CN108486185A - 一种制备肌肽的新工艺方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种制备肌肽的新工艺方法，包括以下步骤：A.β‑丙氨酸甲酯盐酸盐合成；1.1向反应釜中加入甲醇，控温0‑20℃，将氯化亚砜滴入其中，滴加完毕，加入β‑丙氨酸，30‑60℃保温搅拌1‑5h；1.230‑50℃减压，真空度≤‑0.09MPa，浓缩，浓缩至无馏分流出，得β‑丙氨酸甲酯盐酸盐。本发明适用于肌肽的制备。
Description
技术领域
本发明技术涉及医药和化工技术领域。
背景技术
肌肽是一种天然的活性二肽，研究证明L-肌肽有抗氧化作用，有抗衰老功能，对高血压、心脏病、老年性白内障、溃疡等都有治疗效果，还有抗肿瘤等生物活性，可延缓皮肤衰老。与其他抗氧化剂相比，L-肌肽具有抗氧化能力强、无毒副作用的优点，并有多种生理活性，在医药、保健、卫生、美容等领域有广泛的应用前景。
发明内容
发明目的：为了解决上述技术问题，本发明公开一种制备肌肽的新工艺方法，本申请人之前已申请了申请号为2017105545126，发明名称为一种催化合成肌肽的氨肽酶及其制备方法和应用的发明，其中公开了酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
技术方案:一种制备肌肽的新工艺方法，包括以下步骤：A.β-丙氨酸甲酯盐酸盐合成；1.1向反应釜中加入甲醇，控温0-20℃，将氯化亚砜滴入其中，滴加完毕，加入β-丙氨酸，30-60℃保温搅拌1-5h；1.2 30-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩，浓缩至无馏分流出，得β-丙氨酸甲酯盐酸盐；B.酶反应；2.1向反应釜中加入L-组氨酸、去离子水、β-丙氨酸甲酯盐酸盐；2.2 在15-45℃，用碱性溶液调节pH值至7.0-9.0；2.3 加入酶，加酶的量为反应液总量的1%-3%，该酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；25-45℃搅拌反应，反应过程中用碱性溶液控制反应体系pH值在7.0-9.0；C.肌肽粗品制备；3.1反应完毕，放料，料液离心除去不溶物，收集滤液；3.2将得到的滤液通过超滤机进行超滤，收集超滤透析液；3.3将得到的超滤透析液通过纳滤机进行纳滤，收集纳滤浓缩液；3.4将纳滤浓缩液上树脂柱，树脂柱的径高比为0.05-0.2，上样pH值为5.0-7.0，上样流速为0.5-2.0bv/h；3.5用纯化水冲洗树脂柱；3.6用1%-5%的氨水洗脱解吸附树脂柱，收集茚三酮显色部分洗脱液；3.7 将收集的洗脱液50-80℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩至肌肽含量20-40%；3.8加入浓缩液的2-8倍量的有机溶剂，0-25℃搅拌析晶10-24h。3.9析晶完毕，放料离心，30-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得肌肽粗品；D.肌肽粗品精制；4.1肌肽粗品加入水溶解；4.2往滤液中加入析晶溶剂，0-25℃搅拌析晶10-24h；4.3析晶完毕，放料离心，30-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得肌肽精品。
作为优选，所述步骤B中，所述碱性溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、氨水中的一种。
作为优选，步骤C中所述上样的流速为0.5-2.0bv/h。
作为优选，所述的树脂柱为001×7型阳离子树脂柱。
作为优选，所述步骤C中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
作为优选，所述步骤D中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
有益的效果：本发明采作酶催化合成肌肽，该酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，该酶反应生成率高，可到达95%以上，与传统化学法相比，其污染小、反应周期短，更利于产业化，能耗低。本发明采用超滤设备，有效除去多余大分子酶，用纳滤设备有效去除小分子盐，提高了产品的纯度，污染小、成本低；利用001×7型阳离子树脂对反应液进行提纯，树脂对产品吸附量大、对杂质吸附小，除杂效果好。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明技术作进一步说明，但本发明的保护范围不限于下述的实例。
β-丙氨酸甲酯盐酸盐合成实施例：实施例1：1、准确称取甲醇400g、氯化亚砜220g，控温0-5℃、将氯化亚砜缓慢滴加到甲醇中，滴加完毕，加入β-丙氨酸160g，30-35℃保温搅拌2h；2、保温结束，35-40℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩，浓缩至无馏分流出，得β-丙氨酸甲酯盐酸盐245g，收率为97.6%。
实施例2：1、准确称取甲醇500g、氯化亚砜280g，控温10-15℃、将氯化亚砜缓慢滴加到甲醇中，滴加完毕，加入β-丙氨酸200g，35-40℃保温搅拌4h；2、保温结束，45-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩，浓缩至无馏分流出，得β-丙氨酸甲酯盐酸盐307g，收率为97.9%。
实施例3：1、准确称取甲醇600g、氯化亚砜340g，控温15-20℃、将氯化亚砜缓慢滴加到甲醇中，滴加完毕，加入β-丙氨酸250g，45-50℃保温搅拌1h；保温结束，45-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩，浓缩至无馏分流出，得β-丙氨酸甲酯盐酸盐373g，收率为95.8%。
酶反应实施例，其中酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
实施例4：1、向反应瓶中加入L-组氨酸20g、去离子水400g、β-丙氨酸甲酯盐酸盐25g，搅拌均匀；2、在25-30℃，用30%氢氧化钠调节pH至7.0-7.5；3、加入2%酶液9g，25-30℃搅拌反应4.0h，反应过程中用5%NaOH溶液控制反应体系pH值在7.0-7.5；4、反应完毕，反应液中肌肽含量为6.19%，生成率为96.1%。
实施例5：1、向反应瓶中加入L-组氨酸30g、去离子水600g、β-丙氨酸甲酯盐酸盐37.5g，搅拌均匀；2、在20-25℃，用20%氨水调节pH至7.5-8.0；3、加入2%酶液13g，20-25℃搅拌反应3.0h，反应过程中用20%氨水溶液控制反应体系pH值在7.5-8.0；4、反应完毕，反应液中肌肽含量为6.39%，生成率为98.0%。
实施例6：1、向反应瓶中加入L-组氨酸40g、去离子水800g、β-丙氨酸甲酯盐酸盐50g，搅拌均匀；2、在35-40℃，用20%碳酸钠调节pH至8.5-9.0；3、加入1%酶液9g，35-40℃搅拌反应2.0h，反应过程中用5%碳酸钠溶液控制反应体系pH值在8.5-9.0；4、反应完毕，反应液中肌肽含量为6.29%，生成率为97.1%。
肌肽粗品制备实施例：实施例7：1、将肌肽纳滤浓缩液300g，其中肌肽含量6.29%，上300ml 001×7型阳离子树脂柱，上样速度：0.5bv/h，上样完毕，用500ml纯化水洗涤，水洗速度：1.0bv/h，，水洗完后用2%氨水解吸，解吸速度：1.5bv/h，收集茚三酮明显显色部分，得解吸液826g，解吸液含量为2.17%，解析率约为95.0%，将解析液控温50-55℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩至肌肽含量25%，得肌肽浓缩液；2、加入肌肽浓缩液的3倍量的甲醇，0-5℃搅拌析晶10h；3、析晶完毕，过滤，30-35℃减压，真空度≤-0.09MPa干燥6-8h，得肌肽粗品16.0g，析晶收率为89.3%。
实施例8：1、将肌肽纳滤浓缩液250g，其中肌肽含量为6.38%，上250ml 001×7型阳离子树脂柱，上样速度：1.0bv/h，上样完毕，用400ml纯化水洗涤，水洗速度：1.5bv/h，水洗完后用3%氨水解吸，解吸速度：1.5bv/h，收集茚三酮明显显色部分，得解吸液650g，解吸液含量为2.36%，解析率约为96.0%。将解析液控温60-65℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩至肌肽含量30%，得肌肽浓缩液；2、加入浓缩液的4倍量的乙醇10-15℃搅拌析晶18h。3、析晶完毕，过滤，35-40℃减压，真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得肌肽粗品13.5g，析晶收率为88.0%。
实施例9：1、将肌肽纳滤浓缩液200g，肌肽含量6.19%，上200ml 001×7型阳离子树脂柱，上样速度：2.0bv/h，上样完毕，用500ml纯化水洗涤，水洗速度：2.0bv/h，水洗完后用4%氨水解吸，解吸速度：2.0bv/h，收集茚三酮明显显色部分，得解吸液480g，解吸液含量为2.42%，解析率约为94.0%。将解析液控温60-65℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩至肌肽含量35%，得肌肽浓缩液；2、加入浓缩液的5倍量的异丙醇20-25℃搅拌析晶20h。3、析晶完毕，过滤，35-40℃减压，真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得肌肽粗品10.6g，析晶收率为91.1%。
肌肽粗品精制实施例：实施例10：将5g肌肽粗品加入6倍量的水溶解，得15%左右的肌肽粗品水溶液，向肌肽粗品水溶液中加入8被量体积的乙醇，于10-15℃搅拌析晶18-20h，过滤，滤饼于40℃下真空干燥6-8h，得肌肽精品4.5g。收率约为90%，含量为99%。
实施例11：将5g肌肽粗品加入5倍量的水溶解，得17%左右的肌肽粗品水溶液，向肌肽粗品水溶液中加入6被量体积的甲醇，于20-25℃搅拌析晶18-20h，过滤，滤饼于45℃下真空干燥6-8h，得肌肽精品4.3g；收率约为86%，含量为99%。
实施例12：将5gJT粗品加入4倍量的水溶解，得约25%的肌肽粗品水溶液，向肌肽粗品水溶液中加入4倍量体积的丙酮，于15-20℃搅拌析晶18-20h，过滤，滤饼于50℃下真空干燥6-8h，得肌肽精品4.4g。收率约为88%，含量为99%。
Claims (6)
1.一种制备肌肽的新工艺方法，其特征在于：包括以下步骤：
A.β-丙氨酸甲酯盐酸盐合成；
1） 向反应釜中加入甲醇，控温0-20℃，将氯化亚砜滴入其中，滴加完毕，加入β-丙氨酸，30-60℃保温搅拌1-5h；
2） 30-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩，浓缩至无馏分流出，得β-丙氨酸甲酯盐酸盐；
B.酶反应；
1）向反应釜中加入L-组氨酸、去离子水、β-丙氨酸甲酯盐酸盐；
2） 在15-45℃，用碱性溶液调节pH值至7.0-9.0；
3） 加入酶，加酶的量为反应液总量的1%-3%，该酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；25-45℃搅拌反应，反应过程中用碱性溶液控制反应体系pH值在7.0-9.0；
C.肌肽粗品制备；
1）反应完毕，放料，料液离心除去不溶物，收集滤液；
2）将得到的滤液通过超滤机进行超滤，收集超滤透析液；
3）将得到的超滤透析液通过纳滤机进行纳滤，收集纳滤浓缩液；
4）将纳滤浓缩液上树脂柱，树脂柱的径高比为0.05-0.2，上样pH值为5.0-7.0；
5）用纯化水冲洗树脂柱；
6）用1%-5%的氨水洗脱解吸附树脂柱，收集茚三酮显色部分洗脱液；
7）将收集的洗脱液50-80℃减压，真空度≤-0.09MPa，浓缩至肌肽含量20-40%；
8）加入浓缩液的2-8倍量的析晶溶剂，0-25℃搅拌析晶10-24h；
9）析晶完毕，放料离心，30-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得肌肽粗品；
D.肌肽粗品精制；
1）肌肽粗品加入水溶解；
2）往滤液中加入有机溶剂，0-25℃搅拌析晶10-24h；
3）析晶完毕，放料离心，30-50℃减压，真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得肌肽精品。
2.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法，其特征在于：所述步骤B中，所述碱性溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、氨水中的一种。
3.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法，其特征在于：步骤C中所述上样的流速为0.5-2.0bv/h。
4.根据权利要求2所述的制备肌肽的新工艺方法，其特征在于：所述的树脂柱为001×7型阳离子树脂柱。
5.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法，其特征在于：所述步骤C中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
6.根据权利要求1所述的制备肌肽的新工艺方法，其特征在于：所述步骤D中析晶溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。
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Cited By (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN109928896A (zh) * | 2019-04-15 | 2019-06-25 | 宁夏医科大学 | 白藜芦醇氨基酸酯类衍生物及其制备方法 |
| CN112480206A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-03-12 | 音芙医药科技(上海)有限公司 | 一种l-肌肽的高效合成方法 |
| WO2021163828A1 (zh) * | 2020-02-17 | 2021-08-26 | 上海辉文生物技术股份有限公司 | 一种高效制备富含肌肽类化合物的工艺方法 |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| WO2021163828A1 (zh) * | 2020-02-17 | 2021-08-26 | 上海辉文生物技术股份有限公司 | 一种高效制备富含肌肽类化合物的工艺方法 |
| CN112480206A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-03-12 | 音芙医药科技(上海)有限公司 | 一种l-肌肽的高效合成方法 |
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