CN108264390A - 一种桑黄子实体的工厂化栽培方法及其培养基 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种桑黄子实体的工厂化栽培方法及其培养基，其包括桑黄种子制备、工厂化生产培养基制备、接种、培养管理、采收、干燥步骤，其中固体菌种扩大培养基包括玉米粉、麦芽糖、蛋白胨、MgSO4、KH2P04、琼脂；液体菌种扩大培养基包括葡萄糖、酵母粉、MgSO4、KH2PO4、柠檬酸三铵、桑枝水提物、维生素B1；工厂化生产培养基包括粮食种子、蒸馏水、MgSO4、KH2P04、桑枝水提物，本发明污染率低，培养周期短、产品质量稳定、成本低，能实现工厂化、标准化生产。培养基使桑黄菌丝生长速度快、旺盛、获得桑黄种子量大时间短，原材料简单易购，价格低廉，使桑黄子实体栽培时间缩短，生物转化率高，可以保持其中的多糖、黄酮、三帖成分含量较高。

Description

一种桑黄子实体的工厂化栽培方法及其培养基

技术领域：

本发明涉及一种桑黄子实体的工厂化栽培方法及其培养基，属于食药用菌栽培技术领域，涉及名贵药用真菌桑黄的培养方法，采用此方法，可实现桑黄的工厂化、标准化、无菌化栽培。

背景技术：

桑黄（Phellinus igniarius）又名桑黄菰、针层孔菌、桑黄菇、梅树菌，隶属担子菌亚门（Basidiomycotina），层菌纲（Hymenomycetes），多孔菌科（Polyporaceae），木层孔菌属（Puccinia pusilla），是一种生于杨、柳等阔叶树树干上的珍稀药用菌，长于我国华北、西北、黑龙江、吉林、台湾、广东、四川、云南、西藏等地区，分布比较广，是一种珍贵的中药材。由于桑黄生理生态的复杂性和特殊性以及外部环境条件的不确定性，在自然界中形成桑黄子实体需要很多年，而且由于过度采摘，导致野生的桑黄很稀有，价格也一度高达每公斤5000~8000元人民币。

桑黄含有丰富的黄酮类、多糖类、三萜类等多种活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎症、增强免疫力和修复细胞功能的作用，有显著的止血，活血，化饮，止泻等的功效。桑黄同时被确认为没有毒性，对小鼠进行喂养实验，均无异常现象产生，且对小鼠肝酒精中毒具有解毒效果。

目前桑黄人工栽培已经实现，在韩国、中国、日本都有栽培，其方法是采用椴木或菌袋栽培，子实体收获需要三年以上，由于栽培周期长、环境暴露，导致污染率高、产品品质不均一、成品价格高。产量、质量与价格综合因素，限制了桑黄的进一步开发应用。

特别是现有桑黄子实体的栽培周期太长，无法实现工厂化、机械化栽培，桑黄工厂化栽培仍属空白。如何开发出培养周期短、可以标准化、工厂化、机械化生产，有效解决培养过程的污染问题，且保持产品质量稳定，使生产成本大幅度降低的桑黄栽培技术成为亟待解决的关键问题。

发明内容：

本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种桑黄子实体的工厂化栽培方法及其培养基，该栽培方法整个过程在瓶内培养，污染率低，培养周期短、产品质量稳定、成本低，能实现工厂化、标准化生产。所用的固体菌种扩大培养基桑黄菌丝生长速度最快，菌丝体颜色较深，不容易退化成白色，菌丝体最旺盛致密；所用的液体菌种扩大培养基，可以在短时间内获得大量的桑黄种子；所用的工厂化生产培养基原材料简单易购，价格低廉，使桑黄子实体栽培时间缩短，生物转化率高，可以保持其中的多糖、黄酮、三帖成分含量较高。

本发明的目的可以通过如下措施来达到：

一种用于桑黄子实体的工厂化栽培的固体菌种扩大培养基，其特征在于培养基原料包括：10-50g／L玉米粉，10-50g/L麦芽糖，0.5-5g/L蛋白胨，O.1-2.0g/L MgSO4，1-6g/LKH2P04， 15-25g／L琼脂，余量水，pH自然；此培养基是通过筛选找到的桑黄生长的最适合的固体菌种扩大培养基，在此培养基上，桑黄菌丝生长速度最快，菌丝体颜色较深，不容易退化成白色，菌丝体最旺盛致密，将为桑黄栽培成子实体奠定基础。

一种用于桑黄子实体的工厂化栽培的液体菌种扩大培养基，其特征在于培养基原料包括：30-50g／L葡萄糖,5-15g/L酵母粉,1-5g／L MgSO4,1-5g／L KH2PO4,1-5g／L柠檬酸三铵,1-5g／L桑枝水提物,O.05-3g／L维生素B1，余量水，pH自然；此培养基是通过筛选找到的桑黄生长的最适合的液体菌种扩大培养基，可以在短时间内获得大量的桑黄种子，为减少生产周期, 大规模工业化生产桑黄子实体奠定基础。

一种用于桑黄子实体的工厂化栽培的工厂化生产培养基，其特征在于培养基原料包括：暗培养基重量百分比计，它含有：40-50%无霉变 粮食种子，40-50%蒸馏水，0.1-3.0%MgSO4, 0.1-3.0% KH2P04，1-10% 桑枝水提物，pH自然，所述的粮食种子为大米、小米、高粱、小麦、燕麦、玉米中的一种；该工厂化生产培养基原材料简单易购，价格低廉，在此培养基上可以使桑黄子实体由传统栽培时间缩短到6个月，同时生物转化率高，可以保持其中的多糖、黄酮、三帖成分含量较高。

一种桑黄子实体的工厂化栽培方法，其特征在于其包括如下具体步骤：

（1）菌种：桑黄菌种，保存于PDA斜面培养基上；

（2）种子制备：在适合桑黄生长的条件下，在液体种子培养基中培养桑黄菌丝至对数生长期，获得液体桑黄种子；或者在固体种子培养基中培养桑黄菌丝，获得固体桑黄种子；其具体步骤如下：

保存菌种的活化：菌种活化用的固体种子培养基采用胡萝卜琼脂固体培养基，接种桑黄斜面菌种后温度28℃，暗培养8-12天；

固体菌种的扩大培养：固体菌种扩大培养基采用的成分为10-20g／L玉米粉，10-20g/L麦芽糖，0.5-1g/L蛋白胨，O.1-0.6g/L MgSO4，1-4g/L KH2P04， 15-25g／L琼脂，余量水，pH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，最后获得供生产车间足够数量和优质质量的固体桑黄种子；

液体菌种的扩大培养：液体菌种扩大培养基采用的成分为30-50g／L葡萄糖,5-15g/L酵母粉,1-5g／L MgSO4,1-5g／L KH2PO4,1-5g／L柠檬酸三铵,1-5g／L桑枝水提物,O.05-3g／L维生素B1, 余量水，PH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度20-30℃，转速120-130rpm，最后获得供生产车间足够数量的优质质量的液体桑黄种子；

（3）工厂化生产培养基制备：暗培养基重量百分比计，它含有：40-50%无霉变 粮食种子，40-50% 蒸馏水，0.1-3.0% MgSO4, 0.1-3.0% KH2P04，1-10% 桑枝水提物，将以上培养基成分按照所述比例混合均匀，加盖密封好后，在121℃，103.4kPa灭菌1h，所述的粮食种子为大米、小米、高粱、小麦、燕麦、玉米中的一种；

（4）接种、培养管理、采收：在无菌环境下，将制得的液体桑黄种子或固体桑黄种子接种到已灭菌的工厂化生产培养基上，置于24-28℃培养室中暗培养6个月，采收桑黄子实体；暗培养过程中培养基湿度62%-68%，空气湿度60%-70%，培养室要经常开门开窗通风换气，以保证充足的氧气供应量，要求室内无光；

（5）干燥：采收的桑黄子实体在50℃-60℃恒温干燥箱里干燥12h，使桑黄子实体含水量达到1.3%以下。

本发明同已有技术相比可产生如下积极效果：本发明是利用粮食基质培养基培养桑黄菌，可以在短时间内获得桑黄子实体，能够很好地解决珍贵药用真菌少，实验材料来源少的问题。同时得到的桑黄子实体活性成分高，可以用于保健品的开发，产生一定的经济效益；整个栽培过程在瓶内培养，污染率低，培养周期短、产品质量稳定、成本低，能实现工厂化、标准化生产。

附图说明：

图1为本发明的不同粮食培养基上瓶栽桑黄子实体情况图。

具体实施方式：下面对本发明的具体实施方式作详细说明：

实施例1：大米为主要原料。

（1）菌种：桑黄菌种，购于广东微生物菌种保藏中心，保存于PDA斜面培养基上。

（2）种子制备：在适合桑黄生长的条件下，在液体种子培养基中培养桑黄菌丝至对数生长期，获得液体桑黄种子；或者在固体种子培养基中培养桑黄菌丝，获得固体桑黄种子，其具体步骤如下：

保存菌种的活化：菌种活化用的固体种子培养基采用胡萝卜琼脂固体培养基，接种斜面菌种后温度28℃，暗培养8天。

固体菌种的扩大培养：固体菌种扩大培养基采用的成分为20g／L玉米粉， 20g/L麦芽糖，1g/L蛋白胨，0.6g/L MgSO4，1g/L KH2P04，15g／L琼脂，余量水，pH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，最后获得供生产车间足够数量和优质质量的固体桑黄种子。

液体菌种的扩大培养：液体菌种扩大培养基采用的成分为30g／L葡萄糖,5g/L酵母粉,1g／L MgSO4,1g／L KH2PO4,2g／L柠檬酸三铵,1g／L桑枝水提物,O.05g／L生素B1, 余量水，PH自然。将活化的桑黄菌种接种后，培养温度20℃，转速120rpm，最后获得供生产车间足够数量的优质质量的液体桑黄种子。

（3）工厂化生产培养基制备：按培养基重量百分比计，它含有：50%的无霉变大米种子、45% 蒸馏水， 2.0% MgSO4, 2.0% KH2P04，1% 桑枝水提物，将以上培养基成分按照所述比例混合均匀，加盖密封好后，在121℃，103.4kPa灭菌1h。

（4）接种、培养管理、采收：在无菌环境下，将制得的液体桑黄种子或固体桑黄种子接种到已灭菌的工厂化生产培养基上，置于26℃培养室中暗培养6个月，采收桑黄子实体；暗培养过程中培养基湿度62%，空气湿度68%，培养室要经常开门开窗通风换气，以保证充足的氧气供应量，要求室内无光；

（5）干燥：采收的桑黄子实体在60℃恒温干燥箱里干燥12h，使桑黄子实体含水量达到1.3%以下。

实例结果：湿重：180.90g/斤（培养基）；干重：52g/斤（培养基）。

以大米为培养原料培养桑黄，使用一定的方法提取其中的活性成分，含量为：多糖含量：19.49mg/g ；黄酮含量：11.82mg/g ；三萜含量：0.43mg/g。

实施例2：以小米主要原料

（1）菌种：桑黄菌种，购于广东微生物菌种保藏中心，保存于PDA斜面培养基上。

（2）种子制备：在适合桑黄生长的条件下，在液体种子培养基中培养桑黄菌丝至对数生长期，获得液体桑黄种子；或者在固体种子培养基中培养桑黄菌丝，获得固体桑黄种子，其具体步骤如下：

保存菌种的活化：菌种活化用的固体种子培养基采用胡萝卜琼脂固体培养基，接种斜面菌种后温度28℃，暗培养12天。

固体菌种的扩大培养：固体菌种扩大培养基采用的成分为15g／L玉米粉，15g/L麦芽糖，0.8g/L蛋白胨，0.5g/L MgSO4，3g/L KH2P04， 20g／L琼脂，余量水，pH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，最后获得供生产车间足够数量和优质质量的固体桑黄种子。

液体菌种的扩大培养：液体菌种扩大培养基采用的成分为40g／L葡萄糖,10g/L酵母粉,3g／L MgSO4,2g／L KH2PO4,1g／L柠檬酸三铵,2g／L桑枝水提物,0.1g／L维生素B1, 余量水，PH自然。将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，转速125rpm，最后获得供生产车间足够数量的优质质量的液体桑黄种子。

（3）工厂化生产培养基制备：按培养基重量百分比计，它含有：45%的无霉变小米种子，40%蒸馏水，2.5% MgSO4, 2.5% KH2P04，10% 桑枝水提物，将以上培养基成分按照所述比例混合均匀，加盖密封好后，在121℃，103.4kPa灭菌1h；

（4）接种、培养管理、采收：在无菌环境下，将制得的液体桑黄种子或固体桑黄种子接种到已灭菌的工厂化生产培养基上，置于24℃培养室中暗培养6个月，采收桑黄子实体；暗培养过程中培养基湿度65%，空气湿度60%，培养室要经常开门开窗通风换气，以保证充足的氧气供应量，要求室内无光；

（5）干燥：采收的桑黄子实体在50℃恒温干燥箱里干燥12h，使桑黄子实体含水量达到1.3%以下。

实例结果：湿重：103.4g/斤（培养基）；干重：27.1g/斤（培养基）。

以小米为培养原料培养桑黄，使用一定的方法提取其中的活性成分，含量为：多糖含量：10.77mg/g ；黄酮含量：3.9mg/g ；三萜含量：0.7mg/g。

实施例3：以燕麦主要原料

（1）菌种：桑黄菌种，购于广东微生物菌种保藏中心，保存于PDA斜面培养基上。

（2）种子制备：在适合桑黄生长的条件下，在液体种子培养基中培养桑黄菌丝至对数生长期，获得液体桑黄种子；或者在固体种子培养基中培养桑黄菌丝，获得固体桑黄种子，其具体步骤如下：

保存菌种的活化：菌种活化用的固体种子培养基采用胡萝卜琼脂固体培养基，接种斜面菌种后温度28℃，暗培养10天。

固体菌种的扩大培养：固体菌种扩大培养基采用的成分为10g／L玉米粉， 10g/L麦芽糖，0.5g/L蛋白胨，0.1g/L MgSO4，4g/L KH2P04，25g／L琼脂，余量水，pH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，最后获得供生产车间足够数量和优质质量的固体桑黄种子。

液体菌种的扩大培养：液体菌种扩大培养基采用的成分为50g／L葡萄糖,15g/L酵母粉,5g／L MgSO4,5g／L KH2PO4,5g／L柠檬酸三铵,5g／L桑枝水提物,3g／L生素B1, 余量水，PH自然。将活化的桑黄菌种接种后，培养温度30℃，转速130rpm，最后获得供生产车间足够数量的优质质量的液体桑黄种子。

（3）工厂化生产培养基制备：按培养基重量百分比计，它含有：40%的无霉变燕麦种子、50% 蒸馏水， 3.0% MgSO4, 3.0% KH2P04，4% 桑枝水提物，将以上培养基成分按照所述比例混合均匀，加盖密封好后，在121℃，103.4kPa灭菌1h。

（4）接种、培养管理、采收：在无菌环境下，将制得的液体桑黄种子或固体桑黄种子接种到已灭菌的工厂化生产培养基上，置于28℃培养室中暗培养6个月，采收桑黄子实体；暗培养过程中培养基湿度62%，空气湿度65%，培养室要经常开门开窗通风换气，以保证充足的氧气供应量，要求室内无光；

（5）干燥：采收的桑黄子实体在55℃恒温干燥箱里干燥12h，使桑黄子实体含水量达到1.3%以下。

实例结果：湿重：141.9g/斤（培养基）；干重：33.85g/斤（培养基）。

以燕麦为培养原料培养桑黄，使用一定的方法提取其中的活性成分，含量为：多糖含量：8.85mg/g ；黄酮含量：2.29mg/g ；三萜含量：0.45mg/g。

实施例4：以麦麸主要原料

（1）菌种：桑黄菌种，购于广东微生物菌种保藏中心，保存于PDA斜面培养基上。

（2）种子制备：在适合桑黄生长的条件下，在液体种子培养基中培养桑黄菌丝至对数生长期，获得液体桑黄种子；或者在固体种子培养基中培养桑黄菌丝，获得固体桑黄种子，其具体步骤如下：

保存菌种的活化：菌种活化用的固体种子培养基采用胡萝卜琼脂固体培养基，接种斜面菌种后温度28℃，暗培养10天。

固体菌种的扩大培养：固体菌种扩大培养基采用的成分为20g／L玉米粉， 10g/L麦芽糖，0.5g/L蛋白胨，0.6g/L MgSO4，3g/L KH2P04，15g／L琼脂，余量水，pH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，最后获得供生产车间足够数量和优质质量的固体桑黄种子。

液体菌种的扩大培养：液体菌种扩大培养基采用的成分为40g／L葡萄糖,15g/L酵母粉,3g／L MgSO4,3g／L KH2PO4,3g／L柠檬酸三铵,4g／L桑枝水提物,2g／L生素B1, 余量水，PH自然。将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，转速125rpm，最后获得供生产车间足够数量的优质质量的液体桑黄种子。

（3）工厂化生产培养基制备：按培养基重量百分比计，它含有：45%的无霉变麦麸、45% 蒸馏水，0.1% MgSO4,0.1% KH2P04，9.8% 桑枝水提物，将以上培养基成分按照所述比例混合均匀，加盖密封好后，在121℃，103.4kPa灭菌1h。

（4）接种、培养管理、采收：在无菌环境下，将制得的液体桑黄种子或固体桑黄种子接种到已灭菌的工厂化生产培养基上，置于27℃培养室中暗培养6个月，采收桑黄子实体；暗培养过程中培养基湿度68%，空气湿度70%，培养室要经常开门开窗通风换气，以保证充足的氧气供应量，要求室内无光；

（5）干燥：采收的桑黄子实体在60℃恒温干燥箱里干燥12h，使桑黄子实体含水量达到1.3%以下。

实例结果：湿重：96.5g/斤（培养基），干重22.6g/斤（培养基）。

以麦麸为培养原料培养桑黄，使用一定的方法提取其中的活性成分，含量为：多糖含量：3.68mg/g ；黄酮含量：0.39mg/g ；三萜含量：0.47mg/g。

应当理解的是，本说明书未详细阐述的部分都属于现有技术。上述针对较佳实施例的描述较细致，但不能因此认为是对本发明专利保护范围的限制。

Claims (4)

1.一种用于桑黄子实体的工厂化栽培的固体菌种扩大培养基，其特征在于培养基原料包括：10-50g／L玉米粉，10-50g/L麦芽糖，0.5-5g/L蛋白胨，O.1-2.0g/L MgSO4，1-6g/LKH2P04， 15-25g／L琼脂，余量水，pH自然。

2.一种用于桑黄子实体的工厂化栽培的液体菌种扩大培养基，其特征在于培养基原料包括：30-50g／L葡萄糖,5-15g/L酵母粉,1-5g／L MgSO4,1-5g／L KH2PO4,1-5g／L柠檬酸三铵,1-5g／L桑枝水提物,O.05-3g／L维生素B1，余量水，pH自然。

3.一种用于桑黄子实体的工厂化栽培的工厂化生产培养基，其特征在于培养基原料包括：暗培养基重量百分比计，40-50%无霉变 粮食种子，40-50% 蒸馏水，0.1-3.0% MgSO4,0.1-3.0% KH2P04，1-10% 桑枝水提物，pH自然，所述的粮食种子为大米、小米、高粱、小麦、燕麦、玉米中的一种。

4.一种桑黄子实体的工厂化栽培方法，其特征在于其包括如下具体步骤：

（1）菌种：桑黄菌种，保存于PDA斜面培养基上；

（2）种子制备：在适合桑黄生长的条件下，在液体种子培养基中培养桑黄菌丝至对数生长期，获得液体桑黄种子；或者在固体种子培养基中培养桑黄菌丝，获得固体桑黄种子；其具体步骤如下：

保存菌种的活化：菌种活化用的固体种子培养基采用胡萝卜琼脂固体培养基，接种桑黄斜面菌种后温度28℃，暗培养8-12天；

固体菌种的扩大培养：固体菌种扩大培养基采用的成分为10-20g／L玉米粉，10-20g/L麦芽糖，0.5-1g/L蛋白胨，O.1-0.6g/L MgSO4，1-4g/L KH2P04， 15-25g／L琼脂，余量水，pH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度25℃，最后获得供生产车间足够数量和优质质量的固体桑黄种子；

液体菌种的扩大培养：液体菌种扩大培养基采用的成分为30-50g／L葡萄糖,5-15g/L酵母粉,1-5g／L MgSO4,1-5g／L KH2PO4,1-5g／L柠檬酸三铵,1-5g／L桑枝水提物,O.05-3g／L维生素B1, 余量水，PH自然；将活化的桑黄菌种接种后，培养温度20-30℃，转速120-130rpm，最后获得供生产车间足够数量的优质质量的液体桑黄种子；

（3）工厂化生产培养基制备：暗培养基重量百分比计，它含有：40-50%无霉变 粮食种子，40-50% 蒸馏水，0.1-3.0% MgSO4, 0.1-3.0% KH2P04，1-10% 桑枝水提物，将以上培养基成分按照所述比例混合均匀，加盖密封好后，在121℃，103.4kPa灭菌1h，所述的粮食种子为大米、小米、高粱、小麦、燕麦、玉米中的一种；

（4）接种、培养管理、采收：在无菌环境下，将制得的液体桑黄种子或固体桑黄种子接种到已灭菌的工厂化生产培养基上，置于24-28℃培养室中暗培养6个月，采收桑黄子实体；暗培养过程中培养基湿度62%-68%，空气湿度60%-70%，培养室要经常开门开窗通风换气，以保证充足的氧气供应量，要求室内无光；

（5）干燥：采收的桑黄子实体在50℃-60℃恒温干燥箱里干燥12h，使桑黄子实体含水量达到1.3%以下。