CN108753802B - 一个苹果酸脱氢酶基因cimdh1及其重组表达载体 - Google Patents
一个苹果酸脱氢酶基因cimdh1及其重组表达载体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108753802B CN108753802B CN201810492054.2A CN201810492054A CN108753802B CN 108753802 B CN108753802 B CN 108753802B CN 201810492054 A CN201810492054 A CN 201810492054A CN 108753802 B CN108753802 B CN 108753802B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ala
- cimdh1
- val
- gene
- gly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
- C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
- C12Y101/01037—Malate dehydrogenase (1.1.1.37)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种苹果酸脱氢酶基因CIMDH1,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,通过构建重组载体并在大肠杆菌中表达,表达产物具有苹果酸脱氢酶功能,能催化苹果酸转化成草酰乙酸。
Description
技术领域
本发明涉及一种苹果酸脱氢酶基因CIMDH1及其重组表达载体,具体涉及以担子菌Cystofilobasidium infirmominiatum菌株YM25058总RNA反转录的cDNA为模板,扩增得到编码苹果酸脱氢酶(MDH)的基因,将其克隆到大肠杆菌表达载体后诱导表达,亲和层析法纯化后得到纯酶,并对该酶进行了酶活测定,属于基因工程和酶工程领域。
背景技术
苹果酸脱氢酶( MDH)广泛分布于生物体内,是一种活性非常强的酶,它催化草酰乙酸盐和苹果酸盐的相互转化反应,与二核苷酸辅酶的氧化还原相关。草酰乙酸盐在许多代谢途径中都有重要作用,包括三羧酸循环、乙醛酸旁路、氨基酸合成、糖原异生等,并维持氧化还原平衡,还能促进胞质和亚细胞器代谢物的交换。依生物体的功能不同、组织差异、细胞内定位的不同其表达种类不同,MDH具有多种同工酶形式。胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)存在于细胞胞质内,担负着将NADH转入线粒体的重任,并且还对调控三羧酸循环有作用,同时cMDH还是核酸通路(NACh)复合体的一个组成部分。
苹果酸脱氢酶(MDH)广泛分布在动物组织、微生物和植物中。它是一种活性最强的酶,根据亚细胞定位,苹果酸脱氢酶可分为5种类型,存在于乙醛酸体、线粒体、过氧化物体、叶绿体、细胞浆以及锥虫甘油体内。MDH为多聚体酶,是由相同或相似亚基组成的二聚体或四聚体,亚基的分子量为30-35kDa,MDH在医学方面也引起越来越多的关注如利用基因工程疫苗预防人体带绦虫病已是备受关注的研究方向,通过牛带绦虫亚洲亚种MDH基因的生物信息学分析,预测到胞浆型MDH是一个潜在的诊断抗原,这为带绦虫在诊断、药物及疫苗研究中的应用前景提供了重要的线索,在临床诊断中用于多酶分析及疾病的早期诊断,例如用于诊断DIC(弥散性血管内凝血),心肌梗塞,急慢性肝炎等。在食品领域,苹果酸脱氢酶用于有机酸含量的测定,如L-苹杲酸、醋酸、柠檬酸等物质的测定,应用前景广泛。利用MDH底物专一性,还可将其用于拆分D,L-苹果酸酶。总之,MDHs作为生物体中枢代谢途径的关键酶,国内外对其己进行了较为广泛的研究,MDHs同工酶正应用于生物分类、物种分化、遗传变异、物种杂交和个体发育等研究。因此深入了解MDHs的生理生化特性、结构及功能、催化机制,对于酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析,探讨生物体中MDHs的代谢作用以及一些疾病的分子致病机制有着重要的意义;同时MDH的应用研究也将会推动MDHs转基因植物及手性药物的进一步发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种从担子菌Cystofilobasidium infirmominiatumYM25058中分离的苹果酸脱氢酶基因CIMDH1,该基因核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示或该核苷酸序列的片段,或与SEQ ID NO:1互补的核苷酸序列,该基因序列长为1020bp(碱基),该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的多肽或其片段。
本发明另一目的是提供一种含有苹果酸脱氢酶基因CIMDH1的重组表达载体,是将SEQ ID NO:1所示基因直接与不同表达载体(质粒、病毒或运载体)连接所构建的重组载体。
本发明另一目的是提供一种含有该苹果酸脱氢酶基因CIMDH1或上述重组表达载体的宿主细胞大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21。
用本发明所述的核苷酸序列或含有核苷酸序列的重组载体转化宿主细胞可用本领域的技术人员熟知的方法进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时,用CaCl2、电穿孔等方法进行。当宿主是真核生物,可选用DNA转染法、显微注射、电穿孔、脂质体包装等方法。
本发明提供的核苷酸序列是一种高效、特异性的苹果酸脱氢酶基因,可以将其与载体连接后转化至微生物细胞体内生产苹果酸脱氢酶,具有产物特异性高、生产周期短、生产不受场地、气候、季节的影响及利用不同的菌种和培养基适合开发商业化苹果酸脱氢酶等优点;本发明应用基因工程技术构建特异性生产苹果酸脱氢酶的转基因大肠杆菌生产苹果酸脱氢酶,具有操作简单、成本低、可行性高等优点,为苹果酸脱氢酶基因工程化生产奠定基础。
附图说明
图1为利用本发明的担子菌Cystofilobasidium infirmominiatum YM25058总RNA反转录成cDNA进行PCR扩增获得的苹果酸脱氢酶基因CIMDH1电泳图,其中:1为DNA Marker;2阴性对照;3为CIMDH1基因的扩增条带;
图2为利用本发明的担子菌Cystofilobasidium infirmominiatum YM25058苹果酸脱氢酶基因CIMDH1构建的大肠杆菌重组表达质粒pET32aCIMDH1质粒图谱;
图3为本发明所构建重组表达质粒pET32aCIMDH1的限制性酶切分析图;其中:1为DNA Marker;2为pET32a(+)双酶切后条带;3为pET32aCIMDH1双酶切后条带;
图4为本发明的苹果酸脱氢酶基因CIMDH1诱导表达并纯化后的SDS-PAGE分析图;其中:1为蛋白电泳Marker;2为转化了pET32a(+)并经IPTG诱导的大肠杆菌BL21总蛋白;3为转化了pET32aCIMDH1并经IPTG诱导的大肠杆菌BL21总蛋白;4为纯化的目的蛋白条带。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明,但本发明保护范围不局限于所述内容,实施例中使用的试剂和方法,如无特殊说明,均采用常规试剂和使用常规方法。
实施例1:担子菌Cystofilobasidium infirmominiatum苹果酸脱氢酶基因CIMDH1的克隆
采用OMEGA试剂盒E.Z.N.A Fungal RNA Kit从Cystofilobasidium infirmominiatum 菌株YM25058中提取总RNA,用反转录试剂盒Thermo Scientific MaximaH Minus First Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA,取1μl为模板进行聚合酶链式反应;设计引物(引物CIMDH1F1和引物CIMDH1R1)进行PCR 扩增,反应所用引物、组分和扩增条件如下:
CIMDH1F1: 5`-TCGGATCCATGGTCAAGGCCGTCGTCAT -3` (SEQ ID NO:3)
CIMDH1R1: 5`-GTCTCGAGGAGCTTGGAGTCGGCGTC-3` (SEQ ID NO:4);
PCR扩增体系(50μL)组成如下:
5×Trans PFU Buffer 10μL
dNTP(2.5μmol/L) 5μL
cDNA 1μL
CIMDHF1(10μmol/L) 2μL
CIMDHR1(10μmol/L) 2μL
Fast Pfu DNA polymerase(5U/μL) 2μL
无菌ddH2O 补足至50μL;
扩增条件:94℃变性4min,再用94℃ 45s、56℃ 45s、72℃ 90s进行30个循环,最后72℃ 10min,反应完后取产物1μL,然后在浓度为1%的琼脂糖凝胶中,进行电泳分析,分析结果如图1所示。经凝胶成像***成像确认片段大小正确后,用百泰克生物技术有限公司多动能DNA纯化回收试剂盒回收目的片段,然后将PCR扩增得到的目的基因连接到pMD18-T上,连接产物转化大肠杆菌DH5α,用含有氨苄青霉素(Amp+)的LB固体平板进行筛选,挑取平板上的转化子进行菌落PCR筛选阳性克隆,然后送去上海生工测序。测序结果显示,获得一段1020bp长的序列,命名为CIMDH1,序列组成如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
实施例2:重组表达质粒pET32aCIMDH1的构建
采用实施例1中经测序分析的含CIMDH1序列的pMD18-T(pMD18-CIMDH1)为模板进行PCR 扩增,反应所用引物组合、反应组分和扩增条件如下:
CIMDH1F1: 5`-TCGGATCCATGGTCAAGGCCGTCGTCAT -3` (SEQ ID NO:3)
CIMDH1R1: 5`-GTCTCGAGGAGCTTGGAGTCGGCGTC-3` (SEQ ID NO:4)
PCR扩增体系(50 µL)组成如下:
5×Fast Pfu Buffer 10μL
dNTP(2.5 µmol/L) 5μL
pMD18-CIMDH1 0.5μL
CIMDHF1(10 µmol/L) 1μL
CIMDHR1(10 µmol/L) 1μL
Fast Pfu DNA polymerase(5U/µL) 1μL
无菌ddH2O 补足至50μL;
扩增条件:94℃变性4min,再用94℃ 45s、59℃ 45s、72℃ 2min进行30个循环,最后72℃ 10min;取纯化的PCR产物和质粒pET-32a分别用BamH I和EcoR I酶切过夜,50μlPCR产物反应体系:PCR产物25μL,10×Tango Buffer 10μl,BamH I和EcoR I各1.5μL,用灭菌的双蒸水补齐,37℃酶切过夜。50μl质粒pET-32a反应体系:质粒pET-32a 15μl,10×Tango Buffer 10μl,BamH I和EcoR I各1.5μL,用灭菌的双蒸水补齐,37℃酶切过夜。电泳检验酶切产物,并用凝胶回收试剂盒对酶切产物进行纯化和回收。连接体系(10μL):纯化的PCR产物和表达载体pET-32a 按5:1加样,T4DNA连接酶0.5μL,T4 Buffer 1μL,16℃连接过夜。取连接产物转入大肠杆菌DH5ɑ中。37℃振荡培养1.5h后,培养液涂布含氨苄的LB培养基平板,37℃培养箱中培养12h,挑取平板上的转化子进行菌落PCR,筛选阳性克隆,构建获得重组表达质粒命名为pET32aCIMDH1,该质粒图谱如图2所示。
进一步进行双酶切分析鉴定,如图3第3泳道所示,用BamH I和EcoR I双酶切,重组质粒产生两条带,小分子条带与之前的PCR产物大小一致,大分子条带与泳道2中用相同两个限制性内切酶酶切pET32a(+)产生的条带大小一致,表明所构建的重组表达质粒正确,进一步测序分析也证明这一点。此外,通过核苷酸序列所编码的氨基酸相似性搜索表明,该基因编码的蛋白与真菌来源的苹果酸脱氢酶相似,但不完全相同。
实施例3:苹果酸脱氢酶基因CIMDH1在大肠杆菌BL21中的诱导表达
1、苹果酸脱氢酶蛋白CIMDH1的诱导表达及纯化
为了验证该基因编码蛋白的活性,将1μg重组质粒pET32aCIMDH1加入50μL大肠杆菌BL21感受态细胞中,将整个体系冰浴30min之后于42℃热击90s,再次冰浴2min,然后将连接体系吸取并加入至950μL LB液体培养基中,37℃、100rpm振荡孵育1h。孵育结束后于5000rpm离心10 min,留下约80μL 上清液悬浮沉淀后涂布于含有氨苄青霉素(Amp+)的LB固体平板,37℃倒置培养10h。
挑取阳性转化子于100 mL LB(含100μg/mL氨苄霉素)培养基中,37 ℃振荡培养过夜,将富集的菌液按1%比例接种到1L LB液体培养基中,于37℃,160rpm培养至OD600值约为0.8。取5mL菌液作为空白对照,其余加入IPTG至终浓度为1mmol/L,于15℃恒温摇床80rpm诱导培养8小时,12000 rpm离心15min收集菌体。SDS-PAGE分析显示,pET32aCIMDH1转化的大肠杆菌BL21中表达出一条分子量约为50kD的蛋白(见图4泳道3),但在空载体pET32a(+)转化的大肠杆菌BL21中没有(见图4泳道2)。
进一步用该菌体悬浮于适量(使菌悬液的OD600≈20)30 mM的咪唑缓冲液中,冰上超声破碎细胞,4℃、14000 rpm离心15 min。将离心后的上清液用0.2μm的微型滤膜过滤,滤液上样于已用30mM咪唑缓冲液平衡好的His Trap HP柱(1 mL,GE Healthcare),用150mM咪唑缓冲液进行洗脱,洗脱液用离心管按顺序收集,洗脱样品用SDS-PAGE电泳检测,获得一纯蛋白条带(见图4泳道4)。
2、苹果酸脱氢酶CIMDH1的酶活测定
苹果酸脱氢酶是调控苹果酸代谢的关键酶,可以催化苹果酸进行脱氢氧化,伴随着产生草酰乙酸和NADH。由于MDH的酶活在一定的反应时间内与反应产物NADH的浓度变化呈线性关系,所以MDH的活性可通过检测NADH的浓度变化来测定;以苹果酸和NAD(+)为底物加入苹果酸脱氢酶进行反应,用紫外分光光度计在340nm处测定酶活;MDH酶活的的计算:
单位定义:一个酶活力单位是指25℃时每分钟生成1μmol NADH所需的酶量。
苹果酸脱氢酶酶活计算公式:
E=[(Δe/Δt) ×Vt×df]/(ε×D×Vs×C)
=[(0.315-0.236)×1.9×95]/(6.42×1×0.02×0.3482)
=318.93U/mg
Vt-----反应溶液总体积(mL)
ε-----340nm处测定的NADH的吸光度为6.42
D-----光路长(1cm)(比色皿直径)
Vs-----酶液体积(mL)
C-----蛋白质浓度(mg/mL)
Δe/Δt----1min内340nm处吸光度的变化
df----稀释因子;
结果显示,所纯化的苹果酸脱氢酶CIMDH1的酶活为253.28 U/mg,表明基因重组载体在大肠杆菌BL21中诱导表达出来的苹果酸脱氢酶CIMDH1具有苹果酸脱氢酶的活性,能催化苹果酸转化成草酰乙酸。
序列表
<110> 昆明理工大学
<120> 一种苹果酸脱氢酶基因CIMDH1及其重组表达载体
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1020
<212> DNA
<213> 担子菌YM25058(Cystofilobasidium infirmominiatum YM25058)
<400> 1
atggtcaagg ccgtcgtcat cggagccgct ggaggtatcg gccagcccct cgcgctgctc 60
atgaagacca acccgctcgt gtccgagctc gccctgtacg acgtcgtcaa cgccccgggt 120
gtcgcgaccg acctgtcgca catcgacacg ccggcccagg tgacgggcta cctgcccgcc 180
gacggcgggc tcgagaaggc cctcaagggc gccaagattg tcgtcatccc cgccggtgtc 240
ccccgcaagc ctggcatgac ccgcgacgac ctcttcaaga tcaacgccgg catctgccgc 300
gacctcgcaa agggcatcgc cgcccactgc cccgacgcct tcacgctcgt catctcgaac 360
cccgtcaact cgaccgtgcc cgtctttgca gaggtcttca aggccgccgg cgtgtacgac 420
gccaagaagc tctttggtgt gacgacgctc gacgtcgtcc gctcgtcgac gttcgtcgcc 480
gccatcagcg gccagcccga gaaggcgacc gagtacacga tcccggtcat cggcggccac 540
tctggcgtga cgatcgtccc cctgctctcg cagtccgtcc cggccctgcc cgaggctgtc 600
ctcaacgaca aggctaagct ggccgagctc gtcaagcgca tccagttcgg cggcgacgag 660
gtcgtcaagg ccaaggacgg cgcgggttct gcgacgctct cgatggccta cgccggcgcc 720
aagtttgcga cgctcgtcct gcgcgccgtc gtcggcggcg agacggggct cgtctcgccc 780
tcttacgtct cgctctcggc cgacgccgag ggcggcaagg ccgtcgccgg cgaggtcggc 840
aaggacctcg agttcttctc ggtcaaggtc gagctcggcg ccgccggcat caccaagatc 900
ctgcccatcg ggtcgctctc ggccgaggag aaggacctgc tcgccgcctg cgtccccgag 960
ctcgagggca gcatcgccaa gggcgtctct ttcatcaagg acgccgactc caagctctag 1020
<210> 2
<211> 339
<212> PRT
<213> 担子菌YM25058(Cystofilobasidium infirmominiatum YM25058)
<400> 2
Met Val Lys Ala Val Val Ile Gly Ala Ala Gly Gly Ile Gly Gln Pro
1 5 10 15
Leu Ala Leu Leu Met Lys Thr Asn Pro Leu Val Ser Glu Leu Ala Leu
20 25 30
Tyr Asp Val Val Asn Ala Pro Gly Val Ala Thr Asp Leu Ser His Ile
35 40 45
Asp Thr Pro Ala Gln Val Thr Gly Tyr Leu Pro Ala Asp Gly Gly Leu
50 55 60
Glu Lys Ala Leu Lys Gly Ala Lys Ile Val Val Ile Pro Ala Gly Val
65 70 75 80
Pro Arg Lys Pro Gly Met Thr Arg Asp Asp Leu Phe Lys Ile Asn Ala
85 90 95
Gly Ile Cys Arg Asp Leu Ala Lys Gly Ile Ala Ala His Cys Pro Asp
100 105 110
Ala Phe Thr Leu Val Ile Ser Asn Pro Val Asn Ser Thr Val Pro Val
115 120 125
Phe Ala Glu Val Phe Lys Ala Ala Gly Val Tyr Asp Ala Lys Lys Leu
130 135 140
Phe Gly Val Thr Thr Leu Asp Val Val Arg Ser Ser Thr Phe Val Ala
145 150 155 160
Ala Ile Ser Gly Gln Pro Glu Lys Ala Thr Glu Tyr Thr Ile Pro Val
165 170 175
Ile Gly Gly His Ser Gly Val Thr Ile Val Pro Leu Leu Ser Gln Ser
180 185 190
Val Pro Ala Leu Pro Glu Ala Val Leu Asn Asp Lys Ala Lys Leu Ala
195 200 205
Glu Leu Val Lys Arg Ile Gln Phe Gly Gly Asp Glu Val Val Lys Ala
210 215 220
Lys Asp Gly Ala Gly Ser Ala Thr Leu Ser Met Ala Tyr Ala Gly Ala
225 230 235 240
Lys Phe Ala Thr Leu Val Leu Arg Ala Val Val Gly Gly Glu Thr Gly
245 250 255
Leu Val Ser Pro Ser Tyr Val Ser Leu Ser Ala Asp Ala Glu Gly Gly
260 265 270
Lys Ala Val Ala Gly Glu Val Gly Lys Asp Leu Glu Phe Phe Ser Val
275 280 285
Lys Val Glu Leu Gly Ala Ala Gly Ile Thr Lys Ile Leu Pro Ile Gly
290 295 300
Ser Leu Ser Ala Glu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Ala Cys Val Pro Glu
305 310 315 320
Leu Glu Gly Ser Ile Ala Lys Gly Val Ser Phe Ile Lys Asp Ala Asp
325 330 335
Ser Lys Leu
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 3
tcggatccat ggtcaaggcc gtcgtcat 28
<210> 4
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 4
gtctcgagga gcttggagtc ggcgtc 26
Claims (2)
1.一种苹果酸脱氢酶基因CIMDH1,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种含有权利要求1所述苹果酸脱氢酶基因CIMDH1的重组表达载体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810492054.2A CN108753802B (zh) | 2018-05-22 | 2018-05-22 | 一个苹果酸脱氢酶基因cimdh1及其重组表达载体 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810492054.2A CN108753802B (zh) | 2018-05-22 | 2018-05-22 | 一个苹果酸脱氢酶基因cimdh1及其重组表达载体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108753802A CN108753802A (zh) | 2018-11-06 |
CN108753802B true CN108753802B (zh) | 2021-07-16 |
Family
ID=64007713
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810492054.2A Active CN108753802B (zh) | 2018-05-22 | 2018-05-22 | 一个苹果酸脱氢酶基因cimdh1及其重组表达载体 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108753802B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109666683B (zh) * | 2019-02-27 | 2021-10-29 | 昆明理工大学 | 乙酰辅酶A乙酰转移酶基因RKAcaT2及其应用 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103003298A (zh) * | 2010-06-04 | 2013-03-27 | 诺维信股份有限公司 | 在丝状真菌中产生c4二羧酸 |
CN103492551A (zh) * | 2011-02-28 | 2014-01-01 | 诺维信股份有限公司 | 用于生产c4-二羧酸的微生物 |
CN104673809A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-06-03 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因及其重组表达载体 |
CN104673810A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-06-03 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因mimdh1及其重组表达载体 |
JP2015130808A (ja) * | 2014-01-10 | 2015-07-23 | 株式会社ダイセル | 発酵性基質から高い選択率でアルキルジオールを生成する組換え微生物及びその利用 |
CN105296509A (zh) * | 2015-11-16 | 2016-02-03 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因rkmdh2及其重组表达载体 |
CN105838724A (zh) * | 2016-04-25 | 2016-08-10 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因rgmdh1及其重组表达载体 |
CN105886517A (zh) * | 2016-04-25 | 2016-08-24 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因rkmdh1及其重组表达载体 |
CN107109347A (zh) * | 2014-12-19 | 2017-08-29 | 诺维信公司 | 用于生产3‑羟基丙酸的重组宿主细胞 |
EP3257934A1 (en) * | 2015-02-15 | 2017-12-20 | Tianjin Institute Of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences | New dibasic organic acid producing strain and preparation and application of same |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX2013001071A (es) * | 2010-07-26 | 2013-06-28 | Genomatica Inc | Microorganismos y metodos para la biosintesis de aromaticos, 2, 4-pentadienoato y 1, 3-butadieno. |
CN106190921B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-07-26 | 天津科技大学 | 一种谷氨酸棒状杆菌与应用 |
CN106434772B (zh) * | 2016-09-09 | 2019-05-21 | 北京化工大学 | 一株生产l-苹果酸的基因工程菌及其构建方法和应用 |
CN107287222B (zh) * | 2017-07-20 | 2020-07-10 | 昆明理工大学 | 一种组氨酸激酶基因Hisk2301的用途 |
CN107841526A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-03-27 | 北华大学 | 一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒 |
CN109337879B (zh) * | 2018-12-21 | 2021-01-26 | 厦门大学 | 一种苹果酸脱氢酶PbMDH及其编码序列和应用 |
-
2018
- 2018-05-22 CN CN201810492054.2A patent/CN108753802B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103003298A (zh) * | 2010-06-04 | 2013-03-27 | 诺维信股份有限公司 | 在丝状真菌中产生c4二羧酸 |
CN103492551A (zh) * | 2011-02-28 | 2014-01-01 | 诺维信股份有限公司 | 用于生产c4-二羧酸的微生物 |
JP2015130808A (ja) * | 2014-01-10 | 2015-07-23 | 株式会社ダイセル | 発酵性基質から高い選択率でアルキルジオールを生成する組換え微生物及びその利用 |
CN107109347A (zh) * | 2014-12-19 | 2017-08-29 | 诺维信公司 | 用于生产3‑羟基丙酸的重组宿主细胞 |
CN104673809A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-06-03 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因及其重组表达载体 |
CN104673810A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-06-03 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因mimdh1及其重组表达载体 |
EP3257934A1 (en) * | 2015-02-15 | 2017-12-20 | Tianjin Institute Of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences | New dibasic organic acid producing strain and preparation and application of same |
CN105296509A (zh) * | 2015-11-16 | 2016-02-03 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因rkmdh2及其重组表达载体 |
CN105838724A (zh) * | 2016-04-25 | 2016-08-10 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因rgmdh1及其重组表达载体 |
CN105886517A (zh) * | 2016-04-25 | 2016-08-24 | 昆明理工大学 | 一种苹果酸脱氢酶基因rkmdh1及其重组表达载体 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
"Malate dehydrogenase: A model for structure, evolution, and catalysis";CHRISTOPHER R. GOWARD等;《Protein Science》;19941031;第1883-1888页 * |
"nad-malate dehydrogenase [Phaffia rhodozyma]";Sharma,Rahul.等;《Genbank Database》;20150509;Accession No:CED85321.1 * |
"New role for glyoxylate cycle enzymes in wood-rotting basidiomycetes in relation to biosynthesis of oxalic acid";Erman Munir等;《J Wood Sci》;20011001(第47期);第368-373页 * |
"Trichosporon asahii var. asahii CBS 2479 L-malate dehydrogenase partial mRNA";Yang,R.Y.等;《Genbank Database》;20150924;Accession No:XM_014325730.1 * |
"苹果酸脱氢酶的结构及功能";汪新颖等;《生物学杂志》;20090831;第26卷(第4期);第69页左栏第1段 * |
"过量表达苹果酸脱氢酶对大肠杆菌NZN111产丁二酸的影响";梁丽亚等;《生物工程学报》;20110725;第27卷(第7期);第1005-1012页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108753802A (zh) | 2018-11-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104673810B (zh) | 一种苹果酸脱氢酶基因mimdh1及其重组表达载体 | |
CN109609474A (zh) | 一种氨基酸脱氢酶突变体及其在合成l-草铵膦中的应用 | |
CN106929521B (zh) | 一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用 | |
CN109055327A (zh) | 醛酮还原酶突变体及其应用 | |
CN104673809B (zh) | 一种苹果酸脱氢酶基因及其重组表达载体 | |
JP5867586B2 (ja) | 炭化水素合成酵素遺伝子及びその利用 | |
CN107177607A (zh) | 枯草芽孢杆菌bs04的尿酸氧化酶基因及其用途 | |
CN105296509B (zh) | 一种苹果酸脱氢酶基因rkmdh2及其重组表达载体 | |
US20180009855A1 (en) | Gene for biosynthesis of core structure of ophiobolin | |
CN108998462B (zh) | 含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达***及其应用方法 | |
CN105838724B (zh) | 一种苹果酸脱氢酶基因rgmdh1及其重组表达载体 | |
US20170211104A1 (en) | Biosynthetic production of acetaminophen, p-aminophenol, and p-aminobenzoic acid | |
CN103114110A (zh) | 利用固定化酶合成胆红素的方法 | |
CN108753802B (zh) | 一个苹果酸脱氢酶基因cimdh1及其重组表达载体 | |
CN103103234A (zh) | 利用固定化酶合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的方法 | |
CN109337879B (zh) | 一种苹果酸脱氢酶PbMDH及其编码序列和应用 | |
CN105349557B (zh) | 一种苹果酸酶基因rkme2及其重组表达载体 | |
CN105886517B (zh) | 一种苹果酸脱氢酶基因rkmdh1及其重组表达载体 | |
CN114934062B (zh) | 一种高效表达d-阿洛酮糖3-差向异构酶的工程菌及应用 | |
Qi et al. | Molecular cloning, co-expression, and characterization of glycerol dehydratase and 1, 3-propanediol dehydrogenase from Citrobacter freundii | |
CN113355366B (zh) | 一种多酶级联制备2-苯乙醇的方法 | |
CN115873881A (zh) | 一种产1,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 | |
CN101864448A (zh) | 大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质研究 | |
WO2018121129A1 (zh) | 羰基还原酶寡聚体及其在手性醇合成中的应用 | |
CN104673808B (zh) | 一种苹果酸酶基因及其重组表达载体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |