CN108368059A

CN108368059A - 一种取代的酞嗪酮化合物及其药物组合物

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Publication number: CN108368059A
Application number: CN201780004367.2A
Authority: CN
Inventors: 王义汉; 李焕银
Original assignee: Shenzhen Targetrx Inc
Current assignee: Shenzhen Targetrx Inc
Priority date: 2016-04-18
Filing date: 2017-04-17
Publication date: 2018-08-03
Anticipated expiration: 2037-04-17
Also published as: WO2017181918A1; CN108368059B

Abstract

本发明公开了如式（I）所示的取代的酞嗪酮化合物以及含有该化合物、或其晶型、药学上可接受的盐、前药、互变异构体、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂合物的药物组合物及其用途。本发明公开的酞嗪酮化合物及包含该化合物的组合物对聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶具有优异的抑制性，同时具有更好的药代动力学参数特性，能够提高化合物在动物体内的药物浓度，以提高药物疗效和安全性。

Description

一种取代的酞嗪酮化合物及其药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种酞嗪酮化合物及包含该化合物的组合物及其用途。

背景技术

聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(Poly(ADP-ribose)poly-merase,PARP)是40年前由Pierre Chambon Weill和Paul Mandel等从鸡肝胞核中提取并纯化的一种单链DNA修复酶，其通过碱基切除修复(base excision repair,BER)途径对DNA复制过程出现的单链损伤进行切除修复，从而参与DNA的复制与转录并维持基因组稳定性(Vyas S,Chang P.,New PARP targets for cancer therapy[J].Nat.Rev.Cancer,2014,14,502-509.)。

PARP家族由18个核蛋白成员组成，但目前研究认为仅有其中的6个具有聚合ADP核糖并发挥DNA修复的作用，其他成员仅具有传递ADP核糖的功能，其中PARP-1和PARP-2是最早被发现也是目前为止研究最为成熟的PARP家族成员，在碱基切除修复过程中具有核心修复功能。

PARP-1含有3个结构域：N端含有2个锌指结构的DNA结合结构域(DNA binding domain,DBD)、中间片段自校正结构域(auto-modification domain,AMD)以及C端催化结构域(catalytic domain,CD)。DNA的单链损伤可以诱导PARP-1的大量活化,活化的PARP-1迅速结合于DNAS损伤的缺口位点形成二聚体，并进一步催化尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)分解成ADP核糖和尼克酰胺，生成的ADP核糖结合到PARP-1蛋白上并聚合组蛋白及其他一些DNA修复蛋白形成ADP核糖聚合物ADP ribose polymer,PAR)，所形成的PAR复合体所携带的大量负电荷可以进一步招募大量参与BER的修复蛋白如XRCCl等共同完成DNA单链修复过程(single strain break,SSB)。尽管PARP-1的DNA修复功能在生理状态下至关重要，但研究发现PARP-1在肿瘤细胞中呈过表达状态，在肿瘤细胞受细胞毒药物DNA破坏过程中扮演了DNA修复的关键角色，这或许可以部分解释肿瘤对细胞毒类化疗药物的原发或继发性耐药。因此，在肿瘤化疗过程中抑制PARP-1的DNA修复功能对化疗药物疗效的提高存在重要的研究价值。

PARP抑制剂的抗肿瘤研究主要分布在2个方面，即单药用于特定基因突变的肿瘤亚型和联合放化疗增敏。目前多数PARP抑制剂已进入临床试验阶段，部分已取得可喜的临床数据，提示PARP抑制剂可能存在着潜力巨大的临床价值。例如，Rucaparib由Pfizer公司研发，首个进入临床研究的PARP-1抑制剂。临床前体外实验显示出Rucaparib对40株卵巢癌细胞可靠的抗肿瘤效应，且在联合化疗药物卡铂、多柔比星及拓扑替康中显示出对卵巢癌细胞株显著的杀伤效应。奥拉帕尼(Olaparib)是由AstraZeneca公司开发的能同时抑制PARP-1和PARP-2功能的口服抑制剂，体外实验数据显示其半数抑制浓度(IC₅₀)分别为PARP-1＝5nmol/L、PARP-2＝1nmol/L。2014年12月，FDA迅速批准了奥拉帕尼作为单药治疗之前至少经过3次化疗的晚期卵巢癌患者，或者怀疑BRCA突变的晚期卵巢癌。目前，阿斯利康正开展多个III期研究，调查奥拉帕尼用于BRCA突变卵巢癌、胃癌、乳腺癌的治疗。奥拉帕尼的作用模式，赋予其具有DNA修复缺陷的广泛肿瘤类型的潜力。

因此，本领域仍需要开发对聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶有抑制活性或更好药效学性能的PARP抑制剂。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种酞嗪酮化合物及包含该化合物的组合物及其用途，其具有PARP抑制活性，且具有更好的药效学/药代动力学性能的化合物。

对此，本发明采用的技术方案为：

一种酞嗪酮化合物，如式(I)所示的酞嗪酮化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、前药、代谢物、互变异构体、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂化合物，

式(1)中，

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氢、氘、卤素或三氟甲基；

附加条件是，所述酞嗪酮化合物至少含有一个氘原子。

采用此技术方案，氘在药物分子中的形状和体积与氢基本上相同，如果药物分子中氢被选择性替换为氘，氘代药物一般还会保留原来的生物活性和选择性。同时发明人经过实验证实，碳氘键的结合比碳氢键的结合更稳定，可直接影响一些药物的吸收、分布、代谢和***等属性，从而提高药物的疗效、安全性和耐受性。

作为本发明的进一步改进，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量0.015％，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。

在另一优选例中，氘在各氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量(0.015％)，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。

具体地说，在本发明中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²各氘代位置中氘同位素含量至少是5％，较佳地大于10％，更佳地大于15％，更佳地大于20％，更佳地大于25％，更佳地大于30％，更佳地大于35％，更佳地大于40％，更佳地大于45％，更佳地大于50％，更佳地大于55％，更佳地大于60％，更佳地大于65％，更佳地大于70％，更佳地大于75％，更佳地大于80％，更佳地大于85％，更佳地大于90％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。

在另一选例中，式(I)中化合物的R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²，至少其中一个R含氘，更佳地两个R含氘，更佳地三个R含氘，更佳地四个R含氘，更佳地五个R含氘，更佳地六个R含氘，更佳地七个R含氘，更佳地八个R含氘，更佳地九个R含氘，更佳地十个R含氘，更佳地十一个R含氘，更佳地十二个R含氘，更佳地十三个R含氘，更佳地十四个R含氘，更佳地十五个R含氘，更佳地十六个R含氘，更佳地十七个R含氘，更佳地十八个R含氘，更佳地十九个R含氘，更佳地二十个R含氘，更佳地二十一个R含氘，更佳地二十二个R含氘。

作为本发明的进一步改进，R¹、R²、R³和R⁴各自独立地为氘或氢。

作为本发明的进一步改进，R⁵和R⁶各自独立地为氘或氢。

作为本发明的进一步改进，R⁷、R⁸和R⁹各自独立地为氘或氢。

作为本发明的进一步改进，R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷各自独立地为氘或氢。

作为本发明的进一步改进，R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氘或氢。

作为本发明的进一步改进，所述酞嗪酮化合物可选自如下任一结构，或其药学上可接受的盐：

本发明还公开了一种药物组合物，其含有药学上可接受的载体和如上所述的酞嗪酮化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、前药、代谢物、互变异构体、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂化合物。

本发明所述的式(I)化合物或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。可以与烷化剂、以及与拓扑异构酶-I抑制剂一起用于抗癌组合疗法(或者作为辅助剂)，所述烷化剂例如甲磺酸甲酯、替莫唑胺和达卡巴嗪，所述拓扑异构酶-I抑制剂例如托泊替康、依立替康、卢比替康、依沙替康、勒托替康、吉马替康、二氟替康(高喜树碱类)；以及7-取代的非斯兰替康类；7-甲硅烷基喜树碱类BNP 1350；和非喜树碱拓扑异构酶-I抑制剂，例如吲哚并咔唑类，以及拓扑异构酶-I和II双重抑制剂例如苯并吩嗪类、XR 11576/MLN 576和苯并吡啶并吲哚类。。

在另一选例中，所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。

本发明还包括同位素标记的化合物，等同于原始化合物在此公开。可以列为本发明的化合物同位素的例子包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟和氯同位素，分别如²H，³H，¹³C，¹⁴C，¹⁵N，¹⁷O，¹⁸O，³¹P，³²P，³⁵S，¹⁸F以及³⁶Cl。本发明中的化合物，或对映体，非对映体，异构体，或药学上可接受的盐或溶剂化物，其中含有上述化合物的同位素或其他其他同位素原子都在本发明的范围之内。本发明中某些同位素标记化合物，例如³H和¹⁴C的放射性同位素也在其中，在药物和底物的组织分布实验中是有用的。氚，即³H和碳-14，即¹⁴C，它们的制备和检测比较容易，是同位素中的首选。此外，较重同位素取代如氘，即²H，由于其很好的代谢稳定性在某些疗法中有优势，例如在体内增加半衰期或减少用量，因此，在某些情况下可以优先考虑。同位素标记的化合物可以用一般的方法，通过用易得的同位素标记试剂替换为非同位素的试剂，用示例中的方案可以制备。

本发明的另一方面方面提供通过抑制PARP而缓解的疾病的治疗，包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的第一方面中定义的式(I)化合物或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，优选以药物组合物的形式施用，以及提供癌症的治疗，包括向需要治疗的受试者组合施用治疗有效量的式(I)化合物与放射治疗(电离辐射)或化学治疗剂，所述第一方面中定义的化合物优选以药物组合物的形式，与放射治疗或化学治疗剂同时或先后施用。

在另一选例中，所述的药物组合物用于治疗和预防以下疾病：血管疾病；脓毒性休克；缺血性损伤；神经毒性；失血性休克；病毒感染；或者在癌症治疗中作为辅助剂使用或用于增强电离放射或化学治疗剂对肿瘤细胞的治疗作用。

在另一选例中，所述的癌症包括但并不限于：卵巢癌、乳腺癌、***癌、肺癌、头颈癌、食道癌、直肠癌、结肠癌、鼻咽癌、子宫癌、胰腺癌、淋巴瘤、血癌、骨肉瘤、黑色素瘤、肾癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、甲状腺癌或大肠癌。

本发明还公开了一种如上所述的酞嗪酮化合物的用途，其用于制备抑制聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶的药物组合物。优选的，其用于制备抑制PARP酶介导的疾病的药物，例如卵巢癌，乳腺癌，***癌。

在本发明的其他方面，所述化合物可以用于制备治疗同源重组(HR)依赖性DNA双链断裂(DSB)修复活性缺失的癌症的药物或者用于治疗患有HR依赖性DNA DSB修复活性缺失的癌症患者，包括向所述患者施用治疗有效量的所述化合物。

HR依赖性DNA DSB修复缺失的癌症可能包括一种或多种癌细胞或由一种或多种癌细胞组成，相对于正常细胞，它们通过该途径修复DNA DSB的能力降低或丧失，即在一种或多种癌细胞中HR依赖性DNA DSB修复途径的活性可能降低或丧失。在患有HR依赖性DNA DSB修复缺失的癌症的个体的一个或多个癌细胞中，HR依赖性DNA DSB修复途径的一种或多种组分的活性可能丧失。HR依赖性DNA DSB修复途径的组分在本领域中已经进行了充分表征(参见例如Wood，等，Science，291，2001，1284-1289)，并且包括上文列出的组分。

在一些优选的实施方案中，所述癌细胞可能具有BRCA1和/或BRCA2缺失表型，即在癌细胞中BRCA和/BRCA2活性降低或丧失。具有该表型的癌细胞可能是BRCA1和/或BRCA2缺失的，即在癌细胞中BRCA1和/或BRCA2的表达和/或活性可能降低或丧失，例如通过编码核酸的突变或多态性，或通过编码调节因子的基因例如编码BRCA2调节因子的EMSY基因的扩增、突变或多态性(Hughes-Davies，等，Cell，115，523-535)，或者通过表观遗传机制，例如基因启动子甲基化。BRCA1和/或BRCA2突变的携带者也处于患卵巢癌、***癌和胰腺癌的高风险中。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

本文中，如无特别说明，“卤素”指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤原子选自F、Cl和Br。

本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。

本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％)的化合物。

药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。

术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

本发明还提供了包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或所述化合物的药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。所述载体在与制剂的其他成分相容以及，在药学上可接受的载体的情况下，在用于药物中的量下不会对其接受者有害的意义上是“可接受的”。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

第一，采用本发明技术方案的酞嗪酮化合物，对聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶具有优异的抑制性。第二，通过氘代这一技术改变化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性。第三，用氘取代化合物中的氢原子，由于其氘同位素效应，能够提高化合物在动物体内的药物浓度，以提高药物疗效。第四，用氘取代化合物中的氢原子，可以抑制某些代谢产物，提高化合物的安全性。

具体实施方式

下面对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。

实施例1制备4-[3-(4-环丙烷羰基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8-哌嗪-1-羰基)-4-氟-苄基]-2H- 酞嗪-1-酮(化合物5)

具体合成步骤如下：

步骤一：化合物3的合成。

将N，N-二异丙基乙胺(化合物1，DIPEA，0.3g,2.34mmol)加入至连续搅拌的2,2,3,3,5,5,6,6-d8-哌嗪(200mg.2.12mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，冰水浴下冷却至0℃，缓慢滴加环丙基甲酰氯(化合物2，200mg,1.91mmol)，室温下搅拌30分钟后，加入10mL水淬灭反应，分离有机相并用二氯甲烷萃取两次，收集有机相干燥后，得到白色固体产物190mg，收率为47％。

LC-MS(APCI):m/z＝163.1(M+1)⁺。

步骤二：化合物5的合成。

氮气保护下，依次将O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU,644mg,1.7mmol)、N，N-二异丙基乙胺(化合物1，DIPEA，0.52mL,3.0mmol)加入至5-[(3,4-二氢-4-氧代-1-酞嗪基)甲基]-2-氟苯甲酸(化合物4，357mg,1.2mmol)的二甲基乙酰胺(DMA,2mL) 溶液中，于15-25℃下，加入化合物3(0.16g,1.0mmol)的二甲基乙酰胺(DMA,1mL)溶液后，室温下搅拌4小时。剧烈搅拌下加水10mL，过滤后用柱色谱分离纯化得白色固体产物100mg，收率为22％。

LC-MS(APCI):m/z＝443.2(M+1)⁺。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)(δ/ppm):10.80(brs,1H),8.51-8.47(m,1H),7.81-7.72(m,3H),7.39-7.32(m,2H),7.06(t,J＝9.0Hz,1H),4.32(s,4H),1.78-1.71(m,1H),1.05-1.00(m,2H),0.84-0.81(m,2H)。

实施例2制备4-[[3-(4-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟-苯基]-d2-甲基]-2H-酞嗪-1-酮 (化合物10)

具体合成步骤如下：

步骤1：化合物7的合成。

氮气保护下，依次将O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU,5.7g,15mmol)、N，N-二异丙基乙胺(化合物1，DIPEA，5.3mL,30mmol)加入至5-[(3,4-二氢-4-氧代-1-酞嗪基)甲基]-2-氟苯甲酸(化合物4，3.0g,10mmol)的二甲基乙酰胺(DMA,15mL)溶液中，继续加入化合物6(2.3g,12mmol)的二甲基乙酰胺(DMA,5mL)溶液后，室温下搅拌2小时。加水淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，干燥后用柱色谱分离纯化得白色固体3.5g，收率为75％。

LC-MS(APCI):m/z＝467.2(m+1)⁺。

步骤2：化合物9的合成。

氮气保护下，将化合物7(300mg,0.64mmol)溶于10mL二氯甲烷中，待反应液澄清后冷却至0℃，逐滴加入三氟乙酸2mL，室温搅拌1小时，加入50mL二氯甲烷后，将反应体系置于冰盐浴中，逐滴加入5mL三乙胺，进一步冷却至-10℃后，加入环丙基甲酰氯(80mg，0.77mmol)，搅拌5分钟，加水淬灭反应，分离有机相，水洗后干燥并通过柱色谱分离纯化得白色固体产物240mg，收率为86％。

LC-MS(APCI):m/z＝433.2(M-1)⁺。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)(δ/ppm)10.20(br s,1H),8.50-8.47(m,1H),7.81-7.72(m,3H),7.38-7.33(m,2H),7.07(t,J＝9.0Hz,1H),4.30(s,2H),3.86-3.80(m,4H),3.65-3.60(m,2H),3.41-3.34(m,2H),1.27(s,1H),1.05-1.00(m,2H),0.85-0.81(m,2H)。

步骤3：化合物10的合成。

将化合物9(100mg,0.23mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU,76mg,0.5mmol)加入至一个装有5mL D₂O和10mL DMSO-d6的单颈圆底烧瓶中，加热至70℃并在该温度下反应过夜后，冷却至室温，减压旋干D₂O和DMSO-d6，加入20mL二氯甲烷，干燥后通过柱色谱分离纯化得到白色固体产物56mg，收率为56％。

LC-MS(APCI):m/z＝435.2(M-1)⁺。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)(δ/ppm):10.80(br s,1H),8.51-8.47(m,1H),7.81-7.72(m,3H),7.39-7.32(m,2H),7.06(t,J＝9.0Hz,1H),3.88-3.81(m,4H),3.66-3.60(m,2H),3.41-3.34(m,2H),1.78-1.71(m,1H),1.05-1.00(m,2H),0.84-0.81(m,2H)。

实施例3制备4-[[3-(4-环丙烷羰基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8-哌嗪-1-羰基)-4-氟-苯基]-d2- 甲基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物11)

具体合成步骤如下：

将化合物5(100mg,0.23mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU,76mg,0.5mmol)加入至一个装有5mL D₂O和10mL DMSO-d6的单颈圆底烧瓶中，加热至70℃并在该温度下反应过夜后，冷却至室温，减压旋干D₂O和DMSO-d6，加入20mL二氯甲烷，干燥后通过柱色谱分离纯化得到白色固体产物56mg，收率为56％。

LC-MS(APCI):m/z＝445.2(M+1)⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)(δ/ppm):10.80(br s,1H),8.51-8.47(m,1H),7.81-7.72(m,3H),7.39-7.32(m,2H),7.06(t,J＝9.0Hz,1H),1.78-1.71(m,1H),1.05-1.00(m,2H),0.84-0.81(m,2H)。

实施例4制备4-[3-(4-(2,2-d2)-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟-苄基]-2H-酞嗪-1-酮 (化合物16)

具体合成步骤如下：

步骤1：化合物13的合成。

冰水浴下，100mL三口烧瓶中加入2,2-二氯环丙基苯(化合物12,3g，16mmol)、无水***(30mL)，缓慢加入小块金属钠(4g，173.9mmol)，1小时加完，与此同时，剧烈搅拌下滴加入氘代甲醇与重水的混合溶液(1.5mL重水和9mL MeOD)，70分钟滴完，室温下搅拌过夜。滤掉生成的大量白色固体，滤液减压蒸掉有机溶剂，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得无色油状物1.5g，收率为78％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)(δ/ppm):7.26-7.23(m,2H),7.15-7.11(m,1H),7.08-7.06(m,2H),1.87(t,J＝6.8Hz,1H),0.93(t,J＝5.6Hz,1H),0.67(t,J＝4.8Hz,1H).

步骤2：化合物14的合成。

磁力搅拌下往250mL单口烧瓶中加入水(36mL)、乙腈(23mL)、四氯化碳(23mL)、化合物13(0.7g，5.83mmol)、高碘酸钾(18.6g，81mmol)和一水合三氯化钌(29mg，0.127mmol)，反应混合物氮气氛下40℃搅拌反应过夜。冷却到室温，滴加入饱和Na₂CO₃水溶液，调pH～9，生成的固体过滤，滤饼水洗(50mL)，二氯甲烷洗涤(50mL)，滤液分出水相，二氯甲烷(20mL)洗涤，浓盐酸调pH～4，***(40mL*4)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，过硅胶柱得无色液体300mg，收率为58.4％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)(δ/ppm):12.04(s,1H),1.50-1.46(m,1H),0.81-0.76(m,2H).

步骤3：化合物16的合成

磁力搅拌下25mL双口烧瓶中加入化合物14(60mg，0.68mmol)、无水二氯甲烷(3mL)，N₂氛下冰水浴冷却，缓慢滴加入草酰氯(104mg，0.82mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)及一滴无水DMF，室温下搅拌反应2h。另一个烧瓶中加入化合物8(248mg，0.68mmol)、无水二氯甲烷(4mL)及三乙胺(103mg，1.02mmol)，N₂氛下冰水浴冷却，酰氯溶液通过注射器缓慢滴加入化合物8的溶液中，滴加完成后拆去冰水浴，室温下搅拌反应1h。加水(10mL)淬灭反应，分出有机层，水相二氯甲烷萃取(10mL x 2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，过硅胶柱得白色固体260mg，收率为87.7％。

LC-MS(APCI):m/z＝437.2(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)(δ/ppm):12.57(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(t,J＝8.0Hz,1H),7.81(t,J＝6.8Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.35-7.33(m,1H),7.22(t,J＝8.8Hz,1H),4.31(s,2H),3.73-3.36(m,6H),3.21-3.11(m,2H),1.99-1.85(m,1H),0.72-0.67(m,2H).

实施例5制备4-[3-(4-(2,2-d2)-环丙烷羰基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8-哌嗪-1-羰基)-4-氟-苄基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物20)

具体合成步骤如下：

步骤1：化合物17的合成

100mL单口烧瓶中加入化合物1(1g，10.6mmol)和甲醇(20mL)，磁力搅拌下滴加入三氟醋酸(1.21g，10.6mmol)，搅拌10分钟，再加入水(20mL)，搅拌10min，缓慢滴加入二碳酸二叔丁酯(2.3g，10.6mmol)和碘(0.27g,1.06mmol)的甲醇溶液(40mL)，室温下搅拌反应3h。冰水浴下滴加NaOH水溶液(20％)，调pH～11，生成的固体过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼(20mL)，滤液乙酸乙酯萃取(60mL x 3)，水洗(40mL)、饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥，旋干得无色液体1.5g，收率为72.2％。

步骤2：以化合物17为原料，与实施案例2中化合物7的合成一样合成方法，得到化合物18。LC-MS(APCI):m/z＝475.2(M+1)⁺.

步骤3：以化合物18为原料，与实施案例2中化合物8的合成一样合成方法，得到化合物19。

LC-MS(APCI):m/z＝375.2(M+1)⁺.

步骤4：以化合物19为原料，与实施案例4中化合物16的合成一样合成方法，得到化合物20。

LC-MS(APCI):m/z＝445.2(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)(δ/ppm):12.57(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(t,J＝8.0Hz,1H),7.81(t,J＝6.8Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.35-7.33(m, 1H),7.22(t,J＝8.8Hz,1H),4.31(s,2H),1.99-1.85(m,1H),0.72-0.67(m,2H).

实施案例6：

制备4-[[3-(4-(2,2-d2)-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟-苯基]-d2-甲基]-2H-酞嗪-1- 酮(化合物21)

具体合成步骤如下：

以化合物16为原料，与实施案例3中化合物11的合成一样合成方法，得到化合物21。

LC-MS(APCI):m/z＝439.2(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)(δ/ppm):12.57(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.87(t,J＝8.0Hz,1H),7.81(t,J＝6.8Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.35-7.33(m,1H),7.22(t,J＝8.8Hz,1H),3.73-3.36(m,6H),3.21-3.11(m,2H),1.99-1.85(m,1H),0.72-0.67(m,2H).

实施案例7：

制备4-[[3-(4-(2,2-d2)-环丙烷羰基-2,2,3,3,5,5,6,6-d8-哌嗪-1-羰基)-4-氟-苯基]-d2- 甲基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物22)

具体合成步骤如下：

以化合物20为原料，与实施案例3中化合物11的合成一样合成方法，得到化合物22。

LC-MS(APCI):m/z＝447.2(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):10.43(s,1H),8.49-8.47(m,1H),7.80-7.74(m,3H),7.36-7.28(m,2H),7.06(t,J＝8.8Hz,1H),1.79-1.75(m,1H),1.01(t,J＝4.0Hz,1H),0.90(t,J＝4.0Hz,1H).

实施案例8：

制备4-[[3-(4-(1-d)-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟-苄基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物 29)

具体合成步骤如下：

步骤1：化合物24的合成

磁力搅拌和冰水浴冷却下，100mL单口烧瓶中加入1-溴环丙基甲酸甲酯(化合物23，1.78g，10mmol)、***(40mL)、甲苯(20mL)和水(90mg，5mmol)，加入叔丁醇钾(1.12g，10mmol)，反应混合物0℃下搅拌反应1h。饱和碳酸氢钠水溶液萃取(30mLx 4)，合并水相，盐酸(6M)调PH～3，***萃取(50mL x 4)，无水硫酸钠干燥，浓缩，过柱得无色液体1.0g，收率为61.3％。

步骤2：化合物27的合成

磁力搅拌及冰水浴下，25mL单口烧瓶中加入1-溴环丙基甲酸(化合物24,1.0g，6.1mmol)和二氯亚砜(5mL)，反应混合液氮气氛下，室温搅拌反应过夜。蒸馏掉过量的二氯亚氛，并用无水二氯甲烷带2次，溶于无水二氯甲烷(3mL)中，待用。

另一50mL双口烧瓶中加入1-Cbz哌嗪(化合物26,1.34g,6.1mmol)、无水二氯甲烷(15mL)和三乙胺(0.8g，7.93mmol)，氮气氛下冷却0℃，酰氯溶液通过注射器缓慢滴加入哌嗪溶液中，室温搅拌反应1h。加入水(10mL)淬灭反应，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取(10mL x 2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，过硅胶柱得白色固体1.8g，收率为80.3％。

LC-MS(APCI):m/z＝367.1(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):7.39-7.34(m,5H),5.17(s,2H),3.80-3.57(m,8H),1.44-1.38(m,2H),1.36-1.31(m,2H).

步骤3：化合物28的合成

磁力搅拌下，50mL单口烧瓶中加入化合物28(200mg，0.55mmol)、氘代甲醇(7mL)和Pd/C(10％，150mg)，反应瓶抽真空并用氘气置换三次，压氘气球反应过夜。滤掉Pd/C,滤饼甲醇洗涤(10mL)，滤液旋干得白色固体77mg，收率为90.9％。

LC-MS(APCI):m/z＝156.1(M+1)⁺.

步骤4：以化合物28及化合物8为原料，与实施案例1中化合物5的合成一样方法，合成化合物29.

LC-MS(APCI):m/z＝436.2(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):10.59(s,1H),8.49-8.47(m,1H),7.80-7.74(m,3H),7.36-7.28(m,2H),7.06(t,J＝8.8Hz,1H),4.31(s,2H),3.84-3.32(m,8H),1.04-1.01(m,2H),0.87-0.82(m,2H).

实施案例9

制备4-[[3-(4-(1,2,2,3,3,-d5)-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟-苄基]-2H-酞嗪-1-酮(化合物39)

具体合成步骤如下：

步骤1：化合物31的合成

磁力搅拌下，250mL单口烧瓶中依次加入重水(40mL)、无水二氧六环(40mL)、苯乙酮(化合物30，4.8g，40mmol)和四氢吡咯(280mg，4mmol)，混合物氮气氛下室温搅拌反应过夜。减压蒸出二氧六环，稀盐酸(1M)调pH～4，二氯甲烷萃取(40mLx3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得无色液体4.5g，收率93.7％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):7.95-7.92(m,2H),7.65-7.56(m,3H).

步骤2：化合物32的合成

冰水浴，磁力搅拌下，100mL单口烧瓶中加入苯乙酮-d3(化合物31，4.5g，36.6mmol)和MeOD(30mL)，NaBD₄(1.53g，36.6mmol)缓慢加入反应液中，加完后继续反应10分钟，加入饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，旋掉乙酸乙酯跟甲醇，残留物再次用乙酸乙酯萃取(10mLx 2)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得无水液体4.0g，收率88.9％。

LC-MS(APCI):m/z＝127.1(M+1)⁺.

步骤3：化合物33的合成

氮气氛，冰水浴下，25mL三口烧瓶中依次加入化合物32(4g，31.7mmol)和三甲基硅基溴(5.8g，38.04mmol)，室温搅拌反应3h，减压蒸出反应生成的六甲基硅醚，残留物过硅胶柱得无水油状物3.8g，收率63.8％。

步骤4：苯乙烯-d3(化合物34)的合成

氮气氛，冰水浴下，100mL双口烧瓶中加入化合物33(3.8g，20.2mmol)，缓慢滴加入叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(1M，24.2mL，24.2mmol)，室温搅拌反应3h。加入***(100mL)，过滤，滤饼***洗涤(10mL)，常温蒸除***与四氢呋喃，加入水10mL，***萃取(20mL x 2)，无水硫酸钠干燥，过滤，常温蒸除***得淡黄色液体1.1g，收率50.2％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):7.42-7.40(m,2H),7.34-7.30(m,2H),7.26-7.25(m,1H).

步骤5：化合物35的合成

冰水浴下，100mL双口烧瓶中依次加入化合物34(1.1g，10.3mmol)、苄基三乙基溴化铵(56mg，0.204mmol)和溴仿(25.5g，103mmol)，剧烈搅拌下，缓慢滴加入50％KOH水溶液(26mL，0.26mol)，反应4h。加入水50mL，二氯甲烷萃取(40mL x 3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物过硅胶柱得无色液体0.6g，收率21.6％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):7.39-7.35(m,3H),7.30-7.28(m,2H).

步骤5：化合物36的合成

以化合物35为原料，与实施案例4中化合物13的合成方法类似，得到化合物36。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)(δ/ppm):7.26-7.23(m,2H),7.15-7.11(m,1H),7.08-7.06(m,2H).

步骤6：化合物37的合成

以化合物36为原料，与实施案例4中化合物14的合成方法类似，得到化合物37。

步骤7：化合物39的合成

以化合物37为原料，与实施案例4中化合物16的合成方法类似，得到化合物39。

LC-MS(APCI):m/z＝440.2(M+1)⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl3)(δ/ppm):10.59(s,1H),8.49-8.47(m,1H),7.80-7.74(m,3H),7.36-7.28(m,2H),7.06(t,J＝8.8Hz,1H),4.31(s,2H),3.84-3.32(m,8H).

生物活性测试

(1)激酶抑制作用

将从Hela细胞核提取物中分离的哺乳动物PARP用Z缓冲液[25mM Hepes(Sigma)；12.5mM MgCl₂(Sigma)；50mM KCl(Sigma)；1mM DTT(Sigma)；10％甘油(Sigma)0.001％NP-40(Sigma)；pH7.4]在96孔FlashPlates中培养，并加入不同浓度的所述抑制剂。将所有化合物在DMSO中稀释，使最终分析浓度在10至0.01μM之间，DMSO的最终浓度为每孔1％。每个孔的总测定体积为40μL。

在30℃下培养1分钟后，加入10μL含有NAD(5μM)、3H-NAD和30mer双链DNA-低聚体的反应混合物引发反应。指定的阳性和阴性反应孔与化合物孔(未知)组合进行处理以计算酶活性％。然后将板振摇2分钟，在30℃下培养45分钟。培养后，向每个孔中加入50μL 30％的乙酸终止反应。然后将板在室温下振摇1小时。将板转移至TopCount NXT上进行闪烁计数。记录值为对每个孔计数30秒后的每分钟的计数(cpm)。

实验结果表明，本发明化合物对聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶具有强效抑制活性。

(2)代谢稳定性评价

微粒体实验：人肝微粒体：0.5mg/mL，辅酶(NADPH/NADH)：1mM，氯化镁：10nM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH 7.4)

代谢稳定性的测定：将没有添加辅酶的反应体系在37℃下预培养10分钟，然后添加辅酶开始反应。添加辅酶后，培养0、5、10、20、30及60分钟，每隔规定时间取出一部分反应液，将取出的反应液添加到含有内标物质的乙腈溶液中，使反应停止。反应停止后，进行离心分离，将上清液注入液相色谱仪串联质谱中测定反应体系中残留的未变化的物质。离子化按照阳离子检测模式进行电喷雾电离，利用使用已设定的母离子及子离子的选择反应检测法。

数据分析：

评价化合物的残留率根据下式算出。

残留率＝(反应时间t分钟时的评价化合物的峰面积/内标物质的峰面积)÷(反应时间0分钟时的评价化合物的峰面积/内标物质的峰面积)

对残留率和培养时间进行非线性最小二乘法解析，求出消失速度常数(0.693/t_1/2)，进而，利用式(1)求出肝固有清除率(CL_int)。

CL_int(μL/min/mg)＝(0.693/t1/2)÷0.2(mg/mL)×1000(1)

对本发明化合物及其没有氘代的化合物同时测验比较，评价人肝脏微粒体的代谢稳定性，结果如表1所示。

表1实施例化合物的肝微粒代谢评价

实验结果如上表1所示，同Olaparib相比，本发明化合物的半衰期较长，清除率较小，在人肝微粒体与大鼠肝微粒体实验中都表现出较优的代谢稳定性。

(3)大鼠药代动力学实验

实验目的：研究大鼠给予Olaparib、实施例化合物后，考察本发明化合物的药代动力学行为。

实验动物：

种类及品系：SD大鼠等级：SPF级

性别及数量：雄性，6只

体重范围：180～220g(实际体重范围为187～197g)

来源：上海西普尔必凯实验动物有限公司

实验及动物合格证号：SCXK(沪)2013-0016。

实验过程：

在血样采集之前，预先在EDTA-K2抗凝管中加入20L的2M氟化钠溶液(酯酶抑制剂)，于80度烘箱内烘干后，置于4度冰箱存放。

大鼠，雄性，体重187～197g，随机分为2组，于实验前一天下午开始禁食过夜但可自由饮水，给药后4h给食物。A组给予Olaparib 3mg/kg，B组给予实施例化合物3mg/kg，分别于给药后15min、30min、1、2、3、5、8、10h从大鼠眼眶静脉取血100-200L左右，置于经EDTA-K2抗凝的0.5mL的Eppendorf管中，立即混匀，抗凝后，尽快将试管轻轻颠倒混匀5-6次后,血取好后放置在冰盒中，30min 内把血样本在4000rpm，10min，4℃条件下离心分离血浆，收集全部血浆后立即于-20℃保存。所有时间点样品采集后测定每个时间点的血浆中的血药浓度。

根据上述所得的给药后平均血药浓度-时间数据，采用Winnonin软件，按非房室统计矩理论求算雄性SD大鼠分别i.g给予Olaparib(3mg/kg)、实施例化合物(3mg/kg)后的药代动力学相关参数。

实验表明，与Olaparib相比，本发明化合物具有更优的活性，并且具有优异的药代动力学性质，因此更适合作为抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物，进而适合制备治疗癌症的药物。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims

一种取代的酞嗪酮化合物，其特征在于：如式(I)所示的酞嗪酮化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、前药、代谢物、互变异构体、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂化合物，

式(1)中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氢、氘、卤素或三氟甲基；

附加条件是，所述酞嗪酮化合物至少含有一个氘原子。
根据权利要求1所述的酞嗪酮化合物，其特征在于：R¹、R²、R³和R⁴各自独立地为氘或氢。
根据权利要求1所述的酞嗪酮化合物，其特征在于：R⁵和R⁶各自独立地为氘或氢。
根据权利要求1所述的酞嗪酮化合物，其特征在于：R⁷、R⁸和R⁹各自独立地为氘或氢。
根据权利要求1所述的酞嗪酮化合物，其特征在于：R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷各自独立地为氘或氢。
根据权利要求1所述的酞嗪酮化合物，其特征在于：R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹和R²²各自独立地为氘或氢。
根据权利要求1～6任意一项所述的酞嗪酮化合物，其特征在于：所述酞嗪酮化合物可选自如下任一结构，或其药学上可接受的盐：
一种药物组合物，其特征在于：其含有药学上可接受的载体和如权利要求1～7任意一项所述的酞嗪酮化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、前药、互变异构体、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂合物。
一种如权利要求1～7任意一项所述的酞嗪酮化合物的用途，其特征在于：用于制备由聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶介导的疾病的药物，例如卵巢癌。