CN108152394A - 一种分离测定依折麦布中异构体的方法 - Google Patents

一种分离测定依折麦布中异构体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定依折麦布中异构体的方法。该方法采用手性色谱柱，以正己烷、乙醇与甲醇混合溶液为流动相，其中正己烷、乙醇与甲醇的体积比为75～95:3～15:1～10。本方法能有效分离依折麦布及其七种异构体，该方法分离度好、专属性强、灵敏度高且操作简单，对于依折麦布的质量控制有重要意义。

Description

一种分离测定依折麦布中异构体的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定依折麦布中异构体的方法。
背景技术
依折麦布为降胆固醇药物，可用于治疗原发性(杂合子家族性或非家族性) 高胆固醇血症，用于降低纯合子家族性谷甾醇血症患者的谷甾醇和植物甾醇水平。分子式为：1-(4-氟苯基)-3(R)-[3-(4-氟苯基)-3(S)-羟丙基]-4(S)-(4-羟苯基)-2- 吖丁啶(氮杂环丁烷)酮，其化学结构式如下：
从上结构式可知，依折麦布有三个手性中性，存在8个非对映异构体，即依折麦布中有7个非对映异构体杂质。依折麦布异构体杂质化学结构式如下：
因异构体之间结构相近，极性无差异，采用普通高效液相手段分离较困难，加上依折麦布异构体杂质个数较多，增加了对异构体之间分离的难度，若仅采用正己烷-某一种低级醇(低级醇包括异丙醇、无水乙醇、甲醇)，按任意比例混合，或更换不同类型和长短的一根手性色谱柱，不同类型手性色谱柱包括：大赛璐AS-H、AD、AD-H、OD-H以及IE柱，均只能对以上非对映异构体中的1～2个进行分离，而无法同时满足对依折麦布及其7个非对映异构体杂质进行理想的分离。
USP收载了依折麦布异构体分析检测方法，但该方法仅用于依折麦布及依折麦布异构体I、异构体III～异构体V、异构体VII的检测分离，加上USP中收载的依折麦布异构体分析检测方法要求使用2根Chiracel OD-RH色谱柱串联使用，柱温控制为5℃，色谱条件较为苛刻，普通实验室较难满足以上试验条件。
发明CN 105628805A公开了一种依折麦布及其(R,S,R)、(S,S,R)、(S,S,S)型光学异构体分析与分离测定方法，其流动相为正己烷-异丙醇的混合溶液，该方法仅用于分离分析依折麦布及(R,S,R)、(S,S,R)、(S,S,S)型光学异构体杂质，可分离异构体种类少。
因此需要开发简单可行、灵敏度高、专属性好的依折麦布及其七个非对映异构体分析检测方法，用于依折麦布的质量控制，对于实现对依折麦布的安全性保证具有极其重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离依折麦布及其异构体的方法，其操作简单，分离度高，对于依折麦布质量控制有重要意义。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
所用色谱柱为手性色谱柱，以正己烷、乙醇和甲醇的混合溶液为流动相，其中正己烷、乙醇与甲醇的体积比为75～95:3～15:1～10。
上述异构体为以下依折麦布异构体的一种或多种：
作为优选的方案，上述分离依折麦布中异构体的方法包括以下步骤：
1)取依折麦布溶于稀释剂制备供试品溶液；
2)取供试品溶液和稀释剂注入高效液相色谱仪，流动相洗脱得洗脱液；
3)洗脱液进入检测器检测，记录色谱图；
所述稀释剂为流动相。
作为优选的方案，上述手性色谱柱以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为填充剂。
作为优选的方案，色谱柱填料粒径为5μm。
作为优选的方案，色谱柱柱长为100mm～250mm。
进一步，优选的，色谱柱柱长为250mm。
作为优选的方案，上述流动相中正己烷、乙醇与甲醇的体积比例为85～90:7～10:3～5。
进一步优选的，正己烷：乙醇：甲醇体积比例为88:8.5:3.5。
作为优选的方案，上述检测器为紫外检测器、DAD检测器和VWD检测器中的一种。
作为优选的方案，色谱柱进样量为5-100μl。
进一步优选的，进样量20μl。
作为优选的方案，上述流动相的流速为0.9-1.1ml/min。
进一步优选的，流动相的流速为1.0ml/min。
作为优选的方案，上述色谱柱柱温为20～35℃。
进一步优选的，柱温为25℃。
作为优选的方案，上述检测器检测波长为248nm±5nm。
本发明的目的之二在于提供一种基于目的一方法的测定依折麦布及异构体含量的方法，其专属性强，灵敏度高，以保证依折麦布的质量控制。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种测定依折麦布及异构体含量的方法，采用高效液相色谱的方法，所用色谱柱为手性色谱柱，以正己烷、乙醇和甲醇的混合溶液为流动相，其中正己烷、乙醇与甲醇的体积比为75～95:3～15:1～10。
上述方法的步骤为：
1)按照目的一所述方法完成依折麦布与异构体的完全分离；
2)一定浓度的依折麦布与7种异构体的混合溶液用步骤1)的方法完成分离，步骤1)产生的色谱图的杂质峰和主成分峰面积比较，按照主成分自身对照法计算各有关物质的含量。
作为优选的方案，上述测定方法的步骤为：
1)取依折麦布制成供试品溶液，取供试品溶液稀释成对照溶液，取依折麦布及7种异构体制成***适用性溶液；
2)步骤1)的供试品溶液、对照溶液、***适用性溶液和稀释剂按照目的一的方法用高效液相色谱完成分离；
3)供试品溶液产生的色谱图的杂质峰和主成分峰面积比较，按照主成分自身对照法计算各有关物质的含量。
计算公式如下：
A1—供试品溶液中异构体杂质的峰面积；
Ar—对照溶液中主成分峰面积；
按主成分自身对照法计算样品中各异构体杂质的含量，按主成分自身对照法计算样品中其他单个杂质的含量，总杂质为各已知杂质与其他单个杂质之和。
稀释剂为流动相。
作为优选的方案，上述手性色谱柱以直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为填充剂。
作为优选的方案，色谱柱填料粒径为5μm。
作为优选的方案，色谱柱柱长为100mm～250mm。
进一步，优选的，色谱柱柱长为250mm。
作为优选的方案，上述流动相中正己烷、乙醇与甲醇的体积比例为 85～90:7～10:3～5。
进一步优选的，正己烷：乙醇：甲醇体积比例为88:8.5:3.5。
作为优选的方案，上述检测器为紫外检测器、DAD检测器和VWD检测器中的一种。
作为优选的方案，色谱柱进样量为5-100μl。
进一步优选的，进样量20μl。
作为优选的方案，上述流动相的流速为0.9-1.1ml/min。
进一步优选的，流动相的流速为1.0ml/min。
作为优选的方案，上述色谱柱柱温为20～35℃。
进一步优选的，柱温为25℃。
作为优选的方案，上述检测器检测波长为248nm±5nm。
本发明的有益效果在于：本发明提供的一种分离测定依折麦布及其异构体的分析方法，本方法能有效分离依折麦布及其七种异构体，该方法分离度好，专属性强，灵敏度高；且操作简单，具有简便、快速的优点，保证产品的安全有效，对于依折麦布的质量控制有重要意义。
附图说明
图1为实施例1中溶剂的高效液相色谱图。
图2为实施例1中***适用性溶液的高效液相色谱图。
图3为实施例1中依折麦布供试品溶液的高效液相色谱图。
图4为实施例1中依折麦布对照溶液的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下将(参照附图)对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1依折麦布中异构体杂质的测定
1、仪器与条件
仪器：高效液相色谱仪SHIMADZU 2010AHT(SHIMADZU)；
色谱工作站：LcSolution；
检测器：VWD；
色谱柱：硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为填料(DAICEL，CHIRALPAK AD-H，250mm×4.6mm，5μm)；
流动相(V:V)：正己烷；乙醇：甲醇＝88：8.5：3.5；
检测波长：248nm；
柱温：25℃；
流速：1.0ml/min；
进样体积：20μl。
2、实验步骤
(1)用流动相溶解配制含依折麦布1mg/ml，异构体杂质I、异构体杂质II、异构体杂质V、异构体杂质VII、异构体杂质VI各2μg/ml，异构体杂质III、异构体杂质IV各1μg/ml的混合溶液作为***适用性溶液；
(2)取依折麦布适量，用流动相溶解，配制成每1ml含依折麦布1mg的溶液作为供试品溶液。
(3)精密量取供试品溶液0.5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密移取上述溶液1.0ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
(4)分别取流动相、***适用性溶液、供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，结果见图1-4。
3、检测结果
取***适用性溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按异构体杂质I、异构体杂质II、异构体杂质III+异构体杂质IV、异构体杂质V、依折麦布、异构体杂质VII、异构体杂质VI的顺序依次出峰，异构体杂质V峰的峰高-依折麦布峰与杂质异构体杂质V峰之间峰谷的比应不小于5，结果见表1。
表1数批样品***适用性溶液检测结果
异构体杂质V峰的峰高-依折麦布峰与杂质异构体杂质V峰之间峰谷的比 13.4
精密量取供试品溶液对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰与***适用性溶液中异构体杂质峰保留时间一致，按主成分自身对照法计算供试品中各已知异构体杂质的含量，计算公式如下：
A1—供试品溶液中异构体杂质的峰面积；
Ar—对照溶液中主成分峰面积；
供试品各异构体杂质检测结果见表2。
表2供试品检测结果
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种分离依折麦布及其异构体的方法，其特征在于，所用色谱柱为手性色谱柱，利用物质分配的原理，以正己烷、乙醇和甲醇的混合溶液为流动相，其中正己烷、乙醇与甲醇的体积比为75～95:3～15:1～10；
所述异构体为以下依折麦布异构体的一种或多种：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述手性色谱柱的填料为直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相中正己烷、乙醇与甲醇的体积比例为85～90:7～10:3～5。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中样品的稀释剂为流动相。
5.一种基于权利要求1～4任一项所述方法的测定依折麦布中异构体含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)按照权利要求1～4任一项所述方法用高效液相色谱完成依折麦布与异构体的完全分离；
2)一定浓度的依折麦布与7种异构体的混合溶液用步骤1)的方法完成分离，步骤1)产生的色谱图的杂质峰和主成分峰面积比较，按照主成分自身对照法计算各有关物质的含量。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)取依折麦布制成供试品溶液，取供试品溶液稀释成对照溶液，取依折麦布及7种异构体制成***适用性溶液；
2)步骤1)的供试品溶液、对照溶液、***适用性溶液和稀释剂按照权利要求1～4任一项的方法用高效液相色谱完成分离；
3)供试品溶液产生的色谱图的杂质峰和主成分峰面积比较，按照主成分自身对照法计算各有关物质的含量。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法的检测器为紫外检测器、DAD检测器和VWD检测器中的一种。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.9～1.1ml/min。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法的检测器检测波长为248nm±5nm。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述手性色谱柱柱温为20～35℃。
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