CN108587191A - 一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法 - Google Patents

一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108587191A
CN108587191A CN201810477824.6A CN201810477824A CN108587191A CN 108587191 A CN108587191 A CN 108587191A CN 201810477824 A CN201810477824 A CN 201810477824A CN 108587191 A CN108587191 A CN 108587191A
Authority
CN
China
Prior art keywords
silk
fibroin
hyaluronic acid
network hydrogel
interpenetration network
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810477824.6A
Other languages
English (en)
Inventor
肖文谦
周桢凡
陈琳
李加乐
谭云飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing University of Science and Technology
Original Assignee
Chongqing University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing University of Science and Technology filed Critical Chongqing University of Science and Technology
Priority to CN201810477824.6A priority Critical patent/CN108587191A/zh
Publication of CN108587191A publication Critical patent/CN108587191A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
    • C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
    • C08J3/075—Macromolecular gels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/28—Treatment by wave energy or particle radiation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2389/00—Characterised by the use of proteins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2405/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2401/00 or C08J2403/00
    • C08J2405/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Processes Of Treating Macromolecular Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法。所述方法以高弹性丝蛋白、改性的透明质酸为基本原料，采用超声、光交联方法制备出丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶，制得的水凝胶结构稳定性和机械性能好，可改善现有水凝胶溶胀性能差、生物降解难以满足组织工程要求等问题。

Description

一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法
技术领域
本发明属于组织工程材料领域，特别涉及一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法。
背景技术
关节软骨损伤是临床常见的疑难杂症之一。关节软骨受其自身生理结构所限，损伤后常不能自行修复。目前临床上对关节软骨损伤治疗的方法虽有一定短期疗效，但都是以纤维软骨修复为主，缺少正常透明软骨的力学性能和耐用性，因而通常修复效果较差，难以获得满意的远期临床效果。
软骨组织工程给软骨损伤的治疗提供了一种新方法。软骨组织工程是在体外将种子细胞包埋或种植到三维支架中，通过细胞的粘附、增殖、分化等途径，构建出结构与生理特性与软骨组织类似的组织，再移植到软骨缺损部位进行修复治疗。理想的组织工程支架应该尽可能地模仿细胞外基质的成分和结构。
水凝胶作为用于软组织修复的纤维材料具有若干优点。但是单纯的水凝胶材料稳定性和机械性能普遍较差、溶胀性能差、难以降解，传统的丝蛋白-透明质酸复合材料的制备过程都普遍存在很难回避有毒交联剂的影响，以及材料的力学性能较差等问题。
考虑到传统方法各种问题，组织工程材料领域仍然需要改善的解决手段来愈合软组织缺损。
发明内容
针对现有技术存在问题，本发明的目的在于提供一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法。该方法以高弹性丝蛋白、改性的透明质酸为基本原料，采用超声、光交联方法制备出丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶，制得的水凝胶结构稳定性和机械性能好，可改善现有水凝胶溶胀性能差、生物降解难以满足组织工程要求等问题。
为实现上述发明目的，具体提供了如下所述的技术方案：
1、一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
1)将丝蛋白、改性的透明质酸和光引发剂的混合物在20-37℃温度条件下微震荡达到均匀状态；
2)将步骤1)所得混合物进行超声处理，然后及时吸入至模具中；
3)将步骤2)所述模具放在紫外光下进行光交联成胶，然后放置在37℃恒温箱中，制得丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶。
优选的，按质量份数计，步骤1)所述丝蛋白、改性的透明质酸、光引发剂分别为86-99份；1～14份；0.5份。
进一步优选的，所述透明质酸用甲基丙烯酸酐改性。
优选的，所述光引发剂为2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮、苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)磷酸锂盐中的一种或几种。
优选的，所述步骤2)中，超声前所述混合物为液体状态，超声后混合物变为半液体状态。
优选的，所述步骤2)超声时间为15-25s，保持温度为25-37℃。
优选的，步骤2)所述模具为直径1cm,高度4mm的圆柱形硅胶模具或24孔板。
优选的，所述步骤3)在紫外光下进行光交联时间为15-25s，所述紫外光光源波长：320-500nm，紫外点光源功率：7.0mW/cm2。
2、根据所述的可光交联的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法制得的可光交联的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶，所述水凝胶微观呈疏松多孔的蜂窝状的结构。
进一步，所述可光交联的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的断裂应变在65％-80％范围内，弹性模量在20-200kPa范围内，24小时的溶胀率在13～16范围内。
本发明的有益效果在于：本发明公开的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法中，通过在丝蛋白溶液中加入改性的透明质酸溶液，可有效地增强丝蛋白水凝胶的溶胀性能以及为丝蛋白水凝胶提供必要的生物响应机制以满足组织构建的需求，并且制得的水凝胶结构稳定性和机械性能好，可改善现有水凝胶溶胀性能差、生物降解难以满足组织工程要求等问题，对软骨组织工程支架材料设计与制备具有重要指导意义和参考价值。
附图说明
图1为根据本发明实施例1制备的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的x200倍电镜图片；
图2为根据本发明实施例1制备的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的力学性能图片。
具体实施方式
下面将结合具体实施例和附图对本发明做详细说明。
以下实施例所使用的透明质酸均使用甲基丙烯酸酐进行改性，具体操作步骤为：
称取2g分子量为20-40万道尔顿的透明质酸钠溶解于100mL二次去离子水中，在室温下用磁力搅拌器匀速搅拌，待溶解完全后，缓慢滴入2mL(滴加速率：1ml/每分钟)的甲基丙烯酸酐溶液。滴加完全后在4℃环境中磁力搅拌反应24小时，此过程中用1mol/L的NaOH溶液不断调节溶液pH为8。
反应结束后，将得到的产物装入截留分子量为3500D的透析袋中，置于二次去离子水中在4℃下透析3天，每天更换去离子水6次。透析完成后将所得的透明质酸溶液冷冻干燥处理以作为改性透明质酸备用。
实施例1
一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶按如下方法进行制备：
1)按质量份数计，以分别为86份；1份；0.5份的丝蛋白、甲基丙烯酸酐改性的透明质酸和2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮的混合物在20℃温度条件下微震荡达到液体均匀状态；
2)将步骤1)所得混合物在FS-150N超声波处理器里进行超声15s得到半液体状态，然后及时将超声过的材料吸入24孔板中；
3)将步骤2)所得24孔板放入紫外点光源仪器(紫外光光源波长：320-500nm，紫外点光源功率：7.0mW/cm2)中进行光交联25s，然后放置在37℃恒温箱中，制得高弹性丝蛋白-透明质酸互穿网络可光交联水凝胶材料。
将通过实施例1得到的水凝胶材料进行电镜照射，得到如图1所示的x20倍电镜图片，由图1显示本实施例制备的水凝胶材料微观呈现疏松多孔的蜂窝状的结构，具有很高的孔隙率。
进一步对本实施例制备的材料进行力学性能测试，如图2所示，制得的水凝胶成品断裂应变75％-80％范围内，弹性模量在20-200kPa范围内,溶胀率(24h)在13～16范围内。
实施例2
一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶按如下方法进行制备：
1)按质量份数计，以分别为95份；5份；0.5份的丝蛋白、甲基丙烯酸酐改性的透明质酸和苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)磷酸锂盐的混合物在20℃温度条件下微震荡达到液体均匀状态；
2)将步骤1)所得混合物在FS-150N超声波处理器里进行超声25s得到半液体状态，然后及时将超声过的材料吸入24孔板中；
3)将步骤2)所得24孔板放入紫外点光源仪器(紫外光光源波长：320-500nm，紫外点光源功率：7.0mW/cm2)中进行光交联20s，然后放置在37℃恒温箱中，制得高弹性丝蛋白-透明质酸互穿网络可光交联水凝胶材料。
实施例3
一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶按如下方法进行制备：
1)按质量份数计，以分别为90份；10份；0.5份的丝蛋白、甲基丙烯酸酐改性的透明质酸和苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)磷酸锂盐的混合物在20℃温度条件下微震荡达到液体均匀状态；
2)将步骤1)所得混合物在FS-150N超声波处理器里进行超声25s得到半液体状态，然后及时将超声过的材料吸入24孔板中；
3)将步骤2)所得24孔板放入紫外点光源仪器(紫外光光源波长：320-500nm，紫外点光源功率：7.0mW/cm2)中进行光交联20s，然后放置在37℃恒温箱中，制得高弹性丝蛋白-透明质酸互穿网络可光交联水凝胶材料。
按照实施例1所述的检测方式，分别对实施例2以及实施例3所得样品进行测试，实施例2、3所得样品的x200倍电镜图片同样呈现疏松多孔的蜂窝状的结构，具有很高的孔隙率。断裂应变在75％-80％范围内，弹性模量在90-200kPa范围内,溶胀率(24h)为14-16内。
对比实施例
1)按质量份数计，以分别为100份；0.5份的丝蛋白和2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮的混合物在20℃温度条件下微震荡达到液体均匀状态；
2)将步骤1)所得混合物在FS-150N超声波处理器里进行超声15s得到半液体状态，然后及时将超声过的材料吸入24孔板中；
3)将步骤2)所得24孔板放入紫外点光源仪器(紫外光光源波长：320-500nm，紫外点光源功率：7.0mW/cm2)中进行光交联25s，然后放置在37℃恒温箱中，制得高弹性丝蛋白-透明质酸互穿网络可光交联水凝胶材料。
按照实施例1所述的检测方式，对对比实施例所得样品进行测试，对比实施例所得样品的断裂应变在20％-25％范围内，弹性模量在20-30kPa范围内,溶胀率(24h)为10-12范围内。
由以上实施例可论证，通过加入甲基丙烯酸酐改性的透明质酸制备出的高弹性丝蛋白-透明质酸互穿网络可光交联水凝胶材料，可改善原有的纯丝蛋白水凝胶材料中溶胀性能差、难易降解等特性和为丝蛋白水凝胶提供必要的生物响应机制以满足组织构建的需求，按照本发明所述制备方法制备的材料为高弹性丝蛋白-透明质酸互穿网络可光交联水凝胶材料。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将丝蛋白、改性的透明质酸和光引发剂的混合物在20-37℃温度条件下微震荡达到均匀状态；
2)将步骤1)所得混合物进行超声处理，然后及时吸入至模具中；
3)将步骤2)所述模具放在紫外光下进行光交联成胶，然后放置在37℃恒温箱中，制得丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶。
2.根据权利要求1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：按质量份数计，步骤1)所述丝蛋白、改性的透明质酸、光引发剂分别为86-99份；1～14份；0.5份。
3.根据权利要求1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：所述透明质酸用甲基丙烯酸酐改性。
4.根据权利要求1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：所述光引发剂为2-羟基-4′-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮、苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)磷酸锂盐中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，超声前所述混合物为液体状态，超声后混合物变为半液体状态。
6.根据权利要求1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤2)超声时间为15-25s，保持温度为25-37℃。
7.根据权利要求1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤2)所述模具为直径1cm,高度4mm的圆柱形硅胶模具或24孔板。
8.根据权利1所述一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤3)在紫外光下进行光交联时间为15-25s，所述紫外光光源波长：320-500nm，紫外点光源功率：7.0mW/cm2。
9.根据权利要求1～8任一项所述的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的制备方法制得的丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶，其特征在于，所述水凝胶微观呈疏松多孔的蜂窝状的结构。
10.根据权利要求9所述丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶，其特征在于，所述丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶的断裂应变在65％-80％范围内，弹性模量在20-200kPa范围内，24小时的溶胀率在13～16范围内。
CN201810477824.6A 2018-05-18 2018-05-18 一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法 Pending CN108587191A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810477824.6A CN108587191A (zh) 2018-05-18 2018-05-18 一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810477824.6A CN108587191A (zh) 2018-05-18 2018-05-18 一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108587191A true CN108587191A (zh) 2018-09-28

Family

ID=63631867

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810477824.6A Pending CN108587191A (zh) 2018-05-18 2018-05-18 一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108587191A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109810267A (zh) * 2019-01-31 2019-05-28 重庆科技学院 一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法
CN110093041A (zh) * 2019-05-17 2019-08-06 青岛大学 一种乙酰化改性蚕丝蛋白/细菌纤维素复合水凝胶膜及其制备方法
CN110607076A (zh) * 2019-09-26 2019-12-24 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种基于丝素蛋白和透明质酸的3d打印材料制备方法
CN114949346A (zh) * 2022-04-24 2022-08-30 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 用于软骨修复的3d打印功能化丝素蛋白/透明质酸支架
CN115260527A (zh) * 2022-07-08 2022-11-01 浙江工业大学 一种光固化丝素/透明质酸水凝胶及其制备方法与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104004231A (zh) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 一种生物大分子互穿网络水凝胶及其制备方法
CN106492279A (zh) * 2016-11-04 2017-03-15 武汉纺织大学 一种丝素蛋白‑透明质酸复合凝胶的快速制备方法
CN107899075A (zh) * 2017-10-20 2018-04-13 浙江大学 一种基于特异性相互作用的自组装水凝胶及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104004231A (zh) * 2014-06-12 2014-08-27 东南大学 一种生物大分子互穿网络水凝胶及其制备方法
CN106492279A (zh) * 2016-11-04 2017-03-15 武汉纺织大学 一种丝素蛋白‑透明质酸复合凝胶的快速制备方法
CN107899075A (zh) * 2017-10-20 2018-04-13 浙江大学 一种基于特异性相互作用的自组装水凝胶及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
姚静: "《药用辅料应用指南》", 31 August 2011, 中国医药科技出版社 *
薛巍 等: "《生物医用水凝胶》", 31 December 2012 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109810267A (zh) * 2019-01-31 2019-05-28 重庆科技学院 一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法
CN110093041A (zh) * 2019-05-17 2019-08-06 青岛大学 一种乙酰化改性蚕丝蛋白/细菌纤维素复合水凝胶膜及其制备方法
CN110607076A (zh) * 2019-09-26 2019-12-24 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种基于丝素蛋白和透明质酸的3d打印材料制备方法
CN114949346A (zh) * 2022-04-24 2022-08-30 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 用于软骨修复的3d打印功能化丝素蛋白/透明质酸支架
CN115260527A (zh) * 2022-07-08 2022-11-01 浙江工业大学 一种光固化丝素/透明质酸水凝胶及其制备方法与应用
CN115260527B (zh) * 2022-07-08 2023-09-29 浙江工业大学 一种光固化丝素/透明质酸水凝胶及其制备方法与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108587191A (zh) 一种丝蛋白/透明质酸互穿网络水凝胶及其制备方法
CN108047465A (zh) 一种甲基丙烯酸酯明胶/壳聚糖互穿网络水凝胶、制备方法及应用
CN104056300B (zh) 一种多糖-多巴胺复合生物胶及应用
CN108653810A (zh) 一种可实现细胞包裹的丝素蛋白/明胶互穿网络水凝胶及其制备方法
CN109810267A (zh) 一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法
CN108367100A (zh) 水凝胶的光活化制备
CN109749098A (zh) 一种物理/化学双交联网络高强度明胶水凝胶及其制备方法
CN104958783A (zh) 一种天然多糖基水凝胶及制备和在眼结膜修复中的应用
CN110721346B (zh) 一种生物3d打印墨水及其制备方法
EP3083942B1 (en) Process for implementing in vitro spermatogenesis
CN113101419A (zh) 一种具有聚多巴胺涂层的水凝胶支架及其制备方法
CN110834411B (zh) 负载细胞的三维泡状石墨烯-PEGDA-GelMA光固化生物材料、制备方法和应用
CN107638590B (zh) 一种壳聚糖基梯度仿生复合支架材料及其构建方法
CN106220874B (zh) 复合水凝胶的制备方法与应用、复合水凝胶修复材料及其制备方法
Heichel et al. Silk fibroin reactive inks for 3D printing crypt-like structures
CN114796617A (zh) 一种复合3d打印墨水及其应用
Hu et al. 3D printing GelMA/PVA interpenetrating polymer networks scaffolds mediated with CuO nanoparticles for angiogenesis
CN105770983B (zh) 一种透明质酸生物粘合剂的制备方法
Jia et al. Preparation and characterization of polylactic acid/nano hydroxyapatite/nano hydroxyapatite/human acellular amniotic membrane (PLA/nHAp/HAAM) hybrid scaffold for bone tissue defect repair
CN110075346A (zh) 一种高粘附性水凝胶敷料及其制备方法
CN102327643B (zh) 一种用于骨组织再生的生物支架
CN108822308A (zh) 一种蚕丝微米纤维增强仿生水凝胶及其制备方法
CN109880011A (zh) 一种关节软骨浅表层修复用高效自修复水凝胶及其制备方法
JP4989108B2 (ja) 血管平滑筋細胞の培養方法、培養器材および培養によって得られる医療用材料
CN108686266A (zh) 一种三维多孔微支架组装单元的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180928