CN108486185A - 一种制备肌肽的新工艺方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备肌肽的新工艺方法,包括以下步骤:A.β‑丙氨酸甲酯盐酸盐合成;1.1向反应釜中加入甲醇,控温0‑20℃,将氯化亚砜滴入其中,滴加完毕,加入β‑丙氨酸,30‑60℃保温搅拌1‑5h;1.230‑50℃减压,真空度≤‑0.09MPa,浓缩,浓缩至无馏分流出,得β‑丙氨酸甲酯盐酸盐。本发明适用于肌肽的制备。
Description
技术领域
本发明技术涉及医药和化工技术领域。
背景技术
肌肽是一种天然的活性二肽,研究证明L-肌肽有抗氧化作用,有抗衰老功能,对高血压、心脏病、老年性白内障、溃疡等都有治疗效果,还有抗肿瘤等生物活性,可延缓皮肤衰老。与其他抗氧化剂相比,L-肌肽具有抗氧化能力强、无毒副作用的优点,并有多种生理活性,在医药、保健、卫生、美容等领域有广泛的应用前景。
发明内容
发明目的:为了解决上述技术问题,本发明公开一种制备肌肽的新工艺方法,本申请人之前已申请了申请号为2017105545126,发明名称为一种催化合成肌肽的氨肽酶及其制备方法和应用的发明,其中公开了酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
技术方案:一种制备肌肽的新工艺方法,包括以下步骤:A.β-丙氨酸甲酯盐酸盐合成;1.1向反应釜中加入甲醇,控温0-20℃,将氯化亚砜滴入其中,滴加完毕,加入β-丙氨酸,30-60℃保温搅拌1-5h;1.2 30-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩,浓缩至无馏分流出,得β-丙氨酸甲酯盐酸盐;B.酶反应;2.1向反应釜中加入L-组氨酸、去离子水、β-丙氨酸甲酯盐酸盐;2.2 在15-45℃,用碱性溶液调节pH值至7.0-9.0;2.3 加入酶,加酶的量为反应液总量的1%-3%,该酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;25-45℃搅拌反应,反应过程中用碱性溶液控制反应体系pH值在7.0-9.0;C.肌肽粗品制备;3.1反应完毕,放料,料液离心除去不溶物,收集滤液;3.2将得到的滤液通过超滤机进行超滤,收集超滤透析液;3.3将得到的超滤透析液通过纳滤机进行纳滤,收集纳滤浓缩液;3.4将纳滤浓缩液上树脂柱,树脂柱的径高比为0.05-0.2,上样pH值为5.0-7.0,上样流速为0.5-2.0bv/h;3.5用纯化水冲洗树脂柱;3.6用1%-5%的氨水洗脱解吸附树脂柱,收集茚三酮显色部分洗脱液;3.7 将收集的洗脱液50-80℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩至肌肽含量20-40%;3.8加入浓缩液的2-8倍量的有机溶剂,0-25℃搅拌析晶10-24h。3.9析晶完毕,放料离心,30-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,干燥6-8h,得肌肽粗品;D.肌肽粗品精制;4.1肌肽粗品加入水溶解;4.2往滤液中加入析晶溶剂,0-25℃搅拌析晶10-24h;4.3析晶完毕,放料离心,30-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,干燥6-8h,得肌肽精品。
作为优选,所述步骤B中,所述碱性溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、氨水中的一种。
作为优选,步骤C中所述上样的流速为0.5-2.0bv/h。
作为优选,所述的树脂柱为001×7型阳离子树脂柱。
作为优选,所述步骤C中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
作为优选,所述步骤D中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
有益的效果:本发明采作酶催化合成肌肽,该酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,该酶反应生成率高,可到达95%以上,与传统化学法相比,其污染小、反应周期短,更利于产业化,能耗低。本发明采用超滤设备,有效除去多余大分子酶,用纳滤设备有效去除小分子盐,提高了产品的纯度,污染小、成本低;利用001×7型阳离子树脂对反应液进行提纯,树脂对产品吸附量大、对杂质吸附小,除杂效果好。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明技术作进一步说明,但本发明的保护范围不限于下述的实例。
β-丙氨酸甲酯盐酸盐合成实施例:实施例1:1、准确称取甲醇400g、氯化亚砜220g,控温0-5℃、将氯化亚砜缓慢滴加到甲醇中,滴加完毕,加入β-丙氨酸160g,30-35℃保温搅拌2h;2、保温结束,35-40℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩,浓缩至无馏分流出,得β-丙氨酸甲酯盐酸盐245g,收率为97.6%。
实施例2:1、准确称取甲醇500g、氯化亚砜280g,控温10-15℃、将氯化亚砜缓慢滴加到甲醇中,滴加完毕,加入β-丙氨酸200g,35-40℃保温搅拌4h;2、保温结束,45-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩,浓缩至无馏分流出,得β-丙氨酸甲酯盐酸盐307g,收率为97.9%。
实施例3:1、准确称取甲醇600g、氯化亚砜340g,控温15-20℃、将氯化亚砜缓慢滴加到甲醇中,滴加完毕,加入β-丙氨酸250g,45-50℃保温搅拌1h;保温结束,45-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩,浓缩至无馏分流出,得β-丙氨酸甲酯盐酸盐373g,收率为95.8%。
酶反应实施例,其中酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
实施例4:1、向反应瓶中加入L-组氨酸20g、去离子水400g、β-丙氨酸甲酯盐酸盐25g,搅拌均匀;2、在25-30℃,用30%氢氧化钠调节pH至7.0-7.5;3、加入2%酶液9g,25-30℃搅拌反应4.0h,反应过程中用5%NaOH溶液控制反应体系pH值在7.0-7.5;4、反应完毕,反应液中肌肽含量为6.19%,生成率为96.1%。
实施例5:1、向反应瓶中加入L-组氨酸30g、去离子水600g、β-丙氨酸甲酯盐酸盐37.5g,搅拌均匀;2、在20-25℃,用20%氨水调节pH至7.5-8.0;3、加入2%酶液13g,20-25℃搅拌反应3.0h,反应过程中用20%氨水溶液控制反应体系pH值在7.5-8.0;4、反应完毕,反应液中肌肽含量为6.39%,生成率为98.0%。
实施例6:1、向反应瓶中加入L-组氨酸40g、去离子水800g、β-丙氨酸甲酯盐酸盐50g,搅拌均匀;2、在35-40℃,用20%碳酸钠调节pH至8.5-9.0;3、加入1%酶液9g,35-40℃搅拌反应2.0h,反应过程中用5%碳酸钠溶液控制反应体系pH值在8.5-9.0;4、反应完毕,反应液中肌肽含量为6.29%,生成率为97.1%。
肌肽粗品制备实施例:实施例7:1、将肌肽纳滤浓缩液300g,其中肌肽含量6.29%,上300ml 001×7型阳离子树脂柱,上样速度:0.5bv/h,上样完毕,用500ml纯化水洗涤,水洗速度:1.0bv/h,,水洗完后用2%氨水解吸,解吸速度:1.5bv/h,收集茚三酮明显显色部分,得解吸液826g,解吸液含量为2.17%,解析率约为95.0%,将解析液控温50-55℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩至肌肽含量25%,得肌肽浓缩液;2、加入肌肽浓缩液的3倍量的甲醇,0-5℃搅拌析晶10h;3、析晶完毕,过滤,30-35℃减压,真空度≤-0.09MPa干燥6-8h,得肌肽粗品16.0g,析晶收率为89.3%。
实施例8:1、将肌肽纳滤浓缩液250g,其中肌肽含量为6.38%,上250ml 001×7型阳离子树脂柱,上样速度:1.0bv/h,上样完毕,用400ml纯化水洗涤,水洗速度:1.5bv/h,水洗完后用3%氨水解吸,解吸速度:1.5bv/h,收集茚三酮明显显色部分,得解吸液650g,解吸液含量为2.36%,解析率约为96.0%。将解析液控温60-65℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩至肌肽含量30%,得肌肽浓缩液;2、加入浓缩液的4倍量的乙醇10-15℃搅拌析晶18h。3、析晶完毕,过滤,35-40℃减压,真空度≤-0.09MPa,干燥6-8h,得肌肽粗品13.5g,析晶收率为88.0%。
实施例9:1、将肌肽纳滤浓缩液200g,肌肽含量6.19%,上200ml 001×7型阳离子树脂柱,上样速度:2.0bv/h,上样完毕,用500ml纯化水洗涤,水洗速度:2.0bv/h,水洗完后用4%氨水解吸,解吸速度:2.0bv/h,收集茚三酮明显显色部分,得解吸液480g,解吸液含量为2.42%,解析率约为94.0%。将解析液控温60-65℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩至肌肽含量35%,得肌肽浓缩液;2、加入浓缩液的5倍量的异丙醇20-25℃搅拌析晶20h。3、析晶完毕,过滤,35-40℃减压,真空度≤-0.09MPa,干燥6-8h,得肌肽粗品10.6g,析晶收率为91.1%。
肌肽粗品精制实施例:实施例10:将5g肌肽粗品加入6倍量的水溶解,得15%左右的肌肽粗品水溶液,向肌肽粗品水溶液中加入8被量体积的乙醇,于10-15℃搅拌析晶18-20h,过滤,滤饼于40℃下真空干燥6-8h,得肌肽精品4.5g。收率约为90%,含量为99%。
实施例11:将5g肌肽粗品加入5倍量的水溶解,得17%左右的肌肽粗品水溶液,向肌肽粗品水溶液中加入6被量体积的甲醇,于20-25℃搅拌析晶18-20h,过滤,滤饼于45℃下真空干燥6-8h,得肌肽精品4.3g;收率约为86%,含量为99%。
实施例12:将5gJT粗品加入4倍量的水溶解,得约25%的肌肽粗品水溶液,向肌肽粗品水溶液中加入4倍量体积的丙酮,于15-20℃搅拌析晶18-20h,过滤,滤饼于50℃下真空干燥6-8h,得肌肽精品4.4g。收率约为88%,含量为99%。
Claims (6)
1.一种制备肌肽的新工艺方法,其特征在于:包括以下步骤:
A.β-丙氨酸甲酯盐酸盐合成;
1) 向反应釜中加入甲醇,控温0-20℃,将氯化亚砜滴入其中,滴加完毕,加入β-丙氨酸,30-60℃保温搅拌1-5h;
2) 30-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩,浓缩至无馏分流出,得β-丙氨酸甲酯盐酸盐;
B.酶反应;
1)向反应釜中加入L-组氨酸、去离子水、β-丙氨酸甲酯盐酸盐;
2) 在15-45℃,用碱性溶液调节pH值至7.0-9.0;
3) 加入酶,加酶的量为反应液总量的1%-3%,该酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;25-45℃搅拌反应,反应过程中用碱性溶液控制反应体系pH值在7.0-9.0;
C.肌肽粗品制备;
1)反应完毕,放料,料液离心除去不溶物,收集滤液;
2)将得到的滤液通过超滤机进行超滤,收集超滤透析液;
3)将得到的超滤透析液通过纳滤机进行纳滤,收集纳滤浓缩液;
4)将纳滤浓缩液上树脂柱,树脂柱的径高比为0.05-0.2,上样pH值为5.0-7.0;
5)用纯化水冲洗树脂柱;
6)用1%-5%的氨水洗脱解吸附树脂柱,收集茚三酮显色部分洗脱液;
7)将收集的洗脱液50-80℃减压,真空度≤-0.09MPa,浓缩至肌肽含量20-40%;
8)加入浓缩液的2-8倍量的析晶溶剂,0-25℃搅拌析晶10-24h;
9)析晶完毕,放料离心,30-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,干燥6-8h,得肌肽粗品;
D.肌肽粗品精制;
1)肌肽粗品加入水溶解;
2)往滤液中加入有机溶剂,0-25℃搅拌析晶10-24h;
3)析晶完毕,放料离心,30-50℃减压,真空度≤-0.09MPa,干燥6-8h,得肌肽精品。
2.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法,其特征在于:所述步骤B中,所述碱性溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、氨水中的一种。
3.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法,其特征在于:步骤C中所述上样的流速为0.5-2.0bv/h。
4.根据权利要求2所述的制备肌肽的新工艺方法,其特征在于:所述的树脂柱为001×7型阳离子树脂柱。
5.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法,其特征在于:所述步骤C中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
6.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法,其特征在于:所述步骤D中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
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WO2021163828A1 (zh) * | 2020-02-17 | 2021-08-26 | 上海辉文生物技术股份有限公司 | 一种高效制备富含肌肽类化合物的工艺方法 |
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