CN108226329A - L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法 - Google Patents

L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108226329A
CN108226329A CN201711421154.8A CN201711421154A CN108226329A CN 108226329 A CN108226329 A CN 108226329A CN 201711421154 A CN201711421154 A CN 201711421154A CN 108226329 A CN108226329 A CN 108226329A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
prolineamides
ethanol solution
dissolved
triethylamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711421154.8A
Other languages
English (en)
Inventor
包策
应燕飞
王臻
朱国荣
屠勇军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201711421154.8A priority Critical patent/CN108226329A/zh
Publication of CN108226329A publication Critical patent/CN108226329A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种L‑脯氨酰胺的液相色谱分析方法，包括以下步骤：分别精密量取L‑脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到L‑脯氨酰胺衍生物溶液；将所述L‑脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。本发明的液相色谱分析方法能够准确灵敏地检测L‑脯氨酰胺和D‑脯氨酰胺。

Description

L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法。
背景技术
L-脯氨酰胺是合成维格列汀(Vildagliptin)的重要手性中间体，其对映异构体D-脯氨酰胺通常存在于市售的L-脯氨酰胺产品中，两者的结构式分别如下：
L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的紫外吸收均较弱，常规的带紫外检测器的高效液相色谱仪(HPLC)无法灵敏地检测L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量，存在样品不易被检测的问题。因此，有必要研究能够准确灵敏地检测L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量的分析方法，以便能够在后续的维格列汀合成工艺中有效控制手性异构体的含量。
发明内容
为克服上述问题，本发明提供了一种灵敏、高效的L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法，所述方法包括以下步骤：
1)分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，即得L-脯氨酰胺衍生物溶液；
2)将L-脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。
在一个实施方案中，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：
将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备L-脯氨酰胺溶液；
将衍生试剂溶解于乙腈中以制备衍生试剂溶液；
将三乙胺溶解于乙醇中以制备三乙胺乙醇溶液；
将二乙胺溶解于乙醇中以制备二乙胺乙醇溶液；
将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备三氟乙酸乙醇溶液。
在一个实施方案中，进行上述色谱分析的色谱仪器及条件为：
检测仪器：高效液相色谱仪，配备紫外检测器；
色谱条件：
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IC 4.6×250mm,5um；流动相：正己烷-乙醇(40/60(v/v))；检测波长：262nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样体积：10μL；样品盘温控：15℃；运行时间：30min；稀释液：0.1％的三氟醋酸/乙醇混合液。
在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)，其结构式如下：
进一步地，所述衍生试剂FMOC-Cl与L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺反应制备其对应的衍生物的原理如下：
另一方面，本发明还提供了衍生试剂用于L-脯氨酰胺的液相色谱分析的用途。
在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。
另一方面，本发明还提供了L-脯氨酰胺衍生物，其具有如下结构：
又一方面，本发明还提供了化合物的制备方法，包括以下步骤：
分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到所述化合物。
在一个实施方案中，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：
将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备所述L-脯氨酰胺溶液；
将衍生试剂溶解于乙腈中以制备所述衍生试剂溶液；
将三乙胺溶解于乙醇中以制备所述三乙胺乙醇溶液；
将二乙胺溶解于乙醇中以制备所述二乙胺乙醇溶液；
将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备所述三氟乙酸乙醇溶液。
在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。
本发明的有益效果在于：衍生试剂FMOC-Cl能将待测L-脯氨酰胺样品及其中含有的对映异构体D-脯氨酰胺在温和条件下在短时间内完全转化为其衍生物，所述衍生物紫外吸收较大，最大吸收波长达到262nm，而且所述衍生物在手性色谱中分离度较高，符合样品衍生化要求。
附图说明
图1为供试品衍生物溶液的HPLC谱图。
具体实施方案
检测仪器：高效液相色谱仪，配备紫外检测器
色谱条件：
色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IC 4.6×250mm,5um
流动相：正己烷-乙醇(40/60(v/v))
检测波长：262nm
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样体积：10μL
样品盘温控：15℃
运行时间：30min
溶液制备：
稀释液：准确移取1.0ml三氟醋酸于1000ml乙醇中，混匀。
供试品溶液：准确称取50mg L-脯氨酰胺样品于25ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
FMOC-Cl溶液：准确称取15mg FMOC-Cl样品溶于5ml乙腈中，混匀。(密封，4℃条件下保存，现用现配)。
1％三乙胺乙醇溶液：准确移取1.0ml三乙胺于100ml乙醇中，混匀。
1％二乙胺乙醇溶液：准确移取1.0ml二乙胺于100ml乙醇中，混匀。
1％三氟醋酸乙醇溶液：准确移取1.0ml三氟醋酸于100ml乙醇中，混匀。
空白溶液：分别用移液枪精密量取50μl稀释液、50μl 1％三乙胺乙醇溶液、200μlFMOC-Cl溶液置于衍生反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应5min；再用移液枪精密量取250μl 1％二乙胺乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应1min；再分别精密量取300μl 1％三氟醋酸乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，即得。
供试品衍生物溶液：分别用移液枪精密量取50μl供试品溶液、50μl 1％三乙胺乙醇溶液、200μl FMOC-Cl溶液置衍生反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应5min；再用移液枪精密量取250μl 1％二乙胺乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，于室温条件下反应1min；再分别精密量取300μl 1％三氟醋酸乙醇溶液于上述反应瓶中，加盖密封，涡旋混匀15s，即得。
分别注入空白溶液和供试品衍生物溶液于高效液相色谱仪中，分别记录色谱图。供试品衍生物溶液的HPLC谱图见图1，其中D-脯氨酰胺衍生物(杂质)的含量按照峰面积归一化计算。

Claims (10)

1.一种L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法，包括以下步骤：
1)分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到L-脯氨酰胺衍生物溶液；
2)将所述L-脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：
将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备所述L-脯氨酰胺溶液；
将衍生试剂溶解于乙腈中以制备所述衍生试剂溶液；
将三乙胺溶解于乙醇中以制备所述三乙胺乙醇溶液；
将二乙胺溶解于乙醇中以制备所述二乙胺乙醇溶液；
将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备所述三氟乙酸乙醇溶液。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，用于色谱分析的流动相选自正己烷/乙醇，体积比为40:60。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述稀释液采用0.1％的三氟醋酸的乙醇溶液。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述L-脯氨酰胺衍生物溶液的紫外检测波长为262nm。
7.衍生试剂用于L-脯氨酰胺的液相色谱分析的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。
9.一种L-脯氨酰胺衍生物，其具有如下结构：
10.化合物的制备方法，包括以下步骤：
分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，即得。
CN201711421154.8A 2017-12-25 2017-12-25 L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法 Pending CN108226329A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711421154.8A CN108226329A (zh) 2017-12-25 2017-12-25 L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711421154.8A CN108226329A (zh) 2017-12-25 2017-12-25 L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108226329A true CN108226329A (zh) 2018-06-29

Family

ID=62648749

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711421154.8A Pending CN108226329A (zh) 2017-12-25 2017-12-25 L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108226329A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112881571A (zh) * 2021-02-22 2021-06-01 江苏沿海化学品检测技术服务有限公司 一种高效液相色谱法的Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手性检测方法
WO2022121383A1 (zh) * 2020-12-08 2022-06-16 海南通用三洋药业有限公司 一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和l-脯氨酰胺含量的方法
CN114646701A (zh) * 2022-03-01 2022-06-21 浙江国邦药业有限公司 一种l-脯胺酰胺中有关物质的hplc测试方法
CN115267021A (zh) * 2022-07-27 2022-11-01 诚达药业股份有限公司 一种l-脯氨酰胺有关物质的液相色谱分析方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011092687A1 (en) * 2010-01-28 2011-08-04 Mapi Pharma Hk Limited Process for the preparation of darunavir and darunavir intermediates
CN104326961A (zh) * 2014-11-20 2015-02-04 海南中和药业有限公司 一种维格列汀的合成工艺
CN104788546A (zh) * 2015-03-12 2015-07-22 吉尔生化（上海）有限公司 一种含有24个氨基酸残基的线性直链肽的制备方法
CN105319309A (zh) * 2015-04-23 2016-02-10 北京紫萌同达科技有限公司 一种甘氨酰-l-谷氨酰胺手性异构体的分离检测方法
CN105806963A (zh) * 2014-12-29 2016-07-27 北大方正集团有限公司 L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011092687A1 (en) * 2010-01-28 2011-08-04 Mapi Pharma Hk Limited Process for the preparation of darunavir and darunavir intermediates
CN104326961A (zh) * 2014-11-20 2015-02-04 海南中和药业有限公司 一种维格列汀的合成工艺
CN105806963A (zh) * 2014-12-29 2016-07-27 北大方正集团有限公司 L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法
CN104788546A (zh) * 2015-03-12 2015-07-22 吉尔生化（上海）有限公司 一种含有24个氨基酸残基的线性直链肽的制备方法
CN105319309A (zh) * 2015-04-23 2016-02-10 北京紫萌同达科技有限公司 一种甘氨酰-l-谷氨酰胺手性异构体的分离检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KELI OU 等: "Improved high-performance liquid chromatography of amino acids derivatised with 9-fluorenylmethyl chloroformate", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
RUUD A. BANK 等: "Amino Acid Analysis by Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography: Improved Derivatization and Detection Conditions with 9-Fluorenylmethyl Chloroformate", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》 *
李清寒 等: "L-脯氨酰胺衍生物的合成及在不对称催化反应中的应用", 《西南民族大学学报自然科学版》 *
许艳杰 等: "9-芴甲氧羰基氨基保护试剂的合成与分析", 《精细化工》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022121383A1 (zh) * 2020-12-08 2022-06-16 海南通用三洋药业有限公司 一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和l-脯氨酰胺含量的方法
CN112881571A (zh) * 2021-02-22 2021-06-01 江苏沿海化学品检测技术服务有限公司 一种高效液相色谱法的Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手性检测方法
CN114646701A (zh) * 2022-03-01 2022-06-21 浙江国邦药业有限公司 一种l-脯胺酰胺中有关物质的hplc测试方法
CN114646701B (zh) * 2022-03-01 2023-09-29 浙江国邦药业有限公司 一种l-脯氨酰胺中有关物质的hplc测试方法
CN115267021A (zh) * 2022-07-27 2022-11-01 诚达药业股份有限公司 一种l-脯氨酰胺有关物质的液相色谱分析方法
CN115267021B (zh) * 2022-07-27 2024-04-09 诚达药业股份有限公司 一种l-脯氨酰胺有关物质的液相色谱分析方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108226329A (zh) L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法
CN107085068A (zh) 衍生化hplc－dad法测定药物中小分子脂肪胺的方法
CN110031557B (zh) 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯、5-异喹啉磺酸乙酯的检测方法
CN103698424A (zh) 一种测定难溶性铝盐药物中有机溶剂的检测方法
CN113671077A (zh) 丙烯酰氯及其有关物质检测方法
CN108037209A (zh) 替格瑞洛手性中间体的液相色谱分析方法
CN106814144B (zh) 一种富马酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的测定分析方法
CN102539592A (zh) 检测体液中极长链脂肪酸含量的方法
CN108982694B (zh) 一种n-溴代丁二酰亚胺有关物质的检测方法
CN110954629A (zh) 一种呋塞米中糠胺含量测定的控制方法
CN103134886A (zh) 一种hplc法分析分离伊班膦酸钠及杂质的方法
CN107589197B (zh) Hplc法分离测定伊索克酸及其有关物质的方法
CN110907541B (zh) 同时测定L-α-甘油磷酰胆碱中R-环氧丙醇和R-3-氯-1,2-丙二醇残留量方法
CN112630314B (zh) 一种l-丙氨酸异丙酯盐酸盐与其对映异构体的分离方法
CN108088929B (zh) 一种左旋苯甘氨酸乙基邓钾盐的分析方法
CN110261496B (zh) 一种四氢姜黄素的含量检测方法
CN101762646B (zh) 一种测定拉克替醇含量的方法
CN109490461A (zh) 达格列净中间体a中葡萄糖酸内酯残留量的检测方法
CN114200067B (zh) 一种6-溴-3-羟基吡嗪-2-甲酰胺及杂质的高效液相色谱分析方法
CN111257441B (zh) 一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法
CN107589201A (zh) 一种反应‑顶空气相色谱测定氨基酸含量的方法
CN105738500B (zh) 一种无对照品的化学定量分析方法
CN109521120B (zh) Gc-aed的无关校正曲线法（cic法）定量测定dntf含量
CN108088948A (zh) Hplc测定复方柳安咖注射液中水杨酸钠含量的方法
CN115524407A (zh) 一种有机酸的分离检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180629

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication