CN108402338A - 一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应用、石斑鱼饲料 - Google Patents

一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应用、石斑鱼饲料 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应用、石斑鱼饲料，属饲料领域。上述饲料添加剂包括银杏叶、甘草、洋蓟、水飞蓟、女贞子、艾叶、黄芪、柴胡、当归、姜黄、茵陈蒿、五味子及芽孢杆菌。该饲料添加剂安全环保，无毒副作用，中草药药效较高，毒副作用较低。制备方法包括：制备中草药发酵培养基，然后接种芽孢杆菌的种子液，发酵。此方法简单，可增加中草药有效成分的利用率，并可除去中草药的苦涩味道。将其用于石斑鱼饲料中，可有效预防各种原因引起的石斑鱼肝细胞与组织损伤，减少肝病给石斑鱼养殖带来的危害，增加养殖收益。含有上述饲料添加剂的石斑鱼饲料具有提高石斑鱼整体健康情况以及生产性能的作用。

Description

一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应 用、石斑鱼饲料
技术领域
本发明涉及饲料领域，且特别涉及一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应用、石斑鱼饲料。
背景技术
近年来，由于水产养殖集约化程度的不断加深、养殖环境的不断恶化以及药物滥用等问题，导致鱼类疾病肆虐，冲击了水产养殖业的生产，造成了不可估量的经济损失。肝脏作为鱼类体内代谢、消化、***和免疫等功能的重要器官，在不断恶化的环境中受到了来自各类代谢毒物、病毒、细菌等造成的肝脏损伤，引起了水产养殖业的广泛关注。
过去，使用抗生素、化学合成药物和类固醇激素常作为治疗或预防鱼类肝脏疾病的重要途径，然而大量的滥用这类物质导致水产品的药残超标，以至于危害人类本身的健康。随着传统饲料添加剂逐渐被淘汰，开发“绿色、高效、低成本”的保肝型饲料添加剂正是符合当前“绿色养殖”的要求。
中国是中草药的发源地，目前中国大约有12000种药用植物，这是其他国家所不具备的，在中药资源上我们占据垄断优势。古代先贤对中草药和中医药学的深入探索、研究和总结，使得中草药得到了最广泛的认同与应用。但是在现有技术条件下，其还存在许多尚未解决的问题：(1)用量大，见效慢；(2)适口性差；(3)毒副作用。
因此，现有的中草药制剂还不能满足水产养殖业的需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，该饲料添加剂安全环保，无毒副作用，所含的芽孢杆菌与中草药混合物有协同作用，有利于提高中草药的药效，降低毒副作用。并且，中草药成分对水产动物的微生物菌群也有一定的协同作用。
本发明的第二目的在于提供一种上述饲料添加剂的制备方法，该方法简单，可增加中草药有效成分的利用率，降低中草药原料的不良反应，除去中草药的苦涩味道。
本发明的第三目的在于提供上述饲料添加剂在石斑鱼饲料中的应用，将其添加于石斑鱼饲料中，可有效预防各种原因引起的石斑鱼肝细胞与组织损伤，促使受损的肝细胞修复与再生，改善肝脏生化指标，提高机体免疫力，减少肝病给石斑鱼养殖带来的危害，增加养殖收益。
本发明的第四目的在于提供一种石斑鱼饲料，该饲料包括上述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，有利于提高石斑鱼的免疫力、抗应激能力以及整体健康情况，提高其生产性能。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：
本发明提出一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，包括中草药混合物以及芽孢杆菌。
中草药混合物包括5-15重量份的银杏叶、6-18重量份的甘草、 3-10重量份的洋蓟、2-5重量份的水飞蓟、7-16重量份的女贞子、9-15 重量份的艾叶、5-15重量份的黄芪、6-15重量份的柴胡、3-6重量份的当归、5-16重量份的姜黄、3-10重量份的茵陈蒿以及3-12重量份的五味子。
本发明还提出上述饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
将中草药混合物制备成中草药发酵培养基，于中草药发酵培养基中接种芽孢杆菌的种子液，发酵。
另外，本发明还提出了上述饲料添加剂的应用，例如将其用于添加至石斑鱼饲料中。
此外，本发明还提出了一种石斑鱼饲料，该石斑鱼饲料包括上述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。
本发明较佳实施例提供的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应用、石斑鱼饲料的有益效果包括：
(1)较强的针对性。本发明实施例提供的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的制备方法能针对性地解决石斑鱼在养殖过程中出现的如：花肝，白肝，肝坏死，肝功能异常等肝脏健康问题。在石斑鱼体外实验与养殖试验中均获得良好的效果。
(2)提高药效。芽孢杆菌发酵可以分泌各种酶，把中草药细胞壁内部存在的大量有效成分解离出来，以利于机体的吸收，从而增强药效，减少用量，解决中草药见效慢的问题。
(3)降低毒副作用，增加动物的接受程度。本发明实施例中所使用的中草药如洋蓟、水飞蓟与柴胡等，如未处理，都会有一定的毒副作用，而且味道苦涩，添加到饲料中会严重降低水产动物采食量，经过发酵处理的中草药，在保证药效的前提下，苦涩味道大幅度降低，毒副作用几乎没有，并且还有产生新药效物质的可能。
(4)益生菌与中草药协同作用。本发明实施例使用的发酵菌种芽孢杆菌为益生菌，具有促进动物生长发育，提高免疫力的作用。益生菌与中草药相辅相成，中草药能促进益生菌的增殖，益生菌则能增强中草药的吸收效率，经过适宜益生菌发酵的中草药，具有天然无毒，不残留，安全环保，具有广阔的发展前景。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂及其制备方法与应用、石斑鱼饲料进行具体说明。
本发明实施例所提供的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂主要包括中草药混合物以及作为益生菌的芽孢杆菌。
其中，中草药混合物例如可以包括5-15重量份的银杏叶、6-18 重量份的甘草、3-10重量份的洋蓟、2-5重量份的水飞蓟、7-16重量份的女贞子、9-15重量份的艾叶、5-15重量份的黄芪、6-15重量份的柴胡、3-6重量份的当归、5-16重量份的姜黄、3-10重量份的茵陈蒿以及3-12重量份的五味子。
单独地，上述各成分分别可包括如下作用：银杏叶可起到抗氧化、抑制细胞凋亡、对肝脏有保护与抗纤维化的作用。甘草可起到抗炎、调节免疫力以及防治肝损害等药理作用。洋蓟可起到抗氧化、降低机胆固醇以及促进胆汁分泌与保护肝脏的作用。水飞蓟可起到保护肝脏、抗肝炎病毒复制、降血脂以及保护心肌等作用。女贞子可起到护肝、免疫调节和调节血脂等多种药理作用。艾叶可起到抗菌、抗病毒以及保护肝脏的作用。
黄芪可通过活化吞噬细胞、参与肝细胞内蛋白质的合成等来增强吞噬细胞功能，以消除损伤的肝细胞，同时参与蛋白质合成，促进新的肝细胞生成从而发挥对肝细胞的保护作用。五味子可改善肝功能、抑制肝脏胶原纤维的生成、减轻肝细胞脂质过氧化损伤，从而防止肝纤维化的形成与发展。
柴胡可起到和解表里，疏肝，升阳的作用。当归可起到补血、活血、止痛等功效，可应用于慢性肝病临床中。姜黄可起到保肝、抗炎、抗氧化、抗肿瘤的作用。茵陈蒿对肝、胆、胰腺、免疫***等均有广泛而独特的生物学活性。
上述原料成分除了各自具有单独的作用外，各原料之间还具有协同增效作用，配伍的效果好于单方，例如：洋蓟与水飞蓟等配伍后有助于肝脏排出毒素，银杏叶与甘草等配伍后可以保护肝脏细胞，促进肝功能恢复。
本发明实施例所提供的芽孢杆菌例如可以包括芽孢杆菌SE5(保藏于集美大学水产学院营养与饲料教研室)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtili)CGMCC：1.892，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。此外，也可以是其它可作为有益菌的芽孢杆菌。
通过将芽孢杆菌作为石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的原料之一，能够明显改善石斑鱼体内菌群组成，促进其生长。值得说明的是，本发明实施例中所采用的芽孢杆菌较其它有益菌而言，在颗粒料、粉料的加工过程中以及酸性环境中具有较高稳定性，在肠道内环境中能发挥作用而增殖。
特别地，芽孢杆菌在肠道酸性环境中具有高度的稳定性，其不仅能分泌较强活性的蛋白酶及淀粉酶，促进饲料营养物质的消化。而且，在本发明实施例的基础上，芽孢杆菌发酵分泌的酶，能够将中草药细胞壁内部存在的大量有效成分解离出来，从而利于石斑鱼机体的吸收，从而增强药效，减少用量，解决中草药见效慢的问题。
承上，本发明实施例中所用的益生菌芽孢杆菌与中草药成分相辅相成，中草药能促进益生菌芽孢杆菌的增殖，益生菌芽孢杆菌反之能增强中草药的吸收效率。
此外，本发明实施例还提供了上述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的制备方法，可参考地，该制备方法例如可以包括以下步骤：将中草药混合物制备成中草药发酵培养基，于中草药发酵培养基中接种芽孢杆菌的种子液，发酵。
制备芽孢杆菌的种子液可以包括以下步骤：于种子培养基中接种芽孢杆菌，然后于28-32℃的条件下培养22-26h(优选于30℃的条件下培养24h)。
种子培养基(液体形式)的成分包括蛋白胨、酵母膏和钠盐。其中，蛋白胨和酵母膏主要是为芽孢杆菌提供氮源，该类氮源也可以用大豆粉或者硫酸铵替代。该种子培养基中的碳源可以玉米粉或糖蜜替代。钠盐例如可以为NaCl。较佳地，上述种子培养基的pH值可控制于7.0±0.1，优选为7.0。
种子培养基配制好后，灭菌30-35min(121℃)，冷却备用。
接种是挑取保藏的芽孢杆菌至上述制成的液体种子培养基中，培养，获得种子液。优选地，培养是于180-220r/min的转速条件下进行。该转速下芽孢杆菌，特别是芽孢杆菌SE5生长情况最好，转速过高或过低都会减慢芽孢杆菌的生长。
进一步地，制备中草药发酵培养基包括以下步骤：
混合中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4以及 MgSO4·7H2O，得培养基基质；将培养基基质与水混合。其中，麸皮和葡萄糖主要用于提供碳源，硫酸铵主要用于提供氮源，其余物质主要用于提供矿物质元素镁与钾元素等。值得说明的是，上述碳源、氮源以及矿物质元素等也可以由其它芽孢杆菌能够利用的相应物质替换。
可选地，中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4以及MgSO4·7H2O依次按重量比为85-95：4-6：2-4：1-2：0.2-0.4： 0.1-0.3混合。
优选地，中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4以及MgSO4·7H2O依次按重量比为90：5：3：1.5：0.3：0.2混合。
得到上述培养基基质后，将其与水(双蒸水)混合，例如可按固液比为1：1.5-2.5，优选为1：2混合。然后灭菌(121℃)30-35min，冷却即可。
值得说明的是，在制备中草药发酵培养基的过程中，可在将各中草药成分混合前，分别对各中草药成分进行干燥和粉碎，然后过 80-100目筛，以增大中草药成分与芽孢杆菌的接触面积，有利于提高有效成分的溶出率并提高药效作用。
本发明实施例中，中草药发酵培养基中接种的芽孢杆菌的种子液的质量例如可占中草药发酵培养基的质量的4-8％。选择上述范围的接种量能确保较快的发酵速度。在该范围内，接种量越大，发酵速度越快。超过上述接种范围，发酵速度增长不明显且成本明显增加。
作为可选地，本发明实施例中发酵可以于30-34℃的条件下发酵 70-74h。优选于32℃的条件下发酵72h。
由于本发明实施例中所使用的中草药含有洋蓟、水飞蓟与柴胡等，该类物质在常用条件下会有一定的毒副作用，而且味道苦涩，添加到饲料中会严重降低水产动物采食量。鉴于此，本发明实施例通过上述发酵处理，可在保证药效的前提下，大幅度降低上述中草药物质的苦涩味及毒副作用(几乎无毒副作用)，并且还有产生新药效物质的可能。
进一步地，发酵后，还包干燥发酵产物至水分含量不超过10wt％。干燥后，还包括粉碎所述干燥产物，过80-100目筛。
此外，本发明实施例还提供了一种上述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的应用，例如将其用于添加至石斑鱼饲料中。优选地，每千克石斑鱼饲料中石斑鱼保肝型发酵中草药饲料的添加量不超过25 克。
此外，本发明实施例还提供了一种石斑鱼饲料，该石斑鱼饲料除了包括上述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，还可以包括普通石斑鱼的基础日粮配方。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
(1)将蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L配制成pH为 7.0的液体种子培养基，经121℃灭菌30min，冷却至室温后备用。
(2)挑取斜面保藏的芽孢杆菌SE5(Bacillus pumilus)1环，接种到步骤(1)制成的液体种子培养基中，于30℃、200r/min的条件下摇床培养24h，获得芽孢杆菌的种子液备用。
(3)将8重量份的银杏叶、18重量份的甘草、5重量份的洋蓟、 2重量份的水飞蓟、10重量份的女贞子、15重量份的艾叶、8重量份的黄芪、8重量份的柴胡、3重量份的当归、10重量份的姜黄、3重量份的茵陈蒿以及10重量份的五味子烘干后，粉碎，过80目筛，均匀混合后获得中草药混合物。
(4)将(3)所得的中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、 KH2PO4以及MgSO4·7H2O按重量比为90：5：3：1.5：0.3：0.2均匀混合后，得到培养基基质。
(5)将步骤(4)获得的培养基基质按照固液比为1：2与双蒸水混合，于121℃灭菌30min，冷却至室温，制得中草药固态发酵培养基。
(6)将步骤(2)获得的芽孢杆菌SE5种子液接种至步骤(5) 获得的中草药固态发酵培养基中，芽孢杆菌的种子液的质量占中草药发酵培养基的质量的6％。于32℃条件下发酵72h，在65℃烘干至水分为10wt％，粉碎过80目筛，包装，得石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。
实施例2
(1)将蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L配制成pH为 6.9的液体种子培养基，经121℃灭菌35min，冷却至室温后备用。
(2)挑取斜面保藏的芽孢杆菌SE5(Bacillus pumilus)1环，接种到步骤(1)制成的液体种子培养基中，于28℃、180r/min的条件下摇床培养26h，获得芽孢杆菌的种子液备用。
(3)将8重量份的银杏叶、18重量份的甘草、5重量份的洋蓟、 2重量份的水飞蓟、10重量份的女贞子、15重量份的艾叶、8重量份的黄芪、8重量份的柴胡、3重量份的当归、10重量份的姜黄、3重量份的茵陈蒿以及10重量份的五味子烘干后，粉碎，过100目筛，均匀混合后获得中草药混合物。
(4)将(3)所得的中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、 KH2PO4以及MgSO4·7H2O按重量比为85：4：2：1：0.2：0.1均匀混合后，得到培养基基质。
(5)将步骤(4)获得的培养基基质按照固液比为1：1.5与双蒸水混合，于121℃灭菌35min，冷却至室温，制得中草药固态发酵培养基。
(6)将步骤(2)获得的芽孢杆菌SE5种子液接种至步骤(5) 获得的中草药固态发酵培养基中，芽孢杆菌的种子液的质量占中草药发酵培养基的质量的4％。于30℃条件下发酵74h，在65℃烘干至水分为8wt％，粉碎过100目筛，包装，得石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。
实施例3
(1)将蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L配制成pH为 7.1的液体种子培养基，经121℃灭菌32min，冷却至室温后备用。
(2)挑取斜面保藏的芽孢杆菌SE5(Bacillus pumilus)2环，接种到步骤(1)制成的液体种子培养基中，于32℃、220r/min的条件下摇床培养22h，获得芽孢杆菌的种子液备用。
(3)将8重量份的银杏叶、18重量份的甘草、5重量份的洋蓟、 2重量份的水飞蓟、10重量份的女贞子、15重量份的艾叶、8重量份的黄芪、8重量份的柴胡、3重量份的当归、10重量份的姜黄、3重量份的茵陈蒿以及10重量份的五味子烘干后，粉碎，过90目筛，均匀混合后获得中草药混合物。
(4)将(3)所得的中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、 KH2PO4以及MgSO4·7H2O按重量比为95：6：4：2：0.4：0.3均匀混合后，得到培养基基质。
(5)将步骤(4)获得的培养基基质按照固液比为1：2.5与双蒸水混合，于121℃灭菌32min，冷却至室温，制得中草药固态发酵培养基。
(6)将步骤(2)获得的芽孢杆菌SE5种子液接种至步骤(5) 获得的中草药固态发酵培养基中，芽孢杆菌的种子液的质量占中草药发酵培养基的质量的8％。于34℃条件下发酵70h，在65℃烘干至水分为6wt％，粉碎过90目筛，包装，得石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：中草药混合物的原料含有6 重量份的银杏叶、10重量份的甘草、3重量份的洋蓟、5重量份的水飞蓟、7重量份的女贞子、9重量份的艾叶、15重量份的黄芪、6重量份的柴胡、6重量份的当归、16重量份的姜黄、5重量份的茵陈蒿以及12重量份的五味子。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于：中草药混合物的原料含有15 重量份的银杏叶、8重量份的甘草、5重量份的洋蓟、3重量份的水飞蓟、12重量份的女贞子、10重量份的艾叶、5重量份的黄芪、15 重量份的柴胡、5重量份的当归、10重量份的姜黄、6重量份的茵陈蒿以及6重量份的五味子。
实施例6
本实施例与实施例1的区别在于：中草药混合物的原料含有9 重量份的银杏叶、11重量份的甘草、6重量份的洋蓟、3重量份的水飞蓟、11重量份的女贞子、12重量份的艾叶、10重量份的黄芪、10 重量份的柴胡、5重量份的当归、10重量份的姜黄、6重量份的茵陈蒿以及8重量份的五味子。
实施例7
本实施例与实施例1的区别在于：中草药混合物的原料含有5 重量份的银杏叶、6重量份的甘草、10重量份的洋蓟、3重量份的水飞蓟、16重量份的女贞子、12重量份的艾叶、10重量份的黄芪、10 重量份的柴胡、5重量份的当归、5重量份的姜黄、10重量份的茵陈蒿以及3重量份的五味子。
实施例8
本实施例与实施例1的区别在于：芽孢杆菌为购自中国普通微生物菌种保藏管理中心的CGMCC：1.892的枯草芽孢杆菌。
实施例9
本实施例与实施例1的区别在于：种子培养基中的氮源为大豆粉，碳源为玉米粉。
实施例10
本实施例与实施例1的区别在于：种子培养基中的氮源为硫酸铵，碳源为糖蜜。
实施例11
本实施例提供一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的应用，每千克石斑鱼饲料中添加25克的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料。
实施例12
本实施例提供一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的应用，每千克石斑鱼饲料中添加20克的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料。
实施例13
本实施例提供一种石斑鱼饲料，该石斑鱼饲料含有如实施例1-10 任一实施例所得的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。
试验例
重复实施上述实施例1-10，得到足够多的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。以实施例1、实施例4-实施例6为例，进行以下试验。
试验一：石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂对氧化损伤石斑鱼肝细胞的保护作用。
从石斑鱼肝脏中分离出肝细胞，接种于96孔板或6孔板中，待其贴壁融合70％以上时备用。将实验分成18组，分别为对照组、损伤组和试验例1-4(对应实施例1、实施例4-实施例6为例)，各组处理如下：对照组：加入L-15(含有1％S/P，15％FBS)，培养8h后收集上清和细胞；损伤组：加入浓度为800umol/mlH2O2的L-15(含有 1％S/P，15％FBS)，培养8h后收集上清和细胞；试验例1-4：加入浓度为800umol/mlH2O2和浓度为1mg/ml各味中药发酵制剂的L-15(含有1％S/P，15％FBS)，培养8h后收集上清和细胞。检测ALT(谷丙转氨酶)，AST(谷草转氨酶)，LDH(乳酸脱氢酶)等指标。其结果如表1所示。
表1石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂对石斑鱼肝细胞氧化损伤的保护作用
由表1可以看出，与对照组相比，当石斑鱼肝细胞受到氧化损伤时，其AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)和LDH(乳酸脱氢酶)指标均显著增加，ALT/AST也有所增加，说明石斑鱼肝细胞受到严重损伤。继续对比试验例1-4可以看出，通过添加实施例1、4-6 对应的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，可显著降低石斑鱼的AST、ALT、LDH以及ALT/AST指标，说明试验例1-4可有效的保护石斑鱼肝细胞免受损伤。其中，部分试验例组的数据优于对照组，说明其对石斑鱼肝细胞有较好的修复作用。
试验二：养殖试验。
挑选大小基本一致，无疾病症状的石斑鱼450尾，随机放入15 个体积为100cm×60cm×80cm的网箱中，每个网箱30尾。15个网箱同置于一个长方形水泥池中，将15个网箱随机分成5个处理组，每个处理组3个重复。分别为对照组和试验例1-4(对应实施例1、实施例4-实施例6为例)，对照组饲喂商用饲料，试验例1-4为商用饲料分别添加0.25wt％的实施例1、实施例4-实施例6的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，斜带石斑鱼的平均初始体重为12.6g。
在每天的8:00和16:00进行饱食投喂，每两天进行一次吸粪，养殖水体为活水。在养殖过程中，每日观察和记录摄食量和游泳行为是否正常，养殖周期为8周。养殖水体的温度保持在22.5-30℃，溶解氧大于5.7mg/L。其结果如表2-4所示。
表2石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂对石斑鱼生产性能的影响
由表2可以看出，通过添加实施例1、4-6对应的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，可以提高石斑鱼的增重率，降低肝体比并对石斑鱼的成活率没有影响。
表3石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂对石斑鱼肝功能指标的影响
由表3可以看出，通过添加实施例1、4-6对应的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，可显著降低石斑鱼血液中谷草转氨酶与谷丙转氨酶的活力，说明本发明实施例的发酵中草药对石斑鱼肝脏有很强的保护作用；此外，还可以看出石斑鱼血液中总胆固醇也显著降低，这表明添加实施例1、4-6对应的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂可提高石斑鱼的健康水平。
表4石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂对石斑鱼肝脏抗氧化指标的影响
由表4可以看出，较对照组而言，试验例1-4降低了石斑鱼肝脏中丙二醛的含量，提高了超氧化物气化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，说明通过添加实施例1、4-6对应的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，可降低丙二醛对石斑鱼的毒害，而两种抗氧化酶活性的提高表明通过添加实施例1、4-6对应的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，可显著提高石斑鱼的免疫力和抗应激能力，提高其生产性能。
按照上述试验例的方法对实施例2、3以及7-10所得的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂进行试验，其结果显示通过在石斑鱼的商用饲料中添加上述实施例提供的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，同样可有效保护石斑鱼肝细胞免受损伤，对石斑鱼肝细胞有较好的修复作用，提高石斑鱼的增重率，降低肝体比，提高石斑鱼的健康水平以及显著提高石斑鱼的免疫力、抗应激能力以及生产性能的作用。
综上所述，本发明实施例提供的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂安全环保，无毒副作用，所含的芽孢杆菌与中草药混合物有协同作用，有利于提高中草药的药效，降低毒副作用。并且，中草药成分对水产动物的微生物菌群也有一定的协同作用。所提供的制备方法简单，可增加中药有效成分的利用率，降低中药原料的不良反应，除去中草药的苦涩味道。将石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂添加于石斑鱼饲料中，可有效预防各种原因引起的石斑鱼肝细胞与组织损伤，促使受损的肝细胞修复与再生，改善肝脏生化指标，提高机体免疫力，减少肝病给石斑鱼养殖带来的危害，增加养殖收益。包括上述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，有利于提高石斑鱼的免疫力、抗应激能力以及整体健康情况，提高其生产性能。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂，其特征在于，包括中草药混合物以及芽孢杆菌；
所述中草药混合物包括5-15重量份的银杏叶、6-18重量份的甘草、3-10重量份的洋蓟、2-5重量份的水飞蓟、7-16重量份的女贞子、9-15重量份的艾叶、5-15重量份的黄芪、6-15重量份的柴胡、3-6重量份的当归、5-16重量份的姜黄、3-10重量份的茵陈蒿以及3-12重量份的五味子。
2.一种如权利要求1所述的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将所述中草药混合物制备成中草药发酵培养基，于所述中草药发酵培养基中接种所述芽孢杆菌的种子液，发酵。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，制备所述芽孢杆菌的所述种子液包括以下步骤：
于种子培养基中接种芽孢杆菌，然后于28-32℃的条件下培养22-26h；所述种子培养基的成分包括蛋白胨、酵母膏和钠盐；
优选地，培养是于180-220r/min的转速条件下进行。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，制备所述中草药发酵培养基包括以下步骤：
混合所述中草药混合物与麸皮、葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4及MgSO4·7H2O，得培养基基质；将所述培养基基质与水混合；
优选地，所述中草药混合物与所述麸皮、所述葡萄糖、所述(NH4)2SO4、所述KH2PO4以及所述MgSO4·7H2O依次按重量比为85-95：4-6：2-4：1-2：0.2-0.4：0.1-0.3混合。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，接种的所述芽孢杆菌的所述种子液的质量占所述中草药发酵培养基的质量的4-8％。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，发酵是于30-34℃的条件下发酵70-74h；
优选地，于32℃的条件下发酵72h。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，发酵后，还包干燥发酵产物至水分含量不超过10wt％。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，干燥后，还包括粉碎干燥产物，过80-100目筛。
9.如权利要求1所述的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂的应用，其特征在于，所述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂用于添加至石斑鱼饲料中；
优选地，每千克所述石斑鱼饲料中所述石斑鱼保肝型发酵中草药饲料的添加量不超过25克。
10.一种石斑鱼饲料，其特征在于，所述石斑鱼饲料包括如权利要求1所述的石斑鱼保肝型发酵中草药饲料添加剂。
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