CN108101625A - 一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，属于肥料领域。本发明将芸苔素内酯和胺鲜酯进行复配，其主要功效一方面促进植株的碳、氮代谢，从而提高水稻活力和发育；另一方面提高作物产量，改善作物品质。本发明通过促渗剂渗入水稻根部，通过芸苔内酯和胺鲜酯促进酶活和光合作用，再通过分离培养的菌株在酶活作用下大大增加活性，促进抵抗稻瘟病病菌的侵入的能力，另一方面添加猕猴桃茎叶活性物质，抑制生成稻瘟病病菌在水稻体内的繁殖和生长，控制稻瘟病。本发明解决了目前防治稻瘟病采用杀菌类药物防治，造成大量的人力物力资源浪费，而且对环境造成了不必要的污染，同时稻谷内产生了不必要的农药残留的问题。

Description

一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法

技术领域

本发明属于肥料领域，具体涉及一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法。

背景技术

水稻是我国最重要的粮食作物，水稻施肥是一个极其复杂的问题，需要根据水稻品种的营养特性、肥料的性质、土壤、气候等特点。确定适宜的施肥时间、施肥量、肥料品种和施肥方法，使施用的肥料获得最高的利用率和最佳的经济利益，达到高产、优质、高效的目的。合理的施肥既能提高产量，改善作物品质，又能使土壤养分保持平衡，有利于增强土地肥力。但是，现有技术中，水稻施肥多以尿素、碳铵、磷酸二铵等常规的单质肥料为主，水稻长期施用单质肥料，会对土壤和作物产生不良影响，导致水稻的生长速度变慢和水稻的产量低下，并且现有的肥料都无法抑制水稻稻瘟病的发展。

稻瘟病是水稻重要病害之一，可引起大幅度减产，严重时减产40~50％，甚至颗粒无收。世界各稻区均有发生，其中以叶部、节部发生为多，发生后可造成不同程度减产，尤其穗颈瘟或节瘟发生早而重，可造成白穗以致绝产。近年来，广东稻瘟病年发生面积不少于50万亩，而且出现逐年增加趋势，局部大爆发并不少见。稻瘟病可能发生在省域内的任何年头、任何季节。主要危害叶片、茎秆、穗部。因危害时期、部位不同分为苗瘟、叶瘟、节瘟、穗颈瘟、谷粒瘟。苗瘟发生于三叶前，由种子带菌所致，病苗基部灰黑，上部变褐，卷缩而死，湿度较大时病部产生大量灰黑色霉层，即病原菌分生孢子梗和分生孢子。叶瘟在整个生育期都能发生，分孽至拔节期危害较重。节瘟常在抽穗后发生，初在稻节上产生褐色小点，后渐绕节扩展使病部变黑，易折断，发生早的形成枯白穗，仅在一侧发生的造成茎秆弯曲。穗颈瘟初形成褐色小点，放展后使穗颈部变褐，也造成枯白穗；发病晚的造成秕谷，枝梗或穗轴受害造成小穗不实。谷粒瘟产生褐色椭圆形或不规则斑，可使稻谷变黑；有的颖壳无症状，护颖受害变褐，使种子带菌。目前的防治方法以化学防治使用最为广泛，主要是通过杀菌剂防治，如使用30%克瘟散乳油500倍液，50%消菌灵水溶性粉剂500倍液，40%克百菌悬乳剂500液，25%咪鲜胺乳油1500倍液等。但是由于防治主要采用杀菌类药物进行防治，造成大量的人力物力资源浪费；而且对环境造成了不必要的污染，同时稻谷内产生了不必要的农药残留，给食品安全带来隐患。因此，可以生产出一种可以有效防治稻瘟病的肥料存在很大的市场需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：针对目前防治稻瘟病采用杀菌类药物防治，造成大量的人力物力资源浪费，而且对环境造成了不必要的污染，同时稻谷内产生了不必要的农药残留的问题，提供一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

（1）取芸苔素内酯加入质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯进行混合，溶解后，得混合物，向混合物中加入壬基酚聚氧乙烯醚和水，搅拌，得复配制剂物，备用；

（2）取猕猴桃茎叶粉加入磷酸缓冲溶液和纤维素酶，酶解，灭酶，取灭酶物加入无水乙醇混合，微波提取，在3~4℃条件下离心，过滤，取滤液减压浓缩，得浓缩物，备用；

（3）取预处理的水稻剪成1~2cm左右长的小段，置于腐植酸琼脂培养基上培养，挑取析出的菌径最大的菌落接种至PDA培养基中培养培养，挑取培养物重复划线接种培养2~3次，得纯化培养物，取纯化培养物接种至PDA液体培养基中振荡培养，干燥，粉碎过筛，收集过筛颗粒物；

（4）按质量份数计，取步骤（1）备用的复配制剂物30~50份，步骤（2）浓缩物60~70份，过筛颗粒物40~50份，促渗剂10~15份，磷酸二氢铵2~5份，磷酸二氢钾3~5份，磷酸氢二胺1~3份混合，得用于防治水稻稻瘟病的肥料。

所述步骤（1）中芸苔素内酯与质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯的质量比为2：75~80：3；混合物、壬基酚聚氧乙烯醚和水的质量比为20：1：100。

所述步骤（2）中猕猴桃茎预处理：将猕猴桃鲜茎叶洗净，剪成段，在 40~45℃条件下干燥，粉碎过100目筛，经石油醚脱脂脱色后干燥，得到猕猴桃茎叶粉；猕猴桃茎叶粉、磷酸缓冲溶液和纤维素酶的质量比为3：10：2，30~40℃酶解1~2h；灭酶物与无水乙醇的质量比为1：30~35；微波条件：微波功率300W的条件下，每间隔1min微波1次，每次作用1min，提取时间5~6min。

所述步骤（3）中腐植酸琼脂培养基：按质量份数计，取1~4份腐植酸，0.2~0.4份磷酸氢二钠，0.8~1.2份氯化钾，0.02~0.05份七水合硫酸镁，0.05~0.09份七水合硫酸亚铁，0.01~0.04份碳酸钙，18~25份琼脂粉，1~3份Vitamin B 100x，1000份纯水，pH值7.2±0.2，121℃灭菌20~25 min，冷却至50~55℃，取冷却物按质量比1000：1~2加入苯菌灵，即得腐植酸琼脂培养基。

所述步骤（3）中水稻预处理：将采集的处于前7~8周营养生长期未感染稻瘟的新鲜水稻清水洗净，水稻按照根、茎、叶和鞘四个组织剪开，浸于浓度为120mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液中超声1~2min，再在质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸没6 min，取出依次用乙醇和无菌水清洗30s，干燥1~3h。

所述步骤（3）中置于腐植酸琼脂培养基上的培养条件：27~33℃培养2~3周；接种至PDA培养基的培养条件：27~35℃培养5~7d；纯化培养物按10%的接种量接种至PDA液体培养基中振荡培养2~3d。

所述步骤（4）中促渗剂的配制：取木质素按质量比1：8：5加入浓度为0.1mol/L的NaOH溶液和淀粉混合，得混合溶液，按质量份数计，取混合溶液20~30份，丙烯酰胺6~8份，丙烯酸8~10份，过硫酸钾5~7份，蒸馏水100~150份，调节pH至7.5~8，通入氮气，搅拌30min，加入丙酮抽提，取沉淀于55~60℃下干燥至恒重。

本发明与其他方法相比，有益技术效果是：

（1）本发明将芸苔素内酯和胺鲜酯进行复配，其主要功效一方面为提高水稻体内叶绿素、蛋白质、核酸的含量和光合速率，提高过氧化物酶及硝酸还原酶的活性，促进植株的碳、氮代谢，从而提高水稻活力和发育；另一方面提高作物产量，改善作物品质，提高作物耐寒、耐旱、耐涝、耐盐碱能力，提高抗逆能力，减轻农药药害及化学污染药害，同时能抗多种病毒、细菌、真菌增强了水稻的抗病能力，在与杀菌剂混用时，提高了杀菌剂的防治效果从而减少杀菌剂的使用量；

（2）本发明通过提取猕猴桃茎叶中的活性物质，能够抑制scytalone脱氢酶的作用，从而抑制黑色素的形成，导致稻瘟病菌细胞内积累了大量的黑色素中间体scytalon，作用于稻瘟病时孢子虽能萌发但菌丝变形且不能产生附着孢，附着孢不能产生黑色素，由于黑色素的缺失，使得真菌不能产生高压，也无法完成附着孢的渗入，阻碍了真菌对寄主的侵入；

（3）本发明分离培养基主要是以淀粉为碳源，酪蛋白为氮源，内生真菌的生长一般比内生放线菌快，加以苯菌灵等抗真菌化合物以促进所要筛选的放线菌生长，通过筛选水稻的内生放线菌，内生菌与宿主共存一段时间后，能够在植物体内产生多种有效的生物活性物质，尤其是当宿主受到外界病原菌侵入的时候，产生的活性物质量会大大提升，内生菌能产生的生物活性物质种类很多，如能拮抗真菌细胞壁成分的水解酶纤维素酶、几丁质酶、葡聚糖酶，或生产对植物的生长有促进作用的物质如铁载体、植物生长素吲哚乙酸等，几丁质酶是一种重要的能够溶解真菌的酶，能够促进植物宿主生长，并提高宿主抵抗疾病的能力；

（4）本发明通过促渗剂渗入水稻根部，通过芸苔内酯和胺鲜酯促进酶活和光合作用，再通过分离培养的菌株在酶活作用下大大增加活性，促进抵抗稻瘟病病菌的侵入的能力，另一方面添加猕猴桃茎叶活性物质，抑制生成稻瘟病病菌在水稻体内的繁殖和生长，控制稻瘟病。

具体实施方式

Vitamin B 100x：按质量份数计，取0.2~0.5份盐酸硫胺素，0.3~0.6份核黄素，0.03~0.05份烟酸，0.5~0.8份维生素B6，1~2份肌醇，0.5~1.2份泛酸钙，对3~5份氨基苯甲酸，4~6份生物素，1000份纯水混合，经直径0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。

腐植酸琼脂培养基：按质量份数计，取1~4份腐植酸，0.2~0.4份磷酸氢二钠，0.8~1.2份氯化钾，0.02~0.05份七水合硫酸镁，0.05~0.09份七水合硫酸亚铁，0.01~0.04份碳酸钙，18~25份琼脂粉，1~3份Vitamin B 100x，1000份纯水，pH值7.2±0.2，121℃灭菌20~25min，冷却至50~55℃，取冷却物按质量比1000：1~2加入苯菌灵，即得腐植酸琼脂培养基。

猕猴桃茎预处理：将猕猴桃鲜茎叶洗净，剪成段，在 40~45℃条件下干燥，粉碎过100目筛，经石油醚脱脂脱色后干燥，得到猕猴桃茎叶粉。

水稻预处理：将采集的处于前7~8周营养生长期未感染稻瘟的新鲜水稻清水洗净，水稻按照根、茎、叶和鞘四个组织剪开，浸于浓度为120mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液中超声1~2min，再在质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸没6min，取出依次用乙醇和无菌水清洗30s，干燥1~3h。

一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，包括如下步骤：

（1）取芸苔素内酯按质量比2：75~80：3加入质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯进行混合，溶解后，得混合物，向混合物中按质量比20：1：100加入壬基酚聚氧乙烯醚和水，于30~40℃搅拌2~3h，得复配制剂物，备用；

（2）取猕猴桃茎叶粉按质量比3：10：2加入磷酸缓冲溶液和纤维素酶，于30~40℃酶解1~2h，灭酶4~5min，取灭酶物按质量比1：30~35加入无水乙醇混合，在微波功率300W的条件下，每间隔1min微波1次，每次作用1min，提取时间5~6min，在3~4℃条件下6000r/min离心10min，过滤，取滤液减压浓缩，得浓缩物，备用；

（3）取预处理的水稻剪成1~2cm左右长的小段，置于腐植酸琼脂培养基上，于27~33℃培养2~3周，挑取析出的菌径最大的菌落接种至PDA培养基中培养，27~35℃培养5~7d，挑取培养物重复划线接种培养2~3次，得纯化培养物，取纯化培养物按10%的接种量接种至PDA液体培养基中振荡培养2~3d，干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒物；

（4）按质量份数计，取步骤（1）备用的复配制剂物30~50份，步骤（2）浓缩物60~70份，过筛颗粒物40~50份，促渗剂10~15份，磷酸二氢铵2~5份，磷酸二氢钾3~5份，磷酸氢二胺1~3份混合，得用于防治水稻稻瘟病的肥料。

实例1

Vitamin B 100x：按质量份数计，取0.2份盐酸硫胺素，0.3份核黄素，0.03份烟酸，0.5份维生素B6，1份肌醇，0.5份泛酸钙，对3份氨基苯甲酸，4份生物素，1000份纯水混合，经直径0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。

腐植酸琼脂培养基：按质量份数计，取1份腐植酸，0.2份磷酸氢二钠，0.8份氯化钾，0.02份七水合硫酸镁，0.05份七水合硫酸亚铁，0.01份碳酸钙，18份琼脂粉，1份VitaminB 100x，1000份纯水，pH值7.0，121℃灭菌20min，冷却至50℃，取冷却物按质量比1000：1加入苯菌灵，即得腐植酸琼脂培养基。

猕猴桃茎预处理：将猕猴桃鲜茎叶洗净，剪成段，在 40℃条件下干燥，粉碎过100目筛，经石油醚脱脂脱色后干燥，得到猕猴桃茎叶粉。

水稻预处理：将采集的处于前7周营养生长期未感染稻瘟的新鲜水稻清水洗净，水稻按照根、茎、叶和鞘四个组织剪开，浸于浓度为120mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液中超声1min，再在质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸没6min，取出依次用乙醇和无菌水清洗30s，干燥1h。

一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，包括如下步骤：

（1）取芸苔素内酯按质量比2：75：3加入质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯进行混合，溶解后，得混合物，向混合物中按质量比20：1：100加入壬基酚聚氧乙烯醚和水，于30℃搅拌2h，得复配制剂物，备用；

（2）取猕猴桃茎叶粉按质量比3：10：2加入磷酸缓冲溶液和纤维素酶，于30℃酶解1h，灭酶4min，取灭酶物按质量比1：30加入无水乙醇混合，在微波功率300W的条件下，每间隔1min微波1次，每次作用1min，提取时间5min，在3℃条件下6000r/min离心10min，过滤，取滤液减压浓缩，得浓缩物，备用；

（3）取预处理的水稻剪成1cm左右长的小段，置于腐植酸琼脂培养基上，于27℃培养2周，挑取析出的菌径最大的菌落接种至PDA培养基中培养，27℃培养5d，挑取培养物重复划线接种培养2次，得纯化培养物，取纯化培养物按10%的接种量接种至PDA液体培养基中振荡培养2d，干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒物；

（4）按质量份数计，取步骤（1）备用的复配制剂物30份，步骤（2）浓缩物60份，过筛颗粒物40份，促渗剂10份，磷酸二氢铵2份，磷酸二氢钾3份，磷酸氢二胺1份混合，得用于防治水稻稻瘟病的肥料。

实例2

Vitamin B 100x：按质量份数计，取0.5份盐酸硫胺素，0.6份核黄素，0.05份烟酸，0.8份维生素B6，2份肌醇，1.2份泛酸钙，对5份氨基苯甲酸，6份生物素，1000份纯水混合，经直径0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。

腐植酸琼脂培养基：按质量份数计，取4份腐植酸，0.4份磷酸氢二钠，1.2份氯化钾，0.05份七水合硫酸镁，0.09份七水合硫酸亚铁，0.04份碳酸钙，25份琼脂粉，3份VitaminB 100x，1000份纯水，pH值7.4，121℃灭菌25min，冷却至55℃，取冷却物按质量比1000：2加入苯菌灵，即得腐植酸琼脂培养基。

猕猴桃茎预处理：将猕猴桃鲜茎叶洗净，剪成段，在45℃条件下干燥，粉碎过100目筛，经石油醚脱脂脱色后干燥，得到猕猴桃茎叶粉。

水稻预处理：将采集的处于前8周营养生长期未感染稻瘟的新鲜水稻清水洗净，水稻按照根、茎、叶和鞘四个组织剪开，浸于浓度为120mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液中超声2min，再在质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸没6min，取出依次用乙醇和无菌水清洗30s，干燥3h。

一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，包括如下步骤：

（1）取芸苔素内酯按质量比2：80：3加入质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯进行混合，溶解后，得混合物，向混合物中按质量比20：1：100加入壬基酚聚氧乙烯醚和水，于40℃搅拌3h，得复配制剂物，备用；

（2）取猕猴桃茎叶粉按质量比3：10：2加入磷酸缓冲溶液和纤维素酶，于40℃酶解2h，灭酶5min，取灭酶物按质量比1：35加入无水乙醇混合，在微波功率300W的条件下，每间隔1min微波1次，每次作用1min，提取时间6min，在4℃条件下6000r/min离心10min，过滤，取滤液减压浓缩，得浓缩物，备用；

（3）取预处理的水稻剪成2cm左右长的小段，置于腐植酸琼脂培养基上，于33℃培养3周，挑取析出的菌径最大的菌落接种至PDA培养基中培养，35℃培养7d，挑取培养物重复划线接种培养3次，得纯化培养物，取纯化培养物按10%的接种量接种至PDA液体培养基中振荡培养3d，干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒物；

（4）按质量份数计，取步骤（1）备用的复配制剂物50份，步骤（2）浓缩物70份，过筛颗粒物50份，促渗剂15份，磷酸二氢铵5份，磷酸二氢钾5份，磷酸氢二胺3份混合，得用于防治水稻稻瘟病的肥料。

实例3

Vitamin B 100x：按质量份数计，取0.35份盐酸硫胺素，0.45份核黄素，0.04份烟酸，0.65份维生素B6，1.5份肌醇，0.85份泛酸钙，对4份氨基苯甲酸，5份生物素，1000份纯水混合，经直径0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。

腐植酸琼脂培养基：按质量份数计，取2.5份腐植酸，0.3份磷酸氢二钠，1份氯化钾，0.035份七水合硫酸镁，0.075份七水合硫酸亚铁，0.025份碳酸钙，21.5份琼脂粉，2份Vitamin B 100x，1000份纯水，pH值7.2，121℃灭菌22.5min，冷却至53℃，取冷却物按质量比1000：1.5加入苯菌灵，即得腐植酸琼脂培养基。

猕猴桃茎预处理：将猕猴桃鲜茎叶洗净，剪成段，在 43℃条件下干燥，粉碎过100目筛，经石油醚脱脂脱色后干燥，得到猕猴桃茎叶粉。

水稻预处理：将采集的处于前7.5周营养生长期未感染稻瘟的新鲜水稻清水洗净，水稻按照根、茎、叶和鞘四个组织剪开，浸于浓度为120mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液中超声1.5min，再在质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸没6min，取出依次用乙醇和无菌水清洗30s，干燥2h。

一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，包括如下步骤：

（1）取芸苔素内酯按质量比2：77：3加入质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯进行混合，溶解后，得混合物，向混合物中按质量比20：1：100加入壬基酚聚氧乙烯醚和水，于35℃搅拌2.5h，得复配制剂物，备用；

（2）取猕猴桃茎叶粉按质量比3：10：2加入磷酸缓冲溶液和纤维素酶，于35℃酶解1.5h，灭酶4.5min，取灭酶物按质量比1：33加入无水乙醇混合，在微波功率300W的条件下，每间隔1min微波1次，每次作用1min，提取时间5.5min，在3℃条件下6000r/min离心10min，过滤，取滤液减压浓缩，得浓缩物，备用；

（3）取预处理的水稻剪成1.5cm左右长的小段，置于腐植酸琼脂培养基上，于30℃培养2.5周，挑取析出的菌径最大的菌落接种至PDA培养基中培养，31℃培养6d，挑取培养物重复划线接种培养2次，得纯化培养物，取纯化培养物按10%的接种量接种至PDA液体培养基中振荡培养2.5d，干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒物；

（4）按质量份数计，取步骤（1）备用的复配制剂物40份，步骤（2）浓缩物65份，过筛颗粒物45份，促渗剂12.5份，磷酸二氢铵3.5份，磷酸二氢钾4份，磷酸氢二胺2份混合，得用于防治水稻稻瘟病的肥料。

对照例：武汉市某公司生产的防治稻瘟病杀菌剂。

采用上述实施例制备的防治水稻稻瘟病的肥料到湖北省武汉市某水稻试验基地，并设置采用对照例的杀菌剂进行对比实验，测试结果见表1。

表1：

测试项目	实例1	实例2	实例3	对照例
					稻瘟病症状	4天后病症基本消失	3天后病症基本消失	4天后病症基本消失	4天后病情逐渐减缓，后期仍有叶瘟、穗颈瘟症状
单产（kg/亩）	674	702	689	489~515

综合上述，本发明的防治水稻稻瘟病的肥料可以有效抑制稻瘟病，值得推广。

Claims (7)

1.一种用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

取芸苔素内酯加入质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯进行混合，溶解后，得混合物，向混合物中加入壬基酚聚氧乙烯醚和水，搅拌，得复配制剂物，备用；

取猕猴桃茎叶粉加入磷酸缓冲溶液和纤维素酶，酶解，灭酶，取灭酶物加入无水乙醇混合，微波提取，在3~4℃条件下离心，过滤，取滤液减压浓缩，得浓缩物，备用；

取预处理的水稻剪成1~2cm左右长的小段，置于腐植酸琼脂培养基上培养，挑取析出的菌径最大的菌落接种至PDA培养基中培养培养，挑取培养物重复划线接种培养2~3次，得纯化培养物，取纯化培养物接种至PDA液体培养基中振荡培养，干燥，粉碎过筛，收集过筛颗粒物；

按质量份数计，取步骤（1）备用的复配制剂物30~50份，步骤（2）浓缩物60~70份，过筛颗粒物40~50份，促渗剂10~15份，磷酸二氢铵2~5份，磷酸二氢钾3~5份，磷酸氢二胺1~3份混合，得用于防治水稻稻瘟病的肥料。

2.根据权利要求1所述的用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中芸苔素内酯与质量分数为80%的乙醇溶液和胺鲜酯的质量比为2：75~80：3；混合物、壬基酚聚氧乙烯醚和水的质量比为20：1：100。

3.根据权利要求1所述的用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中猕猴桃茎预处理：将猕猴桃鲜茎叶洗净，剪成段，在 40~45℃条件下干燥，粉碎过100目筛，经石油醚脱脂脱色后干燥，得到猕猴桃茎叶粉；猕猴桃茎叶粉、磷酸缓冲溶液和纤维素酶的质量比为3：10：2，30~40℃酶解1~2h；灭酶物与无水乙醇的质量比为1：30~35；微波条件：微波功率300W的条件下，每间隔1min微波1次，每次作用1min，提取时间5~6min。

4.根据权利要求1所述的用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中腐植酸琼脂培养基：按质量份数计，取1~4份腐植酸，0.2~0.4份磷酸氢二钠，0.8~1.2份氯化钾，0.02~0.05份七水合硫酸镁，0.05~0.09份七水合硫酸亚铁，0.01~0.04份碳酸钙，18~25份琼脂粉，1~3份Vitamin B 100x，1000份纯水，pH值7.2±0.2，121℃灭菌20~25min，冷却至50~55℃，取冷却物按质量比1000：1~2加入苯菌灵，即得腐植酸琼脂培养基。

5.根据权利要求1所述的用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中水稻预处理：将采集的处于前7~8周营养生长期未感染稻瘟的新鲜水稻清水洗净，水稻按照根、茎、叶和鞘四个组织剪开，浸于浓度为120mmol/L的磷酸氢二钠缓冲液中超声1~2min，再在质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸没6 min，取出依次用乙醇和无菌水清洗30s，干燥1~3h。

6.根据权利要求1所述的用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中置于腐植酸琼脂培养基上的培养条件：27~33℃培养2~3周；接种至PDA培养基的培养条件：27~35℃培养5~7d；纯化培养物按10%的接种量接种至PDA液体培养基中振荡培养2~3d。

7.根据权利要求1所述的用于防治水稻稻瘟病的肥料的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中促渗剂的配制：取木质素按质量比1：8：5加入浓度为0.1mol/L的NaOH溶液和淀粉混合，得混合溶液，按质量份数计，取混合溶液20~30份，丙烯酰胺6~8份，丙烯酸8~10份，过硫酸钾5~7份，蒸馏水100~150份，调节pH至7.5~8，通入氮气，搅拌30min，加入丙酮抽提，取沉淀于55~60℃下干燥至恒重。