CN109810177A - 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109810177A CN109810177A CN201910228464.0A CN201910228464A CN109810177A CN 109810177 A CN109810177 A CN 109810177A CN 201910228464 A CN201910228464 A CN 201910228464A CN 109810177 A CN109810177 A CN 109810177A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- walnut
- filtrate
- polypeptide
- glutelin
- centrifuged
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有ACE抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用，该多肽是氨基酸序列为Val‑Glu‑Arg‑Gly‑Arg‑Arg‑Ile‑Thr‑Ser‑Val和Phe‑Val‑Ile‑Glu‑Pro‑Asn‑Ile‑Thr‑Pro‑Ala的混合物。本发明首先对榨油后的废弃物核桃粕进行脱脂处理，然后采用连续提取法，依次利用纯水、稀盐溶液、乙醇溶液和稀酸溶液从脱脂核桃蛋白中提取核桃谷蛋白‑1，再以核桃谷蛋白‑1为原料，采用限制性酶解技术、凝胶色谱分离、反向高效液相色谱纯化等技术制备出对ACE活性抑制率达92％以上的核桃粕多肽。本发明可以变废为宝，提高核桃精深加工和综合利用水平，推动核桃产业发展，产生良好的经济效益，所得多肽可作为ACE抑制剂和制备降血压药物。
Description
技术领域
本发明属农产品加工技术领域，具体涉及一种具有ACE抑制活性的核桃粕多肽，以及以核桃粕为原料制备该多肽的方法。
背景技术
核桃(Juglans regia L.)别名胡桃、羌桃，是我国重要的经济栽培树木。目前我国主栽品种有27个，栽培区域涉及26个省份，主产区为新疆、陕西、甘肃、云南、山西等省。据中国林业统计年鉴统计，2017年我国核桃年产量高达415.25万吨，按16元/千克价格计，2017年中国核桃产值达到664亿元，未来我国核桃市场前景广阔。
研究表明，核桃仁中蛋白质含量约为14％～18％，可吸收率为85％，与其它植物蛋白资源相比，核桃仁蛋白质18种氨基酸齐全，8种必需氨基酸比例适宜，同时精氨酸与谷氨酸比重也相对较大，这些成分皆是人体组织细胞代谢不可缺少的重要物质，长期食用可对人体产生良好的保健效果，还可以间接降低冠心病患病风险。
核桃粕是核桃仁榨油后的副产物，年产量很大，榨油后的核桃粕中营养成分含量很高，其中蛋白质高达40％～50％，是丰富的植物蛋白质资源，但目前核桃粕主要用作肥料或饲料，造成了优质蛋白资源的极大浪费。
随着人们生活水平的提高，各种富贵病如高血压、高血脂、肥胖病、糖尿病等日显突出。高血压是威胁人类健康的主要疾病之一，是世界性健康问题。血管紧张素转化酶(AntiotensinI Converting Enzyme，ACE)能催化血管紧张素I转变为具有强效升高血压作用的血管紧张素II，同时将具有降压作用的舒缓激肽降解，使之失去降压作用，通过作用于肾素-血管紧张素***、激肽释放酶-激肽***、血管内皮细胞***、肾脏和体液平衡***，最终导致血压升高。通过抑制体内ACE的活性可以起到降血压的作用，目前临床上使用的降血压药物的降压原理主要是抑制ACE的活性。但目前使用的降压药物多为化学合成，如卡托普利、雷米普利等，这些药物的降血压效果较好，但药效时间短，患者需长期服用，且副作用较大。食源性ACE抑制肽是指从食物蛋白中分离出来的、具有抑制ACE活性的多肽，其优点是降血压效果良好、无毒副作用、可添加到饮食中降低血压等，是功能性食品、医药等行业的研究热点。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有ACE抑制活性的核桃粕多肽，以及以核桃粕为原料制备该多肽的方法，并为该多肽提供新的应用。
针对上述目的，本发明所采用的核桃粕多肽是氨基酸序列为Val-Glu-Arg-Gly-Arg-Arg-Ile-Thr-Ser-Val和Phe-Val-Ile-Glu-Pro-Asn-Ile-Thr-Pro-Ala的混合物。
上述具有ACE抑制活性的核桃粕多肽的制备方法由下述步骤组成：
1、制备核桃粕脱脂粉
将榨油后的核桃粕在40～50℃鼓风干燥箱中干燥，粉碎过60～80目筛，然后按料液比为1g﹕10～20mL加入沸程为30～60℃的分析纯石油醚，除去剩余的核桃油，得到核桃粕脱脂粉。
2、提取核桃谷蛋白-1
(1)按料液比为1g﹕10～30mL，向核桃粕脱脂粉中加入去离子水，室温搅拌提取2～3h，过滤，收集滤液，将滤渣再反复提取3次，合并收集的滤液。
(2)将步骤(1)合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕10～30mL向所得沉淀中加入0.4～0.5mol/L的氯化钠水溶液，室温下震荡提取2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(3)将步骤(2)合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕10～30mL向所得沉淀中加入体积浓度为50％～70％的乙醇水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(4)将步骤(3)合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，所得沉淀用去离子水清洗后，按料液比为1g﹕10～30mL向沉淀中加入体积浓度为40％～60％的冰乙酸水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(5)将步骤(4)合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，上清液装入截留分子量为3000～6000透析袋中，在4～6℃的蒸馏水中透析12～24小时，透析结束后，将透析液在4～10℃、8000～12000rpm的条件下离心15～20min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得核桃谷蛋白-1。
3、限制性酶水解
按料液比为1～4g﹕100mL，将核桃谷蛋白-1溶解于0.1～0.3mol/L磷酸缓冲液中，用0.1mol/L的盐酸调节pH至1.0～3.0，加入核桃谷蛋白-1质量2％～5％的胃蛋白酶，在30～50℃下震荡酶解2～6h，将酶解液在90～100℃下灭酶5～10min；将灭酶后的酶解液在4～6℃、10000～15000rpm的条件下离心20～30min，收集上清液，冷冻干燥后得到核桃谷蛋白-1多肽初提物。
4、凝胶色谱分离
将核桃谷蛋白-1多肽初提物溶解于去离子水中，配制成50～150mg/mL的溶液，然后对所得溶液进行柱层析分离，柱长0.6～1.2m，直径16～26mm，固定相为Sephadex G-15，纯水洗脱，洗脱流速为0.4～0.8mL/min，洗脱液在220nm处用分光光度计比色，收集分离的第2个多肽组分，冷冻干燥。
5、反相高效液相色谱纯化
将上述凝胶色谱分离所得到的第2个多肽组分溶解于去离子水中配成10～20mg/mL的溶液，过0.22μm滤膜，收集滤液；将滤液进行反相高效液相色谱分离，所用分离柱为碳18半制备柱，流动相A为含0.1％三氟乙酸的乙腈、流动相B为超纯水，进行梯度洗脱，流动相梯度选择0到20分钟A:B为5％:95％，20～50分钟A:B为25％:75％，流速2.0～2.5mL/min，柱温30～40℃，检测波长220nm；收集分离的第5个和第8个多肽组分，冷冻干燥，得到具有ACE抑制活性的核桃粕多肽。
上述步骤2中，优选提取核桃谷蛋白-1的方法如下：
(1)按料液比为1g﹕15～20mL，向核桃粕脱脂粉中加入去离子水，室温搅拌提取2～3h，过滤，收集滤液，将滤渣再反复提取3次，合并收集的滤液。
(2)将步骤(1)合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕15～20mL向所得沉淀中加入0.4～0.5mol/L的氯化钠水溶液，室温下震荡提取2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(3)将步骤(2)合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕15～20mL向所得沉淀中加入体积浓度为70％的乙醇水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(4)将步骤(3)合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，所得沉淀用去离子水清洗后，按料液比为1g﹕15～20mL向沉淀中加入体积浓度为60％的冰乙酸水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(5)将步骤(4)合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，上清液装入截留分子量为5000透析袋中，在4～6℃的蒸馏水中透析24小时，透析结束后，将透析液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得核桃谷蛋白-1。
上述步骤3中，优选按料液比为2～3g﹕100mL，将核桃谷蛋白-1溶解于0.1～0.2mol/L磷酸缓冲液中，用0.1mol/L的盐酸调节pH至1.5～2.0，加入核桃谷蛋白-1质量3％～4％的胃蛋白酶，在45～50℃下震荡酶解4～6h，将酶解液在95～100℃下灭酶10min；将灭酶后的酶解液在4～6℃、10000～15000rpm的条件下离心20～30min，收集上清液，冷冻干燥后得到核桃谷蛋白-1多肽初提物。
本发明具有ACE抑制活性的核桃粕多肽在制备ACE抑制剂中的应用。
本发明具有ACE抑制活性的核桃粕多肽在制备降血压药物中的应用。
本发明的有益效果如下：
本发明首先对榨油后的废弃物核桃粕进行脱脂处理，然后采用连续提取法，依次利用纯水、稀盐溶液、乙醇溶液和稀酸溶液从脱脂核桃蛋白中提取核桃谷蛋白-1，再以核桃谷蛋白-1为原料，采用限制性酶解技术、凝胶色谱分离、反向高效液相色谱纯化等技术制备出对ACE活性抑制率高达92％以上的核桃粕多肽。本发明可以变废为宝，提高核桃精深加工和综合利用水平，推动核桃产业发展，产生良好的经济效益，所得多肽可作为ACE抑制剂和制备降血压药物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。
实施例1
1、制备核桃粕脱脂粉
将榨油后的核桃粕在45℃鼓风干燥箱中干燥后粉碎，过60目筛，然后按料液比为1g﹕10mL加入沸程为30～60℃的分析纯石油醚，除去剩余的核桃油，得到核桃粕脱脂粉。
2、提取核桃谷蛋白-1
(1)按料液比为1g﹕15mL，向核桃粕脱脂粉中加入去离子水，室温搅拌提取2.5h，过滤，收集滤液。在滤渣中加入去离子水(料液比为1g﹕15mL)按照上述方法反复提取3次，合并收集的滤液。
(2)将步骤(1)合并后的滤液在4℃、10000rpm的条件下离心20min，然后按料液比为1g﹕15mL向所得沉淀中加入0.4mol/L的氯化钠水溶液，室温下震荡提取2.5h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(3)将步骤(2)合并后的滤液在4℃、10000rpm的条件下离心20min，然后按料液比为1g﹕15mL向所得沉淀中加入体积浓度为70％的乙醇水溶液，室温搅拌2.5h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(4)将步骤(3)合并后的滤液在4℃、10000rpm的条件下离心20min，所得沉淀用去离子水清洗后，按料液比为1g﹕15mL向沉淀中加入体积浓度为60％的冰乙酸水溶液，室温搅拌2.5h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(5)将步骤(4)合并后的滤液在4℃、10000rpm的条件下离心20min，上清液装入截留分子量为5000透析袋中，在4～6℃的蒸馏水中透析24小时，去除盐离子、可溶性糖、小分子蛋白等杂质；透析结束后，将透析液在4℃、12000rpm的条件下离心15min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得到核桃谷蛋白-1。
3、限制性酶水解
将4g核桃谷蛋白-1溶解于200mL0.1mol/L磷酸缓冲液中，用0.1mol/L的盐酸调节pH至1.5，加入0.12g胃蛋白酶，在50℃下震荡酶解6h，将酶解液在100℃下灭酶10min；将灭酶后的酶解液在4℃、15000rpm的条件下离心20min，收集上清液，冷冻干燥后得到核桃谷蛋白-1多肽初提物。
4、凝胶色谱分离
将核桃谷蛋白-1多肽初提物溶解于去离子水中，配制成100mg/mL的溶液，然后对该溶液进行柱层析分离，柱长0.6m，直径16mm，固定相为Sephadex G-15，纯水洗脱，洗脱流速为0.6mL/min，每5min收集一次，洗脱液在220nm处用分光光度计比色。分离出4个多肽组分，收集分离的第2个多肽组分，冷冻干燥。
5、反相高效液相色谱纯化
将上述凝胶色谱分离所得到的第2个多肽组分溶解于去离子水中配成15mg/mL的溶液，过0.22μm滤膜，收集滤液；将滤液进行反相高效液相色谱分离，所用分离柱为碳18半制备柱(9.4mm×250mm)，流动相A为含0.1％三氟乙酸的乙腈、流动相B为超纯水，进行梯度洗脱，流动相梯度选择0到20分钟A:B为5％:95％，20～50分钟A:B为25％:75％，流速2.0mL/min，柱温35℃，检测波长220nm；收集分离的第5个和第8个多肽组分，冷冻干燥，得到具有ACE抑制活性的核桃粕多肽。
发明人采用碳18分析柱-反相高效液相色谱(4.6mm×250mm)对上述得到的核桃粕多肽进行分离，流动相A为含0.1％三氟乙酸的乙腈、流动相B为超纯水，进行梯度洗脱，流动相梯度选择0到20分钟A:B由5％:95％到25％:75％，20～50分钟A:B为25％:75％，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长220nm，得到2个纯多肽，将2个多肽分别收集，冷冻干燥。经N端测序分析鉴定，这2个纯多肽的氨基酸序列和分子量分别为：Val Glu Arg Gly Arg Arglle Thr Ser Val(分子量为1172.35Da，第5个多肽组分)和Phe Val Ile Glu Pro Asn IleThr Pro Ala(分子量为1100.28Da，第8个多肽组分)。
实施例2
1、制备核桃粕脱脂粉
将榨油后的核桃粕在40℃鼓风干燥箱中干燥后粉碎，过80目筛，然后按料液比为1g﹕15mL加入沸程为30～60℃的分析纯石油醚，除去剩余的核桃油，得到核桃粕脱脂粉。
2、提取核桃谷蛋白-1
(1)按料液比为1g﹕10mL，向核桃粕脱脂粉中加入去离子水，室温搅拌提取3h，过滤，收集滤液。在滤渣中加入去离子水(料液比为1g﹕10mL)按照上述方法反复提取3次，合并收集的滤液。
(2)将步骤(1)合并后的滤液在5℃、12000rpm的条件下离心15min，然后按料液比为1g﹕10mL向所得沉淀中加入0.5mol/L的氯化钠水溶液，室温下震荡提取3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(3)将步骤(2)合并后的滤液在5℃、12000rpm的条件下离心15min，然后按料液比为1g﹕10mL向所得沉淀中加入体积浓度为50％的乙醇水溶液，室温搅拌3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(4)将步骤(3)合并后的滤液在5℃、12000rpm的条件下离心15min，所得沉淀用去离子水清洗后，按料液比为1g﹕10mL向沉淀中加入体积浓度为50％的冰乙酸水溶液，室温搅拌3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液。
(5)将步骤(4)合并后的滤液在5℃、12000rpm的条件下离心15min，上清液装入截留分子量为3500透析袋中，在4～6℃的蒸馏水中透析24小时，去除盐离子、可溶性糖、小分子蛋白等杂质；透析结束后，将透析液在4℃、10000rpm的条件下离心20min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得到核桃谷蛋白-1。
3、限制性酶水解
将2g核桃谷蛋白-1溶解于200mL0.2mol/L磷酸缓冲液中，用0.1mol/L的盐酸调节pH至2.0，加入0.08g胃蛋白酶，在45℃下震荡酶解4h，将酶解液在95℃下灭酶10min；将灭酶后的酶解液在4℃、15000rpm的条件下离心20min，收集上清液，冷冻干燥后得到核桃谷蛋白-1多肽初提物。
4、凝胶色谱分离
将核桃谷蛋白-1多肽初提物溶解于去离子水中，配制成150mg/mL的溶液，然后对该溶液进行柱层析分离，柱长1.0m，直径16mm，固定相为Sephadex G-15，纯水洗脱，洗脱流速为0.5mL/min，每5min收集一次，洗脱液在220nm处用分光光度计比色。分离出4个多肽组分，收集分离的第2个多肽组分，冷冻干燥。
5、反相高效液相色谱纯化
将上述凝胶色谱分离所得的第2个多肽组分溶解于去离子水中配成20mg/mL的溶液，过0.22μm滤膜，收集滤液；将滤液进行反相高效液相色谱分离，所用分离柱为碳18半制备柱(9.4mm×250mm)，流动相A为含0.1％三氟乙酸的乙腈、流动相B为超纯水，进行梯度洗脱，流动相梯度选择0到20分钟A:B由5％:95％到25％:75％，20～50分钟A:B为25％:75％，流速2.0～2.5mL/min，柱温30～40℃，检测波长220nm；收集分离的第5个和第8个多肽组分，冷冻干燥，得到具有ACE抑制活性的核桃粕多肽。
实施例3
本发明核桃粕多肽的ACE抑制活性
按照文献(Jimsheena,V.K.and Gowda,L.R.(2009))中方法分别对实施例1和实施例2得到的核桃粕多肽以及分离后的2个纯多肽进行体外血管紧张素转化酶(ACE)测定，具体测定方法如下：
取50μL浓度为1.0mg/mL的多肽样品水溶液和50μL ACE溶液(酶活力单位为25mU/mL，溶解于浓度为50mmol/L、pH 8.3的硼酸缓冲液中)混合均匀，在37℃下水浴10min，冷却至室温后加入150μL已经预热至37℃的HHL溶液，在37℃下反应60min，冷却至室温后加入250μL 1mol/L HCl水溶液以终止反应，之后加入1.4mL乙酸乙酯，在旋涡振荡器上剧烈振荡5s，在14100rpm下离心5min，离心后溶液体系分层，小心量取1mL上层溶液至玻璃试管中，在鼓风干燥箱中于120℃下放置30min。取出试管，待其冷却至室温，加入2mL去离子水，摇晃均匀后在228nm处比色。
抑制率按照如下公式计算：
ACE抑制率(％)＝(1-AS/AC)×100
式中，As表示加入多肽的吸光度值，Ac表示未加多肽的吸光度值。
实验结果显示，氨基酸序列为Val Glu Arg Gly Arg Arg lle Thr Ser Val的多肽对ACE的体外抑制率达到98.26％，氨基酸序列为Phe Val Ile Glu Pro AsnIle Thr ProAla的多肽对ACE的体外抑制率为92.15％，实施例1得到的核桃粕多肽对ACE的体外抑制率为93.25％，实施例2得到的核桃粕多肽对ACE的体外抑制率为92.50％。因此，本发明核桃粕多肽可作为ACE抑制剂和制备降血压药物。
Claims (6)
1.一种具有ACE抑制活性的核桃粕多肽，其特征在于：所述核桃粕多肽是氨基酸序列为Val-Glu-Arg-Gly-Arg-Arg-Ile-Thr-Ser-Val和Phe-Val-Ile-Glu-Pro-Asn-Ile-Thr-Pro-Ala的混合物。
2.一种权利要求1所述的具有ACE抑制活性的核桃粕多肽的制备方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：
(1)制备核桃粕脱脂粉
将榨油后的核桃粕在40～50℃鼓风干燥箱中干燥，粉碎过60～80目筛，然后按料液比为1g﹕10～20mL加入沸程为30～60℃的分析纯石油醚，除去剩余的核桃油，得到核桃粕脱脂粉；
(2)提取核桃谷蛋白-1
①按料液比为1g﹕10～30mL，向核桃粕脱脂粉中加入去离子水，室温搅拌提取2～3h，过滤，收集滤液，将滤渣再反复提取3次，合并收集的滤液；
②将步骤①合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕10～30mL向所得沉淀中加入0.4～0.5mol/L的氯化钠水溶液，室温下震荡提取2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液；
③将步骤②合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕10～30mL向所得沉淀中加入体积浓度为50％～70％的乙醇水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液；
④将步骤③合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，所得沉淀用去离子水清洗后，按料液比为1g﹕10～30mL向沉淀中加入体积浓度为40％～60％的冰乙酸水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液；
⑤将步骤④合并后的滤液在4～10℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，上清液装入截留分子量为3000～6000透析袋中，在4～6℃的蒸馏水中透析12～24小时，透析结束后，将透析液在4～10℃、8000～12000rpm的条件下离心15～20min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得核桃谷蛋白-1；
(3)限制性酶水解
按料液比为1～4g﹕100mL，将核桃谷蛋白-1溶解于0.1～0.3mol/L磷酸缓冲液中，用0.1mol/L的盐酸调节pH至1.0～3.0，加入核桃谷蛋白-1质量2％～5％的胃蛋白酶，在30～50℃下震荡酶解2～6h，将酶解液在90～100℃下灭酶5～10min；将灭酶后的酶解液在4～6℃、10000～15000rpm的条件下离心20～30min，收集上清液，冷冻干燥后得到核桃谷蛋白-1多肽初提物；
(4)凝胶色谱分离
将核桃谷蛋白-1多肽初提物溶解于去离子水中，配制成50～150mg/mL的溶液，然后对所得溶液进行柱层析分离，柱长0.6～1.2m，直径16～26mm，固定相为Sephadex G-15，纯水洗脱，洗脱流速为0.4～0.8mL/min，洗脱液在220nm处用分光光度计比色，收集分离的第2个多肽组分，冷冻干燥；
(5)反相高效液相色谱纯化
将上述凝胶色谱分离所得到的第2个多肽组分溶解于去离子水中配成10～20mg/mL的溶液，过0.22μm滤膜，收集滤液；将滤液进行反相高效液相色谱分离，所用分离柱为碳18半制备柱，流动相A为含0.1％三氟乙酸的乙腈、流动相B为超纯水，进行梯度洗脱，流动相梯度选择0到20分钟A:B为5％:95％，20～50分钟A:B为25％:75％，流速2.0～2.5mL/min，柱温30～40℃，检测波长220nm；收集分离的第5个和第8个多肽组分，冷冻干燥，得到具有ACE抑制活性的核桃粕多肽。
3.根据权利要求2所述的具有ACE抑制活性的核桃粕多肽的制备方法，其特征在于：步骤(2)提取核桃谷蛋白-1的方法如下：
①按料液比为1g﹕15～20mL，向核桃粕脱脂粉中加入去离子水，室温搅拌提取2～3h，过滤，收集滤液，将滤渣再反复提取3次，合并收集的滤液；
②将步骤①合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕15～20mL向所得沉淀中加入0.4～0.5mol/L的氯化钠水溶液，室温下震荡提取2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液；
③将步骤②合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，按料液比为1g﹕15～20mL向所得沉淀中加入体积浓度为70％的乙醇水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液；
④将步骤③合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，所得沉淀用去离子水清洗后，按料液比为1g﹕15～20mL向沉淀中加入体积浓度为60％的冰乙酸水溶液，室温搅拌2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再反复震荡提取3次，合并收集的滤液；
⑤将步骤④合并后的滤液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，上清液装入截留分子量为5000透析袋中，在4～6℃的蒸馏水中透析24小时，透析结束后，将透析液在4～5℃、10000～12000rpm的条件下离心15～20min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得核桃谷蛋白-1。
4.根据权利要求3所述的具有ACE抑制活性的核桃粕多肽的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，按料液比为2～3g﹕100mL，将核桃谷蛋白-1溶解于0.1～0.2mol/L磷酸缓冲液中，用0.1mol/L的盐酸调节pH至1.5～2.0，加入核桃谷蛋白-1质量3％～4％的胃蛋白酶，在45～50℃下震荡酶解4～6h，将酶解液在95～100℃下灭酶10min；将灭酶后的酶解液在4～6℃、10000～15000rpm的条件下离心20～30min，收集上清液，冷冻干燥后得到核桃谷蛋白-1多肽初提物。
5.权利要求1所述的具有ACE抑制活性的核桃粕多肽在制备ACE抑制剂中的应用。
6.权利要求1所述的具有ACE抑制活性的核桃粕多肽在制备降血压药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910228464.0A CN109810177A (zh) | 2019-03-25 | 2019-03-25 | 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910228464.0A CN109810177A (zh) | 2019-03-25 | 2019-03-25 | 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109810177A true CN109810177A (zh) | 2019-05-28 |
Family
ID=66610251
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910228464.0A Pending CN109810177A (zh) | 2019-03-25 | 2019-03-25 | 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109810177A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112795611A (zh) * | 2021-01-25 | 2021-05-14 | 昆明生物制造研究院有限公司 | 一种不可溶性蛋白制备核桃蛋白多肽的方法 |
| WO2021129016A1 (zh) * | 2019-12-27 | 2021-07-01 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种多肽脱盐的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105111282A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-02 | 哈尔滨工业大学 | 一种具有ace抑制活性的核桃肽及其制备方法 |
| CN105803024A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-07-27 | 中国热带农业科学院椰子研究所 | 一种以椰麸球蛋白为原料制备ace抑制肽的方法 |
-
2019
- 2019-03-25 CN CN201910228464.0A patent/CN109810177A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105111282A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-02 | 哈尔滨工业大学 | 一种具有ace抑制活性的核桃肽及其制备方法 |
| CN105803024A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-07-27 | 中国热带农业科学院椰子研究所 | 一种以椰麸球蛋白为原料制备ace抑制肽的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 金子纯: "核桃粕蛋白质组分的理化性质、抗氧化性质及ACE抑制率的研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)工程科技Ⅰ辑》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021129016A1 (zh) * | 2019-12-27 | 2021-07-01 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种多肽脱盐的方法 |
| CN112795611A (zh) * | 2021-01-25 | 2021-05-14 | 昆明生物制造研究院有限公司 | 一种不可溶性蛋白制备核桃蛋白多肽的方法 |
| CN112795611B (zh) * | 2021-01-25 | 2023-04-28 | 昆明生物制造研究院有限公司 | 一种不可溶性蛋白制备核桃蛋白多肽的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105586379B (zh) | 一种具有抑制癌细胞增殖作用的胶原蛋白活性肽的制备方法 | |
| CN104004806B (zh) | 一种具有抗凝血与溶血栓地龙多肽及其酶解制备方法与应用 | |
| CN109400678A (zh) | 一种刺参来源的抗氧化和dpp-iv抑制活性肽 | |
| CN110655556B (zh) | 一种免疫调节肽的制备及方法 | |
| CN105111282A (zh) | 一种具有ace抑制活性的核桃肽及其制备方法 | |
| CN102370671A (zh) | 灵芝子实体中的有效部位、提取方法及其用途和制剂 | |
| CN109320588A (zh) | 一种刺参来源的ace抑制活性肽 | |
| CN109810177A (zh) | 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用 | |
| CN103539831A (zh) | 山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途 | |
| CN103539833A (zh) | 高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途 | |
| CN107349244B (zh) | 丙二酰基人参皂苷的提取方法 | |
| CN112159451A (zh) | 一种绞股蓝皂苷提取物及其制备方法 | |
| CN105030914B (zh) | 粗壮女贞苦丁茶提取物在α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用 | |
| CN105803024B (zh) | 一种以椰麸球蛋白为原料制备ace抑制肽的方法 | |
| CN114213506B (zh) | 一种人参来源的抗血管生成及抗肿瘤活性肽及其制备方法和应用 | |
| CN1209155C (zh) | 含降血糖活性成分的苦瓜制品的制备方法 | |
| CN108851076A (zh) | 一种苦瓜提取物的制备方法和应用 | |
| CN104757561A (zh) | 一种贻贝蛋白降压肽的用途 | |
| CN112442112B (zh) | 一种银杏蛋白源ace抑制肽组合物及其制备方法和应用 | |
| CN115124591A (zh) | 钝顶螺旋藻藻蓝蛋白血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法和应用 | |
| CN110144015B (zh) | 一种灵芝多糖、灵芝三萜酸及氨基酸的同步提取纯化方法 | |
| CN104353057B (zh) | 含有稠李花色苷的降血压保健品 | |
| CN112708651A (zh) | 一种瓜蒌蛋白粉和多肽粉及其制备方法和应用 | |
| CN107699601B (zh) | 一种具有ace抑制功能和dpp-iv抑制功能的蛹虫草蛋白肽 | |
| CN113413413A (zh) | 通过经络康复法治疗脑血管病的中药组合物的制备方法及其质量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20190528 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |