CN108367070B - 免疫毒素与检查点抑制剂的组合治疗 - Google Patents

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Abstract

区域性、肿瘤靶向的细胞毒素疗法例如D2C7‑免疫毒素(D2C7‑IT)不仅特异性靶向并破坏肿瘤细胞，而且在该过程中引发促进原位疫苗效应的免疫事件。通过免疫检查点阻断来扩增抗肿瘤作用，这产生了有效消除所有肿瘤细胞的长期全身性免疫响应。

Description

免疫毒素与检查点抑制剂的组合治疗
本发明在国立卫生研究院授予的CA197264和CA-154291政府支持下完成。政府对本发明享有一定的权利。
技术领域
本发明涉及免疫治疗领域。具体地，其涉及***的组合方案以及用于完成它们的试剂盒和药物。
背景技术
胶质母细胞瘤是所有原发性脑肿瘤和中枢神经***肿瘤中最恶劣的恶性脑肿瘤。目前标准治疗或甚至新开发药物治疗的胶质母细胞瘤患者的中位存活时间少于15个月。因此，迫切需要开发先进和有效的治疗方法以改善胶质母细胞瘤患者以及其它表达EGFR受体的肿瘤的不良存活前景。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供了一种用于治疗患者肿瘤的方法。向患者施用免疫毒素和免疫检查点抑制剂。该免疫毒素包含与PE38截断的假单胞菌外毒素融合的单链可变区抗体。该单链可变区抗体具有如SEQ ID NO：6-11所示的CDR1区、CDR2区和CDR3区。
根据本发明的另一方面，提供了一种用于***的试剂盒。该试剂盒包含免疫毒素和免疫检查点抑制剂。该免疫毒素包含与PE38截断的假单胞菌外毒素融合的单链可变区抗体，其中，该单链可变区抗体具有如SEQ ID NO：6-11所示的CDR1区、CDR2区和CDR3区。
在阅读说明书后对本领域技术人员显而易见的这些和其它实施方式为本领域提供了用于治疗胶质母细胞瘤和表达表皮生长因子(EGF)受体(即EGFR以及其突变体(例如EGFR变体III))的其它肿瘤的治疗方法、方案、试剂盒和试剂。
附图说明
图1.区域细胞毒素疗法和免疫检查点阻断组合的可能机制。细胞毒素疗法可能导致原发性肿瘤的靶向破坏和“原位疫苗”效应。同时阻断免疫检查点受体PD1、PD-L1、TIM-3、LAG-3和/或CSF-1R可以增强疫苗介导的免疫。APC：抗原呈递细胞；PD1：程序性死亡分子1；PD-L1：程序性死亡配体1；TIM-3：T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3；LAG-3：淋巴细胞活化基因-3；CSF-1R：集落刺激因子1受体；NK/NKT：自然杀伤细胞/自然杀伤T细胞。
图2A-2D CT-2A-mD2C7细胞系的流式细胞术分析。(图2A)小鼠H-2Kb(MHC I类)表达，(图2B)小鼠H-2Db(MHC I类)表达，(图2C)小鼠PD-L1表达和(图2D)D2C7-IT靶抗原mEGFRvIII在CT-2A-mD2C7细胞上的表达。
图3 D2C7-IT对CT-2A-mD2C7细胞的体外细胞毒性。使用WST1测定来确定D2C7-IT对CT-2A-mD2C7细胞的体外细胞毒性。与阴性对照免疫毒素P588-IT(上线，IC50＞1000ng/ml)相比，D2C7-IT对CT-2A-mD2C7细胞的IC50为0.47ng/ml(下线)。
图4.用CT2A-mD2C7细胞颅内注射的C57BL/6小鼠的存活。
图5A-5B.免疫细胞填充CT2A-mD2C7脑肿瘤微环境的表型谱。图5A为对照脑并且图5B为CT2A-mD2C7肿瘤。(F480lo+F480int+F480hi)＝巨噬细胞。
图6.D2C7-IT、BLZ945组合治疗的实验大纲。
图7.D2C7-IT和BLZ945组合疗法对颅内CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型的抗肿瘤功效。
图8A-8B.D2C7-IT+(αCTLA-4或αPD-1)mAb组合疗法在皮下携带CT2A-mD2C7神经胶质瘤的C57BL/6免疫活性小鼠中的体内功效。图8A显示了所有治疗组随访直到第35天。图8B显示了在初始肿瘤接种后随访直至第62天的治疗组G4-6。注意到10只小鼠中的4只和10只小鼠中的5只分别在治疗组G5和G6中治愈。
图9A-9B.对于组合治疗组(G5和G6)中治愈小鼠的肿瘤再激发研究。图9A.首先在第72天用106个CT2A亲代细胞在左侧翼再激发治愈小鼠。图9B显示了在右侧翼的初始CT2A-mD2C7细胞接种后第126天用3×105个CT2A-mD2C7细胞在脑中进行的随后激发。在所有幼稚小鼠(G0)中有肿瘤生长，而在治愈的那些小鼠(G5和G6)中没有肿瘤生长。
图10A-10B.D2C7-IT+(αCTLA-4或αPD-1)mAb组合疗法在双侧皮下携带CT2A-mD2C7神经胶质瘤的C57BL/6免疫活性小鼠中的体内功效。图10A显示了右侧(治疗过的)肿瘤的肿瘤生长曲线，这与先前的单侧模型相似。图10B显示了左侧(未治疗的)肿瘤的肿瘤生长曲线，这表明右侧的组合疗法对远处的左侧肿瘤也具有抗肿瘤作用。
图11A-11B.在初始肿瘤接种后的第35天和第43天，在各组中的左侧肿瘤体积。图11A.在第35天，与治疗组G1相比，在所有其它治疗组中左侧肿瘤生长显著延迟，对于治疗组G2、G3和G4，p＜0.05；对于治疗组G5和G6，p＜0.01。图11B.在第43天，与对右侧肿瘤的D2C7-IT单一疗法相比，组合治疗显著延迟了左侧肿瘤生长，p＜0.05。
具体实施方式
本发明人通过将来自D2C7单克隆抗体(mAb)的单链可变片段(scFv)与假单胞菌外毒素A(PE)融合(任选地与KDEL肽融合)而开发了靶向免疫毒素(IT)D2C7-(scdsFv)-PE38KDEL(D2C7-IT)。D2C7-IT与野生型表皮生长因子受体(EGFRwt)和EGFR变体III(EGFRvIII)(两种在胶质母细胞瘤中过表达的蛋白)两者反应。D2C7-IT的强大抗肿瘤功效通过PE在免疫受损小鼠的原位神经胶质瘤异种移植模型中介导。除了直接杀死肿瘤细胞之外，免疫毒素单一疗法通过接合T细胞诱导继发性抗肿瘤免疫响应。当免疫毒素以免疫检查点抑制剂组合的方式施用时，观察到改善且协同的结果。
可以与抗体连接的其它部分包括提供额外有益性质的部分。例如，可以在蛋白的羧基端添加KDEL(lys-asp-glu-leu)四肽以提供在内质网中的滞留。也可以使用类似功能的DKEL、RDEL和KNEL等变体。
可以治疗的肿瘤是与D2C7抗体反应的任何肿瘤。这些肿瘤包括但不限于存在至少一种EGFRvIII等位基因的那些肿瘤。这些肿瘤可以在***、头部和颈部、脑、多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、肺或其它肿瘤中发现。在疗法之前可能需要确定这种等位基因的存在。这可以使用基于寡核苷酸的技术(如PCR)或使用免疫学技术(如免疫组织化学)来完成。可能需要确定表达EGFR和/或EGFRvIII的肿瘤中细胞的量、分数、比例或百分比。在其表面上表达EGFR的细胞越多，这种抗体疗法可能就越有益。由于抗体结合野生型EGFR的能力，甚至可以治疗表达很少或不表达EGFRvIII的肿瘤。任选地，可以在治疗之前测试肿瘤与D2C7抗体的反应性。免疫毒素本身可以在治疗前、治疗期间或治疗后用作免疫组织化学试剂。第二试剂可以与免疫毒素一起用于检测。例如，它可以识别免疫毒素的假单胞菌组分。
免疫毒素可以通过本领域已知的任何技术施用。为了避免表达EGFR的正常组织的细胞毒性，可能需要隔室呈递。合适的隔室呈递方法包括但不限于呈递至脑、呈递至手术创建的肿瘤切除腔、呈递至天然肿瘤囊肿以及呈递至肿瘤实质。
可以通过本发明的方法治疗的肿瘤是表达表皮生长因子受体(EGFR)的任何肿瘤，无论是野生型、EGFRvIII还是其它变体。优选地，肿瘤以远远超过正常组织表达的量表达受体。高水平表达的机制可能是基因扩增、其它改变，无论是遗传修饰或后生修饰或翻译后修饰。可治疗的示例性肿瘤包括但不限于：恶性神经胶质瘤、乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、肺癌。
可以针对任何此类靶标(包括但不限于PD-1、PD-L1、TIM-3、LAG-3、CTLA-4和CSF-1R以及此类检查点抑制剂的组合)进行T细胞免疫检查点受体阻断。免疫检查点受体可以在肿瘤细胞或免疫细胞(如T细胞、单核细胞、小胶质细胞和巨噬细胞，并没有限制)上。主张免疫检查点阻断的试剂可以是小的化学实体或聚合物、抗体、抗体片段、单链抗体或其它抗体构建体，包括但不限于双特异性抗体和双抗体。
可以根据本发明使用的免疫检查点抑制剂包括任何破坏细胞毒性T细胞和肿瘤细胞的抑制性相互作用的抑制剂。这些抑制剂包括但不限于抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗LAG-3抗体、抗TIM-3抗体。抑制剂不必须是抗体，而可以是小分子或其它聚合物。如果抑制剂是抗体，则它可以是多克隆、单克隆、片段、单链或其它抗体变体构建体。抑制剂可以靶向本领域已知的任何免疫检查点，包括但不限于CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、CSF-1R、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、IDO、A2aR和B-7家族的配体。可以使用针对单个靶免疫检查点的抑制剂或针对不同免疫检查点的不同抑制剂的组合。
可用于与免疫毒素组合治疗的CSF-1R抑制剂的实例包括但不限于处于临床开发中的以下试剂：PLX3397、PLX486、RG7155、AMG820、ARRY-382、FPA008、IMC-CS4、JNJ-40346527和MCS110。
免疫检查点抑制剂可以在免疫毒素的同时、之前或之后施用。通常两种试剂将在彼此的30、28、21、14、7、4、2或1天内施用。可以连续地或者以第一试剂和第二试剂循环重复施用。在检查点抑制剂之前施用疫苗可能是有利的，但不是必需的。但是也可以使用相反的顺序。由免疫毒素激活细胞毒性T淋巴细胞响应可能需要约5至约14天。检验点抑制剂的施用可有利地在激活期期间或之后开始。
免疫检查点抑制剂可以通过本领域已知的用于特定抑制剂的任何适当手段施用。这些手段包括静脉内、口服、腹膜内、舌下、鞘内、腔内、肌内和皮下。
除了呈递免疫毒素和免疫检查点抑制剂外，治疗方案可包括手术切除肿瘤、手术切除肿瘤、化疗、生物治疗、放疗。这些模式是许多疾病状态下的护理标准，并且患者不需要被拒绝护理标准。免疫毒素和免疫检查点抑制剂可以在护理标准之前、期间或之后施用。免疫毒素和免疫检查点抑制剂可以在护理标准失败后施用。
试剂盒可以在单个分开或未分开的容器中包含免疫毒素或其组分或其编码DNA以及免疫检查点抑制剂或免疫检查点抑制剂的组合。两种试剂之间的储存稳定性可能不同，因此可以使用独立的容器。任选将一种或两种试剂冻干或冷冻。
免疫毒素可以直接杀死表达高水平靶向肿瘤抗原的癌细胞。免疫毒素单一疗法可以在免疫受损的小鼠的恶性脑肿瘤异种移植模型中有效且直接地破坏表达靶向表位(例如EGFRwt和/或其截断的变体EGFRvIII)的肿瘤细胞。免疫毒素疗法可以在小鼠模型中诱导继发性抗肿瘤免疫响应，这与直接杀死机制不同，需要免疫***的配合。由于恶性脑肿瘤总是异质肿瘤，因此可能由于缺乏表位，一些肿瘤细胞可以免于免疫毒素疗法的直接靶向攻击。由于这个原因，由免疫毒素刺激的继发性抗肿瘤免疫响应可能在消除那些不直接靶向肿瘤细胞中起重要作用。
最近，一些研究成功地证明了通过抑制共抑制分子(如CTLA4、CSF-lR、IDO和PD1)在小鼠神经胶质瘤模型中实现了肿瘤消退和显著改善的存活。基于有希望的临床前数据，一些临床试验已开始研究免疫检查点抑制剂治疗恶性脑肿瘤的用途，无论是单一疗法还是与其它抗肿瘤试剂组合的疗法。
然而，恶性神经胶质瘤(包括胶质母细胞瘤)具有相对较低的突变率，这可能产生较少和微妙的肿瘤抗原，与对免疫治疗响应良好的其它肿瘤类型(例如黑素瘤和NSCLC)相比，导致相对较差的基础免疫原性。因此，靶向细胞毒素免疫疗法和免疫检查点抑制剂的组合可以提供协同抗肿瘤作用。
理想的组合疗法可以具有较低剂量的靶向细胞毒素免疫疗法以限制其副作用并获得长期的抗肿瘤免疫力。免疫毒素疗法可通过其独特的细胞毒素机制有效且直接地杀死表达高水平靶向抗原的癌细胞。通过局部免疫毒素疗法破坏的癌细胞释放肿瘤抗原和/或其它新抗原。然后这些抗原可以由APC递送至局部引流***中的寄主T细胞，其激活CTL以迁移并消除在肿瘤部位表达特异性肿瘤抗原的剩余或复发肿瘤细胞。在整个过程中，T细胞和APC之间和/或T细胞和肿瘤细胞之间的各种共抑制检验点途径可以引发不同的机制以使T细胞失活，并调节抗肿瘤免疫的持续性和强度。免疫检查点抑制剂(例如抗CTLA4和抗PD1mAb)可以阻断这些免疫抑制途径，因此增加由靶向免疫毒素疗法激活的淋巴细胞所引起的肿瘤细胞死亡。
我们在6组C57BL/6免疫活性小鼠中建立了皮下小鼠CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型，其中在肿瘤生长至一定大小后，将小鼠用对照免疫毒素P588-IT或D2C7-IT与αCTLA4或αPD1抑制剂组合治疗。在这种体内皮下CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型中，与对照免疫毒素P588-IT治疗组相比，四种剂量的低剂量D2C7-IT但不是αCTLA4或αPD1单一疗法，以及D2C7-IT+αCTLA-4或αPD-1组合疗法在肿瘤生长方面产生显著延迟(图8A和图8B)。重要的是，仅在D2C7-IT+αCTLA4(n＝4/10)和D2C7-IT+αPD-1(n＝5/10)组合疗法组中观察到完全治愈(图8A和图8B)，尽管D2C7-IT单一疗法也可以显著延迟肿瘤生长。这些结果表明，低剂量的细胞毒素免疫毒素疗法可显著延迟肿瘤生长但不能治愈荷瘤小鼠。结合免疫检查点抑制剂，细胞毒素免疫毒素疗法可将低剂量免疫毒素疗法的初始治愈率从零增加至超过40％。此外，所有治愈小鼠均拒绝了mD2C7阴性肿瘤原发性皮下再激发，而肿瘤在未经治疗的幼稚小鼠中生长，表明组合治疗提供了长期持续的抗肿瘤免疫性，其甚至也延伸至mD2C7阴性亲代细胞(图9A)。然后所有9只治愈小鼠拒绝了CT2A-mD2C7继发性脑内再激发，而肿瘤在未经治疗的幼稚小鼠中生长，表明组合治疗还提供了长期持续的抗肿瘤免疫性，其甚至也延伸至偏远免疫豁免的CNS(图9B)，其中中央记忆T细胞(TCM)可能发挥重要作用。
随后，我们建立了双侧皮下小鼠神经胶质瘤模型以研究局部高剂量免疫毒素治疗是否可以对远端区域的肿瘤提供全身性抗肿瘤作用，以及免疫检查点抑制剂的组合是否可以增强由局部免疫毒素疗法诱导的全身性抗肿瘤免疫性。D2C7-IT单一疗法，D2C7-IT+αCTLA4和D2C7-IT+αPD1组合疗法导致右侧肿瘤显著的生长延迟(P＜0.01)，并且分别治愈4/10、6/10和5/10的右侧肿瘤(图10A)。有趣的是，在通过D2C7-IT或αCTLA-4或αPD-1单一疗法或D2C7-IT+(αCTLA-4或αPD-1)组合疗法治疗右侧肿瘤的组中，与对照组相比，左侧未治疗的肿瘤也生长得慢得多(图10B和图11A)，这表明与全身性免疫检验点抑制剂单一疗法相比，高剂量的局部D2C7-IT单一疗法可以在左侧未治疗的肿瘤上实现类似的抗肿瘤免疫性。此外，右侧肿瘤中的组合疗法导致小鼠中左侧未治疗的肿瘤最显著的延迟生长(图10B和图11B)，这表明免疫检查点抑制剂可以增强局部免疫毒素疗法诱导的抗肿瘤免疫性以限制偏远区域的肿瘤生长。
我们已经证明了D2C7-IT的肿瘤内递送诱导继发性抗肿瘤免疫性，其不仅破坏表达mD2C7的肿瘤细胞，而且破坏在全身性水平上不表达mD2C7的肿瘤细胞。D2C7免疫毒素与免疫检查点抑制剂的组合可以增强这种免疫毒素诱导的抗肿瘤免疫性以实现协同的长期抗肿瘤作用。
以上公开内容总体上描述了本发明。本文公开的所有参考文献明确地通过引用并入。通过参考下面的具体实施例可以获得更完整的理解，这些实施例仅仅是为了说明的目的而提供的，并不意图限制本发明的范围。
实施例1
我们建立了过表达D2C7-IT抗原小鼠EGFRvIII(mEGFRvIII)的小鼠神经胶质瘤系CT-2A-mD2C7。通过流式细胞术和体外细胞毒性测定(WST1)分别测定D2C7-IT对CT-2A-mD2C7细胞的反应性和治疗功效。通过流式细胞术进一步分析CT-2A-mD2C7细胞的MHC I类和PD-L1表达。在携带皮下CT-2A-mD2C7神经胶质瘤的C57BL/6免疫活性小鼠中评估D2C7-IT或αCTLA-4或αPD-1单一疗法或D2C7-IT+αCTLA-4或D2C7-IT+αPD-1组合疗法的体内功效。
WST-1是测量细胞增殖的试剂。它用于非放射性、分光光度定量细胞增殖和细胞群的存活力。该测定是基于通过细胞线粒体脱氢酶而将四唑鎓盐WST-1裂解为甲臜。活细胞数量的增加导致线粒体脱氢酶活性的增加，这又导致形成的甲臜染料的量增加。活细胞产生的甲臜染料可以通过测量λ＝440nm处的吸光度来定量。
实施例2
流式细胞术分析证实了D2C7单克隆抗体对CT-2A-mD2C7细胞的特异性结合能力(图2D)。流式细胞术还显示了肿瘤细胞表面上的MHC I类分子(图2A和2B)和PD-L1(图2C)两者的高表达。在体外WST1细胞毒性测定中，D2C7-IT对CT-2A-mD2C7细胞具有较高细胞毒性(IC50＝0.47ng/mL)(图3)。
实施例3
D2C7-(scdsFv)-PE38KDEL免疫毒素的构建、表达和纯化。D2C7VH结构域的羧基末端通过15个氨基酸的肽(Gly4Ser)3连接子连接到VL结构域的氨基末端。为了获得稳定的IT，必须确保在复性期间VH位于VL附近。这是通过将每条链中的单个关键残基突变为半胱氨酸以稳定形成二硫键来实现的。在使用分子建模和其它dsFv重组IT的经验数据进行预测的基础上，我们选择每条链中的一个氨基酸突变为半胱氨酸。这些是VH的框架区2(FR2)中的残基44和VL的FR4中的残基100(根据Kabat编号)。因此，我们制备了含有肽连接子和由半胱氨酸残基产生的二硫键两者的Fv，所述半胱氨酸残基取代了VH的Ser44和VL的Gly100。然后将D2C7(scdsFv)PCR片段与假单胞菌外毒素A的结构域II和III的DNA融合。此处使用的假单胞菌外毒素A的形式PE38KDEL具有修饰的C末端，这增加了其细胞内滞留，进而增强其细胞毒性。D2C7-(scdsFv)-PE38KDEL在T7启动子控制下的大肠杆菌(E.coli)中表达，并作为包涵体收获。
实施例4
靶向肿瘤和肿瘤相关巨噬细胞用于胶质母细胞瘤疗法：我们评估了D2C7-IT和BLZ945组合治疗协同作用并且在免疫活性胶质母细胞瘤小鼠模型中产生有效的抗肿瘤响应的能力。
C57BL/6小鼠中CT2A-mD2C7的颅内生长曲线：为了确定CT2A-mD2C7颅内肿瘤生长的时程，将3×105个细胞/3ul植入9只雌性C57BL/6小鼠中，绘制存活曲线(图4)。CT2A-mD2C7存活曲线证明了在肿瘤植入后第25天发生100％死亡。基于我们先前的研究，选择肿瘤植入后第8天作为启动D2C7-IT输注的最佳日期。
免疫细胞填充CT2A-mD2C7脑肿瘤微环境的表型谱：为了表征CT2A-mD2C7肿瘤的免疫细胞表型，向C57BL/6免疫活性小鼠植入3×105个肿瘤细胞。随后评估小鼠肿瘤发展并且当它们濒临死亡时将其安乐死。在安乐死后，收获脑并通过流式细胞术分析肿瘤浸润免疫细胞。使用从幼稚C57BL/6小鼠分离的细胞作为对照。正常大脑中的主要细胞类型是小胶质细胞(80％)、巨噬细胞((F480lo+F480int+F480hi＝11％)和T细胞(5％)(图5A)。然而，荷瘤小鼠中小胶质细胞(8％)、巨噬细胞(F480lo+F480int+F480hi＝63％)和T细胞(19％)的百分比有显著变化(图5B)。
D2C7-IT和BLZ945组合疗法对颅内CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型的抗肿瘤功效：D2C7-IT+BLZ945组合疗法对CT2A-mD2C7细胞系的实验大纲显示在图6中。在携带颅内CT2A-mD2C7神经胶质瘤的C57BL/6免疫活性小鼠中评估D2C7-IT或BLZ945单一疗法或D2C7-IT+BLZ945组合疗法的体内功效(图7)。D2C7-IT(0.018μg总剂量)通过渗透泵经由对流增强递送(CED)在肿瘤接种后第8天至第11天输注72小时。BLZ945(200mg/kg)在第7天和第12-25天通过口服灌胃每天递送一次。用载体对照和BLZ945单一疗法治疗的小鼠的存活曲线看起来类似(中位存活期＝22-24天，图7)。总剂量为0.018μg时，D2C7-IT单一疗法延长了中位存活时间至42天(图7)。D2C7-IT+BLZ945组合治疗组的中位存活期为53天(图7)。显著地，仅在组合疗法组(2/6只小鼠)中观察到完全治愈。初步数据表明，胶质母细胞瘤患者将受益于D2C7-IT和BLZ945组合疗法。
实施例5
D2C7-IT+(抗CTLA4或抗PD1)抑制剂组合疗法在皮下(SC)CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型中的体内功效。
在先前的初步研究中，我们观察到皮下再激发的小鼠神经胶质瘤同种移植物在那些携带有通过瘤内(i.t.)免疫毒素疗法治愈的SC小鼠神经胶质瘤同种移植物的免疫活性小鼠中被拒绝，表明SC免疫毒素疗法后可能存在记忆抗肿瘤免疫响应。在由靶向IL-13的免疫毒素治疗的SC黑素瘤小鼠模型中也报道了这种现象，其中CTL在介导这种免疫毒素诱导的抗肿瘤响应中起主要作用，尽管与CNS中的恶性神经胶质瘤相比，黑素瘤是显著不同类型的肿瘤。因此，有必要建立合适的小鼠神经胶质瘤模型来研究由免疫毒素诱导的针对胶质母细胞瘤的继发性免疫响应，并确定如何通过免疫检查点抑制剂(例如抗CTLA4或抗PD1抗体(αCTLA4或αPD1))的组合疗法增强这种响应以达到长期持续缓解。
我们在6组C57BL/6免疫活性小鼠中建立了皮下小鼠CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型，其中小鼠用对照免疫毒素P588-IT或D2C7-IT与αCTLA4或αPD1抑制剂组合治疗。在该体内皮下CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型中，与对照免疫毒素P588-IT治疗组相比，D2C7-IT(低剂量，每只小鼠每剂1.5μg，i.t.)但不是αCTLA4(每只小鼠每剂100μg，腹膜内[i.p])或αPD1(每只小鼠每剂250μg，i.p.)单一疗法和D2C7-IT+αCTLA-4或αPD-1组合疗法(在IT疗法后的第二天施用免疫检查点抑制剂)的四个剂量(每3天)产生肿瘤生长的显著延迟(P＜0.01，图8A)。重要的是，仅在D2C7-IT+αCTLA4(n＝4/10)和D2C7-IT+αPD-1(n＝5/10)组合疗法组中观察到完全治愈(图8A和图8B)，尽管D2C7-IT单一疗法也可以显著延迟肿瘤的生长。
实施例6
对来自D2C7-IT和免疫检查点抑制剂组合疗法组的治愈小鼠进行肿瘤再激发研究
为了确定来自D2C7-IT和免疫检查点抑制剂组合疗法组的那些治愈小鼠是否能够回想到保护性抗肿瘤记忆免疫响应，在初始肿瘤激发后的第72天，然后用106个CT2A亲代细胞的剂量在左侧翼首先皮下再激发接受所有9只治愈小鼠(1°SCR)。所有这些小鼠均拒绝了mD2C7阴性肿瘤，而肿瘤在所有未经治疗的幼稚小鼠中生长，这表明组合治疗提供了长期持续的抗肿瘤免疫性，其也延长至mD2C7阴性亲代细胞(图9A)。
为了确定这种保护性抗肿瘤免疫性是否可以保护小鼠免于在例如脑的偏远免疫豁免区域中的肿瘤再激发，然后在第126天(初始皮下肿瘤激发后)用3×105个CT2A-mD2C7细胞剂量在脑中将所有9只治愈小鼠颅内(IC)再激发(2°ICR)一秒钟的时间。在本研究结束时，将所有存活的小鼠都安乐死以用于脑组织病理学检查，其没有显示脑中的肿瘤(数据未显示)。所有这些小鼠都拒绝了CT2A-mD2C7颅内(IC)再激发(2°ICR)，而肿瘤在所有未经治疗的幼稚小鼠中生长，这表明组合治疗还提供了长期持续的抗肿瘤免疫性，其也延伸至偏远免疫豁免的CNS(图9B)。
实施例7
D2C7-IT+(抗CTLA4或抗PD1)抑制剂组合疗法在双侧皮下CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型中的体内功效。
在体内双侧皮下CT2A-mD2C7神经胶质瘤模型中，在C57BL/6小鼠中同时在侧翼的两侧接种肿瘤细胞，在右侧具有较高密度(3×106个细胞)并且在左侧具有较低密度(106个细胞)。使用D2C7-IT或αCTLA4或αPD1单一疗法或D2C7-IT+αCTLA4或D2C7-IT+αPD1组合疗法(在免疫毒素疗法的同一天施用免疫检查点抑制剂)的四种剂量(每两天)治疗较大的肿瘤(右侧)，而左侧肿瘤未经治疗。D2C7-IT单一疗法(高剂量，每只小鼠每剂4.5μg，肿瘤内)，D2C7-IT+αCTLA4(每只小鼠每剂100μg，腹膜内)和D2C7-IT+αPD1(每只小鼠每剂250μg，腹膜内)组合疗法导致右侧肿瘤的显著生长延迟(P＜0.01)，其分别治愈了4/10、6/10和5/10的右侧肿瘤(图10A)。
有趣的是，在用D2C7-IT或αCTLA-4或αPD-1单一疗法或D2C7-IT+(αCTLA-4或αPD-1)组合疗法治疗右侧肿瘤的组中，与对照组相比，左侧未经***也生长得慢得多(图10B和11A)，这表明与全身性免疫检验点抑制剂单一疗法相比，高剂量的局部D2C7-IT单一疗法可以在未经治疗的肿瘤中实现类似的抗肿瘤免疫性。此外，右侧肿瘤中的D2C7-IT+(αCTLA-4或αPD-1)组合疗法导致小鼠中左侧未经***最显著的延迟生长(图10B和图11B)，这表明免疫检查点抑制剂可以增强免疫毒素诱导的抗肿瘤免疫性以限制偏远区域的肿瘤生长。
序列表
<110> D·比格纳
V·查德拉莫汉
S·奈尔
M·格罗迈耶
X·巴奥
<120> 免疫毒素与检查点抑制剂的组合治疗
<130> 000250.00229
<160> 14
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> D2C7 VH
<400> 1
Glu Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Asp Tyr Asp Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Gln Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala His Arg Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> 氨基酸连接子
<400> 2
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> D2C7 VL
<400> 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ile Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Gly Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Lys Lys
100 105
<210> 4
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> PE38KDEL
<400> 4
Lys Ala Ser Gly Gly Pro Glu Gly Gly Ser Leu Ala Ala Leu Thr Ala
1 5 10 15
His Gln Ala Cys His Leu Pro Leu Glu Thr Phe Thr Arg His Arg Gln
20 25 30
Pro Arg Gly Trp Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly Tyr Pro Val Gln Arg
35 40 45
Leu Val Ala Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Asn Gln Val Asp
50 55 60
Gln Val Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Gly Gly Asp Leu
65 70 75 80
Gly Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala Arg Leu Ala Leu Thr
85 90 95
Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg Gln Gly Thr Gly Asn
100 105 110
Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Gly Pro Ala Asp Ser Gly Asp Ala Leu
115 120 125
Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe Leu Gly Asp Gly Gly
130 135 140
Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn Trp Thr Val Glu Arg
145 150 155 160
Leu Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu Arg Gly Tyr Val Phe Val
165 170 175
Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala Ala Gln Ser Ile Val Phe Gly
180 185 190
Gly Val Arg Ala Arg Ser Gln Asp Leu Asp Ala Ile Trp Arg Gly Phe
195 200 205
Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala Leu Ala Tyr Gly Tyr Ala Gln Asp Gln
210 215 220
Glu Pro Asp Ala Arg Gly Arg Ile Arg Asn Gly Ala Leu Leu Arg Val
225 230 235 240
Tyr Val Pro Arg Ser Ser Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Thr Ser Leu Thr
245 250 255
Leu Ala Ala Pro Glu Ala Ala Gly Glu Val Glu Arg Leu Ile Gly His
260 265 270
Pro Leu Pro Leu Arg Leu Asp Ala Ile Thr Gly Pro Glu Glu Glu Gly
275 280 285
Gly Arg Leu Glu Thr Ile Leu Gly Trp Pro Leu Ala Glu Arg Thr Val
290 295 300
Val Ile Pro Ser Ala Ile Pro Thr Asp Pro Arg Asn Val Gly Gly Asp
305 310 315 320
Leu Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile Ser Ala Leu
325 330 335
Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Pro Lys Asp Glu Leu
340 345 350
<210> 5
<211> 593
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> D2C7 -(scdsFv)-PE38KDEL
<400> 5
Glu Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Asp Tyr Asp Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Gln Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala His Arg Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala
130 135 140
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr
145 150 155 160
Ser Glu Asn Ile Tyr Ile Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly
165 170 175
Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly
180 185 190
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu
195 200 205
Lys Ile Asn Gly Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Gly Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln His Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu
225 230 235 240
Lys Lys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Glu Gly Gly Ser Leu Ala Ala Leu
245 250 255
Thr Ala His Gln Ala Cys His Leu Pro Leu Glu Thr Phe Thr Arg His
260 265 270
Arg Gln Pro Arg Gly Trp Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly Tyr Pro Val
275 280 285
Gln Arg Leu Val Ala Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Asn Gln
290 295 300
Val Asp Gln Val Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly Ser Gly Gly
305 310 315 320
Asp Leu Gly Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala Arg Leu Ala
325 330 335
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg Gln Gly Thr
340 345 350
Gly Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Gly Pro Ala Asp Ser Gly Asp
355 360 365
Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe Leu Gly Asp
370 375 380
Gly Gly Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn Trp Thr Val
385 390 395 400
Glu Arg Leu Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu Arg Gly Tyr Val
405 410 415
Phe Val Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala Ala Gln Ser Ile Val
420 425 430
Phe Gly Gly Val Arg Ala Arg Ser Gln Asp Leu Asp Ala Ile Trp Arg
435 440 445
Gly Phe Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala Leu Ala Tyr Gly Tyr Ala Gln
450 455 460
Asp Gln Glu Pro Asp Ala Arg Gly Arg Ile Arg Asn Gly Ala Leu Leu
465 470 475 480
Arg Val Tyr Val Pro Arg Ser Ser Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Thr Ser
485 490 495
Leu Thr Leu Ala Ala Pro Glu Ala Ala Gly Glu Val Glu Arg Leu Ile
500 505 510
Gly His Pro Leu Pro Leu Arg Leu Asp Ala Ile Thr Gly Pro Glu Glu
515 520 525
Glu Gly Gly Arg Leu Glu Thr Ile Leu Gly Trp Pro Leu Ala Glu Arg
530 535 540
Thr Val Val Ile Pro Ser Ala Ile Pro Thr Asp Pro Arg Asn Val Gly
545 550 555 560
Gly Asp Leu Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala Ile Ser
565 570 575
Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Pro Lys Asp Glu
580 585 590
Leu
<210> 6
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> VH, CDR1
<400> 6
Gly Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> VH, CDR2
<400> 7
Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Asp Tyr Asp Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> VH, CDR3
<400> 8
Gly Ala His Arg Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> VL, CDR1
<400> 9
Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ile Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> VL, CDR2
<400> 10
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> VL, CDR3
<400> 11
Gln Gln His Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 12
<211> 1779
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> D2C7-(scdsFv)-PE38KDEL
<400> 12
gaggtccacc tgcagcagtc tggacctgag ctggagaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aatggcaagt gccttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtga tactgactac 180
gaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccaa cacagtctac 240
atgcagctcc agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaggggcc 300
catagggatt actatgctat ggactactgg ggtcaaggga cctcagtcac cgtctcctca 360
ggtggtggcg gttcaggcgg aggtggctct ggcggtggcg gatcggacat ccagatgact 420
cagtctccag cctccctatc tgcatctgtg ggagaaactg tcaccatcac atgtcgaaca 480
agtgagaata tttacattta tttagcatgg tatcagcaga aacagggaaa atctcctcag 540
ctcctggtct ataatgcaaa aaccttagca gaaggtgtgc catcaaggtt cagtggcagt 600
gggtcaggca cacagttttc tctgaagatc aacggcctgc agcctgaaga ttttgggggt 660
tattactgtc aacagcatta tggcactccg tacacgttcg gatgcgggac caagctggaa 720
aaaaaaaaag cttccggagg tcccgagggc ggcagcctgg ccgcgctgac cgcgcaccag 780
gcttgccacc tgccgctgga gactttcacc cgtcatcgcc agccgcgcgg ctgggaacaa 840
ctggagcagt gcggctatcc ggtgcagcgg ctggtcgccc tctacctggc ggcgcggctg 900
tcgtggaacc aggtcgacca ggtgatccgc aacgccctgg ccagccccgg cagcggcggc 960
gacctgggcg aagcgatccg cgagcagccg gagcaagccc gtctggccct gaccctggcc 1020
gccgccgaga gcgagcgctt cgtccggcag ggcaccggca acgacgaggc cggcgcggcc 1080
aacggcccgg cggacagcgg cgacgccctg ctggagcgca actatcccac tggcgcggag 1140
ttcctcggcg acggcggcga cgtcagcttc agcacccgcg gcacgcagaa ctggacggtg 1200
gagcggctgc tccaggcgca ccgccaactg gaggagcgcg gctatgtgtt cgtcggctac 1260
cacggcacct tcctcgaagc ggcgcaaagc atcgtcttcg gcggggtgcg cgcgcgcagc 1320
caggacctcg acgcgatctg gcgcggtttc tatatcgccg gcgatccggc gctggcctac 1380
ggctacgccc aggaccagga acccgacgca cgcggccgga tccgcaacgg tgccctgctg 1440
cgggtctatg tgccgcgctc gagcctgccg ggcttctacc gcaccagcct gaccctggcc 1500
gcgccggagg cggcgggcga ggtcgaacgg ctgatcggcc atccgctgcc gctgcgcctg 1560
gacgccatca ccggccccga ggaggaaggc gggcgcctgg agaccattct cggctggccg 1620
ctggccgagc gcaccgtggt gattccctcg gcgatcccca ccgacccgcg caacgtcggc 1680
ggcgacctcg acccgtccag catccccgac aaggaacagg cgatcagcgc cctgccggac 1740
tacgccagcc agcccggcaa accgccgaaa gacgagctc 1779
<210> 13
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> D2C7-(scdsFv)
<400> 13
gaggtccacc tgcagcagtc tggacctgag ctggagaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aatggcaagt gccttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtga tactgactac 180
gaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccaa cacagtctac 240
atgcagctcc agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagaggggcc 300
catagggatt actatgctat ggactactgg ggtcaaggga cctcagtcac cgtctcctca 360
ggtggtggcg gttcaggcgg aggtggctct ggcggtggcg gatcggacat ccagatgact 420
cagtctccag cctccctatc tgcatctgtg ggagaaactg tcaccatcac atgtcgaaca 480
agtgagaata tttacattta tttagcatgg tatcagcaga aacagggaaa atctcctcag 540
ctcctggtct ataatgcaaa aaccttagca gaaggtgtgc catcaaggtt cagtggcagt 600
gggtcaggca cacagttttc tctgaagatc aacggcctgc agcctgaaga ttttgggggt 660
tattactgtc aacagcatta tggcactccg tacacgttcg gatgcgggac caagctggaa 720
aaaaaa 726
<210> 14
<211> 1053
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体构建体，全部或部分
<223> PE38KDEL
<400> 14
aaagcttccg gaggtcccga gggcggcagc ctggccgcgc tgaccgcgca ccaggcttgc 60
cacctgccgc tggagacttt cacccgtcat cgccagccgc gcggctggga acaactggag 120
cagtgcggct atccggtgca gcggctggtc gccctctacc tggcggcgcg gctgtcgtgg 180
aaccaggtcg accaggtgat ccgcaacgcc ctggccagcc ccggcagcgg cggcgacctg 240
ggcgaagcga tccgcgagca gccggagcaa gcccgtctgg ccctgaccct ggccgccgcc 300
gagagcgagc gcttcgtccg gcagggcacc ggcaacgacg aggccggcgc ggccaacggc 360
ccggcggaca gcggcgacgc cctgctggag cgcaactatc ccactggcgc ggagttcctc 420
ggcgacggcg gcgacgtcag cttcagcacc cgcggcacgc agaactggac ggtggagcgg 480
ctgctccagg cgcaccgcca actggaggag cgcggctatg tgttcgtcgg ctaccacggc 540
accttcctcg aagcggcgca aagcatcgtc ttcggcgggg tgcgcgcgcg cagccaggac 600
ctcgacgcga tctggcgcgg tttctatatc gccggcgatc cggcgctggc ctacggctac 660
gcccaggacc aggaacccga cgcacgcggc cggatccgca acggtgccct gctgcgggtc 720
tatgtgccgc gctcgagcct gccgggcttc taccgcacca gcctgaccct ggccgcgccg 780
gaggcggcgg gcgaggtcga acggctgatc ggccatccgc tgccgctgcg cctggacgcc 840
atcaccggcc ccgaggagga aggcgggcgc ctggagacca ttctcggctg gccgctggcc 900
gagcgcaccg tggtgattcc ctcggcgatc cccaccgacc cgcgcaacgt cggcggcgac 960
ctcgacccgt ccagcatccc cgacaaggaa caggcgatca gcgccctgcc ggactacgcc 1020
agccagcccg gcaaaccgcc gaaagacgag ctc 1053

Claims (14)

1.免疫毒素和免疫检查点的抑制剂组合在制备用于治疗患者神经胶质瘤的药物中的用途，所述免疫检查点的抑制剂选自抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体和BLZ495，其中所述免疫毒素包含与PE38截断的假单胞菌外毒素融合的单链可变区抗体，其中，所述单链可变区抗体具有如SEQ ID NO：6-11所示的CDR1区、CDR2区和CDR3区。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述神经胶质瘤是恶性神经胶质瘤。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述免疫毒素直接施用于所述神经胶质瘤。
4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述抑制剂是抗PD-1抗体。
5.根据权利要求1所述的用途，其中，所述抑制剂是抗CTLA4抗体。
6.根据权利要求1所述的用途，其中，所述抑制剂是BLZ495。
7.根据权利要求1所述的用途，其中，在施用所述免疫毒素后30天内施用所述免疫检查点的抑制剂。
8.根据权利要求1所述的用途，其中，在施用所述免疫毒素后7天内施用所述免疫检查点的抑制剂。
9.根据权利要求1所述的用途，其中，将所述PE38截断的假单胞菌外毒素与KDEL肽融合。
10.一种用于治疗神经胶质瘤的试剂盒，其包含：
免疫毒素，所述免疫毒素包含与PE38截断的假单胞菌外毒素融合的单链可变区抗体，其中，所述单链可变区抗体具有如SEQ ID NO：6-11所示的CDR1区、CDR2区和CDR3区；以及
免疫检查点的抑制剂，其选自抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体和BLZ495。
11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，所述抑制剂是抗PD-1抗体。
12.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，所述抑制剂是抗CTLA4抗体。
13.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，所述抑制剂是BLZ495。
14.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，将所述PE38截断的假单胞菌外毒素与KDEL肽融合。
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