CN108348779A

CN108348779A - Ack1/tnk2酪氨酸激酶的抑制剂

Info

Publication number: CN108348779A
Application number: CN201680045457.1A
Authority: CN
Inventors: 努帕姆·P·马哈詹; 基兰·N·马哈詹; 尼古拉斯·J·劳伦斯; 哈尔沙尼·R·劳伦斯
Original assignee: H Lee Murphy Cancer Center Research Ltd
Current assignee: H Lee Murphy Cancer Center Research Ltd; H Lee Moffitt Cancer Center and Research Institute Inc
Priority date: 2015-08-02
Filing date: 2016-08-02
Publication date: 2018-07-31
Also published as: US20180215738A1; EP3328496A1; EP3328496A4; US10336734B2; AU2022200838A1; WO2017023899A1; AU2016301212A1

Abstract

本发明描述了癌症疗法和抗癌化合物。具体地讲，本发明公开了ACK1酪氨酸激酶的抑制剂及其在癌症治疗中的用途。本发明还公开了筛选新ACK1酪氨酸激酶抑制剂的方法。在特定的实施例中，本发明公开了具有式I的化合物。

Description

ACK1/TNK2酪氨酸激酶的抑制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年8月2日提交的美国临时申请62/200,084和2016年2月24日提交的美国临时申请62/299,178的优先权，其公开内容以引用的方式并入本文中。

政府资助的声明

本发明在政府支持下在国家健康协会授予的资助号CA135328下进行。政府享有本发明的某些权利。

发明领域

本文公开的主题通常涉及癌症疗法以及抗癌化合物。更具体地讲，本文公开的主题涉及ACK1酪氨酸激酶的抑制剂及其在癌症治疗中的用途。还公开了筛选ACK1激酶的选择性抑制剂的方法。

背景技术

ACK1，也称为TNK2，是在各式各样的细胞类型中表达的非受体酪氨酸激酶。它整合来自若干重要的配体活化的受体酪氨酸激酶(RTK)如EGFR、MerTK、HER2、PDGFR和胰岛素受体的信号以引发细胞内信号传导级联。ACK1酪氨酸激酶在包括***癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和肺癌的许多类型的人类癌症中异常活化、扩增或突变(Mahajan K等，ACK1tyrosine kinase：targeted inhibition to block cancer cell proliferation.CancerLett.2013；338：185-92)。异常活化的ACK1经由多种分子机制驱动细胞生长(Mahajan K等，Shepherding AKT and androgen receptor by ACK1 tyrosinekinase.J.Cell.Physiol.2010；224：327-33)。若干最近发现强调了其促进肿瘤的功能。例如，ACK1在Tyr267处在其反式活化结构域中以雄性激素非依赖性方式使雄性激素受体磷酸化以促进去势难治性***癌(CRPC)生长(Mahajan K等，Activated Cdc42-associatedkinase ACK1 promotes prostate cancer progression via androgen receptortyrosine phosphorylation.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2007；104：8438-43；Mahajan K等，ACK1-mediated androgen receptor phosphorylation modulates radiationresistance in castration-resistant prostate cancer.J.Biol.Chem.2012；287(26)：22112-22)。已经显示ACK1通过使在Tyr287上的含WW结构域的氧化还原酶(Wwox)肿瘤抑制剂(Aqeilan RI等，WWOX in biological control andtumorigenesis.J.Cell.Physiol.2007；212：307-10)磷酸化导致其多聚泛素化和随后的降解(Mahajan K等，Activated tyrosine kinase ACK1 promotes prostatetumorigenesis：role of ACK1 in polyubiquitination of tumor suppressorWwox.Cancer Res.2005；65：10514-23)来促进***肿瘤发生。还已经显示，ACK1磷酸化并活化在人生理和疾病中起重要作用的关键信号传导激酶AKT(Franke TF等，The proteinkinase encoded by the Akt proto-oncogene is a target of the PDGF-activatedphosphatidylinositol 3-kinase.Cell 1995；81：727-36；Burgering BM等，Proteinkinase B(c-Akt)in phosphatidylinositol-3-OH kinase signal transduction.Nature1995；376：599-602；Manning BD等，AKT/PKB signaling：navigating downstream.Cell2007；129：1261-74)。当AKT在Tyr176上被ACK1磷酸化时，它通过抑制促细胞凋亡途径而功能性地参与乳腺癌的进展(Mahajan K等，ACK1 mediated AKT/PKB tyrosine 176phosphorylation regulates its activation.PloS one 2010；5：e9646)。相反地，通过siRNA敲低ACK1表达抑制MCF7乳腺癌细胞系中的AKT活化，并增加促凋亡基因如Bim和Fas的表达(同上)。ACK1转基因小鼠发展成***上皮内瘤变(PIN)，指示其活化在肿瘤发生中是至关重要的(同上)。因此，临床前模型中的重要证据验证ACK1作为抗癌药物的靶标，并驱动许多ACK1抑制剂的开发。ACK1抑制剂的选定实例如下：

发现了一系列的4-氨基-5，6-二芳基-呋喃并[2，3-d]嘧啶(结构1a-1c)抑制ACK1和src激酶家族Lck(淋巴细胞特异性激酶)的相关成员(DiMauro EF等，Discovery of 4-amino-5，6-biaryl-furo[2，3-d]pyrimidines as inhibitors of Lck：development ofan expedient and divergent synthetic route and preliminarySAR.Bioorg.Med.Chem.Lett.2007；17，2305-9；Martin MW等，Discovery of novel 2，3-diarylfuro[2，3-b]pyridin-4-amines as potent and selective inhibitors of Lck：synthesis，SAR，and pharmacokinetic properties.Bioorg.Med.Chem.Lett.2007；17：2299-304)。例如，化合物1a有力地抑制ACK1和Lck两者，并且由于Lck抑制而可用于开发用于治疗T细胞介导的自身免疫和炎性疾病的其他化合物。化合物1b(AIM-100)用作ACK1抑制的化学探针，因为据报道其以比1a(Lck∶ACK1 1.8∶1)低的程度抑制Lck(ACK1∶Lck 5∶1)。AIM-100抑制在胰腺癌细胞中的ACK1依赖性AKT Tyr176磷酸化(Mahajan K等，ACK1tyrosine kinase activation correlates with pancreatic cancerprogression.Am.J.Pathol.2012；180：1386-93)和AR Tyr267磷酸化(Mahajan K等，Effectof ACK1 tyrosine kinase inhibitor on ligand-independent androgen receptoractivity.Prostate 2010；70：1274-85)。AIM-100还通过抑制AR Tyr267磷酸化来抑制去势且耐辐射性***异种移植肿瘤生长(Mahajan K等，ACK1-mediated androgen receptorphosphorylation modulates radiation resistance in castration-resistantprostate cancer.J.Biol.Chem.2012；287：22112-22)。对4-氨基-5，6-二芳基-呋喃并[2，3-d]嘧啶系列的其他成员的研究显示二硫戊环1c是异常有力的ACK1抑制剂(K_i0.3nM)。该化合物抑制依赖于ACK1的细胞系的生长，其中IC₅₀为5nM。然而，其不良的药代动力学性质(归因于二硫戊环和NMe₂两者的氧化)不能用于动物模型中。Amgen还开发了一系列2型吡唑并嘧啶作为ACK1抑制剂(Kopecky DJ等，Identification and optimization of N3，N6-diaryl-1H-pyrazolo[3，4-d]pyrimidine-3，6-diamines as a novel class of ACK1inhibitors.Bioorg.Med.Chem.Lett.2008；18：6352-6)。例如，如通过抑制ACK1自磷酸化所测量，化合物2在体外有力地抑制ACK1(IC₅₀2nM)且在完整细胞中有效地抑制ACK1(IC₅₀20nM)。Gray和同事已经通过嘧啶-二氮杂卓的集中文库的高通量激酶分析来鉴定ACK1抑制剂3(Miduturu CV等，High-throughput kinase profiling：a more efficientapproach toward the discovery of new kinase inhibitors.Chem.Biol.2011；18：868-79)。该化合物在HEK293细胞中在2μM的浓度下消除EGF诱导的ACK1自磷酸化(Tyr284)。它在10μM下还抑制A549肺癌细胞生长。OSI/Astellas的Jin和同事已经开发了一系列基于咪唑并吡嗪的ACK1抑制剂(Jin M等，Discovery of potent，selective and orallybioavailable imidazo[1，5-a]pyrazine derived ACK1inhibitors.Bioorg.Med.Chem.Lett.2013；23：979-84)。例如，化合物4是在小鼠模型中口服生物可利用的有力ACK1抑制剂且具有良好的实验ADMET性质。其在AlphaScreen测定中抑制ACK1介导的poly-(GT)的磷酸化，其中IC₅₀为110nM。在细胞背景下，其有力地抑制ACK1。如通过ELISA测定所测量，在NCI-H1703人非小细胞肺癌细胞中，其对于ACK1抑制的IC₅₀为35nM。在该测定中，来自细胞溶胞产物的ACK1通过ACK1抗体捕获在ELISA板上。ACK1的磷酸化程度使用识别磷酸酪氨酸残基的酶联抗体确定。已经显示若干混杂的激酶抑制剂抑制ACK1。例如，Src/Abl激酶抑制剂博舒替尼(Golas JM等，SKI-606，a 4-anilino-3-quinolinecarbonitrile dual inhibitor of Src and Abl kinases，is a potentantiproliferative agent against chronic myelogenous leukemia cells in cultureand causes regression of K562xenografts in nude mice.Cancer Res.2003；63：375-81)以2.7nM的IC₅₀抑制ACK1(Remsing R等，Global target profile of the kinaseinhibitor bosutinib in primary chronic myeloid leukemia cells.Leukemia 2009；23：477-85)。发现博舒替尼在一组非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中抑制细胞迁移和侵袭而不抑制细胞活力(Tan DS等，Bosutinib inhibits migration and invasion via ACK1 inKRAS mutant non-small cell lung cancer.Mol.Cancer 2014；13：13)。当ACK1在K-Ras突变细胞系中被特定地敲低时没有看到这些效应。达沙替尼(Dasatinib)，另一BCR/Abl和Src家族酪氨酸激酶抑制剂，抑制ACK1，其中K_D为6nM(Carter TA等，Inhibition of drug-resistant mutants of ABL，KIT，and EGF receptor kinases.Proc.Natl.Acad.Sci.USA2005；102：11011-6)。显示达沙替尼抑制调蛋白刺激的人***癌LNCaP细胞中的Tyr-267的ACK1自磷酸化和AR磷酸化两者，其中IC₅₀＜5nM(Liu Y等，Dasatinib inhibits site-specific tyrosine phosphorylation of androgen receptor by ACK1 and Srckinases.Oncogene 2010；29：3208-16)。另外，在小鼠异种移植模型中，达沙替尼显著降低表达组成性活化的ACK1的LNCaP细胞的生长(同上)。化学和磷蛋白质组学方法揭示ACK1是达沙替尼在人肺癌细胞中的靶标(Li J等，A chemical and phosphoproteomiccharacterization of dasatinib action in lung cancer.Nat.Chem.Biol.2010；6：291-9)。

ACK1抑制剂通过分析包括以下的已知ACK1抑制剂开发：1b(AIM-100)、吡唑并嘧啶衍生物5(Kopecky DJ等，Identification and optimization of N3，N6-diaryl-1H-pyrazolo[3，4-d]pyrimidine-3，6-diamines as a novel class of ACK1inhibitors.Bioorg.Med.Chem.Lett.2008；18：6352-6)和ALK抑制剂6(TAE684)(Galkin AV等，Identification of NVP-TAE684，a potent，selective，and efficacious inhibitorof NPM-ALK.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2007；104：270-5)(其强烈地交叉抑制来自已公开的抑制剂概况数据集的ACK1；K_d 2nM(Davis MI等，Comprehensive analysis of kinaseinhibitor selectivity.Nat.Biotechnol.2011；29：1046-51)和K_i 1nM(Metz JT等，Navigating the kinome.Nat.Chem.Biol.2011；7：200-2))。这三种抑制剂的结合模式示于图1A至1F中，如由以下得出：5的X-射线结构与ACK1(pdb 3EQR)；由类似物的X-射线结构模拟的1b(AIM-100)与ACK1(Jiao X等，Synthesis and optimization of substituted furo[2，3-d]-pyrimidin-4-amines and 7H-pyrrolo[2，3-d]pyrimidin-4-amines as ACK1inhibitors.Bioorg.Med.Chem.Lett.2012；22：6212-7)(pdb 4EWH)；由其X-射线结构模拟的6与ALK(Bossi RT等，Crystal structures of anaplastic lymphoma kinase incomplex with ATP competitive inhibitors.Biochem.2010；49：6813-25)(pdb 2XB7)。这些经由嘧啶基团，在越过门卫的疏水口袋中且在核糖结合区中的定位基团，结合ACK1铰链残基Ala-208(Galkin AV等，Identification of NVP-TAE684，a potent，selective，andefficacious inhibitor of NPM-ALK.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2007；104：270-5)。双苯胺基嘧啶支架长期以来被认为是经典的激酶抑制剂基序(Bebbington D等，The discoveryof the potent aurora inhibitor MK-0457(VX-680).Bioorg.Med.Chem.Lett.2009；19：3586-92；Moriarty KJ等，The synthesis and SAR of 2-amino-pyrrolo[2，3-d]pyrimidines：a new class of Aurora-A kinaseinhibitors.Bioorg.Med.Chem.Lett.2006；16：5778-83；Tari LW等，Structural basisfor the inhibition of Aurora A kinase by a novel class of high affinitydisubstituted pyrimidine inhibitors.Bioorg.Med.Chem.Lett.2007；17：688-691)。据报道Aurora A抑制剂使用双苯胺基嘧啶支架(Lawrence HR等，Development of o-chlorophenyl substituted pyrimidines as exceptionally potent aurora kinaseinhibitors.J.Med.Chem.2012；55：7392-416；Martin MP等，A novel mechanism by whichsmall molecule inhibitors induce the DFG flip in Aurora A.ACS Chem.Biol.2012；7：698-706；Yang H等，Dual Aurora A and JAK2 kinase blockade effectivelysuppresses malignant transformation.Oncotarget 2014；5：2947-61)。在新型ACK1抑制剂的开发中，设计过程并入氨基嘧啶结构作为铰链结合基团(图1D)，且并入1b、5和6的片段作为R¹、R²和R³(图1D)基团以在混合和匹配过程中产生混合型结构(图1A至1F)。

需要的是用于抑制ACK1的新化合物和方法以及这些化合物的用途。本文公开的主题解决了这些和其他需要。

发明概要

根据公开的材料和方法的目的，正如本文中所体现并广泛描述的，公开的主题一方面涉及化合物、组合物和用于制备并使用化合物和组合物的方法。在特定的方面，公开的主题涉及癌症疗法以及抗癌化合物。更具体地讲，本文公开的主题涉及ACK1酪氨酸激酶的抑制剂及其在癌症治疗中的用途。还公开了筛选新ACK1酪氨酸激酶抑制剂的方法。

另外的优点将在随后的描述中部分地阐述，并且部分根据所述描述将是显而易见的，或可以通过实践下面描述的方面知悉。以下所描述的优点将借助在所附权利要求书中特定指出的要素和组合来实现并达到。应理解，前面的概述和下面的详述都仅仅是示例性和说明性的而不是限制性的。

附图简述

图1A至1F。通过(R)-9bMS(DZ1-067甲磺酸盐)实现的ACK1激酶活性抑制作用抑制AR和AR-V7表达。图1A显示在用(R)-9bMS处理(3.5μM，16小时)的VCaP细胞中AR-V7的qRT-PCR分析。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。*p＜0.05。图1B和图1C显示用(R)-9bMS处理的雄性激素剥夺的VCaP和LAPC4细胞的免疫印迹分析。图1D显示用caACK或kdACK构建体转染的PC3细胞的免疫印迹分析。图1E和图1F显示在用caACK或kdACK构建体转染的PC3细胞中AR和PSA的qRT-PCR分析。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。**p＜0.01。

图2A至2C。ACK1抑制剂(R)-9bMS抑制组蛋白H4在酪氨酸88处的表观遗传修饰。图2A显示用(R)-9bMS(5μM)处理，接着进行***处理(IGF，40分钟)或血小板衍生的生长因子处理(PDGF，60分钟)的血清和雄性激素饥饿的LNCaP和LAPC4细胞的免疫印迹分析。图2B显示用(R)-9bMS(5μM)、恩杂鲁胺(enzalutamide)(5μM)或DHT(10nM)处理，接着进行IGF处理(40分钟)或EGF处理(60分钟)的血清和雄性激素饥饿的LNCaP-C4-2B和LAPC4细胞的免疫印迹分析。图2C显示用对照物或ACK1 siRNA电穿孔，接着进行IGF配体处理的LNCaP细胞的免疫印迹分析。

图3A至3C。检测人CRPC中的组蛋白H4 Y88-磷酸化。图3A显示来自组蛋白从3个新鲜冷冻的人CRPC样品中纯化并消化时的MS数据。观察到ArgC消化的肽KTVTAMDVVYALKR(SEQID No.：1)为三电荷的，m/z为558.9605，这表示质量误差为1.2ppm；使用Mascot在CRPC样品#1中以32.1分鉴定MS/MS谱。图3B显示在CRPC样品#1-3中人组蛋白H4中磷酸化酪氨酸88的无标记定量。使用Xcalibur软件(Thermo)提取含有Arg-C消化的肽KTVTAMDVVYALKR(SEQID No.：1)的H4 pY-88的离子色谱图。m/z公差设定为+/-0.02Th，且保留时间(RT)公差设定为+/-60秒。使用曲线下面积(AUC)值来定量样品之间的相对强度。图3C显示从新鲜冷冻的人CRPC样品#1和正常***样品中分离的总组蛋白的免疫印迹分析。

图4A和4B。通过ACK1在AR基因上游沉积pY88-H4表观遗传标志。图4A显示ChIP-测序揭示pY88-H4表观遗传标志在AR基因上游三个不同位置沉积。图4B显示人AR基因和位于AR转录起始位点(TSS)上游的pY88-H4结合位点AREM1-3。

图5A至5J。AR转录受被c(R)-9bMS敏化的酪氨酸88处的组蛋白H4的表观遗传修饰调控。图5A至5D显示用pY88-H4抗体，接着通过qPCR使用对应于用(R)-9bMS处理的C4-2B细胞的AREM1-3和对照(基因沙漠)位点的引物进行的ChIP。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。**p＜0.01。图5E显示用AR抗体，接着通过qPCR使用对应于用AR和对照siRNA转染的C4-2B细胞的AREM1位点的引物进行的ChIP。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。*p＜0.05，**p＜0.01。图5F和5G显示用pY88-H4抗体，接着通过qPCR使用对应于用ACK1、AR和对照siRNA转染的C4-2B细胞的AREM2和AREM1位点的引物进行的ChIP。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。*p＜0.05，**p＜0.01。图5H显示用pY88-H4抗体，接着通过qPCR使用对应于LAPC4和ACK1-KO(通过CRISPR/Cas9编辑)LAPC4细胞的AREM1位点的引物进行的ChIP。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。*p＜0.05。图5I和5J显示在用FLAG-标签的H4或Y88F突变体H4表达构建体转染的LAPC4细胞中AR和PSA的qRT-PCR分析。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。*p＜0.05，**p＜0.01。

图6A至6F。MLL2/WDR5复合体的募集和在AR基因上游H3K4me3表观遗传标志的沉积可以通过(R)-9bMS消除。图6A显示，肽下拉测定揭示，与H4肽相比，WDR5与磷酸-Tyr88-H4的结合增加。图6B显示来自表达H4或H4的Y88F突变体的雄性激素剥夺的LNCaP细胞用FLAG珠粒得到的剪切染色质在用H3K4me3和H3K9me3抗体免疫印迹后的免疫沉淀。图6C至6F显示用指示的抗体，接着通过qPCR使用对应于在用(R)-9bMS处理的C4-2B细胞中的AREM1和对照(基因沙漠)位点的引物进行的ChIP。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。*p＜0.05，**p＜0.01。

图7A至7F。(R)-9bMS克服CRPC的耐恩杂鲁胺性。图7A显示用(R)-9bMS处理96小时的PC系的细胞活力测定。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。图7B显示用(R)-9bMS、萨卡替尼(sarcatinib)或星形孢菌素(staurosporine)处理的C4-2B细胞的细胞凋亡测定。图7C显示，在(R)-9bMS或媒剂处理后，切除C4-2B异种移植肿瘤并示出代表性肿瘤。图7D显示用(R)-9bMS处理96小时的耐恩杂鲁胺性C4-2B细胞的细胞活力测定。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±s.e.m.(n＝3)。图7E显示耐恩杂鲁胺性细胞中ARmRNA水平的qRT-PCR分析。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±平均值的标准误差(s.e.m.)(n＝3)。*p＜0.05。图7F显示用(R)-9bMS处理的耐恩杂鲁胺性C4-2B细胞的免疫印迹分析。用(R)-9bMS处理(24小时)的***细胞系的细胞周期分析。

图8A至8F。(R)-9bMS缓解CRPC肿瘤生长。图8A显示将C4-2B细胞皮下植入***的雄性SCID小鼠中。一旦形成可触知的肿瘤，则每周6天给小鼠注射媒剂(在PBS中的10％DMSO)或(R)-9bMS(50mg/kg体重)，持续5周(每次治疗n＝9只小鼠)。测量肿瘤体积。数据表示平均值±s.e.m.。图8B显示示出异种移植肿瘤的重量。*p＜0.05。图8C显示来自切除异种移植肿瘤时的数据。图8D显示在用DMSO或(R)-9bMS处理的异种移植肿瘤中AR、PSA和TMPRSS2 mRNA水平的qRT-PCR分析。数据表示来自三个独立实验之一的平均值±平均值的标准误差(s.e.m.)(n＝3)。**p＜0.01。图8E显示来自小鼠的器官被切除，固定并且H&E染色。图8F显示示出小鼠的重量。

图9。ACK1抑制剂(R)-9bMS抑制***小鼠中的异种移植肿瘤生长。将雄性SCID小鼠***并对其注射LNCaP-caAck细胞。一旦形成可触知的肿瘤，则每周6天给小鼠注射媒剂(在PBS中的10％DMSO)或(R)-9bMS(50mg/kg体重)，持续4周(每次治疗n＝7只小鼠)。测量肿瘤体积。

图10A至10F。ACK1激酶活性的缺失显著增加免疫反应。图10A和10B显示ACK1敲低引起总脾细胞和***细胞计数的显著增加。图10C和10D显示ACK1的缺失导致CD4辅助细胞、CD8细胞毒性细胞的显著增加。图10E和10F显示在ACK1活性缺失时观察到脾脏和***B细胞的显著增加。

图11A至11C。ACK1激酶活性对于癌细胞保持免疫细胞‘静止’至关重要。图11A和11B显示ACK1敲低引起自然杀伤(NK)细胞和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)计数的显著增加。图11C显示T细胞从WT和KO小鼠中纯化并用抗CD3活化24小时。对T细胞进行染色以产生IFN-g。

图12。ACK1抑制剂通过激发免疫细胞抗肿瘤反应引起肿瘤抑制。将SM-1细胞皮下注射到WT和KO小鼠中，并在接下来的4-5周内监测异种移植肿瘤的形成。测量肿瘤体积(每种情况，n＝7)并示出平均肿瘤体积。

具体的实施方式

通过参考所公开主题的特定方面的以下详细描述和其中包括的实施例，可以更容易地理解本文中描述的材料、化合物、组合物和方法。

在公开并描述本发明的材料、化合物、组合物和方法之前，应理解下述方面不限于特定的合成方法或特定的试剂，因此当然可以变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定方面的目的，且并非意图加以限制。

此外，贯穿本说明书，参考多种出版物。这些出版物的公开内容特此以引用的方式整体并入本申请中以便更充分地描述公开的主题涉及的领域的现状。对公开的参考文献中包含并且在其引用的句子中讨论的材料还单独并特定地以引用的方式并入本文。

一般定义

在本说明书和随附权利要求书中，将会提及许多术语，这些术语应被定义为具有以下含义：

贯穿本说明书和权利要求书，词语“包含(comprise)”和所述词语的其他形式如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”是指包括但不限于并且不旨在排除例如其他添加剂、组分、整数或步骤。

除非上下文另外明确规定，否则如在描述和随附的权利要求书中所用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述/该(the)”包括多个指示物。因此，例如，提及“一种组合物”包括两种或更多种这样的组合物的混合物，提及“一种抑制剂”包括两种或更多种这样的抑制剂的混合物，提及“一种激酶”包括两种或更多种这样的激酶的混合物，等等。

“任选的”或“任选地”是指后面描述的事项或情形可能发生，或者可能不发生，并且该描述包括该事项或情形发生的情况和不发生的情况。

尽管阐述本公开的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但在特定实施例中所阐述的数值尽可能精确地加以报告。然而，由于在数值相应的试验测量中有标准偏差，所以任何数值本身必然含有一些误差。此外，当在此阐述变化范围的数值范围时，预期可以使用这些值的任何组合，包括所列举的值。另外，范围在本文中可以表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表示这样的范围时，另一方面包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表达为近似值时，将理解的是，特定值形成另一方面。应进一步理解，范围中的每一个的端点相对于另一个端点并且独立于另一个端点都是有意义的。除非另有说明，否则术语“约”是指在由术语“约”修饰的特定值的5％内(例如，2％或1％内)。

“降低(reduce)”或所述词语的其他形式，如“降低(reducing)”或“降低(reduction)”是指事件或特征(例如，肿瘤生长、转移)的减低。应理解，这通常是相对于一些标准或预期值，换句话说，它是相对的，但是它对于待提及的标准或相对值来说并不总是必需的。例如，“降低肿瘤生长”是指相对于标准或对照减少肿瘤细胞的量。

“预防(prevent)”或所述词语的其他形式，如“预防(preventing)”或“预防(prevention)”是指终止特定事件或特征，稳定或延迟特定事件或特征的发展或进展，或使特定事件或特征发生的机会最小化。预防不需要与对照相比较，因为它通常比例如降低更绝对。如本文所用，某事可以被降低但不可预防，但是被降低的某事也可以得到预防。同样地，某事可以被预防但是不可被降低，但是被预防的某事也可以得到降低。应理解，使用降低或预防时，除非特别指出，否则也明确地公开其他词语的使用。

如本文所用，“治疗”是指获得有益的或期望的临床结果。有益的或期望的临床结果包括但不限于以下任何一种或多种：减轻一种或多种症状(例如肿瘤生长或转移)，降低癌症程度，稳定(即不恶化)癌症状态，预防或延迟癌症的扩散(例如转移)，预防或延迟癌症的发生或复发，延迟或延缓癌症进展，改善癌症状态，和缓解(部分或全部)。

术语“患者”优选是指为了任何目的需要用抗癌剂或治疗进行治疗的人，并且更优选为需要这样的治疗以治疗癌症或癌前病变或病变的人。然而，术语“患者”还可以指需要用抗癌剂或治疗进行治疗的非人类动物，优选哺乳动物，例如犬、猫、马、牛、猪、绵羊，和非人类灵长类动物等。

应理解，贯穿本说明书，使用标识符“第一”和“第二”仅仅是为了帮助区分所公开主题的各种组分和步骤。标识符“第一”和“第二”并非旨在暗含由这些术语修饰的组分或步骤的任何特定的顺序、量、优先性或重要性。

化学定义

如本文所用，术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接地产生的任何产品。

说明书和最后的权利要求书中提及的组合物中的特定元素或组分的重量份表示组合物或制品中的这些元素或组分与任何其他元素或组分之间的重量关系，用重量份表示。因此，在含有2重量份的组分X和5重量份的组分Y的混合物中，X和Y是以2∶5的重量比存在，并且不管该混合物中是否含有另外的组分，都是以这样的比率存在。

除非特别地相反说明，否则组分的重量百分比(重量％)都是基于其中包含该组分的制剂或组合物的总重量。

如本文所用，术语“取代的”预期包括有机化合物的所有可允许的取代基。在一个广泛的方面，可允许的取代基包括有机化合物的非环状和环状、支链和非支链、碳环和杂环以及芳族和非芳族的取代基。说明性的取代基包括例如下面描述的那些取代基。对于适当的有机化合物，可允许的取代基可以是一个或多个以及相同或不同的。出于本公开的目的，杂原子如氮可以具有氢取代基和/或满足杂原子的化合价的本文中描述的有机化合物的任何可允许的取代基。本公开并非旨在以任何方式受有机化合物的可允许的取代基的限制。此外，术语“取代”或“被...取代”包括隐含条件，即这样的取代符合取代的原子和取代基的允许化合价，并且取代产生稳定的化合物，例如不会自发地如通过重排、环化、消除等进行转化的化合物。

如本文所用的术语“脂族”是指非芳族烃基并且包括支链和非支链的烷基、烯基或炔基。

如本文所用的术语“烷基”是具有1至24个碳原子的支链或非支链的饱和烃基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基等。烷基也可以是取代的或未取代的。烷基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、卤代烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代(sulfo-oxo)、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如下所述。

如本文所用的术语“杂烷基”是具有1至24个碳原子的支链或非支链的饱和烃基，其中碳原子中的一个或多个及其附接的氢原子(如果有的话)已被O、S、N或NH置换。杂芳基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、卤代烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如下所述。

符号Aⁿ在本文中仅用作下面定义中的通用取代基。

如本文所用的术语“烷氧基”是通过单个末端醚键结合的烷基；也就是说，“烷氧基”可以被定义为-OA¹，其中A¹是如上定义的烷基。

如本文所用的术语“烯基”是具有含有至少一个碳碳双键的结构式的具有2至24个碳原子的烃基。不对称结构如(A¹A²)C＝C(A³A⁴)旨在包括E和Z两种异构体。这可以用本文的结构式来假定，其中存在不对称的烯烃，或可以通过键符号C＝C来明确地指明。烯基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、卤代烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如下所述。

如本文所用的术语“炔基”是具有含有至少一个碳碳三键的结构式的具有2至24个碳原子的烃基。炔基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、卤代烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如下所述。

如本文所用的术语“芳基”是含有任何基于碳的芳族基团的基团，包括但不限于苯、萘、苯基、联苯基、苯氧基苯等等。术语“杂芳基”定义为含有具有至少一个并入芳族基团的环内的杂原子的芳族基团的基团。杂原子的实例包括但不限于氮、氧、硫和磷。包括在术语“芳基”中的术语“非杂芳基”定义含有不含杂原子的芳族基团的基团。芳基和杂芳基可以是取代或未取代的。芳基或杂芳基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、卤代烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如本文所述。术语“联芳基”是一种特定类型的芳基，并且包括在芳基的定义中。联芳基是指通过稠环结构(如在萘中)结合在一起或通过一个或多个碳碳键附接(如在联苯基中)的两个芳基。

如本文所用的术语“环烷基”是由至少三个碳原子组成的非芳族基于碳的环。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。术语“杂环烷基”是如上定义的环烷基，其中环的碳原子中的至少一个被杂原子取代，该杂原子例如但不限于氮、氧、硫或磷。环烷基和杂环烷基可以是取代的或未取代的。环烷基和杂环烷基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如本文所述。

术语“杂环烷基”是如上所定义的一类环烷基，其中碳原子中的至少一个及其附接的氢原子(如果有的话)被O、S、N或NH置换。杂环烷基和杂环烯基可以是取代的或未取代的。环烯基和杂环烯基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如本文所述。

如本文所用的术语“环烯基”是由至少三个碳原子组成且含有至少一个双键，即C＝C的非芳族碳基环。环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基等等。

术语“杂环烯基”是如上定义的一类环烯基，其中该环的碳原子中的至少一个被O、S、N或NH取代。环烯基和杂环烯基可以是取代的或未取代的。环烯基和杂环烯基可以被一个或多个基团取代，这些基团包括但不限于烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤化物、羟基、酮、硝基、硅烷基、磺基-氧代、磺酰基、砜、亚砜或巯基，如本文所述。

如本文所用的术语“环基”是指芳基、非芳基(即，环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基)或两者。环基具有一个或多个可以是取代的或未取代的环***。环基可以含有一个或多个芳基、一个或多个非芳基，或一个或多个芳基和一个或多个非芳基。

本文所用的术语“醛”由式-C(O)H表示。在整个说明书中，“C(O)”是C＝O的简写符号。

如本文所用的术语“胺”或“氨基”由式NA¹A²A³表示，其中A¹、A²和A³可以独立地为氢，上述的烷基、卤代烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。

如本文所用的术语“羧酸”由式-C(O)OH表示。如本文所用的“羧酸酯”由式-C(O)O^-表示。

如本文所用的术语“酯”由式-OC(O)A¹或-C(O)OA¹表示，其中A¹可以是上述的烷基、卤代烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。

如本文所用的术语“醚”由式A¹OA²表示，其中A¹和A²可以独立地是上述的烷基、卤代烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。

如本文所用的术语“酮”由式A¹C(O)A²表示，其中A¹和A²可以独立地是上述的烷基、卤代烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。

如本文所用的术语“卤化物”是指卤素，即氟、氯、溴和碘。

如本文所用的术语“羟基”由式-OH表示。

如本文所用的术语“硝基”由式-NO₂表示。

如本文所用的术语“氰基”由式-CN表示。

如本文所用的术语“叠氮基”由式-N₃表示。

如本文所用的术语“磺酰基”是指由式-S(O)₂A¹表示的磺基-氧代基团，其中A¹可以是氢，上述的烷基、卤代烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。

如本文所用的术语“磺酰氨基”或“磺酰胺”由式-S(O)₂NH₂表示。

如本文所用的术语“巯基”由式-SH表示。

应该理解，本文提供的化合物可以含有手性中心。这样的手性中心可以具有(R-)或(S-)构型。本文提供的化合物可以是对映体纯的，或者是非对映体或对映体混合物。应该理解，本文提供的化合物的手性中心可以在体内经历差向异构化。如此，本领域技术人员将认识到，对于经历体内差向异构化的化合物来讲，施用(R-)形式的化合物与施用(S-)形式的化合物等效。

如本文所用，基本上纯是指足够均匀，使得如通过标准分析方法如薄层色谱法(TLC)、核磁共振(NMR)、凝胶电泳、高效液相色谱法(HPLC)和质谱(MS)、气相色谱质谱(GC-MS)以及本领域技术人员用于评估这种纯度的类似方法所测定看上去没有可容易检测到的杂质，或者足够纯，使得进一步的纯化不会可检测地改变物质的物理和化学性质如酶促和生物活性。纯化化合物以产生基本上化学纯的化合物的传统方法和现代方法都是本领域技术人员已知的。然而，基本上化学纯的化合物可以是立体异构体的混合物。

除非相反说明，否则化学键只以实线显示而不是以楔形或虚线显示的式预期各种可能的异构体，例如各种对映异构体、非对映异构体和内消旋化合物，以及异构体的混合物，如外消旋或部分消旋(scalemic)的混合物。

“药学上可接受的”组分是适合供人和/或动物使用而没有与合理的效/险比相称的不利副作用(例如毒性、刺激性和过敏反应)的组分。

“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的且具有所需药理学性质的盐。这样的盐包括可以在化合物中存在的酸性质子能够与无机碱或有机碱反应的情况下形成的那些盐。合适的无机盐包括与碱金属如钠、钾、镁、钙和铝形成的那些无机盐。合适的有机盐包括与有机碱形成的那些有机盐，这些有机碱例如为胺碱，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等等。这样的盐还包括与无机酸(例如盐酸和氢溴酸)和有机酸(例如乙酸、柠檬酸、马来酸以及烷烃磺酸和芳烃磺酸如甲磺酸和苯磺酸)形成的酸加成盐。当存在两个酸性基团时，药学上可接受的盐可以是单酸单盐或二盐；类似地，在存在多于两个酸性基团的情况下，这样的基团中的一些或全部可以转化成盐。

“药学上可接受的赋形剂”是指常规上可用于制备药物组合物的赋形剂，这种赋形剂通常安全、无毒且合乎需要，并且包括可为兽医学用途以及人医药用途所接受的赋形剂。此类赋形剂可以是固体、液体、半固体，或者在气雾剂组合物的情况下，可以是气体。

“药学上可接受的载体”是用于将公开的化合物递送到患者的载体，例如溶剂、悬浮剂或媒剂。载体可以是液体或固体，并根据计划的施用方式进行选择。脂质体也是药物载体。如本文所用，“载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、媒剂、包衣、稀释剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂、缓冲剂、载体溶液、悬浮液、胶体等等。这样的介质和试剂针对药物活性物质的用途在本领域中为熟知的。除了任何常规的介质或试剂与活性成分不相容之外，还预期其在治疗组合物中使用。

本文所用的术语“治疗有效量”是指诱发由研究人员、兽医、医生或其他临床医师所研究的组织、***、动物或人中的生物或医学反应的活性化合物或药剂的量。关于癌症或其他不想要的细胞增殖，有效量包括足以引起肿瘤缩小和/或减小肿瘤生长速率(例如抑制肿瘤生长)或预防或延迟其他不想要的细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足以延迟发育的量。在一些实施方案中，有效量是足以预防或延迟发生和/或复发的量。有效量可以用一次剂量或多次剂量进行施用。在癌症的情况下，药物或组合物的有效量可以：(i)降低癌细胞的数量；(ii)降低肿瘤大小；(iii)抑制、减慢、在一定程度上延缓并优选停止癌细胞浸润到周围器官中；(iv)抑制(即，在一定程度上延缓并且优选停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上减轻与癌症相关的症状中的一种或多种。

本文所述的用于治疗哺乳动物受试者的化合物或组合物的有效量可以包括约0.1至约1000mg/Kg受试者的体重/天，例如约1至约100mg/Kg/天，特别是约10至约100mg/Kg/天。这些剂量可以是急性的或慢性的。据信，广泛范围的所公开组合物剂量是安全且有效的。

现在将详细参考公开的材料、化合物、组合物、物品和方法的特定方面，其实例在随附的实施例中说明。

化合物

已经发现ACK1使Tyr176处的AKT直接磷酸化，导致AKT膜定位和活化。在***癌细胞中，ACK1以雄性激素非依赖性方式使Tyr-267处的AR磷酸化。此外，Tyr284-磷酸化-ACK1、Tyr176-磷酸化-AKT和Tyr267-磷酸化-AR的水平与疾病进展的严重程度正相关，并且与***癌患者的生存率负相关。类似地，发现ACK1介导的AKT酪氨酸磷酸化与乳腺癌进展正相关。

另外，已经发现ACK1的抑制剂，4-氨基-5，6-二芳基-呋喃并[2，3-d]嘧啶(AIM-100)不仅抑制ACK1活化，而且抑制pTyr267-AR磷酸化和AKT Tyr176-磷酸化，抑制AR和AKT活性。这些发现指示，ACK1是***癌进展的预后，且ACK1活性的抑制剂是治疗***癌的治疗剂。

ACK1抑制剂的集中化学文库通过支架-跳跃和基于片段结构的设计而开发。根据该文库，若干化合物被鉴定为能够以低浓度，并且在许多情况下以纳摩尔浓度，体外抑制ACK1。显示来自该文库的化合物在完整的癌细胞中抑制Tyr176处的AKT的磷酸化，是体内ACK1抑制的替代物。

因此，公开了作为ACK1酪氨酸激酶抑制剂的化合物。这些公开的化合物可以用于作为抗癌治疗剂的各种组合物中。

在某些实施方案中，公开的化合物具有如式I中所示的基于嘧啶的结构。

其中

n为1、2或3；

m为1、2、3、4或5，优选地，m为1或2；且

R¹为C₅-C₆环烷基、C₄-C₆杂环烷基、苯基或嘧啶基，它们中的任何一个都可以是未取代的或被R⁶取代；

R²各自独立地为Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、CH₂C(O)R⁵、C(O)NHR⁵，或未取代的或被R⁶取代的杂环烷基，其中

R⁵为C₁-C₆烷基、杂芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基，它们中的任何一个都可以是未取代的或被R⁶取代；且

R⁶为OH、Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、CO₂H、CO₂R⁵、OC(O)R⁵、(CH₂)_1-6CO₂H、C(O)(CH₂)_1-6CO₂H、(CH₂)_1-6CO₂R⁵、C(O)(CH₂)_1-6CO₂R⁵、OR⁵、C(O)R⁵、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、4-吗啉基、4-哌嗪基、1-哌啶基(piperidinyl)、4-哌啶基(piperadinyl)。

公开的化合物也可以以药学上可接受的盐的形式存在，并且此类盐的实例在本文中公开。

在某些实施方案中，R¹可以是含有至少一个氧或氮原子的C₄-C₆杂环烷基，其任选地被一个或多个R⁶基团取代。示例性的C₄-C₆杂环烷基包括呋喃基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、氧杂环庚烷基和呋喃并呋喃基。

在一些特定的实施例中，R¹可以是环戊基、环己基、呋喃基、四氢呋喃基、吡咯烷基、噁烷基，其任选地被C₁-C₆烷基取代。在一些其他的特定实施例中，R¹可以是任选被卤素取代的苯基。

在一些实施例中，R²可以是未取代的或被R⁶取代(如被甲基取代)的4-吗啉基、4-哌嗪基、1-哌啶基或4-哌啶基。在一个优选的实施例中，R²可以是N-甲基哌嗪基。在具有这些式的其他实施例中，m可以是1且R²在对位，或者m是2且R²各自在对位和间位。

本文提供式II的化合物

其中：

n为1、2或3；

m为1、2、3、4或5，优选地，m为1或2；

a为1、2或3；

b为0、1或2；

R²各自独立地为Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、CH₂C(O)R⁵、C(O)NHR⁵，或未取代的或被R⁶取代的杂环烷基；

R⁶在存在时独立地为OH、Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、CO₂H、CO₂R⁵、OC(O)R⁵、(CH₂)_1-6CO₂H、C(O)(CH₂)_1-6CO₂H、(CH₂)_1-6CO₂R⁵、C(O)(CH₂)_1-6CO₂R⁵、OR⁵、C(O)R⁵、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、4-吗啉基、4-哌嗪基、1-哌啶基、4-哌啶基；且

R⁵在存在时为C₁-C₆烷基、杂芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基，它们中的任何一个都可以是未取代的或被R⁶取代；

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供式IIa的对映体化合物：

其中n、m、a、b、R²和R⁶具有对于式II的化合物或其药学上可接受的盐给出的含义。式IIa的化合物可以以至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％的对映异构体过量提供。

在式II和IIa的化合物的某些优选的实施方案中，a为1，b为0，n为1，m为1，R²在对位，或者m为2，R²(可以相同或不同)在间位或对位。

在另外的实施例中，公开了具有式III的化合物：

其中

n为1、2或3；

R^2’为H、Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、CH₂C(O)R⁵、C(O)NHR⁵，或未取代的或被R⁶取代的杂环烷基，其中

R⁶为OH、Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、CO₂H、CO₂R⁵、OC(O)R⁵、(CH₂)_1-6CO₂H、C(O)(CH₂)_1-6CO₂H、(CH₂)_1-6CO₂R⁵、C(O)(CH₂)_1-6CO₂R⁵、OR⁵、C(O)R⁵、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、4-吗啉基、4-哌嗪基、1-哌啶基、4-哌啶基。

在一些特定的实施例中，R^2′可以是H或OMe。

根据本公开的合适化合物提供在表1中。

方法

本文进一步提供治疗或预防受试者中的癌症的方法，其包括向受试者施用有效量的如本文所公开的化合物或组合物。该方法可以进一步包括施用第二化合物或组合物，例如抗癌剂或抗炎剂。另外，该方法可以进一步包括向受试者施用有效量的电离辐射。

本文还提供了杀死肿瘤细胞的方法。这些方法包括使肿瘤细胞与有效量的如本文所公开的化合物或组合物接触。这些方法可以进一步包括向受试者施用第二化合物或组合物(例如抗癌剂或抗炎剂)或施用有效量的电离辐射。

本文还提供了肿瘤放射疗法的方法，包括使肿瘤与有效量的如本文所公开的化合物或组合物接触，以及用有效量的电离辐射照射肿瘤。

还公开了用于治疗患者的肿瘤病症的方法。在一个实施方案中，将有效量的一种或多种本文公开的化合物或组合物施用到患有肿瘤病症并需要治疗的患者。公开的方法可以任选地包括鉴定正需要或者可能需要***病症的患者。患者可以是人或其他哺乳动物，例如灵长类动物(猴、黑猩猩、猿等)、犬、猫、牛、猪或马，或具有肿瘤病症的其他动物。肿瘤疾病包括但不限于癌症和/或以下部位的肿瘤：***、胆管、膀胱、骨、骨髓、肠(包括结肠和直肠)、***、眼睛、胆囊、肾、口腔、喉、食道、胃、睾丸、子宫颈、头、颈、卵巢、肺、间皮瘤、神经内分泌、***、皮肤、脊髓、甲状腺、***、外阴、子宫、肝脏、肌肉、胰腺、***、血细胞(包括淋巴细胞和其他免疫***细胞)和脑。预期用于治疗的特定癌症包括癌、卡波希氏肉瘤(Karposi’s sarcoma)、黑素瘤、间皮瘤、软组织肉瘤、胰腺癌、肺癌、白血病(急性淋巴细胞性、急性骨髓性、慢性淋巴细胞性、慢性髓细胞性和其他)和淋巴瘤(霍奇金病(Hodgkin’s)淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)，以及多发性骨髓瘤。

可以根据本文公开的方法治疗的癌症的其他实例是肾上腺皮质癌、肾上腺皮质癌、小脑星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤、乳腺癌、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、类癌瘤、中枢神经***淋巴瘤、***、慢性骨髓增殖性病症、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、生殖细胞瘤、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞(肝)癌、下咽癌、下丘脑和视觉通路神经胶质瘤、眼内黑色素瘤、成视网膜细胞瘤、胰岛细胞癌(内分泌胰腺)、喉癌、嘴唇和口腔癌、肝癌、髓母细胞瘤、梅克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)、具有隐匿性蕈样肉芽肿的鳞状颈癌、骨髓增生异常综合征、髓细胞性白血病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、***癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体瘤、浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、***癌、直肠癌、肾细胞(肾)癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤因肉瘤(Ewing’s sarcoma)、软组织肉瘤、赛匝瑞综合征(Sezary syndrome)、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、滋养细胞肿瘤、尿道癌、子宫癌、***癌、外阴癌、瓦尔登斯特姆氏巨球蛋白血症(macroglobulinemia)和维尔姆斯氏瘤(Wilms’tumor)。

在一些方面，公开了通过向受试者施用至少一种如本文公开的化合物或组合物和至少一种癌症免疫治疗剂的组合来治疗受试者中的肿瘤或肿瘤转移的方法。公开的化合物可以单独施用或与癌症免疫治疗剂组合施用。受试者可以在手术干预以除去全部或部分肿瘤之前，期间或之后接受治疗组合物。施用可以通过直接浸渍；全身或局部静脉内(i.v.)；腹膜内(i.p.)；皮下(s.c.)；肌肉内(i.m.)或直接注射到肿瘤块中；和/或通过口服施用适当的制剂来完成。

适用于本文公开的方法的癌症免疫治疗剂是如下免疫治疗剂，其包含与肿瘤相关抗原靶向组分接合的细胞效应子组分。合适的细胞效应子组分可以包括细胞毒性化学物质、细胞毒性放射性同位素和细胞信号传导剂如细胞因子。合适的肿瘤靶向组分是多肽链，其与肿瘤细胞的周围组织基质上或肿瘤细胞的周围组织基质中存在的肿瘤相关抗原如受体蛋白质链或免疫球蛋白链结合。

可以用于免疫治疗剂的靶标的肿瘤相关抗原包括选自AFP、CA125、CEA、CD19、CD20、CD44、CD45、EGF受体、GD[2]、GD[3]、GM1、GM2、Her-2/Neu、Ep-CAM(KSA)、IL-2受体、Lewis-Y、Lewis-X(CD 15)、黑素瘤相关蛋白多糖MCSP、PSA和转铁蛋白受体的肿瘤相关抗原。

免疫治疗剂的实例具有效应子组分，该效应子组分是与作为免疫球蛋白(Ig)多肽链的靶向组分接合的细胞因子多肽。Ig多肽链包含与肿瘤相关抗原结合的可变区。优选的是，所述免疫球蛋白链在与适当的互补链组合(即，重链与轻链互补)时定义了对肿瘤相关抗原具有特异性的抗体活性位点。

免疫治疗剂的肿瘤靶向Ig部分可以包含完整的免疫球蛋白链氨基酸序列，或者其片段至少包含蛋白质的抗原结合特异性部分。因此，合适的Ig多肽链将具有对肿瘤相关抗原具有特异性的至少一个Ig可变区。

适用于公开的方法的抗体及其多肽链将具有可以是任何哺乳动物来源的氨基酸序列。在这种抗体蛋白具有与预期患者不同的起源的情况下，可以使用抗体蛋白的片段，例如F(ab′)2、Fab、Fv或工程化的Fv单链抗体蛋白。为了进一步降低抗体蛋白质的抗原性，可以通过使蛋白质看起来更像患者正常抗体组分来完成对抗体氨基酸序列的修饰以降低抗体蛋白质的抗原性。例如，可以修饰单克隆鼠抗体氨基酸序列以看起来更像人抗体氨基酸序列，以便通过使抗体人源化的多种方法施用到人类患者。

癌症免疫治疗剂的特定实例包括特异性结合CLTA-4的抗体，例如易普利姆玛(ipilimumab)(Bristol-Myers Squibb)、抗PD-1、抗PDL1。其他免疫治疗剂包括TNFα拮抗剂(例如依那西普(etanercept))、B细胞耗竭剂利妥昔单抗(rituximab)、抗IL-6受体托珠单抗(tocilizumab)和共刺激阻断剂阿巴西普(abatacept)，它们可以与本文公开的化合物或组合物一起施用。

公开的化合物也可以与toll样受体(TLR)激动剂一起施用。TLR激动剂是选自TLR1、TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的TLR的配体。例如，TLR激动剂可以是选自Pam3CSK4、Pam3CSK4、poly I：C、Ribomunyl和CpG ODN的配体。

公开的化合物还可以与血管生成抑制剂一起施用，该血管生成抑制剂可以抑制新血管的形成(新生血管形成)或扩大现有毛细血管网络进入肿瘤细胞附近的组织。合适的血管生成抑制剂可以是具有血管生成抑制活性的肽，例如肿瘤相关抗原PSA。其他合适的血管生成抑制剂可以是VEGF相关血管生成的拮抗剂，例如细胞表面上VEGF受体的拮抗剂。一种可以使用的单克隆抗体是LM609(ATCC HB 9537)。

施用

公开的化合物可以以分开的或组合的药物制剂顺序或同时施用。当公开的化合物中的一种或多种与第二治疗剂组合使用时，每种化合物的剂量可以与化合物在单独使用时的剂量相同或不同。适当的剂量将被本领域的普通技术人员容易地理解。

关于如本文所述的化合物，术语“施用”及其变体(例如“施用”化合物)是指将化合物或化合物的前药引入需要治疗的动物的***中。当如本文所述的化合物或其前药与一种或多种其他活性剂(例如，细胞毒性剂等)组合提供时，“施用”及其变体各自被理解为包括同时和顺序地引入该化合物或其前药以及其他试剂。

公开的化合物和含有其的组合物的体内应用可以通过本领域技术人员目前或前瞻性已知的任何合适的方法和技术来实现。例如，公开的化合物可以以生理上或药学上可接受的形式配制，并通过包括例如口服、鼻腔、直肠、局部和肠胃外施用路径的本领域已知的任何合适的路径施用。如本文所用，术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、腹膜内和胸骨内施用，例如通过注射施用。公开的化合物或组合物的施用可以是单次施用，或者可以以如本领域技术人员可以容易地确定的连续或不同的间隔进行。

本文公开的化合物和包含其的组合物也可以利用脂质体技术、缓释胶囊、可植入泵和生物可降解的容器施用。这些递送方法可以有利地在延长的时间内提供均匀的剂量。化合物还可以以其盐衍生物形式或结晶形式施用。

本文公开的化合物可以根据用于制备药学上可接受的组合物的已知方法配制。在本领域技术人员熟知且容易获得的许多来源中详细地描述了制剂。例如，E.W.Martin(1995)的Remington′s Pharmaceutical Science描述了可以与公开的方法结合使用的制剂。通常，可以配制本文公开的化合物，使得有效量的化合物与合适的载体组合以促进化合物的有效施用。使用的组合物也可以以各种形式。这些包括例如固体、半固体和液体剂型，例如片剂、丸剂、粉剂、液体溶液或悬浮液、栓剂、注射液和输注液以及喷雾剂。优选的形式取决于施用和治疗应用的预期模式。组合物还优选包含本领域技术人员已知的常规药学上可接受的载体和稀释剂。与化合物一起使用的载体或稀释剂的实例包括乙醇、二甲亚砜、甘油、氧化铝、淀粉、盐水以及等效的载体和稀释剂。为了提供用于期望的治疗性处理的这种剂量的施用，本文公开的组合物可以有利地包含基于包含载体或稀释剂的总组合物的重量计总量为约0.1重量％至99重量％且特别地1重量％至15重量％的一种或多种主题化合物。

适合施用的制剂包括例如无菌注射水溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包含悬浮剂和增稠剂。这些制剂可以以单位剂量或多剂量容器(例如密封的安瓿和小瓶)存在，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下储存，其使用之前仅需要例如注射用水的无菌液体载体的条件。临时注射溶液和悬浮液可以由无菌粉剂、颗粒剂、片剂等制备。应该理解，除了上面特别提到的成分之外，本文公开的组合物还可以包含关于所讨论的制剂类型的领域中常规的其他试剂。

本文公开的化合物和包含其的组合物可以通过与细胞直接接触或通过载体方式递送到细胞。用于将化合物和组合物递送到细胞的载体方式在本领域中已知的，并且包括例如将组合物包封在脂质体部分中。将本文公开的化合物和组合物递送到细胞的另一方式包括将化合物附接到所靶向的蛋白质或核酸以递送至靶细胞。美国专利6,960,648和美国申请公告2003/0032594和2002/0120100公开了可以与另一组合物偶联并且允许组合物跨生物膜易位的氨基酸序列。美国申请公告2002/0035243号还描述了用于跨细胞膜转运生物学部分以便细胞内递送的组合物。也可以将化合物掺入聚合物中，聚合物的实例包括用于颅内肿瘤的聚(D-L丙交酯-共-乙交酯)聚合物；摩尔比为20∶80的聚[双(对-羧基苯氧基)丙烷∶癸二酸](如在GLIADEL中所用)；软骨素；甲壳素；和壳聚糖。

为了***病症，可以将本文公开的化合物与其他抗肿瘤或抗癌物质和/或辐射和/或光动力疗法和/或手术治疗组合施用到需要治疗的患者以除去肿瘤。这些其他物质或治疗可以在与本文公开的化合物相同或不同的时间给予。例如，本文公开的化合物分别可以与以下试剂组合使用：有丝***抑制剂，例如紫杉醇或长春碱；烷化剂，例如环磷酰胺或异环磷酰胺；抗代谢剂，例如5-氟尿嘧啶或羟基脲；DNA嵌入剂，例如阿霉素(adriamycin)或博莱霉素(bleomycin)；拓扑异构酶抑制剂，例如依托泊苷(etoposide)或喜树碱(camptothecin)；抗血管生成剂，例如血管抑制素；抗***剂，例如他莫昔芬(tamoxifen)；和/或其他抗癌药物或抗体，例如GLEEVEC(Novartis PharmaceuticalsCorporation)和HERCEPTIN(Genentech，Inc.)。

许多肿瘤和癌症具有在肿瘤或癌细胞中存在的病毒基因组。例如，爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr Virus)(EBV)与许多哺乳动物恶性肿瘤相关。本文公开的化合物还可以单独使用或与例如更昔洛韦(ganciclovir)、叠氮胸苷(azidothymidine)(AZT)、拉米夫定(lamivudine)(3TC)等抗癌或抗病毒剂组合使用以治疗感染了可能导致细胞转化的病毒的患者和/或治疗患有与细胞中病毒基因组的存在相关的肿瘤或癌症的患者。本文公开的化合物还可以与肿瘤疾病的基于病毒的治疗组合使用。例如，化合物可以与突变型单纯疱疹病毒一起用于治疗非小细胞肺癌(Toyoizumi等，“Combined therapy withchemotherapeutic agents and herpes simplex virus type IICP34.5 mutant(HSV-1716)in human non-small cell lung cancer，”Human Gene Therapy，1999，10(18)：17)。

化合物和/或包含其的组合物的治疗应用可以通过本领域技术人员目前或前瞻性已知的任何合适的治疗方法和技术来完成。另外，本文公开的化合物和组合物用作制备其他有用的化合物和组合物的原料或中间体。

本文公开的化合物和组合物可以在一个或多个解剖部位如不想要的细胞生长的部位(例如肿瘤部位或良性皮肤生长，例如注射或局部应用到肿瘤或皮肤生长)任选地与药学上可接受的载体如惰性稀释剂组合而局部施用。本文公开的化合物和组合物可以全身施用，例如静脉内或口服施用，其任选地与药学上可接受的载体如惰性稀释剂或用于口服递送的可同化的可食用载体组合施用。它们可以封闭在硬壳或软壳明胶胶囊中，可以压制成片剂，或者可以直接掺入患者饮食的食物中。对于口服治疗施用，活性化合物可以与一种或多种赋形剂组合，并且以可摄取片剂、口腔片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂、气溶胶喷雾剂等等的形式使用。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等等也可以含有以下物质：粘合剂，例如黄蓍胶、***胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等等；润滑剂，例如硬脂酸镁；和甜味剂，例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或者可以添加调味剂，例如胡椒薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊剂时，除了上述类型的材料之外，其还可以含有液体载体，例如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可以作为包衣存在或以其他方式改变固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊剂可以用明胶、蜡、紫胶或糖等等包衣。糖浆剂或酏剂可以含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂如樱桃或橙风味剂。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料都应该是药学上可接受的并且在所采用的量下实质上无毒。此外，活性化合物可以掺入缓释制剂和装置中。

本文公开的化合物和组合物，包括其药学上可接受的盐、水合物或类似物，可通过输注或注射静脉内、肌肉内或腹膜内施用。活性剂或其盐的溶液可以在水中任选与无毒表面活性剂混合制备。还可以在甘油、液体聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中以及在油中制备分散液。在普通的储存和使用条件下，这些制剂可以含有防腐剂以防止微生物的生长。

适合注射或输注的药物剂型可以包括无菌水溶液或分散液或任选地包封在脂质体中的适于临时制备无菌可注射或可输注的溶液或分散液的包含活性成分的无菌粉剂。在制造和储存的条件下，最终的剂型应该是无菌的，流动的且稳定的。液态载体或媒介物可为溶剂或液态分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其适合的混合物。适当的流动性可以例如通过形成脂质体、在分散液的情况下维持所需粒度或使用表面活性剂加以维持。任选地，微生物作用的预防可以通过各种其他抗菌剂和抗真菌剂如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等等实现。在许多情况下，将优选的是包含等渗剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶来实现。

无菌可注射溶液通过将需要量的本文公开的化合物和/或试剂与上面列举的各种其他成分(根据需要)一起掺入适当的溶剂中，接着过滤除菌来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这些技术产生活性成分外加存在于先前无菌过滤的溶液中的任何另外的期望成分的粉末。

对于局部施用，本文公开的化合物和试剂可以作为液体或固体应用。然而，通常希望它们作为组合物与可以是固体或液体的皮肤病学上可接受的载体组合局部施用到皮肤上。本文公开的化合物和试剂以及组合物可以局部应用到受试者的皮肤以减小恶性或良性生长的大小(并且可以包括完全移除)，或治疗感染部位。本文公开的化合物和试剂可以直接应用于生长或感染部位。优选地，将化合物和试剂以例如软膏、乳膏、洗剂、溶液剂、酊剂等制剂应用到生长或感染部位。也可以使用用于将药理物质递送到真皮损伤处的药物递送***，例如美国专利5,167,649中所描述。

可用的固体载体包括微细分散的固体，例如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等等。可用的液体载体包括水、醇或二醇或水-醇/二醇共混物，其中化合物可以任选地借助于无毒的表面活性剂以有效含量溶解或分散。可以添加例如芳香剂及另外的抗微生物剂的佐剂以对于给定用途优化性质。所得液体组合物可以从用于浸渍绷带和其他敷料的吸收垫应用，或者例如使用泵型或气溶胶喷雾器喷雾到受影响的区域。

例如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质的增稠剂也可以与液态载体一起采用，以形成用于直接应用到使用者的皮肤的可涂敷糊剂、凝胶剂、软膏剂、皂剂等等。可以用于将化合物递送到皮肤的可用的皮肤病学组合物的实例公开在美国专利4,608,392；美国专利4,992,478；美国专利4,559,157；和美国专利号4,820,508中。

本文公开的化合物和试剂以及药物组合物的可用剂量可以通过比较它们的体外活性与动物模型中的体内活性来确定。用于将在小鼠和其他动物中的有效剂量外推至人的方法在本领域中是已知的；例如参见美国专利4,938,949。

还公开了包含本文公开的化合物以及药学上可接受的载体的药物组合物。包含一定量的化合物的适于口服、局部或肠胃外施用的药物组合物构成一个优选的方面。施用到患者，特别是人的剂量应该足以在合理的时间框架内实现患者的治疗反应，而没有致死毒性，并且优选不会引起超过可接受水平的副作用或发病率。本领域技术人员将认识到，剂量将取决于各种因素，包括受试者的状况(健康)、受试者的体重、同时治疗的种类(如果有的话)、治疗的频率、治疗比率以及病理状况的严重程度和阶段。

为了***病症，可以在其他抗肿瘤剂或抗癌剂或物质(例如化疗剂、免疫治疗剂、放射治疗剂、细胞毒性剂等)和/或放射疗法和/或手术治疗以除去肿瘤之前，在其之后或与其组合对需要治疗的患者施用本文公开的化合物和试剂以及组合物。例如，本文公开的化合物和试剂以及组合物可以用于治疗癌症的方法中，其中患者有待用或正用或已经用以下试剂治疗：有丝***抑制剂，例如紫杉醇或长春碱；烷化剂，例如环磷酰胺或异环磷酰胺；抗代谢剂，例如5-氟尿嘧啶或羟基脲；DNA嵌入剂，例如阿霉素或博莱霉素；拓扑异构酶抑制剂，例如依托泊苷或喜树碱；抗血管生成剂，例如血管抑制素；抗***剂，例如他莫昔芬；和/或其他抗癌药物或抗体，例如GLEEVEC(Novartis Pharmaceuticals Corporation；East Hanover，NJ)和HERCEPTIN(Genentech，Inc.；South San Francisco，CA)。这些其他物质或放射治疗可以在与本文公开的化合物相同或不同的时间给予。其他合适的化学治疗剂的实例包括但不限于六甲蜜胺(altretamine)、博来霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)(VELCADE)、硫酸巴比妥(busulphan)、亚叶酸钙、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克立他酶(crisantaspase)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、柔红霉素(dactinomycin)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺、伊马替尼(imatinib)(GLEEVEC)、伊立替康(irinotecan)、脂质体多柔比星(doxorubicin)、洛莫司汀(lomustine)、美法仑(melphalan)、巯嘌呤(mercaptopurine)、甲氨喋呤(methotrexate)、丝裂霉素、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇、喷司他丁(pentostatin)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷替曲塞(raltitrexed)、链佐星(streptozocin)、替加氟尿嘧啶(tegafur-uracil)、替莫唑胺(temozolomide)、噻替派(thiotepa)、硫鸟嘌呤(tioguanine)/硫鸟嘌呤(thioguanine)、拓扑替康(topotecan)、曲奥舒凡(treosulfan)、长春碱、长春新碱、长春地辛(vincristine)、长春瑞滨(vindesine)。在一个示例性实施方案中，化学治疗剂是美法仑。合适的免疫治疗剂的实例包括但不限于阿仑单抗(alemtuzumab)、西妥昔单抗(cetuximab)(ERBITUX)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、碘131托西莫单抗(tositumomab)、利妥昔单抗(rituximab)、曲妥珠单抗(trastuzamab)(HERCEPTIN)。细胞毒性剂包括例如放射性同位素(例如I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、P³²等)和细菌、真菌、植物或动物来源的毒素(例如，蓖麻毒素、肉毒杆菌毒素、炭疽毒素、黄曲霉毒素、水母毒素(例如，箱型水母等)。还公开了用于***病症的方法，其包括在施用化疗剂、免疫治疗剂、放射治疗剂或放射疗法之前，在其之后和/或与其组合施用有效量的本文公开的化合物和/或试剂。

试剂盒

进一步提供了用于实践本文所述的方法的试剂盒。“试剂盒”是指包含至少一种试剂如表1中所述的化合物中的任一种的任何制造品(例如，包装或容器)。试剂盒可以作为一个单元进行被推广、分销或出售，以执行本文所述的方法。另外，试剂盒可以包含描述试剂盒及其使用方法的包装说明书。任何或所有的试剂盒试剂都可以提供在保护它们免受外部环境影响的容器内，例如在密封的容器或小袋中。

为了提供用于期望的治疗性处理的这种剂量的施用，在一些实施方案中，本文公开的药物组合物可以包含基于包含载体和稀释剂的总组合物的重量计总量为约0.1重量％至45重量％且特别是1重量％至15重量％的一种或多种所述化合物。说明性地，施用的活性成分的剂量水平可以是：静脉内，0.01mg/kg至约20mg/kg；腹膜内，0.01mg/kg至约100mg/kg；皮下，0.01mg/kg至约100mg/kg；肌肉内，0.01mg/kg至约100mg/kg；口服，0.01mg/kg至约200mg/kg，且优选地约1mg/kg至100mg/kg；鼻内滴注，0.01mg/kg至约20mg/kg；和气雾剂，0.01mg/kg至约20mg/kg动物(身体)重量。

本发明还公开了包括包含在一个或多个容器中的本文公开的化合物的组合物的试剂盒。公开的试剂盒可以任选地包含药学上可接受的载体和/或稀释剂。在一个实施方案中，试剂盒包含一种或多种如本文所述的其他组分、助剂或佐剂。在另一个实施方案中，试剂盒包含一种或多种抗癌剂，例如本文所述的那些试剂。在一个实施方案中，试剂盒包括描述如何施用试剂盒的化合物或组合物的说明书或包装材料。试剂盒的容器可以具有任何合适的材料，例如玻璃、塑料、金属等，并且具有任何合适的尺寸、形状或构造。在一个实施方案中，本文公开的化合物和/或试剂作为固体如片剂、丸剂或粉剂形式提供于试剂盒中。在另一个实施方案中，本文公开的化合物和/或试剂作为液体或溶液提供在试剂盒中。在一个实施方案中，试剂盒包括含有以液体或溶液形式的本文公开的化合物和/或试剂的安瓿或注射器。

筛选方法

本文还公开了鉴定推定的抗癌化合物的方法，其包括使ACK1酪氨酸激酶与靶标化合物接触，和确定化合物是否以DFG-out构造结合激酶，其中鉴定结合DFG-out构造的化合物为推定的抗癌化合物。

实施例

提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供本文所要求的化合物、组合物、制品、设备和/或方法如何制备和评价的完整公开和描述，并且不意图限制本发明人所认定的发明范围。已经努力确保关于数字(例如量、温度等)的准确性，但应该考虑到一些误差和偏差。除非另外指出，否则份数是重量份，温度是以℃计或者处于环境温度，压力是处于大气压或接近大气压。

ACK1：活化的CDC42相关激酶1；DMF：二甲基甲酰胺；DMSO：二甲亚砜；DCM：二氯甲烷；ELISA：酶联免疫吸附测定；ESI：电喷雾电离；HRMS：高分辨率质谱：HPLC：高效液相色谱；HCL：盐酸；LC-MS：液相色谱质谱；mCPBA：间氯苯氧基苯甲酸；SAR：结构活性关系；TFA：三氟乙酸；THF：四氢呋喃。

化合物合成

本文公开的化合物可以通过以下路径制备：

例如，化合物可以通过WO2015/021149中公开的路径来制备，其合成技术和表征测定通过引用并入本文。

中间体1

2，5-二氯-N-(呋喃-2-基甲基)嘧啶-4-胺(Int-1)：在氩气下在0℃下向呋喃-2-基甲胺(0.477g，4.907mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Et₃N(0.76mL，5.453mmol)。在0℃下搅拌反应混合物10分钟，接着缓慢添加在MeOH中的2，4，5-三氯嘧啶(1.000g，5.453mmol)。在添加之后使反应混合物升温至室温并搅拌2小时。除去溶剂，并且将所得残余物用EtOAc(50mL)稀释并用水(25mL)洗涤，随后用盐水(20mL)洗涤。将有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。粗制物质通过SiO₂快速色谱法纯化，以获得呈白色固体的标题化合物(0.951g，72％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.05(s，1H)，7.40(t，J＝0.8Hz，1H)，6.36-6.34(m，2H)，5.81(brs，1H)，4.70(d，J＝5.6Hz，2H)；LC-MS(ESI+)m/z 244.1(M+H)⁺。

中间体2

2-(((2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int-2)：除了使用2-(氨基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.037g，5.180mmol)之外，使用对于Int-1描述的程序合成该化合物。粗制物质黄色油状物(1.765g，98％)不经纯化即用于下一步。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.06(brs，1H)，7.97(s，1H)，4.26(appt，J＝9.6Hz，1H)，3.57-3.52(m，1H)，3.41-3.33(m，3H)，2.10-2.03(m，1H)，1.96-1.88(m，2H)，1.78-1.71(m，2H，与水重叠)，1.47(s，9H)；LC-MS(ESI+)m/z 347.2(M+H)⁺。

中间体3

2-(((2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基)甲基)-5-甲基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(Int-3)：除了使用(5-甲基呋喃-2-基)甲胺(0.576g，5.180mmol)之外，使用对于Int-1描述的程序合成该化合物。粗制物质用DCM/己烷湿磨，以提供呈白色固体的标题化合物。(1.11g，85％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.06(s，1H)，6.22(d，J＝2.8Hz，1H)，5.93-5.92(m，1H)，5.85(brs，1H)，4.64(d，J＝5.2Hz，2H)，2.28(s，3H)；LC-MS(ESI+)m/z 258.1(M+H)⁺。

中间体4

2，5-二氯-N-((四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)嘧啶-4-胺(Int-4)：除了使用(四氢-2H-吡喃-2-基)甲胺(0.525g，4.558mmol)之外，使用对于Int-1描述的程序合成该化合物，以提供呈白色固体的标题化合物(0.923g，77％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.01(s，1H)，6.00(s，1H)，4.04-4.00(m，1H)，3.80(ddd，J＝13.6，6.8，2.8Hz，1H)，3.53-3.43(m，1H)，3.28(ddd，J＝13.6，8.4，3.6Hz，1H)，1.89-1.85(m，1H)，1.66-1.47(m，4H，与水的峰重叠)，1.39-1.30(m，1H)；LC-MS(ESI+)m/z 262.1(M+H)⁺。

中间体5

2，5-二氯-N-(环戊基甲基)嘧啶-4-胺(Int-5)：除了使用环戊基甲胺(0.186g，1.879mmol)之外，使用对于Int-1描述的程序合成该化合物，以提供呈无色油状物的标题化合物(0.337g，73％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.00(s，1H)，5.49(s，1H)，3.45(dd，J＝7.2，5.6Hz，2H)，2.22-2.14(m，1H)，1.86-1.78(m，2H)，1.68-1.57(m，4H)，1.31-1.23(m，2H)；LC-MS(ESI+)m/z 246.2(M+H)⁺。

中间体6

2，5-二氯-N-(吡咯烷-2-基甲基)嘧啶-4-胺二盐酸盐：将Int-2(0.500g，1.441mmol)和在二噁烷中的4M HCl(4mL)的混合物在室温下搅拌30分钟。除去溶剂，并将所得残余物在DCM/Hex中湿磨并超声处理。倾析出溶剂。将固体在高真空下干燥，以提供呈白色固体的Int-6(0.370g，80％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.16(s，1H)，3.84-3.75(m，3H)，2.23-2.19(m，1H)，2.14-2.02(m，2H)，1.88-1.79(m，1H)；LC-MS(ESI+)m/z 247.1(M+H)⁺。

2，5-二氯-N-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)嘧啶-4-胺(Int-6)：向2，5-二氯-N-(吡咯烷-2-基甲基)嘧啶-4-胺二盐酸盐(0.160g，0.5mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中添加Et₃N(0.223mL，1.6mmol)，接着添加CH₃I(0.078g，0.55mmol)。在室温下搅拌反应混合物4小时。除去溶剂，且向所得残余物中添加水(2mL)，并用DCM(5mL×6)萃取，直至产物被从水相中完全提取出来。将合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干燥。粗制物质通过SiO₂快速色谱法(梯度：在DCM中的0-5％MeOH)纯化，以提供呈浅黄色粘性发泡固体的标题化合物(0.11g，84％，含有一些Et₃N HCl盐)。其不经进一步纯化即用于下一步。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ10.20(brs，1H)，8.11(s，1H)，4.17-4.09(m，1H)，4.01-3.84(m，3H)，2.90-2.82(m，1H)，2.80(s，3H)，2.45-2.36(m，1H)，2.29-2.15(m，2H)，2.01-1.95(m，1H)；LC-MS(ESI+)m/z261.1(M+H)⁺。

中间体7

2，5-二氯-N-苯乙基嘧啶-4-胺(Int-7)：在氩气下在0℃下向苯乙胺(0.628g，5.180mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Et₃N(0.76mL，5.453mmol)。在0℃下搅拌反应混合物10分钟，接着缓慢添加2，4，5-三氯嘧啶(1.000g，5.453mmol)在MeOH中的溶液。在添加之后使反应混合物升温至室温并搅拌2小时。除去溶剂，并且将所得残余物用EtOAc(50mL)稀释并用水(25mL)洗涤，随后用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，以获得呈橙色液体的标题化合物(1.290g，92.8％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.98(s，1H)，7.35-7.21(m，5H)，5.57(brs，1H)，3.80-3.75(m，2H)，2.95-2.92(t，J＝6.8Hz，2H)。

中间体8

2，5-二氯-N-(3-苯基丙基)嘧啶-4-胺(Int-8)：该化合物使用3-苯基丙胺(0.700g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈黄色液体的标题化合物(1.447g，99.0％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.98(s，1H)，7.32-7.19(m，5H)，5.48(s，1H)，3.58-3.53(m，2H)，2.74-2.71(t，J＝7.2Hz，2H)，2.04-1.96(m，2H)。

中间体9

2，5-二氯-N-(2，4-二氯苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-9)：该化合物使用2，4-二氯苯乙胺(0.984g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈橙色液体的标题化合物(1.483g，85％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.02(s，1H)，7.41(d，J＝2.0Hz，1H)，dd(7.20，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.12(s，1H)，7.15(s，1H)，5.58(s，1H)，3.81-3.76(m，2H)，3.08-3.04(t，J＝6.8Hz，2H)。

中间体10

2，5-二氯-N-(2，6-二氯苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-10)：该化合物使用2，6-二氯苯乙胺(0.984g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈橙色液体的标题化合物(1.097g，63％)。¹H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.83(brs，1H)，8.14(brt，J＝6.0Hz，1H，与单峰部分地重叠)，8.12(s，1H)，7.40(d，J＝8.0Hz，2H)，7.24(t，J＝8.0Hz，2H)，3.65-3.60(m，2H)，3.18-3.14(t，J＝6.8Hz，2H)。

中间体11

2，5-二氯-N-(2-氯苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-11该化合物使用2-氯苯乙胺(0.806g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈白色粉末的标题化合物(0.700g，45％)。¹H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.98(s，1H)，7.36-7.34(m，1H)，7.28-7.26(m，1H)，7.22-7.17(m，2H)，3.74(t，J＝6.8Hz，2H)，3.07(t，J＝8.0Hz，2H)。

中间体12

2，5-二氯-N-(2-氯-6-氟苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-12)：该化合物使用2-氟-6-氯苯乙胺(0.984g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈白色粉末的标题化合物(0.972g，59％)。¹H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.98(s，1H)，7.20-7.18(m，2H)，7.03-6.99(m，1H)，3.775(t，J＝6.8HZ，2H)，3.14(dt，J＝2.0Hz，6.4Hz，2H)。

中间体13

2，5-二氯-N-(2-氟苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-13)：该化合物使用2-氟苯乙胺(0.721g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈白色粉末的标题化合物(1.102g，74％)。¹H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.97(s，1H)，7.25-7.19(m，2H)，7.08-7.00(m，2H)，3.72(t，J＝6.8Hz，2H)，2.96(t，J＝6.8Hz，2H)。

中间体14

2，5-二氯-N-(2-甲氧基苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-14)：该化合物使用2-甲氧基苯乙胺(0.783g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈黄色粉末的标题化合物(1.350g，87％)。¹H NMR(400MHz，DMSO)：δ8.10(s，1H)，7.86(t，J＝5.6Hz，1H)，7.17(dt，J＝1.6Hz，7.6Hz，1H)，7.09(dd，J＝1.6Hz，7.2Hz，1H)，6.93(apptdd，J＝1.6Hz，7.2Hz，1H)，6.83(dt，J＝1.6Hz，7.6Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.57-3.62(m，2H)，2.852(t，J＝7.6Hz，2H)。

中间体15

2，5-二氯-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)嘧啶-4-胺(Int-15)：该化合物使用2-(2-吡啶基)乙胺(0.631g，5.180mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈白色固体的标题化合物(1.230g，88％)。¹H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.44(ddd，J＝0.8，1.6，4.8Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.73(td，J＝1.6Hz，7.6Hz，1H)，7.33(td，J＝0.8，8Hz，1H)，7.25(ddd，J＝1.2，4.8，7.6Hz)3.83(t，J＝7.2Hz，2H)，3.08(t，J＝6.8Hz，2H)。

中间体16

2，5-二氯-N-(2-甲基苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-16)：该化合物使用2-甲基苯乙胺(0.700g，5.179mmol)以与Int-7相同的方式制备，以提供呈黄色油状物的标题化合物(1.478g，96％)。该中间体不经进一步的纯化即可使用。¹H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.93(s，1H)，7.12-7.03(m，4H)，3.61-3.58(m，2H)，2.90-2.86(m，2H)，2.38(s，3H)。

中间体17

2，5-二氯-N-(2，6-二氯苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-17)：在0℃下向2，6-二氯苯乙胺(2.07g，10.9mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中缓慢添加三乙胺(1.52mL)。随后向混合物中添加2，4，5-三氯嘧啶(2.00g，10.9mmol)在MeOH(20mL)中的溶液。将混合物搅拌2.5小时且随后使用EtOAc和水分配。将水层从EtOAc中重新萃取。将有机层合并，并干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压浓缩。所得粗制油使用EtOH、EtOAc和己烷重新湿磨，以得到呈白色固体的标题化合物(1.508g，41％)。Mp：158-159℃。HPLC-MS(ESI+)：m/z 360.0[20％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+Na)⁺]，358.1[20％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl+Na)⁺]，338.0[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]，336.0[90％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，340.0[50％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl³⁷Cl+H)⁺]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.13(t，J＝6.5Hz，1H在D₂O振动上消失)，8.12(s，1H)，7.40(d，J＝8.0Hz，2H)，7.24(t，J＝8.0Hz，1H)，3.63(q，J＝6.5Hz，2H)，3.16(t，J＝6.5Hz，2H)。

中间体18

(R)-2，5-二氯-N-(1-苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-18)：将(R)-1-苯基乙-1-胺(1.32g，10.9mmol)、2，4，5-三氯嘧啶(2g，10.9mmol)和DIPEA在异丙醇(20mL)中的混合物搅拌并在80℃下加热(油浴)过夜，历时19小时。一旦从热中移出，则将反应物在减压下浓缩。将所得油状物溶解于EtOAc(50mL)中并用水(2×30mL)洗涤。随后将水层用EtOAc(2×30mL)萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，并减压浓缩。粗制油在室温下静置时凝固。添加己烷并从烧瓶中倾析出。随后，添加溶解固体的己烷/EtOAc(9∶1)。将烧瓶置于冰上以允许重结晶，提供呈淡褐色固体的标题化合物(1.071g，37％)。Mp：66-67℃。HPLC-MS(ESI+)：m/z 290.0[25％，(M³⁵Cl³⁵Cl+Na)⁺]，270.1[60％，(M³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，268.1[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.19(d，J＝8.1Hz，1H，在D₂O振动上消失)，8.16(s，1H)，7.38(d，J＝7.5Hz，2H)，7.31(t，J＝7.5Hz，2H)，7.21(t，J＝7.5Hz，1H)，5.28(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，1.52(d，J＝7.1Hz，3H)。

中间体19

(S)-2，5-二氯-N-(1-苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-19)：该化合物以与Int-18相同的方式由(S)-1-苯基乙-1-胺(1.32g，10.9mmol)制备。在处理之后，所得黄色油状物通过快速色谱法(SiO₂)用在EtOAc中的己烷(0-50％)洗脱来纯化，以提供呈灰白色结晶粉末的标题化合物(1.638g，56％)。Mp：66-67℃。HPLC-MS(ESI+)：m/z 290.0[25％，(M³⁵Cl³⁵Cl+Na)⁺]，270.1[60％，(M³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，268.1[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.19(d，J＝8.1Hz，1H，在D₂O振动上消失)，8.16(s，1H)，7.38(d，J＝7.4Hz，2H)，7.31(t，J＝7.4Hz，2H)，7.21(t，J＝7.2Hz，1H)，5.28(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，1.52(d，J＝7.1Hz，3H)。

实施例1

5-氯-N4-(呋喃-2-基甲基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-1)：将YL11-096(0.100g，0.410mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.086g，0.45mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.11mL，0.44mmol)在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的混合物密封在微波小瓶中并在110℃的油浴中加热18小时。在冷却时使用V-10蒸发器蒸发溶剂。将所得残余物溶解于饱和NaHCO₃(10mL)中并用氯仿(20mL×2)萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干燥。粗制固体用SiO₂快速色谱法纯化。所获得的物质用DCM/己烷湿磨，以提供呈白色固体的标题化合物(0.11g，67％)。HPLC 99.4％(t_R＝9.52分钟，在具有0.1％TFA的水中的30％CH₃OH，20分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.79(s，1H)，7.45-7.41(m，3H)，6.92(appd，J＝8.8Hz，2H)，6.31(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.18(dd，J＝3.2，0.8Hz，1H)，4.63(s，2H)，3.13(t，J＝5.2Hz，4H)，2.62(t，J＝5.2Hz，4H)，2.34(s，3H)；LC-MS(ESI+)m/z 200.2(M+2H)²⁺，399.2(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₀H₂₄ClN₆O(M+H)⁺的计算值398.1616，实验值398.1597。

实施例2

5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(吡咯烷-2-基甲基)嘧啶-2，4-二胺三-TFA盐(Ex-2)：除了使用在2-甲氧基乙-1-醇(3mL)中的Int-2(0.178g，0.515mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.093g，0.489mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.122mL，0.489mmol)之外，使用对于Ex-1描述的程序合成该化合物。粗制物质通过制备型HPLC(梯度：在具有0.1％TFA的水中的MeOH15-65％，30分钟)纯化，以提供呈浅紫色固体的标题化合物(0.098g，27％)。HPLC 96％(t_R＝12.97分钟，梯度：在具有0.1％TFA的水中的CH₃OH 15-65，30分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.95(s，1H)，7.39(d，J＝8.8Hz，2H)，7.11(d，J＝8.8Hz，2H)，3.90-3.71(m，6H)，3.63(d，J＝10.8Hz，2H)，3.28-3.25(m，3H)，3.09-3.03(m，2H)，2.98(s，3H)，2.16-1.97(m，3H)，1.85-1.75(m，1H)；LC-MS(ESI+)m/z 201.7(M+2H)²⁺，402.3(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₀H₂₉ClN₇(M+H)⁺的计算值402.2168，实验值402.2163。

实施例3

5-氯-N4-((5-甲基呋喃-2-基)甲基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-嘧啶-2，4-二胺(Ex-3)：除了使用在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的Int-3(0.065g，0.250mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.045g，0.237mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.063mL，0.250mmol)之外，使用对于Ex-1描述的程序合成该化合物，以提供呈白色固体的标题化合物(0.069g，70％)。HPLC 93％(t_R＝20.53分钟，在具有0.1％TFA的水中的30％CH₃OH，30分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.78(s，1H)，7.45(d，J＝9.2Hz，2H)，6.92(d，J＝9.2Hz，2H)，6.05(d，J＝3.2Hz，1H)，5.89(dd，J＝3.2，1.2Hz，1H)，4.57(s，2H)，3.14(t，J＝4.8Hz，4H)，2.63(t，J＝4.8Hz，4H)，2.35(s，3H)，2.24(s，3H)；LC-MS(ESI+)m/z 207.2(M+2H)²⁺，413.3(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₁H₂₆ClN₆O(M+H)⁺计算值412.1773，实验值412.1767。

实施例4

5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-((四氢-2H-吡喃-2-基)甲基)嘧啶-2，4-二胺盐酸盐(Ex-4)：除了使用在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的Int-4(0.100g，0.382mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.066g，0.344mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.086mL，0.344mmol)之外，使用对于Ex-1描述的程序合成该化合物。除去溶剂，且将所得残余物用DCM(5mL)浆化，过滤并用DCM(3mL×2)洗涤，在高真空下干燥，以提供呈灰色固体的标题化合物(0.133g，85％)。HPLC 99％(t_R＝13.69分钟，在具有0.1％TFA的水中的30％CH₃OH，20分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.88(s，1H)，7.40(d，J＝8.8Hz，2H)，7.11(d，J＝9.2Hz，2H)，3.96-3.86(m，3H)，3.66-3.36(m，8H)，3.08(t，，J＝11.2Hz，2H)，2.98(s，3H)，1.87-1.85(m，1H)，1.59-1.49(m，4H)，1.30-1.22(m，1H)；LC-MS(ESI+)m/z 209.2(M+2H)²⁺，417.3(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₁H₃₀ClN₆O(M+H)⁺计算值417.2164，实验值417.2164。

实施例5

YL11-143

5-氯-N4-(环戊基甲基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-5)：除了使用在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的Int-5(0.105g，0.427mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.073g，0.384mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.096mL，0.384mmol)之外，使用对于Ex-1描述的程序合成该化合物，以提供呈米黄色固体的标题化合物(0.090g，59％)。HPLC99.6％(t_R＝5.04分钟，在具有0.1％TFA的水中的30％CH₃OH，20分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.85(s，1H)，7.47(d，J＝8.8Hz，2H)，6.90(d，J＝8.8Hz，2H)，6.76(s，1H)，5.29(appt，J＝5.6Hz，1H)，3.41(dd，J＝7.2，5.6Hz，2H)，3.32(appt，4H)，2.87(brs，4H)，2.55(s，3H)，2.26-2.18(m，1H)，1.85-1.78(m，2H)，1.68-1.56(m，5H)，1.32-1.26(m，2H)；LC-MS(ESI+)m/z 201.2(M+2H)²⁺，401.3(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₁H₃₀ClN₆(M+H)⁺计算值401.2215，实验值401.2210。

实施例6

5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)嘧啶-2，4-二胺三TFA盐(Ex-6)：除了使用在2-甲氧基乙-1-醇(1mL)中的Int-6(0.050g，0.192mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.033g，0.172mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.043mL，0.172mmol)之外，使用对于Ex-1描述的程序合成该化合物。粗制物质通过制备型HPLC(梯度：在具有0.1％TFA的水中的MeOH 5-65％，30分钟)纯化，以提供呈浅褐色固体的标题化合物(0.068g，52％)。HPLC 99％(t_R＝9.47分钟，梯度：在具有0.1％TFA的水中的CH₃OH 5-65，30分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.98(s，1H)，7.36(appd，J＝8.8Hz，2H)，7.12(appd，J＝8.8Hz，2H)，3.87(appd，J＝4.8Hz，4H)，3.70-3.55(m，4H)，3.30-3.24(m，2H)，3.13-3.06(m，3H)，2.98(s，3H)，2.79(s，3H)，2.26-2.19(m，1H)，2.12-1.87(m，3H)；LC-MS(ESI+)m/z 208.8(M+2H)²⁺，416.3(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₁H₃₁ClN₇(M+H)⁺计算值416.2324，实验值416.2318。

实施例7

5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-苯乙基嘧啶-2，4-二胺(Ex-7)：将Int-7(0.100g，0.37mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.064g，0.33mmol)和在二噁烷中的4MHCl(0.08mL，0.33mmol)在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的混合物密封在微波小瓶中并在110℃的油浴中加热18小时。在冷却时使用V-10蒸发器蒸发溶剂。将所得残余物溶解于饱和NaHCO₃(10mL)中并用氯仿(20mL×2)萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干燥。将获得的固体用DCM和己烷湿磨，过滤，并用甲醇洗涤，产生呈白色固体的标题化合物(0.081g，57％)。HPLC 98％(t_R＝7.89分钟，在具有0.1％TFA的水中的40％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 423(M+H)⁺；LC-MS(ESI+)m/z 423(M+H)⁺。

实施例8

5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(3-苯基丙基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-8)：该化合物以与Ex-7相同的方式由Int-8(0.100g，0.35mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.061g，0.32mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.1mL，0.32mmol)制备，以提供呈白色固体的标题化合物(0.041g，30％)。HPLC 96％(t_R＝13.01分钟，在具有0.1％TFA的水中的40％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 437(M+H)⁺；LC-MS(ESI+)m/z 437(M+H)⁺。

实施例9

5-氯-N4-(2，4-二氯苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-9)：该化合物以与Ex-7相同的方式由Int-9(0.100g，0.30mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.051g，0.27mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.07mL，0.27mmol)制备，以提供标题化合物(0.073g，55％)。HPLC 95％(t_R＝3.90分钟，在具有0.1％TFA的水中的40％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 491和493(M+H)⁺-Cl同位素；LC-MS(ESI+)m/z 491(M+H)⁺。

实施例10

5-氯-N4-(2，6-二氯苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-10)：该化合物以与Ex-7相同的方式由Int-10(0.100g，0.30mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.051g，0.27mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.07mL，0.27mmol)制备，以提供粗制固体，其通过SiO₂快速色谱法纯化。白色固体用DCM/己烷湿磨，以提供标题化合物(0.070g，54％)。HPLC 95％(t_R＝8.6分钟，在具有0.1％TFA的水中的45％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 491和493(M+H)⁺-Cl同位素；LC-MS(ESI+)m/z 491(M+H)⁺。

实施例11

5-氯-N4-(2-氯苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-11)：该化合物以与Ex-7相同的方式由Int-11(0.100g，0.33mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.060g，0.31mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.08mL，0.31mmol)制备，以提供粗制物质，其通过快速色谱纯化。获得的白色固体用DCM/己烷湿磨，以提供标题化合物(0.080g，56％)。HPLC 96％(t_R＝13.6分钟，在具有0.1％TFA的水中的45％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 457和459(M+H)⁺-Cl同位素；LC-MS(ESI+)m/z 457(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/zC₂₃H₂₆Cl₂N₆(M+H)⁺计算值457.1669，实验值457.1649。

实施例12

5-氯-N4-(2-氯-6-氟苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-12)：该化合物使用对于Ex-1描述的程序使用在2-甲氧基乙-1-醇(10mL)中的Int-12(0.648g，2.031mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.369g，1.930mmol)和在二噁烷中的4MHCl(0.508mL，2.031mmol)合成，以提供呈白色固体的标题化合物(0.641g，70％)。HPLC99.9％(t_R＝11.91分钟，在具有0.1％TFA的水中的40％CH₃OH，40分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.72(s，1H)，7.43(appd，J＝9.2Hz，2H)，7.21-7.14(m，2H)，7.00-6.93(m，3H)，3.77(t，J＝6.8Hz，2H)，3.16-3.12(m，6H)，2.64(t，J＝5.2Hz，4H)，2.36(s，3H)；LC-MS(ESI+)m/z 238.2(M+2H)²⁺，475.2(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₃H₂₆Cl₂FN₆(M+H)⁺计算值475.1575，实验值475.1569。

实施例13

5-氯-N4-(2-氟苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-13)：该化合物以与Ex-7相同的方式由Int-13(0.100g，0.35mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.063g，0.33mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.08mL，0.33mmol)制备，以提供粗制物质，其通过快速色谱法纯化。获得的白色固体用DCM/己烷湿磨，以提供标题化合物(0.089g，56％)。HPLC 93％(t_R＝13.6分钟，在具有0.1％TFA的水中的45％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 441(M+H)；LC-MS(ESI+)m/z 441(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₃H₂₆ClFN₆(M+H)⁺计算值441.1964，实验值441.1953。

实施例14

5-氯-N4-(2-甲氧基苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-14)：该化合物使用在2-甲氧基乙-1-醇(15mL)中的Int-14(1.180g，3.957mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.719g，3.760mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.989mL，3.957mmol)根据用于Ex-1的程序合成，以提供呈白色固体的标题化合物(0.777g，46％)。HPLC 99.6％(t_R＝11.65分钟，在具有0.1％TFA的水中的40％CH₃OH，40分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.73(s，1H)，7.49(appd，J＝8.8Hz，2H)，7.18(ddd，J＝8.4，7.6，2.0Hz，1H)，7.11(d，J＝7.6，2.0Hz，1H)，6.93-6.84(m，4H)，3.79(s，2H)，3.67(t，J＝7.2Hz，2H)，3.14(t，J＝5.2Hz，4H)，2.93(t，J＝7.2Hz，2H)，2.63(t，J＝4.8Hz，4H)，2.35(s，3H)；LC-MS(ESI+)m/z 227.2(M+2H)²⁺，453.3(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₄H₃₀ClN₆O(M+H)⁺计算值453.2164，实验值453.2169。

实施例15

5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(2-(吡啶-2-基)乙基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-15)：该化合物以与Ex-7相同的方式由Int-15(0.100g，0.35mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.064g，0.33mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.08mL，0.33mmol)制备，以提供粗制物质，其通过SiO₂快速色谱法纯化。获得的棕褐色固体用DCM/己烷湿磨，以提供标题化合物(0.090g，60％)。HPLC99％(t_R＝13.7分钟，在具有0.1％TFA的水中的15％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 424(M+H)；LC-MS(ESI+)m/z 424(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₂H₂₆ClN₇(M+H)⁺计算值424.2011，实验值424.2005

实施例16

5-氯-N4-(2-基苯乙基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-16)：该化合物以与Ex-7相同的方式由在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的Int-16(0.100g，0.35mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.064g，0.33mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.08mL，0.33mmol)制备，以提供粗制物质，其通过SiO₂快速色谱法纯化。获得的白色固体用DCM/己烷湿磨，以提供呈固体的标题化合物(0.042g，30％)。HPLC 97％(t_R＝13.0分钟，在具有0.1％TFA的水中的40％CH₃OH，20分钟)；HPLC-MS(ESI+)m/z 437(M+H)；LC-MS(ESI+)m/z 437(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₄H₂₉ClN₆(M+H)⁺计算值437.2215，实验值437.2209。

实施例17

5-氯-N⁴-(2，6-二氯苯乙基)-N²-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2，4-二胺(Ex-17)：向在MeOH(1mL)中的Int-17(50mg，0.148mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(33mg，0.148mmol)中添加2滴4M HCl(水性)。该溶液在微波条件下在160℃下照射30分钟。将溶液用EtOAc(40mL)转移至分液漏斗中，并用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤。将水层用EtOAc(2×20mL)再次萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压浓缩。所得粗制混合物通过快速色谱法(SiO₂)用在MeOH中的DCM(0％至10％)洗脱来纯化，以提供呈薄膜状的标题化合物(27mg，35％)。HPLC：94％[t_R＝5.9分钟，45％MeOH，55％水(具有0.1％TFA)，20分钟]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.87(d，J＝8.8Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.40(d，J＝8.1Hz，2H)，7.31(t，J＝6.8Hz，1H)，7.29(s，1H，在D₂O振动上消失)，7.23(t，J＝8.1Hz，1H)，6.60(d，J＝2.5Hz，1H)，6.43(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.59(q，J＝6.8Hz，2H)，3.18(d，J＝6.8Hz，3H来自甲醇)，3.10-3.04(m，4H)，2.46-2.41(m，4H)，2.20(s，3H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 523.2[25％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，521.2[25％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]，262.2[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl+2H)²⁺]，261.2[95％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+2H)²⁺]。LC-MS(ESI+)：521.2[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]。HRMS(ESI+)：m/z C₂₄H₂₇Cl₃N₆O(M+H)⁺计算值521.1385，实验值521.1390。

实施例18

(R)5-氯-N⁴-(1-苯乙基)-N²-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2，4-二胺(Ex-18)：该化合物以与Ex-17相同的方式由JM1-080(50mg，0.186mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(41mg，0.186mmol)制备，提供呈薄膜状的标题化合物(27mg，35％)。HPLC：93％[t_R＝7.0分钟，35％MeOH，65％水(具有0.1％TFA)，20分钟]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.84(s，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，1H)，7.41(s，1H，在D₂O振动上消失)，7.38-7.23(m，5H；1H在D₂O振动上消失)，7.17(t，J＝7.2Hz，1H)，6.57(d，J＝2.5Hz，1H)，6.42(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，5.20(五重峰，J＝7.4Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.12-3.05(m，4H)，2.47-2.41(m，4H)，2.21(s，3H)，1.48(d，J＝7.1Hz，3H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 453.3[30％，(M³⁵Cl+H)⁺]，227.9[35％，(M³⁷Cl+2H)²⁺]，227.2[100％，(M³⁵Cl+2H)²⁺]。LC-MS(ESI+)：453.2[100％，(M³⁵Cl+H)⁺]。HRMS(ESI+)：m/z C₂₄H₂₉ClN₆O(M+H)⁺计算值453.2164，实验值453.2157。

实施例19

(S)5-氯-N⁴-(1-苯乙基)-N²-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2，4-二胺(Ex-19)：该化合物以与Ex-17相同的方式由Int-19(50mg，0.186mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-4-基)苯胺(41mg，0.186mmol)制备，以提供呈薄膜状的标题化合物(28mg，35％)。HPLC：98％[t_R＝8.9分钟，35％MeOH，65％水(具有0.1％TFA)，20分钟]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.84(s，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，1H)，7.42(s，1H 1H在D₂O振动上消失)，7.38-7.23(m，5H；1H在D₂O振动上消失)，7.17(t，J＝7.2Hz，1H)，6.57(d，J＝2.4Hz，1H)，6.42(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，5.21(五重峰，J＝7.4Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.12-3.05(m，4H)，2.47-2.41(m，4H)，2.21(s，3H)，1.48(d，J＝7.1Hz，3H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 453.2[30％，(M³⁵Cl+H)⁺]，228.0[35％，(M³⁷Cl+2H)²⁺]，227.2[100％，(M³⁵Cl+2H)²⁺]。LC-MS(ESI+)：453.2[100％，(M³⁵Cl+H)⁺]。HRMS(ESI+)：m/z C₂₄H₂₉ClN₆O(M+H)⁺计算值453.2164，实验值453.2162。

实施例20

5-氯-N⁴-(2-氯-6-氟苯乙基)-N²-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2，4-二胺(Ex-20)：向Int-12(100mg，0.312mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(75mg，0.343mmol)在2-甲氧基乙醇(2mL)中的溶液中添加在二噁烷中的4M HCl(0.086mL，0.343mmol)。将该溶液搅拌并在110℃下加热14小时。随后，另外添加2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(18mg，0.081mmol)和1滴4M HCl(水性)，并将混合物在微波条件下在160℃下进一步照射15分钟。将溶液减压浓缩并在饱和NaHCO₃和DCM(各20mL)之间分配。将水层用DCM(20mL)再次萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压浓缩。所得粗制混合物通过快速色谱法(SiO₂)用在MeOH中的DCM(0％至10％)洗脱来纯化，以提供呈棕色发泡体的标题化合物(75mg，48％)。HPLC：98％[t_R＝8.7分钟，45％MeOH，55％水(具有0.1％TFA)，20分钟。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.87(d，J＝8.8Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.33-7.22(m，4H；1H在D₂O振动上消失)，7.19-7.11(m，1H)，6.60(d，J＝2.5Hz，1H)，6.42(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.58(q，J＝6.6Hz，2H)，3.10-3.05(m，4H)，3.03(t，J＝6.6Hz，2H)，2.46-2.42(m，4H)，2.21(s，3H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 507.2[45％，(M³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，505.2[50％，(M³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]，254.2[60％，(M³⁵Cl³⁷Cl+2H)²⁺]，253.2[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl+2H)²⁺]。LC-MS(ESI+)：505.2[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl+H)]。HRMS(ESI+)：m/z C₂₄H₂₇Cl₂FN₆OS(M+H)⁺计算值505.1680，实验值505.1683。

实施例21

5-氯-N²-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-N⁴-(2-甲氧基苯乙基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-21)：向Int-14(100mg，0.335mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(82mg，0.369mmol)在2-甲氧基乙醇(2mL)中的溶液中添加在二噁烷中的4M HCl(0.086mL，0.343mmol)。将该溶液搅拌并在110℃下加热14小时。随后，另外添加2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(40mg，0.180mmol)和1滴4M HCl(水性)，并将混合物在微波条件下在160℃下进一步照射15分钟。以与Ex-20相同的方式处理提供呈浅棕色发泡体的标题化合物(97mg，60％)。HPLC：99％[t_R＝8.7分钟，45％MeOH，55％水(具有0.1％TFA)，20分钟。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，7.82(s，1H)，7.42(s，1H，在D₂O振动上消失)，7.18(ddd，J＝8.2，7.4，1.7Hz，1H)，7.14(t，J＝6.3Hz，1H，在D₂O振动上降低50％)，7.07(dd，J＝7.4，1.7Hz，1H)，6.94(dd，J＝8.2，0.9Hz，1H)，6.85(td，J＝7.4，0.9Hz，1H)，6.60(d，J＝2.5Hz，1H)，6.34(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.76(s，3H)，3.50(q，J＝6.3Hz，2H)，3.10-3.03(m，4H)，2.82(t，J＝6.3Hz，2H)，2.47-2.41(m，4H)，2.21(s，3H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 483.3[50％，(M³⁵Cl+H)⁺]，242.2[100％，(M³⁵Cl+2H)²⁺]。LC-MS(ESI+)：483.2[100％，(M³⁵Cl+H)⁺]。HRMS(ESI+)：m/z C₂₅H₃₁Cl₂N₆O₂(M+H)⁺计算值483.2270，实验值483.2272。

实施例22

5-氯-N⁴-(2-氯-6-氟苯乙基)-N²-[2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2，4-二胺(Ex-22)：向2，5-二氯-N-(2-氯-6-氟苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-12)(100mg，0.312mmol)和2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(81mg，0.343mmol)在2-甲氧基乙醇(2mL)中的溶液中添加86μL的在二噁烷中的4M HCl。将溶液搅拌并加热至110℃达14小时，随后在微波条件下在160℃下照射15分钟。将混合物真空浓缩。随后添加饱和NaHCO₃(20mL)和二氯甲烷(20mL)并将其转移到分液漏斗中。将水层用二氯甲烷(2×20mL)再次萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压浓缩。所得残余物通过制备型TLC用二氯甲烷和丙酮(2∶1，v/v)洗脱来纯化，提供呈棕色发泡体的标题化合物(50mg，31％)。HPLC：97％[t_R＝9.03分钟，45％MeOH，55％水(具有0.1％TFA)，20分钟]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.02(d，J＝8.8，1H)，7.88(s，1H)，7.37(t，J＝5.9Hz，1H)，7.32-7.23(m，3H)，7.20-7.12(m，1H)，6.63(d，J＝2.5Hz，1H)，6.46(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，4.10(q，J＝7.0Hz，2H)，3.60(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(brs，4H)，3.05(t，J＝6.4Hz，2H)，2.70(brs，4H)，2.40(s，3H)，1.38(t，J＝7.0Hz，3H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 521.3[20％，(M³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，519.2[35％，(M³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]，261.1[66％，(M³⁵Cl³⁷Cl+2H)²⁺]，260.3[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl+2H)²⁺]，

实施例23

5-氯-N²-[2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-N⁴-(2-氯-6-氟苯乙基)嘧啶-2，4-二胺(Ex-23)：向2，5-二氯-N-(2-氯-6-氟苯乙基)嘧啶-4-胺(Int-12)(50mg，0.156mmol)和2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(42mg，0.186mmol)在2-甲氧基乙醇(1mL)中的溶液中添加47μL的在二噁烷中的4M HCl。将溶液搅拌并加热至110℃达14小时，随后在微波条件下在160℃下照射15分钟。将混合物真空浓缩。随后添加饱和NaHCO₃(10mL)和二氯甲烷(10mL)并将其转移到分液漏斗中。将水层用二氯甲烷(2×10mL)再次萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压浓缩。所得残余物通过制备型TLC用二氯甲烷和丙酮(2∶1，v/v)洗脱来纯化，提供呈黄色薄膜状的标题化合物(13mg，17％)。HPLC：98％[t_R＝6.88分钟，45％MeOH，55％水(具有0.1％TFA)，20分钟]。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.92(s，1H)，7.82(s，1H)，7.56(d，J＝8.9Hz，1H)，7.31-7.21(m，3H)，7.19-7.09(m，1H)，6.97(d，J＝2.8Hz，1H)，6.88(dd，J＝9.0，2.8Hz，1H)，3.59-3.46(q，J＝6.4Hz，2H)，3.16-3.07(m，4H)，2.99(t，J＝6.4Hz，2H)，2.47-2.39(m，4H)，2.21(s，3H)。HPLC-MS(ESI⁺)：m/z 511.2[35％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl+H)⁺]，509.1[35％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+H)⁺]，256.1[100％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁷Cl+2H)²⁺]，255.2[98％，(M³⁵Cl³⁵Cl³⁵Cl+2H)²⁺]。

实施例24

(R)-2-(4-((5-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-酮(Ex-24)：除了使用在2-甲氧基乙-1-醇(2mL)中的(R)-2，5-二氯-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)嘧啶-4-胺(Lawrence，H.R.等，(2015)Development ofNovel ACK1/TNK2 Inhibitors Using a Fragment Based Approach.J.Med.Chem.58(6)，2746-2763)(0.100g，0.403mmol)、2-(4-氨基苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-酮(0.089g，0.383mmol)和在二噁烷中的4M HCl(0.1mL，0.403mmol)之外，使用对于Ex-1描述的程序合成该化合物，以提供呈米黄色固体的标题化合物(0.109g，64％)。HPLC 97.6％(t_R＝6.88分钟，在具有0.1％TFA的水中的30％CH₃OH，20分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ7.01(s，1H)，6.78(appd，J＝8.8Hz，2H)，6.34(d，J＝8.8Hz，2H)，3.39-3.33(m，1H)，3.10-3.05(m，1H)，2.95(aapt，1H)，2.92(s，2H)，2.83-2.69(m，6H)，1.58(t，J＝5.2Hz，2H)，1.46(t，J＝4.8Hz，2H)，1.44(s，3H)，1.24-1.03(m，3H)，0.91-0.82(m，1H)；LC-MS(ESI+)m/z 223.2(M+2H)²⁺，445.2(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₂H₃₀ClN₆O₂(M+H)⁺计算值445.2113，实验值445.2109。

实施例25

(R)-4-((5-氯-4-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-N-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺(Ex-25)：该化合物使用对于Ex-1描述的程序由(R)-2，5-二氯-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)嘧啶-4-胺(Lawrence，H.R.等，(2015)Development of NovelACK1/TNK2 Inhibitors Using a Fragment Based Approach.J.Med.Chem.58(6)，2746-2763)(0.100g，0.403mmol)、4-氨基-2-氟-N-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺(0.096g，0.383)和在二噁烷中的4M HCl(0.1mL，0.403mmol)合成，以提供呈白色固体的标题化合物(0.097g，55％)。HPLC 99.6％(t_R＝12.21分钟，在具有0.1％TFA的水中的30％CH₃OH，20分钟)；¹H NMR(400MHz，CDOD₃)：δ9.69(s，1H)，8.00(s，1H)，7.85-7.81(m，2H)，7.49-7.40(m，2H)，7.31(t，J＝6.0Hz，1H)，4.13-4.07(m，1H)，3.79-3.74(m，1H)，3.67-3.59(m，2H)，3.48-3.44(m，2H)，2.69(brd，J＝11.2Hz，2H)，2.13(s，3H)，1.94-1.72(m，7H)，1.63-1.49(m，3H)；¹⁹F NMR(376MHz，DMSO-d₆)：δ-112.25--112.30(m)；LC-MS(ESI+)m/z 232.2(M+2H)²⁺，463.2(M+H)⁺；HRMS(ESI+)m/z C₂₂H₂₉ClFN₆O₂(M+H)⁺计算值463.2019，实验值463.2012。

实施例26

(R)-5-氯-N²-[2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-N⁴-[(四氢呋喃-2-基)甲基]嘧啶-2，4-二胺(Ex-26)：向(R)-2，5-二氯-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)嘧啶-4-胺(Lawrence，H.R.等，(2015)Development of Novel ACK1/TNK2 Inhibitors Using aFragment Based Approach.J.Med.Chem.58(6)，2746-2763)(0.100g，0.403mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(98mg，0.443mmol)在2-甲氧基乙醇(2mL)中的溶液中添加在二噁烷中的4M HCl(0.110mL，0.443mmol)。将溶液搅拌并在110℃下加热18小时。随后，将混合物减压浓缩并在饱和NaHCO₃和CHCl₃(各20mL)之间分配。将水层用CHCl₃(20mL)再次萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压浓缩。所得粗制混合物通过快速色谱法(SiO₂)用在MeOH中的DCM(0％至10％)洗脱来纯化，以提供呈棕色油状的标题化合物(79mg，54％)。HPLC：95％[t_R＝6.8分钟，30％MeOH，70％水(具有0.1％TFA)，20分钟。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.84(s，1H)，7.78(d，J＝8.8Hz，1H)，7.45(s，1H，在D₂O振动上消失)，7.00(t，J＝6.0Hz，1H，在D₂O振动上消失)，6.59(d，J＝2.6Hz，1H)，6.42(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，4.03(五重峰，J＝6.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.76-3.69(m，1H)，3.62-3.56(m，1H)，3.36(t，J＝6.0Hz，2H)，3.10-3.04(m，4H)，2.46-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)，1.90-1.71(m，3H)，1.60-1.50(m，1H)。HPLC-MS(ESI+)：m/z 433.2[30％，(M³⁵Cl+H)⁺]，218.2[40％，(M³⁷Cl+2H)²⁺]，217.2[100％，(M³⁵Cl+2H)²⁺]。LC-MS(ESI+)：433.2[100％，(M³⁵Cl+H)]。HRMS(ESI+)：m/zC₂₁H₂₉ClN₆O₂(M+H)⁺计算值433.2113，实验值433.2106。

生物活性

雄性激素受体(AR)在***癌(PC)的发病和进展中起着至关重要的作用(Burnstein，K.L.(2005).Regulation of androgen receptor levels：implications forprostate cancer progression and therapy.J.Cell.Biochem.95，657-669；Grossmann，M.E.等，(2001).Androgen receptor signaling in androgen-refractory prostatecancer.J.Nat.Cancer Inst.93，1687-1697；Lonergan，P.E.和Tindall，D.J.(2011).Androgen receptor signaling in prostate cancer development andprogression.J.Carcinogenesis10，20；Watson，P.A.等，(2015).Emerging mechanisms ofresistance to androgen receptor inhibitors in prostate cancer.Nature Rev.15，701-711)。Emerging mechanisms of resistance to androgen receptor inhibitors inprostate cancer.Nature Rev.15，701-711)。尽管有初始反应，AR拮抗剂由于无法阻遏AR或其剪接变体AR-V7的表达而在长期抑止AR活性方面无效。PC细胞由于对抗雄性激素的迅速反应而重振AR基因转录并进展到致死阶段去势难治性***癌(CRPC)(Grasso，C.S.等，(2012).The mutational landscape of lethal castration-resistant prostatecancer.Nature487，239-243；Robinson，D.等，(2015).Integrative clinical genomicsof advanced prostate cancer.Cell161，1215-1228)。CRPC增加AR和AR-V7水平的内在能力重申AR蛋白活性的抑制是不够的；为了实现有效的缓解，AR转录的消融至关重要。然而，用小分子抑制剂对AR及其剪接变体AR-V7转录的靶向抑制尚未实现。我们发现AR-相互作用的非受体酪氨酸激酶(NRTK)ACK1(也称为TNK2)在CRPC中经常失调(Mahajan，K.和Mahajan，N.P.(2015).ACK1/TNK2 tyrosine kinase：molecular signaling and evolving role incancers.Oncogene34，4162-4167；Mahajan，N.P.等，(2007).Activated Cdc42-associatedkinase ACK1 promotes prostate cancer progression via androgen receptortyrosine phosphorylation.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.104，8438-8443)，使在酪氨酸88处的组蛋白H4磷酸化。ACK1被直接募集到AR基因座，并沉积由WDR5和MLL2组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶复合物“读取”的pY88-H4标志，促进H3K4三甲基活化标志的沉积。这种驱动AR和AR-V7表达的自主表观遗传线路不仅是雄性激素非依赖性的，而且对第二代抗雄性激素恩杂鲁胺不敏感(Tran等，2009)。一致地，ACK1抑制剂(R)-9bMS(DZ1-067甲磺酸盐)逆转pY88-H4表观遗传标志不仅阻遏AR及其变体水平并敏化耐恩杂鲁胺性癌细胞，而且缓解体内CRPC肿瘤生长。组合起来，这些揭示由组蛋白酪氨酸激酶驱动的正反馈线路，其加强AR及其变体转录，促进CRPC生长。另外，这些数据表明一类新的表观遗传抑制剂(R)-9bMS作为CRPC的可行性治疗选择的出现。此外，观察到ACK1抑制剂(R)-9bMS起到免疫调节抑制剂的作用。ACk1的抑制引起CD4辅助细胞、CD8细胞毒性细胞和天然杀伤(NK)细胞的显著增加。另外，还观察到MDSC(来源于骨髓的抑制细胞)的显著增加。有趣的是，与具有ACK1的小鼠相比，在缺乏ACK1活性的小鼠中形成的肿瘤明显更小。总之，这些数据展示ACK1激酶活性对于癌细胞保持免疫细胞“静止”至关重要。因此，用ACK1抑制剂处理通过激发免疫细胞抗肿瘤反应而引起肿瘤抑制。

CRPC总是克服恩杂鲁胺阻断(Arora，V.K.等，(2013).Glucocorticoid receptorconfers resistance to antiandrogens by bypassing androgen receptorblockade.Cell155，1309-1322；Balbas，M.D.等，(2013).Overcoming mutation-basedresistance to antiandrogens with rational drug design.eLife2，e00499)，且AR-V7剪接变体(Dehm，S.M.等，(2008).Splicing of a novel androgen receptor exongenerates a constitutively active androgen receptor that mediates prostatecancer therapy resistance.Cancer Res.68，5469-5477)可能是抵抗恩杂鲁胺和雄性激素合成抑制剂阿比特龙(abiraterone)(Antonarakis，E.S.等，(2014).AR-V7 andresistance to enzalutamide and abiraterone in prostate cancer.New EnglandJ.Med.371，1028-1038)的机制之一。因此，其揭示了应对该复杂疾病的两个重要警告；首先，不是所有的CRPC都是相同的，其次，其他信号传导事件如酪氨酸激酶的活化可能是驱动疾病的原因(Drake，J.M.等，(2012).Oncogene-specific activation of tyrosinekinase networks during prostate cancerprogression.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.109，1643-1648)。NRTK如ACK1与AR以雄性激素非依赖性方式相互作用(Mahajan，N.P.等，(2007).Activated Cdc42-associated kinaseACK1 promotes prostate cancer progression via androgen receptor tyrosinephosphorylation.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.104，8438-8443)并且在PC中常被上调(Taylor，B.S.等，(2010).Integrative genomic profiling of human prostatecancer.Cancer Cell18，11-22)。重要的是，大多数CRPC表现出5至100倍的ACK1过表达(vander Horst，E.H.等，(2005).Metastatic properties and genomic amplification ofthe tyrosine kinase gene ACK1.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.102，15901-15906)，并且其表达与疾病进展到CRPC阶段正相关(Mahajan，K.等，(2010).Effect of ACK1 tyrosinekinase inhibitor on ligand-independent androgen receptor activity.TheProstate70，1274-1285)。然而，ACK1是否修饰表观遗传景观以促进CRPC进展还不得而知。

已经显示全长AR的表达是AR-V7起源所需要的(Watson，P.A等，(2010).Constitutively active androgen receptor splice variants expressed incastration-resistant prostate cancer require full-length androgenreceptor.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.107，16759-16765)。我们评估了在用(R)-9bMS(DZ1-067甲磺酸盐)处理后的AR-V7mRNA水平。在ACK1抑制时，AR-V7 mRNA和变体蛋白水平均显著降低(图1A-1C)。另外，为了检查在AR表达中对ACK1激酶活性的要求，进行表现出不可检测的AR水平的PC3细胞的转染。组成性活性ACK1，但不是激酶死亡的ACK1，不仅诱导显著的AR(和PSA)mRNA表达，而且导致可检测的AR蛋白水平(图1D-1F)。

为了评估内源性H4-磷酸化，将血清和雄性激素饥饿的PC细胞用配体处理以活化ACK1。它导致强烈的H4 Y88-磷酸化，在(R)-9bMS处理时受到抑制(图2A)。另外，H4 Y88-磷酸化仍然不受DHT或恩杂鲁胺处理影响(图2B)，然而，ACK1的沉默导致H4 Y88-磷酸化的显著损失(图2C)。此外，使用质谱法在人CRPC中也检测到H4 Y88-磷酸化，其通过免疫印迹验证(图3A-3C)。

为了破译CRPC中的pY88-H4表观遗传景观，将用媒剂或(R)-9bMS处理的C4-2B细胞制备的染色质用pY88-H4抗体免疫沉淀(ChIp)，接着测序。仔细检查X染色体揭示pY88-H4在AR转录起始位点上游的3个不同位置沉积；AREM1(nt：66，669，600-66，670，200)、AREM2(nt：66，649，550-66，649，850)和AREM3(nt：66，631，300-66，631，650)(图4A和4B)。ChIP和接着的实时PCR揭示pY88-H4标志在这些位点特异性地沉积，并且在(R)-9bMS处理时被消除(图5A-5D)，表明pY88-H4表观遗传标志的沉积在CRPC中是可逆事件。另外，AR在AR基因的上游结合(图5E)，并且ACK1或AR敲低显著降低在AREM1和AREM2位点处的pY88-H4沉积(图5F、5G和5H)，表明AR募集在AR基因上游的ACK1。

为了检查在AR上游pY88-H4标志的沉积是否是其转录活化所必需的，由用H4或WT-H4的Y88F突变体转染的细胞制备RNA。Y88F-H4突变体的过表达导致AR和PSA mRNA水平的显著减小(图5I和5J)。

我们观察到，与H4相比，WDR5表现出对Y88-磷酸化H4的优先结合(图6A)。另外，当H3K4me3的沉积受损时，转录阻遏标志H3K9的三甲基化显著增加，表明活化/阻遏标志的相互作用可以微调AR mRNA输出(图6B)。此外，发现WDR5、MLL2、H3K4me3甲基标志和RNA PolII在没有雄性激素的情况下在AREM1-3位点特异性富集，并且在用(R)-9bMS处理时显著降低(图6C-6F)。总体而言，这些数据指示，H4 Y88-磷酸化标志可以被表观遗传读取子WDR5识别，该WDR5通过进一步招募MLL2(“表观遗传抄写员”)而反式操作，导致H3K4me3的沉积。

为了研究ACK1抑制剂的抗肿瘤活性，我们首先分析了(R)-9bMS抑制PC细胞系增殖的能力。发现C4-2B、VCaP、LAPC4和LNCaP对(R)-9bMS处理敏感，IC₅₀分别为400nM、450nM、750nM和1.8uM(图7A)。(R)-9bMS处理使PC细胞停滞在G2期(图7B)，诱导细胞凋亡(图7C)。

为了检查CRPC对恩杂鲁胺和(R)-9bMS的相对敏感性，我们产生了耐恩杂鲁胺性的C4-2B细胞系。虽然耐恩杂鲁胺性细胞对恩杂鲁胺表现出相当大的抵抗性(IC₅₀＞7.5uM)，但是细胞保留对(R)-9bMS处理的敏感性(图7D)。有趣的是，这些细胞表现出AR表达显著增加(图7E)，并且(R)-9bMS能够抑制AR表达(图7F)。总之，这些数据表明(R)-9bMS可以通过下调AR转录，促进细胞周期停滞和最终的细胞凋亡来克服耐恩杂鲁胺性。

为了研究(R)-9bMS对CRPC异种移植物肿瘤生长的影响，将C4-2B细胞植入去势SCID小鼠中。在注射了(R)-9bMS的小鼠中观察到CRPC肿瘤生长和肿瘤重量的显著减小(图8A、8B和8C)。(R)-9bMS处理的肿瘤展示出AR、PSA和TMPRSS2 mRNA水平的显著降低(图8D)。发现来自DMSO或(R)-9bMS处理的小鼠的器官在组织学上是正常的(图8E)，并且在体重方面没有统计学差异(图8F)。

类似地，另一CRPC模型LNCaP-caAck(Mahajan，N.P.等，(2007).Activated Cdc42-associated kinase ACK1promotes prostate cancer progression via androgenreceptor tyrosine phosphorylation.Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.104，8438-8443)也展示出对(R)-9bMS处理的敏感性(图9)。

总之，这些数据指示CRPC利用ACK1酪氨酸激酶的表观遗传活性建立转录允许的染色质景观，其富含双重的H4-pY88/H3K4me3标志，促进AR转录自动调控。总体而言，揭露AR的新型表观遗传控制为使用ACK1抑制剂治疗CRPC开辟了新的途径。

作为免疫调节抑制剂的ACK1抑制剂(R)-9bMS

为了了解ACK1激酶在调控免疫功能中的作用，产生了ACK1敲除小鼠(KO)。评估这些小鼠的ACK1激酶活性缺失的效应。ACK1敲低导致CD4辅助细胞、CD8细胞毒性细胞和自然杀伤(NK)细胞的显著增加(图10A-10F和图11A-11C)。此外，还观察到MDSC(来源于骨髓的抑制细胞)的显著增加(图10A-10F和11A-11C)。此外，对WT和ACK1 KO小鼠注射SM-1癌细胞并监测肿瘤生长。在KO小鼠肿瘤中发展的肿瘤显著小于WT(图12)。总之，这些数据展示ACK1激酶活性对于癌细胞保持免疫细胞“静止”至关重要。因此，用ACK1抑制剂处理通过激发免疫细胞抗肿瘤反应而引起肿瘤抑制。

Claims

1.一种具有式I的化合物：

其中

n为1、2或3；

m为1、2、3、4或5；且

R⁶为OH、Cl、Br、F、C₁-C₆烷基、CO₂H、CO₂R⁵、OC(O)R⁵、(CH₂)_1-6CO₂H、C(O)(CH₂)_1-6CO₂H、(CH₂)_1-6CO₂R⁵、C(O)(CH₂)_1-6CO₂R⁵、OR⁵、C(O)R⁵、C(O)NH₂、C(O)NHR⁵、SO₂NH₂、SO₂NHR⁵、C(O)NHSO₂R⁵、4-吗啉基、4-哌嗪基、1-哌啶基、4-哌啶基，

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹是环戊基、环己基、呋喃基、四氢呋喃基、吡咯烷基、噁烷基，其任选地被C₁-C₆烷基取代。

3.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R¹是任选被卤素取代的苯基。

4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R²是未取代的或被R⁶取代的4-吗啉基、4-哌嗪基、1-哌啶基或4-哌啶基。

5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R²是N-甲基哌嗪基。

6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m为1且R²在对位，或者m为2且R²各自在对位和间位。

7.一种具有式III的化合物：

其中

n为1、2或3；

或其药学上可接受的盐。

8.根据权利要求7所述的化合物，其中R¹是含有至少一个氧或氮原子的C₄-C₆杂环烷基，其任选地被一个或多个R⁶基团取代。

9.根据权利要求7或8所述的化合物，其中R¹是环戊基、环己基、呋喃基、四氢呋喃基、吡咯烷基、噁烷基，其任选地被C₁-C₆烷基取代。

10.根据权利要求7或8所述的化合物，其中R¹是任选被卤素取代的苯基。

11.根据权利要求7至9中任一项所述的化合物，其中R^2’为H或OMe。

12.一种化合物，其示于表1中。

13.一种治疗或预防受试者中的癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至12中任一项所述的化合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌症为***癌。

15.方法，其包括使肿瘤细胞与有效量的根据权利要求1至12中任一项所述的化合物接触。