CN108485990B - 一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents
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- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
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- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
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- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract
本发明公开了一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂及其制备方法，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20‑30份、纳豆芽孢杆菌10‑20份、枯草芽孢杆菌15‑25份、异常汉逊酵母20‑30份、圆褐固氮菌5‑15份、多孔磁性壳聚糖微球5‑10份。本发明具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，完全没有因化学药剂的使用所带来的化学抗药性等问题，因而有利于苹果的无公害生产。依靠相互间协同作用、增殖关系形成一个复杂、结构稳定、功能广泛的具有多种多样细菌微生物群落的生物菌群，对苹果树根腐病具有良好的防控作用。
Description
技术领域
本发明属于生物领域，具体涉及一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
苹果属于蔷薇科，是落叶乔木，有较强的极性，通常生长旺盛，树冠高大，树高可达15米，栽培条件下一般高3-5米左右。树干灰褐色，老皮有不规则的纵裂或片状剥落，小枝光滑。据测定，每百克苹果含果糖6.5-11.2克，葡萄糖2.5-3.5克，蔗糖1.0-5.2克，还含有微量元素锌、钙、磷、铁、钾及维生素B1、维生素B2、维生素C和胡萝卜素等。苹果喜光，喜微酸性到中性土壤，最适于土层深厚、富含有机质、心土为通气排水良好的沙质土壤。
苹果根腐病又名圆斑根腐病，是分布较广、危害较重的一种烂根病，根腐病是苹果根系衰弱的情况下，受土壤中***方米使用50%多菌灵1.5%克，或75%五氯硝基苯3克，翻入土中。②40%根腐宁1000倍或80%402乳油1500倍灌根。③使用氯化苦熏蒸剂，几乎能够杀死一切细菌、真菌、病毒、害虫及老鼠，防治多种土传病害，防治重返茬，改善土际环境。4、生物措施：①使用500倍“魔方”牌壳寡糖柠檬酸盐+3%印楝素浸种、浸菌。防治病菌、病毒、有害真菌、害虫，增加土壤中乳酸菌、放线菌等有益菌菌群，改善土壤团粒结构，增强土壤通透性，恢复生态平衡。②使用1000倍海藻精灌根大量杀灭有害真菌、细菌、病毒，增强土壤肥力，促进根系生长。上述方法虽然对治疗苹果树根腐病有一定效果，但效果并不理想。
发明内容
本发明提供了一种简单易行、效果优异、无污染的具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。
本发明还提供了该具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法。
本发明的技术方案如下：
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20-30份、纳豆芽孢杆菌10-20份、枯草芽孢杆菌15-25份、异常汉逊酵母20-30份、圆褐固氮菌5-15份、多孔磁性壳聚糖微球5-10份。
本发明的哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌均为市售，有效活菌数为10-100亿/克。
本发明所用的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），保藏编号分别为：CGMCC No.3435和CGMCC No.12402。
所述的，多孔磁性壳聚糖微球是由以下步骤制得的：
1）将氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20混合均匀，密封浸泡2-4h，50-55℃水浴加热并搅拌至羧甲基壳聚糖完全溶解，且静止至气泡完全逸出，得羧甲基壳聚糖相；
2）将司班-80和液体石蜡加至烧瓶中，50-60℃水浴加热，搅拌至混合均匀，作为石蜡相；
3）50-60℃水浴加热条件下，边搅拌边将羧甲基壳聚糖相滴加到石蜡相中，滴加完毕继续搅拌5min；匀速将50-60℃的水浴换成冰水浴，5-10min后撤去冰水浴，室温条件下添加混合溶液，反应5-9h，停止搅拌，依次用石油醚、无水乙醇洗涤数次，真空干燥，得粒径为5-10μm的多孔磁性壳聚糖微球。
所述的，氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20的重量比为100：5-15：10-15：10-20；所述氨水的浓度为20%。
所述的，司班-80和液体石蜡的重量比为1：25-30。
所述的，羧甲基壳聚糖相、石蜡相和混合溶液的重量比为1：6-8：0.4-0.6。
所述的，混合溶液是由正硅酸乙酯和无水乙醇按照1：10-20的重量比混合得到的。
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，是由以下步骤制得的：
1）分别取斜面保种的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度37℃，培养时间20h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液；
2）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液按5%接种量接入500L种子罐培养基中，35℃、180r/min条件下培养24h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液；
3）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液用硅藻土吸附，吸附完成后板框压滤机压滤，喷雾干燥，进风温度140-180℃、进料流量13-17ml/min，分别得异常汉逊酵母菌剂和圆褐固氮菌菌剂；
4）将哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、异常汉逊酵母菌剂、圆褐固氮菌菌剂和多孔磁性壳聚糖微球混合均匀，加入气流粉碎机，细度控制300-400目，即可制得具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。
所述的，牛肉膏蛋白胨培养基的具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15g/L，其余为水。
所述的，种子罐培养基的具体组成：牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，葡萄糖0.5%。
本发明的有益效果：
1.本发明具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，完全没有因化学药剂的使用所带来的化学抗药性等问题，因而有利于苹果的无公害生产。依靠相互间协同作用、增殖关系形成一个复杂、结构稳定、功能广泛的具有多种多样细菌微生物群落的生物菌群，对苹果树根腐病具有良好的防控作用。多孔磁性壳聚糖微球可为微生物菌剂提供栖息地，使微生物菌剂能够耐受外界不良环境。
2.本发明具有防控苹果树根腐病微生物菌剂简单易行、效果优异、无污染，可用于苹果树的任何生长期，特别是休眠期，不产生任何抗性。
3.本发明的制造方法简单易行，运行成本低，具有广阔的市场应用前景。
具体实施方式
结合实施例对本发明做进一步阐述，不构成对本发明的范围限制。
本发明的哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌均为市售，有效活菌数为10-100亿/克。
本发明所用的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），保藏编号分别为：CGMCC No.3435和CGMCC No.12402。
实施例1
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20份、纳豆芽孢杆菌10份、枯草芽孢杆菌25份、异常汉逊酵母30份、圆褐固氮菌5份、多孔磁性壳聚糖微球10份。
所述的，多孔磁性壳聚糖微球是由以下步骤制得的：
1）将氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20混合均匀，密封浸泡2h，55℃水浴加热并搅拌至羧甲基壳聚糖完全溶解，且静止至气泡完全逸出，得羧甲基壳聚糖相；
2）将司班-80和液体石蜡加至烧瓶中，50℃水浴加热，搅拌至混合均匀，作为石蜡相；
3）50℃水浴加热条件下，边搅拌边将羧甲基壳聚糖相滴加到石蜡相中，滴加完毕继续搅拌5min；匀速将50℃的水浴换成冰水浴，10min后撤去冰水浴，室温条件下添加混合溶液，反应5h，停止搅拌，依次用石油醚、无水乙醇洗涤数次，真空干燥，得粒径为5-10μm的多孔磁性壳聚糖微球。
所述的，氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20的重量比为100：5：10：20；所述氨水的浓度为20%。
所述的，司班-80和液体石蜡的重量比为1：25。
所述的，羧甲基壳聚糖相、石蜡相和混合溶液的重量比为1：6：0.6。
所述的，混合溶液是由正硅酸乙酯和无水乙醇按照1：10的重量比混合得到的。
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，是由以下步骤制得的：
1）分别取斜面保种的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度37℃，培养时间20h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液；
2）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液按5%接种量接入500L种子罐培养基中，35℃、180r/min条件下培养24h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液；
3）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液用硅藻土吸附，吸附完成后板框压滤机压滤，喷雾干燥，进风温度140℃、进料流量17ml/min，分别得异常汉逊酵母菌剂和圆褐固氮菌菌剂；
4）将哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、异常汉逊酵母菌剂、圆褐固氮菌菌剂和多孔磁性壳聚糖微球混合均匀，加入气流粉碎机，细度控制300-400目，即可制得具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。
所述的，牛肉膏蛋白胨培养基的具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15g/L，其余为水。
所述的，种子罐培养基的具体组成：牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，葡萄糖0.5%。
将本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂加水稀释10倍，混合均匀，制得微生物菌液；将微生物菌液灌根，每棵树浇灌100斤。灌根时间选在苹果树根幼果膨大期（4月-5月）进行，灌根后75天进行观察检测发现，平均每株苹果树增长18根新根，每克叶绿素含量为7.69毫克，增产9.4%，土壤PH值由未灌根前的4.5变为5.5，采用本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂处理苹果树根腐病指数由未处理的32%，下降至16%，防控苹果树根腐病效果显著。
实施例2
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌25份、纳豆芽孢杆菌15份、枯草芽孢杆菌20份、异常汉逊酵母25份、圆褐固氮菌10份、多孔磁性壳聚糖微球8份。
所述的，多孔磁性壳聚糖微球是由以下步骤制得的：
1）将氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20混合均匀，密封浸泡3h，53℃水浴加热并搅拌至羧甲基壳聚糖完全溶解，且静止至气泡完全逸出，得羧甲基壳聚糖相；
2）将司班-80和液体石蜡加至烧瓶中，55℃水浴加热，搅拌至混合均匀，作为石蜡相；
3）55℃水浴加热条件下，边搅拌边将羧甲基壳聚糖相滴加到石蜡相中，滴加完毕继续搅拌5min；匀速将55℃的水浴换成冰水浴，8min后撤去冰水浴，室温条件下添加混合溶液，反应7h，停止搅拌，依次用石油醚、无水乙醇洗涤数次，真空干燥，得粒径为5-10μm的多孔磁性壳聚糖微球。
所述的，氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20的重量比为100：10：13：15；所述氨水的浓度为20%。
所述的，司班-80和液体石蜡的重量比为1：28。
所述的，羧甲基壳聚糖相、石蜡相和混合溶液的重量比为1：7：0.5。
所述的，混合溶液是由正硅酸乙酯和无水乙醇按照1：15的重量比混合得到的。
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，是由以下步骤制得的：
1）分别取斜面保种的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度37℃，培养时间20h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液；
2）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液按5%接种量接入500L种子罐培养基中，35℃、180r/min条件下培养24h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液；
3）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液用硅藻土吸附，吸附完成后板框压滤机压滤，喷雾干燥，进风温度160℃、进料流量15ml/min，分别得异常汉逊酵母菌剂和圆褐固氮菌菌剂；
4）将哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、异常汉逊酵母菌剂、圆褐固氮菌菌剂和多孔磁性壳聚糖微球混合均匀，加入气流粉碎机，细度控制300-400目，即可制得具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。
所述的，牛肉膏蛋白胨培养基的具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15g/L，其余为水。
所述的，种子罐培养基的具体组成：牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，葡萄糖0.5%。
将本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂加水稀释10倍，混合均匀，制得微生物菌液；将微生物菌液灌根，每棵树浇灌100斤。灌根时间选在苹果树根幼果膨大期（4月-5月）进行，灌根后75天进行观察检测发现，平均每株苹果树增长16根新根，每克叶绿素含量为7.71毫克，增产9.1%，土壤PH值由未灌根前的4.5变为5.4，采用本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂处理苹果树根腐病指数由未处理的30%，下降至16%，防控苹果树根腐病效果显著。
实施例3
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌30份、纳豆芽孢杆菌20份、枯草芽孢杆菌15份、异常汉逊酵母20份、圆褐固氮菌15份、多孔磁性壳聚糖微球5份。
所述的，多孔磁性壳聚糖微球是由以下步骤制得的：
1）将氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20混合均匀，密封浸泡4h，50℃水浴加热并搅拌至羧甲基壳聚糖完全溶解，且静止至气泡完全逸出，得羧甲基壳聚糖相；
2）将司班-80和液体石蜡加至烧瓶中，60℃水浴加热，搅拌至混合均匀，作为石蜡相；
3）60℃水浴加热条件下，边搅拌边将羧甲基壳聚糖相滴加到石蜡相中，滴加完毕继续搅拌5min；匀速将60℃的水浴换成冰水浴，5min后撤去冰水浴，室温条件下添加混合溶液，反应9h，停止搅拌，依次用石油醚、无水乙醇洗涤数次，真空干燥，得粒径为5-10μm的多孔磁性壳聚糖微球。
所述的，氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20的重量比为100：15：15：10；所述氨水的浓度为20%。
所述的，司班-80和液体石蜡的重量比为1：30。
所述的，羧甲基壳聚糖相、石蜡相和混合溶液的重量比为1：8：0.4。
所述的，混合溶液是由正硅酸乙酯和无水乙醇按照1：20的重量比混合得到的。
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，是由以下步骤制得的：
1）分别取斜面保种的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度37℃，培养时间20h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液；
2）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液按5%接种量接入500L种子罐培养基中，35℃、180r/min条件下培养24h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液；
3）分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液用硅藻土吸附，吸附完成后板框压滤机压滤，喷雾干燥，进风温度180℃、进料流量13ml/min，分别得异常汉逊酵母菌剂和圆褐固氮菌菌剂；
4）将哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、异常汉逊酵母菌剂、圆褐固氮菌菌剂和多孔磁性壳聚糖微球混合均匀，加入气流粉碎机，细度控制300-400目，即可制得具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。
所述的，牛肉膏蛋白胨培养基的具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15g/L，其余为水。
所述的，种子罐培养基的具体组成：牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，葡萄糖0.5%。
将本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂加水稀释10倍，混合均匀，制得微生物菌液；将微生物菌液灌根，每棵树浇灌100斤。灌根时间选在苹果树根幼果膨大期（4月-5月）进行，灌根后75天进行观察检测发现，平均每株苹果树增长15根新根，每克叶绿素含量为7.62毫克，增产9.3%，土壤PH值由未灌根前的4.5变为5.3，采用本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂处理苹果树根腐病指数由未处理的32%，下降至18%，防控苹果树根腐病效果显著。
对比例1
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20份、纳豆芽孢杆菌10份、枯草芽孢杆菌25份、异常汉逊酵母30份、圆褐固氮菌5份。
其余同实施例1。
将本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂加水稀释10倍，混合均匀，制得微生物菌液；将微生物菌液灌根，每棵树浇灌100斤。灌根时间选在苹果树根幼果膨大期（4月-5月）进行，灌根后75天进行观察检测发现，平均每株苹果树增长10根新根，每克叶绿素含量为7.21毫克，增产5.5%，土壤PH值由未灌根前的4.5变为4.9，采用本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂处理苹果树根腐病指数由未处理的31%，下降至26%，防控苹果树根腐病效果一般。
对比例2
一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20份、纳豆芽孢杆菌10份、枯草芽孢杆菌25份、多孔磁性壳聚糖微球10份。
其余同实施例1。
将本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂加水稀释10倍，混合均匀，制得微生物菌液；将微生物菌液灌根，每棵树浇灌100斤。灌根时间选在苹果树根幼果膨大期（4月-5月）进行，灌根后75天进行观察检测发现，平均每株苹果树增长7根新根，每克叶绿素含量为6.56毫克，增产4.7%，土壤PH值由未灌根前的4.5变为4.8，采用本实施例具有防控苹果树根腐病微生物菌剂处理苹果树根腐病指数由未处理的32%，下降至27%，防控苹果树根腐病效果一般。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20-30份、纳豆芽孢杆菌10-20份、枯草芽孢杆菌15-25份、异常汉逊酵母20-30份、圆褐固氮菌5-15份、多孔磁性壳聚糖微球5-10份；
所述多孔磁性壳聚糖微球是由以下步骤制得的：
1)将氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20混合均匀，密封浸泡2-4h，50-55℃水浴加热并搅拌至羧甲基壳聚糖完全溶解，且静止至气泡完全逸出，得羧甲基壳聚糖相；
2)将司班-80和液体石蜡加至烧瓶中，50-60℃水浴加热，搅拌至混合均匀，作为石蜡相；
3)50-60℃水浴加热条件下，边搅拌边将羧甲基壳聚糖相滴加到石蜡相中，滴加完毕继续搅拌5min；匀速将50-60℃的水浴换成冰水浴，5-10min后撤去冰水浴，室温条件下添加混合溶液，反应5-9h，停止搅拌，依次用石油醚、无水乙醇洗涤数次，真空干燥，得粒径为5-10μm的多孔磁性壳聚糖微球；
所述混合溶液是由正硅酸乙酯和无水乙醇按照1：10-20的重量比混合得到的。
2.根据权利要求1所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，所述氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20的重量比为100：5-15：10-15：10-20；所述氨水的浓度为20％。
3.根据权利要求1所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，所述司班-80和液体石蜡的重量比为1：25-30。
4.根据权利要求1所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖相、石蜡相和混合溶液的重量比为1：6-8：0.4-0.6。
5.一种权利要求1-4中任一项所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，其特征在于，是由以下步骤制得的：
1)分别取斜面保种的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度37℃，培养时间20h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液；
2)分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，35℃、180r/min条件下培养24h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液；
3)分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液用硅藻土吸附，吸附完成后板框压滤机压滤，喷雾干燥，进风温度140-180℃、进料流量13-17ml/min，分别得异常汉逊酵母菌剂和圆褐固氮菌菌剂；
4)将哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、异常汉逊酵母菌剂、圆褐固氮菌菌剂和多孔磁性壳聚糖微球混合均匀，加入气流粉碎机，细度控制300-400目，即可制得具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。
6.根据权利要求5所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨培养基的具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15g/L，其余为水。
7.根据权利要求5所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述种子罐培养基的具体组成：牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，葡萄糖0.5％。
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