed.,Pierce Chem.Co.,Rockford,Ill.,1984描述。更长的蛋白可以通过较短片段的氨基和羧基末端的缩合来合成。通过活化羧基末端(例如使用偶联剂N,N'-二环己基碳二亚胺)来形成肽键的方法在本领域中是公知的。
D.方法和组合物
1.治疗方法
本文公开的方法用于HIV-1感染的防止或治疗。防止包括对HIV-1感染的抑制。该方法包括让细胞与治疗有效量的所公开的特异结合gp41的抗体、抗原结合片段或缀合物接触，或者与编码这样的抗体、抗原结合片段或缀合物的核酸接触。该方法还可包括让向受试者施用治疗有效量的所公开的特异结合gp41的抗体、抗原结合片段或缀合物接触，或者向受试者施用编码这样的抗体、抗原结合片段或缀合物的核酸。在一些实例中，该抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子可在暴露前使用(例如，以防止或抑制HIV-1感染)。在一些实例中，该抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子可用在暴露后预防中。在一些实例中，该抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子可用于消除或降低HIV-1在受试者中的病毒储藏库(viral reservoir)。例如，可将治疗有效量的抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子施用至带有HIV-1的受试者，例如正以抗病毒治疗处理的受试者。在一些实例中，该抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子被修饰，以便其直接对感染的细胞有细胞毒性(例如，通过与毒素的缀合)，或者以便使用天然防御，例如补体、抗体依赖的细胞毒性(ADCC)或巨噬细胞吞噬作用。
对于该方法有效而言，HIV-1感染不必被完全消除或防止。例如，方法可降低期望量的HIV-1感染，例如与缺乏该处理的HIV-1感染相比，降低至少10％、至少20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或甚至至少100％(可检测的HIV-1感染细胞的消除)。在一些实施方案中，该细胞还可与治疗有效量的另外的试剂如抗病毒剂接触。该细胞可在体内或体外。该方法包括施用本领域已知的一种或更多种另外的试剂。在另外的实施方案中，HIV-1复制可通过类似的方法降低或抑制。对于该方法有效而言，HIV-1复制不必被完全消除。例如，方法可降低期望量的HIV-1复制，例如与缺乏该处理的HIV-1复制相比，降低至少10％、至少20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或甚至至少100％(可检测的HIV-1的消除)。
测定中和活性的方法包括，但不限于，如Martin等(2003)Nature Biotechnology21:71-76描述的单周期感染测定。在该测定中，病毒活性的水平通过可选择标记物测量，该标记物的活性反映了样品中活病毒的量，并确定IC50。在其它测定中，可在PM1细胞系或在原代细胞(正常PBMC)中监测急性感染。在该测定中，病毒活性的水平可通过采用ELISA确定p24浓度来监测。参见，例如，Martin等(2003)Nature Biotechnology 21:71-76。
在一个实施方案中，所公开的抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子的施用导致受试者中HIV-1感染的建立的降低和/或随后的HIV-1疾病进展的减弱。HIV-1感染的建立的降低和/或随后的HIV-1疾病进展的减弱涵盖HIV-1活性任何统计上显著的降低。在一些实施方案中，公开了用于治疗带有HIV-1感染的受试者的方法。这些方法包括向该受试者施用治疗有效量的所公开的抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子，由此防止或治疗该HIV-1感染。
研究已显示，当将齐多夫定(zidovudine)在怀孕和分娩期间施用至HIV感染妇女以及施用至出生后的子女可显著降低HIV-1的母婴传播率(Connor等,1994 PediatrInfect Dis J 14:536-541)。HIV-1母婴传播的几项研究已证实了分娩时母体病毒载量与HIV-1传播至孩子的风险的关联性。本公开提供了可用于降低HIV母婴传播的抗体、抗原结合片段、缀合物和核酸分子。因此，在一些实例中，施用治疗有效量的gp41特异的抗体或其抗原结合片段或编码这样的抗体或抗体抗原结合片段的核酸，以防止HIV-1从母亲传播至婴儿或降低HIV-1从母亲传播至婴儿的风险。在一些实例中，将治疗有效量的抗体、抗原结合片段或编码这样的抗体或抗原结合片段的核酸在分娩时施用至母亲和/或孩子。在其它实例中，在母乳喂养前将治疗有效量的抗体、抗原结合片段或编码该抗体或抗原结合片段的核酸施用至母亲和/或婴儿，以防止病毒传播至婴儿或降低病毒传播至婴儿的风险。在一些实施方案中，将治疗有效量的抗体、抗原结合片段或编码该抗体或抗原结合片段的核酸以及治疗有效量的另一试剂例如齐多夫定施用至母亲和/或婴儿。
对于任何应用，该抗体、抗原结合片段、缀合物或核酸分子可与抗逆转录病毒治疗联合。抗逆转录病毒药物通过该药物抑制的逆转录病毒生命周期的阶段来宽泛地分类。所公开的抗体可与如下药物联合施用：核苷类似物逆转录酶抑制剂(例如齐多夫定、地丹诺辛(didanosine)、扎西他宾(zalcitabine)、司他夫定(stavudine)、拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韦(abacavir)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩替卡韦(entecavir)和阿立他滨(apricitabine))，核苷逆转录酶抑制剂(例如替诺福韦(tenofovir)和阿德福韦(adefovir))，非核苷逆转录酶抑制剂(例如依法韦仑(efavirenz)、奈韦拉平(nevirapine)、地拉夫定(delavirdine)、依曲韦林(etravirine)和利匹韦林(rilpivirine))，蛋白酶抑制剂(例如沙奎那韦(saquinavir)、利托那韦(ritonavir)、印地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir)、安泼那韦(amprenavir)、洛匹那韦(lopinavir)、福沙那韦(fosamprenavir)、阿扎那韦(atazanavir)、替拉那韦(tipranavir)和地瑞那韦(darunavir))，进入或融合抑制剂(例如马拉维诺(maraviroc)和恩夫韦肽(enfuvirtide))，成熟抑制剂(例如贝韦立马(bevirimat)和维韦康(vivecon))，或广谱抑制剂，例如天然抗病毒剂。在一些实例中，所公开的抗体或其活性片段或编码它们的核酸与IL-15联合施用或者缀合至IL-15。
研究已显示，靶向不同HIV-1 Env表位的HIV-1中和抗体的混合物可处理SHIV慢性感染的猕猴(macaque)(Shingai等,Nature,503,277-280,2013；和Barouch等,Nature,503,224-228,2013)。因此，在一些实例中，还向受试者施用一种或更多种另外的结合HIV-1 Env(例如，其结合gp120和/或gp41)并中和HIV-1感染的抗体。该另外的抗体可在本文公开的新抗体(例如，10E8v4、10E8v5、10E8v4 S100cF或10E8v4 V5R S100cF)施用之前、期间或之后施用。在一些实施方案中，该另外的抗体可为这样的抗体，其特异结合HIV-1 Env上的表位，例如CD4结合位点(例如，b12、3BNC117、VRC01、VRC07、VRC07-523抗体)，V1/V2结构域(例如，PG9抗体、CAP256-VRC26)，V3环(例如，10-1074、PGT 121或PGT128抗体)，或者那些结合gp120和gp41亚基的抗体(例如，35O22、PGT151或8ANC195)。在这些组合抗体处理方法中，这些抗体可为IgG形式或另外形式。特异结合这些区域并中和HIV-1感染的抗体为本领域普通技术人员所知。非限定性实例可例如在PCT公开No.WO 2011/038290、WO/2013/086533、WO/2013/090644、WO/2012/158948中找到，通过引用将它们每个全文并入本文。
在一些实例中，将编码抗体或其抗原结合片段的DNA施用至受试者，以例如使用该受试者的细胞机械提供体内抗体生成。通过核酸构建体的免疫是本领域所公知的，并例如在美国专利No.5,643,578、美国专利No.5,593,972和美国专利No.5,817,637中有教导。美国专利5,880,103描述数种向生物体递送编码核酸的方法。一种核酸施用方法为直接施用质粒DNA，例如施用哺乳动物表达质粒。编码所公开的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列可置于启动子的控制下以增加表达。该方法包括核酸的脂质体递送。这样的方法可由本领域普通技术人员应用于抗体或其抗原结合片段的产生。在一些实施方案中，所公开的抗体或抗原结合片段采用pVRC8400载体(描述在Barouch等,J.Virol,79,8828-8834,2005中，通过引用将其并入本文)在受试者中表达。
编码所公开的抗体(例如10E8v4 S100cW-DS)或抗原结合片段的核酸分子可包括在病毒载体中，例如用于该抗原或抗原结合片段在宿主细胞或受试者(例如患有HIV-1感染或有HIV-1感染风险的受试者)中表达。已构建了多种可用于表达所公开的抗体或抗原结合片段的病毒载体，例如逆转录病毒载体、腺病毒载体或腺相关病毒(AAV)载体。在几个实例中，该病毒载体可为能复制的。例如，该病毒载体可在病毒基因组中具有不抑制病毒在宿主细胞中复制的突变。该病毒载体还可为有条件地能复制的。在其它实例中，该病毒载体在宿主细胞中是复制缺陷的。
在几个实施方案中，可向受试者(例如患有HIV-1感染或有HIV-1感染风险的人受试者)施用治疗有效量的腺相关病毒(AAV)病毒载体，该病毒载体包括编码所公开的抗体或抗原结合片段(例如10E8v4 S100cF抗体)的一个或更多个核酸分子。该AAv病毒载体被设计为表达编码所公开的抗体或抗原结合片段的核酸分子，并且治疗有效量的该AAV病毒载体向受试者施用导致治疗有效量的该抗体或抗原结合片段在该受试者中的表达。可用于在受试者中表达所公开的抗体或抗原结合片段AAV病毒载体的非限定性实例包括在Johnson等(“Vector-mediated gene transfer engenders long-lived neutralizing activityand protection against SIV infection in monkeys,”Nat.Med.,15(8):901-906,2009)和Gardner等(“AAV-expressed eCD4-Ig provides durable protection from multipleSHIV challenges,”Nature,519(7541):87-91,2015)中提供的那些。
在一个实施方案中，编码所公开的抗体或其抗原结合片段的核酸被直接引入细胞中。例如，该核酸可通过标准方法装载进金微球中，并通过诸如Bio-Rad’s HELIOSTM基因枪的设备引入皮肤内。该核酸可为“裸露的”，由强启动子控制下的治疗构成。
典型地，可将该DNA注射进肌肉，尽管也可直接注射进其它部位。用于注射的剂量通常在大概0.5μg/kg至约50mg/kg，并典型地为约0.005mg/kg至约5mg/kg(参见，例如美国专利No.5,589,466)。
在另一实施方案中，基于mRNA的施用方案可用于将编码所公开的抗体的核酸递送进细胞。在一些实施方案中，以mRNA为基础的基于核酸的治疗剂可以为之前提及的方法提供强有力的替换方案。mRNA治疗剂排除了关于DNA整合进宿主基因组的安全性担忧，并可直接地在宿主细胞细胞质中翻译。此外，该简单的无细胞、体外合成RNA避免了与病毒载体或复杂生物分子的细胞生成和纯化相关的制造复杂性。可用于递送编码所公开的抗体的核酸的两种示例性形式的基于RNA的治疗剂的递送包括常规的非扩增特异性mRNA治疗性递送(参见，例如,Petsch等,“Protective efficacy of in vitro synthesized,specificmRNA vaccines against influenza A virus infection,”Nature biotechnology,30(12):1210–6,2012)和自我扩增mRNA治疗性递送(参见，例如Geall等,“Nonviral deliveryof self-amplifying RNA vaccines,”PNAS,109(36):14604-14609,2012；Magini等,“Self-Amplifying mRNA Vaccines Expressing Multiple Conserved InfluenzaAntigens Confer Protection against Homologous and Heterosubtypic ViralChallenge,”PLoS One,11(8):e0161193,2016；以及Brito et al.,“Self-amplifyingmRNA vaccines,”Adv Genet.,89:179-233,2015)。
2.剂量
gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子的治疗有效量将取决于疾病和/或感染的严重性以及患者健康的总体状况。治疗有效量提供症状的主观减轻或通过医师或其它有资格的观察者注意到的客观上可鉴定的改善。该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子可与另一治疗剂联合施用，无论是同时地，还是有序地。
包括所公开的gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子的组合物的单次或多次施用可根据患者所需的和容许的剂量和频率施用。包括gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子的组合物应提供足够量的gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子的至少一种以有效治疗患者。该剂量可施用一次，但可以定期应用，直至达到了治疗结果或者直至副反应导致有必要停止治疗。在一个实例中，每隔一天输注30分钟的一剂抗体或抗原结合片段。在这个实例中，可施用约1剂至约10剂，例如可每隔一天施用3剂或6剂。在另一实例中，施用连续输注约5至约10天。可定期治疗受试者，例如每月，直至达到期望的治疗结果。一般地，该剂量足以治疗或缓解疾病的症状或体征，而不导致对患者的不可接受的毒性。
从细胞培养物测定和动物研究获得的数据可用在制定用于人的剂量范围中。该剂量正常处于包括ED50在内的循环浓度的范围内，具有微小毒性或最低毒性。该剂量可在该范围内随采用的剂型和使用的施用途径而变化。治疗有效剂量可从细胞培养物测定和动物研究确定。
在某些实施方案中，特异结合gp41的抗体或抗原结合片段或它们的缀合物或编码这样的分子的核酸分子或载体或包括这些分子的组合物以约5或10nmol/kg至约300nmol/kg或从约20nmol/kg至约200nmol/kg的范围内的剂量施用，或以约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、350、400、450、500、750、1000、1250、1500、1750或2000nmol/kg的剂量施用，或以约5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000μg/kg，或以约1、1.25、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10mg/kg的剂量施用，或以治疗医生认为合适的其它剂量施用。在一些实施方案中，该抗原或抗原结合片段可以以约0.5至约40mg/kg，例如约1至约30、约1至约20、约1至约15、约1至约10、约1至约5、约1至约3、约0.5至约40mg/kg，例如约0.5至约30、约0.5至约20、约0.5至约15、约0.5至约10、约0.5至约5、约0.5至约3、约3至约7、约8至约12、约15至约25、约18至约22、约28至约32、约10至约20、约5至约15、约20至约40mg/kg的剂量向受试者施用。本文描述的剂量可根据本文描述的给药频率/施用频率来施用，包括但不限于每天、每周2或3次、每周、每2周、每3周、每月、每隔1月等。
在一些实施方案中，所公开的治疗剂可静脉内、皮下或通过其它模式每天或每周多次施用一段时间，然后是一段时间的无处理，接着重复该循环。在一些实施方案只中，起初的处理时间(例如，每天或每周多次施用该治疗剂)为3天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周。在相关的实施方案中，无处理的时间持续3天、1周、2周、3周或4周。在某些实施方案中，该治疗剂的给药方案为每天一次持续3天，然后是3天无处理；每天或每周多次持续1周，然后是3天或1周无处理；每天或每周多次持续2周，然后是1或2周无处理；每天或每周多次持续3周，然后是1、2或3周无处理；或者每天或每周多次持续4、5、6、7、8、9、10、11或12周，然后是1、2、3或4周无处理。
3.施用模式
gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子或包括这些分子的组合物，以及另外的试剂可用各种方式施用，包括局部和全身施用，例如，通过皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮内或椎管内注射。在一个实施方案中，该治疗剂通过每天一次的皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮内或椎管内注射来施用。该治疗剂也可通过直接在疾病部位或近疾病部位注射来施用。
该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子或包括这些分子的组合物还可以以微球、微胶囊、脂质体(不带电的或带电的(例如，阳离子的))、聚合物微粒(例如，聚酰胺、聚乳酸、聚乙醇酸交酯、聚(丙交酯-乙交酯))、微乳液等的形式口服施用。
其它的施用方法为通过渗透泵(例如，Alzet泵)或微型泵(例如，Alzet微型渗透泵)，其允许在预定的时间可控的、连续的和/或缓慢释放递送该治疗剂或药物组合物。该渗透泵或微型泵可皮下植入或近靶位点植入。
对本领域技术人员来说显而易见的是，该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子或包括这些分子的组合物还可通过其它模式施用。确定最有效的施用模式处于技术人员的技术范围内。该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子或包括这些分子的组合物可作为适合于例如口服(包括口腔和舌下)、直肠、鼻、局部、肺、***或胃肠外(包括肌内、动脉内、椎管内、皮下或静脉内)施用的药物制剂施用，或者以适合于通过吸入或吹入施用的形式施用。取决于所期望的施用模式，该药物制剂可为固体、液体、半固体或液体剂型，例如片剂、栓剂、药丸、胶囊、粉末、液体、悬浮液、乳液、药膏、乳膏、软膏、洗剂等。该制剂可以以适合于精确剂量的单次施用的单位剂型提供。该制剂包括有效量的治疗剂和一种或更多种药学上可接受的赋形剂、载体和/或稀释剂，以及任选地一种或更多种其它的生物学活性剂。
4.组合物
提供了组合物，其在载体中包括本文公开的gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子的一种或更多种。该组合物例如可用于治疗或检测HIV-1感染。该组合物可制备为单位剂型，用于向受试者施用。施用的量和时机由治疗医生决定，以实现期望的目的。该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子可配制为用于全身或局部施用。在一个实例中，该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子被配制为用于胃肠外施用，例如静脉内施用。
在一些实施方案中，该组合物包括至少70％(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)纯度的抗体、抗原结合片段或其缀合物。在某些实施方案中，该组合物含有少于10％(例如少于5％、少于4％、少于3％、少于2％、少于1％、少于0.5％或甚至更少)的大分子污染物，例如其它的哺乳动物(例如，人)蛋白。
用于施用的该组合物包含溶解在药学上可接受的载体如水性载体中的该gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子的溶液。可使用各种水性载体，例如，缓冲盐水等。这些溶液为无菌的并通常没有不希望的物质。这些组合物可以经常规、公知的灭菌技术灭菌。该组合物可以含有所需的药学上可接受的辅助性物质以接近生理条件，例如pH调节和缓冲剂，毒性调节剂等，例如醋酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。抗体在这些制剂中的浓度可大范围变化，将根据所选的特定施用模式和受试者的需要主要基于流体体积、粘度、体重等来选择。
用于静脉内施用的典型组合物包括约0.01至约50mg/kg的抗体或抗原结合片段或缀合物/受试者/天(或对应剂量的包括该抗体或抗原结合片段的缀合物)。用于制备可施用组合物的实际方法将对本领域技术人员是已知的或显而易见的，并且在诸如Remington'sPharmaceutical Science,22th ed.,Pharmaceutical Press,London,UK(2012)的出版物中有更详细描述。在一些实施方案中，该组合物可为液体制剂，包括浓度范围约0.1mg/ml至约40mg/ml或约0.5mg/ml至约20mg/ml或约1mg/ml至约20mg/ml或约0.1mg/ml至约10mg/ml或约0.5mg/ml至约10mg/ml或约1mg/ml至约10mg/ml的一种或更多种抗体、抗原结合片段(例如特异结合gp41的抗体或抗原结合片段)。
抗体或其抗原结合片段或缀合物或编码这些分子的核酸分子可提供为冻干形式，并且在施用前用无菌术再水化，尽管它们也可提供为已知浓度的无菌溶液。接着可将该抗体溶液或抗原结合片段或编码这些抗体或抗原结合片段的核酸添加至含有0.9％氯化钠，USP的输注袋中，并典型地以0.5至15mg/kg的剂量施用。本领域中在抗体药物施用方面有可获得的相当多的经验，抗体药物自1997年批准以来已在美国上市。抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸可通过缓慢输注施用，而不是在静脉内推送或团注(bolus)施用。在一个实例中，施用较高的负荷剂量，随后是较低水平施用的维持剂量。例如，最初的4mg/kg负荷剂量可以在大概90分钟时间内输注，然后是每周的30分钟时间内输注的2mg/kg维持剂量，持续4至8周(如果之前的剂量被很好地容许)。
控制释放的胃肠外制剂可制备为植入物、油性注射物或为颗粒***。对于蛋白递送***的概览，参见Banga,A.J.,Therapeutic Peptides and Proteins:Formulation,Processing,and Delivery Systems,Technomic Publishing Company,Inc.,Lancaster,PA,(1995)。颗粒***包括微球、微颗粒、微胶囊、纳米胶囊、纳米球和纳米颗粒。微胶囊含有作为中心核心的治疗性蛋白，例如细胞毒素或药物。在微球中，该治疗剂分散在颗粒中。小于约1μm的颗粒、微球和微胶囊一般分别称为纳米颗粒、纳米球和纳米胶囊。毛细管具有约5μm的直径，使得仅纳米颗粒静脉内给药。微颗粒一般为约100μm的直径，并通过皮下或肌内施用。参见，例如，Kreuter,J.,Colloidal Drug Delivery Systems,J.Kreuter,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,NY,pp.219-342(1994)；和Tice&Tabibi,Treatise onControlled Drug Delivery,A.Kydonieus,ed.,Marcel Dekker,Inc.New York,NY,pp.315-339,(1992)。
聚合物可用于本文公开的抗体组合物的离子控制释放。用于可控的药物递送的各种可降解的和非可降解聚合物基质在本领域是已知的(Langer,Accounts Chem.Res.26:537-542,1993)。例如，嵌段共聚物泊洛沙姆(polaxamer)407在低温下作为粘性而流动的液体，但在体温下形成半固体凝胶。其已显示为有效的载体，用于重组白介素-2和尿素酶的配制和持续递送(Johnston等,Pharm.Res.9:425-434,1992；和Pec等.,J.Parent.Sci.Tech.44(2):58-65,1990)。作为选择，羟基磷灰石已用作蛋白控制释放的微载体(Ijntema等,Int.J.Pharm.112:215-224,1994)。在另一方面，脂质体被用于控制释放以及脂质包封药物的药物靶向(Betageri等,Liposome Drug Delivery Systems,Technomic Publishing Co.,Inc.,Lancaster,PA(1993))。许多另外的用于治疗性蛋白的控制递送的***是已知的(参见美国专利No.5,055,303；美国专利No.5,188,837；美国专利No.4,235,871；美国专利No.4,501,728；美国专利No.4,837,028；美国专利No.4,957,735；美国专利No.5,019,369；美国专利No.5,055,303；美国专利No.5,514,670；美国专利No.5,413,797；美国专利No.5,268,164；美国专利No.5,004,697；美国专利No.4,902,505；美国专利No.5,506,206；美国专利No.5,271,961；美国专利No.5,254,342和美国专利No.5,534,496)。
5.检测和诊断方法
还提供了用于gp41的表达的体外或体内检测的方法。在一个实例中，gp41的表达在生物样品中检测，并可作为样品中存在HIV-1而用于检测HIV-1感染。该样品可为任何样品，包括但不限于，来自活检、尸检以及病例标本的组织。生物样品还包括组织切片，例如，用于组织学目的取得的冷冻切片。生物样品还包括体液，例如血液、血清、血浆、痰、脊髓液或尿。该检测方法包括在足以形成免疫复合物的条件下让特异结合gp41的抗体或抗原结合片段或其缀合物(例如，包括可检测标记物的缀合物)与细胞或样品接触或被施用至受试者，并检测该免疫复合物(例如，通过检测缀合至该抗体或抗原结合片段的可检测标记物)。
在几个实施方案中，提供了在受试者中检测HIV-1感染的方法。本公开提供了用于在生物样品中检测HIV-1的方法，其中该方法包括使来自受试者的生物样品与所公开的抗体或抗原结合片段在足以形成免疫复合物的条件下接触，并检测该免疫复合物，以检测该生物样品中的该gp41。在一个实例中，样品中gp41的检测表明该受试者患有HIV-1感染。在另一实例中，样品中gp41的检测验证对受试者中HIV-1感染的诊断。
在一些实施方案中，所公开的抗体或其抗原结合片段被用于测试疫苗。例如，测试包括gp41的疫苗组合物是否呈现包括10E8表位的构象。因此，本文提供了用于测试疫苗的方法，其中该方法包括让含有疫苗如HIV-1 Env免疫原的样品与所公开的抗体或抗原结合片段在足以形成免疫复合物的条件下接触，并检测该免疫复合物，以检测样品中具有包括10E8表位的HIV-1免疫原的疫苗。在一个实例中，样品中免疫复合物的检测表明该疫苗组分如HIV-1 Env免疫原呈现了能够结合该抗体或抗原结合片段的构象。
在一个实施方案中，用可检测标签直接该抗体或抗原结合片段。在另一实施方案中，结合HIV-1 Env的抗体(第一抗体)是未标记的，并将第二抗体或可结合该结合第一抗体的抗体的其它分子用于检测。如本领域技术人员所公知的，选择能够特异结合特异物种和类别的第一抗体的第二抗体。例如，如果该第一抗体或人IgG，则该第二抗体可以为抗人IgG。可结合抗体的其它分子包括，但不限于，蛋白A和蛋白G，它们都是可商业获得的。
用于抗体、抗原结合片段或第二抗体的合适标签如上文描述，包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、磁性剂和放射活性物质。合适酶的非限定性实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶。合适的辅基复合物的非限定性实例包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素。合适的荧光物质的非限定性实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白。发光物质的非限制性实例为鲁米诺(luminol)；非限定性的示例性磁性剂为钆，以及非限定性的示例性放射性标签包括125I、131I、35S或3H。
E.试剂盒
还提供了试剂盒。例如，用于治疗患有HIV-1感染的受试者，或用于检测样品中或受试者中gp41的试剂盒。该试剂盒将典型地包括所公开的gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子或包括这些分子的组合物。不止一种所公开的gp41特异性抗体、抗原结合片段、缀合物或编码这些分子的核酸分子或包括这些分子的组合物可包括在该试剂盒中。
在一个实施方案中，该试剂盒为诊断试剂盒并包括免疫测定。尽管该免疫测定的细节可能随采用的具体形式变化，但在生物样品中检测gp41的方法通常包括在足以与gp41形成免疫复合物的条件下让该生物样品与特异地反应的抗体接触的步骤。该抗体允许在免疫学反应条件下特异结合以形成免疫复合物，并直接或间接检测该免疫复合物(结合的抗体)的存在。
该试剂盒包括容器和该容器上的或与该容器关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射筒等。该容器可以由各种物质如玻璃或塑料形成。该容器典型地容纳有包括一种或更多种所公开的抗体、抗原结合片段、缀合物、核酸分子或组合物的组合物。在几个实施方案中，该容器可以具有无菌进入口(例如，该容器可以为静脉溶液袋或具有可通过皮下注射针刺穿的瓶塞的小瓶)。标签或包装插页表明该组合物用于治疗特定的状况。
该标签或包装插页典型地还将包括用于包括在该试剂盒内的该抗体、抗原结合片段、缀合物、核酸分子或组合物的使用说明。包装插页典型地包括通常包含在治疗产品的商业包装中的说明书，其包含关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告的信息。该说明性材料可以书写为电子形式(例如计算机磁盘或压缩磁盘)或可以为影像的(例如视频文件)。该试剂盒还可以包括另外的组分以方便该试剂盒所针对的特定应用。因此，例如，该试剂盒可以另外含有检测标签的手段(例如用于酶标签的酶底物，用于检测荧光标签的滤光器组，适当的第二标签如第二抗体，等等)。该试剂盒还可以包括常规用于实施特定方法的缓冲剂和其它试剂。这样的试剂盒和适当的内容物是本领域技术人员所公知的。
F.另外的实施方案
第1项.分离的单克隆抗体或抗原结合片段，包括：
(A)重链可变区(VH)，其包括SEQ ID NO:35(10E8v4 S100cW)所示VH的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区(VL)，其包括SEQ ID NO:6(rL3-6mut)所示VL的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3；
(B)包括SEQ ID NO:36(10E8v4 DS)所示可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的VH，和包括SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)所示可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的VL；或
(C)包括SEQ ID NO:37(10E8v4 S100cW-DS)所示可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的VH，和包括SEQ ID NO:41(rL3-6mut-DS)所示可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的VL；以及
其中所述单克隆抗体或抗原结合片段特异结合gp41并中和HIV-1。
第2项.第1项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3
分别包括SEQ ID NO:7、8、52、10、11和12(10E8v4/v5 S100cW IMGT CDRs)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:7、8、53、55、11和12(10E8v4/v5 DS IMGT CDRs)所示的氨基酸序列；
或分别包括SEQ ID NO:7、8、54、55、5和6(10E8v4/v5 S100cW-DS IMGT CDRs)所示的氨基酸序列。
第3项.第1项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中VH和VL
分别包括SEQ ID NO:35和6(10E8v4 S100cW)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:36和41(10E8v4 DS)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:37和41(10E8v4 S100cW-DS)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:38和6(10E8v5 S100cW)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:39和41(10E8v5 DS)所示的氨基酸序列；或
分别包括SEQ ID NO:40和41(10E8v5 S100cW-DS)所示的氨基酸序列。
第4项.分离的单克隆抗体或抗原结合片段，包括：
(A)分别包括SEQ ID NO:5和6(10E8v4)所示的氨基酸序列的重链和轻链可变区；
(B)分别包括SEQ ID NO:3和6(10E8v5)所示的氨基酸序列的重链和轻链可变区；
其中所述单克隆抗体或抗原结合片段特异结合gp41并中和HIV-1。
第5项.前述任一项的分离的抗体或抗原结合片段，其中LCDR1还在kabat位置32处包括丝氨酸残基的氨基酸替换。
第6项.第5项的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述氨基酸替换为Y32F替换。
第7项.第5项的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述氨基酸替换为Y32W替换。
第8项.第5项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3
分别包括SEQ ID NO:7、8、9、56、11和12(10E8v4/v5 Y32W IMGT CDRs)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:7、8、52、56、11和12(10E8v4/v5 S100cW Y32W IMGTCDRs)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:7、8、53、85、11和12(10E8v4/v5 DS Y32W IMGT CDRs)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:7、8、54、85、5和6(10E8v4/v5 S100cW-DS Y32W IMGTCDRs)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:7、8、52、57、11和12(10E8v4/v5 S100cW Y32F IMGTCDRs)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:7、8、53、86、11和12(10E8v4/v5 DS Y32F IMGT CDRs)所示的氨基酸序列；或
分别包括SEQ ID NO:7、8、54、86、5和6(10E8v4/v5 S100cW-DS Y32F IMGTCDRs)所示的氨基酸序列。
第9项.第5项的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其中VH和VL
分别包括SEQ ID NO:5和41(10E8v4 Y32W)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:35和6(10E8v4 S100cW)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:36和41(10E8v4 DS)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:37和41(10E8v4 S100cW-DS)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:3和41(10E8v5 Y32W)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:38和6(10E8v5 S100cW Y32W)所示的氨基酸序列；
分别包括SEQ ID NO:39和41(10E8v5 DS Y32W)所示的氨基酸序列；或
分别包括SEQ ID NO:40和41(10E8v5 S100cW-DS Y32W)所示的氨基酸序列。
第10项.前述任一项的抗体或抗原结合片段，还包括列在表3或表4中的一个或更多个功能获得氨基酸替换。
第11项.前述任一项的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段在20℃在磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4中溶解至至少5mg/ml的浓度。
第12项.前述任一项的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段以50μg/ml或更小的IC50中和至少95％的列在图16A中的病毒株。
第13项.前述任一项的抗体或抗原结合片段，包括人框架区。
第14项.前述任一项的抗体，包括人恒定区。
第15项.前述任一项的抗体，其中所述抗体为IgG、IgM或IgA。
第16项.前述权利要求任一项的抗体，包括重组恒定结构域，所述重组恒定结构域包括增加与新生儿Fc受体结合的修饰。
第17项.第16项的抗体，其中所述抗体为IgG1，所述增加与新生儿Fc受体结合的修饰包括M428L和N434S氨基酸替换。
第18项.第1至13项中任一项的抗原结合片段。
第19项.第18项的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段为Fv、Fab、F(ab')2、scFV或scFV2片段。
第20项.包括前述任一项的分离的人单克隆抗体或抗原结合片段的双特异性抗体。
第21项.第20项的双特异性抗体，其中所述抗体特异结合gp41和CD3。
第22项.前述任一项的抗体或抗原结合片段，连接至效应分子或可检测标记物。
第23项.第22项的抗体或抗原结合片段，其中所述可检测标记物为荧光、酶学或放射性标记物。
第24项.编码第1至21项中任一项的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子。
第25项.编码权利要求第1至21项中任一项的抗体或抗原结合片段的VH、VL或者VH和VL的分离的核酸分子。
第26项.第21至24中任一项的核酸分子，其中
所述抗体或抗原结合片段的VH包括SEQ ID NO:44所示的核酸序列；
所述抗体或抗原结合片段的VH包括SEQ ID NO:45所示的核酸序列；
所述抗体或抗原结合片段的VL包括SEQ ID NO:47所示的核酸序列；
所述抗体或抗原结合片段的VH和VL分别包括SEQ ID NO:44和47所示的核酸序列；
所述抗体或抗原结合片段的VH和VL分别包括SEQ ID NO:45和47所示的核酸序列。
第27项.第24至26项中任一项的核酸分子，可操作地连接至启动子。
第28项.包括第24至27项中任一项的核酸分子的表达载体。
第29项.第28项的表达载体，其中所述表达载体为病毒载体。
第30项.第29项的表达载体，其中所述病毒载体为腺相关病毒载体。
第31项.包括第27项的核酸分子的宿主细胞，尤其是其中所述宿主细胞为真核宿主细胞例如人宿主细胞。
第32项.用于治疗HIV-1感染的药物组合物，包括：
治疗有效量的第1至21项中任一项的抗体、抗原结合片段、核酸分子或表达载体；以及
药学上可接受的载体。
第33项.产生特异结合gp41的抗体或抗原结合片段的方法，包括：
在足以表达所述核酸分子或表达载体以产生所述抗体或抗原结合片段的体外条件下温育第31项的宿主细胞；以及
纯化所述抗体或抗原结合片段。
第34项.在受试者中检测HIV-1感染的方法，包括：
使来自所述受试者的生物样品与第1至23项中任一项的抗体或抗原结合片段在足以形成免疫复合物的条件下接触；以及
检测所述样品上所述免疫复合物的存在，其中所述样品上所述免疫复合物的存在表明所述受试者患有HIV-1感染。
第35项.在受试者中抑制或治疗HIV-1感染的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的第1至30项中任一项的抗体、抗原结合片段、核酸分子或表达载体，由此防止或治疗所述HIV-1感染。
第36项.第35项的方法，其中所述受试者有HIV-1感染风险。
第37项.第35项的方法，其中所述受试者患有HIV-1感染。
第38项.第37项的方法，其中所述受试者具有AIDS。
第39项.第35至38项中任一项的方法，还包括向所述受试者施用另外的抗体、抗原结合片段或编码所述另外的抗体或抗原结合片段的核酸，其中所述另外的抗体或抗原结合片段特异结合HIV-1 Env并中和HIV-1感染。
第40项.第39项的方法，其中所述另外的抗体为VRC01类抗体。
第41项.第40项的方法，其中所述VRC01类抗体为VRC01或VRC07-523。
第42项.第1至30项或第32项中任一项的抗体、抗原结合片段、核酸分子、表达载体或药物组合物在受试者中抑制或治疗HIV-1感染的用途。
III.实施例
提供以下的实施例来阐释某些实施方案的具体特征，但权利要求的范围不应限于这些例举的特征。
实施例1：优化的10E8抗体
本实施例阐述与亲本10E8抗体相比具有改善的中和、溶解性和自体反应性性质组合的经修饰10E8抗体的鉴定。
广谱中和抗体10E8分离自HIV-1感染供体N152，并识别就在HIV-1 gp41糖蛋白的跨膜区之前的近外膜区(MPER)中的螺旋。10E8中和98％的各式各样HIV-1分离株，50％抑制浓度(IC50)约0.32μ/ml，其比其它的结合gp41的MPER的抗体如2F5和4E10抗体明显更高效和广谱。关于10E8抗体的描述，参见Huang等(Nature,491:406-412,2012)。
改善10E8抗体的中和性质的先前努力鉴定了10E8 VH的kabat位置74处的丝氨酸残基作为潜在的突变位点(参见，美国专利公开2014/0348785A1，图44)。例如，具有S74W替换的10E8抗体改善了10E8中和3至5倍(参见美国公开2014/0348785A1，图45)。但是，当将S74W替换并入HC6 VH(在下文中讨论)并与10E8 VL配对时，所得的抗体通过心磷脂抗体测定有自体反应性(参见美国公开2014/0348785A1，图56)，表明具有这种替换的抗体可能对于治疗使用不是最佳的.
很多10E8重链和轻链的克隆变体通过对供体N152样品的下一代测序而鉴定，并通过与互补的野生型10E8链配对来评估功能(参见美国公开2014/0348785A1的第104至107页和图50至52)。在很多鉴定的克隆变体中有HC6 VH(称为gVRC-H2dN152并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:154提供)、H6 VH(称为gVRC-H6dN152并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:158提供)、H8 VH(称为gVRC-H8dN152并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:160提供)、L10 VL(称为gVRC-L10dN152并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:173提供)，以及L19 VL(称为gVRC-L19dN152并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:192提供)。
进行了10E8抗体VH的另外修饰以生成HC6-S74Y VH(在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:192提供)，和HC6-S74Y-511 VH(称为HC6_S77Y_hp_L02并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:201提供)。进行了10E8抗体VL的修饰以生成rL3 VL(称为“L3,”或“10E8gL03”并在美国公开2014/0348785A1中作为SEQ ID NO:152提供)。
尽管有上文描述的对10E8抗体的改进，仍需要另外的10E8变体，它们为高度可溶的、缺乏自体反应性、并保留(或改善)野生型10E8的中和能力。
上述抗体VH和VL结构域的氨基酸序列提供在图1A至1E中。图1A和1B显示了这些重链和轻链可变区的通过IMGT定位的CDR,图1C和图1D显示了这些重链和轻链可变区的通过kabat定位的CDR。本实施例中讨论的重链和轻链可变区的氨基酸序列的实例列在表2中。
表2.10E8变体序列
这些经修饰的10E8抗体基本上按之前的描述产生(参见，例如，Wu等,Science,333(6049):1593–1602,2011和Zhu等,Front Microbiol 3(2012):315,2012)。简而言之，通过用等量的配对重链和轻链质粒共转染Expi293F细胞来表达抗体，并采用重组蛋白A柱(GEHealthcare)纯化。除非上下文另有说明，在实施例中描述的所有抗体测定利用IgG形式的变体10E8抗体(在可变区具有一个或更多个氨基酸替换)，并按上文描述产生。
一种评估抗体溶解性的方法为通过在350nm处测量溶液的光学密度OD来测定含有该抗体的溶液的浊度。因此，通过测量抗体溶液的OD350确定含有10E8抗体、包括HC6-S74YVH和rL3 VL的抗体、包括HC6-S74Y-511 VH和rL3 VL的抗体或VRC01抗体(其在水溶液中是高度可溶的)的溶液的浊度。简而言之，在动物细胞中表达这些抗体，并让得到的上清液穿过蛋白A柱。洗涤柱，采用洗脱缓冲液(10mM甘氨酸，pH 2.7)从柱上洗脱结合的抗体，其滴进含有1M Tris-HCl，pH 8.5中和缓冲液的收集管中。如图2中所示，与VRC01抗体相比，含有10E8抗体或HC6-S74Y/rL3抗体的洗脱液展示了相当高的OD350读数。该发现表明，这两种抗体倾向于聚集，可溶性低于VRC01抗体。但是，如通过OD350测定的，与10E8和HC6-S74Y/rL3抗体相比，HC6-S74Y-511/rL3抗体明显较不浑浊(即，更易溶)(图2)，并且在中和HIV-1方面差不多有效(图3)。
采用作为溶解性筛选的浊度测定测试了另外的重链和轻链组合(图4)。如图4中显示的，如通过OD350处浊度确定的，与未修饰10E8抗体相比，包括H8 VH和L10 VL或L19 VL或H6 VH和L10 VL的组合的抗体展现了改善的溶解性。
为了进一步改善基于H6和H8的抗体的溶解性，将VH的L72、I75和F77残基作为靶用于更亲水的氨基酸的替换。这些残基位于10E8 VH的疏水补丁中(从10E8/MPER复合物的结构鉴定的，在Huang等,Nature,491:406-412,2012中有描述)。如图4A中所显示，与未修饰10E8抗体或包括H6/L10、H8/L10或H8/L19的经修饰10E8抗体相比，如通过OD350处浊度确定的，包括H8-511 VH和L10 VL或H6-511 VH和L10 VL的抗体展现了大大改善的溶解性。但是，H8-511 VH和L10 VL或H6-511 VH和L10 VL的组合的每个对于HIV-1病毒株的中和有效性大概低10倍(图4B)。该亲水替换预期会降低整体疏水性并增加H6和H8 VH结构域的溶解性，但中和效力和广度的剧烈降低是未预见到的。
设计了H6-511 VH的另外修饰，试图改善HIV-1中和，但没有抗体溶解性的相应降低。如图5中所示，在kabat位置28、31、52和98处的残基接近10E8的表位结合区。在H6-511VH中kabat位置28、31、52和98分别被天冬酰胺、天冬氨酸、丝氨酸和组氨酸残基占据。相比之下，在HC6 VH(当与rL3 VL配对时其为强烈中和性的)中，kabat位置28、31、52和98分别被天冬氨酸、天冬酰胺、苏氨酸和酪氨酸占据。用相应的来自HC6 VH的对应残基替换来自H6-511 VH的kabat位置28、31、52、98的各种组合以生成一系列突变的与rL3 VL配对的VH结构域，并测试溶解性和中和性。如图6中所显示的，与未经修饰的10E8抗体相比，通过OD350处浊度确定的所有的突变体都展现了改善的溶解性。此外，经修饰的抗体之一，H6-511-4mut(第7个，与H6-511相比，其包括H98Y、N28D、D31N、S52T替换)广谱中和HIV-1病毒株(图7)。与野生型10E8 VH相比，该H6-511-4mut VH包括Q3R、A61E、P62S、E64K、L72D、S74T、I75K、F77T、L(82C)V、M84T、S87T、Y98H、R105Q和T110I替换。
如图8中显示的，包括L10 VL的经修饰的10E8抗体鉴定为高度可溶的(将未经修饰的10E8与10E8H/L10相比)。但是，包括L10 VL的经修饰的10E8抗体缺乏亲本10E8抗体的广谱中和性质(图4B)。相比之下，包括与10E8 VH配对的rL3 VL的经修饰10E8抗体为HIV-1感染的广谱和有效中和物，但不如包括L10 VL的抗体易溶。
因此，进行了筛选测定以确定是否可生成具有rL3 VL的HIV-1中和性质以及L10 VL的溶解性的经修饰VL。该L10 VL和rL3 VL在序列中在12个位置处有差异(参见图1)。对在这些位置每个处具有替换的抗体筛选溶解性和中和性质。如图9中显示的，含有包括与具有S1A、Y2S、T8P、G9A、G16K和R17Q替换的rL3 VL配对的10E8 VH的经修饰10E8抗体与对应的10E8WT或其它rL3变体相比明显较不浑浊。具有S1A、Y2S、T8P、G9A、G16K和R17Q替换的rL3VL变体称为“rL3-6mut”，与天然10E8 VL相比包括S1A、Y2S、E7D、T8P、G9A、G16K、R17Q、I45V、V58I、S76T、D83E和E85D。
包括与rL3-6mut VL配对的H6-511-4mut VH的抗体明显比10E8wt抗体或H6-511-4mut/rL3抗体更易溶(如采用浊度测定测量的)(图10)。此外，H6-511-4mut VH/rL3-6mut和H6-511-4mut/rL3抗体的每个以比10E8wt更小的IC50和IC80值中和HIV-1。
图12提供了HC6-S74Y-511/rL3(变体1)、H6-511-4mut/rL3-6mut(变体4)和HC6-S74Y-511/rL3-6mut(变体5)抗体的开发过程总结。这些变体抗体的命名、序列，以及与野生型10E8相比的替换总结在表3中。
表3.10E8变体
进行了另外的测定来进一步分析HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的溶解性、自体反应性和中和性(图13至16)。
动力学浓度。进行了动力学浓度测定以评估HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的溶解性。将3毫升(浓度0.35OD)磷酸盐缓冲盐水，pH7.4中的每种变体载入具有30,000道尔顿分子量截留的离心浓缩器中，并以4000g离心20分钟(图13A)。浓缩后，每种经修饰抗体的体积小于野生型10E8的体积，其中H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的体积明显小于10E8抗体的体积(图13B)。还观察到H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体溶液的蛋白浓度显著增加(图13C)。
动态光散射。通过动态光散射评估HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体。动态光散射为确定溶解在溶液中的聚合物的大小的均一性的有用技术。单分散溶液为含有相同大小的聚合物(蛋白)的溶液。多分散溶液含有不同大小的聚合物。对于含有聚集的蛋白的蛋白溶液，该动态光散射测定将鉴定为多分散溶液。如图14中所显示的，含有野生型10E8的抗体溶液为多分散的，而含有HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut或HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的抗体溶液为单分散的。这些发现显示，这些变体抗体不在溶液中聚集。
自体反应性。之前表征的MPER mAbs 2F5和4E10的共同性质是它们与自身抗原交叉反应，随后已知它们与未接触HIV-1的HEp-2细胞(HIV-1naive HEp-2cell)上存在的自身抗原反应(Haynes等,Science 308,1906-1908,2005；Huang等,Nature,491:406-412,2012)。因此，通过HEp-2细胞染色测试了HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的自体反应性。基本上按之前的描述(Haynes等,Science,308(5730):1906–1908,2005)，采用作为复染剂的Evans Blue和FITC缀合山羊抗人IgG(ZeusScientific)在载玻片上通过间接免疫荧光确定对HIV-1阴性人上皮(HEp-2)细胞的反应性。如图15中所示，与已知的自体反应性抗体VRC07-G54W相比，HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体显示几乎没有HEp-2细胞染色。在H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体观察到比HC6-S74Y-511/rL3抗体更低的染色强度。
中和性(Neutralization)。为了进一步评估HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的中和广度和效力，采用之前描述的假病毒中和测定(参见，Wu等,Science,329(5993):856-861,2010，通过引用将其全文并入本文)在一大组200种HIV-1假病毒上进行了测试。简而言之，将单克隆抗体用Dulbecco改良的Eagle培养基10％FCS(Gibco)进行5倍系列稀释,并让10μl与40μl的假病毒在96孔板中于37℃温育30min，然后添加TZM-bl细胞，并温育板48h。接着用荧光素酶测定***(Promega)对测定显色，在光度计上读取相对光单位(RLU)。HIV-1 Env假病毒通过用2:1比例的pSG3δEnv骨架和表达HIV-1Env的第二质粒共转染293T细胞来生成。转染后72小时，收集含有假病毒的上清，冷冻在-80℃，直至将来使用。按所描述的，采用5参数山坡方程(hill slop equation)通过非线性回归来拟合中和曲线。IC50和IC80值分别报告为抑制感染50％或80％所需的抗体浓度。
10E8、HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体中和该大组中98％的病毒，中值IC50大约0.4μg/ml(图16A至16C)，中值IC80大约2.0μg/ml(图16D至16F)。
血清半衰期。10E8v4抗体的血清半衰期在猕猴中进行评估。包括10E8或10E8v4抗体的重链和轻链可变区的抗体用IgG1恒定区或IgG1具有“LS”突变的恒定区生成，并IV注射进猕猴中评估血清半衰期。如图17所示，该10E8v4抗体(恒定区带有或没有LS替换)与亲本10E8抗体相比具有明显增加的半衰期。
总之，HC6-S74Y-511/rL3、H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体的效力、广谱性和自体反应性类似于未经修饰10E8抗体，但经修饰10E8抗体在水溶液中易溶得多，特别是H6-511-4mut/rL3-6mut和HC6-S74Y-511/rL3-6mut抗体。
实施例2：优化的10E8抗体
本实施例阐述采用表面矩阵法(surface-matrix approach)开发的一系列经修饰的10E8抗体，其中对单个表面突变评估了中和效力和可制造性。为了改进10E8，一种能够中和98％的HIV-1分离株的人抗体，生成了加入疏水改变(Phe/Trp)、亲水突出(Arg)、大立体突出(N连接的聚糖)，以及侧链移除(多甘氨酸)的280个表面突变体。对于效力，通过中和评估这些突变体。
观察到重链残基100c处的疏水替换增加中和性。包括S100cW替换的10E8变体(10E8v4-100cW)产生了到现在所描述的最广泛的和最有效的HIV-1中和抗体。此外，观察到包括轻链残基32的修饰的多甘氨酸替换增强大小排阻层析中的均一性，也实现了通过在该区域引入二硫键的效果。
1.表面矩阵法
大分子功能常常严重依赖于表面相互作用。尽管丙氨酸扫描或Arg扫描已用于理解功能，但这些扫描还没有用于直接改善功能。选择可能增强功能的特异蛋白表面改变。
生成了280个10E8表面突变体，它们加入了疏水改变(Phe/Trp-增强与疏水补丁的结合)、亲水突出(Arg-有助于溶解性或与膜相互作用)、大立体突出(N-连接的多糖-有助于溶解性或有助于进入的立体抑制)，以及侧链移除(多甘氨酸-有助于溶解性或除去识别上的立体限制)。采用9分离株HIV-1组如上文所述筛选了这些10E8突变体的HIV-1中和性，并如上文所述对除Phe/Trp改变之外的所有突变体评估了浊度。
表4.10E8抗体的表面扫描
在上表中，“浊度改善>x倍”表明变体在PBS，pH7.4中的实际浊度与10E8抗体的浊度相比降低x倍。对于多糖扫描，示出的残基(Ri)被Asn替换并且在c末端离示出残基两个位置的残基(Ri+2)被Ser或Thr替换以在位置Ri添加多糖。
在下表中提供了目标突变和对应中和性情况的变化的总结。
表5.增强HIV-1中和和/或降低浊度的某些10E8氨基酸替换的总结。
2.轻链kabat位置32处的替换
当采用凝胶层析纯化10E8、10E8变体4和10E8变体5时，观察到罕见的“双峰”(参见图18A)。尽管该双峰似乎不影响中和广度或效力或抗体溶解性，但进行了10E8抗体序列的额外修饰以确定该双峰是否可被去除。基于结合至MPER肽的10E8的结构，测定了很多氨基酸替换，包括VL的kabat位置32。出乎意料地，用几乎任何其它氨基酸替换VL的kabat位置32的酪氨酸残基都移除该“双峰”(图18B和18C)。采用9分离株HIV-1组(特别选择以代表多样性)对所得到的10E8变体测定了HIV-1中和性。如下表中指出的，还包括Y32W的10E8变体4抗体与10E8变体4相比具有改善的HIV-1中和性质，具有Y32F替换的变体近乎与10E8变体4一样有效。
表6.10E8变体的中和情况
还对进一步在VL kabat位置32处包括替换的几个10E8变体4抗体测定了浊度(图18D)。具有Y32A、Y32F、Y32I、Y32L、Y32M、Y32P、Y32V，或Y32W替换的10E8变体4每个具有类似于10E8变体4的浊度情况。
2.10E8v4-100cW
上文讨论的表面矩阵突变测定鉴定了重链kabat位置100c处的疏水改变改善HIV-1中和效力(S100cF替换)。抗体表面分析提示了潜在的膜相互作用，以及kabat位置100c处的Trp替换也可能是引人关注的。因此，将S100cW替换引入10E8v4并分析HIV-1中和性(图19)。在一组208个HIV-1分离株上测试10E8v4-100cW，表明其为到目前为止最有效和最广谱的抗体。
进行ANA Hep-2染色分析和抗心磷脂ELISA以测试几个10E8变体的自体反应性。Hep-2染色测定如上文描述进行。该抗心磷脂ELISA按Asokan等，J.Virol.,doi:10.1128/JVI.02097-15,2015)描述的进行。这些测定的结果总结在下表中。
表7.10E8变体的自体反应性
抗体 ANA HEp2染色测定 抗心磷脂ELISA
10E8 wt 无反应性 无反应性
10E8v4 无反应性 无反应性
10E8v4 w/LS重链 无反应性 无反应性
10E8v4 s100cW 无反应性 无反应性
10E8v4 Y32W 无反应性 无反应性
10E8v4 Y32F 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cW/Y32F 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cW/Y32W 反应性(1+) 无反应性
10E8v4 S100cF 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cF/Y32F 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cF/Y32W 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cY 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cY/Y32F 无反应性 无反应性
10E8v4 S100cY/Y32W 无反应性 无反应性
3.10E8v4-100cW-DS
通过大小排阻层析观察到非典型的10E8v4 100cW纯化曲线(purificationprofile)。因此，通过大小排阻层析测定了几种另外的10E8变体的纯化曲线。这些变体包括：
1.10E8v4 S100cF
2.在VL kabat位置32处具有A、D、E、F、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、T、V或W替换的10E8v4S100cF
3.10E8v4 S100cW
4.在VL kabat位置32处具有A、D、E、F、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、T、V或W替换的10E8v4S100cW
5.在VH kabat位置100c处具有D、E、I、K、M、N、P、Q、T或V替换的10E8v4
6.10E8v4-DS(VH Y100eC和VL S30C替换)
7.10E8v4 S100cW-DS
8.10E8v4-HCDR3(HCDR3删除)
在这些经修饰的10E8抗体中，10E8v4 S100cP和10E8v4 HCDR3显示了典型的基于大小排阻层析的抗体曲线，10E8v4 S100cF/Y32N、10E8v4 S100cW/Y32N、10E8v4-DS和10E8v4 S100cW-DS显示了接近典型的基于大小排阻层析的抗体曲线。剩余的抗体以多个峰从大小排阻柱洗脱。对于10E8v4、10E8v4/Y32F、10E8v4 S100cA、具有HCDR3删除的10E8v4、10E8v4-DS，以及10E8v4 S100cW-DS抗体，大小排阻层析曲线的总结提供在图20和21中。大小排阻层析测定的简要总结提供如下：
***：Acquity Waters UPLC H-class；
柱：Acquity UPLC Protein BEH200 SEC,粒径:孔径：1.7μm，
柱尺度：4.6mm×150mm
UV吸光度:280nm
流动相：2X PBS
流速：0.4mL/min(等强度)
运行时间：20分钟
注射的样品体积：50μL
样品浓度：1mg/mL
样品质量：50μg
样品一式两份地运行。
对照1:VRC01 D-13-0030A，1mg/mL；注射的体积：50μL
对照2:凝胶过滤标准，9mg/mL；注射的体积：30μL
评估了以下的变体结合MPER肽的能力：10E8v4 S100cF/LC-Y32N、10E8v4 S100cW/LC-Y32N、10E8v4 S100cP、10E8v4-DS和10E8v4 HCDR3(10E8v4 w/HCDR3删除)。除了10E8v4_DS比10E8v4结合紧密两倍之外，所有的结合都严重削弱。也评估了10E8v4-100cW-DS对MPER肽的结合，发现类似于10E8v4-DS。
采用9分离株HIV-1组(特别选择以代表多样性)测定了这些10E8变体的几种的HIV-1中和性，结果显示在下表中。
表8.10E8变体的HIV-1中和性。
实施例3：采用gp41特异性抗体在样品或受试者中检测HIV-1
本实施例描述将特异于gp41的HIV-1单克隆中和抗体用于在样品或受试者中检测HIV-1。本实施例还描述将这些抗体用于验证对受试者中HIV-1感染的诊断。
从诊断为、正筛选或怀疑患有HIV-1感染的患者获得生物样品，例如血液样品。从未感染患者取得的血液样品用作对照，尽管标准结果也可用作对照。进行ELISA以检测gp41在血液样品中的存在。根据本领域公知的方法，将存在于血液样品(患者样品和对照样品)中的蛋白固定在固体支持物如96孔板上(参见，例如，Robinson等,Lancet 362:1612-1616,2003,通过引用并入本文)。固定后，将直接用荧光标记物标记的特异于gp41的HIV-1单克隆中和抗体应用至固定了蛋白的板。在适当的缓冲液如PBS中洗涤板，以除去未结合的抗体并降低抗体的非特异性结合。根据标准方法采用荧光读板仪检测荧光。患者样品相对于对照样品的荧光强度增加表明gp41抗体特异结合来自血液样品的蛋白，因此检测到样品中gp41蛋白的存在。在患者样品中检测到gp41蛋白表明该患者患有HIV-1感染，或者验证了受试者中HIV-1感染的诊断。
实施例4：采用特异于gp41的单克隆抗体治疗HIV-1
本实施例描述了可通过施用一种或更多种gp41特异的人中和抗体在人受试者中治疗HIV-1感染的特定方法。尽管提供了具体的方法、剂量和施用模式，但本领域技术人员应理解，可进行各种改动而基本上不影响该治疗。
基于本文公开的教导，可通过施用治疗上有效量的一种或更多种本文描述的中和抗体，由此降低或消除HIV-1感染，来治疗HIV-1感染。
筛选受试者：在具体实施例中，首选筛选受试者以确定他们是否患有HIV-1感染。可用于筛选HIV-1感染的方法的实例包括对受试者的CD4+ T细胞计数和血清血液水平中的HIV-1病毒水平的联合测量。另外的采用本文描述的gp41特异性抗体的方法也可用于筛选HIV-1感染。
在一些实例中，HIV-1测试由用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测针对HIV-1的抗体的最初筛选构成。具有来自最初ELISA的无反应性结果的标本被认为是HIV-1阴性的，除非发生新暴露于感染的伴侣或未知HIV-1状态的伴侣。具有反应性结果的标本一式两份地重测。如果任一重复测试为反应性的，则该标本报告为重复反应性，并用更特异的补充测试(例如，Western印迹或免疫荧光测定(IFA))进行证实性测试。通过ELISA为重复反应性并通过IFA为阳性或通过Western印迹为反应性的标本被认为是HIV阳性的，表明了HIV-1感染。重复ELISA反应性的标本偶尔提供不明确的Western印迹结果，其可以为对感染者中HIV-1的不完全抗体应答，或未感染者中的非特异性反应。IFA可用于证实这些含糊病例中的感染。在一些情形下，可在超过一个月后收集第二标本，并重测具有不明确Western印迹结果的受试者。在另外的实例中，在某些情况下核酸测试(例如，病毒RNA或前病毒DNA扩增方法)也可帮助诊断。
在受试者血液中检测到HIV-1表明，该受试者感染有HIV-1，为接受本文公开的治疗性组合物的候选者。此外，检测到CD4+ T细胞计数低于350个/微升，例如200个细胞/微升，也表明该受试者可能患有HIV-1感染。
预筛选不是在施用本文公开的治疗性组合物之前所必须的。
受试者预治疗：在特定实例中，受试者在施用本领域技术人员已知的包括一种或更多种抗逆转录病毒治疗的治疗剂之前经治疗。但是，这样的预治疗不是一直需要的，可由熟练医师确定。
治疗性组合物的施用：在选择受试者之后，可将治疗上有效剂量的本文描述的gp41特异性中和抗体(例如H6-511-4mut/rL3-6mut抗体)施用至该受试者(例如成人或新生婴儿，或者有接触HIV-1的风险，或者已知感染有HIV-1)也可在施用所公开的试剂的同时、之前或之后向该受试者使用另外的试剂，例如抗病毒试剂。可通过本领域已知的任何方法完成施用，例如口服施用、吸入、静脉内、肌内、腹膜内或皮下施用。
施用以防止、降低、抑制和/或治疗HIV-1或与其相关的状况的组合物的量取决于正被治疗的受试者、病症的严重性，以及该治疗性组合物的施用方式。理想地，治疗上有效量的试剂为足以在受试者中防止、降低和/或治疗该病况(例如，HIV-1)、而不在该受试者中引起可观的细胞毒性作用的量。有效量可容易地由本领域技术人员确定，例如采用建立剂量反应曲线的常规试验。如此，这些组合物可以与惰性稀释剂或与药物可接受的载体一起配制。
在一个具体实例中，取决于特定的HIV-1阶段，抗体以5mg/kg/两周施用，或10mg/kg/两周施用。在一个实例中，抗体被持续施用。在另一实例中，抗体或抗原结合片段以50μg/kg每周两次施用2至3周。
治疗性组合物的使用可长期进行(例如在数月或数年时间)。
评估：在施用一种或更多种治疗后，可监测具有HIV-1的受试者HIV-1水平的降低、受试者的CD4+ T细胞计数的增加或一个或更多个与HIV-1相关的临床症状的减弱。在具体实例中，分析受试者一次或更多次，在治疗后7天开始。可采用本领域已知的方法来监测受试者。例如，可从受试者获得生物样品包括血液，并评价HIV-1或CD4+ T水平的变动。
另外的治疗：在具体实例中，如果受试者为稳定的或具有对治疗的较小、混合或部分应答，则他们可在再评价后用该相同的时间表和他们之前接受的试剂制备物再治疗期望的一段时间，包括持续受试者终生。部分应答为HIV-1感染、HIV-1复制或其组合的降低，例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％或至少70％。部分应答也可以为CD4+T细胞计数的增加，例如至少350个T细胞/微升。
实施例5
优化的10E8抗体
本实施例描述精氨酸和色氨酸扫描突变测定来鉴定具有改善的HIV-1中和性的10E8 V5R S100cF抗体(其包括如SEQ ID NO:76和6所示的VH和VL)。
10E8v4 V5R S100cF抗体的重链可变区残基E1、V5、S7、G8、G10、L11、K13、G15、G16、S17、S21、S23、S25、D28、D30、N31、P41、G42、K43、E46、P52b、G52c、E53、G54、W55、S56、E61、S62、K64、G65、T68、S70、D72、T74、K75、N76、E81、N82a、N82b、T84、E85、Y89、K97、Y99、F100a、W100b、Y100e、P100f、P100g、Q101、D102、Q105、L108和S113(kabat编号)各自突变为精氨酸或色氨酸。另外，10E8v4 V5R S100cF抗体的轻链可变区残基S2、E3、T5、D7、P8、A9、S12、A14、L15、K16、Q17、T18、T20、D26、S30、P40、G41、Q42、V45、K51、N52、S56、G57、P59、D60、S63、S65、A66、S67、G68、N69、T76、G77、Q79、A80、E81、D85、K93、S94、G100、K103和L107(kabat编号)各自突变为精氨酸或色氨酸。因此，一共生成了172个10E8v4 V5R S100cF突变体。表达每个所得的10E8v4 V5R S100cF突变体(作为IgG)，并采用上文描述的假病毒中和测定进行测试。这其中，鉴定了以下的变体为相对于亲本10E8v4 V5R S100cF抗体改善了HIV-1中和性(通过几何平均值)至少2倍。
表9.10E8变体。
将引起至少3倍HIV-1中和性改善的10E8v4 V5R S100cF变体定位在匹配有10E8v4抗体的Cryo-EM HIV-1 Env结构内(见图22)。该分析揭示，所鉴定的突变在10E8抗体上在一起成簇。一组突变在10E8结合至HIV-1 Env时处于10E8的近膜区中(对VL的D7W、D26R和G68R替换)，另一组在10E8的不接近细胞膜的区域中(对VH的D72R、E1R D28W和P52bR替换)。可将这组替换引入10E8v4 V5R S100cF抗体的序列中以生成如下的另外的10E8变体：
具有对VH的D72R、E1R D28W和P52bR替换的10E8v4 V5R S100cF；
具有对VL的D7W、D26R和G68R替换的10E8v4 V5R S100cF；
具有对VH的D72R、E1R D28W和P52bR替换和对VL的D7W、D26R和G68R替换的10E8v4V5R S100cF；
接着生成包括在各个突变筛选中鉴定的突变组合的10E8v4 V5R S100cF，并测定HIV-1中和性。在鉴定的目标组合中(见下表)，表达了几个并采用上文描述的假病毒中和测定进行测试。这其中，鉴定了几个抗体相对于亲本10E8v4 V5R S100cF抗体改善了HIV-1中和性(见图23A至23F)。
表10.10E8变体。
所列出的几个变体相对于亲本10E8v4V5R S100cF抗体具有改善的中和曲线，包括10E8-1081，其与10e8v4 V5R 100cF(10E8-1022)相比具有大约两倍的更好效力；10E8-1073，其以小于25μg/ml的IC50值中和病毒组中的所有病毒。
实施例6
抗体表征
用10E8v4、10E8v4 S100cW、10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF抗体进行测定，以确定这些抗体的每个用于临床生产的适当性。通过在CHO细胞中瞬时表达产生10E8变体，采用标准技术纯化，并进行一组涉及纯化的抗体的物理特征的测定。表达的抗体包括IgG1背景下的10E8v4、10E8v4 S100cW、10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF VH和VL区，该IgG1在恒定区包括“LS”替换以增加血清半衰期。这些测定的结果列在表11中。测定包括：
1.大小排阻层析(SEC)以确定所纯化的10E8变体的聚集和多聚化水平。10E8变体的每个主要在脱离大小排阻柱的一个峰中。
2.5次冷冻解冻循环后的大小排阻层析(SEC)，以确定冷冻应力是否将诱导抗体聚集。该冷冻解冻循环不显著改变10E8变体从大小排阻柱的洗脱曲线。
3.在最初的纯化后评价抗体溶液的外观。所有的抗体溶液都是清澈、无色的，并且没有可见的微粒。
4.抗体浓度(UV-VIS)：通过280nm处吸光度(A)(蛋白的特征)和350nm处溶液中亚可见(sub-visible)/可见颗粒导致的光散射(OD)确定在最初纯化后的溶液中抗体的浓度。低OD350nm(<0.05OD)表明起始材料中最少的大颗粒。
5.通过差示扫描量热法(DSC)测量的热转变(Thermal Transition)：这些测量确定10E8变体的结构转变温度落在正常范围内。
6.圆二色性(CD)：进行CD测定以确定10E8变体的二级结构是否落在正常范围内。如表中所显示的，该CD测定鉴定CD信号最小值在约218nm和230nm。总体上该CD结果表明，这些10E8变体一定程度上具有抗体的典型二级结构。对每个变体获得了类似的CD测量值。
7.动态光散射(DLS)：DLS用于评价溶液中变体抗体的群体大小的异质性。该DLS测定显示，这些10E8变体的每个展示出几乎无群体大小的异质性，表明这些10E8变体在溶液中为单分散的。为每个变体鉴定的水力半径落在正常范围内。
8.将DLS热斜坡(DLS thermal ramping，DLS-Melt)用于评价10E8变体的胶体和结构热转变。对于10E8变体的每个，聚集的开始(Tonset)在正常范围内。
9.将等温化学变性用于评价作为pH的函数的10E8变体的固有稳定性。10E8变体的每个具有正常范围内的pH敏感性。
表11.10E8变体的物理性质。
鉴于上文，发现10E8v4、10E8v4 S100cW、10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF抗体具有基本上类似的物理特征，它们落入采用大规模生产技术已生产的抗体的正常范围内。
但是，抗体溶解性和浓缩抗体变体的能力的更多分析揭示，10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF抗体在一些方面优于10E8v4 S100cW。具体地，浓缩10E8v4 S100cW时遇到困难，当试图达到浓度20mg/ml时具有来自溶液的大量抗体沉淀。其它三种抗体(10E8v4、10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF)达到20mg/ml则没有困难。
例如，用于生成10E8v4变体的标准抗体表达和纯化方案包括在Expi293F细胞中瞬时表达重链和轻链，采用蛋白A纯化柱纯化来自细胞培养基的分泌抗体，用洗脱缓冲液(pH2.8)从柱洗脱抗体，通过透析将缓冲液换成PBS(pH 7.4)，以及浓缩抗体溶液。对于10E8v4、10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF抗体，产量落入正常范围，纯化的浓缩的抗体相对于从柱洗脱的对应抗体为约70-80％。但是，10E8v4 S100cW抗体的产量为纯化的浓缩的抗体相对于从柱洗脱的10E8v4 S100cW的量的仅约60％。10E8v4 S100cW抗体的损失主要是由于在浓缩步骤期间从溶液沉淀。相比之下，对于10E8v4 S100cF和10E8v4 V5R S100cF抗体，在浓缩步骤期间从溶液有最少的抗体损失。
另外，当浓缩步骤采用Amicon Stirred Cell Ultrafiltration(氮气压力)在10mM柠檬酸盐-磷酸盐，150mM NaCl pH 6.0(10E8v4 S100cW)或10mM柠檬酸盐-磷酸盐，150mM NaCl pH 6.5(10E8v4 S100cF和10E8 V5R S100cF))中进行时，对于10E8v4 V5R100cF和10E8v4-100cF在浓度步骤期间观察到大约5-10％的蛋白损失，而对于10E8v4-100cW变体观察到大约40％蛋白损失。从这些浓缩步骤获得的最终抗体浓度也在测试的变体之间有相当大的差异。对于10E8v4 S100cF和10E8v4S100cW抗体，获得了最终浓度23-25mg/mL。相比之下，对于10E8v4 V5R S100cF抗体，获得了最终浓度约40mg/mL。
为了进一步研究存在于10E8抗体的kabat位置100c处的残基对溶解性的效果，将具有S100cF、S100cH、S100cL、S100cR、S100cW、S100cY的10E8v4抗体如上文描述表达和纯化，并基于浓缩能力测定溶解性(图24)。采用洗脱缓冲液(pH 7.4)从纯化柱洗脱抗体，透析进PBS(pH 7.4)，并采用30,000MWCO浓缩器(Amicon Ultra-15filter MWCO 30,000)将3ml(0.35OD)的每种变体在4000rpm浓缩30分钟，一式三份。如图24所示，10E8v4 S100cW变体是最难浓缩的，并在浓缩后具有最大的最终溶液体积(和最小的抗体浓度)，如通过OD280测量评估的。
实施例7
优化的10E8抗体
本实施例描述10E8v4抗体的kabat位置S100c突变为几种不同氨基酸，以评价本残基对10E8v4抗体HIV-1中和性的相对效果。按实施例5所讨论的表达和纯化了具有S100cF、S100cH、S100cL、S100cR、S100cW或S100cY替换的10E8v4抗体，并采用假病毒测定测定了HIV-1中和性。如表12中所显示的，具有s100cF和S100cW替换的10E8v4变体在平均中和效力方面显示出超过10E8v4的最大改善(相对于10E8v4，平均IC50值低～20和～40倍)。结合上文讨论的发现，这些结果显示，包括S100cF替换的10E8v4变体抗体相对于测试的很多10E8变体具有最佳的HIV-1中和性、溶解性，以及自体反应性性质的组合。
表12.10E8v4变体的HIV-1中和性
应理解，所描述的方法或组合物的精确细节可以被改动或修饰，而不脱离所描述实施方案的精神。我们主张所有这样的修饰和改动都落入所附权利要求的范围和精神内。
序列表
<110> 美国政府（由卫生和人类服务部的部长所代表）
纽约市哥伦比亚大学理事会
<120> HIV-1 GP41中和抗体及其用途
<130> 4239-94645-02
<150> US 62/250360
<151> 2015-11-03
<160> 86
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Leu Asn Ser Ile Asn Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Met Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 2
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 2
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Glu Thr Gly Val Ser Val Ala Leu Gly Arg
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 3
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 3
Glu Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Tyr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 4
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 4
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Asp Thr Gly Val Ser Val Ala Leu Gly Arg
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 5
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 5
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 6
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 6
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 7
Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala Trp
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 8
Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val
1 5 10
<210> 9
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 9
Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Phe Gln Asp
20
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 10
Ser Leu Arg Ser His Tyr
1 5
<210> 11
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 11
Gly Lys Asn
1
<210> 12
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 12
Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg Leu Ser Val
1 5 10
<210> 13
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 13
Glu Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Leu Asn Tyr Ile Asn Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Met Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 14
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 14
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asp Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Ser Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Leu Asn Ser Ile Asn Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys His Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 15
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 15
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asp Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Ser Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys His Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 16
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 16
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Met Asn Ser Ile Asn Phe
65 70 75 80
Phe Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Lys Ile Glu Asp Thr Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys His Tyr Ala Phe Trp Gly Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Leu Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 17
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 17
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Tyr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Phe Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys His Tyr Ala Phe Trp Gly Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Leu Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 18
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 18
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Val
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ala Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Asp Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 19
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 19
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Asn Tyr Tyr Thr
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Pro Lys His Asn Arg Pro Pro Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Ala Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Thr Glu
65 70 75 80
Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Val Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Thr Val Val
100 105
<210> 20
<211> 1443
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 20
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggtgt acattctgaa 60
gtgcggctgg ctgagagcgg cggggggctg gtcaaacctg gcgggtcact gcggctgtcc 120
tgttctgcct ccggcttcga ttttgataac gcatggatga catgggtgcg acagccacct 180
ggaaaggggc tggagtgggt cggcagaatc actggacctg gcgaagggtg gtctgtggac 240
tacgcagctc cagtcgaggg acgattcacc attagtagag ataactacaa gaatacactg 300
tatctggaga tgaacaatct gaggactgaa gacagcggcc tgtatttctg cgcccgcacc 360
gggaaatact atgatttttg gtctgggtac ccacccggag aggaatattt tcaggactgg 420
ggacggggca ccctggtgat cgtcagctcc gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc 480
ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag 540
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg 600
cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc 660
gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc 720
aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca 780
ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 840
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 900
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 960
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1020
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1080
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1140
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1200
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1260
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1320
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1380
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1440
tga 1443
<210> 21
<211> 1440
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 21
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggtgt acattctgag 60
gttagactgg tggagtcagg aggggggctt gtgaagcccg gtgggtctct ccgcctgagc 120
tgttctgcct ccggctttga tttcgataac gcctggatga cctgggtcag gcagcctcca 180
ggtaagggac tggagtgggt gggaagaatc acaggtccag gcgagggctg gtccgtggac 240
tacgcggaat ctgttaaagg gcggtttaca atctcaaggg acaataccaa gaataccttg 300
tatttggaga tgaacaacgt gagaactgaa gacaccggat attacttctg tgccagaaca 360
ggcaaatact acgacttctg gtccggctat ccccctggcg aggaatattt tcaagactgg 420
ggtcagggaa cccttgttat cgtgtcctcc gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc 480
ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag 540
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg 600
cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc 660
gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc 720
aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca 780
ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 840
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 900
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 960
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1020
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1080
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1140
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1200
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1260
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1320
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1380
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1440
<210> 22
<211> 461
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 22
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 23
<211> 461
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 23
Glu Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Tyr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 24
<211> 648
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 24
Thr Cys Ala Thr Ala Cys Gly Ala Ala Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys
1 5 10 15
Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Thr Gly Gly Cys Gly Thr Cys Thr Cys
20 25 30
Thr Gly Thr Gly Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly
35 40 45
Ala Cys Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Thr
50 55 60
Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Cys Gly Ala Cys Thr Cys Ala Cys Thr
65 70 75 80
Gly Cys Gly Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Gly Cys Thr
85 90 95
Thr Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala
100 105 110
Ala Ala Cys Cys Cys Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Cys Cys
115 120 125
Thr Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Thr Thr Cys Thr Ala Cys
130 135 140
Gly Gly Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Thr Ala Gly Gly Cys
145 150 155 160
Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr Cys Cys Cys Cys Gly Ala
165 170 175
Cys Cys Gly Cys Thr Thr Thr Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr
180 185 190
Gly Cys Ala Thr Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Cys Cys Gly Ala Gly
195 200 205
Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Cys
210 215 220
Cys Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly
225 230 235 240
Gly Ala Cys Gly Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Ala Cys Thr
245 250 255
Ala Thr Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala
260 265 270
Thr Ala Ala Gly Ala Gly Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala
275 280 285
Cys Thr Gly Ala Gly Cys Gly Thr Gly Thr Thr Cys Gly Gly Ala Gly
290 295 300
Gly Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Cys
305 310 315 320
Cys Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Cys
325 330 335
Ala Ala Gly Gly Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Thr Cys Gly Gly
340 345 350
Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys
355 360 365
Cys Thr Cys Gly Ala Gly Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Thr Thr
370 375 380
Cys Ala Ala Gly Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Ala
385 390 395 400
Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Cys Ala Thr
405 410 415
Ala Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys Gly
420 425 430
Gly Gly Ala Gly Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly
435 440 445
Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Ala Gly
450 455 460
Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly Cys Gly
465 470 475 480
Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala
485 490 495
Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly
500 505 510
Cys Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Ala Gly Thr Ala Cys Gly Cys Gly
515 520 525
Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Ala
530 535 540
Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala
545 550 555 560
Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Cys Cys Cys Ala Cys Ala Gly Ala
565 570 575
Ala Gly Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Gly
580 585 590
Thr Cys Ala Cys Gly Cys Ala Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Ala Gly
595 600 605
Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly Ala Cys Ala
610 615 620
Gly Thr Gly Gly Cys Cys Cys Cys Thr Ala Cys Ala Gly Ala Ala Thr
625 630 635 640
Gly Thr Thr Cys Ala Thr Ala Gly
645
<210> 25
<211> 678
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 25
Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ala Thr Gly Gly Thr
1 5 10 15
Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys Thr Thr Thr Thr
20 25 30
Thr Cys Thr Ala Gly Thr Ala Gly Cys Ala Ala Cys Thr Gly Cys Ala
35 40 45
Ala Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly Ala Cys Cys Gly
50 55 60
Cys Ala Thr Cys Cys Gly Ala Ala Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala
65 70 75 80
Gly Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys Thr
85 90 95
Gly Thr Gly Gly Cys Ala Cys Thr Gly Ala Ala Gly Cys Ala Gly Ala
100 105 110
Cys Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Thr Gly
115 120 125
Cys Cys Gly Ala Gly Gly Cys Gly Ala Cys Thr Cys Ala Cys Thr Gly
130 135 140
Cys Gly Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Gly Cys Thr Thr
145 150 155 160
Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala
165 170 175
Ala Cys Cys Cys Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Cys Cys Thr
180 185 190
Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Thr Thr Cys Thr Ala Cys Gly
195 200 205
Gly Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Thr Ala Gly Gly Cys Cys
210 215 220
Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr Cys Cys Cys Cys Gly Ala Cys
225 230 235 240
Cys Gly Cys Thr Thr Thr Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly
245 250 255
Cys Ala Thr Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Cys Cys Gly Ala Gly Cys
260 265 270
Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Cys Cys
275 280 285
Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly
290 295 300
Ala Cys Gly Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Ala Cys Thr Ala
305 310 315 320
Thr Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala Thr
325 330 335
Ala Ala Gly Ala Gly Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Cys
340 345 350
Thr Gly Ala Gly Cys Gly Thr Gly Thr Thr Cys Gly Gly Ala Gly Gly
355 360 365
Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Cys Cys
370 375 380
Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Cys Ala
385 390 395 400
Ala Gly Gly Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr
405 410 415
Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Cys
420 425 430
Thr Cys Gly Ala Gly Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Thr Thr Cys
435 440 445
Ala Ala Gly Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Ala Cys
450 455 460
Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Cys Ala Thr Ala
465 470 475 480
Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys Gly Gly
485 490 495
Gly Ala Gly Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Cys
500 505 510
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Ala Gly Cys
515 520 525
Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly Cys Gly Gly
530 535 540
Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys
545 550 555 560
Ala Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys
565 570 575
Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Ala Gly Thr Ala Cys Gly Cys Gly Gly
580 585 590
Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Ala Gly
595 600 605
Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Cys Thr Gly Ala Asn Cys Ala Gly
610 615 620
Thr Gly Gly Ala Ala Asn Gly Thr Cys Cys Cys Ala Cys Ala Gly Ala
625 630 635 640
Ala Gly Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Gly
645 650 655
Thr Cys Ala Cys Gly Cys Ala Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Ala Gly
660 665 670
Cys Ala Cys Cys Gly Thr
675
<210> 26
<211> 856
<212> PRT
<213> Human immunodeficiency virus type 1
<220>
<221> VARIANT
<400> 26
Met Arg Val Lys Glu Lys Tyr Gln His Leu Trp Arg Trp Gly Trp Arg
1 5 10 15
Trp Gly Thr Met Leu Leu Gly Met Leu Met Ile Cys Ser Ala Thr Glu
20 25 30
Lys Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala
35 40 45
Thr Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp Thr Glu
50 55 60
Val His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn
65 70 75 80
Pro Gln Glu Val Val Leu Val Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp
85 90 95
Lys Asn Asp Met Val Glu Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp
100 105 110
Asp Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Ser
115 120 125
Leu Lys Cys Thr Asp Leu Lys Asn Asp Thr Asn Thr Asn Ser Ser Ser
130 135 140
Gly Arg Met Ile Met Glu Lys Gly Glu Ile Lys Asn Cys Ser Phe Asn
145 150 155 160
Ile Ser Thr Ser Ile Arg Gly Lys Val Gln Lys Glu Tyr Ala Phe Phe
165 170 175
Tyr Lys Leu Asp Ile Ile Pro Ile Asp Asn Asp Thr Thr Ser Tyr Lys
180 185 190
Leu Thr Ser Cys Asn Thr Ser Val Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val
195 200 205
Ser Phe Glu Pro Ile Pro Ile His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Phe Ala
210 215 220
Ile Leu Lys Cys Asn Asn Lys Thr Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Thr
225 230 235 240
Asn Val Ser Thr Val Gln Cys Thr His Gly Ile Arg Pro Val Val Ser
245 250 255
Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly Ser Leu Ala Glu Glu Glu Val Val Ile
260 265 270
Arg Ser Val Asn Phe Thr Asp Asn Ala Lys Thr Ile Ile Val Gln Leu
275 280 285
Asn Thr Ser Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg
290 295 300
Lys Arg Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile
305 310 315 320
Gly Lys Ile Gly Asn Met Arg Gln Ala His Cys Asn Ile Ser Arg Ala
325 330 335
Lys Trp Asn Asn Thr Leu Lys Gln Ile Ala Ser Lys Leu Arg Glu Gln
340 345 350
Phe Gly Asn Asn Lys Thr Ile Ile Phe Lys Gln Ser Ser Gly Gly Asp
355 360 365
Pro Glu Ile Val Thr His Ser Phe Asn Cys Gly Gly Glu Phe Phe Tyr
370 375 380
Cys Asn Ser Thr Gln Leu Phe Asn Ser Thr Trp Phe Asn Ser Thr Trp
385 390 395 400
Ser Thr Glu Gly Ser Asn Asn Thr Glu Gly Ser Asp Thr Ile Thr Leu
405 410 415
Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln Lys Val Gly Lys
420 425 430
Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Ser Gly Gln Ile Arg Cys Ser Ser Asn
435 440 445
Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly Asn Ser Asn Asn Glu
450 455 460
Ser Glu Ile Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met Arg Asp Asn Trp Arg
465 470 475 480
Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys Ile Glu Pro Leu Gly Val
485 490 495
Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Arg Ala
500 505 510
Val Gly Ile Gly Ala Leu Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser
515 520 525
Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr Leu Thr Val Gln Ala Arg Gln Leu
530 535 540
Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Asn Asn Leu Leu Arg Ala Ile Glu
545 550 555 560
Ala Gln Gln His Leu Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu
565 570 575
Gln Ala Arg Ile Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu
580 585 590
Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile Cys Thr Thr Ala Val
595 600 605
Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lys Ser Leu Glu Gln Ile Trp Asn
610 615 620
His Thr Thr Trp Met Glu Trp Asp Arg Glu Ile Asn Asn Tyr Thr Ser
625 630 635 640
Leu Ile His Ser Leu Ile Glu Glu Ser Gln Asn Gln Gln Glu Lys Asn
645 650 655
Glu Gln Glu Leu Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser Leu Trp Asn Trp
660 665 670
Phe Asn Ile Thr Asn Trp Leu Trp Tyr Ile Lys Leu Phe Ile Met Ile
675 680 685
Val Gly Gly Leu Val Gly Leu Arg Ile Val Phe Ala Val Leu Ser Ile
690 695 700
Val Asn Arg Val Arg Gln Gly Tyr Ser Pro Leu Ser Phe Gln Thr His
705 710 715 720
Leu Pro Thr Pro Arg Gly Pro Asp Arg Pro Glu Gly Ile Glu Glu Glu
725 730 735
Gly Gly Glu Arg Asp Arg Asp Arg Ser Ile Arg Leu Val Asn Gly Ser
740 745 750
Leu Ala Leu Ile Trp Asp Asp Leu Arg Ser Leu Cys Leu Phe Ser Tyr
755 760 765
His Arg Leu Arg Asp Leu Leu Leu Ile Val Thr Arg Ile Val Glu Leu
770 775 780
Leu Gly Arg Arg Gly Trp Glu Ala Leu Lys Tyr Trp Trp Asn Leu Leu
785 790 795 800
Gln Tyr Trp Ser Gln Glu Leu Lys Asn Ser Ala Val Ser Leu Leu Asn
805 810 815
Ala Thr Ala Ile Ala Val Ala Glu Gly Thr Asp Arg Val Ile Glu Val
820 825 830
Val Gln Gly Ala Cys Arg Ala Ile Arg His Ile Pro Arg Arg Ile Arg
835 840 845
Gln Gly Leu Glu Arg Ile Leu Leu
850 855
<210> 27
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile Asp Cys
20 25 30
Thr Leu Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Lys Pro Arg Gly Gly Ala Val Asn Tyr Ala Arg Pro Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Val Tyr Ser Asp Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Lys Asn Cys Asp Tyr Asn Trp Asp Phe Glu His Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 103
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 28
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser Leu Ala
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Ser
35 40 45
Gly Ser Thr Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg
50 55 60
Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp
65 70 75 80
Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln Gly Thr
85 90 95
Lys Val Gln Val Asp Ile Lys
100
<210> 29
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 29
Gln Val Arg Leu Ser Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Asp
1 5 10 15
Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile Asn Cys
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Lys Pro Arg Gly Gly Ala Val Ser Tyr Ala Arg Gln Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Met Tyr Ser Glu Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Lys Tyr Cys Thr Ala Arg Asp Tyr Tyr Asn Trp Asp Phe
100 105 110
Glu His Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 30
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 30
Gln Val Arg Leu Ser Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Asp
1 5 10 15
Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile Asn Cys
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Lys Pro Arg His Gly Ala Val Ser Tyr Ala Arg Gln Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Met Tyr Ser Glu Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Lys Tyr Cys Thr Ala Arg Asp Tyr Tyr Asn Trp Asp Phe
100 105 110
Glu His Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 31
<211> 101
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 31
Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Thr
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser Leu Ala Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Ser Gly Ser
35 40 45
Thr Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp Gly
50 55 60
Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe Gly
65 70 75 80
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
85 90 95
Gln Val Asp Ile Lys
100
<210> 32
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 32
Gln Val Arg Leu Ser Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Asp
1 5 10 15
Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ile Asn Cys
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Lys Arg Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Lys Pro Arg His Gly Ala Val Ser Tyr Ala Arg Gln Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Met Tyr Ser Glu Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Tyr Cys Thr Ala Arg Asp Tyr Tyr Asn Trp Asp Phe
100 105 110
Glu His Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 33
<211> 101
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 33
Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Thr
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Tyr Gly Ser Leu Ala Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Ser Gly Ser
35 40 45
Thr Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp Gly
50 55 60
Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe Gly
65 70 75 80
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
85 90 95
Gln Val Asp Ile Lys
100
<210> 34
<211> 28
<212> PRT
<213> Human immunodeficiency virus type 1
<220>
<221> VARIANT
<400> 34
Asn Glu Gln Glu Leu Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser Leu Trp Asn
1 5 10 15
Trp Phe Asp Ile Thr Asn Trp Leu Trp Tyr Ile Arg
20 25
<210> 35
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 35
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Trp Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 36
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 36
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Cys Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 37
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 37
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Trp Gly Cys Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 38
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 38
Glu Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Tyr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Trp Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 39
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 39
Glu Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Tyr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Cys Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 40
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 40
Glu Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Tyr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Ser Gly Leu Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Trp Gly Cys Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 41
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 41
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Cys His Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 42
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 42
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Trp Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 43
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 43
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Phe Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 44
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 44
gaagtgcggc tggctgagag cggcgggggg ctggtcaaac ctggcgggtc actgcggctg 60
tcctgttctg cctccggctt cgattttgat aacgcatgga tgacatgggt gcgacagcca 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtcggcaga atcactggac ctggcgaagg gtggtctgtg 180
gactacgcag ctccagtcga gggacgattc accattagta gagataacta caagaataca 240
ctgtatctgg agatgaacaa tctgaggact gaagacagcg gcctgtattt ctgcgcccgc 300
accgggaaat actatgattt ttggtctggg tacccacccg gagaggaata ttttcaggac 360
tggggacggg gcaccctggt gatcgtcagc tcc 393
<210> 45
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 45
gaggttagac tggtggagtc aggagggggg cttgtgaagc ccggtgggtc tctccgcctg 60
agctgttctg cctccggctt tgatttcgat aacgcctgga tgacctgggt caggcagcct 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtgggaaga atcacaggtc caggcgaggg ctggtccgtg 180
gactacgcgg aatctgttaa agggcggttt acaatctcaa gggacaatac caagaatacc 240
ttgtatttgg agatgaacaa cgtgagaact gaagacaccg gatattactt ctgtgccaga 300
acaggcaaat actacgactt ctggtccggc tatccccctg gcgaggaata ttttcaagac 360
tggggtcagg gaacccttgt tatcgtgtcc tcc 393
<210> 46
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 46
tcatacgaac tgactcagga cactggcgtc tctgtggcac tggggaggac tgtgactatt 60
acttgccgag gcgactcact gcggagccac tacgcttcct ggtatcagaa gaaacccggc 120
caggcacctg tgctgctgtt ctacggaaag aacaataggc catctggcat ccccgaccgc 180
ttttctggca gtgcatcagg gaaccgagcc agtctgacca ttaccggcgc ccaggctgag 240
gacgaagccg attactattg cagctcccgg gataagagcg gctccagact gagcgtgttc 300
ggaggaggaa ctaaactgac cgtcctc 327
<210> 47
<211> 390
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 47
accaccatgg gatggtcatg tatcatcctt tttctagtag caactgcaac cggttctgtg 60
accgcatccg aactgactca ggaccctgcc gtctctgtgg cactgaagca gactgtgact 120
attacttgcc gaggcgactc actgcggagc cactacgctt cctggtatca gaagaaaccc 180
ggccaggcac ctgtgctgct gttctacgga aagaacaata ggccatctgg catccccgac 240
cgcttttctg gcagtgcatc agggaaccga gccagtctga ccattaccgg cgcccaggct 300
gaggacgaag ccgattacta ttgcagctcc cgggataaga gcggctccag actgagcgtg 360
ttcggaggag gaactaaact gaccgtcctc 390
<210> 48
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 48
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gtgtacattc 1440
tgaagtgcgg ctggctgaga gcggcggggg gctggtcaaa cctggcgggt cactgcggct 1500
gtcctgttct gcctccggct tcgattttga taacgcatgg atgacatggg tgcgacagcc 1560
acctggaaag gggctggagt gggtcggcag aatcactgga cctggcgaag ggtggtctgt 1620
ggactacgca gctccagtcg agggacgatt caccattagt agagataact acaagaatac 1680
actgtatctg gagatgaaca atctgaggac tgaagacagc ggcctgtatt tctgcgcccg 1740
caccgggaaa tactatgatt tttggtctgg gtacccaccc ggagaggaat attttcagga 1800
ctggggacgg ggcaccctgg tgatcgtcag ctccgcgtcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 49
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 49
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gtgtacattc 1440
tgaggttaga ctggtggagt caggaggggg gcttgtgaag cccggtgggt ctctccgcct 1500
gagctgttct gcctccggct ttgatttcga taacgcctgg atgacctggg tcaggcagcc 1560
tccaggtaag ggactggagt gggtgggaag aatcacaggt ccaggcgagg gctggtccgt 1620
ggactacgcg gaatctgtta aagggcggtt tacaatctca agggacaata ccaagaatac 1680
cttgtatttg gagatgaaca acgtgagaac tgaagacacc ggatattact tctgtgccag 1740
aacaggcaaa tactacgact tctggtccgg ctatccccct ggcgaggaat attttcaaga 1800
ctggggtcag ggaacccttg ttatcgtgtc ctccgcgtcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 50
<211> 5119
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 50
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gttctgtgac 1440
ctcatacgaa ctgactcagg acactggcgt ctctgtggca ctggggagga ctgtgactat 1500
tacttgccga ggcgactcac tgcggagcca ctacgcttcc tggtatcaga agaaacccgg 1560
ccaggcacct gtgctgctgt tctacggaaa gaacaatagg ccatctggca tccccgaccg 1620
cttttctggc agtgcatcag ggaaccgagc cagtctgacc attaccggcg cccaggctga 1680
ggacgaagcc gattactatt gcagctcccg ggataagagc ggctccagac tgagcgtgtt 1740
cggaggagga actaaactga ccgtcctcag tcagcccaag gctgccccct cggtcactct 1800
gttcccgccc tcgagtgagg agcttcaagc caacaaggcc acactggtgt gtctcataag 1860
tgacttctac ccgggagccg tgacagtggc ctggaaggca gatagcagcc ccgtcaaggc 1920
gggagtggag accaccacac cctccaaaca aagcaacaac aagtacgcgg ccagcagcta 1980
cctgagcctg acgcctgagc agtggaagtc ccacagaagc tacagctgcc aggtcacgca 2040
tgaagggagc accgtggaga agacagtggc ccctacagaa tgttcataga agctgatcca 2100
gatctgctgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct 2160
tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc 2220
attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg 2280
aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg ggtacccagg 2340
tgctgaagaa ttgacccggt tcctcctggg ccagaaagaa gcaggcacat ccccttctct 2400
gtgacacacc ctgtccacgc ccctggttct tagttccagc cccactcata ggacactcat 2460
agctcaggag ggctccgcct tcaatcccac ccgctaaagt acttggagcg gtctctccct 2520
ccctcatcag cccaccaaac caaacctagc ctccaagagt gggaagaaat taaagcaaga 2580
taggctatta agtgcagagg gagagaaaat gcctccaaca tgtgaggaag taatgagaga 2640
aatcatagaa ttttaaggcc atgatttaag gccatcatgg ccttaatctt ccgcttcctc 2700
gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa 2760
ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa 2820
aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct 2880
ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac 2940
aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc 3000
gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc 3060
tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg 3120
tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga 3180
gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag 3240
cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta 3300
cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag 3360
agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg 3420
caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac 3480
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 3540
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag 3600
tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc 3660
agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc gggggggggg ggcgctgagg 3720
tctgcctcgt gaagaaggtg ttgctgactc ataccaggcc tgaatcgccc catcatccag 3780
ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag agctttgttg taggtggacc agttggtgat 3840
tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcg tgatctgatc 3900
cttcaactca gcaaaagttc gatttattca acaaagccgc cgtcccgtca agtcagcgta 3960
atgctctgcc agtgttacaa ccaattaacc aattctgatt agaaaaactc atcgagcatc 4020
aaatgaaact gcaatttatt catatcagga ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt 4080
ttctgtaatg aaggagaaaa ctcaccgagg cagttccata ggatggcaag atcctggtat 4140
cggtctgcga ttccgactcg tccaacatca atacaaccta ttaatttccc ctcgtcaaaa 4200
ataaggttat caagtgagaa atcaccatga gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa 4260
agcttatgca tttctttcca gacttgttca acaggccagc cattacgctc gtcatcaaaa 4320
tcactcgcat caaccaaacc gttattcatt cgtgattgcg cctgagcgag acgaaatacg 4380
cgatcgctgt taaaaggaca attacaaaca ggaatcgaat gcaaccggcg caggaacact 4440
gccagcgcat caacaatatt ttcacctgaa tcaggatatt cttctaatac ctggaatgct 4500
gttttcccgg ggatcgcagt ggtgagtaac catgcatcat caggagtacg gataaaatgc 4560
ttgatggtcg gaagaggcat aaattccgtc agccagttta gtctgaccat ctcatctgta 4620
acatcattgg caacgctacc tttgccatgt ttcagaaaca actctggcgc atcgggcttc 4680
ccatacaatc gatagattgt cgcacctgat tgcccgacat tatcgcgagc ccatttatac 4740
ccatataaat cagcatccat gttggaattt aatcgcggcc tcgagcaaga cgtttcccgt 4800
tgaatatggc tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt 4860
catgatgata tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacaacgtgg 4920
ctttcccccc ccccccatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 4980
atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa 5040
gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt 5100
atcacgaggc cctttcgtc 5119
<210> 51
<211> 5119
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 51
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gttctgtgac 1440
cgcatccgaa ctgactcagg accctgccgt ctctgtggca ctgaagcaga ctgtgactat 1500
tacttgccga ggcgactcac tgcggagcca ctacgcttcc tggtatcaga agaaacccgg 1560
ccaggcacct gtgctgctgt tctacggaaa gaacaatagg ccatctggca tccccgaccg 1620
cttttctggc agtgcatcag ggaaccgagc cagtctgacc attaccggcg cccaggctga 1680
ggacgaagcc gattactatt gcagctcccg ggataagagc ggctccagac tgagcgtgtt 1740
cggaggagga actaaactga ccgtcctcag tcagcccaag gctgccccct cggtcactct 1800
gttcccgccc tcgagtgagg agcttcaagc caacaaggcc acactggtgt gtctcataag 1860
tgacttctac ccgggagccg tgacagtggc ctggaaggca gatagcagcc ccgtcaaggc 1920
gggagtggag accaccacac cctccaaaca aagcaacaac aagtacgcgg ccagcagcta 1980
cctgagcctg acgcctgagc agtggaagtc ccacagaagc tacagctgcc aggtcacgca 2040
tgaagggagc accgtggaga agacagtggc ccctacagaa tgttcataga agctgatcca 2100
gatctgctgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct 2160
tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc 2220
attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg 2280
aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg ggtacccagg 2340
tgctgaagaa ttgacccggt tcctcctggg ccagaaagaa gcaggcacat ccccttctct 2400
gtgacacacc ctgtccacgc ccctggttct tagttccagc cccactcata ggacactcat 2460
agctcaggag ggctccgcct tcaatcccac ccgctaaagt acttggagcg gtctctccct 2520
ccctcatcag cccaccaaac caaacctagc ctccaagagt gggaagaaat taaagcaaga 2580
taggctatta agtgcagagg gagagaaaat gcctccaaca tgtgaggaag taatgagaga 2640
aatcatagaa ttttaaggcc atgatttaag gccatcatgg ccttaatctt ccgcttcctc 2700
gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa 2760
ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa 2820
aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct 2880
ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac 2940
aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc 3000
gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc 3060
tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg 3120
tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga 3180
gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag 3240
cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta 3300
cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag 3360
agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg 3420
caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac 3480
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 3540
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag 3600
tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc 3660
agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc gggggggggg ggcgctgagg 3720
tctgcctcgt gaagaaggtg ttgctgactc ataccaggcc tgaatcgccc catcatccag 3780
ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag agctttgttg taggtggacc agttggtgat 3840
tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcg tgatctgatc 3900
cttcaactca gcaaaagttc gatttattca acaaagccgc cgtcccgtca agtcagcgta 3960
atgctctgcc agtgttacaa ccaattaacc aattctgatt agaaaaactc atcgagcatc 4020
aaatgaaact gcaatttatt catatcagga ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt 4080
ttctgtaatg aaggagaaaa ctcaccgagg cagttccata ggatggcaag atcctggtat 4140
cggtctgcga ttccgactcg tccaacatca atacaaccta ttaatttccc ctcgtcaaaa 4200
ataaggttat caagtgagaa atcaccatga gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa 4260
agcttatgca tttctttcca gacttgttca acaggccagc cattacgctc gtcatcaaaa 4320
tcactcgcat caaccaaacc gttattcatt cgtgattgcg cctgagcgag acgaaatacg 4380
cgatcgctgt taaaaggaca attacaaaca ggaatcgaat gcaaccggcg caggaacact 4440
gccagcgcat caacaatatt ttcacctgaa tcaggatatt cttctaatac ctggaatgct 4500
gttttcccgg ggatcgcagt ggtgagtaac catgcatcat caggagtacg gataaaatgc 4560
ttgatggtcg gaagaggcat aaattccgtc agccagttta gtctgaccat ctcatctgta 4620
acatcattgg caacgctacc tttgccatgt ttcagaaaca actctggcgc atcgggcttc 4680
ccatacaatc gatagattgt cgcacctgat tgcccgacat tatcgcgagc ccatttatac 4740
ccatataaat cagcatccat gttggaattt aatcgcggcc tcgagcaaga cgtttcccgt 4800
tgaatatggc tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt 4860
catgatgata tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacaacgtgg 4920
ctttcccccc ccccccatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 4980
atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa 5040
gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt 5100
atcacgaggc cctttcgtc 5119
<210> 52
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 52
Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Trp Gly Tyr Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Phe Gln Asp
20
<210> 53
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 53
Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Cys Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Phe Gln Asp
20
<210> 54
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 54
Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Trp Gly Cys Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Phe Gln Asp
20
<210> 55
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 55
Ser Leu Arg Cys His Tyr
1 5
<210> 56
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 56
Ser Leu Arg Ser His Trp
1 5
<210> 57
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 57
Ser Leu Arg Ser His Phe
1 5
<210> 58
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 58
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Cys His Trp Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 59
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 59
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Cys His Phe Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 60
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 60
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gtgtacattc 1440
tgaggttaga ctggtggagt caggaggggg gcttgtgaag cccggtgggt ctctccgcct 1500
gagctgttct gcctccggct ttgatttcga taacgcctgg atgacctggg tcaggcagcc 1560
tccaggtaag ggactggagt gggtgggaag aatcacaggt ccaggcgagg gctggtccgt 1620
ggactacgcg gaatctgtta aagggcggtt tacaatctca agggacaata ccaagaatac 1680
cttgtatttg gagatgaaca acgtgagaac tgaagacacc ggatattact tctgtgccag 1740
aacaggcaaa tactacgact tctggtccgg ctgcccccct ggcgaggaat attttcaaga 1800
ctggggtcag ggaacccttg ttatcgtgtc ctccgcgtcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 61
<211> 5119
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 61
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gttctgtgac 1440
cgcatccgaa ctgactcagg accctgccgt ctctgtggca ctgaagcaga ctgtgactat 1500
tacttgccga ggcgactcac tgcggtgcca ctacgcttcc tggtatcaga agaaacccgg 1560
ccaggcacct gtgctgctgt tctacggaaa gaacaatagg ccatctggca tccccgaccg 1620
cttttctggc agtgcatcag ggaaccgagc cagtctgacc attaccggcg cccaggctga 1680
ggacgaagcc gattactatt gcagctcccg ggataagagc ggctccagac tgagcgtgtt 1740
cggaggagga actaaactga ccgtcctcag tcagcccaag gctgccccct cggtcactct 1800
gttcccgccc tcgagtgagg agcttcaagc caacaaggcc acactggtgt gtctcataag 1860
tgacttctac ccgggagccg tgacagtggc ctggaaggca gatagcagcc ccgtcaaggc 1920
gggagtggag accaccacac cctccaaaca aagcaacaac aagtacgcgg ccagcagcta 1980
cctgagcctg acgcctgagc agtggaagtc ccacagaagc tacagctgcc aggtcacgca 2040
tgaagggagc accgtggaga agacagtggc ccctacagaa tgttcataga agctgatcca 2100
gatctgctgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct 2160
tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc 2220
attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg 2280
aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg ggtacccagg 2340
tgctgaagaa ttgacccggt tcctcctggg ccagaaagaa gcaggcacat ccccttctct 2400
gtgacacacc ctgtccacgc ccctggttct tagttccagc cccactcata ggacactcat 2460
agctcaggag ggctccgcct tcaatcccac ccgctaaagt acttggagcg gtctctccct 2520
ccctcatcag cccaccaaac caaacctagc ctccaagagt gggaagaaat taaagcaaga 2580
taggctatta agtgcagagg gagagaaaat gcctccaaca tgtgaggaag taatgagaga 2640
aatcatagaa ttttaaggcc atgatttaag gccatcatgg ccttaatctt ccgcttcctc 2700
gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa 2760
ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa 2820
aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct 2880
ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac 2940
aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc 3000
gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc 3060
tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg 3120
tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga 3180
gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag 3240
cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta 3300
cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag 3360
agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg 3420
caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac 3480
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 3540
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag 3600
tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc 3660
agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc gggggggggg ggcgctgagg 3720
tctgcctcgt gaagaaggtg ttgctgactc ataccaggcc tgaatcgccc catcatccag 3780
ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag agctttgttg taggtggacc agttggtgat 3840
tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcg tgatctgatc 3900
cttcaactca gcaaaagttc gatttattca acaaagccgc cgtcccgtca agtcagcgta 3960
atgctctgcc agtgttacaa ccaattaacc aattctgatt agaaaaactc atcgagcatc 4020
aaatgaaact gcaatttatt catatcagga ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt 4080
ttctgtaatg aaggagaaaa ctcaccgagg cagttccata ggatggcaag atcctggtat 4140
cggtctgcga ttccgactcg tccaacatca atacaaccta ttaatttccc ctcgtcaaaa 4200
ataaggttat caagtgagaa atcaccatga gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa 4260
agcttatgca tttctttcca gacttgttca acaggccagc cattacgctc gtcatcaaaa 4320
tcactcgcat caaccaaacc gttattcatt cgtgattgcg cctgagcgag acgaaatacg 4380
cgatcgctgt taaaaggaca attacaaaca ggaatcgaat gcaaccggcg caggaacact 4440
gccagcgcat caacaatatt ttcacctgaa tcaggatatt cttctaatac ctggaatgct 4500
gttttcccgg ggatcgcagt ggtgagtaac catgcatcat caggagtacg gataaaatgc 4560
ttgatggtcg gaagaggcat aaattccgtc agccagttta gtctgaccat ctcatctgta 4620
acatcattgg caacgctacc tttgccatgt ttcagaaaca actctggcgc atcgggcttc 4680
ccatacaatc gatagattgt cgcacctgat tgcccgacat tatcgcgagc ccatttatac 4740
ccatataaat cagcatccat gttggaattt aatcgcggcc tcgagcaaga cgtttcccgt 4800
tgaatatggc tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt 4860
catgatgata tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacaacgtgg 4920
ctttcccccc ccccccatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 4980
atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa 5040
gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt 5100
atcacgaggc cctttcgtc 5119
<210> 62
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 62
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatgggc tggtcctgta ttatcctgtt cctggtcgca actgctactg gcgtccattc 1440
agaagtgagg ctggtcgaga gcggcggcgg cctggtgaag ccaggaggaa gcctgcgact 1500
gagctgctcc gcctctggct tcgactttga taacgcttgg atgacatggg tgcgacagcc 1560
ccctggaaaa ggcctggagt gggtcggaag aatcaccggc cccggagagg gatggagtgt 1620
ggactacgca gaatcagtca agggccggtt caccattagc cgggataaca ccaaaaatac 1680
actgtatctg gagatgaaca atgtcaggac tgaagacacc gggtactatt tctgtgcccg 1740
caccggaaag tactatgatt tttggtgggg ctacccaccc ggagaagaat actttcagga 1800
ctggggacag ggaacactgg tcatcgtcag cagcgcctcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 63
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 63
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gtgtacattc 1440
tgaggttaga ctggtggagt caggaggggg gcttgtgaag cccggtgggt ctctccgcct 1500
gagctgttct gcctccggct ttgatttcga taacgcctgg atgacctggg tcaggcagcc 1560
tccaggtaag ggactggagt gggtgggaag aatcacaggt ccaggcgagg gctggtccgt 1620
ggactacgcg gaatctgtta aagggcggtt tacaatctca agggacaata ccaagaatac 1680
cttgtatttg gagatgaaca acgtgagaac tgaagacacc ggatattact tctgtgccag 1740
aacaggcaaa tactacgact tctggtgggg ctgcccccct ggcgaggaat attttcaaga 1800
ctggggtcag ggaacccttg ttatcgtgtc ctccgcgtcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 64
<211> 450
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 64
atgggctggt cctgtattat cctgttcctg gtcgcaactg ctactggcgt ccattcagaa 60
gtgaggctgg tcgagagcgg cggcggcctg gtgaagccag gaggaagcct gcgactgagc 120
tgctccgcct ctggcttcga ctttgataac gcttggatga catgggtgcg acagccccct 180
ggaaaaggcc tggagtgggt cggaagaatc accggccccg gagagggatg gagtgtggac 240
tacgcagaat cagtcaaggg ccggttcacc attagccggg ataacaccaa aaatacactg 300
tatctggaga tgaacaatgt caggactgaa gacaccgggt actatttctg tgcccgcacc 360
ggaaagtact atgatttttg gtggggctac ccacccggag aagaatactt tcaggactgg 420
ggacagggaa cactggtcat cgtcagcagc 450
<210> 65
<211> 450
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 65
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggtgt acattctgag 60
gttagactgg tggagtcagg aggggggctt gtgaagcccg gtgggtctct ccgcctgagc 120
tgttctgcct ccggctttga tttcgataac gcctggatga cctgggtcag gcagcctcca 180
ggtaagggac tggagtgggt gggaagaatc acaggtccag gcgagggctg gtccgtggac 240
tacgcggaat ctgttaaagg gcggtttaca atctcaaggg acaataccaa gaataccttg 300
tatttggaga tgaacaacgt gagaactgaa gacaccggat attacttctg tgccagaaca 360
ggcaaatact acgacttctg gtccggctgc ccccctggcg aggaatattt tcaagactgg 420
ggtcagggaa cccttgttat cgtgtcctcc 450
<210> 66
<211> 450
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 66
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggtgt acattctgag 60
gttagactgg tggagtcagg aggggggctt gtgaagcccg gtgggtctct ccgcctgagc 120
tgttctgcct ccggctttga tttcgataac gcctggatga cctgggtcag gcagcctcca 180
ggtaagggac tggagtgggt gggaagaatc acaggtccag gcgagggctg gtccgtggac 240
tacgcggaat ctgttaaagg gcggtttaca atctcaaggg acaataccaa gaataccttg 300
tatttggaga tgaacaacgt gagaactgaa gacaccggat attacttctg tgccagaaca 360
ggcaaatact acgacttctg gtggggctgc ccccctggcg aggaatattt tcaagactgg 420
ggtcagggaa cccttgttat cgtgtcctcc 450
<210> 67
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 67
gaagtgcggc tggctgagag cggcgggggg ctggtcaaac ctggcgggtc actgcggctg 60
tcctgttctg cctccggctt cgattttgat aacgcatgga tgacatgggt gcgacagcca 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtcggcaga atcactggac ctggcgaagg gtggtctgtg 180
gactacgcag ctccagtcga gggacgattc accattagta gagataacta caagaataca 240
ctgtatctgg agatgaacaa tctgaggact gaagacagcg gcctgtattt ctgcgcccgc 300
accgggaaat actatgattt ttggtggggg tacccacccg gagaggaata ttttcaggac 360
tggggacggg gcaccctggt gatcgtcagc tcc 393
<210> 68
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 68
gaagtgcggc tggctgagag cggcgggggg ctggtcaaac ctggcgggtc actgcggctg 60
tcctgttctg cctccggctt cgattttgat aacgcatgga tgacatgggt gcgacagcca 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtcggcaga atcactggac ctggcgaagg gtggtctgtg 180
gactacgcag ctccagtcga gggacgattc accattagta gagataacta caagaataca 240
ctgtatctgg agatgaacaa tctgaggact gaagacagcg gcctgtattt ctgcgcccgc 300
accgggaaat actatgattt ttggtctggg tgcccacccg gagaggaata ttttcaggac 360
tggggacggg gcaccctggt gatcgtcagc tcc 393
<210> 69
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 69
gaagtgcggc tggctgagag cggcgggggg ctggtcaaac ctggcgggtc actgcggctg 60
tcctgttctg cctccggctt cgattttgat aacgcatgga tgacatgggt gcgacagcca 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtcggcaga atcactggac ctggcgaagg gtggtctgtg 180
gactacgcag ctccagtcga gggacgattc accattagta gagataacta caagaataca 240
ctgtatctgg agatgaacaa tctgaggact gaagacagcg gcctgtattt ctgcgcccgc 300
accgggaaat actatgattt ttggtggggg tgcccacccg gagaggaata ttttcaggac 360
tggggacggg gcaccctggt gatcgtcagc tcc 393
<210> 70
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 70
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggttc tgtgaccgca 60
tccgaactga ctcaggaccc tgccgtctct gtggcactga agcagactgt gactattact 120
tgccgaggcg actcactgcg gtgccactac gcttcctggt atcagaagaa acccggccag 180
gcacctgtgc tgctgttcta cggaaagaac aataggccat ctggcatccc cgaccgcttt 240
tctggcagtg catcagggaa ccgagccagt ctgaccatta ccggcgccca ggctgaggac 300
gaagccgatt actattgcag ctcccgggat aagagcggct ccagactgag cgtgttcgga 360
ggaggaacta aactgaccgt cctc 384
<210> 71
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 71
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggttc tgtgaccgca 60
tccgaactga ctcaggaccc tgccgtctct gtggcactga agcagactgt gactattact 120
tgccgaggcg actcactgcg gagccactgg gcttcctggt atcagaagaa acccggccag 180
gcacctgtgc tgctgttcta cggaaagaac aataggccat ctggcatccc cgaccgcttt 240
tctggcagtg catcagggaa ccgagccagt ctgaccatta ccggcgccca ggctgaggac 300
gaagccgatt actattgcag ctcccgggat aagagcggct ccagactgag cgtgttcgga 360
ggaggaacta aactgaccgt cctc 384
<210> 72
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 72
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggttc tgtgaccgca 60
tccgaactga ctcaggaccc tgccgtctct gtggcactga agcagactgt gactattact 120
tgccgaggcg actcactgcg gagccacttt gcttcctggt atcagaagaa acccggccag 180
gcacctgtgc tgctgttcta cggaaagaac aataggccat ctggcatccc cgaccgcttt 240
tctggcagtg catcagggaa ccgagccagt ctgaccatta ccggcgccca ggctgaggac 300
gaagccgatt actattgcag ctcccgggat aagagcggct ccagactgag cgtgttcgga 360
ggaggaacta aactgaccgt cctc 384
<210> 73
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 73
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggttc tgtgaccgca 60
tccgaactga ctcaggaccc tgccgtctct gtggcactga agcagactgt gactattact 120
tgccgaggcg actcactgcg gagccactgg gcttcctggt atcagaagaa acccggccag 180
gcacctgtgc tgctgttcta cggaaagaac aataggccat ctggcatccc cgaccgcttt 240
tctggcagtg catcagggaa ccgagccagt ctgaccatta ccggcgccca ggctgaggac 300
gaagccgatt actattgcag ctcccgggat aagagcggct ccagactgag cgtgttcgga 360
ggaggaacta aactgaccgt cctc 384
<210> 74
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 74
atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caaccggttc tgtgaccgca 60
tccgaactga ctcaggaccc tgccgtctct gtggcactga agcagactgt gactattact 120
tgccgaggcg actcactgcg gagccacttt gcttcctggt atcagaagaa acccggccag 180
gcacctgtgc tgctgttcta cggaaagaac aataggccat ctggcatccc cgaccgcttt 240
tctggcagtg catcagggaa ccgagccagt ctgaccatta ccggcgccca ggctgaggac 300
gaagccgatt actattgcag ctcccgggat aagagcggct ccagactgag cgtgttcgga 360
ggaggaacta aactgaccgt cctc 384
<210> 75
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 75
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Phe Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 76
<211> 131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 76
Glu Val Arg Leu Arg Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Phe Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 77
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 77
Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Phe Gly Tyr Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Glu Tyr Phe Gln Asp
20
<210> 78
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 78
gaggttagac tggtggagtc aggagggggg cttgtgaagc ccggtgggtc tctccgcctg 60
agctgttctg cctccggctt tgatttcgat aacgcctgga tgacctgggt caggcagcct 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtgggaaga atcacaggtc caggcgaggg ctggtccgtg 180
gactacgcgg aatctgttaa agggcggttt acaatctcaa gggacaatac caagaatacc 240
ttgtatttgg agatgaacaa cgtgagaact gaagacaccg gatattactt ctgtgccaga 300
acaggcaaat actacgactt ctggttcggc tatccccctg gcgaggaata ttttcaagac 360
tggggtcagg gaacccttgt tatcgtgtcc tcc 393
<210> 79
<211> 393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 79
gaggttagac tgcgggagtc aggagggggg cttgtgaagc ccggtgggtc tctccgcctg 60
agctgttctg cctccggctt tgatttcgat aacgcctgga tgacctgggt caggcagcct 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtgggaaga atcacaggtc caggcgaggg ctggtccgtg 180
gactacgcgg aatctgttaa agggcggttt acaatctcaa gggacaatac caagaatacc 240
ttgtatttgg agatgaacaa cgtgagaact gaagacaccg gatattactt ctgtgccaga 300
acaggcaaat actacgactt ctggttcggc tatccccctg gcgaggaata ttttcaagac 360
tggggtcagg gaacccttgt tatcgtgtcc tcc 393
<210> 80
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 80
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gtgtacattc 1440
tgaggttaga ctggtggagt caggaggggg gcttgtgaag cccggtgggt ctctccgcct 1500
gagctgttct gcctccggct ttgatttcga taacgcctgg atgacctggg tcaggcagcc 1560
tccaggtaag ggactggagt gggtgggaag aatcacaggt ccaggcgagg gctggtccgt 1620
ggactacgcg gaatctgtta aagggcggtt tacaatctca agggacaata ccaagaatac 1680
cttgtatttg gagatgaaca acgtgagaac tgaagacacc ggatattact tctgtgccag 1740
aacaggcaaa tactacgact tctggttcgg ctatccccct ggcgaggaat attttcaaga 1800
ctggggtcag ggaacccttg ttatcgtgtc ctccgcgtcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 81
<211> 5856
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> variation
<223> 变体抗体序列
<400> 81
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240
ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300
tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360
ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420
cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480
catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540
tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600
tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660
ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720
catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780
cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840
ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900
agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960
tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020
cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080
ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140
ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200
accctgcttg ctcaactcta gttaacggtg gagggcagtg tagtctgagc agtactcgtt 1260
gctgccgcgc gcgccaccag acataatagc tgacagacta acagactgtt cctttccatg 1320
ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagac 1380
caccatggga tggtcatgta tcatcctttt tctagtagca actgcaaccg gtgtacattc 1440
tgaggttaga ctgcgggagt caggaggggg gcttgtgaag cccggtgggt ctctccgcct 1500
gagctgttct gcctccggct ttgatttcga taacgcctgg atgacctggg tcaggcagcc 1560
tccaggtaag ggactggagt gggtgggaag aatcacaggt ccaggcgagg gctggtccgt 1620
ggactacgcg gaatctgtta aagggcggtt tacaatctca agggacaata ccaagaatac 1680
cttgtatttg gagatgaaca acgtgagaac tgaagacacc ggatattact tctgtgccag 1740
aacaggcaaa tactacgact tctggttcgg ctatccccct ggcgaggaat attttcaaga 1800
ctggggtcag ggaacccttg ttatcgtgtc ctccgcgtcg accaagggcc catcggtctt 1860
ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt 1920
caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg 1980
cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtggt 2040
gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc 2100
cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg 2160
cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa 2220
acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt 2280
gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa 2340
tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct 2400
caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa 2460
agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc 2520
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 2580
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 2640
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 2700
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 2760
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 2820
taaatgatga ggatccagat ctgctgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc 2880
ctcccccgtg ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa 2940
tgaggaaatt gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg 3000
gcaggacagc aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg 3060
ctctatgggt acccaggtgc tgaagaattg acccggttcc tcctgggcca gaaagaagca 3120
ggcacatccc cttctctgtg acacaccctg tccacgcccc tggttcttag ttccagcccc 3180
actcatagga cactcatagc tcaggagggc tccgccttca atcccacccg ctaaagtact 3240
tggagcggtc tctccctccc tcatcagccc accaaaccaa acctagcctc caagagtggg 3300
aagaaattaa agcaagatag gctattaagt gcagagggag agaaaatgcc tccaacatgt 3360
gaggaagtaa tgagagaaat catagaattt taaggccatg atttaaggcc atcatggcct 3420
taatcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 3480
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 3540
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 3600
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 3660
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 3720
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 3780
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3840
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3900
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3960
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 4020
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 4080
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 4140
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 4200
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 4260
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 4320
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 4380
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcggg 4440
gggggggggc gctgaggtct gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga 4500
atcgccccat catccagcca gaaagtgagg gagccacggt tgatgagagc tttgttgtag 4560
gtggaccagt tggtgatttt gaacttttgc tttgccacgg aacggtctgc gttgtcggga 4620
agatgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccgccgt 4680
cccgtcaagt cagcgtaatg ctctgccagt gttacaacca attaaccaat tctgattaga 4740
aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 4800
atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 4860
tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 4920
atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 4980
ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 5040
tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 5100
gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 5160
accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 5220
ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 5280
gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 5340
tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 5400
ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 5460
cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 5520
agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 5580
cagacagttt tattgttcat gatgatatat ttttatcttg tgcaatgtaa catcagagat 5640
tttgagacac aacgtggctt tccccccccc cccattattg aagcatttat cagggttatt 5700
gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 5760
gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 5820
cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtc 5856
<210> 82
<211> 461
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 82
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Phe Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 83
<211> 461
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 83
Glu Val Arg Leu Arg Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Asp Asn Ala
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Thr Gly Pro Gly Glu Gly Trp Ser Val Asp Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Glu Met Asn Asn Val Arg Thr Glu Asp Thr Gly Tyr Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Thr Gly Lys Tyr Tyr Asp Phe Trp Phe Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Gly Glu Glu Tyr Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 84
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 84
Ala Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Lys Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Gly Asp Ser Leu Arg Ser His Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Phe Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Lys Ser Gly Ser Arg
85 90 95
Leu Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 85
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 85
Ser Leu Arg Cys His Trp
1 5
<210> 86
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> VARIANT
<223> 变体抗体序列
<400> 86
Ser Leu Arg Cys His Phe
1 5

Claims (41)

1.分离的抗体，包括：
重链可变区(VH)，所述重链可变区包括SEQ ID NO:75所示VH的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:6所示VL的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3(10E8v4 S100cF CDRs)；以及
其中所述抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
2.权利要求1的分离的抗体，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包括SEQ ID NO:7、8、77、10、11和12所示的氨基酸序列(10E8v4 S100cF IMGT CDRs)。
3.权利要求1或权利要求2的分离的抗体，其中
所述VH分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82c、84、87、89、105和110处包括精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及
所述VL分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处包括丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基。
4.权利要求1至3中任一项的分离的抗体，在kabat位置5处包括精氨酸残基。
5.权利要求1至4中任一项的分离的抗体，其中所述VH和VL分别包括与SEQ ID NO:75和6(10E8v4 S100cF)有至少90％一致性的氨基酸序列。
6.权利要求1至4中任一项的分离的抗体，其中所述VH和VL分别包括与SEQ ID NO:76和6(10E8v4 V5R S100cF)有至少90％一致性的氨基酸序列。
7.权利要求1的分离的抗体，其中所述VH和VL分别包括SEQ ID NO:75和6所示的氨基酸序列(10E8v4 S100cF)。
8.权利要求1的分离的抗体，其中所述VH和VL分别包括SEQ ID NO:76和6所示的氨基酸序列(10E8v4 V5R S100cF)。
9.分离的抗体，包括：
重链可变区(VH)，所述重链可变区包括SEQ ID NO:5所示VH的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:6所示VL的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3(10E8v4 CDRs)，其中
所述VH分别在kabat位置3、61、62、64、72、74、75、77、82C、84、87、89、105和110处包括精氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苏氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺和异亮氨酸残基；以及
所述VL分别在kabat位置1、2、7、8、9、16、17、45、58、76、83和85处包括丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基；以及
其中所述抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
10.权利要求9的分离的抗体，其中所述VH和VL分别包括与SEQ ID NO:5和6(10E8v4)有至少90％一致性的氨基酸序列。
11.权利要求9的分离的抗体，其中所述VH和VL分别包括SEQ ID NO:5和6所示的氨基酸序列(10E8v4)。
12.权利要求1至8中任一项的分离的抗体，其中
(a)所述VH相对于SEQ ID NO:76还包括E1R、E1W、G15R、S25W、D28W、D30W、D30R、N31W、N31R、P52bR、D72R或E81R替换之一(kabat编号)；
(b)所述VH相对于SEQ ID NO:76还包括D72R、E1R D28W和P52bR替换(kabat编号)；
(c)所述VH相对于SEQ ID NO:76还包括D28Y替换(kabat编号)；
(d)所述VL相对于SEQ ID NO:6还包括D7W、A14R、Q17R、T18R、T20R、D26R、K51R、N53R、S65R、G68R、G77R或G100R替换之一(kabat编号)；
(e)所述VL相对于SEQ ID NO:6还包括D7W、D26R和G68R替换(kabat编号)；
(f)所述VH相对于SEQ ID NO:76还包括D72R、E1R D28W和P52bR替换(kabat编号)，所述VL相对于SEQ ID NO:6还包括D7W、D26R和G68R替换(kabat编号)；
(g)所述VH相对于SEQ ID NO:76还包括P52bR替换(kabat编号)，所述VL相对于SEQ IDNO:6还包括D7W和G68R替换(kabat编号)；
(h)所述VH和VL分别相对于SEQ ID NO:76和6还包括以下成对的替换之一：E1R和D7W；E1R和D26R；E1R和G68R；D28W和D7W；D28W和D26R；D28W和G68R；D28W和Q17R；D28W和T18R；D28W和T20R；D28W和K51R；D28W和G77R；P52bR和D7W；P52bR和D26R；P52bR和G68R；P52bR和Q17R；P52bR和T18R；P52bR和T20R；P52bR和K51R；P52bR和G77R；D72R和D7W；D72R和D26R；或D72R和G68R；以及
其中所述抗体特异结合gp41并中和HIV-1。
13.前述权利要求任一项的分离的抗体，其中所述抗体于20℃在磷酸盐缓冲盐水，pH7.4中溶解至至少5mg/ml的浓度。
14.前述权利要求任一项的分离的抗体，其中所述抗体以50μg/ml或更小的IC50中和至少95％的列在图16中的病毒株。
15.前述权利要求任一项的分离的抗体，包括人框架区。
16.前述权利要求任一项的分离的抗体，包括人恒定区。
17.前述权利要求任一项的分离的抗体，其中所述抗体为IgG、IgM或IgA。
18.前述权利要求任一项的分离的抗体，包括重组恒定区，所述重组恒定区包括增加与新生儿Fc受体结合的修饰。
19.权利要求18的分离的抗体，其中所述抗体为IgG1，所述增加与新生儿Fc受体结合的修饰包括M428L和N434S氨基酸替换。
20.权利要求1至19中任一项的抗体的抗原结合片段。
21.权利要求20的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段为Fv、Fab、F(ab')2、scFV或scFV2片段。
22.包括前述权利要求任一项的抗体或抗原结合片段的双特异性抗体。
23.前述权利要求任一项的抗体或抗原结合片段，连接至效应分子或可检测标记物。
24.权利要求23的抗体或抗原结合片段，其中所述可检测标记物为荧光、酶学或放射性标记物。
25.编码权利要求1至24中任一项的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子。
26.编码权利要求1至24中任一项的抗体或抗原结合片段的VH、VL或者VH和VL的分离的核酸分子。
27.权利要求25至26中任一项的核酸分子，其中：
所述抗体或抗原结合片段的VH包括SEQ ID NO:45(H6-511-4mut)、SEQ ID NO:78(H6-511-4mut S100cF)或SEQ ID NO:79(H6-511-4mut V5R S100cF)所示的核酸序列；或
所述抗体或抗原结合片段的VL包括SEQ ID NO:47(rL3-6mut)所示的核酸序列；或
所述抗体或抗原结合片段的VH和VL分别包括SEQ ID NO:45和47(10E8v4)所示的核酸序列，分别包括SEQ ID NO:78和47(10E8v4 S100cF)所示的核酸序列，或分别包括SEQ ID NO:79和47(10E8v4 V5R,S100cF)所示的核酸序列。
28.权利要求25至27中任一项的核酸分子，可操作地连接至启动子。
29.包括权利要求25至28中任一项的核酸分子的表达载体。
30.包括权利要求25至29中任一项的核酸分子的宿主细胞，尤其是其中所述宿主细胞为真核宿主细胞例如人宿主细胞。
31.用于治疗HIV-1感染的药物组合物，包括：
治疗有效量的权利要求1至29中任一项的抗体、抗原结合片段、核酸分子或表达载体；以及
药学上可接受的载体。
32.产生特异结合gp41的抗体或抗原结合片段的方法，包括：
在足以表达所述核酸分子或表达载体以产生所述抗体或抗原结合片段的体外条件下温育权利要求30的宿主细胞；以及
纯化所述抗体或抗原结合片段。
33.在受试者中检测HIV-1感染的方法，包括：
使来自所述受试者的生物样品与权利要求1至24中任一项的抗体或抗原结合片段在足以形成免疫复合物的条件下接触；以及
检测所述样品上所述免疫复合物的存在，其中所述样品上所述免疫复合物的存在表明所述受试者患有HIV-1感染。
34.在受试者中抑制或治疗HIV-1感染的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1至29中任一项的抗体、抗原结合片段、核酸分子或表达载体，由此防止或治疗所述HIV-1感染。
35.权利要求34的方法，其中所述受试者有感染HIV-1的风险。
36.权利要求34的方法，其中所述受试者患有HIV-1感染。
37.权利要求36的方法，其中所述受试者患有AIDS。
38.权利要求34至37中任一项的方法，还包括向所述受试者施用另外的抗体、抗原结合片段或编码所述另外的抗体或抗原结合片段的核酸，其中所述另外的抗体或抗原结合片段特异结合HIV-1Env并中和HIV-1感染。
39.权利要求38的方法，其中所述另外的抗体为VRC01类抗体。
40.权利要求39的方法，其中所述VRC01类抗体为VRC01或VRC07-523。
41.权利要求1至29或31中任一项的抗体、抗原结合片段、核酸分子、表达载体或药物组合物在受试者中抑制或治疗HIV-1感染的用途。
CN201680077520.XA 2015-11-03 2016-11-03 Hiv-1 gp41中和抗体及其用途 Active CN108884149B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210669835.0A CN115010805A (zh) 2015-11-03 2016-11-03 Hiv-1 gp41中和抗体及其用途

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562250360P 2015-11-03 2015-11-03
US62/250,360 2015-11-03
PCT/US2016/060390 WO2017079479A1 (en) 2015-11-03 2016-11-03 Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210669835.0A Division CN115010805A (zh) 2015-11-03 2016-11-03 Hiv-1 gp41中和抗体及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108884149A true CN108884149A (zh) 2018-11-23
CN108884149B CN108884149B (zh) 2022-07-01

Family

ID=57396817

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210669835.0A Pending CN115010805A (zh) 2015-11-03 2016-11-03 Hiv-1 gp41中和抗体及其用途
CN201680077520.XA Active CN108884149B (zh) 2015-11-03 2016-11-03 Hiv-1 gp41中和抗体及其用途

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210669835.0A Pending CN115010805A (zh) 2015-11-03 2016-11-03 Hiv-1 gp41中和抗体及其用途

Country Status (6)

Country Link
US (2) US11236152B2 (zh)
EP (2) EP4011911A1 (zh)
CN (2) CN115010805A (zh)
AU (1) AU2016349392B2 (zh)
CA (1) CA3003878A1 (zh)
WO (1) WO2017079479A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111253493A (zh) * 2020-03-05 2020-06-09 武汉科技大学 一种靶向hiv病毒囊膜双位点的嵌合抗原受体及其表达载体和应用
CN113461811A (zh) * 2021-06-30 2021-10-01 复旦大学 一种双特异性抗hiv-1抗体
CN114645066A (zh) * 2020-12-21 2022-06-21 康霖生物科技（杭州）有限公司 一种用于艾滋病基因治疗的核酸构建体
CN116589566A (zh) * 2022-11-18 2023-08-15 昆明医科大学第一附属医院 一种HIV-1中和抗体的改造重组单克隆IgM抗体及其应用

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017189959A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
EP3448987A4 (en) 2016-04-29 2020-05-27 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
WO2018002902A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Antibody-drug conjugates and therapeutic methods using the same
WO2018075564A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 University Of Maryland, College Park Multispecific antibodies targeting human immunodeficiency virus and methods of using the same
WO2019123262A1 (en) * 2017-12-18 2019-06-27 VIIV Healthcare UK (No.5) Limited Antigen binding polypeptides
CA3102859A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Gilead Sciences, Inc. Antibodies that target hiv gp120 and methods of use
KR20220047277A (ko) 2019-07-16 2022-04-15 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Hiv 백신, 및 이의 제조 및 사용 방법
PE20231105A1 (es) 2020-08-25 2023-07-19 Gilead Sciences Inc Moleculas de union a antigeno multi-especificas contra el vih y metodos de uso
TWI815194B (zh) 2020-10-22 2023-09-11 美商基利科學股份有限公司 介白素2-Fc融合蛋白及使用方法
WO2023114951A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Viiv Healthcare Company Combination therapies for hiv infections and uses thereof
WO2024015741A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Gilead Sciences, Inc. Hiv immunogenic polypeptides and vaccines and uses thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013070776A1 (en) * 2011-11-07 2013-05-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Neutralizing gp41 antibodies and their use
WO2013163427A1 (en) * 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
WO2014040025A2 (en) * 2012-09-10 2014-03-13 International Aids Vaccine Initiative Immunogens of hiv-1 broadly neutralizing antibodies, methods of generation and uses thereof
WO2014084859A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4036945A (en) 1976-05-03 1977-07-19 The Massachusetts General Hospital Composition and method for determining the size and location of myocardial infarcts
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4331647A (en) 1980-03-03 1982-05-25 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4957735A (en) 1984-06-12 1990-09-18 The University Of Tennessee Research Corporation Target-sensitive immunoliposomes- preparation and characterization
US5019369A (en) 1984-10-22 1991-05-28 Vestar, Inc. Method of targeting tumors in humans
US4902505A (en) 1986-07-30 1990-02-20 Alkermes Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5055303A (en) 1989-01-31 1991-10-08 Kv Pharmaceutical Company Solid controlled release bioadherent emulsions
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5271961A (en) 1989-11-06 1993-12-21 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Method for producing protein microspheres
US5188837A (en) 1989-11-13 1993-02-23 Nova Pharmaceutical Corporation Lipsopheres for controlled delivery of substances
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
US5254342A (en) 1991-09-30 1993-10-19 University Of Southern California Compositions and methods for enhanced transepithelial and transendothelial transport or active agents
US5643578A (en) 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
JPH07507768A (ja) 1992-03-12 1995-08-31 アルカーメス　コントロールド　セラピューティクス，インコーポレイテッド Ａｃｔｈ含有マイクロスフェアの制御放出
US5534496A (en) 1992-07-07 1996-07-09 University Of Southern California Methods and compositions to enhance epithelial drug transport
EP0671926B1 (en) 1992-08-11 2002-11-13 President And Fellows Of Harvard College Immunomodulatory peptides
US5593972A (en) 1993-01-26 1997-01-14 The Wistar Institute Genetic immunization
US5514670A (en) 1993-08-13 1996-05-07 Pharmos Corporation Submicron emulsions for delivery of peptides
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
CA2293829C (en) 1997-06-24 2011-06-14 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
ATE447613T1 (de) 1997-11-17 2009-11-15 Micromet Ag Verfahren zur identifikation von bindestellendomänen, die ihre epitopbindefähigkeit beibehalten
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
JP4169478B2 (ja) 1998-04-21 2008-10-22 マイクロメット アーゲー Ｃｄ１９×ｃｄ３特異的ポリペプチドおよびその使用
US6723538B2 (en) 1999-03-11 2004-04-20 Micromet Ag Bispecific antibody and chemokine receptor constructs
PT1914244E (pt) 1999-04-09 2013-07-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para regular a actividade de moléculas funcionais sob o ponto de vista imunológico
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
AU2001242509B2 (en) 2000-03-24 2007-08-23 Micromet Ag mRNA amplification
US7332168B2 (en) 2000-08-22 2008-02-19 Micromet Ag Composition for the elimination of autoreactive B-cells
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
CA2785941C (en) 2000-10-06 2017-01-10 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
EP1399484B1 (en) 2001-06-28 2010-08-11 Domantis Limited Dual-specific ligand and its use
CN1555411A (zh) 2001-08-03 2004-12-15 ���迨�����＼���ɷݹ�˾ 抗体-依赖性细胞毒性增大的抗体糖基化变体
EP1443961B1 (en) 2001-10-25 2009-05-06 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
AU2003208839A1 (en) 2002-02-13 2003-09-04 Micromet Ag De-immunized (poly)peptide constructs
CA2481925A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
US7691568B2 (en) 2002-04-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Antibody composition-containing medicament
JP4628679B2 (ja) 2002-04-09 2011-02-09 協和発酵キリン株式会社 Ｇｄｐ−フコースの輸送に関与する蛋白質の活性が低下または欠失した細胞
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
JPWO2003085107A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 ゲノムが改変された細胞
US7820166B2 (en) 2002-10-11 2010-10-26 Micromet Ag Potent T cell modulating molecules
EP1572744B1 (en) 2002-12-16 2010-06-09 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
JP5010281B2 (ja) 2003-05-31 2012-08-29 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｅｐｃａｍに対する二重特異性抗体を含む薬学的組成物
JP2008501621A (ja) 2003-05-31 2008-01-24 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｂ細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗ｃｄ３、抗ｃｄ１９抗体構築物を含む薬学的組成物
PL1639011T3 (pl) 2003-06-30 2009-05-29 Domantis Ltd Pegilowane przeciwciała jednodomenowe (dAb)
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
DK1673398T3 (da) 2003-10-16 2011-04-18 Micromet Ag Multispecifikke, deimmuniserede CD3-bindere
RS55723B1 (sr) 2003-11-05 2017-07-31 Roche Glycart Ag Molekuli koji se vezuju za antigen sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom
ATE474915T1 (de) 2003-11-19 2010-08-15 Us Gov Health & Human Serv Verfahren zur induktion der entwicklung und terminalen differenzierung von gedächtnis-b- zellen
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
EP1697520A2 (en) 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
US8147840B2 (en) 2004-05-14 2012-04-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human immunodeficiency virus (HIV) immunization strategies employing conformationally-stabilized, surface-occluded peptides comprising a gp41 2F5 epitope in association with lipid
PL1874819T3 (pl) 2005-04-18 2015-10-30 Amgen Res Munich Gmbh Przeciwciała neutralizujące ludzki czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów
WO2006117586A1 (en) 2005-05-02 2006-11-09 Mymetics Corporation Antibody or a fragment thereof, having neutralizing activity against hiv but not against il2
DK1976886T3 (en) 2005-12-16 2015-03-02 Amgen Res Munich Gmbh Means and methods for the treatment of tumor diseases
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN102365095B (zh) 2009-02-06 2015-11-25 麦米提斯公司 ***gp41
CA2759794C (en) 2009-04-29 2017-10-03 Norotos, Inc. Shroud plate with lighting system
WO2011014191A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Method and system to recognize and inventory applications
US20110064760A1 (en) 2009-08-14 2011-03-17 Cho Michael W Polypeptides comprising epitopes of hiv gp41 and methods of use
CN103403026B (zh) 2009-09-25 2016-05-11 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Hiv-1中和抗体及其用途
WO2011046623A2 (en) 2009-10-16 2011-04-21 Duke University Hiv-1 antibodies
WO2012154312A1 (en) 2011-05-09 2012-11-15 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 and their use
MX358099B (es) 2011-05-17 2018-08-06 Univ Rockefeller Anticuerpos que neutralizan el virus de inmunodeficiencia humano y metodos de uso de ellos.
US9890207B2 (en) 2011-07-25 2018-02-13 California Institute Of Technology Highly active agonistic CD4 binding site anti-HIV antibodies (HAADS) comprising modified CDRH2 regions that improve contact with GP120
US9695230B2 (en) 2011-12-08 2017-07-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing HIV-1 VRC07 antibodies that bind to the CD4-binding site of the envelope protein
WO2013090644A2 (en) 2011-12-13 2013-06-20 California Institute Of Technology Anti-hiv antibodies having increased potency and breadth
EP2828294A1 (en) 2012-03-23 2015-01-28 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 and their use
CN104087545A (zh) * 2014-06-30 2014-10-08 哈尔滨医科大学 以沙门氏菌菌毛为载体的hiv-1 10e8表位疫苗及其构建方法和应用
WO2016149710A2 (en) * 2015-03-19 2016-09-22 Duke University Hiv-1 neutralizing antibodies and uses thereof
IL301140A (en) * 2015-10-25 2023-05-01 The Usa As Represented By The Sec Dep Of Health And Human Services Trispecific and/or terrivalent binding proteins for the prevention or treatment of HIV infection

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013070776A1 (en) * 2011-11-07 2013-05-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Neutralizing gp41 antibodies and their use
CN104080805A (zh) * 2011-11-07 2014-10-01 美国政府健康及人类服务部 gp41中和性抗体及其用途
WO2013163427A1 (en) * 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
WO2014040025A2 (en) * 2012-09-10 2014-03-13 International Aids Vaccine Initiative Immunogens of hiv-1 broadly neutralizing antibodies, methods of generation and uses thereof
WO2014084859A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GEORGIEV ET AL.: "Antibodies VRC01 and 10E8 Neutralize HIV-1 with High Breadth and Potency Even with Ig-Framework Regions Substantially Reverted to Germline", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111253493A (zh) * 2020-03-05 2020-06-09 武汉科技大学 一种靶向hiv病毒囊膜双位点的嵌合抗原受体及其表达载体和应用
CN111253493B (zh) * 2020-03-05 2021-03-23 武汉科技大学 一种靶向hiv病毒囊膜双位点的嵌合抗原受体及其表达载体和应用
CN114645066A (zh) * 2020-12-21 2022-06-21 康霖生物科技（杭州）有限公司 一种用于艾滋病基因治疗的核酸构建体
CN114645066B (zh) * 2020-12-21 2023-08-25 康霖生物科技（杭州）有限公司 一种用于艾滋病基因治疗的核酸构建体
CN113461811A (zh) * 2021-06-30 2021-10-01 复旦大学 一种双特异性抗hiv-1抗体
CN116589566A (zh) * 2022-11-18 2023-08-15 昆明医科大学第一附属医院 一种HIV-1中和抗体的改造重组单克隆IgM抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20190077849A1 (en) 2019-03-14
CA3003878A1 (en) 2017-05-11
CN108884149B (zh) 2022-07-01
WO2017079479A1 (en) 2017-05-11
WO2017079479A8 (en) 2018-03-22
EP4011911A1 (en) 2022-06-15
US11236152B2 (en) 2022-02-01
EP3371214A1 (en) 2018-09-12
AU2016349392B2 (en) 2023-07-13
AU2016349392A1 (en) 2018-05-24
US20220098286A1 (en) 2022-03-31
CN115010805A (zh) 2022-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108884149B (zh) Hiv-1 gp41中和抗体及其用途
AU2020201853B2 (en) DNA antibody constructs and method of using same
ES2789348T3 (es) Anticuerpos neutralizantes para GP120 y sus usos
AP1282A (en) HIV envelope polypeptides and vaccine.
Jaume et al. Anti-severe acute respiratory syndrome coronavirus spike antibodies trigger infection of human immune cells via a pH-and cysteine protease-independent FcγR pathway
KR20220134622A (ko) 코로나바이러스 감염 예방 및 치료용 조성물 및 방법 - sars-cov-2 백신
KR101228157B1 (ko) 광견병 바이러스를 중화시킬 수 있는 결합 분자 및 그 용도
CN104955847A (zh) HIV-1 Env结合抗体、融合蛋白及其使用方法
AU2021201586A1 (en) DNA antibody constructs and method of using same
CN106589116B (zh) 一种黄病毒人源单克隆抗体及应用
CN111971299A (zh) HIV-1 Env的中和抗体及其用途
JP6055763B2 (ja) ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ｇＢタンパク質に対する高親和性ヒト抗体
JP2008019256A (ja) Ｃ型肝炎ウイルス（ｈｃｖ）ｅ２抗原に特異的なヒトモノクローナル抗体
Chakrabarti et al. Expanded breadth of virus neutralization after immunization with a multiclade envelope HIV vaccine candidate
WO2021262672A1 (en) Sars-cov-2 rbd constructs
US20120121633A1 (en) Hiv cd4 binding site based covalent immunogen compositions
CA3207878A1 (en) Coronavirus spike protein designs, compositions and methods for their use
TW202225186A (zh) 識別對具有ｇｐ１２０ＣＤ４結合部位導向抗體之療法敏感的ＨＩＶ患者之方法
CN110343173B (zh) 一种高功能活性的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用
RU2761904C1 (ru) Применение средства для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 у детей
García‐Pérez et al. Longer intervals between SARS‐CoV‐2 infection and mRNA‐1273 doses improve the neutralization of different variants of concern
Ang Platform development for human cytomegalovirus (HCMV) vaccine design to elicit cross-reactive neutralizing antibodies (nAbs)
Kgagudi Delineating antibody responses elicited by four SARSCoV-2 variants against the Mu variant
EP3104884B1 (en) A new non-hiv vaccine antigen from the vaginal microbiota capable of inducing a mucosal neutralizing protective antibody response against hiv infection
CN116528895A (zh) 用于在儿童中诱导针对sars-cov-2的特异性免疫的药剂的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant