CN108208654A - 一种高活性的水果酵素粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种高活性的水果酵素粉及制备方法,即利用植物乳杆菌高密度培养与水果酵素的纯种发酵同时进行的方式,最终所得的发酵液通过离心得到高活性的上清液和高密度的菌泥,然后分别对上清液喷雾干燥、菌泥添加冻干保护剂后进行冷冻干燥,分别得到酵素上清粉和菌粉冻干粉,最后将所得的酵素上清粉和菌粉冻干品均匀混合,即得到高活性的水果酵素粉,最终所得的高活性的水果酵素粉中,活菌数可达2.5~4.3×1011CFU/g,其抗氧化活性VC当量为0.357~0.385mg/g。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵领域涉及一种酵素,具体来说是一种高活性的水果酵素粉的制备方法。
背景技术
根据中国生物发酵产业协会的定义,酵素是指以果蔬或其他动、植物等为原料,采用自然或人工接种微生物发酵工艺,后经提取所制得的具有某些特定功能的发酵制品。酵素不仅保存了发酵原料中原有的营养物质,如多酚类、黄酮类、花青素等,而且通过有益菌的发酵代谢产生了一些新的生物活性成分,如有机酸,氨基酸等。与发酵前相比,微生物的转化使得这些小分子物质更易于人体吸收,此外产品中还含有活性益生菌,这些活性物质的有机组合,使得酵素具有抗氧化、抑制致病菌等多种功能,有利于促进正常细胞的增殖及受损细胞再生,进而调节人体新陈代谢过程,增强免疫力,因而酵素产品对人体具有非常好的保健效果。
现有酵素的生产技术一般都有多种水果、谷物或者菌类等混合自然发酵而成,发酵所需时间过长,且发酵得到的酵素产品中有益菌含量较低,菌活性更是不高,保健功效不够显著。
在产品形式方面,目前市场上销售的酵素食品主要可以分为液体状、膏状、粉剂、片剂四种。从功效和吸收来看,液态酵素优势明显,其次膏状。但从保存、运输和稳定性这个角度看,粉状酵素和片状酵素相对来说比较好,另由于粉剂表面积增大,便于其中的活性成份在人体内的溶解、吸收,更符合产品保存和市场推广的需求,故酵素粉是酵素生产企业重点开发的产品,其应用前景非常广阔。但目前市面上的粉状酵素产品,大都经喷雾干燥而成,产品中不含有或含有数量较低的益生菌,与液体产品相比,难以全面发挥酵素的生物活性,也不满足益生菌产品对于活菌数106CFU/g或106CFU/mL的要求[参考文献(耿铁柱.低聚糖对益生菌饮料活菌数量的影响[D].西南大学,2016.)]
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中的酵素活性不高的技术问题而提供了一种高活性的水果酵素粉的制备方法,该制备方法所得的高活性的水果酵素粉,按每克高活性的水果酵素粉计算,其活菌数为2.5~4.3×1011CFU(CFU为菌落形成单位(CFU,Colony-Forming Units),指单位体积中的细菌群落总数),其抗氧化活性VC当量为0.357~0.385mg。
本发明的技术方案
一种高活性的水果酵素粉的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)、种子液的培养
将冻存的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液解冻,吸取300uL植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液加入30mL MRS肉汤培养基中,进行转培活化,培养12-18h后,得到菌种活化液,然后再控制转速为8000-10000r/min进行离心,所得的沉淀用蒸馏水洗涤2次,最终得到种子液;
上述所得的种子液中,每uL种子液中含有2.1×106~2.6×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
所述的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011,于2017年6月23日保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M 2017366,保藏机构地址:湖北省武汉市武昌珞珈山.武汉大学.保藏中心,邮编:430072;
(2)、水果培养液的制备
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11-12BRIX,得到纯果汁稀释液,然后在得到的纯果汁稀释液中依次加入为纯果汁稀释液体积1.5-3%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.5-0.9%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至6.0-7.0,然后控制温度为95℃进行灭菌15~20min,然后自然冷却至室温得到水果培养液;
所述的纯果汁为纯苹果汁;
(3)、植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011的高密度培养
按体积百分比为1.0-2.0%,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液,然后控制温度为37℃进行恒温发酵培养,当培养液中pH达到4.6-4.7时终止发酵,得到发酵液;
上述发酵后所得的发酵液中,植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCCNo.10011的密度可达2.1~4.4×109CFU/mL;
(4)、发酵液后处理
将步骤(3)所得的发酵液控制转速为3500r/min离心15min,分别收集离心所得的沉淀和上清液;
(5)、干燥处理
将步骤(4)离心后所得的沉淀与冻干保护剂进行混合均匀,然后控制温度为-100-(-60)℃进行预先冷冻12-24h,然后再控制温度为-80℃,压力为0.02Mpa进行真空冷冻干燥36-60h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1:5-15,所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为80-120:80-120:10:10;
将步骤(4)离心后所得的上清液控制温度为160-180℃进行喷雾干燥,得到酵素上清粉末;
(6)、将步骤(5)所得的酵素上清粉和菌粉冻干品混合均匀,即得高活性的水果酵素粉。
上述制备方法所得的高活性的水果酵素粉,按每克高活性的水果酵素粉计算,其活菌数为2.5~4.3×1011CFU,含有抗氧化活性VC当量为0.357mg~0.385mg。
本发明仅以植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011进行举例说明,但不限定其他乳酸杆菌在本发明中的应用。
本发明的有益技术效果
本发明的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,由于利用植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011高密度培养与水果酵素的纯种发酵同时进行的方式进行生产,最终所得的发酵液通过离心得到高活性的上清液和高密度的菌泥,然后分别对上清液喷雾干燥、菌泥添加冻干保护剂后进行冷冻干燥,分别得到酵素上清粉和菌粉冻干粉,从而可有效减少植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌体在高密度培养、浓缩过程中的死亡,大大提高植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCCNo.10011菌体的活性,最后将所得的酵素上清粉和菌粉冻干品均匀混合,即得到高活性的水果酵素粉,从而也进一步保证了所得的高活性的水果酵素的功能性稳定有效。
进一步,本发明的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,由于将植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011高密度培养技术与水果酵素的纯种发酵同时进行,然后对所得的发酵液通过离心所得到的上清液和菌泥分别进行干燥处理,从而更好的保护抗氧化性以及植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌体的活性。如利用真空冷冻干燥对菌泥进行浓缩处理,再通过添加合适比例的冻干保护剂进行混合后真空冷冻干燥的改良干燥方法,对植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌体的存活率和抗逆境能力得以最大限度地提高。利用喷雾干燥对上清液进行浓缩升华,得到的酵素上清粉再与所得菌粉冻干品均匀混合,即得到高活性的水果酵素粉。
进一步,本发明的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,最终所得的高活性的水果酵素粉中,活菌数可达2.5~4.3×1011CFU/g,其抗氧化活性VC当量为0.357~0.385mg/g。
附图说明
图1、在517nm波长下检测的不同浓度的VC标准溶液的DPPH自由基清除率情况。
具体实施方式
下面通过具体的实施例并结合附图对本发明进一步阐述,但并不限制本发明。
本发明的各实施例中所用的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCCNo.10011,于2017年6月23日保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M2017366,保藏机构地址:湖北省武汉市武昌珞珈山.武汉大学.保藏中心,邮编:430072;
本发明的各实施例中所用的MRS肉汤培养基,按每升计算,含10.0g蛋白胨、10.0g牛肉粉、5.0g酵母粉、20.0g葡萄糖、0.1g硫酸镁、5.0g醋酸钠、2.0g柠檬酸铵、2.0g磷酸氢二钠、0.05g硫酸锰、1.0g吐温80,余量为水。
本发明中果汁糖度的测定采用手持折光仪(糖度计)来测定果汁的方法[参考文献(刘燕德,应义斌.水蜜桃糖度和有效酸度的近红外光谱测定法[J].营养学报,2004,26(5):400-402.)]。
本发明各实施例中所用的溶液(试剂):95%乙醇溶液,规格为5L/桶,上海泰坦科技股份有限公司生产;DPPH(2,2-二苯基-1-苦基肼),规格1g/瓶,国药集团化学试剂有限公司生产。
本发明各实施例中所用的纯果汁即苹果汁、果糖、番茄汁、脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠、谷氨酸钠、碳酸钠是本领域常规使用的原料和市售产品。
实施例1
一种高活性的水果酵素粉的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)、种子液的培养
将冻存的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液解冻,吸取300uL植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液加入30mL MRS肉汤培养基中,控制温度为37℃进行转培活化培养12-18h后,得到菌种活化液,然后再控制转速为8000-10000r/min进行离心,所得的沉淀用蒸馏水洗涤2次,最终得到种子液;
上述最终所得的种子液中,每uL种子液中含有2.6×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
(2)、水果培养液的制备
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11 BRIX,得到的稀释液,然后在得到的稀释液中依次加入为稀释液体积2%的果糖、为稀释液体积0.7%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至6.0,然后控制温度为95℃进行灭完15~20min,然后自然冷却至室温得到水果培养液;
本发明的各实施例中仅以苹果汁为例进行举例,但不限制其他纯果汁在本发明中的应用;
(3)、植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011高密度培养
按体积百分比为1.0%,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液,然后控制温度为37℃进行恒温发酵培养,当培养液中pH达到4.6-4.7时终止发酵,得到发酵液;
上述发酵后所得的发酵液中,植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCCNo.10011密度达4.4×109CFU/mL;
(4)、发酵液后处理
将步骤(3)所得的发酵液控制转速为3500r/min离心15min,分别收集离心所得的沉淀和上清液;
(5)、干燥处理
将步骤(4)离心后所得的沉淀与冻干保护剂进行混合均匀,然后控制温度为-80℃进行预先冷冻24h,然后再控制温度为-80℃,压力为0.02Mpa进行真空冷冻干燥48h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1:10,所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为100:80:10:10;
将步骤(4)离心后所得的上清液控制温度为180℃进行喷雾干燥,得到酵素上清粉末;
(6)、将步骤(5)所得的酵素上清粉和菌粉冻干品混合均匀,即得高活性的水果酵素粉。
上述制备方法所得的高活性的水果酵素粉,按每克高活性的水果酵素粉计算,其活菌数为4.3×1011CFU,含有抗氧化活性VC当量为0.385mg。
实施例2
一种高活性的水果酵素粉的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)、种子液的培养
冻存的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液解冻,吸取300uL植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液加入30mL MRS肉汤培养基中,控制温度为37℃进行转培活化培养12-18h后,得到菌种活化液,然后再控制转速为8000-10000r/min进行离心,所得的沉淀用蒸馏水洗涤2次,最终得到种子液;
上述最终所得的种子液中,每uL种子液中含有2.3×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011
(2)、水果培养液的制备
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11.5BRIX,得到的纯果汁稀释液中再依次加入为纯果汁稀释液体积1.5%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.5%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调节pH至7.0,然后控制温度为95℃进行灭完15~20min,然后自然冷却至室温得到水果培养液;
所述的纯果汁为纯苹果汁;
(3)、植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011高密度培养
按体积百分比为1.5%,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液,然后控制温度为37℃进行恒温发酵培养,当培养液中pH达到4.6-4.7时终止发酵,得到发酵液;
上述发酵后所得的发酵液中,植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCCNo.10011密度达2.7×109CFU/mL;
(4)、发酵液后处理
将步骤(3)所得的发酵液控制转速为3500r/min离心15min,分别收集离心所得的沉淀和上清液;
(5)、干燥处理
将步骤(4)离心后所得的沉淀与冻干保护剂进行混合均匀,然后控制温度为-100℃进行预先冷冻12h,然后再控制温度为-80℃,压力为0.02Mpa进行真空冷冻干燥36h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1:5,所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为80:100:10:10;
将步骤(4)离心后所得的上清液控制温度为160℃进行喷雾干燥,得到酵素上清粉末;
(6)、将步骤(5)所得的酵素上清粉和菌粉冻干品混合均匀,即得高活性的水果酵素粉。
上述制备方法所得的高活性的水果酵素粉,按每克高活性的水果酵素粉计算,其活菌数为2.5×1011CFU,含有抗氧化活性VC当量为0.357mg。
实施例3
一种高活性的水果酵素粉的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)、种子液的培养
冻存的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液解冻,吸取300uL植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITC CNo.10011菌液加入30mL MRS肉汤培养基中,控制温度为37℃进行转培活化培养12-18h后,得到菌种活化液,得到菌种活化液,然后再控制转速为8000-10000r/min进行离心,所得的沉淀用蒸馏水洗涤2次,最终得到种子液;
上述最终所得的种子液中,每uL种子液中含有2.1×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
(2)、水果培养液的制备
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为12BRIX,得到的纯果汁稀释液中再依次加入为纯果汁稀释液体积3%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.9%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至6.5,然后控制温度为95℃进行灭完15~20min,然后自然冷却至室温得到水果培养液;
所述的纯果汁为纯苹果汁;
(3)、植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011高密度培养
按体积百分比为2.0%,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液,然后控制温度为37℃进行恒温发酵培养,当培养液中pH达到4.6-4.7时终止发酵,得到发酵液;
上述发酵后所得的发酵液中,植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCCNo.10011密度达2.1×109CFU/mL;
(4)、发酵液后处理
将步骤(3)所得的发酵液控制转速为3500r/min离心15min,分别收集离心所得的沉淀和上清液;
(5)、干燥处理
将步骤(4)离心后所得的沉淀与冻干保护剂进行混合均匀,然后控制温度为-60℃进行预先冷冻20h,然后再控制温度为-80℃,压力为0.02Mpa进行真空冷冻干燥60h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1:15,所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为120:120:10:10;
将步骤(4)离心后所得的上清液控制温度为170℃进行喷雾干燥,得到酵素上清粉末;
(6)、将步骤(5)所得的酵素上清粉和菌粉冻干品混合均匀,即得高活性的水果酵素粉。
上述制备方法所得的高活性的水果酵素粉,按每克高活性的水果酵素粉计算,其活菌数为2.9×1011CFU,含有抗氧化活性VC当量为0.371mg。
对照实施例1
一种水果酵素粉的制备方法,具体步骤如下:
(1)、水果培养液的制备
纯果汁用蒸馏水进行适当稀释,糖度为11BRIX,得到的稀释液中再加入为稀释液体积2%的果糖、为稀释液体积0.7%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调节pH至6.0,然后控制温度为95℃进行灭完15~20min,然后自然冷却至室温得到水果培养液;
所述的纯果汁为纯苹果汁;
(2)、自然培养
步骤(2)所得的水果培养液,在敞口条件下控制温度为37℃进行恒温发酵培养至4.6~4.7,得到发酵液;
(3)、干燥处理
将步骤(3)所得的发酵液控制温度为180℃进行喷雾干燥,得到水果酵素粉。
效果例1
酵素粉菌密度实验
将实施例1,2,3步骤(6)所得的高活性的水果酵素粉复溶后,采用平板计数法,稀释至适合浓度,吸取待测定的菌液1mL,置于一次性平板中,将融化后的MRS培养基倒入平板(温度不可过高),将其与菌液混合均匀,待凝固后倒置,放入37℃恒温培养箱中进行培养48h,菌体密度达如下表:
从上表中的数据可以看出,通过高密度培养与水果酵素的纯种发酵同时进行的协同作用方式进行的水果酵素的生产方式,并结合喷雾干燥及优化冷冻干燥等技术手段大大提高了最终所得的水果酵素粉中的活菌密度,由此表明了该水果酵素粉中的益生菌菌体具有较高的活性。
效果例2
抗氧化性实验
分别取实施例1,2,3步骤(6)所得的高活性的水果酵素粉和对照实施例1步骤(3)所得的水果酵素粉为待测样品,分别按待测样品:蒸馏水为1:7的比例,用蒸馏水将待测样品进行复溶、离心后,分别取其上清液测定各待测样品溶解液的抗氧化性,从而得到实施例1,2,3发酵所得高活性的水果酵素粉与对照实施例1所得水果酵素粉相比,其抗氧化性指标明显增加,具体步骤如下:
先进行预实验,取DPPH溶液(0.2mmol/L,溶质为DPPH,溶剂为95%乙醇,下同)2mL,往其中加少量上述待测样品溶解液,加样时,先少后多渐加,边加边混合,并观察DPPH溶液的褪色情况,当DPPH溶液颜色基本褪去时,记下待测样品溶解液的加样量,即为待测样品溶液的最大加样量,取待测样品最大加样量的一半测其抗氧化活性。
分别取待测样品最大加样量的一半的待测样品溶解液于A、B试管中,然后向A中加入6.0mLDPPH溶液,向B中加入6.0mL 95%乙醇溶液,然后分别向A、B试管中加入蒸馏水,使体积补足至12.0mL,然后分别混匀,黑暗环境反应30min。C试管中加入6.0mL DPPH溶液和6.0mL蒸馏水作为空白组,用紫外分光光度计在517nm波长下分别测A、B、C三组的吸光度,重复两次实验,至少做3组平行,取平均值,即可计算得到DPPH自由基清除率,其计算方法按以下公式:
A-待测样品吸光度,即待测样品溶解液和DPPH溶液的吸光度;
B-阴性对照吸光度,即待测样品溶解液和95%乙醇溶液的吸光度;
C-空白组吸光度,即等体积蒸馏水和等体积DPPH溶液的吸光度;
同时,在517nm波长下检测的不同浓度的VC标准溶液对DPPH自由基清除率,结果如图1所示,即标准的VC当量与DPPH自由基清除率的关系曲线图,同时拟合得到关系曲线y=1.5594x+1.0867,R2=0.9907,其中x表示横坐标VC浓度(mg/L),y表示纵坐标清除率(%),其中VC当量高的即为高抗氧化性;
根据上述测得的实施例1、2、3、对照实施例1对应的待测样品溶解液的DPPH自由基清除率,在图1上,通过关系曲线y=1.5594X+1.0867求出VC当量,从而得到实施例1、2、3和对照实施例1对应的各样品溶解液的抗氧化性情况,具体结果见下表:
从上表的数据可以得出,实施例1所得高活性的水果酵素粉与对照实施例1所得的水果酵素粉末相比,其抗氧化活性指标提高21.5%,实施例1的每克高活性的水果酵素粉抗氧化性的VC当量为0.385mg。
实施例2所得高活性的水果酵素粉与对照实施例1所得的水果酵素粉末相比,其抗氧化活性指标提高18.6%,实施例1的每克高活性的水果酵素粉抗氧化性的VC当量为0.357mg。
实施例3所得高活性的水果酵素粉与对照实施例1所得的水果酵素粉末相比,其抗氧化活性指标提高19.2%,实施例1的每克高活性的水果酵素粉抗氧化性的VC当量为0.371mg。
综上所述,本发明的高活性的水果酵素粉的制备方法,由于利用植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011高密度培养与水果酵素的纯种发酵同时进行,并且最终所得的发酵液通过离心得到高活性的上清液和高密度的菌泥,然后分别对上清液喷雾干燥、菌泥添加冻干保护剂后进行冷冻干燥,分别得到酵素上清粉和菌粉冻干品,从而可有效减少植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌体在高密度培养、浓缩过程中的死亡,大大提高植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌体的活性,最后将所得的酵素上清粉和菌粉冻干品均匀混合,即得到高活性的水果酵素粉,最终所得的高活性的水果酵素粉中植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011的活菌数为2.5~4.3×1011CFU/g,其抗氧化活性比自然发酵所得的水果酵素粉末提高了18.6%~21.5%,VC当量为0.357~0.385mg/g。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种高活性的水果酵素粉的制备方法,其特征在于具体包括如下步骤:
(1)、种子液的培养
将冻存的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液解冻,吸取300uL植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌液加入30mL MRS肉汤培养基中,进行转培活化,培养12-18h后,得到菌种活化液,然后再控制转速为8000-10000r/min进行离心,所得沉淀用蒸馏水洗涤2次,最终得到种子液;
上述最终所得的种子液中,每uL种子液中含有2.1×106~2.6×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
所述的植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011,于2017年6月23日保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M 2017366,保藏机构地址:湖北省武汉市武昌珞珈山.武汉大学.保藏中心,邮编:430072;
(2)、水果培养液的制备
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11-12BRIX,得到纯果汁稀释液,然后在得到的纯果汁稀释液中依次加入为纯果汁稀释液体积1.5-3%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.5-0.9%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至6.0-7.0, 然后控制温度为95℃进行灭菌15~20min,然后自然冷却至室温,得到水果培养液;
(3)、植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011的高密度培养
按体积百分比为1.0-2.0%,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液,然后控制温度为37℃进行恒温发酵培养,当水果培养液中pH达到4.6-4.7时终止发酵,得到发酵液;
(4)、发酵液后处理
将步骤(3)所得的发酵液控制转速为3500r/min离心15min,分别收集离心所得的沉淀和上清液;
(5)、干燥处理
将步骤(4)离心后所得的沉淀与冻干保护剂进行混合均匀,然后控制温度为−100-(-60)℃进行预先冷冻12-24h,然后再控制温度为−80℃,压力为0.02 Mpa进行真空冷冻干燥36-60h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1: 5-15,所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为80-120:80-120:10:10;
将步骤(4)离心后所得的上清液控制温度为160-180℃进行喷雾干燥,得到酵素上清粉末;
(6)、将步骤(5)所得的酵素上清粉和菌粉冻干品混合均匀,即得高活性的水果酵素粉。
2.如权利要求1所述的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,其特征在于在制备过程中:
步骤(1)中:
所得的种子液中,每uL种子液中含有2.3×106~2.6×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
步骤(2)中:
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11 -11.5BRIX,在得到的纯果汁稀释液中依次加入为纯果汁稀释液体积1.5-2%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.5-0.7%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至6.0-7.0;
步骤(3)中:
接种比例按体积百分比为1.0-1.5 %计算,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液;
步骤(5)中:
沉淀与冻干保护剂进行混合均匀后控制温度为−100-(-60)℃进行预先冷冻12-24h,然后再控制温度为−80℃,压力为0.02Mpa进行真空冷冻干燥36-60h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1: 5-10;
所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为80-100:80-100:10:10;
上清液控制温度为160-180℃进行喷雾干燥。
3.如权利要求2所述的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,其特征在于在制备过程中:
步骤(1)中:
所得的种子液中,每uL种子液中含有2.6×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
步骤(2)中:
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11 BRIX,在得到的纯果汁稀释液中依次加入为纯果汁稀释液体积2%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.7%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至6.0;
步骤(3)中:
接种比例按体积百分比为1.0 %计算,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液;
步骤(5)中:
沉淀与冻干保护剂进行混合均匀后控制温度为−80℃进行预先冷冻24h,然后再控制温度为−80℃,压力为0.02Mpa进行真空冷冻干燥48h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1: 10;
所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为100:80:10:10;
上清液控制温度为180℃进行喷雾干燥。
4.如权利要求2所述的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,其特征在于在制备过程中:
步骤(1)中:
所得的种子液中,每uL种子液中含有2.3×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
步骤(2)中:
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为11.5 BRIX,在得到的纯果汁稀释液中依次加入为纯果汁稀释液体积1.5%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.5%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调pH至7.0;
步骤(3)中:
接种比例按体积百分比为1.5%计算,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液;
步骤(5)中:
沉淀与冻干保护剂进行混合均匀后控制温度为−100℃进行预先冷冻12h,然后再控制温度为−80℃,压力为0.02 Mpa进行真空冷冻干燥36h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1: 5;所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为80:100:10:10;
上清液控制温度为160℃进行喷雾干燥。
5.如权利要求1所述的一种高活性的水果酵素粉的制备方法,其特征在于在制备过程中:
步骤(1)中:
所得的种子液中,每uL种子液中含有2.1×106个植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011;
步骤(2)中:
纯果汁用蒸馏水进行稀释至糖度为12 BRIX,得到的纯果汁稀释液中再加入为纯果汁稀释液体积3%的果糖、为纯果汁稀释液体积0.9%的番茄汁,得到的混合液用食用级碳酸钠调节pH至6.5, 然后控制温度为95℃进行灭完15~20min,然后自然冷却至室温得到水果培养液;
步骤(3)中:
接种比例按体积百分比为2.0%计算,在步骤(2)所得的水果培养液中接入步骤(1)所得的种子液;
步骤(5)中:
沉淀与冻干保护剂进行混合后控制温度为−60℃进行预先冷冻20h,然后再控制温度为−80℃,压力为0.02 Mpa进行真空冷冻干燥60h,得到菌粉冻干品;
上述混合所用的沉淀与冻干保护剂的量,按质量比计算,即沉淀:冻干保护剂为1:15;
所述的冻干保护剂由脱脂乳粉、乳糖、抗坏死血酸钠和谷氨酸钠组成,按质量比计算,脱脂乳粉:乳糖:抗坏死血酸钠:谷氨酸钠为120:120:10:10;
上清液控制温度为170℃进行喷雾干燥。
6.如权利要求1-5任一所述的高活性的水果酵素粉的制备方法,其特征在于步骤(2)中所述的纯果汁为纯苹果汁。
7.如权利要求1的制备方法所得的一种高活性的水果酵素粉,其特征在于按每克高活性的水果酵素粉计算,其活植物乳杆菌Lactobacillus plantarumSITCC No.10011菌数为2.5~4.3×1011CFU,抗氧化活性VC当量为0.357mg~0.385mg。
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