CN107880875A - 基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针及其制备方法 - Google Patents

基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针及其制备方法，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点，其外层为双亲性磷脂和功能性磷脂，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接。该细胞成像探针的制备方法包括：1)制备全无机钙钛矿量子点甲苯溶液，2)将全无机钙钛矿量子点甲苯溶液与双亲性磷脂氯仿溶液、功能性磷脂氯仿溶液混合均匀，去除有机溶剂后将溶解于超纯水中，得到基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。该本发明提供的探针具有荧光量子效率高、生物相容性好、细胞毒性小等优势。

Description

基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针及其制备方法，属于纳米材料学和荧光分析领域。
背景技术
2008年，下村修等人因为发现荧光蛋白的细胞标记作用而获得了诺贝尔化学奖。近年来，人们发现有非常多的量子点可以替代荧光蛋白作为生物领域细胞成像的标记物，作为一种新型的细胞成像标记物，量子点具有许多独特的性质，相比于传统的荧光染料随着材料的不同，需要多种激发光激发且发射光谱宽、重叠现象严重等特点，量子点可以实现一种激发波长下的多波长发射，而且由于半高宽窄，不同颜色的量子点发射谱重叠现象不明显，具有多色标记和检测多组分生物样品的潜能，并且量子点具有更小的粒径，更加容易进入到细胞中。
全无机钙钛矿量子点作为一种半导体材料，具有合成简单、发射峰较窄(半高宽为12～42nm)、荧光量子效率高(最高可达90％)、发光峰位可调(调控卤素元素的种类和比例、调控量子点合成温度从而调节量子点的粒径尺寸)等特点，其拥有巨大的生物成像优势；双亲性磷脂(phospholipid)是生物膜的组成成分之一，具有亲水性头部和疏水性尾部，可以很容易的形成脂质体、胶束等结构，用于携带各种亲水、疏水和两亲的物质；用具有细胞靶向能力的功能性磷脂和双亲性磷脂分子包裹在全无机钙钛矿量子点的表面能使得全无机钙钛矿量子点具有细胞成像能力，提高其生物相容性、降低其生物毒性。
发明内容
技术问题：本发明的目的是提供一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针及其制备方法，该探针具有荧光量子效率高、生物相容性好、细胞毒性小等优势。
技术方案：本发明提供了一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3，X表示Cl、Br或I中的一种，A表示Cl或I中的一种，0＜n＜1，其外层为双亲性磷脂和功能性磷脂，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接。
其中：
所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbX3和油溶性纳米粒子或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3和油溶性纳米粒子，X表示Cl、Br或I中的一种，A表示Cl或I中的一种，0＜n＜1，其外层为双亲性磷脂和功能性磷脂，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接。
所述的双亲性磷脂为二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、十七烷酰磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基卵磷脂或二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一种。
所述的功能性磷脂为叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺或生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的一种。
所述的全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3与双亲性磷脂、功能性磷脂三者的重量混合比例为1～1.35:54:1～2。
所述的全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3与油溶性纳米粒子、双亲性磷脂、功能性磷脂四者的重量混合比例1～1.35:1～1.35:54:1～2。
所述的油溶性纳米粒子为油溶性四氧化三铁纳米粒子或者油溶性金纳米粒子中的一种。
本发明还提供了一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针的制备方法，该方法包括以下步骤：
1)全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3的制备：按分子式CsPbX3中各元素的摩尔比将PbX2粉末和CsX粉末溶解在二甲基亚砜中得到混合溶液Ⅰ，或者按分子式CsPb(BrnA1-n)3中各元素的摩尔比将PbBr2粉末、PbA2粉末、CsBr粉末和CsA粉末溶解在二甲基亚砜中得到混合溶液Ⅱ，之后向混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ中加入油酸和油胺，超声至澄清得到前驱体溶液，之后将前驱体溶液加入甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbX3的甲苯溶液或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3的甲苯溶液；
2)细胞成像探针制备：按比例将全无机钙钛矿量子点CsPbX3的甲苯溶液或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3的甲苯溶液与双亲性磷脂氯仿溶液、功能性磷脂氯仿溶液、油溶性纳米粒子氯仿溶液混合均匀后，去除有机溶剂形成均匀薄膜，之后将薄膜溶解于超纯水中，得到基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
其中：
步骤1)所述的混合溶液Ⅰ中PbX2的浓度为0.4mM～1mM，所述的混合溶液Ⅱ中PbA2的浓度为0.2mM～0.5mM；步骤1)所述的向混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ中加入油酸和油胺，是指按照体积比混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ：油酸：油胺为10～30:1～6:0.5～0.8将油酸和油胺加入到混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ中；步骤1)所述的将前驱体溶液加入甲苯中，甲苯与前驱体溶液的体积比为1～100:1。
步骤1)所述的将前驱体溶液加入甲苯中是指在温度为10～40℃、搅拌速率为1000rpm～1500rpm的条件下，将前驱体溶液加入甲苯中。
步骤2)所述的双亲性磷脂氯仿溶液由双亲性磷脂粉末加入氯仿中配制，其浓度为10～20mg/mL，所述的功能性磷脂氯仿溶液由功能性磷脂粉末加入氯仿中配制，其浓度为1～10mg/mL；所述的油溶性纳米粒子氯仿溶液由油溶性纳米粒子加入氯仿中配制，其浓度为1～10mg/mL。
步骤2)所述的去除有机溶剂形成均匀薄膜是指在旋转蒸发仪上减压去除有机溶剂形成均匀薄膜。
步骤2)所述的将薄膜溶解于超纯水中，得到基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，是指将薄膜溶解于超纯水中后，进一步经离心、再溶解于超纯水中提纯，得到基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下优势：
本发明采用磷脂包裹技术，在油溶性全无机钙钛矿量子点表面包覆磷脂膜，实现了全无机钙钛矿量子点的细胞成像应用，荧光量子效率高；
本发明利用磷脂膜提高了全无机钙钛矿量子点的生物相容性，同时减少了全无机钙钛矿量子点中有毒元素的释放，降低了量子点的生物毒性；
本发明操作简单，灵敏度高，可重复性好。
附图说明
图1为具有叶酸靶向识别能力的基于全无机钙钛矿量子点CsPbBr3的细胞成像探针在11天内荧光随时间的变化趋势示意图；
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作更进一步的说明。
本发明采用全无机钙钛矿量子点作为荧光成像探针，并在外面包裹磷脂层以提高量子点的生物相容性，降低量子点的生物毒性，实现了全无机钙钛矿量子点的生物应用。
实施例1：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbBr3，外层为双亲性磷脂二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbBr3、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺三者的重量比例为1.35:54:1，其制备包括以下步骤：
步骤1：按摩尔比1:1取溴化铅粉末和溴化铯粉末溶解在10mL二甲基亚砜中,其中溴化铅浓度为0.4mM；再加入1mL油酸和0.5mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入1mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbBr3甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbBr3：二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1.35:54:1的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbBr3甲苯溶液、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤5：将步骤4得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例2：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5，外层为双亲性磷脂二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺三者的重量比例为1.2:54:1.5，其制备包括以下步骤：
步骤1：按照摩尔比为0.5：0.5：1取溴化铅粉末、氯化铅粉末和溴化铯粉末溶解在10mL二甲基亚砜中,其中氯化铅浓度为0.2mM；再加入2mL油酸和0.5mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5的甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末100mg，溶解在20mL氯仿中，得到5mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末100mg，溶解在20mL氯仿中，得到5mg/mL的转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5：二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺：转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1.2:54:1.5的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5甲苯溶液、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液和转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤5：将步骤4得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例3：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5I1.5，外层为双亲性磷脂二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5I1.5、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺三者的重量比例为1.2:54:1.5，其制备包括以下步骤：
步骤1：按照摩尔比为0.5：0.5：1取溴化铅粉末、碘化铅粉末和溴化铯粉末溶解在10mL二甲基亚砜中,其中碘化铅浓度为0.5mM；；再加入2mL油酸和0.5mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5I1.5的甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末20mg，溶解在20mL氯仿中，得到1mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末20mg，溶解在20mL氯仿中，得到1mg/mL的生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5I1.5：二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺：生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1.2:54:1.5的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5I1.5甲苯溶液、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液和生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤5：将步骤4得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例4：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbCl3，外层为双亲性磷脂十七烷酰磷脂(DHPC)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbCl3、十七烷酰磷脂(DHPC)和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺三者的重量比例为1:54:2，其制备包括以下步骤：
步骤1：取氯化铅粉末和溴化铯粉末的摩尔比例为1:1，溶解在30mL二甲基亚砜中,其中氯化铅浓度为1mM；；再加入6mL油酸和0.8mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将0.1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbCl3甲苯溶液。
步骤2：取十七烷酰磷脂(DHPC)粉末150mg，溶解在20mL氯仿中，得到7.5mg/mL的十七烷酰磷脂(DHPC)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末150mg，溶解在20mL氯仿中，得到7.5mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbCl3：十七烷酰磷脂(DHPC)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1:54:2的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbCl3甲苯溶液、十七烷酰磷脂(DHPC)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤5：将步骤4得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例5：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbCl3，外层为双亲性磷脂二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbCl3、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺三者的重量比例为1:54:2，其制备包括以下步骤：
步骤1：取氯化铅粉末和溴化铯粉末的摩尔比例为1:1，溶解在30mL二甲基亚砜中,其中氯化铅浓度为0.8mM；；再加入6mL油酸和0.8mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将0.1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbCl3甲苯溶液。
步骤2：取二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)粉末50mg，溶解在20mL氯仿中，得到2.5mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末50mg，溶解在20mL氯仿中，得到2.5mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbCl3：二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1:54:2的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbCl3甲苯溶液、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤5：将步骤4得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例6：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbCl3，外层为双亲性磷脂二油酰基卵磷脂(DOPC)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbCl3、二油酰基卵磷脂(DOPC)和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺三者的重量比例为1:54:2，其制备包括以下步骤：
步骤1：取氯化铅粉末和溴化铯粉末的摩尔比例为1:1，溶解在30mL二甲基亚砜中,其中氯化铅浓度为0.6mM；再加入6mL油酸和0.8mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将0.1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbCl3甲苯溶液。
步骤2：取二油酰基卵磷脂(DOPC)粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的二油酰基卵磷脂(DOPC)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbCl3：二油酰基卵磷脂(DOPC)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1:54:2的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbCl3甲苯溶液、二油酰基卵磷脂(DOPC)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤5：将步骤4得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例7：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbBr3和油溶性四氧化三铁纳米粒子，其外层为二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbBr3、油溶性四氧化三铁纳米粒子、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺四者的重量比例为1.35:1.35:54:1，其制备包括以下步骤：
步骤1：取溴化铅粉末和溴化铯粉末的摩尔比例为1:1，溶解在10mL二甲基亚砜中,其中溴化铅浓度为0.7mM；；再加入1mL油酸和0.5mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入1mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbBr3的甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：取油溶性油溶性四氧化三铁纳米粒子200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的油溶性四氧化三铁纳米粒子氯仿溶液。
步骤5：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbBr3：油溶性四氧化三铁纳米粒子:二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1.35:1.35:54:1的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbBr3的甲苯溶液、油溶性四氧化三铁纳米粒子氯仿溶液、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤6：将步骤5得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例8：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbCl3和油溶性四氧化三铁纳米粒子，其外层为二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbCl3、油溶性四氧化三铁纳米粒子、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺四者的重量比例为1:1:54:2，其制备包括以下步骤：
步骤1：取氯化铅粉末和氯化铯粉末的摩尔比例为1:1，溶解在30mL二甲基亚砜中,其中氯化铅浓度为0.6mM；再加入6mL油酸和0.8mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将0.1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbCl3的甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：取油溶性油溶性四氧化三铁纳米粒子200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的油溶性四氧化三铁纳米粒子氯仿溶液。
步骤5：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbCl3：油溶性四氧化三铁纳米粒子：二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺：重量比为1:1:54:2的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbCl3的甲苯溶液、油溶性四氧化三铁纳米粒子氯仿溶液、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤6：将步骤5得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例9：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbI3和油溶性金纳米粒子，其外层为二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbI3、油溶性金纳米粒子、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、四者的重量比例为1.35:1.35:54:1，其制备包括以下步骤：
步骤1：取碘化铅粉末和碘化铯粉末的摩尔比例为1:1，溶解在10mL二甲基亚砜中,其中碘化铅浓度为0.6mM；再加入1mL油酸和0.5mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入1mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbI3的甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：取油溶性金纳米粒子100mg，溶解在20mL氯仿中，得到5mg/mL的油溶性金纳米粒子氯仿溶液。
步骤5：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbI3：油溶性金纳米粒子：二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1.35:1.35:54:1的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbI3的甲苯溶液、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液、叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液和油溶性金纳米粒子氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤6：将步骤5得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
实施例10：
一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5和油溶性金纳米粒子，其外层为二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和功能性磷脂叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接，其中全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5、油溶性金纳米粒子、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺四者的重量比例为1:1:54:2，其制备包括以下步骤：
步骤1：按照摩尔比为0.5：0.5：1取溴化铅粉末、氯化铅粉末和溴化铯粉末溶解在10mL二甲基亚砜中,其中氯化铅浓度为0.3mM；再加入2mL油酸和0.5mL油胺稳定，超声至溶液澄清，得到前驱体溶液；将1mL上述前驱体在30℃大力搅拌下，缓慢加入10mL甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5的甲苯溶液。
步骤2：取二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液。
步骤3：取叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺粉末200mg，溶解在20mL氯仿中，得到10mg/mL的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液。
步骤4：取油溶性金纳米粒子20mg，溶解在20mL氯仿中，得到1mg/mL的油溶性金纳米粒子氯仿溶液。
步骤5：在100mL单口烧瓶中，按照全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5：油溶性金纳米粒子:二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)：叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺重量比为1:1:54:2的比例，将全无机钙钛矿量子点CsPbBr1.5Cl1.5的甲苯溶液、油溶性金纳米粒子、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)氯仿溶液和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺氯仿溶液充分混合，减压蒸发有机溶剂，得到均匀薄膜。
步骤6：将步骤5得到的均匀薄膜加入去离子水使薄膜全部溶解后，经离心、重新分散在水中得到所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
图1可以看出，具有叶酸靶向识别能力的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针能在水中实现10天以上的荧光发射。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3，X表示Cl、Br或I中的一种，A表示Cl或I中的一种，0＜n＜1，其外层为双亲性磷脂和功能性磷脂，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接。
2.如权利要求1所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针为胶束状结构，其内层为全无机钙钛矿量子点CsPbX3和油溶性纳米粒子或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3和油溶性纳米粒子，X表示Cl、Br或I中的一种，A表示Cl或I中的一种，0＜n＜1，其外层为双亲性磷脂和功能性磷脂，内外层之间通过亲水和疏水相互作用相连接。
3.如权利要求1或2所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述的双亲性磷脂为二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、十七烷酰磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基卵磷脂或二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一种。
4.如权利要求1或2所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述功能性磷脂为叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、转铁蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺或生物素-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的一种。
5.如权利要求1所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述的全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3与双亲性磷脂、功能性磷脂三者的重量混合比例为1～1.35:54:1～2。
6.如权利要求2所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述的全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3与油溶性纳米粒子、双亲性磷脂、功能性磷脂四者的重量混合比例1～1.35:1～1.35:54:1～2。
7.如权利要求2所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针，其特征在于：所述的油溶性纳米粒子为油溶性四氧化三铁纳米粒子或者油溶性金纳米粒子中的一种。
8.一种如权利要求1或者2所述的基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)全无机钙钛矿量子点CsPbX3或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3的制备：按分子式CsPbX3中各元素的摩尔比将PbX2粉末和CsX粉末溶解在二甲基亚砜中得到混合溶液Ⅰ，或者按分子式CsPb(BrnA1-n)3中各元素的摩尔比将PbBr2粉末、PbA2粉末、CsBr粉末和CsA粉末溶解在二甲基亚砜中得到混合溶液Ⅱ，之后向混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ中加入油酸和油胺，超声至澄清得到前驱体溶液，之后将前驱体溶液加入甲苯中，得到全无机钙钛矿量子点CsPbX3的甲苯溶液或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3的甲苯溶液；
2)细胞成像探针制备：按比例将全无机钙钛矿量子点CsPbX3的甲苯溶液或全无机钙钛矿量子点CsPb(BrnA1-n)3的甲苯溶液与双亲性磷脂氯仿溶液、功能性磷脂氯仿溶液、油溶性纳米粒子氯仿溶液混合均匀后，去除有机溶剂形成均匀薄膜，之后将薄膜溶解于超纯水中，得到基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针。
9.如权利要求8所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针的制备方法，其特征在于：步骤1)所述的混合溶液Ⅰ中PbX2的浓度为0.4mM～1mM，所述的混合溶液Ⅱ中PbA2的浓度为0.2mM～0.5mM；步骤1)所述的向混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ中加入油酸和油胺，是指按照体积比混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ：油酸：油胺为10～30:1～6:0.5～0.8将油酸和油胺加入到混合溶液Ⅰ或混合溶液Ⅱ中；步骤1)所述的将前驱体溶液加入甲苯中，甲苯与前驱体溶液的体积比为1～100:1。
10.如权利要求8所述的一种基于全无机钙钛矿量子点的细胞成像探针的制备方法，其特征在于：步骤2)所述的双亲性磷脂氯仿溶液由双亲性磷脂粉末加入氯仿中配制，其浓度为10～20mg/mL，所述的功能性磷脂氯仿溶液由功能性磷脂粉末加入氯仿中配制，其浓度为1～10mg/mL；所述的油溶性纳米粒子氯仿溶液由油溶性纳米粒子加入氯仿中配制，其浓度为1～10mg/mL。
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