CN107893040B - 一种微生物群体感应信号分子降解菌及其在病害防治中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种微生物群体感应信号分子降解菌及其在病害防治中的应用。所述硝基还原假单胞菌为硝基还原假单胞菌（Pseudomonas nitroreducens）菌株W‑7，该菌株于2017年11月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2017649。该菌株活性稳定，能以OdDHL等群体感应信号分子AHLs作为唯一碳源生长，对信号分子有显著且快速的降解作用，同时，该菌株对其他群体感应信号分子如OHHL和DSF均具有较好降解效果，而且该菌株还具有培养方法简单、生长速度快、不易变异、适应能力强的特点，在群体淬灭方向、抑制软腐病病害、防治依赖微生物群体感应信号介导致病的病原菌危害方面具有巨大推广应用的潜力。本发明可以减少农药滥用问题，同时为生物防治植物病害提供了新思路。

Description

一种微生物群体感应信号分子降解菌及其在病害防治中的 应用

技术领域

本发明属于生物防治技术领域。更具体地，涉及一种微生物群体感应信号分子降解菌及其在病害防治中的应用。

背景技术

植物病原菌的有效防治一直是农业生产中面临的重要问题，例如欧文氏菌属(Erwinia sp.)、迪卡氏菌属(Dickeya sp.)细菌，均为革兰氏阴性植物病原菌。其中迪卡氏菌属是近年来成立的植物病原细菌新属，其模式菌为原来的菊欧氏菌(Erwiniachrysanthemi)。迪卡氏菌属(Dickeya sp.)可以引发多种重要的粮食作物和经济作物的重大病害，如水稻细菌性基腐病、香蕉细菌性软腐病、马铃薯细菌性软腐病等，导致相关农作物的减产，引起重大经济损失。软腐病是一类重要农业病害，目前生产上尚无十分有效的控制措施。

目前国内外针对软腐病致病菌所用的防治措施主要是化学防治，如：噻菌酮、噻枯唑、代森铵、硫酸链霉素及中生菌素等化学农药，然而化学农药的大量使用已经带来了众所周知的环境污染、生态平衡破坏、病原菌抗药性和食品安全等一系列严重问题，另外，抗生素的滥用亦引起了微生物耐药性的产生。因此，寻找新的、有效的防治策略迫在眉睫。

群体感应(Quorum Sensing，QS)是指微生物细胞间通过信号分子(自诱导剂)进行信息交流的一种现象，QS广泛存在于微生物群体中，并且可以调控特定基因尤其是很多致病基因的表达，如：植物致病菌Dickeya zeae EC1存在群体感应的现象并与其致病性有关，信号分子为酰基高丝氨酸内酯类物质(N-Acyl homoserine lactones，AHLs)(Hussain MB，Zhang H B，Xu J L，et al.The acyl-homoserine lactone-type quorum-sensingsystem modulates cell motility and virulence of Erwinia chrysanthemi pv.zeae[J].J Bacteriol，2008，190(3)：1045-1053.)。AHLs是革兰氏阴性菌特有的群体感应信号，它们大都具有相同的高丝氨酸内酯环状的结构且都具有酰基侧链，但其酰基侧链长度、饱和度存在差异。N-(3-oxododecanoyl)-L-homoserine lactone(OdDHL)、N-(3-oxohexanoyl)-L-homoserine lactone(OHHL)均属于AHLs，其差别在于酰基侧链长度不同。AHLs信号广泛存在于革兰氏阴性菌中，包括植物致病菌欧文氏菌(Erwinia)、迪卡氏菌(Dickeya)、人体致病菌绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)等。DSF(Diffusible SignalFactor)是黑腐病致病菌——野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris，Xcc)的群体感应信号分子，其介导的群体感应与致病性有关(Tang J L，Liu Y N，Barber CE，et al.Genetic and molecular analysis of a cluster of rpf genes involved inpositive regulation of synthesis of extracellular enzymes and polysaccharidein Xanthomonas campestris pathovar campestris[J].Mol Gen Genet，1991，226(3)：409-417.)。DSF信号存在于黄单胞菌(Xanthomonas)、伯克氏菌(Burkholderia)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)等。

群体感应淬灭(Quorum Quenching，QQ)即通过淬灭病原菌的信号分子以防止信号分子有效积累，当信号分子浓度低于某一阈值就不能激活病原菌致病基因的表达，从而破坏细胞间的交流，破坏其群体感应***。研究发现，通过群体感应淬灭的方法来防治病害，对病原菌不产生选择压力使病原菌不易产生抗药性。针对微生物群体感应***的生物防治策略(称之为群体淬灭)是有效防治植物细菌病害的新途径，具有操作简便、经济实用、环境友好、效率高且周期短等优点。针对不同群体感应信号发展群体淬灭制剂是目前国际范围的研究热点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和技术不足，提供一种具有高效降解群体感应信号分子能力的硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)，其对AHLs、DSF等群体感应信号分子有显著且快速的降解作用，在防治群体感应信号分子介导的致病菌危害方面有巨大的应用潜力，这为以生物防治替代化学防治且以阻断群体感应为靶标而不引起选择压力的防治策略提供了新的开发途径。

本发明的目的是提供一株可降解微生物群体感应信号分子的硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)菌株W-7。

本发明另一目的是硝基还原假单胞菌在降解微生物群体感应信号分子中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一株可降解微生物群体感应信号分子的硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)菌株W-7，该菌株于2017年11月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2017649。

该菌株从采集自广州市下水道污水样本，经人工筛选分离纯化获得，经过对该菌株的形态学特征、生理生化特性、16S rDNA***发育分析及Biolog微生物自动分析***，鉴定菌株W-7为硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)。

菌株W-7的菌落形态特征为：在营养琼脂平板上培养48h，菌落呈淡黄色，菌落平，表面光滑半透明，边缘整齐：在营养肉汤培养基中培养48h，呈扩散性混浊。

电镜观察菌体的形态特征为：菌体呈杆状，具有1根极生鞭毛。

该菌株W-7的生理生化特性为：为革兰氏阴性菌，好氧，接触酶试验、氧化酶试验、荧光色素试验、硝酸盐还原试验、硝酸盐产气试验反应阳性，溶血试验、明胶液化试验、硫化氢试验、淀粉水解试验反应阴性；最适生长温度为30℃，最适pH为7.0。

所述菌株W-7对氨苄青霉素的抗性均达到400μg/mL以上，对庆大霉素、链霉素、氯霉素的抗性均达到200μg/mL以上，对四环素抗性达到10μg/mL。

经过试验研究显示，该硝基还原假单胞菌菌株W-7对群体感应信号分子OdDHL有显著且快速的降解作用，可在浓度高达0.2mM的OdDHL为唯一碳源的培养基中正常生长，在48h内能将初始浓度为0.2mM的群体感应信号分子OdDHL完全分解。同时，该菌株对其他群体感应信号分子如OHHL和DSF均具有较好降解效果。在防治AHLs类群体感应信号分子和群体感应信号分子DSF介导的致病菌危害方面有巨大的应用潜力。

因此，硝基还原假单胞菌在降解群体感应信号分子AHLs和/或DSF信号中的应用，或在制备降解AHLs和/或DSF信号的产品中的应用也属于本发明的保护范围。

硝基还原假单胞菌在防治AHLs或DSF等群体感应信号分子介导致病的植物病害中的应用，或在制备依赖AHLs或DSF等群体感应信号分子致病的致病菌的防治制剂方面的应用也属于本发明的保护范围。

优选地，上述任一所述的应用中，所述硝基还原假单胞菌为硝基还原假单胞菌菌株W-7。

一种防治依赖AHLs或DSF等群体感应信号分子致病的致病菌病害的方法，是用硝基还原假单胞菌菌株W-7的菌悬液对作物进行处理，以预防依赖AHLs致病的致病菌的侵染。

优选地，所述处理的方式为对作物进行喷雾或接种处理。

优选地，应用时，所述的硝基还原假单胞菌降解AHLs的最适pH为6.5～7.2，最适温度为28℃～30℃。

实验显示，硝基还原假单胞菌菌株W-7对欧文氏菌(Erwinia)、迪卡氏菌(Dickeya)或绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)等依赖AHLs致病的病原菌的病害具有显著的生防作用，对黄单胞菌(Xanthomonas)或伯克氏菌(Burkholderia)等依赖DSF致病的病原菌的病害均具有显著的生防作用。因此具体地，所述依赖微生物群体感应感应信号致病的致病菌包括：欧文氏菌(Erwinia)、迪卡氏菌(Dickeya)、黄单胞菌(Xanthomonas)、伯克氏菌(Burkholderia)或绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)等。

一种含有上述硝基还原假单胞菌菌株W-7和/或其菌悬液的可降解群体感应信号分子AHLs或DSF的降解菌剂，以及一种含有菌株W-7和/或其菌悬液的依赖AHLs或DSF致病的病原菌的生防制剂，也都应在本发明的保护范围之内。

本发明同时还提供了在富营养培养基中所述菌株W-7菌悬液的制备方法：具体是将菌株W-7划线于LB固体培养基平板上，28℃～30℃下培养12～36h，挑取单菌落接种于LB液体培养基中预培养至对数期，所得菌体用0.9％的无菌生理盐水冲洗并重悬，作为种子悬液，再将种子悬液按照体积比0.5％～5％(优选1％)的接种量接种至LB液体培养基培养至对数期，菌体用PBS缓冲液重悬得到菌株W-7的菌悬液，菌悬液的浓度不做严格限制，具体可根据实际病害程度和应用效果进行调整。

优选地，所述LB培养基为：胰蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，pH 6.8～7.2，121℃灭菌15～25min。LB固体培养基配方是在液体培养基中加入1.5％(w/v)的琼脂。

本发明具有以下有益效果：

本发明研究发现，硝基还原假单胞菌能够高效降解群体感应信号分子AHLs和DSF，降解效果显著且快速，在防治AHLs和DSF介导致病的致病菌危害方面有巨大的应用潜力，这为以生物防治替代化学防治且以阻断群体感应为靶标而不引起选择压力的治疗策略提供了新的开发途径。

同时，本发明筛选获得了一株硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)W-7，可在浓度高达0.2mM的OdDHL为唯一碳源的培养基中正常生长，在短时间内可有效降解群体感应信号分子OdDHL，48h内能将初始浓度为0.2mM的群体感应信号分子OdDHL完全分解，具有显著的生物降解效果。同时，该菌株对其他群体感应信号分子如OHHL和DSF均具有较好降解效果。

依据本发明，由于菌株W-7具有稳定高效降解植物病原菌中群体感应AHLs或DSF信号分子的特性，因此，菌株W-7可应用于自然环境中AHLs或DSF介导致病的植物致病菌的防治，既可以减少农药滥用问题，又给植物病害防治带来了新思维、新途径和新方法。

附图说明

图1为本发明的菌株W-7在LB培养基上的菌落形态图。

图2为本发明的菌株W-7在血平板培养基上的菌落形态图。

图3为本发明的菌株W-7的扫描电镜图。

图4为本发明的菌株W-7的***进化树分析图。

图5为本发明的菌株W-7在不同抗生素中的生长情况图。

图6为本发明的菌株W-7的降解活性测定图(DH5α为阴性对照，B23为阳性对照)。

图7为本发明的菌株W-7对OdDHL降解的HPLC图(图A为未接种菌株W-7的对照图，图B、C、D、E分别为菌株W-7对OdDHL 12h，24h，36h，48h降解的高效液相色谱图)。

图8为本发明的菌株W-7以OdDHL为唯一碳源时的生长曲线和降解曲线图。

图9为本发明的菌株W-7以DSF为唯一碳源的固体MM无机盐培养基平板上降解DSF产生透明水解圈图。

图10为本发明的菌株W-7、DH5α、B23、EC1分别单独接种及分别与EC1共同接种于马铃薯块茎30h后的发病情况。

图11为本发明的菌株W-7、3937分别单独接种及共同接种于白菜梗24h后的发病情况。

具体实施方式

以下结合具体实施例和说明书附图来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。

实施例1硝基还原假单胞菌菌株W-7的获取与鉴定

1、菌株W-7的分离、筛选

(1)土样采集：采集自广州的下水道污水样本作为微生物源

土样分离于2014年10月9日从广东省广州市华南农业大学附近的下水道，进行取样、装袋、保存作为微生物源带回学校进行菌株分离。

(2)菌株的富集培养：制备MSM培养基，将50mL的基础培养基装到250mL三角瓶中灭菌，冷却后在无菌条件下加入AHLs母液(甲醇为溶剂)，使AHLs的最终浓度为5μM，同时加入土样5g于30℃、200rpm摇床培养7d后，按10％的接种量转接到第二批含10μM的AHLs的MSM培养基中。相同条件培养7d后，再按10％的接种量转接到含20μM的AHLs的MSM培养基中，继续培养7d。以此类推，不断增加AHLs的浓度。

(3)菌株分离与纯化：采用稀释、平板涂布法进行分离。

取1mL终MSM培养基发酵液用无菌水将其浓度依次梯度稀释为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8的发酵液，然后吸取100μL稀释好的各个浓度梯度的发酵液均匀地涂布在LB固体平板上，30℃培养，挑取长出的不同菌落形态的单菌落，在LB固体平板反复划线培养纯化，直至分离出单菌株。将单菌株-80℃保存，待进一步实验测定AHLs的降解效果。

(4)菌株筛选：利用报告菌株(Agrobacterium tumefaciens NT1)对从土样中分离得到的菌株进行筛选。

将冻存于-80℃的待筛选的菌株划线于LB固体培养基平板上，30℃过夜培养。挑取单菌落，用LB液体培养基培养过夜，得到菌液。取1个OD₆₀₀值的菌体，接种至1mL以AHLs作为唯一碳源的MSM无机盐培养基中，MSM无机盐培养基中AHLs的终浓度为20μM。将反应混合物放置于2mL离心管中，使离心管在30℃，200rpm的条件下培养24h。24h后，取反应5μL反应混合物点样至涂布有200μL Agrobacterium tumefaciens NT1菌液(OD₆₀₀＝0.4)的MM板上，其中MM板中含有浓度为40μg/mL的X-gal。将已经点有样本的MM板放置28℃培养箱，培养24h后观察实验结果。

结果分析：AHLs为扩散性小分子，反应混合物中含有的AHLs越多，MM板上出现的蓝圈直径越大，说明该菌株对AHLs无降解效果，反之，反应混合物中含有的AHLs越少，则产生的蓝圈直径越小甚至没有蓝圈的出现。根据实验结果筛选出对AHLs具有降解效果最好的菌株，命名为菌株W-7。

2、菌株W-7的鉴定及***进化分析

(1)菌落形态特征：将上述菌株W-7划线于LB固体培养基，于30℃生化培养箱中恒温培养24h，营养琼脂平板上培养48h，菌落呈淡黄色，菌落平，表面光滑半透明，边缘整齐，如图1所示；菌株W-7在LB液体培养基中呈扩散性混浊，好氧，30℃下生长良好。如图2所示，在血平板上该细菌菌落呈现淡黄色。

(2)菌体形态特征：如图3所示，菌体呈杆状，具有1根极生鞭毛。

(3)生理生化特性：菌株W-7为革兰氏阴性菌，好氧，接触酶试验、氧化酶试验、荧光色素试验、硝酸盐还原试验、硝酸盐产气试验反应阳性，溶血试验、明胶液化试验、硫化氢试验、淀粉水解试验反应阴性；最适生长温度为30℃，最适pH为7.0。其生理生化鉴定结果如表1所示。

(4)16S rDNA序列及***进化分析：菌株W-7的16S rDNA基因序列长度为1411bp，与NCBI数据库(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)进行比对，发现所述菌株W-7与Pseudomonas nitroreducens具有很好的同源性(＞99％)，其***进化树如图4所示。

(5)Biolog微生物自动分析***鉴定：

Biolog微生物自动分析是一种微生物鉴定的方法，此方法是通过计算机进行数据分析，鉴定过程快捷，结果准确可信。DIS(Distance)和SIM(Similarity)为鉴定结果的2个重要参数，表示测试结果与数据库相应的数据的匹配程度。当DIS＜5.0，SIM值越接近于1，鉴定结果的可靠性越高。

本发明菌株W-7的Biolog微生物自动分析***鉴定结果显示，W-7与硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)最为相似，且DIS＜5.0，SIM值为0.741，说明菌株W-7与还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens)匹配良好。菌株W-7碳源利用结果如表2所示。

综上所述，通过对菌株W-7的形态学特征、生理生化特性、16S rDNA基因序列分析及Biolog微生物自动分析***鉴定，将菌株W-7鉴定为硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，并保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO：M2017649，保藏地址是中国武汉大学。

表1菌株W-7生理生化鉴定结果

注：-：阴性反应；+：阳性反应。

表2菌株W-7碳源利用鉴定结果

注：“-”表示为阴性反应或不利用；“+”表示阳性反应或利用。

实施例2菌株W-7的抗生素敏感性分析

为了能够更好地研究实施例1获得的菌株W-7的生防潜力，我们对该菌株W-7的生物学特性进行了深入的研究。实验研究了菌株W-7对不同抗生素的敏感性，具体如图5所示。

实验结果表明：该菌株W-7对氨苄青霉素的抗性达到400μg/mL以上，对庆大霉素、链霉素、氯霉素的抗性均达到200μg/mL以上，对四环素抗性达到10μg/mL。这一结果利于后续研究中选取合适的抗生素作为参考。

实施例3菌株W-7对OdDHL的降解能力测定

1、菌株培养与样品采集：将菌株W-7划线于LB固体培养基平板上，30℃过夜培养。挑取单菌落，用LB液体培养基培养过夜至得到菌液。取1个OD₆₀₀值的菌体，接种至1mL以OdDHL作为唯一碳源的MSM无机盐培养基中，MSM无机盐培养基中OdDHL的终浓度为80μM。将反应混合物放置于2mL离心管中，使离心管在30℃，200rpm的条件下培养24h。24h后，取反应5μL反应混合物点样至琼脂条顶端，然后在下方点报告菌株(Agrobacterium tumefaciensNT1)菌液。然后将已经好反应混合物和报告菌株的培养皿放置28℃培养箱，培养24h后观察实验结果。其中，琼脂条为含有浓度为40μg/mL X-gal的MM板切条所得。

实验对照中，DH5α为阴性对照，对AHLs无降解作用；B23为阳性对照，对AHLs有降解作用。苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.Israelensis)B23含有编码AHLs的降解酶aiiA的基因，对AHLs有降解作用(Dong Y，Xu J，Li X，et al.AiiA，anenzyme that inactivates the acylhomoserine lactone quorum-sensing signal andattenuates the virulence of Erwinia carotovora[J].Proc Natl Acad Sci USA，2000，97(7)：3526-3531.)。实验结果显示(图6)，CK和DH5α实验组的报告菌株均变蓝且距离基本一致，说明这两个实验组反应混合物中剩余的OdDHL含量相近。B23和W-7实验组报告菌株未变蓝，说明这两个实验组的反应混合物中不含有OdDHL，OdDHL已经被降解完全。

实施例4菌株W-7生长和降解OdDHL关系曲线的测定

1、挑取菌株W-7单菌落接种于LB培养基中预培养至对数期，取1个OD值的菌体，菌体用MSM基础培养基重悬，将重悬液加入19mL MSM基础培养基中，并添加OdDHL母液，使其最终浓度为0.2mM，30℃，200rpm下培养定时取样。采集不同时间点的样品并测定OD₆₀₀值表示菌株W-7的生长情况，利用HPLC测定OdDHL的残留量表示菌株W-7对OdDHL的降解情况。

2、HPLC测定方法

HPLC：Waters 2695。色谱柱：Kinetex EVO C18反相色谱柱(250μm×4.6mm×5μm)。流速：0.8mL/min。柱温：30℃。流动相：甲醇∶水＝70；30(v∶v)。检测波长：210nm。进样量：20μL。

3、结果分析：HPLC检测结果如图7所示，图A为未接种菌株W-7的对照图，图B、C、D、E分别为菌株W-7对OdDHL 12h，24h，36h，48h的降解图，降解率分别达到63.6％，85.9％，91.9％，100％，对应时间菌株W-7的OD₆₀₀值分别为0.054，0.132，0.162，0.165。生长曲线和降解曲线图如图8所示，OdDHL的降解与菌株生长呈正相关，在OdDHL的存在下，菌株生长没有滞留期，迅速进入生长对数期。该菌株在0～24h时对OdDHL的降解最快，菌株培养至48h，OdDHL完全分解。对照中OdDHL 24h内的自然降解率不到40％。

结果表明，硝基还原假单胞菌W-7对OdDHL有显著且快速的降解作用，在防治OdDHL介导的致病菌危害方面有巨大的应用潜力。

实施例5菌株W-7对DSF的降解活性测定

本施例利用以DSF作为唯一碳源的MM无机盐培养基来测定菌株W-7对DSF的降解活性。

1、以DSF为唯一碳源的MM无机盐培养基的制备：配置DSF母液(溶剂为甲醇，浓度为100mM)、不含任何碳源的MM无机盐培养基。在不含任何碳源的MM无机盐培养基中加入一定量的DSF母液，混匀、倒板、晾干，使得DSF终浓度为5mM。

2、将冻存于-80℃的菌株W-7，按照体积比1∶100的接种量接种于液体LB培养基，以30℃，200rpm的条件过夜培养。将培养后得到的菌液以4000rpm，10min的条件进行离心后，弃去上清，用MSM重悬菌体，得到待筛选菌株的MSM重悬液。分别取0.5μL待筛选菌株的MSM重悬液点板于以5mM DSF为唯一碳源的MM无机盐培养基平板上。同时设置了MSM、DH5α实验组作为对照。

3、结果分析：如图9所示，MSM、DH5α实验组无水解圈，说明MSM对本实验无影响，DH5α不能降解DSF。W-7实验组有明显的水解圈，说明菌株W-7能够降解并利用DSF作为唯一碳源。

实施例6菌株W-7对马铃薯软腐病的的生防效果研究

本实施例以引起马铃薯软腐病的病原菌Dickeya zeae EC1(Hussain M B，ZhangH B，Xu J L，et al.The acyl-homoserine lactone-type quorum-sensing systemmodulates cell motility and virulence of Erwinia chrysanthemi pv.zeae[J].JBacteriol，2008，190(3)：1045-1053.)为例，研究菌株W-7对依赖AHLs致病的致病菌的生防效果。

1、将菌株W-7与依赖AHLs致病的病原菌———Dickeya zeae EC1分别划线于LB固体培养基平板上，30℃过夜培养。分别挑取单菌落，用LB培养基中预培养至OD₆₀₀＝2.0。分别设置W-7+LB，DH5α+LB，B23+LB，EC1+LB，W-7+EC1，DH5α+EC1，B23+EC1，七个实验组，使W-7、DH5α、B23、EC1最终工作浓度OD₆₀₀＝1.0。实验组中，DH5α对AHLs无降解作用，为阴性对照，B23对AHLs有降解作用，为阳性对照。每个实验组用移液枪接种5μL的混合菌液至马铃薯。

2、如图10所示，结果分析：W-7+LB，DH5α+LB，B23+LB三个实验组的马铃薯未发病，说明W-7、DH5α、B23对马铃薯无致病力；EC1、DH5α+EC1，B23+EC1三个实验组马铃薯发病情况并未有明显差异。实验组W-7+EC1的马铃薯发病严重程度明显较EC1、DH5α+EC1，B23+EC1三个试验组发病严重程度轻。实验结果表明，菌株W-7对迪卡氏菌EC1引起的软腐病具有显著的生防效果。

实施例7菌株W-7对白菜软腐病的的生防效果研究

本实施例以引起白菜软腐病的病原菌Dickeya dadantii 3937(Glasner J D，Yang C，Reverchon S，et al.Genome sequence of the plant-pathogenic bacteriumDickeya dadantii 3937[J].J Bacteriol，2011，193(8)：2076-2077.)为例，研究菌株W-7对依赖AHLs致病的病原菌的生防效果。

1、将菌株W-7与依赖AHLs致病的病原菌——Dickeya dadantii 3937分别划线于LB固体培养基平板上，30℃过夜培养。分别挑取单菌落，用LB培养基中预培养至OD₆₀₀＝2.0。分别设置LB，3937，W-7，W-7+3937，四个实验组，使3937、W-7最终工作浓度OD₆₀₀＝1.0。每个实验组用移液枪接种2μL的混合菌液至白菜梗。

2、如图11所示，结果分析：在已接种的白菜梗上可以看到，LB，W-7两个实验组的接种处未发病，说明LB，W-7对白菜梗无致病力。实验组W-7+3937的接种处与实验组3937接种处相比无明显软腐症状出现。实验结果表明，菌株W-7对Dickeya dadantii 3937引起的软腐病具有显著的生防效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种可高效降解微生物群体感应信号分子的硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)菌株W-7，其特征在于，该菌株于2017年11月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2017649。

2.硝基还原假单胞菌在降解微生物群体感应信号分子中的应用，或在制备降解微生物群体感应信号分子的产品中的应用，其特征在于，所述硝基还原假单胞菌为权利要求1所述硝基还原假单胞菌菌株W-7，所述微生物群体感应信号分子为酰基高丝氨酸内酯类物质或DSF。

3.硝基还原假单胞菌在防治依赖微生物群体感应信号分子介导致病的植物病害中的应用，或在制备依赖微生物群体感应信号分子致病的致病菌的防治制剂方面的应用，其特征在于，所述硝基还原假单胞菌为权利要求1所述硝基还原假单胞菌菌株W-7，所述微生物群体感应信号分子为酰基高丝氨酸内酯类物质或DSF。

4.一种防治依赖微生物群体感应信号致病的病原菌病害的方法，其特征在于，用硝基还原假单胞菌的菌悬液对作物进行处理，所述硝基还原假单胞菌为权利要求1所述硝基还原假单胞菌菌株W-7，所述微生物群体感应信号分子为酰基高丝氨酸内酯类物质或DSF。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述依赖微生物群体感应信号致病的病原菌为：欧文氏菌(Erwinia)、迪卡氏菌(Dickeya)、黄单胞菌(Xanthomonas)伯克氏菌(Burkholderia)或绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)。

6.一种可降解微生物群体感应信号分子的降解菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述菌株W-7和/或其菌悬液。

7.一种依赖微生物群体感应信号分子致病的病原菌的生防制剂，其特征在于，含有权利要求1所述菌株W-7和/或其菌悬液。

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