CN108504584A - 一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基及应用 - Google Patents

一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，该培养基是以含有多种抑制物成分的木质纤维素预处理液为基质，并添加适合木糖代谢菌株生长的酵母粉、蛋白胨和木糖构成。本发明的培养基适用于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母对多种预处理抑制物的耐受性，利于筛选对预处理抑制物耐受能力增强的葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母菌，与现有单纯添加一种抑制物成分的筛选培养基相比，本发明的培养基可大大提高高耐性酿酒酵母的筛选效率。

Description

一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑 制物的培养基及应用
技术领域
本发明涉及一种筛选培养基及其应用，尤其涉及一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基及应用，属于微生物技术领域。
背景技术
农作物秸秆被随意丢弃和焚烧，造成了资源浪费，也是近年来雾霾天气形成的重要原因之一。将秸秆中木质纤维素转化成清洁能源如燃料乙醇具有广阔应用前景。木质纤维素原料主要由纤维素、半纤维素及木质素组成，各组分之间结构稳定复杂。利用木质纤维素生产燃料乙醇等化学品主要包括原料的预处理、纤维素的酶解和糖的微生物发酵等步骤[Sun Y,Cheng J.Hydrolysis of lignocellulosic materials for ethanolproduction:a review.Bioresour Technol.2002,83(1):1–11.]，作为传统的乙醇生产菌株酿酒酵母不能直接利用纤维素、半纤维素等组分，因此需要对木质纤维素原料进行预处理和水解将其转化成酵母可直接利用的单糖，预处理技术是木质纤维素转化的关键步骤。
目前高效的纤维素预处理方法包括稀酸预处理、碱性预处理(稀碱预处理、石灰预处理和碱性过氧化氢(Alkaline Hydrogen Peroxide,AHP)预处理等)、和氨纤维膨胀(Ammonia Fiber Expansion,AFEX)预处理等。稀酸预处理后纤维素反应活性升高，聚合度(DP)下降，提供后续酶解效率，能够溶解原料中的半纤维素，增加纤维素的可及度。但是由于在高温高压下，脱除的半纤维素首先降解成木糖等单糖，然后这些五碳糖会进一步发生降解形成糠醛等。稀酸预处理产生的抑制物如糠醛、5-羟甲基糠醛(HMF)、乙酸和酚类化合物等会影响微生物生长发酵并降低乙醇得率[Almeida JRM,Modig T,Petersson A,B,Lidén G,GorwaGrauslund MF.Increased tolerance and conversionof inhibitors in lignocellulosic hydrolysates by Saccharomyces cerevisiae.JChem Technol Biotechnol.2007,82:340–349]；碱性过氧化氢(alkaline hydrogenperoxide,AHP)预处理主要是利用碱性溶液溶解木质素的性质，破坏木质素结构，切断碳水化合物和木质素之间的连接，导致木质素和半纤维素的溶出和脱除，该方法更有利于随后酶解过程糖的释放，并且不产生呋喃醛类抑制物[Saha BC,Cotta MA.Comparison ofpretreatment strategies for enzymatic saccharification and fermentation ofbarley straw to ethanol.New Biotechnol.2010,27:10-15.]，获得更高的发酵糖得率[Banerjee G,Car S,Scott-Craig JS,Borrusch MS,Walton JD.Rapid optimization ofenzyme mixtures for deconstruction of diverse pretreatment/biomass feedstockcombinations.Biotechnol Biofuels.2010,3:22.]，但会产生阿魏酸、对香豆酸、乙酸及Na+等抑制物[Banerjee G,Car S,Liu T,Williams DL,Meza SL,Walton JD,HodgeDB.Scale-up and integration of alkaline hydrogen peroxide pretreatment,enzymatic hydrolysis,and ethanolic fermentation.Biotechnol Bioeng.2012,109(4):922-931.]；AFEX预处理是利用氨来分解植物纤维素和半纤维素，将生物质用浓氨进行加热(约100℃)，维持一定时间后突然开阀释压，氨因压力突然降低而政法进入生物质内，从而使纤维素发生溶胀，也会产生乙酰胺、阿魏酸酰胺、香豆酰胺等多种损害酿酒酵母木糖代谢的抑制性小分子[Chundawat SP,Vismeh R,Sharma LN,Humpula JF,da Costa SousaL,Chambliss CK,Jones AD,Balan V,Dale BE.Multifaceted characterization of cellwall decomposition products formed during ammonia fiber expansion(AFEX)anddilute acid based pretreatments.Bioresour Technol.2010,101(21):8429–8438.]。这些抑制物可能会抑制发酵过程中微生物的生长，进而影响下游代谢[van der Pol EC,Bakker RR,Baets P,Eggink G.By-products resulting from lignocellulosepretreatment and their inhibitory effect on fermentations for(bio)chemicalsand fuels.Appl Microbiol Biotechnol.2014,98(23):9579–9593.]，这也是限制纤维乙醇工业化生产的原因之一[Palmqvist E,Hahn- B.Fermentation oflignocellulosic hydrolysates.I:inhibition anddetoxification.Bioresour.Technol.2000,74(1):17–24.]。
酿酒酵母是传统的乙醇发酵菌株，与其他潜在的乙醇生产菌株相比(如Anaerobicbacteria、Escherichia coli、Zymomonas mobilis、Scheffersomyces stipitis、Filamentous fungi等)，具有较高的葡萄糖发酵乙醇得率且对多种乙醇工业生产条件下存在的抑制因素具有较好的耐受性，因此也更加适合以木质纤维素生物质为原料的二代燃料乙醇的生产。然而，与利用淀粉质原料生产乙醇相比，生产二代燃料乙醇的酿酒酵母面临诸多新的困难。首先天然酿酒酵母不能代谢木糖生产乙醇，其次木质纤维素原料水解液中存在大量对酿酒酵母生长和发酵起抑制性作用的化合物。因此，通过基因工程等手段构建高效共发酵葡萄糖和木糖且具有较高抑制物耐受性的菌株是二代燃料乙醇经济规模生产的必要前提。但是，水解液中多种抑制物对酿酒酵母菌株的作用机理非常复杂且目前对酵母抑制物耐受性的响应机制了解不够透彻，为通过理性基因工程的方法有效提高其抑制物耐受性带来困难。因此，获得高抑制物耐受性提高的能共发酵葡萄糖和木糖的工业酵母对于纤维素乙醇的发展和推广至关重要，对木质纤维素高效转化利用具有良好的工业化应用潜力和开发前景。
目前，利用代谢工程和进化工程，通过基因工程手段已获得能够高效共利用葡萄糖和木糖生产乙醇的菌株，如本发明实施例中所使用出发菌株(保藏编号为CGMCCNo.11331)，其发酵混合糖(80g L-1葡萄糖和40g L-1木糖)，可在16h内耗尽全部糖分，糖醇转化率为0.475g g-1，达到理论值的93％[Li H,Shen,Wu M,Hou J,Jiao C,Li Z,Liu X,BaoX.Engineering a wild-type diploid Saccharomyces cerevisiae strain for second-generation bioethanol production.Bioresour Bioprocess.2016,3(1):51.]。但是，对水解液中抑制物的耐受性仍有待提高。目前，多数提高酵母耐受性的研究主要是利用含有单一成分抑制物的酵母培养基进行筛选，最终获得耐受性提高的菌株在未脱毒水解液中往往还是不能较好地生长。现有的对抑制物耐受能力提高的酿酒酵母往往只对一种或某一类抑制物表现出一定的耐受性，很难获得同时耐受几类抑制物的酿酒酵母。鉴于此，开发一种高效的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基具有重要意义，其有助于快速提高高耐性酿酒酵母的筛选效率。经检索，目前国内外还鲜见有关高效的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物培养基的报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基及应用。
本发明所述适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，该培养基是以含有多种抑制物成分的木质纤维素预处理液为基质，并添加适合木糖代谢菌株生长的酵母粉、蛋白胨和木糖构成；
其特征在于：
所述木质纤维素预处理液是稀酸预处理木质纤维素或是碱性过氧化氢(AHP)预处理木质纤维素制得的pH为4.5～5.5的木质纤维素预处理液；所述添加酵母粉、蛋白胨和木糖的量是：8～12g/L酵母粉，18～22g/L蛋白胨，15～30g/L木糖。
上述的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基中：优选的培养基配方是：以木质纤维素预处理液为基质，添加酵母粉、蛋白胨和木糖的量是：10g/L酵母粉，20g/L蛋白胨，20g/L木糖。
其中，
所述稀酸预处理木质纤维素制得木质纤维素预处理液的方法是：配制质量分数为1.0％的稀硫酸溶液，作为稀酸预处理的蒸煮液，将木质纤维素粉碎至20～80目并与蒸煮液以料液重量比1:10混合均匀，然后放入钢罐中密封，再将钢罐放入蒸煮锅中，并向蒸煮锅中加水，使水没过放于蒸煮锅中的钢罐上端，将蒸煮锅密封后置于170±5℃温度下保温反应25～30min，反应结束后立即将钢罐取出，放入凉水中使钢罐的温度降到室温，开盖常规法固液分离，所得液体即为稀酸预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液；
所述碱性过氧化氢(AHP)预处理木质纤维素制得木质纤维素预处理液的方法是：将木质纤维素粉碎至20～80目，加入到NaOH溶液中，搅拌均匀，然后加入H2O2搅拌均匀，使制得的混合反应液中NaOH加量为0.1g/g木质纤维素，H2O2加入量为0.0999g/g木质纤维素，料液比为0.15g/ml，调节pH至11.5～11.7，然后置于温度30±2℃、转速200±20rpm条件下，保温反应24～30小时，反应后常规法固液分离，所得液体即为碱性过氧化氢预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液。
上述木质纤维素原料优选为：粉碎后的玉米芯、玉米秸秆、小麦秸秆、棉花秸秆、甜高粱秸秆、水稻秸秆、油菜秸秆、甘蔗渣、甘薯渣、木屑、废纸和或柳枝稷。
上述稀酸预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液中至少含有抑制物——糠醛、羟甲基糠醛和乙酸。
上述碱性过氧化氢预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液中至少含有抑制物——阿魏酸和对香豆酸。
本发明所述适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基在筛选对预处理抑制物耐受能力增强的葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母菌中的应用。
本发明所述适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基在提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母对多种预处理抑制物耐受能力中的应用。
本发明还公开上述培养基非常适合作为葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受预处理抑制物的筛选培养基，可大大提高高耐性酿酒酵母的筛选效率。
现有筛选培养基一般包括单一成分抑制物，最终获得耐受性提高的菌株在未脱毒水解液中往往还是不能较好地生长。现有的对抑制物耐受能力提高的酿酒酵母往往只对一种或某一类抑制物表现出一定的耐受性，很难获得同时耐受几类抑制物的酿酒酵母，鉴于此，直接利用未脱毒预处理水解液作为基质，配制葡萄糖木糖共发酵菌株能够生长的培养基，是提高高耐性葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母的筛选效率的关键。
本发明通过对常规筛选培养基的组分和含量进行适当的改变，经过实验筛选和验证，最终确定培养基的各组分和最佳含量，从而完成了本发明。实验结果表明，本发明的培养基适合作为提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母对多种预处理抑制物的耐受能力的筛选培养基，可大大提高高耐性酿酒酵母的筛选效率。
附图说明
图1为实施例2中出发菌株在YPX平板、(YPX+AHP)平板和(YPX+酸性预处理)平板上的生长情况。
其中：A：出发菌株在YPX平板和(YPX+AHP)平板上的生长情况；B：出发菌株在YPX和(YPX+酸性预处理)平板上的生长情况。
图2为实施例2中出发菌株在YPX和(YPX+AHP)液体培养基中的生长对比曲线。
图3为实施例3中出发菌株和利用常压室温等离子体(Atmospheric and RoomTemperature Plasma，ARTP)装置诱变所得各编号菌株在YPX和(YPX+AHP)平板上的梯度生长实验。
图4为实施例3中出发菌株和利用常压室温等离子体(Atmospheric and RoomTemperature Plasma，ARTP)装置诱变所得1号菌株在YPX和(YPX+AHP)液体培养基中的生长情况对比曲线。
图5为实施例4中出发菌株和利用常压室温等离子体(Atmospheric and RoomTemperature Plasma，ARTP)装置诱变所得1号菌株在YPX和(YPX+稀酸预处理)平板上的生长情况。
具体实施方式
下面结合实例对本发明的技术方案做进一步说明，应当理解所列实施例虽然列举了本发明优选的实施方式，但所列具体实施例仅是为了更好的阐明本发明而列出，但本发明所保护的范围不限制于所述实施例范围之内。
实施例1：含有多种预处理抑制物的筛选培养基制备
具体步骤如下：
(1)稀酸预处理玉米秸秆制得玉米秸秆预处理液：配制硫酸质量分数为1.0％的稀硫酸溶液，作为稀酸预处理的蒸煮液，将玉米秸秆(粉碎至20～80目)与蒸煮液以料液比1:10混合均匀放入1.5L的小钢罐中，密封后将小罐放入蒸煮锅中，并向蒸煮锅中加入一定量的水，使水没过放于蒸煮锅中的小罐上端，将蒸煮锅密封后设置所需的反应温度170℃并开始加热，达到温度后保温反应25min。反应结束后立即将小罐取出，放入凉水中使得小罐的温度降到室温。将小罐中的预处理液固液分离，液体即为玉米秸秆预处理液，其中含有多种抑制物，如糠醛，羟甲基糠醛，乙酸等。
(2)碱性过氧化氢(AHP)预处理玉米秸秆制得玉米秸秆预处理液：将玉米秸秆(粉碎至20～80目)加入到NaOH溶液中，搅拌均匀，然后加入H2O2搅拌均匀，使制得的混合反应液中NaOH加量为0.1g/g玉米秸秆，H2O2加入量为0.0999g/g玉米秸秆，料液比为0.15g/ml，，调节pH至11.5～11.7，然后于温度30℃、转速200rpm条件下，保温反应24小时，反应后固液分离，液体即为玉米秸秆预处理液，其中含有多种抑制物，如阿魏酸、对香豆酸等。
(3)将步骤(1)和(2)两种玉米秸秆预处理液，测定pH，然后分别利用NaOH或硫酸调pH至4.5～5.5，利用调好pH值的预处理水解液配制含有稀酸和AHP两种预处理工艺产生的抑制物的、用于筛选耐性酵母的培养基，培养基配方为：酵母粉10g/L，蛋白胨20g/L，木糖20g/L，固态培养基加入琼脂粉20g/L。
实施例2：含有稀酸和AHP预处理水解液抑制物的培养基对酵母菌生长的影响
具体步骤如下：
(1)稀释涂布实验：将经过代谢工程改造的、能高效共代谢葡萄糖和木糖的酿酒酵母工业菌株(保藏编号为CGMCC No.11331)作为本实验的出发菌株，将其接到5mL YPD(YPD培养基配方：酵母粉10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L。)中，过夜培养，取1ml菌悬液，8000r/min离心，去上清，用1mL无菌水清洗悬浮菌体，离心，去上清，调整OD600＝1.0左右，稀释1000倍，取100μL涂布到YPX平板、(YPX+稀酸预处理)平板和(YPX+AHP)平板，30℃培养3～4天，观察菌株生长情况，拍照，结果表明(如图1A和B所示)，经测定，出发菌株在YPX平板上生长良好，在(YPX+稀酸预处理)平板上生长较差，只有零星的菌落长出，在(YPX+AHP)平板上生长情况也明显比YPX平板上差。
(2)培养监测生长情况：将出发菌株接到5mLYPD中，过夜培养，取1ml菌悬液，8000r/min离心，去上清，用新鲜的培养基调整起始OD600＝1.0左右，分别接种于YPX和(YPX+AHP)液体培养基中，稀释10倍，使起始OD600＝0.1左右，30℃连续培养30小时左右，利用全自动生长曲线仪自动监测生长情况(如图2所示)。
实施例3：利用ARTP诱变技术提高酿酒酵母耐受AHP预处理玉米秸秆水解液抑制物的能力
具体步骤如下：
(1)出发菌株活化：将出发菌株接种至YPD平板，30℃倒置培养2～3天，然后接种至YPD液体中，振荡培养12h～24小时，转接菌液到新鲜的YPD中控制菌体浓度OD600＝0.1，30℃培养震荡培养数小时，控制菌体终浓度OD600＝1.0以内，作为ARTP诱变出发菌株。
(2)ARTP诱变：取1mL菌液，悬液于1.5mL EP管中，8000r/min，离心2min，弃去上清液。用生理盐水洗涤2次后，稀释制成菌体浓度在106～107之间的菌悬液，取10μL菌悬液均匀涂布于无菌的载片表面。然后将载片置于ARTP诱变育种***的载台上，置于ARTP诱变育种仪中进行诱变处理，诱变仪工作气体为99.99％高纯氦气，射频功率为100W、氦气流量为10SLM，处理时间设置为80s和120s，样品与等离子体发射源之间的距离为3mm。
(3)诱变后培养：取1mL无菌水将诱变后的酵母菌洗下，适度稀释后涂布于含高浓度AHP预处理水解液抑制物的(YPX+AHP)平板上，30℃倒置培养3～4天，诱变时间为80s的平板上有4个菌落生长，诱变时间为120s的平板上有29个菌落长出，总体而言，诱变120s比80s效果好，长出的菌落多，并且菌落较大。
(4)耐AHP预处理水解液抑制物的菌株初筛：挑选在(YPX+AHP)平板上生长较好的菌落(诱变80s的平板上挑选2个，诱变120s的平板上挑选7个)以及诱变前的出发菌株分别接种到5mL的YPD中培养，30℃过夜培养至对数生长期，离心收集菌体，用0.5mL无菌水清洗悬浮菌体，离心，再次用无菌水悬浮菌体，将其放在30℃放置10～12h，制备休止细胞。调节菌液浓度使菌悬液OD600＝1.0左右，进行10倍梯度稀释，依次取1～4μL菌悬液点滴于YPX平板和(YPX+AHP)平板，30℃培养3～4天，观察菌株生长情况，拍照，梯度生长实验结果表明(如图3所示)，只有1号菌株在YPX平板和(YPX+AHP)平板上生长表现出明显优势。
(5)耐AHP预处理水解液抑制物的菌株复筛：将(YPX+AHP)平板上长势良好的1号菌株、诱变前的出发菌株分别接种到5mL的YPD中培养，30℃过夜培养至对数生长期，用新鲜的培养基调整起始OD600＝1.0左右，分别接种于YPX和(YPX+AHP)液体培养基中，稀释10倍，使起始OD600＝0.1左右，30℃连续培养16小时左右，利用全自动生长曲线仪自动监测生长情况，结果表明(如图4所示)，1号菌株虽然在(YPX+AHP)液体培养基中生长情况依然不如在YPX中，但与诱变前的出发菌株相比，1号菌株不管是在YPX中，还是在(YPX+AHP)液体培养基中，生长均有较大程度地改善，到达稳定期的时间缩短。遗传稳定性测试：对复筛验证获得的耐AHP预处理水解液抑制物的菌株经过反复画线，分离单菌落，然后连续传代8～10代，菌株的保持耐受抑制物能力。
(6)摇瓶实验测试：将(YPX+AHP)平板上长势良好的1号菌株、诱变前的出发菌株分别接种到5mL的YPD中培养，30℃过夜培养至对数生长期，将菌液分别接种于40mL的YPX和(YPX+AHP)液体培养基中，调整起始OD600＝0.1左右，30℃连续培养，通过放大培养体积、在选择压力条件下测试生长，与出发菌株相比，1号菌株的生长在YPX中进入稳定期的时间提前了1.5h，在(YPX+AHP)液体培养基中的生长提高了20％左右。
实施例4：耐AHP预处理水解液抑制物的菌株对稀酸预处理水解液抑制物的耐受情况测试
具体步骤如下：
将实施例4所得耐AHP预处理水解液抑制物的1号菌株和出发菌株接种到5mL的YPD中，30℃过夜培养，取1ml菌悬液，8000r/min离心，去上清，用1mL无菌水清洗悬浮菌体，离心，去上清，调整OD600＝1.0左右，稀释1000倍，取100μL菌液涂布到YPX平板和(YPX+稀酸预处理)平板上，30℃培养3～4天，观察菌株生长情况，拍照，结果表明(如图5所示)，与出发菌株相比，1号菌株在(YPX+稀酸预处理)平板上的生长明显变好，说明经过ARTP诱变后，所得1号菌株对稀酸预处理水解液抑制物的耐受性提高。证明本发明所述适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基可大大提高高耐性酿酒酵母的筛选效率。

Claims (8)

1.一种适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，所述培养基是以含有多种抑制物成分的木质纤维素预处理液为基质，并添加适合木糖代谢菌株生长的酵母粉、蛋白胨和木糖构成；
其特征在于：
所述木质纤维素预处理液是稀酸预处理木质纤维素或是碱性过氧化氢(AHP)预处理木质纤维素制得的pH为4.5～5.5的木质纤维素预处理液；所述添加酵母粉、蛋白胨和木糖的量是：8～12g/L酵母粉，18～22g/L蛋白胨，15～30g/L木糖。
2.根据权利要求1所述的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，其特征在于：所述培养基以木质纤维素预处理液为基质，添加酵母粉、蛋白胨和木糖的量是：10g/L酵母粉，20g/L蛋白胨，20g/L木糖。
3.根据权利要求1或2所述的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，其特征在于，
所述稀酸预处理木质纤维素制得木质纤维素预处理液的方法是：配制质量分数为1.0％的稀硫酸溶液，作为稀酸预处理的蒸煮液，将木质纤维素粉碎至20～80目并与蒸煮液以料液重量比1:10混合均匀，然后放入钢罐中密封，再将钢罐放入蒸煮锅中，并向蒸煮锅中加水，使水没过放于蒸煮锅中的钢罐上端，将蒸煮锅密封后置于170±5℃温度下保温反应25～30min，反应结束后立即将钢罐取出，放入凉水中使钢罐的温度降到室温，开盖常规法固液分离，所得液体即为稀酸预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液；
所述碱性过氧化氢(AHP)预处理木质纤维素制得木质纤维素预处理液的方法是：将木质纤维素粉碎至20～80目，加入到NaOH溶液中，搅拌均匀，然后加入H2O2搅拌均匀，使制得的混合反应液中NaOH加量为0.1g/g木质纤维素，H2O2加入量为0.0999g/g木质纤维素，料液比为0.15g/ml，调节pH至11.5～11.7，然后置于温度30±2℃、转速200±20rpm条件下，保温反应24～30小时，反应后常规法固液分离，所得液体即为碱性过氧化氢预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液。
4.根据权利要求3所述的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，其特征在于：所述木质纤维素原料为粉碎后的玉米芯、玉米秸秆、小麦秸秆、棉花秸秆、甜高粱秸秆、水稻秸秆、油菜秸秆、甘蔗渣、甘薯渣、木屑、废纸和或柳枝稷。
5.根据权利要求3所述的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，其特征在于：所述稀酸预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液中至少含有抑制物——糠醛、羟甲基糠醛和乙酸。
6.根据权利要求3所述的适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基，其特征在于：所述碱性过氧化氢预处理木质纤维素制得的木质纤维素预处理液中至少含有抑制物——阿魏酸和对香豆酸。
7.权利要求1或2所述适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基在筛选对预处理抑制物耐受能力增强的葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母菌中的应用。
8.权利要求1或2所述适于提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母耐受多种预处理抑制物的培养基在提高葡萄糖木糖共发酵酿酒酵母对多种预处理抑制物耐受能力中的应用。
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