CN1078886C - 抑制β－淀粉样蛋白产生的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于抑制或预防与阿尔茨海默症和老年唐氏综合征有关的大脑中淀粉状蛋白沉积的化合物和药物组合物以及方法。更进一步地说，本发明涉及阿尔茨海默症的治疗。

Description

抑制β-淀粉样蛋白产生的抑制剂
                    技术领域
本发明涉及用于抑制或预防脑中淀粉样蛋白沉积的化合物和药物组合物以及方法。更进一步地说，本发明涉及阿尔茨海默症的治疗。
                    背景技术
据估计，65岁以上的美国人口中有5％以上的人和85岁以上的美国人口中有15％以上的人患阿尔茨海默症。(Cross，A.J.，Eur.J.Pharmacol.(1982)82：77-80；Terry，R.D.等人，Ann.Neurol.(1983)14：497-506)。人们认为老人限制在长期护理设施中的主要原因是由于这种疾病，而死在专业护理室中的人中大约有65％患有该病。
有关与阿尔茨海默症的发生有关的生化和代谢现象的某些事实已为人们所知。在阿尔茨海默症脑中看到的两种形态和组织病理变化是神经原纤维紊乱(NFT)和淀粉样蛋白沉积。神经类的神经原纤维tangle也存在于其它退化性疾病中，但是在神经内空间(神经斑)和在周围的微脉管***(脉管斑)中均存在淀粉样蛋白沉积似乎是阿尔茨海默症的特点。其中神经斑是最为普遍的(Price，D.L.等人，Drug DevelopmentResearch(1985)5：59-68)。淀粉样蛋白斑在患有阿尔茨海默症的老年唐氏综合征患者的脑中也能看到。
人们已经采用阿尔茨海默症病人的富含蛋白斑的脑作为提取约4.2kd“核心”多肽，淀粉样蛋白斑核心蛋白(APCP)的一种源。这种多肽被Glenner，G.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1984)120：885-890命名为β-蛋白。其氨基-末端的氨基酸序列已被确定(Glenner，G.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1984)122：1131-1135；Masters，C.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82：4245-4259)。这两组所报道的氨基酸序列是相同的，只是Glenner等人报道说在阿尔茨海默症脑血管淀粉样蛋白的位11处有一个谷氨酰胺残基，而Masters等人报道说在11位为谷氨酸。此外，前一位作者报道说大脑血管淀粉样蛋白具有同种氨基末端，而后一位作者报导说是异种氨基末端。这两个小组均表示在成年的患有唐氏综合征的个体的淀粉样蛋白斑核心和血管淀粉样蛋白中发现了相同的肽并且报道了在11位为谷氨酸。Wong，C.W.等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82：8729-8732)表示与Masters(上文)所说的β-淀粉样蛋白核心蛋白的前10种氨基酸同源的一种合成肽可以提高小鼠的抗体并且这些抗体可以用来不仅使充满淀粉样蛋白的大脑血管染色而且使神经斑染色。这些结果被Allsop，D.等人(Neuroscience Letters(1986)68：252-256)利用针对一种合成肽(对应于氨基酸8-17)的抗体证实了。因此，一般说来，在阿尔茨海默症病人的脑的不同位置发现的蛋白斑在免疫反应性方面似乎是相似的。正如在多种常用的变性剂，如去污剂和离液剂中不能达到溶解所显示的，它是高度不溶的(Masters，上文，Allsop，D.等人，上文)。
有六种已知的与疾病有关的淀粉样蛋白沉积的例子，其中该淀粉样蛋白是由前体蛋白产生的：对于初始淀粉样变性，该前体是一种免疫球蛋白轻链；对于次级淀粉样变性，该前体为淀粉样蛋白A蛋白；对于淀粉样变性，该前体为前期白蛋白或其变体；对于甲状腺髓样癌，该前体为一种原降钙素片段；对于遗传性大脑出血，该前体为γ-示踪片段(参见Glenner，G.New England Journal of Medicine(1980)302：1283；Sletton，K.等人，Biochem J(1981)195：561；Benditt等人，FEBS Lett(1971)19：169；Sletton，K.等人，Eur.J Biochem(1974)41：117；Sletton，K.J Exp Med(1976)143：993)。上面只是部分列出，至少还有许多其它有关作为甲状腺癌的淀粉样蛋白的前体的原降钙素片段的文献。
由其它已知的与疾病有关的淀粉样蛋白沉积的例子类推，可以认为与阿尔茨海默症有关的β-淀粉样蛋白核心蛋白是由一种前体蛋白形成的。在较大蛋白的框架中含有β-淀粉样蛋白核心蛋白序列的蛋白已由Kang，J.等人描述(Nature(1987)325：733-736)。这种蛋白的序列是由从人胎儿脑组织cDNA库中分离出的cDNA克隆的序列推断出的，并且由695个氨基酸残基组成，在这些残基中，β-淀粉样蛋白核心蛋白的氨基端从597位开始。第二种含有β-淀粉样蛋白序列的前体蛋白是从由Ponte等人(Nature(1988)331：525-587)分离得到的cDNA克隆推测出来的。由Ponte等人分离得到的这种cDNA克隆编码了一种与Kang等人识别的蛋白相同的前体蛋白，只是它在该β-淀粉样蛋白核心蛋白序列的上游含有附加的57-氨基酸序列。这种57-氨基酸***序列包含一种功能区域，该区域与一系列蛋白酶抑制剂(以Kunitz-型丝氨酸蛋白酶抑制剂为人们所知)高度同源。其它人已鉴定了另一种含有770氨基酸的淀粉样蛋白前体蛋白(参见Kitaguchi等人，Nature(1988)331：530-532)。由Kitaguchi鉴定的前体与Ponte等人鉴定的前体相同，除了它在靠近57-氨基酸蛋白酶抑制剂区域处含有附加的19个氨基酸以外。还不清楚这些附加的19个氨基酸使该分子具有何种附加的功能。已经由cDNA克隆鉴定的各种淀粉样蛋白前体蛋白是由于在单个淀粉样蛋白前体基因的转录过程中发生了不同的信息剪接而造成的。
已经表明该淀粉样蛋白前体蛋白是通过正常的细胞代谢加工的，从而产生β-淀粉样蛋白核心蛋白(Haass等人，Nature(1992)359：322-325；Shoji等人，Science(1992)258：126-129；Seubert等人，Nature(1992)359：325-327)。但是还不清楚是否患有阿尔茨海默症的个体产生大量的β-淀粉样蛋白核心蛋白，尽管已经表明患有唐氏综合征的个体(他们不可避免地患有阿尔茨海默症)表达两倍以上的β-淀粉样蛋白前体蛋白(Neve等人，Neuron(1988)1：669-677)。可以认为淀粉样蛋白斑在阿尔茨海默症脑中的发展是由于该β-淀粉样蛋白的过量产生和/或降低的清除或螯合而造成的。因此，如果通过防止或抑制该前体发展产生淀粉样蛋白核心蛋白而设计出用来干扰蛋白斑形成过程的手段，则这些手段可以构成治疗或改善阿尔茨海默症发展的方法。但是，至今人们还没有充分地理解淀粉样蛋白前体蛋白产生β-淀粉样蛋白核心蛋白的加工过程，从而有效地治疗干扰导致淀粉样蛋白沉积的过程。
目前有多份报告描述了被推测为负责产生β-淀粉样蛋白和/或阿尔茨海默症病理的推断蛋白酶。这些推断蛋白酶包括许多类型酶，例如，丝氨酸、半胱氨酸和金属-蛋白酶。许多β-淀粉样蛋白形成性蛋白酶已经被分离并被鉴定。有些被报导的候选物包括多重催化蛋白酶(FEBS 304：57-60(1992)和FEBS Lett.257：388-392(1989))、乳细胞胃促胰酶(J.Biol.Chem.265：3836-43(1990))、金属-肽链内切酶24.15(Biochem.Biophys.Res.Commun.185：746-52(1992))、钙活化中性蛋白酶(calpain)(J.Neurosci.)10：2400-2411(1990)、钙活化丝氨酸蛋白酶(Biochem.Biophys.Res.Commu.174；790-796(1991))和脯氨酰-肽链内切酶(FEBS Lett.160：131-134(1990))。这些候选β-淀粉样蛋白形成性蛋白酶每一种的生理关系尚未被证实，例如通过抑制酶活性同时阻止β-淀粉样蛋白形成。
已经报道了多种在阿尔茨海默症脑组织中被改变的蛋白酶。举例来说，已经表明α-1-胰蛋白酶样免疫反应性在阿尔茨海默症脑中增加了(Biochem.Biophys.Res.Comm.Vol.193(2)：579-84(1993))，已经报道有三种不同的金属-蛋白酶在阿尔茨海默症脑中被提高了(J.Neurochem.Vol.58：983-92(1992))，已经观察到了多重催化蛋白酶的改变(Neurosc.Res.Comm，Vol.8(3)：185-90(1991))，已经报道了异常组织蛋白酶D和B免疫反应性(Neurosc.Lett.130：195-98(1991)和Proc.Natl.Acad.Sci.87：3861-65(1990))，在阿尔茨海默症大脑组织中已经显示出钙活化中性蛋白酶(calpain)被降低了(Neurobio.of Aging，11：425-31(1990))、被增加了(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2628-32(1993))或未被改变(J.Neurol.Sci.102：220-34(1991))。
上面的内容证明尽管在该领域中报道了大量工作，但是对于在治疗阿尔茨海默症方面有效的蛋白酶的类别方面或这些蛋白酶在与阿尔茨海默症脑组织接触时是否被改变方面还没有达成普遍的一致。
本发明的一个目的在于提供用于抑制患有阿尔茨海默痴呆的个体中β-淀粉样蛋白核心蛋白的产生和淀粉样蛋白斑形成的化合物和药物组合物以及方法。
本发明的进一步的目的在于提供用于治疗或改善阿尔茨海默症发展的药物组合物和方法。
    发明概述
本发明包括用于通过抑制或防止β-淀粉样蛋白核心蛋白在病人中产生而治疗疾病的化合物和这些化合物的用途。这些疾病的一些例子为阿尔茨海默型老年痴呆和老年唐氏综合征。
通式IA中的化合物可用于治疗阿尔茨海默型老年痴呆和老年唐氏综合征。但是这些化合物中有一些以前已被公开用于其它用途。因此，还描述了通式IB，该通式是通式IA的下属，相信通式IB描述了以前没有公开的化合物。通式IB在Xa和X的定义方面不同于通式IA。
在通式IA中描述了该化合物或其水合物、立体异构体、等排物或药物可接受的盐，它们可以用来治疗阿尔茨海默型老年痴呆：
    K-P4-P3-P2-NH-CH(R)-[C(＝O)]n-X
                                              IA
             (肽序列1)其中
X是H、CHF2、CF3、CF2F3、CF2CH2NHC(＝O)R1、CHFCH2NHC(＝O)R1、CF2C(＝O)W、C(＝O)NHR1、B(OH)2或C(＝O)R1，其中W为NHCH2Si(C1-C6烷基)2(Y)、NHR1或R1；
R是C1-C10烷基、苄基、CH2Si(C1-C6烷基)2(Y)、C1-C4亚烷基-O-R1、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、(CH2)m-萘基、或取代的苄基，该取代基为独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基、羟基、NHC(＝NH)NH2、NR1H、NO2、-O-(CH2)m-芳基、NHC(＝O)R1或卤素的1、2或3个取代基，其中m为1或2；
Y是C1-C6烷基、C1-C6链烯基、芳基或芳基烷基；
除非X是B(OH)2，n是1，否则n是0；
R1是H、C1-C6烷基、芳基或芳基烷基；
P2是一个键，或Leu、AIa、Met、Ile、Val、Nva、Nle、Phe、Asp、Ser、Pro、His、环戊基-甘氨酸、环己基甘氨酸、或叔-亮氨酸的残基或-HN-CH[CH2Si(C1-C6烷基)2(X)]C(＝O)-；
P3是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
P4是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
K是氢、脱氨基(desamino)、甲酰基、乙酰基、琥珀酰基、苯甲酰基、叔丁氧基羰基、苄氧羰基、甲苯磺酰基、丹酰基、异戊酰基、甲氧基琥珀酰基、1-金刚烷基磺酰基、1-金刚烷基乙酰基、2-羧基苯甲酰基、苯基乙酰基、叔丁基乙酰基、双[(1-萘基)甲基]乙酰基、-A-Rz，其中A是
Figure C9419359800181
及
Rz是芳基或芳基烷基，其中该芳基含有6、10或12个碳，这些芳基可以被1-3个独立选自氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羟基、含有1-6个碳原子的烷基、含有1-6个碳原子的烷氧基、羧基、烷基羰基氨基(其中该烷基含有1-6个碳)、5-四唑基和含有1-15个碳原子的酰基氨磺酰基(即酰基氨基磺酰基和磺酰基氨基羰基)的基团适当取代，条件是当该酰基氨磺酰基含有一个芳基时，该芳基可以进一步地被选自氟、氯、溴、碘和硝基的基团取代；和在功能上与它们等价的其它末端氨基保护基团，或
Figure C9419359800191
其中Z是N或CH，以及D是下列通式的基团
Figure C9419359800192
(波浪线
Figure C9419359800193
表示与该分子的其它部分相连处，即不是与Z相连)并且其中R′是H或C1-C6烷基，条件是同时X不是H、R不是苄基、P2不是Val、P3不是一个键、P4不是一个键而且K不是苄氧羰基。这些化合物可以用于抑制或预防淀粉样蛋白在患有阿尔茨海默症和唐氏综合征的大脑中发生沉积。
通式IB的化合物或其水合物、立体异构体、等排物或药物可接受的盐(它们被认为是以前没有被公开的通式IA的化合物)：
    Ka-P4 a-P3 a-P2 a-NH-CH(Ra)-[C(＝O)]n-Xa
                    (肽序列2)
           IB其中
Xa是H、CHF2、CF3、CF2F3、CF2CH2NHC(＝O)R1 a、CHFCH2NHC(＝O)R1 a、CF2C(＝O)Wa、C(＝O)NHR1 a、B(OH)2或C(＝O)R1 a，其中Wa为NHCH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)、NHR1 a或R1 a；条件是：
当Xa为H时，Ra是CH2Si(C1-C6烷基)2(C1-C6链烯基或芳基)、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、被NHC(＝O)R1 a或NHC(＝NH)NH2取代的苄基；
当Xa为CF3、CHF2、或C(＝O)NHR1 a时，Ra不是C1-C10
烷基、苄基、CH2OH、CH(OH)CH3或被一个羟基取代的苄
基；
  当Xa为CF2CH2NHC(＝O)R1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄
基、(CH2)m-萘基或被一个羟基取代的苄基；
  当Xa是CF2C(＝O)NH-苄基时，Ra不是苄基、叔-丁基-甲
基、或(CH2)m-萘基；
  当Xa为CF2C(＝O)NHR1 a时，Ra不是CH2Si(CH3)2(Y)、
C1-C10烷基、苄基、CH2OH、CH(OH)CH3或者被一个羟基、
C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基或-O
-(CH2)m-苯基取代的苄基；
  当Xa为C(＝O)R1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、C1-C4亚烷基-O-C1-C10烷基或(CH2)m-萘基；
当Xa是CF2C(＝O)苯乙基时，Ra不是苄基；
当Ra为CH2Si(C1-C6烷基)2(C1-C6链烯基或芳基)、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、或被NHC(＝O)R1 a或NHC(＝NH)NH2取代的苄基时，Xa不是C(＝O)H，
Ra是C1-C10烷基、苄基、CH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)、C1-C4亚烷基-O-R1 a、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、(CH2)m-萘基、或取代的苄基，该取代基为独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基、羟基、NHC(＝NH)NH2、NR1 aH、NO2、-O-(CH2)m-芳基、NHC(＝O)R1 a或卤素的1、2或3个取代基，其中m为1或2；
Ya是C1-C6烷基、C1-C6链烯基、芳基或芳基烷基；
除非Xa是B(OH)2，n是1，否则n是0；
R1 a是H、C1-C6烷基、芳基或芳基烷基；
P2 a是一个键、-HN-CH[CH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)]C(＝O)-，或Leu、Ala、Met、Ile、Val、Nva、Nle、Phe、Asp、Ser、Pro、His、环戊基-甘氨酸、环己基甘氨酸、或叔亮氨酸的残基；
P3 a是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
P4 a是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
Ka是氢、脱氨基、甲酰基、乙酰基、琥珀酰基、苯甲酰基、叔丁氧基羰基、苄氧羰基、甲苯磺酰基、丹酰基、异戊酰基、甲氧基琥珀酰基、1-金刚烷基磺酰基、1-金刚烷基乙酰基、2-羧基苯甲酰基、苯基乙酰基、叔丁基乙酰基、双[(1-萘基)甲基]乙酰基、-Aa-Rza，其中Aa是
Figure C9419359800221
及
Rza是芳基或芳基烷基，其中该芳基含有6、10或12个碳，可以被1-3个独立选自氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羟基、含有1-6个碳原子的烷基、含有1-6个碳原子的烷氧基、羧基、烷基羰基氨基(其中该烷基含有1-6个碳)、5-四唑基和含有1-15个碳原子的酰基氨磺酰基(即酰基氨基磺酰基和磺酰基氨基羰基)的基团适当取代，条件是当该酰基氨磺酰基含有一个芳基时，该芳基可以进一步地被选自氟、氯、溴、碘和硝基的基团取代；和在功能上与它们等价的其它末端氨基保护基团，或 其中
Za是N或CH，以及
Da是下列通式的基团
Figure C9419359800241
并且其中R′a是H或C1-C6烷基。
        发明详述
C1-C6或C1-C10烷基是指直链、支链、环状的烷基或其组合，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、环戊基、己基、异己基、环己基、环己基甲基和环戊基甲基。类似地，C1-C6亚烷基和C1-C4亚烷基分别是指1-6个和1-4个碳的二价基团，它们可以是直链的或支链的。C1-C6链烯基具有1-6个碳，它们是具有一个或多个双键的直链或支链。所有的C1-C10基团优选地是C1-C6基团，更优选的为C1-C4基团。所有的C1-C6基团优选地为C1-C4基团，更优选的为C1-C2基团。
具有天冬氨酸或谷氨酸部分的通式I的化合物可以是游离的形式或盐的形式，如酸加成盐或阴离子盐。这种化合物可以以本领域已知的方式彼此转变成其盐或碱形式。优选的盐是三氟乙酸盐、盐酸盐、钠、钾或铵盐，尽管该范围是要包括所有已知的用于肽化学领域中的盐。
术语“立体异构体”是通常用于单个分子的所有异构体的一个术语，这些分子仅仅是它们的原子在空间的取向不一样。它包括镜像异构体(对映体)、几何(顺式/反式)异构体和具有一个以上手性中心的化合物的异构体(它们彼此不是镜像(非对映体))。对于氨基酸来说，可以采用IUPAC-IUB JointCommission on Biochemical Nomenclature，Eur.J.Biochem.138：9-37(1984)所述的D/L或R/S命名法。除了甘氨酸以外的天然氨基酸都含有一个手性碳原子。除非另有说明，优选的化合物是L-构型的旋光活性氨基酸；但是申请人认为通式I化合物的氨基酸可以具有D-或L-构型，或者可以是D-和L-异构体的混合物，包括外消旋混合物。用于α-氨基酸的缩写列于表I中。
用于本文时，“阿尔茨海默症”还指阿尔茨海默型老年性痴呆。
“水合物”是指本发明的化合物的酮可以作为一种二-羟基亚甲基基团存在。本发明的化合物在正常的生理条件下可以认为是水合形式的。
“脱氨基基团”是指其上没有氨基相连的α-氨基酸。优选的脱氨基基团由没有其末端氨基基团的α-氨基酸Val、PheAla、Asp、Ser和His表示。
“等排物”是指位于相连的氨基酸(-C(O)NH-)之间的正常的肽键是-CH2NH-(还原的)、C(O)N(CH3)(N-甲基酰胺)、-COCH2-(酮)、-CH2(OH)CH2-(羟基)、-CH(NH2)CH2-(氨基)、-CH2CH2-(烃)的变化形式，或者倒置的(-HN(C＝O)-)。用于本文中的等排物还指位于氨基酸和保护基团K的羰基部分之间的C(＝O)NH键的倒置。举例来说，例21具有两种等排基团：一种等排物是位于保护基团(K＝[C6H5-(CH2)2-C(＝O)]-和缬氨酸残基的氨基部分之间，第二种等排物位于缬氨酸残基和苯丙氨酸醛残基之间。优选地，该等排物仅仅适用于K-P4-P3-P2-部分或其一部分上。最优选的是，本发明的化合物不是等排物形式。
“芳基”是指含有一个或多个芳香环的单环或双环碳环***，包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、2，3-二氢化茚基等等。芳基基团可以被一个、二个或三个独立选自C1-C6烷基、卤代烷基、烷氧基、硫代烷氧基、氨基烷基氨基、二烷基氨基、羟基、卤素、巯基、硝基、甲醛、羧基、烷氧羰基和氨基甲酰基的取代基取代或未被取代。上述烷基和烷氧基化合物含有1-6个碳原子。类似地，“芳烷基”是指与上述芳基相连的直链或支链的C1-C6亚烷基，如苄基。
“取代的苄基”是指苄基基团在合适的碳原子上，即间、邻和/或对位在其苯基部分上被取代，取代的苄基具有1-3个取代基。优选的是仅具有一个取代基，更优选的是该取代基在对位上。
每一个α-氨基酸具有一个特殊的“R-基团”，该R-基团是与该α-氨基酸的α-碳原子相连的侧链或残基。举例来说，甘氨酸的R-基团侧链为氢，对于丙氨酸来说，它是甲基，对于缬氨酸来说，它是异丙基。该α-氨基酸的特定的R-基团或侧链可以参见A.L.Lehninger关于生物化学的文章。
“(CH2)m-萘基”是在其1-或2-位上与萘基相连的直链或支链亚烷基。
除了甘氨酸以外的天然氨基酸都含有一个手性碳原子。除非另有说明，优选的化合物是L-构型的旋光活性氨基酸；但是申请人认为通式I化合物的氨基酸可以是D-或L-构型，也可以是D-和L-异构体的混合物，包括外消旋混合物。用于α-氨基酸的缩写列于表I中。
   表     I氨基酸        符号丙氨酸        Ala甘氨酸        Gly异亮氨酸      Ile亮氨酸        Leu赖氨酸        Lys丝氨酸        Ser精氨酸        Arg苏氨酸        Thr天冬氨酸      Asn缬氨酸        Val正缬氨酸      Nva正亮氨酸      Nle谷氨酸        Glu半胱氨酸      Cys组氨酸        His
值得注意的是，尽管通式IB其所有变量均具有一个“a”上标，但是通式IA和IB的唯一的区别在于限制性条件中的X和Xa。下列方案是针对没有“a”上标的变体的，但是用来描述通式IA和IB两者的合成。
一般说来，通式I的化合物可以采用本领域已知的标准化学反应来制备并且如方案A中所述。
方案A
Figure C9419359800281
               (肽序列3)
方案A提供了用于制备通式I的化合物的一种常规合成方案。
P2、P3和K-P4基团可以连结到结构(1)的氨基酸衍生物的游离氨基基团上。该P2、P3和K-P4可以通过公知的肽偶连技术而连接到未保护的游离氨基化合物上。
通常，可以通过将C-末端残基的α-胺解除保护并使用上述方法通过一个肽键与后面的适当保护的氨基酸相连而将肽延长。重复这种脱保护和偶连过程直到获得所需的序列。这种偶连可以如方案A中所说以分步形式用组成氨基酸来进行，也可以通过将片断(两种-数种氨基酸)缩合或将上述两种方法结合起来进行，也可以按照最初由Merrifield.J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149-2154所述的方法，通过固相肽合成技术来进行，上述文献作为参考而引入本文。当采用固相合成方法时，将C-端羧酸连接到一种不溶的载体(通常是聚苯乙烯)上。这些不溶的载体含有一个基团，该基团可以和醛基团反应形成一种对肽延长条件来说是稳定的但在其后又很容易裂解的键。其例子为氯-或溴甲基树脂、羟基甲基树脂和氨基甲基树脂。具有已经引入的所需C-端氨基酸的这些树脂当中有许多可以购买到。对于其中X为H的通式I的化合物来说，还可以在方案A的反应中采用一种连接化合物，从而将树脂与其中X为H的结构(1)的氨基酸衍生物的醛官能团相连。合适的连接化合物的例子为
Figure C9419359800291
另外，本发明的化合物还可以利用自动肽合成设备来合成。除了上述内容以外，肽合成技术还描述于Stewart和Young，“Solid Phase Peptide Synthesis”，2nd ed.，Pierce ChemicalCo.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend，Eds.，“The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology”，Vol 1，2，3，5和9，Academic Press，New York，1980-1987；Bodanszky，“Peptide Chemistry：A Practical Textbook”，Springer-Verlag，New York(1988)；和Bodanszky等人，“The Practiceof Peptide Synthesis”Springer-Verlag，New York(1984)，上述文件作为参考而引入本文。
两种氨基酸，一种氨基酸和一种肽，或两种肽片段之间的偶连可以采用标准偶连方法来完成，这些方法如叠氮化物法、混合碳酸酐(氯甲酸异丁酯)法、碳化二亚胺(二环己基碳化二亚胺、二异丙基碳化二亚胺，或可溶于水的碳化二亚胺)法、活性酯(对硝基苯酯、N-羟基琥珀酰亚氨基酯)法、Woodward试剂K法、羰基二咪唑法、磷试剂如BOP-Cl法，或氧化还原法。这些方法中有一些方法(特别是碳化二亚胺法)可以通过加入1-羟基苯并***而提高。这些偶连反应可以在溶液(液相)或固相中进行。
组成性氨基酸的官能团在偶连反应必须保护起来，以避免形成不需要的键。可以使用的保护基团列于Greene，“Protecting Groups in Organic Chemistry”，John Wiley &Sons，New York(1981)和“The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology”，Vol.3，Academic Press，New York(1981)中，上述文献作为参考而引入本文。
该C-末端残基的α-羧基通常利用一种可以裂解以产生羧酸的酯而保护起来。可以使用的保护基团包括：1)烷基酯，如甲基和叔丁基，2)芳基酯，如苄基和取代的苄基，或3)可以通过弱碱处理或弱还原手段裂解的酯，如三氯乙酯和苯甲酰甲酯。
每一种氨基酸的α-氨基基团都必须保护起来。可以采用本领域内已知的任何一种保护基团。其例子包括：1)酰基类，如甲酰基、三氟乙酰基、邻苯二甲酰基和对甲苯磺酰基；2)芳香族氨基甲酸酯类，如苄氧羰基(Cbz或Z)和取代的苄氧基羰基，1-(对-联苯基)-1-甲基乙氧基-羰基和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；3)脂肪族氨基甲酸酯类，如叔丁氧羰基(Boc)，乙氧羰基，二异丙基甲氧羰基和烯丙氧羰基；4)环烷基氨基甲酸酯类，如环戊氧基羰基和金刚烷氧基羰基；5)烷基类，如三苯甲基和苄基；6)三烷基甲硅烷，如三甲基甲硅烷；和7)含有巯基类，如苯基硫代羰基和二硫代琥珀酰基。优选的α-氨基保护基团是Boc或Fmoc，优选的为Fmoc。许多用于肽合成的被适当保护的氨基酸衍生物可以从市场上买到。
该α-氨基保护基团在与后面的氨基酸偶连之前裂解。当采用Boc基团时，所选择的方法是三氟乙酸(纯净的或在二氯甲烷中)或在二噁烷中的HCl。随后在偶连之前或当时用碱性溶液，如水缓冲液，或在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中的叔胺将所产生的铵盐中和。当采用Fmoc基团时，所选择的试剂为在二甲基甲酰胺中的哌啶或取代的哌啶，但是也可以采用任何一种仲胺或碱性水溶液。脱保护是在0℃至室温的温度下进行的。
任何一个带有侧链官能团的氨基酸在肽的制备过程中都必须用任何一种上述基团保护起来。本领域的技术人员将会认识到选择和使用适用于这些侧链官能团的保护基团将取决于该肽中的氨基酸和其它保护基团的存在。这些保护基团选择的关键在于在该α-氨基基团的脱保护和偶连过程中不能被除去。
举例来说，当采用Boc作为α-氨基保护基团时，下列侧链保护基团是适用的：对甲苯磺酰基(tosyl)可用来保护氨基酸如Lys和Arg的氨基侧链；对甲基苄基、乙酰氨基甲基、苄基(Bzl)或叔丁基磺酰基可用来保护氨基酸如Cys的含硫侧链；苄基(Bzl)醚可用来保护氨基酸如Ser或Thr的含羟基侧链。
当选择Fmoc用于α-氨保护时，一般以叔丁基为基础的保护基团是合适的。举例来说，对赖氨酸来说可以采用Boc，对丝氨酸和苏氨酸来说可以采用叔丁基醚，对谷氨酸来说可以采用叔丁基酯。
一旦该肽的延长完成了，要将所有的保护基团除去。当采用液相合成时，可以采用在选择保护基团时所说的任何一种方式除去保护基团。这些方法对于本领域的技术人员来说是已知的。
当采用固相合成时，一般在保护基团除去的同时，将肽与树脂分离。当在该合成中采用Boc保护方案时，优选的用于将肽与树脂分开的方法是在0℃下用含有添加剂如二甲硫、苯甲醚、硫代苯甲醚或对甲酚的无水HF进行处理。还可以利用其它酸性试剂如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物来完成肽的裂解。如果采用Fmoc保护方案，则采用前面所说的试剂使N-末端Fmoc基团裂解。其它的保护基团和肽可以采用三氟乙酸和各种添加剂如苯甲醚等等的溶液来与该树脂分离。
对于其中X为H的通式I的那些化合物来说，通式I的肽化合物可以用含水酸/甲醛来与连接化合物和树脂分开。
或者，通式I的化合物可以采用本领域已知的并且如方案B中所说的标准化学反应来制备。
      方案B
方案B提供了另一种制备通式I化合物的一般合成方案。
P2、P3和K-P4基团可以如前面方案A所述连接到结构(2)的氨基醇衍生物的游离氨基基团上，从而产生结构(3)的肽醇。
然后，通过本领域已知的和本领域的普通技术人员理解的技术和方法，如利用草酰氯和二甲基亚砜的Swern氧化法，将结构(3)的肽醇的醇官能团氧化，从而产生通式I的化合物。
用于方案A和B中的起始物料对于本领域的普通技术人员来说是很容易获得的。举例来说，氨基酸P2、P3和其中K为氢的K-P4可以从市场上买到，结构(L1)的连接化合物描述于J.Am.Chem.Soc.，114，3157-59(1992)中。此外，在欧洲专利申请0363284(1990年4月11日)中描述了取代的氨基酸K-P4，其中K是乙酰基、琥珀酰基、苯甲酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、甲苯磺酰基、丹酰基、异戊酰基、甲氧基琥珀酰基、1-金刚烷基磺酰基、1-金刚烷基乙酰基、2-羧基苯甲酰基、苯基乙酰基、叔丁基乙酰基、双[(1-萘基)甲基]乙酰基、-A-Rz，其中A是
Figure C9419359800341
及Rz是含有6、10或12个碳的芳基，这些芳基可以被1-3个独立选自氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羟基、含有1-6个碳原子的烷基、含有1-6个碳原子的烷氧基、羧基、烷基羰基氨基(其中该烷基含有1-6个碳)、5-四唑基和含有1-15个碳原子的酰基氨磺酰基(即酰基氨基磺酰基和磺酰基氨基羰基)的基团适当取代，条件是当该酰基氨磺酰基含有一个芳基时，该芳基可以进一步地被选自氟、氯、溴、碘和硝基的基团取代；和在功能上与它们等价的其它末端氨基保护基团的一个部分取代。通式(1)的起始氨基化合物对于本领域的普通技术人员来说是很容易获得的。举例来说，其中：
X为H和R为苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于欧洲专利申请0363284和WO84/00365中；
X为H和R为CH2Si(CH3)3的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于欧洲专利申请0363284中并且在本文中描述于实施例12中。如在例13和14中所说，在甲硅烷基上的取代基可以不同；
X为H和R为取代的苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于专利申请PCT/US91/09741中；
X为CF3和CHF2，R为苄基或被NHC(NH)NH2取代的苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于欧洲专利申请0195212(公开日为1986年9月24日，发明人为Michel Jung等人)中；
X为CF2CH2NHC(＝O)R1和R为苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物作为中间产物描述于欧洲专利申请OPI0275101(1988年1月14日提出，发明人为Daniel Schirlin等人)中；CFHCH2NHC(＝O)R1的单氟衍生物可以利用溴-氟乙酸乙酯代替溴-二氟乙酸乙酯通过相似的方法合成；
X为CF2C(O)W，其中W为NHCH2Si(烷基)3和R为苄基、CH2Si(CH3)3或取代的苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于专利申请PCT/US91/09741(发明人为DanielSchirlin等人，1991年12月20日提出)中，并且当R为(CH2)m-萘基时，可以采用本领域已知的起始物料采用类似的方法制备；
X为CF2C(O)W，其中W为NHR1或R1和R为苄基、CH2Si(CH3)3或取代的苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于专利申请PCT/US91/09741(发明人为DanielSchirlin等人，1991年12月20日提出)中，并且当R为(CH2)m-萘基时，可以采用本领域已知的起始物料采用类似的方法制备；
X为C(O)R1和R为苄基、CH2Si(CH3)3、(CH2)m-萘基或取代的苄基的一些被保护的通式IA的氨基化合物描述于美国专利4820691(1989年4月11日提出)中；以及
用于其中X为H的通式I的化合物的合成中的连接化合物反式-4-(氨基甲基环己烷)甲酸苄酯如，J.Am.Chem.Soc.，1992，114，3156-3157中所述由相应的酸制备。所有上述引用文献作为参考而引入本文。
此外，其它用于方案A和B中的起始物料可以通过下列已知的和为本领域内普通技术人员理解的合成方法制备。
利用本领域内已知的标准化学反应可以制备被取代的结构1的氨基酸K-P4，其中K为
Figure C9419359800361
其中Z为N或CH，以及D为下列通式的基团
Figure C9419359800371
其中R′为氢或C1-C6烷基。
用于制备其中K为
Figure C9419359800381
其中D为-C(＝O)-的取代的氨基酸K-P4的方法描述于方案B中，其中P4和Z如前面所定义或是这些基团的功能等同物。
    方案C
更进一步地说，其中K为
Figure C9419359800383
其中D为-C(＝O)-的氨基酸K-P4是通过在1-4摩尔当量的一种合适的可以起卤化氢受体作用的胺的存在下将其中K为氢的氨基酸K-P4与结构(4)的酰卤偶连而制得。适用作卤化氢受体的胺是有机叔胺，例如三-(低级烷基)胺如三乙胺，或芳香胺如甲基吡啶、可力丁和吡啶。当采用吡啶、甲基吡啶或可力丁时，它们可以以高度过量使用，因此还可以起到反应溶剂的作用。特别适用于该反应的是N-甲基吗啉(“NMM”)。该偶连反应可以通过将过量的，如1-5倍，优选地约4倍摩尔过量的胺然后是结构(4)的酰氯加入到其中K为氢的氨基酸K-P4的溶液中而完成。该溶剂可以是任何一种合适的溶剂，例如石油醚，氯代烃如四氯化碳、二氯乙烷、二氯甲烷或氯仿；氯代芳烃，如1，2，4-三氯苯，或邻二氯苯；二硫化碳；一种醚溶剂，如***、四氢呋喃、或1，4-二噁烷，或一种芳香溶剂，如苯、甲苯或二甲苯。对于该偶连反应来说，二氯甲烷是优选的溶剂。根据反应物、溶剂、该浓度和其它因素，例如可以在约0℃-60℃的温度，方便地是在室温即25℃下，使该反应进行约15分钟-约6小时。其中K为
Figure C9419359800391
其中D为-C(＝O)-的氨基酸K-P4可以通过任何一种合适的技术，如通过在硅胶上层析而从该反应混合物中分离出来。
类似地，仅仅通过用合适的中间体
Figure C9419359800392
其中D不是-C(＝O)-和E为Cl或OH(相应的酸、酰氯或磺酰氯)，取代方案C中结构(5)的化合物，就可以制备得到其中K为其中D不是-C(＝O)-的被取代的氨基酸K-P4。
结构(4)的酰氯和合适的具有下列通式的中间体其中D不是-C(＝O)-和E为Cl或OH(相应的酸、酰氯或磺酰氯)，可以从市场上买到，也可以很容易地通过本领域的普通技术人员已知并理解的技术和方法来制得。
举例来说，具有下列通式的合适中间体可以如方案D中所述而制得，其中所有的取代基如前所定义。
                        方案D
Figure C9419359800404
方案D提供了一种用于制备具有下列通式的合适中间体的一般合成方法
Figure C9419359800412
其中Z如前面所定义。
在步骤a中，合适的2，5-吡啶二羧酸，2-甲基酯(6)(Nippon Kagaku Zasshi，1967，88，563)的羧酸官能团利用本领域的普通技术人员已知和理解的技术和方法，例如使用亚硫酰氯，将其转变成其酰氯，结果产生相应的2，5-吡啶二羧酸，2-甲基酯，5-酰氯(7)。
在步骤b中，利用本领域的普通技术人员已知和理解的技术和方法，将2，5-吡啶二羧酸，2-甲基酯，5-酰氯(7)用吗啉(8)酰胺化，结果产生相应的2，5-吡啶二羧酸，2-甲基酯，3-吗啉代酰胺(9)。
在步骤c中，2，5-吡啶二羧酸，2-甲基酯，3-吗啉代酰胺(9)的甲基酯官能团利用本领域的普通技术人员已知和理解的技术和方法，例如利用甲醇中的氢氧化锂，使其水解，从而产生2，5-吡啶二羧酸，5-吗啉代酰胺(10)。
此外，具有下列通式的合适的中间体
Figure C9419359800421
可以如方案E中所说而制得，其中所有的取代基均如前面所定义。
        方案E
Figure C9419359800431
方案E提供了一种用于制备具有下列通式的合适中间体的一般合成方法其中Z如前面所定义。
在步骤a中，2，5-吡啶二羧酸，2-甲基酯(6)(NipponKagaku Zasshi，1967，88，563)的游离羧酸官能团利用本领域的普通技术人员已知和理解的技术和方法，例如使用二环己基碳化二亚胺(Synthesis，1979，570)的叔丁基醇加成物，使其转变成其叔丁基酯，结果产生相应的2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯(11)。
举例来说，可以将2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯(6)在一种合适的有机溶剂如二氯甲烷中与过量摩尔数的二环基己碳化二亚胺的叔丁基加成物起反应。该反应典型地可以在0℃至室温的温度下进行并且持续2-24小时。通过本领域已知的标准提取方法，将2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯(11)从反应区中分离出来，并且可以通过结晶而纯化。
在步骤b中，将2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯(11)用吗啉(8)酰胺化，结果产生相应的2，5-吡啶二羧酸2-吗啉代酰胺5-叔丁基酯(12)。
举例来说，将2，5-吡啶二羧酸2-甲基酯5-叔丁基酯(11)在一种合适的有机溶剂如四氢呋喃中与过量摩尔量的吗啉接触。典型地，将该反应在从室温到回流的温度下进行并持续5小时至3天。通过本领域已知的标准提取方法，将2，5-吡啶二羧酸2-吗啉代酰胺5-叔丁基酯(11)从反应区中分离出来，并且可以通过结晶而纯化。
在步骤c中，2，5-吡啶二羧酸2-吗啉代酰胺5-叔丁基酯(12)的叔丁基酯官能团例如利用硝基甲烷中的HCl使其水解，从而产生2，5-吡啶二羧酸2-吗啉代酰胺(13)。
一般说来，通式IA可以利用本领域已知的标准化学反应而制得。举例来说，在方案F中描述了其中X为H的通式IA的化合物的合成。除非另有说明，所有的取代基均如前面所定义。试剂和起始物料对于熟悉本领域的普通技术人员来说是很容易获得的。
     方案F
Figure C9419359800461
当X为H时的通式IA
由化合物(14)所定义的所需要的起始物料可以从市场上买到，也可以通过采用已知的现有技术而获得。术语“Pg”是指如前面所完整定义的一种合适的保护基团。这类化合物的例子为被适当保护的氨基酸如丝氨酸、高丝氨酸、苏氨酸、别苏氨酸等等。此外，利用Baldwin，J.E.等人，Tetrahedron，44，2633(1988)中所述的方法，可以将L-赖氨酸转变成2(S)-2-氨基-6-羟基己酸，上述文献被引入本文。
在方案F步骤A中，保护的氨基酸(14)被转化成酰胺(15)。该酰胺化反应可以采用一种与利用保护的氨基酸(14)和N-烷基O-烷基羟基胺在两种氨基酸之间的反应一样的偶连反应而完成，该标准的偶连反应可以采用前面对在两种氨基酸之间的偶连所说的标准偶连方法来实现，从而产生酰胺(15)。
在方案F步骤B中，在本领域已知的如T.H.Green，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley andSons，1981，Chapter 7中所说的条件下将酰胺(15)脱去保护，结果产生脱去保护的酰胺(16)。举例来说，当“Pg”是叔丁氧羰基(Boc)时，可以将酰胺(15)溶解于一种合适的溶剂，如用过量氯化氢(气体)处理过的乙酸乙酯中，并且在约0℃-30℃的温度下搅拌约30分钟-4小时。然后在真空下除去溶剂，结果产生HCl盐形式的脱去保护的酰胺(16)。
在方案F步骤C中，通过利用前面在方案A中所说的方法将后面的适当保护的氨基酸经肽键偶连，或者通过将片段缩合，或者通过将两种方法结合起来而将该脱去保护的酰胺(16)延长，结果产生延长的肽(17)。
在方案F步骤D中，将延长的肽(17)还原，结果产生所需的通式IA的醛。
举例来说，可以将延长的肽(17)溶解于一种合适的有机溶剂如四氢呋喃中，并且在氮气气氛下冷却至0℃。然后向该溶液中加入过量的一种合适的还原剂。合适的还原剂的例子为氢化锂铝、氢化二异丁基铝、氢化三叔丁氧基铝、氢化钠铝、氢化二氨基铝等等。优选的还原剂是氢化锂铝。该反应在约0℃-20℃的温度下搅拌20分钟-2小时。然后终止该反应，并通过本领域已知的技术将产物分离出来。举例来说，可以用10％硫酸氢钠然后加入10％盐酸终止该反应。用一种合适的有机溶剂如乙酸乙酯将含水的混合物萃取。然后用水洗涤该有机萃取物，在硫酸镁上干燥，过滤并在真空下浓缩，结果产生通式IA的醛。
根据方案F中所说的方法可以制得其中X为C(＝O)NHR1的通式IA的化合物。除非另有说明，所有的取代基均如前面所定义。试剂和起始物料对于本领域的普通技术人员来说是很容易获得的。
         方案G
Figure C9419359800491
当X为C(O)NHR1时的通式IC
在方案G，步骤A中，通过用一种合适的碱进行处理，将α-酮酯(18)选择性地水解成α-酮酸(19)。[α-酮酯(18)可以按照Angelastro，M.R.等人，J.Med.Chem.，33，11(1990)中所述的方法而很容易地制得。]
举例来说，可以将适当取代的α-酮酯(18)溶解于一种合适的溶剂混合物如甲醇∶水(50∶50)中，并且用等当量的合适的碱如氢氧化锂进行处理。将该反应在约0℃-30℃的温度下搅拌约1-10小时。然后通过本领域已知的提取技术将α-酮酸(19)分离。举例来说，用一种合适的有机溶剂如乙酸乙酯和等体积的水将该反应烯释。分离各层。水层用稀盐酸酸化并用一种合适的有机溶剂，如乙酸乙酯萃取。将合在一起的有机萃取物在无水硫酸镁上干燥，过滤，并在真空下浓缩，结果产生α-酮酸(19)。
在方案G步骤B中，在本领域已知的条件下，将该α-酮酸(19)与伯胺(20)偶连，结果产生所需的α-酮酰胺(21)。
举例来说，将适当取代的α-酮酸(19)溶解于一种合适的有机溶剂如二氯甲烷中。然后用1当量的1-羟基苯并***、1当量的二异丙基乙胺和1当量的伯胺(20)对该溶液进行处理。加入1当量的二环己基碳化二亚胺，将该反应在约0℃-25℃的温度下搅拌约2-10小时。然后利用本领域已知的技术将产物分离。举例来说，用乙酸乙酯稀释该反应物，用0.5N冷盐酸，饱和的碳酸氢钠进行冲洗，在无水硫酸镁上干燥，过滤并在真空下浓缩，结果产生α-酮酰胺(21)。
在方案G步骤C中，将α-酮酰胺(21)在本领域已知的如T.H.Green，“Protective Groups in Organic Synthesis”，JohnWiley and Sons，1981，Chapter 7中所说的条件下脱去保护，结果产生脱去保护的α-酮酰胺(22)。举例来说，当“Pg”是叔丁氧羰基(Boc)时，可以将α-酮酰胺(21)溶解于一种合适的溶剂如用过量氯化氢(气体)处理过的乙酸乙酯中，并且在约0℃-30℃下搅拌约30分钟-4小时。然后在真空下除去该溶剂，结果产生HCl盐形式的脱去保护的α-酮酰胺(22)。
然后将脱去保护的α-酮酰胺(22)放在方案A中所说的反应条件下，结果产生其中X为C(＝O)NHR1的通式IA的化合物。
在其中X为B(OH)2的通式IA中，可以采用下列总方案(其中R不是苄基的其它起始物料可以如本领域已知的那样使用)：
     方案H
其中X＝B(OH)2的通式IC
在方案H中，利用一种保护基团(Pg1)(它可以是环状的，如Pg1＝蒎烷)或两种不同的保护基团将硼酸衍生物(23)保护起来。
在步骤A中，发生了同系化反应(homologation)，并且引入了一个离去基团(Lg)如氯。然后在步骤B中该硼酸酯(24)被胺化。优选地，胺(25)利用任意两个保护基团(Pg2和Pg3)保护起来。举例来说，参见J.Am.Chem.Soc.，1981，103：5241-5242中所述。在步骤C中，可以如前面所述或如本领域已知的那样将该胺脱去保护。在步骤C中的偶连如前面在方案A中所述的那样发生。然后通过已知的手段可以将该偶连化合物(27)的硼酸酯部分脱去保护(参见为前面反应举例的J.Am.Chem.Soc.1981，103：5241-5242)。
为了引入下列种类的取代基：NR1H，方案I中的起始物料应该是如下所说的保护形式：
Figure C9419359800531
当苄基(R侧链)上的取代基是NO2时，下列方案是优选的
     方案I
在步骤a中，在二环己基碳化二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的存在下，利用本领域的普通技术人员已知并理解的技术和方法，如用甲醇，将-NO2苯丙氨酸衍生物转变成一种酯。在步骤b中，酯(29)在本领域已知的如T.H.Green，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley andSons，1981，Chapter 7中所说的条件下脱去保护，结果产生脱去保护的酯(30)。
在步骤c中，通过利用前面在方案I中所说的方法将后面的适当保护的氨基酸经肽键偶连，或者通过将片段缩合，或者通过将两种方法结合起来而将该脱去保护的酯(30)延长，结果产生延长的肽(31)。
在步骤d中，利用本领域的普通技术人员已知并理解的技术和方法，如使用氢化二异丁基铝(Dibal)，在甲苯/***混合物中，在低温(-78℃--50℃)下，将延长的肽(31)还原成醛(32)。
其中X为CHF2或CF3的通式IA的化合物可以根据方案J而制得。
对于其中X为-CF2H或-CF3的那些化合物来说，用于标准肽偶连技术应用过程中的中间体是通式IIa-b的化合物
Figure C9419359800551
其中X′为-CF3或-CF2H，R如前面在通式IA所定义。类似地，在上述方案中的代号P1、P2、P3、P4和K如通式IA所定义，只是其下属意义或其他变化(如在X中)使用加撇符号表示并对这些改变的符号有具体说明。这些化合物的制备和应用在方案J中示出。
         方案J式中R6为烷基、苯基或其它等价，X′为-CF2H或-CF3。HA′表示一种酸。
通常，取代的吖内酯(34)的形成是通过标准的反应条件由N-保护的氨基酸(33)进行的，其中，将该氨基酸衍生物(33)在一种酸酐的存在下加热。由此产生的吖内酯(34)与二或三氟乙酸酐或酰卤起反应，结果产生一种氟化中间体，该中间体(分离或未分离)用无水草酸进行处理，从而产生N-保护的氟化酮(35)，该酮随后被化学还原成其醇酰胺(36)。在标准的酸性条件下将该酰胺(36)裂解，从而产生其酰胺酸盐(例如其盐酸盐(37))。中和之后，可以利用标准的肽化学技术将醇(IIa)偶连到KP4P3P2OH上，从而产生进行Swern氧化的化合物(38)，由此获得所需的产物(39a)和(39b)(分别是酮或水合物)。另外，也可以根据标准的肽化学技术将醇(IIa)氧化成与KP4P3P2OH偶连的酮(IIb)。当采用这种替代方法时，首先用Boc保护基团将该氨基部分保护起来，通过Swern氧化工艺将OH官能团氧化成其酮，并且随后将Boc保护基团除去，所得到的化合物(IIb)偶连到KP4P3P2OH上。
方案J也适用于制备其中X为CF2CF3的通式IA的化合物，取代的吖内酯(34)在五氟丙酸酸酐或酰卤的存在下被加热。
在方案K中描述了另一种制备其中X为CF2CF3的通式IA的化合物的途径。
        方案K
Figure C9419359800581
在步骤a中，保护的氨基酸(40)被转化成氧肟酸酯(41)。该酰胺化反应可以利用保护的氨基酸(40)和N-烷基O-烷基羟基胺，利用如在两种氨基酸之间的偶连反应来完成。该标准偶连反应可以利用前面对两种氨基酸之间的偶连所说的标准偶连方法来进行，从而产生氧肟酸酯(41)。
在步骤b中该保护的氧肟酸酯(41)被转化成保护的五氟酮(43)或(44)。该反应可以利用在下列参考文献中所说的偶连反应来进行，M.R.Angelastro，J.P.Burkhart，P.Bey，N.P.Peet，Tetrahedron Letters，33(1992)，3265-3268。
在步骤c中，氧肟酸酯(41)在本领域已知的如T.H.Green.“Protective GFoups in Organic Synthesis”，John Wiley andSons，1981，Chapter 7中所说的条件下脱去保护，从而产生脱去保护的氧肟酸酯(41)。通过利用前面在方案K中所说的方法将后面的适当保护的氨基酸经肽键偶连，或者通过将片段缩合，或者通过将两种方法结合起来而将该脱去保护的氧肟酸酯(41)延长，结果产生延长的肽(42)。
在步骤d中，酮(43)在前面所说的条件下脱去保护。通过利用前面在方案K中所说的方法将后面的适当保护的氨基酸经肽键偶连，或者通过将片段缩合，或者通过将两种方法结合起来而将该脱去保护的酮(43)延长，结果产生延长的酮(43)。
为了制备其中X为CF2CH2NHCOR1的通式IA的化合物，可以采用下列方案。
     方案L
Figure C9419359800591
Figure C9419359800601
在进行方案L的步骤时，优选地是用醛(45)开始，其中保护基团是一种氨基甲酸酯，优选地其中Pg是苄氧羰基(CBZ)。对这种保护的醛在锌的存在下与溴二氟乙酸的酯，优选地为乙基酯进行缩合反应。优选地，该反应是在氮气气氛下在一种无水非质子传递溶剂如四氢呋喃、***、二甲氧基乙烷等等中进行的。在回流条件下，优选地在约60℃下将该反应混合物慢慢加热约1-12小时。通过在无水条件下用液氨进行处理，优选地用如无水***的溶剂将该酯(46)转化成其伯酰胺(47)。该酰胺化反应是在-78℃下开始的，在用氨饱和之后，将该反应混合物缓慢升温至室温。将所形成的酰胺化学还原，从而形成游离胺。该化学还原可以很容易地通过在氮气气氛下、在一种无水非质子传递溶剂(如THF)中、在回流条件下将该酰胺与二硼烷，优选二硼烷/二甲基硫混合物起反应而进行。该还原反应产生了一种酸(HCl)盐形式的所需的胺，通过pH调整，可以产生游离的胺，这种游离胺可以采用标准的反应条件(例如在室温下的(BOC)2O，THF)、用一种N-保护基团(例如P′g是叔丁氧羰基)适当地保护起来，从而保护该胺。另外，还可以将游离胺置于设计用来在二氟亚甲基部分的P′侧上形成所需的α-氨基酸或肽部分的反应条件下。
在获得通式(48)的中间体以后，可以进行标准的α-氨基酸或肽偶连工艺，从而制得通式IA的各种化合物。在实践中，可以更容易地在该二氟亚甲基部分的P′侧上进行偶连。
对其中X为CF2CH2NHCOR1的通式IA的化合物来说，应该采用下列方案M。
可以通过已知的Swern氧化工艺，或者通过采用重铬酸吡啶鎓，或铬酸酐吡啶鎓配合物的改良Jones反应，或者用1，1，1-三乙酰氧基-2，1-benzoxiodol(Dess-Martin试剂)而进行该氧化步骤。
为了制备其中X为CHFCH2NHCOR1的通式IA的化合物，可以采用方案L，第一步是在锌的存在下、在醛(45)和溴氟乙酸的一种酯、优选地为乙酯之间进行缩合反应。优选地，该反应可以在一种无水非质子传递溶剂(THF、***、二甲氧基乙烷)中、在氮气氛下进行。其条件如对方案L所说的那样。
为了制备其中X为CF2(C＝O)W和W为NHCH2Si(C1-C6烷基)2(B)或NHR1的通式IA的化合物，可以采用方案N。
        方案N
Figure C9419359800641
步骤a与方案L步骤a相似，并且适用于本发明的所有侧链。在方案N中的酯(54)通过在无水条件下，优选地用如THF的溶剂、采用相应的伯胺(58)或(59)而转化成仲酰胺(55)。该酰胺化反应是在0℃下或在室温下开始的，并且可以将该反应混合物加热至回流，以完成该反应。
在步骤c中，在与方案F步骤b中所说相似的条件下，将所形成的酰胺(55)脱去保护。通过利用前面在方案A中所说的方法将后面的适当保护的氨基酸经肽键偶连，或者通过将片段缩合，或者通过将两种方法结合起来而将该脱去保护的酰胺延长，结果产生延长的肽(56)。
在步骤d中，利用草酰氯和二甲基亚砜，将醇(56)的醇官能团通过本领域的普通技术人员已知的并理解的技术和方法如Swern氧化法氧化，从而产生通式(58)的化合物。
为了制备其中X为CF2C(＝O)W并且W等于R1的通式IA的化合物，可以采用下列方案。
       方案O★如前面所述
在步骤a中，优选地，通过在无水条件(如THF)下、在低温(优选地为0℃)下、在一种惰性溶剂中向氯二氟乙氧肟酸二甲酯(60)中加入MR1(由R1-卤素产生)(优选地为Li或Mg)的有机金属衍生物而制得氯二氟甲基酮(61)。
在步骤a′中，优选地，通过在无水条件(如THF)下、在低温(优选地为-20℃)下、在一种惰性溶剂中向氯二氟乙酸(60a)中加入MR1(由R1-卤素产生)(优选地为Li或Mg)的有机金属衍生物而制得氯二氟甲基酮(61)。
在0℃下、在氮气下，在THF中将上述酮(61)加入到锌、四氯化肽和所需的醛的混合物中。
在步骤c中，利用草酰氯和二甲基亚砜，通过本领域的普通技术人员已知并理解的技术和方法如Swein氧化法将结构(62)的肽醇的醇官能团氧化，结果产生通式(63)的化合物。参见：D.Schirlin等人，Bioorg.and Medicinal Chem.Letters，3(1993)，253-258。
下列实施例表示典型的合成过程。这些实施例应该被理解成是描述性的，它们并不是要对本发明的范围进行任何限制。用于本文时，下列述语具有所说的含义：“g”是指克；“mmol”是指毫摩尔；“ml”是指毫升；“bp”是指沸点；“℃”是指摄氏度；“mmHg”是指毫米汞柱；“μl”是指微升；“μg”是指微克；“μM”是指微摩尔；“Z”或“Cbz”是指苄氧羰基；“THF”是指四氢呋喃；“DCU”是指N，N-二氯脲烷；“Eq”是指等当量；“Atg”是指克原子。
实施例1
Figure C9419359800671
制备苄氧羰基-L-缬氨酰-环戊基甘氨醛(glvcinal)步骤A：苄氧羰基环戊基甘氨醇(glycinol)
在氮气氛下，向充分搅拌过的CbZ-环戊基甘氨酸(0.336g，1.2mmol)在3ml无水四氢呋喃中的溶液中滴加硼烷-二甲硫配合物(1M，在二氯甲烷中，2.4ml)。在室温下搅拌所得溶液16小时。小心地加入水(1ml)，并蒸发该混合物。将油状残余物溶于乙酸乙酯中，用饱和柠檬酸、碳酸氢钠和盐水溶液洗涤该溶液。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到0.2g(60％)油状的醇。Rf＝0.25(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚3∶1)MS：MH+＝264。步骤B：环戊基甘氨醇
将实施例1步骤A的醇(0.74mmol)和0.05g碳载氢氧化钯(Pearlman催化剂，10％)在20ml异丙醇中的混合物在室温下和大气压下氢化16小时。过滤催化剂并蒸发滤液，得到0.076g(80％)未保护的氨基醇。步骤C：苄氧羰基-L-缬氨酰-环戊基甘氨醇
将环戊基甘氨醇(0.065g，0.5mmol)在5ml二氯甲烷中的溶液加入苄氧羰基-L-缬氨酰-O-苯并***基酯[通常通过用羟基-苯并***(0.077g，0.5mmol)、二环己基碳化二亚胺(0.103g，0.5mmol)和N-甲基吗啉(0.101g，1mmol)活化Cbz-缬氨酸(0.13g，0.5mmol)进行制备]在5ml无水二氯甲烷中的溶液中。所得混合物在室温下搅拌16小时并过滤。蒸发滤液，并将油状残余物溶于乙酸乙酯中。用饱和柠檬酸、碳酸氢钠和盐水溶液洗涤该溶液。用MgSO4干燥并蒸发溶剂，得到0.13g淡黄色油，该油在硅胶上进行快速层析(乙酸乙酯∶石油醚1∶1，Rf＝0.2)。蒸发含有产物的合并的流份，得到0.13g(70％)油状的二肽醇。MS：MH+＝363。步骤D：苄氧羰基-L-缬氨酰-环戊基甘氨醛
在室温下，将上述二肽醇(0.086g，0.24mmol)、Dess-Martin全碘烷(periodinane)(0.2g，0.48mmol)和4ml无水二氯甲烷的混合物搅拌2小时。加入异丙醇(1ml)，蒸发溶液至干。对固体残余物进行快速层析(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚1∶7，Rf＝0.3)。蒸发含有产物的合并的流份，得到0.038g(47％)固体的标题化合物。C20H28O4N2.025H2O的分析计算值：C，65.90；H，7.74；N，7.68。实测值：C，66.04；H，7.62；N，7.66。
          实施例2制备苄氧羰基-L-缬氨酰-环己基甘氨醛步骤A：2-环己基甘氨醇
将L-苯基甘氨酸(0.96g，7mmol)、0.1g5％碳载铑和50ml乙酸的混合物在室温下和8巴的压力下氢化48小时。过滤催化剂并蒸发溶液至干(用四氯化碳作共溶剂进行几次蒸发)，得到油状物。用饱和氯化氢气体-醚溶液处理该油，并蒸发溶剂，得到白色固体状标题化合物(0.126g，100％)。步骤B：苄氧羰基-L-缬氨酰-环己基甘氨醇
采用实施例1步骤C的偶连方法，由实施例2步骤A的产物和苄氧羰基-L-缬氨酸得到标题化合物，产率47％。Rf＝0.3(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚4∶6)。C21H32O4N2的分析计算值：C，66.99；H，6.57；N，7.44。实测值：C，67.17；H，6.76；N，7.61。步骤C：苄氧羰基-L-缬氨酰-环己基甘氨醛
采用实施例1步骧D所述的Dess-Martin氧化方法，由实施例2步骤B的醇得到标题的醛，产率78％。Rf＝0.5(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚2∶3)。MS：MH+＝375C21H30N2O4.0.25H2O的分析计算值：C，66.55；H，6.11；N.7.39。实测值：C，66.35；H，6.12；N，7.56。
    实施例3
Figure C9419359800711
制备CBz-L-Ala-L-Phe-H
将CBz-Ala-Phe-OH(0.5g，1.4mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中。加入N，N′-二异丙基乙胺(DIEA，0.23ml)，并将该溶液冷却至0℃。向反应物中加入二(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl，0.34g)、N，O-二甲基羟胺·HCl(0.15g，1.5mmol)和DIEA(0.46ml)。搅拌2小时，然后倒入水中。用乙酸乙酯萃取水层，用无水硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤并真空浓缩。经快速层析纯化残余物(30％乙酸乙酯/己烷，硅胶)，得到氧肟酸酯(0.23g)。
将上述制备的氧肟酸酯(16g)溶于***(10ml)中，并将该溶液冷却至0℃。加入氢化锂铝(0.20g)，并在-2℃下搅拌该反应物25分钟。然后通过滴加10％硫酸氢钾水溶液终止反应，并倒入水(100ml)中。用***(3×50ml)萃取水层。合并有机提取液，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。经快速层析纯化残余物(30％乙酸乙酯/己烷，硅胶)，得到标题化合物(0.05g)。
      实施例4制备CBz-L-Phe-L-Phe-H
将CBz-Phe-Phe-OH(2.14g，4.8mmol，得自BachemBioscience)和N-甲基吗啉(1.6ml，14.4mmol)溶于二氯甲烷(22ml)中。将该溶液冷却至-22℃，并加入氯甲酸异丁酯(0.62ml，4.8mmol)。搅拌该溶液30分钟，加入N，O-二甲基羟胺·HCl(0.6g，6.2mmol)。在-22℃搅拌反应物45分钟，然后温热至室温并搅拌过夜。将反应物倒入稀盐酸水溶液中，用***(2×200ml)萃取水层。合并有机提取物，并用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到氧肟酸酯(1.81g)。
将上述制备的氧肟酸酯(1.0g，2.0mmol)溶于THF(60ml)中，并将该溶液冷却至0℃。加入氢化锂铝(0.21g，5.5mmol)，并搅拌该反应物40分钟。然后通过滴加10％硫酸氢钾水溶液(约3ml)终止反应。将反应混合物倒入水(300ml)中。用***(2×200ml)萃取水层。用无水硫酸钠干燥合并的有机提取液，过滤并真空浓缩。从乙酸乙酯/己烷中结晶残余物，得到标题化合物(0.25g)。
   实施例5制备N-(N-吗啉基羰基)-L-苯丙氨酰-L-(O-苄基)苏氨醛酰胺
将Boc-Thr(Bn)-OH(5.00g，16.3mmol，得自BachemBioscience)溶于二氯甲烷(65ml)中。然后连续加入1-羟基苯并***水合物(2.20g，16.3mmol)、N，O-二甲基羟胺·HCl(1.59g，16.3mmol)、N-甲基吗啉(1.79ml，16.3mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺·HCl(3.10g，16.3mmol)。在氮气氛下搅拌该反应物1小时。然后用10％盐酸水溶液(200ml)稀释反应物，并用二氯甲烷(135ml)萃取。用10％盐酸水溶液(100ml)、饱和碳酸氢钠(100ml)、饱和氯化钠(100ml)洗涤分离的有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到所需的氧肟酸酯(4.83g)，为无色澄清的油。
在氮气氛下，将上述制备的氧肟酸酯(4.80g，13.6mmol)溶于乙酸乙酯(270ml)中，并将该溶液冷却至0℃。向溶液中鼓入氯化氢(气体)50分钟。然后向溶液中鼓入氮气，同时将其温热至室温。真空浓缩，加入己烷(100ml)并再次真空浓缩，得到酰胺的盐酸盐(3.64g)，为白色泡沫。
将Boc-Phe-OH(3.22g，12.12mmol)溶于二氯甲烷(48ml)中。然后连续加入1-羟基苯并***水合物(1.64g，12.12mmol)、上述制备的氧肟酸酯的盐酸盐(3.50g，12.12mmol)、N-甲基吗啉(1.23ml，12.12mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺·HCl(2.23g，12.12mmol)，并在室温下和氮气氛下搅拌反应物过夜。然后用二氯甲烷(100ml)稀释反应物，并加入10％盐酸水溶液(150ml)。分离各层，用10％盐酸水溶液(2×75ml)、饱和碳酸氢钠(2×75ml)、饱和氯化钠(75ml)洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到偶连的酰胺(5.19g)，为白色泡沫。
在氮气氛下，将上述制备的偶连的酰胺(5.00g，10.01mmol)溶于乙酸乙酯(200ml)中，并将该溶液冷却至0℃。向溶液中鼓入氯化氢(气体)1小时。然后向溶液中鼓入氮气，同时将其温热至室温。真空浓缩，加入己烷(100ml)并再次真空浓缩，用氢氧化钾干燥残余物，得到偶连酰胺的盐酸盐(定量产率)。将上述制备的偶连酰胺的盐酸盐(0.750g，1.72mmol)溶于二氯甲烷(34ml)中。加入氯化吗啉(0.399ml，3.44mmol)和N-甲基吗啉(0.389g，3.44mmol)。在室温下和氮气氛下搅拌该反应物约2小时。真空浓缩反应物，通过快速层析纯化残余物(80％乙酸乙酯/丙酮，硅胶)，得到吗啉甲酰胺(0.430g)，为白色泡沫。
在氮气氛下，将上述制备的吗啉甲酰胺(0.4g，0.780mmol)溶于THF(7.8ml)中，并冷却至0℃。加入氢化锂铝(36.9g，0.975mmol)，并在0℃搅拌该反应物1小时。然后通过滴加10％硫酸氢钾终止反应，加入乙酸乙酯(20ml)和10％盐酸水溶液(20ml)。分离各层，用10％盐酸水溶液(2×15ml)、饱和碳酸氢钠(15ml)、饱和氯化钠(15ml)洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到标题化合物(0.264g)，为白色泡沫。
      实施例6
Figure C9419359800751
制备2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-4，4-二氟-1，7-二苯基-3，5-二氧代庚烷步骤A：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-L-苯丙氨酸，氧肟酸N，O-二甲酯
向CBz(L)-Val-Phe-OH(0.220g，0.55mmol)和羟基苯并***(0.93g，0.61mmol)在二氯甲烷(12ml)中的溶液中加入N，N′-二环己基碳化二亚胺(0.920g，4.5mmol)。在0℃搅拌1小时，向反应物中加入N，O-二甲基羟胺·HCl(0.59g，0.61mmol)和N-甲基吗啉(0.61g，0.61mmol)，并在25℃搅拌12小时。过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤，真空浓缩滤液，得到油状的粗品酰胺。经快速层析(硅胶，2∶8乙酸乙酯∶环己烷)纯化该粗品残余物，得到标题化合物(0.250g)。步骤B：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-L-苯丙氨醛
在0℃和惰性气氛下，将上述制备的氧肟酸酯(0.220g，5mmol)加入氢化锂铝(0.19g，0.49mmol)在***(10ml)中的溶液中。搅拌30分钟，使反应物温热至室温并搅拌1小时。分离各相，有机相用饱和碳酸钠(10ml)、饱和氯化钠洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到标题化合物CBz(L)-Val-Phe-H(0.179g)，该产物不需纯化即可使用。步骤C：2-(N-苄氧羰基缬氨酰)氨基-4，4-二氟-1，7-二苯基-3-羟基-5-氧代庚烷
在0℃和氮气氛下，向活化锌(0.196g，3mAtg)在无水THF(3ml)中的悬浮液中加入四氯化钛(0.019g，0.1当量)。搅拌30分钟，并加入在无水THF(4ml)中的CBz(L)-Val-Phe-H(0.42g，1.1mmol)，1-氯-1，1-二氟-2-氧代-4-苯基丁烷(0.218g，1.0mmol)。使反应物温热至室温并搅拌12小时。加入饱和氯化铵溶液(2ml)。用***(4ml)萃取两次，用盐水洗涤有机相，并用无水硫酸镁干燥。真空浓缩有机相。残余物经快速层析纯化(硅胶，3∶7乙酸乙酯∶环己烷)，得到标题的醇(0.381g)。步骤D：2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-4，4-二氟-1，7-二苯基-3，5-二氧代庚烷
在-55℃和氮气氛下，向草酰氯(0.269g，2.13mmol)在无水二氯甲烷(2ml)中的溶液中加入二甲基亚砜(0.331g，4.26mmol)。在-55℃搅拌10分钟，加入在无水二氯甲烷(2ml)中的上述制备的醇(0.3g，0.53mmol)、在此温度下搅拌反应物2小时，并使反应物温热至-20℃。加入三乙胺(0.321g，1.68mmol)，并将反应物温热至室温。再搅拌该混合物几分钟。用乙酸乙酯(10ml)稀释。用盐酸(3×3ml，0.1N)和饱和氯化铵水溶液洗涤有机相。用硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩，得到粗品化合物(0.22g)。该粗品物质经重结晶纯化，得到标题化合物(0.102g)。分析计算值：C，67.59；H，6.24；N，4.95。实测值：C，66.99；H，6.15；N，5.30。
        实施例7制备4-(N-苯基丙酰基-L-缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺步骤A：N-苄氧羰基-苯丙氨醛
按照实施例6(步骤A和B)所述的方法，通过还原CBz(L)-Phe-OH(15.00g，50mmol)得到醛CBz(L)-Phe-H(4.19g)。步骤B：4-苄氧羰基氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基戊酸乙酯
向回流着的活化锌屑(2.0g，31mAgt)在无水THF(10ml)中的悬浮液中加入在无水THF(40ml)中的CBz(L)-Phe-H(4.19g，14.8mmol)和溴二氟乙酸乙酯(6.30g，31mmol)，保持该混合物适度回流。在室温下搅拌该溶液12小时。向该混合物中加入乙酸乙酯(100ml)、盐水(20ml)、硫酸氢钾(20ml)。用乙酸乙酯(3×60ml)萃取水相，用硫酸镁干燥并真空浓缩。经快速层析纯化残余物(硅胶，3∶7乙酸乙酯∶环己烷)，得到标题化合物(3.70g)。步骤C：4-苄氧羰基氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-苄基戊酰胺
向在THF(10ml)中的该乙酯(1.42g，3.5mmol)溶液中加入在THF(10ml)中的苄胺(1.93g，18mmol)溶液。搅拌12小时。加入乙酸乙酯(100ml)，用0.1N盐酸水溶液(2×100ml)、水(100ml)和盐水(100ml)洗涤。用无水硫酸镁干燥。粗产物经快速层析纯化(硅胶，2∶8乙酸乙酯∶环己烷)，得到标题化合物(1.16g)。步骤D：4-氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-苄基戊酰胺
向在无水乙醇(75ml)中的10％披钯炭(0.28g)的悬浮液中加入上述制备的酰胺(0.81g，1.70mmol)。在氢气大气压下搅拌12小时。滤出催化剂，用乙醇洗涤，并真空浓缩，得到标题的脱保护的胺(0.5g)。步骤E：4-(N-苯基丙酰基-L-缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-苄基戊酰胺
向在无水乙腈(15ml)中的氢肉桂酰-Val-OH(3-苯基丙酰基-Val-OH)(0.199g，0.80mmol)的溶液中加入N，N′-二环己基碳化二亚胺(0.165g，0.80mol)。在0℃搅拌1小时。向反应物中加入上述制备的胺(0.210g，0.80mmol)，并在25℃搅拌12小时。过滤该混合物，用乙酸乙酯洗涤，并真空浓缩滤液，得到油状粗品的酰胺。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，2∶8乙酸乙酯∶环己烷)，得到标题化合物(0.16g)。步骤F：4-(N-苯基丙酰-L-缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺
将在二氯甲烷(10ml)和叔丁醇(0.055g，0.75mmol)中的上述制备的醇(0.145g，0.25mmol)加入Dess-Martin试剂(0.318g，0.75mmol)在二氯甲烷中的悬浮液中。在室温下搅拌12小时，真空浓缩该混合物。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，3∶7乙酸乙酯∶环己烷)，得到标题化合物(0.063g)。C32H35N3O4F2的分析计算值：C，68.19；H，6.26；N，7.45。实测值：C，67.90；H，6.30；N，7.33。
       实施例8
Figure C9419359800791
制备4-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-4-苯基-N-(三甲基甲硅烷基甲基)戊酰胺
如实施例7步骤B所述制备4-苄氧羰基氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基戊酸乙酯。步骤A：4-苄氧羰基氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-三甲基甲硅烷基甲基戊酰胺
向在THF(2.5ml)中的三甲基甲硅烷基甲胺(0.81ml，6.10mmol)中加入上述制备的二氟醇(0.25g，0.61mmol)。搅拌并加热回流12小时。真空浓缩。用硫酸氢钾水溶液(5ml)稀释，用***(3×5ml)萃取。用水(2×15ml)洗涤有机相。用硫酸钠干燥。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，25∶75乙酸乙酯∶环己烷)，得到标题化合物(0.212g)。步骤B：4-氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-(三甲基甲硅烷基甲基)戊酰胺
向在无水乙醇(10ml)中的10％披钯炭(0.10g)的悬浮液中加入上述制备的酰胺(0.10g，0.22mmol)。在氢气大气压下搅拌12小时。滤出催化剂，用乙醇洗涤并真空浓缩，得到标题的脱保护的胺(0.71g)。步骤C：4-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-(三甲基甲硅烷基甲基)戊酰胺
向在二甲基甲酰胺(10ml)中的CBz(L)-Val-OH(0.055g，0.22mmol)和羟基苯并***(0.03g，0.22mmol)的溶液中加入N，N′-二环己基碳化二亚胺(0.045g，0.22mol)。在0℃搅拌30分钟。向反应物中加入上述制备的胺(0.073g，0.22mmol)，并在25℃搅拌12小时。加入水和盐水。用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。用乙腈(5ml)稀释，并沉淀DCU。过滤并真空浓缩滤液，得到粗品的酰胺。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，35∶65乙酸乙酯∶石油醚)，得到标题化合物(0.40g)。步骤D：4-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-(三甲基甲硅烷基甲基)戊酰胺
在-60℃，向在二氯甲烷(1ml)中的草酰氯(0.02ml，0.22mmol)溶液中加入在无水二氯甲烷(1ml)中的二甲基亚砜(0.031g，0.44mmol)。在-60℃搅拌5分钟，加入在二氯甲烷(2ml)中的上述制备的醇(0.041g，0.07mmol)。在此温度下搅拌反应物1小时。加入三乙胺(0.09ml，0.65mmol)，使反应物温热至室温。再搅拌该混合物几分钟。用二氯甲烷(10ml)稀释。用硫酸氢钾(3×10ml，1N)和水(2×10ml)洗涤有机相。用硫酸钠干燥有机相，过滤并真空浓缩，得到粗品化合物。粗品残余物经快速层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚25∶75，Rf：0.2)，得到标题化合物(0.015g)。C31H33N3O5F2，0.25H2O的分析计算值：C，58.93；H，6.71；N.7.36。实测值：C，58.74；H，6.72；N，7.16。
       实施例9
Figure C9419359800821
制备3-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-1，1，1-三氟-2-氧代-4-苯基丁烷
按照实施例6所述的偶连反应方法，由CBz(L)-Val-OH(0.128g，0.5mmol)和1，1，1-三氟-3-氨基-4-苯基-2-丁醇(0.112g，0.5mmol，J.Med.Chem.1990，33，394-407)制备3-[苄氧羰基-L-缬氨酰]氨基-1，1，1-三氟-2-羟基-4-苯基丁烷。
如实施例8所述，使用草酰氯氧化上述制备的醇(0.71g，0.16mmol)，得到标题化合物(0.60g)。C23H25F2N2O4F2，0.5H2O的分析计算值：C，60.12；H，5.70；N.6.10。实测值：C，60.08；H，5.81；N，5.89。
          实施例10
Figure C9419359800822
制备1-N-苄氧羰基缬氨酰氨基-2-苯基乙烷硼酸
在0℃，用甲醇将(+)蒎烷二醇-1-N，N-二(三甲基甲硅烷基)氨基-2-苯基乙烷硼酸酯脱去甲硅烷基(J.Am.Chem.Soc.(1981)103，5241)。真空浓缩，并用***洗涤，得到粗品脱保护的氨基硼酸酯。
向上述制备的粗品脱保护的氨基硼酸酯在无水THF中的溶液中加入N-苄氧羰基缬氨酸酐，得到偶连的化合物。
按照J.Am.Chem.Soc.(1980)，102，7590的方法，使用三氯化硼将上述制备的偶连化合物的蒎烷二醇裂解。
通过离子交换柱或者采用Biochemistry(1987)，26，7609(该文献引入本文作为参考)的方法纯化标题化合物。
        实施例11制备N-[2-[4-(氨基亚氨基甲基)氨基]苯基[-1-三氟乙酰乙基]苯甲酰胺，盐酸盐水合物
该化合物的合成描述于Liebigs Ann.Chem.1990，1-6中，该文献引入本文作为参考。
  实施例12制备2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-三甲基甲硅烷基丙醛步骤A：2-苄氧羰基氨基-3-三甲基甲硅烷基-丙酸甲酯
在氮气氛下，向在-78℃的二异丙基氨基锂(8.76ml，62.5mmol)和四甲基乙二胺(9.43ml，62.5mmol)在无水THF(100ml)中的溶液中滴加5.58g(25mmol)N-苄氧羰基甘氨酸甲酯在无水THF(70ml)中的溶液。添加完成后，在-78℃搅拌该溶液2小时，然后在-30℃搅拌15分钟，并冷却至-78℃。向所得到的浆状混合物中滴加5.36g(25mmol)碘甲基三甲基甲硅烷在无水六甲基磷酰胺(39ml)中的溶液。添加完成后，将反应混合物温热至-50℃，在此温度下保持1小时并在水解前冷却至-78℃。通过加入水和氯化铵使反应混合物终止反应，用***稀释。用1N硫酸氢钾洗涤有机层，用水洗涤两次，并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，所得残余物经快速层析纯化(硅胶，乙酸乙酯/石油醚2/8)。得到4.30g标题化合物(产率：56％)(无色油状)。Rf：0.51(乙酸乙酯/石油醚：2/8)。步骤B：2-氨基-3-三甲基甲硅烷基丙酸甲酯盐酸盐
在室温下和氢气氛下，在10％披钯炭(0.03g)存在下，将实施例12步骤A制得的衍生物(0.309g，1mmol)在乙醇(30ml)中和在用氯化氢饱和的无水***(1.5ml)中的溶液搅拌24小时。将氢气氛改为氮气氛，滤出催化剂。真空浓缩后，得到固体状的标题化合物，该化合物直接用于下一反应步骤。步骤C：2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-三甲基甲硅烷基丙酸甲酯
在0℃，向搅拌过的N-苄氧羰基-L-缬氨酸(0.311g，1.24mmol)、1-羟基苯并***水合物(0.167g，1.24mmol)和N，N′-二环己基碳化二亚胺(0.255g，1.24mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中依次加入实施例12步骤B的胺(0.262g，1.24mmol)和N-甲基吗啉(0.136ml，1.24mmol)。移去冷浴，将反应混合物在室温下搅拌17小时。过滤反应混合物，真空浓缩滤液。残余物(0.476克)经快速层析纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯：8/2；Rf：0.14)，得到标题化合物(0.316g，两步的产率为77％)。步骤D：2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-三甲基甲硅烷基丙醛
在氮气氛下，向-78℃实施例12步骤C的酯(0.316g，0.77mmol)在无水***(7.5ml)和无水甲苯(3.5ml)中的溶液中滴加在己烷(1.55ml)中的1M氢化二异丁基铝溶液。在-78℃搅拌该溶液45分钟，用饱和氯化铵水溶液缓缓水解。水相用***(2×20ml)萃取两次，有机相依次用1N硫酸氢钾(10ml)和水(20ml)洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂，得到固体残余物(0.260g)，该残余物经快速层析纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯：75/25；Rf：0.25)，得到标题化合物。(0.15g，产率为53％)。从二氯甲烷/戊烷中结晶，得到0.077g白色絮状固体。C19H30N2O4Si的分析计算值：C，60.29；H，7.99；N，7.40。实测值：C，60.23；H，8.10；N，7.42。
     实施例13
Figure C9419359800861
制备2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-苯基二甲基甲硅烷基丙醛步骤A：2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基二甲基甲硅烷基丙酸甲酯
按照实施例12步骤A所述的方法，由N-叔丁氧羰基甘氨酸甲酯和碘甲基苯基二甲基甲硅烷(由市售氯甲基苯基二甲基甲硅烷制备，产率81％)制备产率为28％的标题的酯。Rf：0.23(硅胶，乙酸乙酯/石油醚：1/9)。步骤B：2-氨基-3-苯基二甲基甲硅烷丙酸甲酯
将在甲酸(30ml)中的实施例13步骤A的衍生物(0.92g，2.73mmol)的溶液在室温下保持2小时。真空除去甲酸后，将残余物溶于乙酸乙酯(20ml)中，用1M碳酸钠(20ml)萃取，并用水洗涤两次，再用乙酸乙酯(20ml)萃取水相1次。用硫酸钠干燥合并的有机层之后，蒸发溶剂，得到标题化合物，产率98％(0.64g)。步骤C：2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-苯基二甲基甲硅烷基丙酸甲酯
采用实施例12步骤C的偶连方法，由实施例13步骤B的胺和N-苄氧羰基-L-缬氨酸得到标题化合物，不同是用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐代替N，N′-二环己基碳化二亚胺(产率74％)。Rf：0.19(硅胶，乙酸乙酯/石油醚：2/8)。步骤D：2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-苯基二甲基甲硅烷基丙醛
采用实施例12步骤D所述的还原方法，由实施例13步骤C的酯制备标题的醛，产率33％。Rf：0.17(硅胶，乙酸乙酯/石油醚：2/8)。C24H32N2O4Si的分析计算值：C，65.42；H，7.32；N，6.36。实测值：C，65.33；H，7.10；N，6.26。
       实施例14制备2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-乙烯基二甲基甲硅烷基丙醛步骤A：2-叔丁氧羰基氨基-3-乙烯基二甲基甲硅烷基丙酸甲酯
按照实施例12步骤A所述的方法，由N-叔丁氧羰基甘氨酸甲酯和碘甲基乙烯基二甲基甲硅烷制备产率为51％的标题的酯。Rf：0.35(硅胶，乙酸乙酯/石油醚：1/9)。步骤B：2-氨基-3-乙烯基二甲基甲硅烷丙酸甲酯
按照实施例13步骤B所述的脱保护方法，由实施例14步骤A的衍生物得到标题的胺(定量产率)。步骤C：2-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-乙烯基二甲基甲硅烷基丙酸甲酯
采用实施例13步骤C的偶连方法，由实施例14步骤B的胺和N-苄氧羰基-L-缬氨酸制备标题化合物，产率68％。Rf：0.22(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚2∶8)。MS：MH+＝421，MNH4 +＝438步骤D：3-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-3-乙烯基二甲基甲硅烷基丙醛
采用实施例12步骤D所述的还原方法，由实施例14步骤C的酯制备标题的醛。
Figure C9419359800881
制备N-苄氧羰基-L-缬氨酰-(O-甲基)-L-酪氨醛步骤A：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-O-甲基-L-酪氨酸苄酯
向N-苄氧羰基-L-缬氨酸酐(0.339g，0.7mmol)在无水二氯甲烷(15ml)中的溶液中加入O-甲基-L-酪氨酸苄酯甲苯-4-磺酸盐(0.330g，0.7mmol)和N-甲基吗啉(0.081g，0.8mmol)。在室温下搅拌该反应物过夜。真空除去溶剂，残余物经快速层析纯化(硅胶，2∶8乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体的标题化合物。步骤B：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-(O-甲基)-L-酪氨醛
向在-78℃无水甲苯(5ml)和***(5ml)中的N-苄氧羰基-L-缬氨酰-O-甲基-L-酪氨酸苄酯(0.250g，0.48mmol)的溶液中加入1.2M氢化二异丁基铝在己烷中的溶液(1.6ml，2mmol)。在-78℃搅拌该反应物1小时，然后用饱和酒石酸钾钠溶液(5ml)水解。然后使温度升至室温。该混合物用1M硫酸氢钾溶液酸化至pH～3，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取3次。有机层用无水硫酸镁干燥。过滤并真空取出溶剂，得到残余物，该残余物经快速层析纯化(硅胶，3∶7乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体的标题化合物。
       实施例16
Figure C9419359800901
制备N-苄氧羰基-L-缬氨酰-O-苄基-L-酪氨醛步骤A：N-叔丁氧羰基-O-苄基-L-酪氨酸，氧肟酸N，O-二甲酯
向0℃叔丁氧羰基氨基-O-(L)苄基酪氨酸(23g，61.9mmol)在无水二氯甲烷(250ml)中的溶液中加入N，N-二环己基碳化二亚胺(12.75g，61.9mmol)和羟基苯并***(9.47g，61.9mmol)。在0℃搅拌该混合物10分钟，然后加入N，O-二甲基羟胺·HCl(6.04g，61.9mmol)和N-甲基吗啉(6.25g，61.9mmol)。在室温下搅拌该反应物12小时。然后过滤该混合物并浓缩滤液。粗品混合物经快速层析纯化(硅胶，2∶8乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体的标题化合物(22.60g，产率88％)。Rf约等于0.36(乙酸乙酯/环己烷)。步骤B：O-苄基-L-酪氨酸，氧肟酸N，O-二甲酯
在0℃，将N-叔丁氧羰基-O-苄基(L)酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(8.28g，20mmol)在三氟乙酸(100ml)中的溶液搅拌1小时。真空除去溶剂。残余物溶于***(250ml)中，用饱和碳酸钠溶液(3×50ml)洗涤3次。有机层用无水硫酸镁干燥。过滤并真空除去溶剂，得到淡黄色油状的标题化合物(6.00g，产率90％)，该产物不需纯化即可用于下一步反应。步骤C：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯
向Z-L缬氨酸酐(8.47g，17.5mmol)在无水二氯甲烷(150ml)中的溶液中加入O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(5.50g，17.5mmol)。在室温下搅拌该混合物过夜。真空除去溶剂，粗品混合物经快速层析纯化(硅胶，2∶7乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体的标题化合物(8.90g，产率93％)。Rf约等于0.18(乙酸乙酯/环己烷)。步骤D：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-O-苄基-L-酪氨醛
在0℃，向N-苄氧羰基-L-缬氨酰-O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(8.90g，16.2mmol)在无水***(150ml)和无水THF(20ml)中的溶液中加入氢化锂铝(0.67g，17.7mmol)。在0℃搅拌该混合物1小时。然后小心地加入1M硫酸氢钾溶液(25ml)。分离有机层，水相用乙酸乙酯(2×100ml)萃取两次。然后用3N盐酸溶液(30ml)、水(30ml)和盐水(30ml)洗涤合并的有机层，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空蒸发溶剂，得到白色固体，该固体在乙酸乙酯/戊烷中重结晶，得到标题化合物(5.40g，产率60％)。Rf约等于0.33(乙酸乙酯/环己烷)。熔点：160-162℃C29H32N2O5的分析计算：计算值：C，71.29；H，6.60；N，5.73。实测值：C，71.18；H，6.94；N，6.30。
           实施例17制备N-苄氧羰基-2-环戊基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨醛步骤A：N-苄氧羰基-2-环戊基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯
向在无水乙腈(20ml)中的外消旋N-苄氧羰基-2-环戊基甘氨酸(0.831g，3mmol)溶液中加入N-甲基吗啉(0.323g，3.2mmol)。在氮气氛下，将该混合物冷却至-20℃，加入氯甲酸异丁酯(0.410g，3mmol)。在-20℃搅拌10分钟后，加入在无水乙腈(10ml)中的O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(1.00g，3.1mmol)。在-20℃和氮气氛下搅拌该混合物4小时，然后使温度升至室温过夜。蒸发粗品混合物，残余物经快速层析纯化(硅胶：3∶7乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体标题化合物(1.60g，产率93％)。Rf约等于0.26(乙酸乙酯/环己烷1∶1)。步骤B：N-苄氧羰基-2-环戊基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨醛
在0℃，向N-苄氧羰基-2-环戊基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(1.60g，2.8mmol)在无水***(20ml)和无水THF(20ml)中的溶液中加入氢化锂铝(0.121g，3.2mmol)。在0℃搅拌该混合物1小时。加入1M硫酸氢钾水溶液(25ml)。该混合物用乙酸乙酯(3×50ml)萃取3次。用3N盐酸、水和盐水洗涤合并的有机层，然后用无水硫酸镁干燥。过滤并真空蒸发溶剂，得到白色固体，该固体经重结晶(在乙酸乙酯/戊烷中)纯化，得到标题化合物(0.96g，产率67％)。Rf约等于0.34(乙酸乙酯/环己烷1∶1)。MS：[MH]+＝515，[MNH4]+＝532C31H34N2O5的分析计算：计算值：C，72.35；H，6.66；N，5.44。实测值：C，72.38；H，6.64；N，5.52。
        实施例18制备N-苄氧羰基-2-环己基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨醛步骤A：N-苄氧羰基-2-环己基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨酸，氧肟酸N，O-二甲酯
向在无水乙腈(25ml)中的外消旋N-苄氧羰基-2-环己基甘氨酸(0.873g，3mmol)溶液中加入N-甲基吗啉(0.323g，3.2mmol)。将该混合物冷却至-20℃，加入氯甲酸异丁酯(0.410g，3mmol)。在-20℃和氮气氛下搅拌10分钟后，加入在无水乙腈(10ml)中的O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(1.00g，3.1mmol)。在-20℃和氮气氛下搅拌该混合物4小时，然后使温度升至室温过夜。真空除去溶剂，残余物经快速层析纯化(硅胶：3∶7乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体标题化合物(1.00g，产率57％)。Rf约等于0.35(乙酸乙酯/环己烷)。步骤B：N-苄氧羰基-2-环己基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨醛
在0℃，向N-苄氧羰基-2-环己基甘氨酸-O-苄基-L-酪氨酸氧肟酸N，O-二甲酯(0.96g，1.6mmol)在无水***(20ml)和无水THF(20ml)中的溶液中加入氢化锂铝(0.068g，1.8mmol)。在0℃搅拌该混合物1小时。加入1M硫酸氢钾水溶液(25ml)。该混合物用乙酸乙酯(3×50ml)萃取3次。用3N盐酸、水和盐水洗涤合并的有机层，然后用无水硫酸镁干燥。过滤并真空蒸发溶剂，得到白色固体，该固体经重结晶(在乙酸乙酯/戊烷中)纯化，得到标题化合物(0.56g，产率67％)。MS：[MH]+＝529，[MNH4]+＝546C32H36N2O5的分析计算：计算值：C，72.71；H，6.86；N，5.30。实测值：C，72.43；H，6.92；N，5.43。
             实施例19
Figure C9419359800951
制备N-苄氧羰基-L-缬氨酰-3-(1-萘基)-L-丙氨醛步骤A：N-叔丁氧羰基-[3-(1-萘基)-L-丙氨酸]-氧肟酸N，O-二甲酯
在0℃，向N-叔丁氧羰基-[3-(1-萘基)-L-丙氨酸](0.65g，2mmol)在无水二氯甲烷(20ml)中的溶液中加入N，N-二环己基碳化二亚胺(0.412g，2mmol)和羟基苯并***(0.306g，2mmol)。搅拌10分钟后，加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(chlorohydrate)(0.195g，2mmol)和N-甲基吗啉(0.202g，2mmol)。在室温下搅拌该反应物12小时。然后过滤该混合物并浓缩滤液。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，4∶6乙酸乙酯/环己烷)，得到无色油状的标题化合物(0.56g，产率78％)。Rf约等于0.36(乙酸乙酯/环己烷1∶1)。步骤B：3-(1-萘基)-L-丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯
在室温下，将N-叔丁氧羰基-[3-(1-萘基)-L-丙氨酸]-氧肟酸N，O-二甲酯(0.560g，1.5mmol)在甲酸(20ml)中的溶液搅拌4小时。真空除去溶剂。残余物溶于乙酸乙酯(50ml)中，用饱和碳酸钠溶液(3×10ml)洗涤3次，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空蒸发溶剂，得到无色的油(0.330g，产率85％)，该产物不需纯化即可用于下一步反应。步骤C：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-3-(1-萘基)-L-丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯
向Z-L-缬氨酸酐(0.581g，1.2mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液中加入3-(1-萘基)-L-丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯(0.320g，1.2mmol)。在室温下搅拌该混合物过夜。真空除去溶剂，残余物经快速层析纯化(硅胶，3∶7乙酸乙酯/环己烷)，得到白色固体的标题化合物(0.470g，产率80％)。Rf约等于0.23(乙酸乙酯/环己烷)。步骤D：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-3-(1-萘基)-L-丙氨酸
在0℃，向N-苄氧羰基-L-缬氨酰-3-(1-萘基)-L-丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯(0.470g，0.96mmol)在无水***(10ml)和无水THF(10ml)中的溶液中加入氢化锂铝(0.042g，1.1mmol)。在0℃搅拌该反应物1小时。然后加入1M硫酸氢钾溶液(5ml)。该混合物用乙酸乙酯(3×30ml)萃取3次。用1N盐酸、水和盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥。过滤并真空蒸发溶剂，得到白色固体，该固体在乙酸乙酯/戊烷中重结晶进行纯化，得到标题化合物(0.260g，产率63％)。Rf约等于0.36(乙酸乙酯/环己烷1∶1)。MS：[MH]+＝433，[MNH4]+＝450C26H28N2O4的分析计算：计算值：C，72.20；H，6.52；N，6.48。实测值：C，71.87；H，6.50；N，6.48。
           实施例20
Figure C9419359800971
制备N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨醛步骤A：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-硝基-L-苯丙氨酸甲酯
向Z-L-缬氨酸酐(4.80g，10mmol)在无水二氯甲烷(50ml)中的溶液中加入4-硝基-L-苯丙氨酸甲酯(2.24g，10mmol)。在室温下搅拌该混合物过夜。真空除去溶剂，残余物经快速层析纯化(硅胶，4∶6乙酸乙酯/环己烷)，得到标题化合物(2.10g，产率56％)。Rf约等于0.32(乙酸乙酯/环己烷1∶1)。步骤B：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨酸甲酯
将N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-硝基-L-苯丙氨酸甲酯(0.91g，2mmol)和二水合氯化锡(II)(1.56g，7mmol)在无水乙醇(50ml)和N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的溶液加热回流4小时。将该混合物冷却，用水稀释，用碳酸氢钠中和，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取3次。有机层用硫酸镁干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残余物溶于无水二氯甲烷(20ml)中，并冷却至0℃。加入三乙胺(0.202g，2mmol)，然后加入苯甲酰氯(0.281g，2mmol)。在室温下搅拌该混合物过夜。真空除去溶剂，残余物经快速层析纯化(硅胶，98∶2二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物(0.500g，产率50％)。步骤C：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨酸向N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨酸甲酯(0.500g，0.94mmol)在二噁烷(30ml)中的溶液中加入在水(10ml)中的氢氧化锂一水合物(0.084g，2mmol)。在室温下搅拌反应物过夜。将混合物溶于水(20ml)中，用乙酸乙酯(2×20ml)洗涤2次。用1N盐酸酸化水相至pH～2，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取3次。有机层用无水硫酸镁干燥。过滤并真空除去溶剂后，得到白色固体的标题化合物(0.400g，产率82％)。MS：[MH]+＝518，[MNH4]+＝535。步骤D：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯
在0℃，向N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨酸(0.390g，0.75mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(5ml)和无水二氯甲烷(15ml)中的溶液中加入N，N-二环己基碳化二亚胺(0.155g，0.75mmol)和羟基苯并***(0.115g，0.75mmol)。搅拌10分钟后，加入氧肟酸N，O-二甲酯盐酸盐(chlorohydrate)(0.073g，0.75mmol)和N-甲基吗啉(0.076g，0.75mmol)。在室温下搅拌该反应物过夜，真空除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯中并过滤。浓缩滤液，残余物经快速层析纯化(硅胶，98∶2二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物(0.230g，产率53％)。Rf约等于0.59(二氯甲烷/甲醇9∶1)。MS：[MH]+＝561，[MNH4]+＝578。步骤E：N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨醛
在0℃，向N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-(苯基羰基氨基)-L-苯丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯(0.230g，0.41mmol)在无水***(10ml)和无水THF(5ml)中的溶液中加入氢化锂铝(0.017g，0.45mmol)。在0℃搅拌该反应物1小时。加入1M硫酸氢钾溶液(5ml)，用乙酸乙酯(3×15ml)萃取该混合物3次。有机层用1N盐酸、水和盐水洗涤，然后用无水硫酸镁干燥。真空除去溶剂后，残余物经快速层析纯化(硅胶，98∶2二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物(0.050g，产率25％)。Rf约等于0.43(二氯甲烷/甲醇9∶1)。MS：[MH]+＝502，[MNH4]+＝519。
            实施例21
Figure C9419359801001
制备2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-甲酰基丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺步骤A：4-苄氧基苄基丙二酸叔丁酯乙酯
在氮气氛下，向45％氢化钠(6.40g，0.12mmol)在无水四氢呋喃(100ml)中的悬浮液中加入在无水四氢呋喃(100ml)中的丙二酸叔丁酯乙酯(20.7g，0.11mmol)。在室温下搅拌该混合物2小时。然后加入在无水THF(50ml)中的4-苄氧基苄基溴(29.60g，0.11mmol)。在室温下搅拌该反应物过夜，用水水解并浓缩。该混合物用乙酸乙酯(3×200ml)萃取3次。残余物经快速层析(硅胶，9∶1甲苯/***)和重结晶(***∶戊烷)纯化，得到标题化合物(20.0g，产率47％)。Rf＝0.65(甲苯∶***9∶1)。步骤B：4-苄氧基苄基丙二酸乙酯
将4-苄氧基苄基丙二酸叔丁酯乙酯(19.0g，49.5mmol)在三氟乙酸(200ml)中的溶液在0℃搅拌1小时。真空除去溶剂。残余物在***/戊烷中重结晶，得到标题化合物(8.50g；产率53％)。步骤C：2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-羧基二甲酯-丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺
在0℃，向4-苄氧基苄基丙二酸乙酯(8.50g，25.9mmol)在无水二氯甲烷(150ml)中的溶液中加入N，N-二环己基碳化二亚胺(5.33g，25.9mmol)、羟基苯并***(3.96g，25.9mmol)和(D)缬氨酸苯乙酰胺(5.70g，25.9mmol)。在室温下搅拌该反应物过夜。过滤沉淀，并浓缩滤液。残余物经快速层析纯化(硅胶，3∶7乙酸乙酯/环己烷)，得到标题化合物(7.0g，产率51％)，为白色固体。Rf约等于0.33(乙酸乙酯/环己烷1∶1)。MS：[MH]+＝531，C32H38N2O5的分析计算：计算值：C，72.43；H，7.22；N，5.28。实测值：C，72.15；H，7.36；N，5.39。步骤D：2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-羧基丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺
向2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-羧基二乙酯-丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺(7.0g，13.2mmol)在2-甲氧基乙醇(100ml)中的溶液中加入氢氧化锂(0.84g，20mmol)的水(50ml)溶液。使反应物回流12小时。真空除去溶剂，将残余物溶于水(100ml)中，用乙酸乙酯(2×30ml)洗涤2次。用3N盐酸酸化水相至pH～2，用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取3次。有机层用无水硫酸镁干燥。过滤并真空除去溶剂后，残余物经重结晶纯化(乙酸乙酯/戊烷)，得到标题化合物(4.0g，产率60％)。MS：[MH]+＝503。步骤E：2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-甲氧肟酸N，O-二甲酯-丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺
在0℃，向2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-羧基丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺(4.00g，8mmol)在无水二氯甲烷(100ml)和N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液中加入氧肟酸N，O-二甲酯盐酸盐(0.78g，8mmol)、N-甲基吗啉(0.81g，8mmol)和N，N-二环己基碳化二亚胺(1.65g，8mmol)。在室温下搅拌该反应物过夜。过滤该混合物，真空浓缩滤液。残余物经快速层析纯化(硅胶，1∶1乙酸乙酯/环己烷)，得到标题化合物(3.20g，产率74％)，为白色固体。Rf约等于0.45(乙酸乙酯)。MS：[MH]+＝546，[MNH4]+＝563。C32H39N3O5的分析计算：计算值：C，70.44；H，7.20；N，7.70。实测值：C，70.22；H，7.02；N，7.65。步骤F：2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-甲酰基-丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺
向2(D)-[3-(4-苄氧基苯基)-2-甲氧肟酸N，O-二甲酯-丙酰氨基]-3-甲基-N-苯乙基丁酰胺(3.0g，5.5mmol)在无水四氢呋喃(50ml)中的溶液中加入氢化锂铝(0.240g，6.3mmol)。在0℃搅拌该反应物1小时，然后用1M硫酸氢钾溶液(20ml)水解，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取3次。有机层用1N盐酸、水和盐水洗涤，然后用无水硫酸镁干燥。过滤并真空除去溶剂，得到白色固体，该固体在乙酸乙酯/戊烷中重结晶，得到标题化合物(2.30g，产率86％)。MS：[MH]+＝487，[MNH4]+＝504。C30H34N2O4，0.5H2O的分析计算：计算值：C，72.70；H，7.12；N，5.65。实测值：C，72.90；H，7.03；N，5.89。
         实施例22
Figure C9419359801031
制备N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-硝基-L-苯丙氨醛
在-78℃和氮气氛下，向N-苄氧羰基-L-缬氨酰-4-硝基-L-苯丙氨酸甲酯(0.375g，0.8mmol)在无水甲苯(10ml)中的溶液中加入在己烷中的1.2M氢化二异丁基铝溶液(3ml，3.5mmol)。在-78℃搅拌该反应物1小时，然后用饱和酒石酸钾钠溶液水解。使温度升至室温。用1M硫酸氢钾溶液酸化该混合物至pH～3，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取3次。有机层用无水硫酸镁干燥。过滤并真空除去溶剂，得到残余物，该残余物经快速层析纯化(硅胶，1∶1乙酸乙酯/环己烷)。得到标题化合物，产率20％(70mg)。Rf约等于0.50(乙酸乙酯)。
         实施例23制备4-D-(N-苄氧羰基)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺步骤A：4-苄氧羰基-D-苯丙氨酸-氧肟酸N，O-二甲酯
在0℃，向Z(D)Phe-OH(31g，0.103mol)在无水二氯甲烷(300ml)中的溶液中加入N，N′-二环己基碳化二亚胺(21.21g，0.103mol)和羟基苯并***水合物(15.76g，0.103mol)。在0℃搅拌10分钟，向反应物中加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(10.04g，0.103mol)和N-甲基吗啉(10.40g，0.103mol)，并在25℃搅拌12小时。过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤，并真空浓缩滤液，得到油状的粗品氧肟酸酯。该粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，乙酸乙酯/环己烷4∶6)，得到无色油状的标题化合物(29.8g，产率85％)。Rf约等于0.37(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。步骤B：N-苄氧羰基-D-苯丙氨醛
在0℃和惰性气氛下，向氧肟酸酯(29g，0.084mol)在无水***(500ml)中的溶液中加入氢化锂铝(3.8g，0.1mol)。搅拌1小时。小心地加入1M硫酸氢钾溶液(150ml)。分离各相，用***(2×150ml)萃取水层2次。用3N盐酸水溶液(50ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤合并的有机层。用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到标题化合物。在乙酸乙酯/戊烷中重结晶进行纯化(10.9g，产率46％)。Rf约等于0.41(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。步骤C：4-D-N-苄氧羰基氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基戊酸乙酯
在氮气氛下，向在无水四氢呋喃(15ml)中的锌(2.30g，35.2mAtg)悬浮液中加入溴二氟乙酸乙酯(7.14g，35.2mmol)和N-苄氧羰基-(D)-苯丙氨醛(4.75g，16.8mmol)在无水四氢呋喃(30ml)中的混合物。再加入2ml该溶液后，在搅拌下将该悬浮液加热回流。通过缓缓加入(滴加)剩余的醛和溴酯溶液保持适度地回流。添加完成后，在室温下搅拌该混合物4小时。通过加入1N硫酸氢钾(30ml)进行水解。用乙酸乙酯萃取(3×30ml)该溶液。用盐水洗涤合并的有机层，并用无水硫酸镁干燥。过滤并真空浓缩滤液。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，乙酸乙酯∶环己烷1∶9)，得到白色固体的标题化合物(2.95g，产率43％)。Rf约等于0.50(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。C21H23NO5F2的分析计算值：C，61.91；H，5.69；N，3.44。实测值：C，62.19；H，5.75；N，3.55。步骤D：4-D-N-苄氧羰基氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-苄基戊酰胺
将实施例23步骤C的酯(1.42g，3.5mmol)和苄胺(1.93g，18mmol)在无水四氢呋喃(10ml)中的溶液在25℃搅拌12小时。用乙酸乙酯(100ml)萃取，并用1N盐酸水溶液(3×15ml)、水(15ml)和盐水(15ml)洗涤。用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩滤液。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，乙酸乙酯∶环己烷3∶7至乙酸乙酯梯度洗脱)。得到白色固体标题化合物(1.16g，产率71％)。Rf约等于0.40(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。MS：MH+＝469。步骤E：4-D-(N-苄氧羰基)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺
向在无水二氯甲烷中的Dess-Martin全碘烷(periodinane)试剂(0.36g，0.85mmol)的混合物中加入实施例23步骤D的醇(0.11g，0.23mmol)在二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(2ml，1ml)中的溶液，并在25℃搅拌3小时。真空蒸发溶剂，粗品残余物经快速层析(硅胶，乙酸乙酯∶环己烷3∶7)，然后经重结晶(乙酸乙酯/戊烷)纯化。得到白色固体标题化合物(0.074g，产率69％)。Rf约等于0.45(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。C26H24N2O4F2.0.5H2O的分析计算值：C，65.68；H，5.30；N.5.89。实测值：C，66.05；H，5.22；N，5.97。MS：MH+＝467。熔点：130℃。
        实施例24制备4-(N-苄氧羰基-L-正缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺步骤A：4-(N-苄氧羰基-L-正缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-苄基戊酰胺
按照实施例8步骤C所述的偶连方法，由实施例7步骤D所述的胺得到标题化合物(产率65％)。Rf约等于0.40(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。MS：MH+＝568。步骤B：4-(N-苄氧基-L-正缬氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺
向在二氯甲烷(5ml)中的Dess-Martin全碘烷(periodinane)试剂(0.271g，0.64mmol)的混合物中加入实施例23步骤A所述的醇(0.09g，0.16mmol)在5ml二氯甲烷中的溶液。在25℃搅拌4小时。真空浓缩，粗品残余物经快速层析(硅胶，乙酸乙酯∶环己烷2∶8)，然后经重结晶(乙酸乙酯/戊烷)纯化。得到白色固体标题化合物(0.04g，产率45％)。Rf约等于0.41(乙酸乙酯∶环己烷1∶1)。MS：MH+＝566。C31H33N3O5F2.0.5H2O的分析计算值：C，64.80；H，5.96；N，7.31。实测值：C，64.82；H，5.92；N，7.16。
         实施例25
Figure C9419359801081
制备4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-三甲基甲硅烷基甲基戊酰胺步骤A：4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰)氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-三甲基甲硅烷基甲基戊酰胺
在室温下，将实施例8步骤B所述的胺[制备成其三氟乙酸盐(0.222g，0.5mmol)]、N-甲基吗啉(115μl，1.05mmol)和苄氧羰基-L-叔亮氨酸酐[预先由酸和N，N′-二环己基碳化二亚胺在3ml二甲基甲酰胺中就地制备(0.556g，1.1mmol)]的混合物搅拌过夜。该混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤2次，并真空浓缩水层。粗品残余物经快速层析纯化(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚3∶7)，得到标题的醇，产率52％(0.15g)。Rf约等于0.69(乙酸乙酯∶石油醚4∶6)。步骤B：4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-三甲基甲硅烷基甲基戊酰胺
采用实施例8步骤D所述的Swern氧化方法，由实施例25步骤A所述的醇制备标题的酮，产率69％。Rf约等于0.30(乙酸乙酯∶石油醚3∶7)。C29H39F2N3O5Si，0.5H2O的分析计算值：C，59.57；H，6.90；N.7.19。实测值：C，59.65；H，6.89；N，7.00。
         实施例26
Figure C9419359801091
制备6-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-4，4-二氟-1-苯基-7-甲基-3，5-二氧代辛烷步骤A：苄氧羰基-L-缬氨酰缬氨醛
采用实施例12步骤D的还原方法，由N-苄氧羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酸乙酯制备标题的醛，产率43％。Rf约等于0.25(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚3∶7)。MS：MH+＝335，MNH4 +＝352。步骤B：6-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-4，4-二氟-1-苯基-7-甲基-5-羟基-3-氧代辛烷
按照实施例6步骤C的方法，由实施例26步骤A的醛和1-氯-1，1-二氟-2-氧代-4-苯基丁烷制备标题的二氟醇，产率39％。Rf约等于0.43(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚3∶7)。MS：MH+＝519，MNH4 +＝536。C28H36F2N2O5的分析计算值：C，64.85；H，7.00；N，5.40。实测值：C，65.11；H，7.25；N，5.22。步骤C：6-(N-苄氧羰基-L-缬氨酰)氨基-4，4-二氟-1-苯基-7-甲基-3，5-二氧代辛烷
采用实施例8步骤D所述的Swern氧化方法，由实施例26步骤C的醇制备标题的酮，产率34％。Rf约等于0.31(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚2∶8)。MS：MH+＝517，MNH4 +＝534。C28H34F2N2O5的分析计算值：C，65.10；H，6.63；N，5.42。实测值：C，65.22；H，6.90；N，5.05。
         实施例27制备(1-苯乙基-2-氧基)羰基-L-缬氨酰-苯丙氨醛步骤A：(1-苯乙基-2-氧)羰基-L-缬氨酸甲酯
用注射器(用3分钟)向羰基二咪唑(4.02g，24.8mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的悬浮液中滴加在二氯甲烷(3ml)中的缬氨酸甲酯(1.63g，12.4mmol)。将反应混合物均化，并在室温下继续搅拌15分钟。然后将该混合物真空浓缩，得到白色固体。将该固体悬浮于无水甲苯(10ml)中，并滴加2-苯乙醇(7.4ml，62.0mmol)。反应混合物变得澄清，将其在68℃(油浴)加热3小时。旋转蒸发除去溶剂，将残余物溶于二氯甲烷中，用水洗涤2次，并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。粗产物在硅胶上用己烷∶石油醚(80∶20至60∶40)作为洗脱剂进行纯化，得到2.51g(72％)所需的产物。步骤B：(1-苯乙基-2-氧)羰基-L-缬氨酸
向实施例27步骤A的氨基甲酸酯(0.43g，1.54mmol)在5ml甲醇和1ml水中的混合物中加入氢氧化锂(1.0M，1.4ml，1.4mmol)。将反应物加热回流(80℃)3小时，在室温下搅拌过夜。加入更多的氢氧化锂(1M，0.5ml)，在室温下继续搅拌该反应物3小时。真空浓缩反应混合物。加入二氯甲烷和水。分离两层，用盐酸(1M)酸化水层至pH1，用二氯甲烷萃取2次。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，得到0.33g(81％)所需的酸。步骤C：(1-苯乙基-2-氧)羰基-L-缬氨酰-L-苯丙氨醇
向实施例27步骤C的酸(0.33g，0.88mmol)、苯丙氨醇(0.3g，1.24mmol)、1-羟基苯并***(0.27g，1.24mmol)、N-甲基吗啉(0.22ml，1.24mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(0.33g，1.24mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜，用二氯甲烷稀释，用1N盐酸、水、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。剩余的白色松散固体从己烷/乙酸乙酯中结晶，得到白色固体标题化合物(0.35g，71％)。步骤D：(1-苯乙基-2-氧)羰基-L-缬氨酰-苯丙氨醛
采用实施例8步骤D所述的氧化方法，由实施例27步骤C的醇制备标题化合物，产率54％。C23H28N2O4的分析计算值：C，69.67；H，7.12；N，7.07。实测值：C，69.61；H，7.22；N，6.77。
         实施例28
Figure C9419359801121
制备4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺步骤A：4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰)氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基-N-苄基戊酰胺
采用实施例25步骤A所述的偶连方法，由实施例7步骤D所述的胺制备标题化合物，产率77％。Rf约等于0.37(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚4∶6)。步骤B：4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-N-苄基戊酰胺
采用实施例8步骤D所述的Swern氧化方法，由实施例28步骤A的醇制备标题的最终化合物，产率85％。Rf约等于0.24(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚3∶7)。C32H35F2N3O5的分析计算值：C，66.31；H，6.03；N，7.25。实测值：C，65.99；H，6.15；N，7.13。
         实施例29
通过各种β-淀粉样蛋白斑形成的体外和体内模型可以证明本发明化合物在防止或减少β-淀粉样蛋白斑的聚积方面的活性以及因此适用于治疗阿尔茨海默型的老年性痴呆和已知与β-淀粉样蛋白斑形成有关的其它疾病例如唐氏综合征。例如，可以通过下列分析1-3所述的几种细胞和无细胞体外方法证明本发明的化合物防止或减少β-淀粉样蛋白斑聚积的能力。这些分析利用的是：天然β-APP被所有细胞表达，并且经加工产生11-12KDa C端片段和β-淀粉样蛋白。如果需要，可以采用标准方法，通过转染β-APP cDNA序列(例如β-APP(751))至细胞中提高内源性β-APP的表达水平。
      体外分析分析#1：免疫沉淀细胞：稳定转染并表达大量βAPP-695的CHO-K1(中国苍鼠卵巢；得自ATCC)细胞系，也称作“CP-6-36”，用于筛选抑制剂。也可以使用并且已经使用了其它哺乳动物的培养细胞系。例如，在同样的分析条件下，人神经元细胞系SK-N-MC(得自ATCC)显示了好的结果。产生βA4不需要用βAPP-695转染；这仅仅加强βA4的信号。在实验的准备中，将CP-6-36细胞以低密度接种于10cm盘中，并在37℃/5％CO2培养器中生长2-4天，得到融合单层(每盘～1.5×107个细胞)；生长介质由DMEM 21/Coon F12(1∶1)＋10％FBS(胎牛血清)＋50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素组成。处理：首先在CP-6-36细胞上，以200μM的剂量对所有化合物进行筛选。在试验开始前，用细胞培养级的DMSO作溶剂，制备每种试验化合物的20mM储液。然后在无血清、缺少半胱氨酸和蛋氨酸的EMEM基质(“Cys-/Met-EMEM”)中将各20mM的化合物储液稀释100倍，得到在该基质中200μM的化合物最终浓度。在开始实验之前，通过用3ml/盘的Cys-/Met-EMEM洗涤各细胞单层3次，然后用3ml/盘的同样的培养基培养(37℃/5％CO2)培养15分钟，使细胞对半胱氨酸和蛋氨酸“饥饿”。从各盘中吸出培养基，然后以3ml/盘的量加入含200μM化合物的培养基。如上所述将这些板和“对照”盘(含1％DMSO且不含化合物的3ml/盘Cys-/Met-EMEM)培养15分钟。吸出培养基，然后向每盘中加入～150μCi/ml的3ml前一步骤的现含35S-反式标记物的培养基，即含35-S标记的半胱氨酸和蛋氨酸)。如上所述将细胞培养4小时。收集：在4小时标记结束时，在显微镜下观察细胞的总体外观，并检查化合物的总毒性作用，然后将培养盘置于冰上。将每盘中条件培养基移入15ml锥形螺帽管中，以2000rpm的转速离心10分钟，并移入一套相似的管中，留下细胞团块。用2ml/盘磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤标记的单细胞层3次，然后向每盘中加入1ml促使细胞溶解的缓冲液(5％Triton X-114；20mMTris，pH7.5；300mM氯化钠；蛋白酶抑制剂)，之后在冰上培养10分钟。从盘上刮下细胞溶解产物并移入1.5ml微离心管中。在冰上将溶胞产物进行4分钟声处理，在微离心管中高速离心10分钟，然后移入15ml锥形螺帽管中，留下细胞碎屑团块。免疫沉淀：在免疫沉淀制备中，用5ml的1×RIPA缓冲液(10mM Tris，pH8.0；150mM NaCl；0.125％NaN3；1％Triton X-100；1％脱氧胆酸盐；0.1 SDS)稀释在前面收集的溶胞产物；条件培养基样品不加稀释就会发生免疫沉淀。首先通过向每一样品中加入5μl正常的兔血清、在室温振摇10分钟，然后加入100μl在RIPA缓冲液中的10％的蛋白A-Sepharose(PAS)，并在室温振摇1.5小时，使条件培养基和溶胞产物预澄清。然后以3000rpm的速度将样品离心，将上清液移入新的15ml管中。然后通过向各管中加入30μl识别βAPP羧基端的抗体，在室温振摇10分钟，然后加入100μl 10％PAS并在室温振摇1.5小时，使预澄清的溶胞产物免疫沉淀。使预澄清的条件培养基样品同样免疫沉淀，不同的是使用45μl识别βA4的抗体代替识别羧基端的抗体。然后以3000rpm的转速将所用样品离心1分钟，得到PAS-抗体配合物的团块，充分洗涤所得团块；用高盐缓冲液(50mM Tris，pH7.5；500mM NaCl；5mM EDTA；0.5％Nonidet P-40)洗涤4次，用低盐缓冲液(50mM Tris，pH7.5；150mM NaCl；5mM EDTA；0.5 Nonidet P-40)洗涤3次，并用10mM Tris缓冲液(pH7.5)洗涤2次。凝胶电泳：将经过洗涤的团块在50μl的2×Laemmli凝胶充填缓冲液中煮沸5分钟。将这些样品和分子量标记物装到含有Tris/Tricine储存缓冲液的16.5％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上。该凝胶在90V电压下电泳～18-20小时，用20％甲醇/20％乙酸固定，在65℃于滤纸上干燥2小时。采用放射自显影显示结果。分析：通过分析放射自显影得出结果。阳性作用的化合物相对于对照样品能够抑制4kDaβA4蛋白带，另一些化合物相对于对照样品则增加9-12kDa C-端蛋白带的水平。以对照带为标准，通过对各带进行密度测定扫描，可以将对βA4的抑制和C-端带的增加定量。相对于对照样品带，阴性作用化合物在4kDaβA4或9-12kDa C-端蛋白带的产量上没有改变。其它试验：如果发现某化合物有活性(即，通过凝胶电泳表明，显著抑制4kDaβA4，同时使C-端片段增加)，则进行剂量反应实验，以测定产生上述影响所需的最小化合物剂量。通常使用的剂量范围是12.5-300μM，对于除了剂量变化以外，进行与上述同样的实验。如果发现某化合物仅略有活性或者根本没有活性，则使用更高的剂量，通常是400μM，重复该实验。如果发现某化合物有毒(即在显微镜下观察发现细胞不健康，或者在凝胶分析后溶胞产物标记得不好)，则在更低的剂量下，例如在25、50和100μM下，对该化合物进行试验，以测定无毒剂量下该化合物的作用。分析#2：放射免疫RIA培养基的制备和Sepak浓缩：
培养的哺乳动物细胞例如中国苍鼠卵巢(CHO)细胞或人神经元SK-N-MC细胞产生β-淀粉样蛋白并将该肽分泌至培养基中。如果用有效的β-淀粉样蛋白形成抑制剂处理细胞，在经过处理的细胞的培养基中未发现可溶性β-淀粉样蛋白。与分析#1相同，可以对不同剂量的抑制化合物进行试验，从200μM开始。在所评估化合物存在或不存在条件下，在2ml EMEM(无血清)中，于37℃对野生型和用β-APP695转染的CHO细胞的10cm板进行4-6小时的培养。除去培养基，以1500rpm的转速(Sorvall RT6000B)离心10分钟，以除去细胞/碎屑。培养基可以直接使用或者在-20℃贮存。进行Sepak C18步骤以除去盐和其它不希望有的污染物并将β-淀粉样蛋白肽浓缩。使培养基样品 (2ml)通过C18 Sepak柱，用2ml在0.1％TFA中的5％CH3CN洗涤Sepak柱。弃去迅速流出的液体和5％CH3CN洗涤液。用2ml在0.1％TFA中的25％CH3CN洗脱Sepak柱，然后用2ml在0.1％TFA中的50％CH3CN洗脱Sepak柱。收集两种洗脱液，在高速真空(speedvac)中干燥，并溶于125μl至250μl 10％异丙醇的水溶液中，以进行RIA分析。25％CH3CN流份含有培养基中大多数的酚红，但是不含β-淀粉样蛋白肽。50％CH3CN流份含有β-淀粉样蛋白肽。用125I标记的β-淀粉样蛋白1-40的制备和HPLC纯化：
采用氯胺T方法，用125I标记合成的β-淀粉样蛋白1-40(10μg)。该反应在室温下进行。在eppendorf管中，向10μlβ-淀粉样蛋白1-40(1mg/ml，在20％异丙醇中)和80μl 0.1M磷酸钠(pH7.4)中加入10μl 125I(1mCi，在NAOH溶液中)并混合。通过加入30μl氯胺T(1mg/ml，在0.1M磷酸钠中，pH7.4)，混合并且培养1分钟开始反应。通过加入150μl焦亚硫酸氢钠(2mg/ml，0.1M磷酸钠，pH7.4)终止反应。
用等体积的水稀释反应混合物(280μl)，使标记的肽通过Sepak C18柱而分离。用5％CH3CN洗涤Sepak柱两次(各1ml)，用50％CH3CN洗涤3次(各1ml)，再用95％CH3CN洗涤2次(各1ml)。几乎所有标记的肽在第1个50％CH3CN洗脱液中洗脱。该洗脱液在-70℃贮存，根据RIA的需要经HPLC纯化。
在C8柱(4.6mm×3cm，Brownlee)上经反相HPLC纯化标记的肽。以0.5ml/分钟的流速，以在0.1％TFA中的5％至45％CH3CN的梯度洗柱30分钟。收集流份(0.5ml)并进行计数。将含有标记肽的峰值流份在-20℃贮存，并在3天内用于RIA。放射免疫分析：RIA中所用的缓冲液是1)RIA缓冲液：0.1M磷酸钠，pH7.4，含有0.1％BSA和0.1％Triton-X-100。2)样品缓冲液：10％异丙醇的水溶液。3)示踪缓冲液：0.2M磷酸钠，pH7.4，含有在0.1％Triton-X-100中的0.1％BSA。如果在竞争配体不存在下约30％标记的肽结合，则使用β-淀粉样蛋白特异性抗体的稀释液。抗体的稀释液在RIA缓冲液中配制。RIA中使用的抗体包括3种抗人β-淀粉样蛋白1-40合成肽的血清(BA#1，BA#2和6514)。BA#1以最终1/900的稀释液使用，BA#2以最终1/1600的稀释液使用，6514以最终1/2500的稀释液使用。在示踪缓冲液中稀释经HPLC纯化的标记肽，达到在50μl中7000-9000cpm。所有顶替反应在高浓度(2.5μM)β-淀粉样蛋白1-40存在进行。在样品缓冲液中制备β-淀粉样蛋白1-40标准品。分析体积为200μl。按下列顺序加入各成分：100μl Ab，在RIA缓冲液中50μl未知的样品或标准品或TD，在样品缓冲液中50μl标记的肽(7000-9000pm，在示踪缓冲液中)
将上述样品混合，并在4℃培养过夜。为了区分结合的计数与游离的计数，用聚乙二醇(PEG)终止该实验。向每一分析管中加入50μl正常的兔血清，然后加入800μl PEG(MW6000-8000，15.8％，在RIA缓冲液中)。在4℃培养各样品10分钟，以3200rpm的转速离心20分钟(Sorvall，RT600B)。吸出上清液，在γ计数器上对沉淀的团块进行计数。分析：以标记的β-淀粉样蛋白示踪物的顶替为依据解释抗体结合的结果。阳性结果是没有观察到示踪物顶替，即培养基不含有分泌的β-淀粉样蛋白，这表明试验化合物有效地抑制了β-淀粉样蛋白的产生。阴性结果是观察到抗体结合示踪物的顶替，并且与未处理的对照细胞相同。
也可以使用酶联免疫分析(ELSIA)对活性化合物进行鉴定。如分析#1所述制备产生β-淀粉样蛋白的经过培养的哺乳动物细胞(例如CHO CP-6或SK-N-MC)并用化合物进行处理，不同的是不对细胞蛋白进行放射标记。收集处理细胞培养物的条件培养基，通过低速离心消除细胞碎屑。然后使用β-淀粉样蛋白特异性抗体，在96孔ELISA培养皿上对条件培养基进行分析。一种β-淀粉样蛋白抗体用作培养基样品中存在的β-淀粉样蛋白俘获剂，识别β-淀粉样蛋白上不同表位的第二种抗体用作检测剂复合物的成分。第二种β-淀粉样蛋白抗体与生物素偶联，该生物素可以被链酶抗生物素蛋白检测到。与辣根过氧化物酶偶连的第三种抗体用于检测β-淀粉样蛋白：抗体：链酶抗生物素蛋白复合物。加入邻苯二胺基质底物和H2O2以及柠檬酸磷酸盐(pH5)可以使过氧化物酶的活性通过记录在OD490nm处混合物的比色变化而定量。通常，除了作为标准品的合成β-淀粉样蛋白1-40之外，在96孔板上制备一系列3倍稀释的各培养基样品稀释液。阳性结果是很少或没有反应活性，即在OD490nm处无吸收，这表明由于试验化合物的抑制作用，在培养基样品中不存在β-淀粉样蛋白。部分活性抑制剂与未处理细胞的对照培养基样品相比，在OD490nm有一定程度、但是不相等的吸收。通过将样品值与标准品进行比较可以准确地定量。
         体内分析
本发明化合物防止或减少β-淀粉样蛋白斑的聚积的活性可以在β-淀粉样蛋白斑聚积的转基因模型(例如转基因小鼠或转基因大鼠)中以及使用自然遗传性倾向形成β-淀粉样蛋白斑的狗的狗模型中进行证明。在例如PCT/US91/04447中描述了在神经元细胞中超表达人β-APP(751)或β-APP(770)、并且显表现出与阿尔茨海默症有关的组织病理学特征的转基因小鼠。在这些小鼠模型中，与β-淀粉样蛋白斑形成有关的组织病理学和/或综合征例如记忆丧失，可以用于证实该化合物能够治疗因β-淀粉样蛋白斑形成所引起的疾病，例如阿尔茨海默症和与唐氏综合征有关的记忆损害。
由于转基因小鼠的组织病理学随着动物年龄的增加更为频繁，因此2月龄的小鼠是适合需要的。2月龄动物具有最小的病理学特征，这在抑制药物不存在下将随着时间而增加。所有的实验动物均为单一的纯种血统。一组小鼠(n＝12)仅接受赋形剂；第二组小鼠(n＝12)接受低剂量的药物；第三组小鼠(n＝12)接受中等剂量的药物；第四组小鼠(n＝12)接受高剂量的药物。根据体重、化合物的半衰期等，由上述分析确定剂量。最好对小鼠进行为期几个月的治疗。根据化合物的情况，通过注射、口服、控制释放的植入物等投送化合物。采用组织免疫化学法对治疗进行评估，由未目击实验治疗的研究人员进行打分，测定在脑4个冠状中线区域中β-淀粉样蛋白免疫活性沉积的频率。在研究中所用的所有小鼠采用同样数目的脑组织分区，对另一种病理学标记物Alz50的免疫活性也进行出现频率的打分。药物作用的阳性结果应该是没有或者减少了病理学标记物的出现频率。β-淀粉样蛋白转基因小鼠独特的病理学和/或行为联系也可以用于证明药物的作用。
已有报道，某些犬类具有β-淀粉样蛋白聚积(Giaccone等，Neuroscience Letters Vol.114，第178-183页(1990))。老年非人类灵长目表现出β-淀粉样蛋白病理学特征以及记忆损伤(Cork等，American Journal of Pathology，Vol.137，第1383-1392页(1990)；Podlisny等，American Journal of Pathology，Vol.138，第1423-1425页(1991))。按照略微不同的实验设计，用犬类和非人类灵长目进行的试验用药时间较长。
可以给患者施用有效量的式I化合物或者多于一种的式I化合物的混合物，以防止异常的β-淀粉样蛋白斑沉积，并且治疗与β-淀粉样蛋白斑异常沉积有关的疾病，例如阿尔茨海默型的老年痴呆或唐氏综合征。用于防止异常的β-淀粉样蛋白斑沉积以及治疗阿尔茨海默型的老年痴呆或唐氏综合征的具体剂量取决于多种因素，例如患者的大小、类型和年龄以及疾病的严重程度，所有这些因素通常是公知的，并且由治疗患者的诊断医生考虑。通常，该化合物的施用剂量为每公斤体重0.2-20毫克，优选为0.5-5mg/Kg。该化合物可以以含有25mg-250mg式I化合物的单次剂量或多单元剂量施用。
对于口服施用，该化合物可以配制成固体或液体制剂，例如胶囊、丸剂、片剂、锭剂、粉末、溶液、悬浮液或乳液。固体单位剂型可以是胶囊，该胶囊可以是普通的明胶胶囊，它含有例如润滑剂或惰性填充剂例如乳糖、蔗糖或玉米淀粉。另一种实施方式是，通式I的化合物可以与常规的片剂基质(例如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)以及与粘合剂(例如***胶、玉米淀粉或明胶)、崩解剂(例如土豆淀粉或藻酸)和润滑剂(例如硬脂酸或硬脂酸镁)一起压片。
对于非肠道施用，该化合物可以以可注射剂量的、在生理学可接受的稀释剂与可药用载体中的化合物的溶液或悬浮液的形式施用，所述稀释剂和载体可以是无菌液体例如水、醇、油和其它可接受的有机溶剂，其中加有或者不加有表面活性剂和其它可药用的辅剂。在这些制剂中可以使用的油是例如矿物油、动物油。植物油或合成的油，例如花生油、豆油和矿物油。通常，水、盐水、葡萄糖水溶液和有关的糖溶液、乙醇和二元醇例如丙二醇或聚乙二醇、或者2-吡咯烷是优选的液体载体，特别是注射液的载体。该化合物可以以储存注射液或脑植入制剂的的形式施用，该制剂可以配制成持续释放活性成分的形式。活性成分可以压缩成小丸或者小的圆柱体，并以储存注射液或植入物的形式植入皮下、肌肉内或脑中。植入物可以使用惰性材料例如可生物降解的聚合物或合成聚硅氧烷，例如SilasticR(由Dow-Corning公司生产的聚硅氧烷橡胶)。
本发明化合物还可以表皮施用。这可以通过简单地制备所施用化合物的溶液实现，优选使用已知的促进透皮吸收的溶剂例如乙醇或二甲基亚砜(DMSO)制备该溶液，可以含有或者不含其它赋形剂。优选使用药物储库和多孔膜性的贴剂或者固体基质的贴剂。
某些适合的透皮设计描述于US3,742,951、3,797,494、3,996,934和4,013,894中。这些设计通常包括支撑膜(这是它的正表面)，作为另一表面的活性药物可渗透粘附层和嵌在两层表面之间的含活性药物的至少一个药物储库。或者，活性药物可以包含在分布于整个可渗透粘附层中的许多微囊中。在任何一种情况下，活性药物透过膜从药物储库或微囊中连续地释放到活性药物可渗透粘附层上，该粘附层与受体的皮肽或粘膜接触。如果活性药物经皮肽吸收，则给受体施用控制和预定流速的活性药物。如果是微囊，则包囊剂也可起到膜的作用。
在本发明化合物透皮施用的另一种设计中，药物活性化合物包含在以渐进、恒定和控制的速度释放药物的基质中。该基质是可透过的、通过扩散和微孔流动释放化合物。不需要膜的这种***描述于US3,291,636中。在这些***中至少可能有两种类型的释放。当基质为非孔基质时，经扩散释放。药物活性化合物溶解于基质中，并通过基质扩散。当药物活性化合物通过液相转运到基质的孔中时，通过微孔流动释放药物。
正如许多类型化合物通常适合于任何具有最终治疗用途的药理活性应用所证实的，由于其总的治疗指数和其生物化学及药理学性质，某些小组和某些特定类型的化合物是优选的。例如优选其中P4是一个键的化合物。
申请人推荐其中X1是H或CF2C(＝O)W的那些化合物。C1-6亚烷基优选为C1-3亚烷基，更优选亚甲基或亚乙基，最优选支链的亚乙基。芳烷基优选苄基或苯乙基，芳基优选苯基。K-P4-P3-P2部分优选保护基(K)和一种氨基酸，优选一个缬氨酸、丙氨酸或苯丙氨酸残基。R优选苄基、异丙基或具有一个取代基的取代苄基。
          序列表(1)一般资料：(i)申请人：Cordell，Barbara
   Schirlin，Daniel
   Peet，Norton
   Higaki，Jeffrey
   Van Dorsselaer，Viviane
   Angelastro，Michael R.(ii)发明题目：抑制β-淀粉样蛋白产生的抑制剂(iii)序列数：5(iv)通信地址
(A)地址：Marion Merrell Dow Inc.
(B)街道：P.O.Box 156300 2110 E.Galbraith Rd.
(C)城市：Cincinnati
(D)州：Ohio
(E)国家：美国
(F)邮政编码(ZIP)：45215-6300(v)计算机可读形式：
(A)介质类型：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容
(C)操作***：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：PatentIn Release #1.0，Version #1.25(vi)本申请资料：
(A)申请号：WO
(B)申请日：
(C)分类：(vii)在先申请资料：
(A)申请号：EP 93402398.7
(B)申请日：01-OCT-1993(viii)代理人/公司资料：
(A)姓名：Moon，Carolyn D
(B)登记号：33，022
(C)卷号：M01714A(ix)通讯资料：
(A)电话：513-948-7960
(B)电传：513-948-7961或4681
(C)电报：214320(2)SEQ ID NO：1的资料：(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：
Xaa Xaa Xaa Xaa
1(2)SEQ ID NO：2的资料：(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：
Xaa Xaa Xaa Xaa
1(2)SEQ ID NO：3的资料：(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：
Xaa Xaa Xaa Xaa
1(2)SEQ ID NO：4的资料：(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：
Xaa Xaa Xaa Xaa
1(2)SEQ ID NO：5的资料：(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：
Xaa Xaa Xaa Xaa
1

Claims (13)

1.通式IB的化合物或其水合物、立体异构体、等排物或药物可接受的盐：
       Ka-P4 a-P3 a-P2 a-NH-CH(Ra)-[C(＝O)]n-Xa(肽序列2)
               IB其中
Xa是H、CHF2、CF3、CF2CF3、CF2CH2NHC(＝O)R1 a、CHFCH2NHC(＝O)R1 a、CF2C(＝O)Wa、C(＝O)NHR1 a、B(OH)2或C(＝O)R1 a，
Wa为NHCH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)、NH-R1 a或R1 a，条件是：
当Xa为H时，Ra是CH2Si(C1-C6烷基)2(C1-C6链烯基或芳基)、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、被NHC(＝O)R1 a或NHC(＝NH)NH2取代的苄基；
当Xa为CF3、CHF2、或C(＝O)NHR1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、CH2OH、CH(OH)CH3或被一个羟基取代的苄基；
当Xa为CF2CH2NHC(＝O)R1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、(CH2)m-萘基或被一个羟基取代的苄基；
当Xa是CF2C(＝O)NH-苄基时，Ra不是苄基、叔丁基-甲基、或(CH2)m-萘基；
当Xa为CF2C(＝O)NHR1 a时，Ra不是CH2Si(CH3)2(Y)、C1-C10烷基、苄基、CH2OH、CH(OH)CH3或者被一个羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基或-O-(CH2)m-苯基取代的苄基；
当Xa为C(＝O)R1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、C1-C4亚烷基-O-C1-C10烷基或(CH2)m-萘基；
当Xa是CF2C(＝O)苯乙基时，Ra不是苄基；
当Ra为CH2Si(C1-C6烷基)2(C1-C6链烯基或芳基)、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、或被NHC(＝O)R1 a或NHC(＝NH)NH2取代的苄基时，Xa不是C(＝O)H，
当Ra为C1-10烷基或(CH2)m-萘基时，Xa不是CF2CF3，
Ra是C1-C10烷基、苄基、CH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)、C1-C4亚烷基-O-R1 a、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、(CH2)m-萘基、或取代的苄基，该取代基为独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基、羟基、NHC(＝NH)NH2、NR1 aH、NO2、-O-(CH2)m-芳基、NHC(＝O)R1 a或卤素的1、2或3个取代基，
其中m为1或2；
Ya是C1-C6烷基、C1-C6链烯基、芳基或芳基烷基；
除非Xa是B(OH)2，n是1，否则n是0；
R1 a是H、C1-C6烷基、芳基或芳基烷基；
P2 a是一个键、-NH-CH[CH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)]C(＝O)-，或Leu、Ala、Met、Ile、Val、Nva、Nle、Phe、Asp、Ser、Pro、His、环戊基-甘氨酸、环己基甘氨酸、或叔亮氨酸的残基；
P3 a是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
P4 a是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
Ka是氢、脱氨基、甲酰基、乙酰基、琥珀酰基、苯甲酰基、叔丁氧基羰基、苄氧羰基、甲苯磺酰基、丹酰基、异戊酰基、甲氧基琥珀酰基、1-金刚烷基磺酰基、1-金刚烷基乙酰基、2-羧基苯甲酰基、苯基乙酰基、叔丁基乙酰基、双[(1-萘基)甲基]乙酰基、-Aa-Rza，其中Aa是
Figure C9419359800041
以及
Rza是一种芳基或一种芳基烷基，其中该芳基含有6、10或12个碳、可以被1-3个独立选自氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羟基、含有1-6个碳原子的烷基、含有1-6个碳原子的烷氧基、羧基、其中烷基含有1-6个碳的烷基羰基氨基、5-四唑基和含有1-15个碳原子的酰基氨基磺酰基或磺酰基氨基羰基的基团适当取代，条件是当该酰基氨磺酰基或磺酰基氨基羰基含有芳基时，该芳基可以进一步地被选自氟、氯、溴、碘和硝基的基团取代；和在功能上与它们等价的其它末端氨基保护基团，或
Figure C9419359800042
其中
Z是N或CH，以及
Da是下列通式的一个基团并且其中R′a是H或C1-C6烷基。
2.权利要求1的化合物，其中Xa是CF2C(＝O)Wa。
3.权利要求2的化合物，其中Wa是NHCH2Si(CH3)3。
4.权利要求3的化合物，其中Ra是苄基。
5.权利要求2的化合物，其中Wa是芳基烷基。
6.权利要求5的化合物，其中Ra是C1-4烷基。
7.权利要求1的化合物，其中P4 a或P3 a均是键。
8.权利要求1的化合物，其中Ka是苄氧羰基或叔丁氧羰基。
9.权利要求1的化合物，其中该化合物是4-(N-苄氧羰基-L-叔亮氨酰基)氨基-2，2-二氟-3-氧代-5-苯基-三甲基甲硅烷基甲基戊酰胺。
10.权利要求1的化合物，其中该化合物是6-(N-苄氧基羰基-L-缬氨酰基)氨基-4，4-二氟-1-苯基-7-甲基-3，5-二氧代辛烷。
11.权利要求1-8中任一项的化合物在制备用于治疗阿尔茨海默氏病的药物中的用途。
12.一种药物组合物，它含有任选地与药物可接受的载体相组合的权利要求1-8中任意一项所述的化合物。
13.制备通式IB的化合物或其水合物、立体异构体、等排物或药物可接受的盐的方法：
    Ka-P4 a-P3 a-P2 a-NH-CH(Ra)-[C(＝O)]n-Xa(肽序列2)
                        IB其中
Xa是H、CHF2、CF3、CF2CF3、CF2CH2NHC(＝O)R1 a、CHFCH2NHC(＝O)R1 a、CF2C(＝O)Wa、C(＝O)NHR1 a、B(OH)2或C(＝O)R1 a，其中Wa为NHCH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)、NHR1 a或R1 a；条件是：
当Xa为H时，Ra是CH2Si(C1-C6烷基)2(C1-C6链烯基或芳基)、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、被NHC(＝O)R1 a或NHC(＝NH)NH2取代的苄基；
当Xa为CF3、CHF2、或C(＝O)NHR1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、CH2OH、CH(OH)CH3或被一个羟基取代的苄基；
当Xa为CF2CH2NHC(＝O)R1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、(CH2)m-萘基或被一个羟基取代的苄基；
当Xa是CF2C(＝O)NH-苄基时，Ra不是苄基、叔丁基-甲基、或(CH2)m-萘基；
当Xa为CF2C(＝O)NHR1 a时，Ra不是CH2Si(CH3)2(Y)、C1-C10烷基、苄基、CH2OH、CH(OH)CH3或被一个羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基或-O-(CH2)m-苯基取代的苄基；
当Xa为C(＝O)R1 a时，Ra不是C1-C10烷基、苄基、C1-C4亚烷基-O-C1-C10烷基或(CH2)m-萘基；
当Xa是CF2C(＝O)苯乙基时，Ra不是苄基；
当Ra为CH2Si(C1-C6烷基)2(C1-C6链烯基或芳基)、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、或被NHC(＝O)R1 a或NHC(＝NH)NH2取代的苄基时，Xa不是C(＝O)H，
当Ra为C1-C10烷基或(CH2)m-萘基时，Xa不是CF2CF3，
Ra是C1-C10烷基、苄基、CH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)、C1-C4亚烷基-O-R1 a、CH2CH(CF3)2、CH2CH(CH3)(CF3)、(CH2)m-萘基、或取代的苄基，该取代基为独立地选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基烷基、苄氧基、羟基、NHC(＝NH)NH2、NR1 aH、NO2、-O-(CH2)m-芳基、NHC(＝O)R1 a或卤素的1、2或3个取代基，
其中m为1或2；
Ya是C1-C6烷基、C1-C6链烯基、芳基或芳基烷基；
除非Xa是B(OH)2，n是1，否则n是0；
R1 a是H、C1-C6烷基、芳基或芳基烷基；
P2 a是一个键、-HN-CH[CH2Si(C1-C6烷基)2(Ya)]C(＝O)-，或Leu、Ala、Met、Ile、Val、Nva、Nle、Phe、Asp、Ser、Pro、His、环戊基-甘氨酸、环己基甘氨酸、或叔亮氨酸的残基；
P3 a是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
P4 a是一个键或Val、Leu、Ile或Met的残基；
Ka是氢、脱氨基、甲酰基、乙酰基、琥珀酰基、苯甲酰基、叔丁氧基羰基、苄氧羰基、甲苯磺酰基、丹酰基、异戊酰基、甲氧基琥珀酰基、1-金刚烷基磺酰基、1-金刚烷基乙酰基、2-羧基苯甲酰基、苯基乙酰基、叔丁基乙酰基、双[(1-萘基)甲基]乙酰基、-Aa-Rz a，其中Aa是 ；以及
Rza是一种芳基或一种芳基烷基，其中该芳基含有6、10或12个碳、可以被1-3个独立选自氟、氯、溴、碘、三氟甲基、羟基、含有1-6个碳原子的烷基、含有1-6个碳原子的烷氧基、羧基、其中烷基含有1-6个碳的烷基羰基氨基、5-四唑基和含有1-15个碳原子的酰基氨基磺酰基或磺酰基氨基羰基的基团适当取代，条件是当该酰基氨磺酰基或磺酰基氨基羰基含有一个芳基时，该芳基可以进一步地被选自氟、氯、溴、碘和硝基的基团取代；和在功能上与它们等价的其它末端氨基保护基团，或
Figure C9419359800091
其中Z是N或CH，以及Da是下列通式的一个基团
Figure C9419359800092
并且其中R′a是H或C1-C6烷基，它包括下列步骤：
将如本文中所定义的Ka-P4 a-P3 a-P2 a-与如本文中所定义的H2N-CH(Ra)-C(＝O)Xa偶连，并且
任选地获得其药物可接受的盐，或者可替换地
将如本文中所定义的Ka-P4 a-P3 a-P2 a-与如本文中所定义的H2N-CH(Ra)-C(＝O)Xa偶连，并且
将所产生的化合物氧化以获得Ka-P4 a-P3 a-P2 a-HN-CH(Ra)-C(＝O)Xa(肽序列5)，
任选地获得其药物可接受的盐。
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