CN107860829A - 一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：蒲桃益胃颗粒的薄层色谱鉴别；高效液相色谱含量测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.2%冰乙酸－甲醇（85:15）为流动相。检测波长为280nm，理论板数按5‑羟甲基糠醛峰计算应不低于5000；取5‑羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10%乙醇制成每1ml含10μg的对照品溶液，即得；取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声10min，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本发明操作简便、分离效果好、专属性强、重复性好，可有效控制该制剂的质量。

Description

一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法

技术领域

本发明属于中药制剂的质量检测领域，具体来说涉及一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法。

背景技术

对蒲桃壳的促胃动力活性成分筛选，提取分离纯化得到5-羟甲基糠醛，并经过促胃动力药理实验，证实该成分具有显著的促胃动力作用。根据中药5类新药注册要求，将蒲桃壳制成含有效成分（5—羟甲基糠醛）大于50%的蒲桃益胃颗粒，可用于治疗胃排空延缓、胃肠动力不足引起的消化不良症。因此需要对蒲桃益胃颗粒进行了质量控制方法的研究，有效控制了该制剂的内在质量，保证其临床用药安全有效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便、分离效果好、专属性强、重复性好，可有效控制该蒲桃益胃颗粒质量的控制方法。

本发明的一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：

（1）蒲桃益胃颗粒的薄层色谱鉴别：本品研细后，取粗粉0.5g，先用0.5ml 1% NaOH溶液润湿，再加入25ml乙酸乙酯，超声提取30min，过滤，滤液挥干，加入1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。另取蒲桃壳药材1g，同法制成药材供试品溶液。另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液。再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液。照《中国药典》2015年版四部的薄层色谱法试验。吸取药材供试品溶液4μl，其他3种溶液各2μl，分别点于同一荧光（GF₂₅₄）板上，以石油醚－乙酸乙酯（1﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黑色斑点。

（2）高效液相色谱含量测定：

A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.2%冰乙酸－甲醇（85 :15）为流动相。检测波长为280nm，理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000；

B、对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10%乙醇制成每1ml含10μg的对照品溶液，即得；

C、供试品溶液的制备：取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声（功率260w，频率40KHz）10min，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

D、含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本发明的优点在于方法简单、准确。

本发明根据国家对“中药新药研究的技术要求”，采用了专属性强、灵敏度高的高效液相色谱法测定颗粒中蒲桃壳有效成分的含量，建立的样品处理方法简单易行，可操作性强，重现性好；采用的流动相对5-羟甲基糠醛与其他组分的分离度、重现性、精密度、加样回收率都较好；采用薄层色谱法定性鉴别颗粒剂中的有效成分，进一步保证了检测方法的准确性。

本发明在蒲桃益胃颗粒含量测定中，供试品溶液处理采用直接加水超声溶解、放冷后再定容的方法，减少了系列操作误差和能耗；在蒲桃益胃颗粒薄层色谱鉴定方法中，供试品的提取及展开剂均采用无毒试剂，绿色环保。建立的质量控制方法能有效控制该制剂的内在质量，保证用药安全，从而确保其临床疗效。

具体实施方式

以下通过试验例和实施例来进一步说明本发明方法的有益效果。

试验例：

制备：取有效成分5—羟甲基糠醛大于50%的蒲桃壳提取物加蔗糖制成，每1g/袋（含有效成分10mg），即得。

用法用量：开水冲服，一次1袋，一日3次。

性状：本品为颗粒剂，内容物为淡黄色颗粒；味甜。

鉴别：取本品研细，取粉末0.5g，先用0.5ml 1%NaOH溶液润湿，再加25ml乙酸乙酯超声提取30min，过滤，滤液挥干，加1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。取蒲桃药材1g，同法药材供试品溶液。另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液。再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液。照《中国药典》2015年版四部（0502）薄层色谱法试验。吸取药材供试品溶液4μl，其他3种溶液各2μl，分别点于同一荧光（GF₂₅₄）板上，以石油醚－乙酸乙酯（1﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的黑色斑点。

检查：应符合颗粒剂项下有关的各项规定（中国药典2015年版四部 0104）。

含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部 0512）测定。

（1）仪器与试剂

岛津LC-10AT型输液泵、岛津SPD-10A型紫外检测器、WML-2006C-4型威玛龙色谱数据工作站、HT-230A色谱柱恒温箱。分析天平：LIBROR AEL-160型万分之一电子分析天平，TG332A型十万分之一分析天平。HS10260D（功率260w，频率40KHz）型超声清洗仪。5-羟甲基糠醛对照品（批号：111626-201308）。对照品购于中国食品药品检定研究院，甲醇为色谱纯，其它试剂均为国产分析纯。供试品由贵州省生物技术研究开发基地提供。

（2）***适应性试验

色谱柱为依利特 Hypersil BDS C₁₈柱(4.6 mm×250mm，5μm)，0.2%冰乙酸－甲醇（85:15）为流动相。检测波长为280nm，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min。理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000。

（3）控制波长选择

取5-羟甲基糠醛对照品溶液进行UV扫描，在280nm处有最大吸收波长，故选择280nm作为控制波长。

（4）色谱条件的筛选

①流动相的选择：

表1 蒲桃益胃颗粒含量测定的流动相选择

通过以上对比试验结果分析，方法2具有保留时间适当，样品分离度高，阴性无干扰等特点，因此作为正文收载。同时根据试验分析总结，当5-羟甲基糠醛理论塔板数达到5000时，分离度均大于1.5，故选择颗粒剂中测定5-羟甲基糠醛的流动相为甲醇－0.2%冰乙酸=15﹕85，以5-羟甲基糠醛峰计算理论塔板数应不低于5000。

②供试品溶液制备方法筛选

a、溶剂的选择

根据5-羟甲基糠醛的理化特性，我们分别采用不同的溶剂，以5-羟甲基糠醛的含量作为测定指标（5-羟甲基糠醛对照品浓度为11.206ug/ml），结果见表2：

表2 供试品溶剂的选择

通过采用乙酸乙酯、甲醇、乙醇、10%乙醇、水等溶剂进行提取，试验结果显示，乙酸乙酯作为提取溶剂时虽然没有杂质，但所得含量低；而用甲醇及乙醇提取溶剂时含量低，且杂质多；10%乙醇和水提取溶剂时杂质峰干扰小，分离度及理论塔板数较为理想。为了节约成本，故选用水作为提取溶剂。

b、超声时间的选择

超声时间试验结果见表3：

表3 超声时间的选择

取本品，研细，称取细粉0.1 g共 6份，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，经不同时长超声，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液。结果表明超声10 min后，5-羟甲基糠醛含量已无明显变化，最后确定超声时间为10 min。

因此，供试品的制备方法为：取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声（功率260w，频率40KHz）10分钟，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

③专属性试验

蒲桃益胃颗粒阴性样品、供试品溶液的制备：取缺有效成分浸膏样品、蒲桃益胃颗粒各0.1g，置于100容量瓶中，加适量水，超声（功率260w，频率40KHz）10分钟，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，制得阴性样品和供试品溶液，另取5-羟甲基糠醛对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，试验结果表明，阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法可行。

④方法学考察

a、线性关系考察

精密量取5-羟甲基糠醛对照品溶液稀释成2.8015，5.603，11.206，22.412，44.824μg·mL^-1的5-羟甲基糠醛对照品溶液，按照上述色谱条件，分别进样10μl，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，5-羟甲基糠醛的进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A= 81677C+77015，相关系数r = 0.9997，结果表明5-羟甲基糠醛在2.8015～44.824μg·ml^-1范围具有良好线性关系。结果见表4。

表4 5-羟甲基糠醛线性测定结果

b、精密度试验

精密量取5-羟甲基糠醛对照品溶液（11.206μg·ml^-1）10μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，以5-羟甲基糠醛的峰面积计算，RSD=1.63%，结果见表5。

表5 精密度试验结果

c、稳定性试验：精密吸取同一批号供试品溶液，分别在0、1、2、3、6、24h进样10μl，测定峰面积。结果，供试品在24h内，5-羟甲基糠醛峰面积积分值前后无明显变化，RSD=1.97%，表明供试品溶液在24小时内具有良好的稳定性。结果见表6。

表6 稳定性试验结果

d、重复性试验 取同一批号供试品，照含量测定方法制备供试品6份，进行测定,以5-羟甲基糠醛的含量计算，RSD=0.87%，结果见表7。

表7 样品重复性试验（n=2）

e、加样回收率试验 取本品粉末50mg，9份，分成3组，精密称定，于100ml容量瓶内，每组按取样量的50%、100%、150%分别加入5-羟甲基糠醛对照品，照供试品处理方法及含量测定方法，进行5-羟甲基糠醛含量测定，结果列于表8。

表8 5-羟甲基糠醛的加样回收率实验结果

试验结果表明，5-羟甲基糠醛加样平均回收率为98.96%，RSD为1.28%，达到标准要求，方法可行。

具体实施方式

一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：

实施例1：蒲桃益胃颗粒薄层色谱鉴别

本品研细，取粗粉0.5g，先用0.5ml 1%NaOH溶液润湿，再加25ml的乙酸乙酯超声提取30min，过滤，滤液挥干，加1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液。取蒲桃药材1g，同法制成药材供试品溶液。另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液。再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液。照薄层色谱法试验。吸取药材供试品溶液4μl，其他3种溶液各2μl，分别点于同一荧光（GF₂₅₄）板上，以石油醚—乙酸乙酯（1﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的黑色斑点。

实施例2：蒲桃益胃颗粒的含量测定

照高效液相色谱法测定。

对照品溶液制备 取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10%乙醇制成每1mL含10μg的对照品溶液，即得。

供试品溶液制备 取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声（功率260w，频率40KHz）10分钟，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜，作为供试品。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中5-羟甲基糠醛含量；结果见表9。

表9 蒲桃益胃颗粒三批样品5-羟甲基糠醛的测定结果

Claims (1)

1.一种蒲桃益胃颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：

（1）蒲桃益胃颗粒的薄层色谱鉴别：本品研细后，取粗粉0.5g，先用0.5ml 1% NaOH溶液润湿，再加入25ml乙酸乙酯，超声提取30min，过滤，滤液挥干，加入1ml乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取蒲桃壳药材1g，同法制成药材供试品溶液，另取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙酸乙酯制成溶液，作为对照品溶液，再根据处方，制备缺蒲桃的阴性样品溶液；吸取药材供试品溶液4μl，其他3种溶液各2μl，分别点于同一荧光（GF₂₅₄）板上，以石油醚－乙酸乙酯（1﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置荧光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黑色斑点；

（2）高效液相色谱含量测定：

A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.2%冰乙酸：甲醇（85 :15）流动相；

检测波长为280nm，理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000；

B、对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加10%乙醇制成每1ml含10μg的对照品溶液，即得；

C、供试品溶液的制备：取本品，研细，取细粉0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量水，超声（功率260w，频率40KHz）10min，放冷至室温，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

D、含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。