CN111257441B - 一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物分析检测领域，具体涉及一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法。本发明的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，包括如下步骤：溶解待测样品得待测溶液；取待测溶液进行高效液相色谱分析，得到合成工艺杂质的含量；高效液相色谱分析采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，并采用梯度洗脱，流动相A为pH为2.5～3.5、0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液，流动相B为体积比为75～85：15～25的乙腈‑甲醇混合溶液。该测定方法能够实现应用同一分析方法，准确的分离检测帕瑞昔布钠原料药或相关产品中多种杂质，覆盖面较广，尤其是能够实现4种过度磺酰化杂质的检测；同时本发明方法分离效果好、灵敏度和准确性高，可有效的评价及控制帕瑞昔布钠的质量。

Description

一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析检测领域，具体涉及一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法。
背景技术
帕瑞昔布钠(parecoxib sodium)，化学名为N-((4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯基)磺酰基)丙酰胺钠盐，是一种特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂，制剂剂型为冻干粉针，是首个可通过静脉注射和肌肉注射给药的COX-2抑制剂。原研药品于2008年在我国获准上市，主要用于手术后疼痛的短期治疗。
目前，在药物合成领域，一种常见的帕瑞昔布钠的合成方法如下所示：
Figure BDA0002352328680000011
该合成方法包括：以PRX-A为起始物料，经磺酰化反应、氨化反应、酰胺化反应、成盐反应以及必要的精制纯化工序，制备获得帕瑞昔布钠产品。在帕瑞昔布钠合成过程中，受工艺过程控制、产品特性等因素影响，不可避免的会在产品中引入合成工艺杂质，包括未反应完全的起始原料，以及反应副产物如中间体、异构体、聚合物、过度磺酰化产物等，上述杂质的存在将影响帕瑞昔布钠药品质量，进而影响产品安全性及有效性。
经研究发现，合成所得帕瑞昔布钠产品中，过度磺酰化杂质以及反应原料是极有可能存在的，但目前的帕瑞昔布钠有关物质的检测方法，并不涉及上述工艺杂质的全面检测。如申请公布号为CN108828127A的发明专利申请公开了一种检测帕瑞昔布钠及合成中间体中有关物质的液相色谱方法，其分别以五氟苯基键合硅胶和十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，并改变洗脱梯度分为两次测定帕瑞昔布钠中间体伐地昔布和帕瑞昔布中的有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ，采用其方法，虽然能检测较多种工艺杂质，但是其方法数量多、分析成本高，并且其方法对合成过程中存在的5个位置异构体有较强的分离能力，但是却不涉及帕瑞昔布钠中未反应完全的起始物料的检测，同时对反应中极有可能存在的过度磺酰化衍生杂质也并未进行综合全面的检测。
而在药品研发及生产的质量控制中，使用高效、准确、灵敏的工艺杂质检测手段，占用尽可能少的检测资源并实现尽可能复杂的相关物质的检测控制，不论从质量源于设计的研发理念，还是精细化生产理念，都是很有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，能够采用一种方法实现多种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测。
为实现上述目的，本发明的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法的具体技术方案为：
帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，包括如下步骤：
1)溶解帕瑞昔布钠待测样品得待测溶液；
2)取待测溶液进行高效液相色谱分析，得到合成工艺杂质的含量。
所述高效液相色谱分析的分析条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A：pH为2.5～3.5、0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液，流动相B：体积比为75～85：15～25的乙腈-甲醇混合溶液；洗脱梯度程序包括：0min，流动相A 60～70vol％，流动相B40～30vol％；30min，流动相A 23～27vol％，流动相B 77～73vol％；41min，流动相A60～70vol％，流动相B 40～30vol％。
所述的帕瑞昔布钠合成工艺杂质为帕瑞昔布钠合成过程中产生的工艺杂质。
步骤2)中，进行高效液相色谱分析，得到合成工艺杂质的含量的具体过程是：将待测溶液进行高效液相色谱分析，得到合成工艺杂质的保留时间和色谱峰，将保留时间与合成工艺杂质标准品进行比对，得到各个合成工艺杂质对应的色谱峰，并将峰面积带入相应的合成工艺杂质的标准工作曲线，通过计算得到合成工艺杂质的含量。
所述的帕瑞昔布钠待测样品包括帕瑞昔布钠原料药、制剂产品、合成粗产品。
关于步骤1)中的样品前处理，采用溶剂溶解帕瑞昔布钠待测样品得到待测溶液，其中所使用的溶剂可以溶解待测的合成工艺杂质。作为优选方案，可以采用乙腈-水混合溶液作为溶剂，优选的，乙腈-水混合溶液中乙腈和水的体积比为40:60。另外，为了提高检测准确度并便于定量计算，每1mL待测溶液中含有0.5mg帕瑞昔布钠待测样品。
进一步的，本发明的检测方法，所针对的合成工艺杂质是结合帕瑞昔布钠合成工艺过程、经过理论分析和实际检测发现并总结的，在帕瑞昔布钠原料药或相关产品质量研究中需要进行研究的杂质。本发明的帕瑞昔布钠合成工艺杂质可分为合成反应原料和合成反应副产物，其中合成反应副产物包括中间体，异构体，聚合物，过度磺酰化产物以及非常规反应产物。本发明中帕瑞昔布钠合成工艺杂质包括但不限于表1所示化合物：
表1帕瑞昔布钠合成工艺杂质的结构、杂质类型及简要说明
Figure BDA0002352328680000031
Figure BDA0002352328680000041
本发明的技术方案采用双流动相，其中流动相A采用pH为2.5～3.5、0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液，流动相B采用体积比为75～85：15～25的乙腈-甲醇混合溶液，并采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，配合特定条件的梯度洗脱，能够在检测帕瑞昔布钠的基础上，实现帕瑞昔布钠待测样品中10种合成工艺杂质的同时检测。具体使用时，可采用本发明方法同时检测上述10种合成工艺杂质，也可以针对其中的一种或部分合成工艺杂质进行检测，具体应用时根据实际检测需求使用即可。
本发明提供的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，能够实现应用同一分析方法，准确的分离检测帕瑞昔布钠待测样品中多种合成工艺杂质，覆盖范围广。尤其是，本发明的检测方法，能实现4种过度磺酰化衍生杂质PRX-E、PRX-K、PRX-Q、PRX-U的有效分离，还能够同时检测合成反应原料。在帕瑞昔布钠合成过程中，由于需要使用大量磺酰化试剂进行反应，因此极有可能产生二取代磺酰化杂质，由于化学结构类似(如PRX-E和PRX-Q互为同分异构体，PRX-K和PRX-U互为同分异构体)，为了准确判断杂质类型并进行控制，实现多种过度磺酰化杂质同时分离十分必要。而本发明在实现多个过度磺酰化杂质分离检测目的的同时，还进一步实现了反应原料、反应中间体等其他工艺杂质与上述过度磺酰化杂质的分离检测，具有较好的技术优势。
作为进一步优化的方案，采用本发明的检测方法同时检测4种过度磺酰化产物。
作为进一步优化的方案，采用本发明的检测方法同时检测4种过度磺酰化产物和合成反应原料。
作为进一步优化的方案，采用本发明的检测方法同时检测上述10种合成工艺杂质。
本发明检测方法中，流动相A采用pH为2.5～3.5、0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液，所述磷酸氢二钠溶液采用磷酸调节pH为2.5～3.5。优选的，所述磷酸氢二钠溶液的pH为3。
优选的，所述的乙腈-甲醇混合溶液的体积比为乙腈：甲醇＝80：20。
所述高效液相色谱分析时采用的流动相的流速为0.8～1.2mL/min，进一步优选为1.0mL/min。所述高效液相色谱分析采用的检测器为紫外检测器，检测波长为215nm。
所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的规格为4.6mm*250mm，填料粒径为5μm；具体的，所选用的色谱柱可商业购买获得，色谱柱型号包括YMC-Pack ODS-AQ(4.6*250mm，5μm)、Welch Ultimate XB-C18(4.6*250mm，5μm)以及类似色谱柱，选择不同色谱柱并不妨碍本发明所提供的方法的实施。高效液相色谱分析时色谱柱的柱温为25～35℃，进一步优选为30℃。
本发明的检测方法，分离效果好、灵敏度和准确性高。各合成工艺杂质的定量限为0.10～0.30ng，低于测试样品浓度的0.01％；各合成工艺杂质的检出限为0.05～0.15ng，低于测试样品浓度的0.005％；同时，在0.01～5.0μg/mL浓度范围内，各杂质浓度与峰面积线性良好，相关系数大于0.999；测定高中低3个浓度9份样品加样回收率，均在90％～110％范围内，测定结果RSD小于5％，精密度及准确度良好；并且，通过改变流速、柱温、流动相比例、更换不同厂家色谱柱及色谱仪等条件，考察杂质检出能力、分离能力，各条件下均无明显变化，说明本发明方法耐用性较好。
采用本发明方法检测帕瑞昔布钠原料药、制剂产品或合成粗产品时，通过检测帕瑞昔布钠样品中合成工艺杂质含量，可有效的评价及控制帕瑞昔布钠的生产工艺和产品品质，实现帕瑞昔布钠精确的质量控制，用以保障药品完善的安全性评价及质量可控性评价。
附图说明
图1为本发明实施例1的液相色谱图；
图2为本发明实施例2的液相色谱图；
图3为本发明实施例3的液相色谱图；
图4为本发明实施例4的液相色谱图；
图5为本发明对比例1的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步说明。以下实施例中，各合成工艺杂质标准品的纯度为：PRX-A(纯度99.93％)，PRX-B(纯度99.07％)，PRX-C(纯度92.95％)，PRX-E(纯度98.10％)，PRX-F(纯度99.30％)，PRX-I(纯度99.50％)，PRX-K(纯度99.50％)，PRX-N(纯度99.70％)，PRX-Q(纯度97.40％)，PRX-U(纯度99.30％)。
下述实施例中采用外标法即标准曲线法测定样品中帕瑞昔布钠合成工艺杂质的含量。标准工作溶液的配制包括合成工艺杂质的单标储备液的配制和系列标准工作溶液的配制，配制成如表2所示的7级标准工作溶液。
表2系列标准工作溶液的浓度(μg/mL)
杂质 1 2 3 4 5 6 7
PRX-A 0.030 0.254 0.508 0.762 1.016 2.539 5.079
PRX-B 0.015 0.258 0.516 0.774 1.032 2.580 5.160
PRX-C 0.019 0.234 0.467 0.701 0.935 2.337 4.674
PRX-E 0.010 0.245 0.490 0.735 0.981 2.451 4.903
PRX-F 0.014 0.234 0.468 0.702 0.936 2.340 4.679
PRX-I 0.015 0.248 0.496 0.744 0.992 2.481 4.961
PRX-K 0.016 0.262 0.524 0.786 1.048 2.621 5.242
PRX-N 0.014 0.237 0.474 0.711 0.948 2.369 4.739
PRX-Q 0.010 0.240 0.480 0.720 0.960 2.401 4.801
PRX-U 0.010 0.247 0.493 0.740 0.986 2.466 4.932
将系列标准工作溶液进行高效液相色谱分析，以目标物的色谱峰面积对其浓度进行回归分析，得到标准曲线的回归方程。后续测定中将待测溶液的高效液相色谱分析结果代入标准曲线，计算得到待测溶液中目标物的含量。
实施例1
本实施例的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，采用如下步骤：
(1)取帕瑞昔布钠待测样品适量，精密称定，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg帕瑞昔布钠待测样品的溶液，作为待测溶液；
(2)取待测溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，根据标准曲线法计算各工艺杂质的含量。
液相检测的色谱条件为：色谱柱：YMC-Pack ODS-AQ(4.6×250mm，5μm)；流动相A：0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至3.0)；流动相B：乙腈-甲醇(75:25，v/v)；检测波长：215nm；柱温：30℃；流速：0.8mL/min；进样体积：10μL。洗脱程序如下表3，其中0～41min为合成工艺杂质的洗脱梯度，41～55min，是为了保持色谱柱的洁净度而增加的等度洗脱。
表3实施例1洗脱程序
Figure BDA0002352328680000071
为有效说明实施例1的分离效果，分别取帕瑞昔布钠(PRX)、PRX-A、PRX-B、PRX-C、PRX-E、PRX-F、PRX-I、PRX-K、PRX-N、PRX-Q、PRX-U标准品各适量，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并稀释制成每1mL中含帕瑞昔布钠0.5mg，杂质各2.5μg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照实施例1的液相色谱分析条件进行测定，记录色谱图。实施例1的供试品色谱图见图1，实验数据见表4。
表4实施例1的数据统计表
归属 保留时间 面积 分离度 拖尾因子 理论塔板数
PRX-C 8.778 78080 -- 1.127 26041
PRX-E 10.060 41886 5.723 1.084 30469
PRX-Q 10.542 18645 2.099 1.058 33953
PRX-B 19.479 46084 36.217 1.045 86675
PRX-U 20.524 37074 3.944 1.007 95813
PRX-I 21.463 37354 3.559 1.035 106722
PRX-K 22.060 30115 2.260 1.031 110311
PRX-N 22.529 46095 1.757 1.026 113376
PRX 25.550 23243036 11.013 1.043 132189
PRX-F 28.573 74851 10.512 0.995 151191
PRX-A 38.693 28756 33.112 1.002 237832
实施例2
本实施例的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，采用如下步骤：
(1)取帕瑞昔布钠待测样品适量，精密称定，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg帕瑞昔布钠待测样品的溶液，作为待测溶液；
(2)取待测溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，根据标准曲线法计算各工艺杂质的含量。
液相检测的色谱条件为：色谱柱：Welch Ultimate XB-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相A：0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至3.2)；流动相B：乙腈-甲醇(80:20，v/v)；检测波长：215nm；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL。洗脱程序如下表5，其中0～41min为合成工艺杂质的洗脱梯度，41～55min，是为了保持色谱柱的洁净度而增加的等度洗脱。
表5实施例2洗脱程序
Figure BDA0002352328680000081
为有效说明实施例2的分离效果，分别取帕瑞昔布钠(PRX)、PRX-A、PRX-B、PRX-C、PRX-E、PRX-F、PRX-I、PRX-K、PRX-N、PRX-Q、PRX-U标准品各适量，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并稀释制成每1mL中含帕瑞昔布钠0.5mg，杂质各2.5μg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照实施例2的液相色谱分析条件进行测定，记录色谱图。实施例2的供试品色谱图见图2，实验数据见表6。
表6实施例2的数据统计表
归属 保留时间 面积 分离度 拖尾因子 理论塔板数
PRX-C 8.870 13871 -- -- 20770
PRX-E 10.074 32581 4.797 1.009 24833
PRX-Q 10.558 35616 1.881 1.006 26516
PRX-B 19.505 27920 31.522 0.989 64024
PRX-U 20.495 30156 3.240 0.983 73518
PRX-I 21.435 29309 3.127 0.984 82247
PRX-K 22.030 22947 1.967 0.991 82750
PRX-N 22.525 37590 1.603 0.986 83861
PRX 25.523 20410945 9.445 0.999 99501
PRX-F 28.833 22798 10.479 0.982 140196
PRX-A 38.687 27151 28.857 0.985 170319
实施例3
本实施例的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，采用如下步骤：
(1)取帕瑞昔布钠待测样品适量，精密称定，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg帕瑞昔布钠待测样品的溶液，作为待测溶液；
(2)取待测溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，根据标准曲线法计算各工艺杂质的含量。
液相检测的色谱条件为：色谱柱：YMC-Pack ODS-AQ(4.6×250mm，5μm)；流动相A：0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至2.8)；流动相B：乙腈-甲醇(85:15，v/v)；检测波长：215nm；柱温：35℃；流速：1.2mL/min；进样体积：10μL。洗脱程序如下表7，其中0～41min为合成工艺杂质的洗脱梯度，41～55min，是为了保持色谱柱的洁净度而增加的等度洗脱。
表7实施例3洗脱程序
Figure BDA0002352328680000091
为有效说明实施例3的分离效果，分别取帕瑞昔布钠(PRX)、PRX-A、PRX-B、PRX-C、PRX-E、PRX-F、PRX-I、PRX-K、PRX-N、PRX-Q、PRX-U标准品各适量，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并稀释制成每1mL中含帕瑞昔布钠0.5mg，杂质各2.5μg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照实施例3的液相色谱分析条件进行测定，记录色谱图。实施例3的供试品色谱图见图3，实验数据见表8。
表8实施例3的数据统计表
归属 保留时间 面积 分离度 拖尾因子 理论塔板数
PRX-C 8.833 13543 -- -- 21798
PRX-E 10.072 32363 5.074 1.016 26193
PRX-Q 10.556 35331 1.930 1.011 27946
PRX-B 19.507 27641 32.479 0.992 68284
PRX-U 20.496 29969 3.342 0.988 78299
PRX-I 21.438 29025 3.231 0.984 87089
PRX-K 22.036 22764 2.030 0.992 87400
PRX-N 22.534 37290 1.660 0.990 89354
PRX 25.527 20224773 9.737 1.001 106249
PRX-F 28.751 22807 10.539 0.983 148350
PRX-A 38.694 26997 30.001 0.993 180508
实施例4
本实施例的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，采用如下步骤：
(1)取帕瑞昔布钠待测样品适量，精密称定，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg帕瑞昔布钠待测样品的溶液，作为待测溶液；
(2)取待测溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，根据标准曲线法计算各工艺杂质的含量。
液相检测的色谱条件为：色谱柱：YMC-Pack ODS-AQ(4.6×250mm，5μm)；流动相A：0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至3.0)；流动相B：乙腈-甲醇(80:20，v/v)；检测波长：215nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL。洗脱程序如下表9，其中0～41min为合成工艺杂质的洗脱梯度，41～55min，是为了保持色谱柱的洁净度而增加的等度洗脱。
表9实施例4洗脱程序
Figure BDA0002352328680000101
为有效说明实施例4的分离效果，分别取帕瑞昔布钠(PRX)、PRX-A、PRX-B、PRX-C、PRX-E、PRX-F、PRX-I、PRX-K、PRX-N、PRX-Q、PRX-U标准品各适量，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并稀释制成每1mL中含帕瑞昔布钠0.5mg，杂质各2.5μg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照实施例4的液相色谱分析条件进行测定，记录色谱图。实施例4的供试品色谱图见图4，实验数据见表10。
表10实施例4的数据统计表
归属 保留时间 面积 分离度 拖尾因子 理论塔板数
PRX-C 8.752 13359 -- -- 22969
PRX-E 10.060 32092 5.551 1.028 28036
PRX-Q 10.545 34922 2.010 1.025 30217
PRX-B 19.486 27391 33.984 1.003 75564
PRX-U 20.473 29350 3.511 0.991 86301
PRX-I 21.414 28918 3.389 0.993 95844
PRX-K 22.010 22694 2.127 0.998 96341
PRX-N 22.516 37065 1.771 0.997 98588
PRX 25.510 20024094 10.224 1.010 116444
PRX-F 28.600 22674 10.616 0.998 163336
PRX-A 38.706 26577 32.101 0.993 199609
对比例1
参考注射用帕瑞昔布钠进口药品注册标准(JX20110120)中公开的检测方法，选用如下条件对各杂质进行检测分离，其操作步骤为：
(1)分别取帕瑞昔布钠(PRX)、PRX-A、PRX-B、PRX-C、PRX-E、PRX-F、PRX-I、PRX-K、PRX-N、PRX-Q、PRX-U标准品各适量，加乙腈-水(40:60，v/v)溶解并稀释制成每1mL中含帕瑞昔布钠0.5mg，杂质各2.5μg的溶液，作为供试品溶液。
(2)取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
液相色谱条件为：色谱柱：YMC-Pack ODS-AQ(4.6*150mm，5μm)；流动相A：0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至3.0)；流动相B：乙腈；检测波长：215nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样体积：20μL。洗脱程序如表11：
表11对比例洗脱程序
时间/分钟 流动相A(％) 流动相B(％)
0.01 60 40
7.00 60 40
55.00 20 80
56.00 60 40
65.00 60 40
对比例待测溶液色谱图见图5，实验数据见表12。
表12对比例的数据统计表
归属 保留时间1 定位时间2 面积 分离度 拖尾因子 理论塔板数
PRX-C 2.979 2.943 141253 -- 1.453 4948
PRX-E 4.230 4.221 126355 6.837 -- 7410
PRX-Q 4.478 4.479 77015 1.227 -- 7396
PRX-B 10.416 10.334 403227 16.338 0.931 6452
PRX-U 11.053 11.001 154348 1.414 -- 13390
PRX-I 12.255 12.405 108885 2.803 -- 10632
PRX-K 12.554 12.044 90784 0.603 -- 9504
PRX-N 13.223 13.005 185897 1.421 1.052 15372
PRX 17.367 / 60351134 9.700 1.046 26361
PRX-F 20.158 19.819 86718 6.802 -- 42148
PRX-A 31.98 32.02 97472 5.030 1.019 85634
注：保留时间1：供试品溶液中的保留时间；定位时间2：各杂质单针定位时间。
由上述数据可知，采用本发明的检测方法能够对上述10种合成工艺杂质实现良好的分离，从而能够更好的对帕瑞昔布钠进行质量研究与控制；而对比例中的方法，对杂质PRX-Q与杂质PRX-E，杂质PRX-U与杂质PRX-B，杂质PRX-K与杂质PRX-I，杂质PRX-N与杂质PRX-K，分离度较差。
实验例
以实施例4的色谱条件进行方法学验证研究，方法学验证试验过程参考《中国药典》方法学验证指导原则，以最低浓度的标准工作溶液计算检出限(S/N＝3)和定量限(S/N＝10)，以各工艺杂质线性浓度重复进样6次，计算测定结果的精密度，同时设置低、中、高三浓度梯度测定方法回收率，并改变柱温、仪器品牌、有机相初始比例、色谱柱测试方法耐用性。本发明方法的检出限，定量限、精密度、回收率和耐用性测定结果见表13～16。
表13本发明检测方法的灵敏度实验数据
Figure BDA0002352328680000121
表14本发明检测方法的精密度实验数据
杂质名称 测定值％ 平均值 RSD％
PRX-C 102.11～103.17 102.5 0.36
PRX-E 102.20～108.97 103.6 2.56
PRX-Q 100.23～100.84 100.5 0.21
PRX-U 99.85～100.57 100.1 0.27
PRX-K 100.73～101.56 101.1 0.27
PRX-N 100.11～102.22 101.3 0.33
PRX-I 103.32～104.57 103.9 0.41
PRX-F 100.40～101.27 100.8 0.37
PRX-A 100.48～101.33 100.8 0.33
表15本发明检测方法的回收率实验数据
杂质 测试范围 回收率％ 平均值 RSD％
PRX-C 50％～150％ 101.91～104.37 102.7 0.86
PRX-E 50％～150％ 102.00～105.29 103.0 1.14
PRX-Q 50％～150％ 99.74～101.92 100.7 0.61
PRX-U 50％～150％ 99.41～101.27 100.2 0.57
PRX-K 50％～150％ 100.73～103.13 101.4 0.67
PRX-N 50％～150％ 99.87～103.11 101.2 1.12
PRX-I 50％～150％ 103.32～108.54 104.8 1.80
PRX-F 50％～150％ 100.40～101.94 101.0 0.42
PRX-A 50％～150％ 100.48～101.43 101.0 0.33
表16本发明检测方法的耐用性测定结果
Figure BDA0002352328680000131
由上述检测结果可知，本发明方法中，
1)各杂质的定量限为0.10～0.30ng，低于供试品浓度的0.01％；各杂质检测限为0.05～0.15ng，低于供试品浓度的0.005％；
2)线性与范围：在0.01～5.0μg/mL浓度范围内，各杂质浓度与峰面积线性良好，相关系数大于0.999；
3)精密度与准确度：测定高中低3个浓度9份样品加样回收率，均在90％～110％范围内，测定结果RSD小于5％，说明本发明方法精密度及准确度良好；
4)耐用性：通过改变流速、柱温、流动相比例、更换不同厂家色谱柱及色谱仪等条件，考察杂质检出能力、分离能力，各条件下均无明显变化，说明本方法耐用性较好。
可见本发明方法具备良好的灵敏度、精密度、准确度及耐用性。

Claims (5)

1.一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)溶解帕瑞昔布钠待测样品得待测溶液；
2)取待测溶液进行高效液相色谱分析，得到合成工艺杂质的含量；
所述高效液相色谱分析的分析条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A：pH为2.5～3.5、0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液，流动相B：体积比为75～85：15～25的乙腈-甲醇混合溶液；洗脱梯度程序包括：0min，流动相A 60～70vol％，流动相B 40～30vol％；30min，流动相A 23～27vol％，流动相B 77～73vol％；41min，流动相A 60～70vol％，流动相B 40～30vol％；
所述帕瑞昔布钠合成工艺杂质包括帕瑞昔布钠合成反应原料和合成反应副产物，所述合成反应原料为：
Figure FDA0003646179970000011
所述合成反应副产物包括如下化合物：
Figure FDA0003646179970000012
所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的型号为YMC-Pack ODS-AQ或Welch Ultimate XB-C18；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的规格为4.6mm*250mm，填料粒径为5μm。
2.如权利要求1所述的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，其特征在于，步骤1)中，采用乙腈-水混合溶液溶解帕瑞昔布钠待测样品。
3.如权利要求1所述的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述待测溶液为每1mL中含0.5mg帕瑞昔布钠待测样品的溶液。
4.如权利要求1所述的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析时采用的流动相的流速为0.8～1.2mL/min。
5.如权利要求1所述的帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析时色谱柱的柱温为25～35℃。
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