CN107691839A - 一种绿色无公害育肥猪预混料及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种绿色无公害育肥猪预混料，由下述配比的原料组成：嗜酸乳酸菌大于0.5万亿cfu；粪肠球菌大于0.3万亿cfu；丁酸梭菌大于0.15万亿cfu；食盐4.8～6.2kg；磷酸氢钙6.2～10.5kg；碳酸钙8.8～12.6kg；生物多糖245～355g；维生素A 17.0～19.0万IU；维生素D3 2.8～3.2万IU；烟酸420～460mg；泛酸钙220～228mg；用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。本发明改善猪的肠道菌群平衡，增强猪只自身免疫能力，提高猪只健康水平及生长速度，提高饲料利用率和降低料肉比。

Description

一种绿色无公害育肥猪预混料及制备方法和应用

技术领域

本发明属于养殖技术领域，涉及一种绿色无公害育肥猪预混料及制备方法和应用。

背景技术

饲料和养殖业中预防性和促生长药物的添加极大的促进了我国养殖业的发展，养殖业业主在追求效益最大化的同时，也带来了严重的环境污染问题。目前国内95％以上的预混料产品均添加促生长和饲用抗生素。据统计中国每年生产的大约21万吨抗生素原料中有9.7万吨用于畜牧养殖业，饲用抗生素给养殖业创造了巨大的经济效益，对中国乃至世界畜牧业的发展做出了巨大的贡献。但在预混料中添加抗生素以及在养殖过程中盲目滥用抗生素，引起各种病原微生物产生抗药性，以及动物的二重感染，严重影响畜禽健康状况；还会引起畜禽产品中药物残留，不仅影响畜禽产品的质量及其安全性，还会导致人类体内病原微生物对抗生素产生耐药性，进而直接威胁人类健康。欧盟和美国已经全面禁止在饲料中添加抗生素，中华人民共和国农业部正式发布第2292号公告：禁止洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种抗生素在食品动物中使用，质检总局发布2015年第144号公告，对进出口饲料和饲料添加剂风险级别及检验检疫监管方式作出调整，以及国家相继出台多项相关标准和产业政策，中国的饲料禁抗时代即将来临。

不少生猪养殖企业在规模化畜禽养殖过程中，为加快畜禽生长速度、提高饲料利用率和防止畜禽疾病，在饲料添加剂中大量使用Cu、Zn、Fe等微量元素。但由于猪对金属元素的低消化吸收率，大量金属元素将以粪便的形式排出体外，而粪便中重金属的大量排放将会给环境造成严重污染。随着人们无公害意识和观念的不断增强，现已经形成了对安全卫生、无残留、无污染、健康的无公害食品的迫切需求。

微生物饲料添加剂是农业部批准的饲料添加剂，不仅可以应对养殖动物复杂的生理性腹泻、营养性腹泻及病原性腹泻等多重挑战，还可以控制动物疾病，促进动物生长、增强免疫机能、改善营养代谢、提高饲料报酬、减少环境污染等多重功效，尤其是幼龄动物表现出良好优势，发挥家畜的生长性能、提高机体免疫机能、改善肠道菌群平衡、控制腹泻率及发病率。微生物饲料添加剂是有效解决，疾病泛滥、病菌耐药、免疫能力下降、成活率降低、养殖效益下降的有效手段，是畜牧业可持续发展的动力。但是，此种产品大多在动物养殖过程中单一菌种或简单组合作为饲用添加剂来使用，没有根据不同动物在不同生理阶段的生长特性对不同菌种和促进因子的需要，而在饲料配方中添加，因此，不能有效达到减少或替代饲料中添加饲用抗生素和微量金属的目的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述存在的问题，提供一种既具备营养功效又有动物免疫保健功能的绿色无公害育肥猪预混料，与现有产品相比，通过添加益生菌和益生元，改善猪的肠道菌群平衡，增强猪只自身免疫能力和极大降低腹泻率及发病率，从而提高猪只健康水平及生长速度，提高饲料利用率和降低料肉比；有效替代饲用抗生素药物和微量元素在饲料中的添加，解决病菌耐药和粪便重金属对环境的危害，促进人类健康，改善生态环境。

本发明的另一目的是提供所述绿色无公害育肥猪预混料的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供绿色无公害育肥猪预混料在育肥猪生长中的应用。

本发明的通过如下技术方案实现。

一种绿色无公害育肥猪预混料，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于0.5万亿cfu；

粪肠球菌大于0.3万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.15万亿cfu；

食盐4.8～6.2kg；

磷酸氢钙6.2～10.5kg；

碳酸钙8.8～12.6kg；

生物多糖245～355g；

维生素A 17.0～19.0万IU；

维生素D3 2.8～3.2万IU；

烟酸420～460mg；

泛酸钙220～228mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

优选的，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于0.5万亿cfu；

粪肠球菌大于0.6万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.15万亿cfu；

食盐6.2kg；

磷酸氢钙10.5kg；

碳酸钙12.6kg；

生物多糖245g；

维生素A 18.0万IU；

维生素D3 3.0万IU；

烟酸440mg；

泛酸钙224mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

优选的，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于1.2万亿cfu；

粪肠球菌大于0.3万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.25万亿cfu；

食盐4.8kg；

磷酸氢钙6.2kg；

碳酸钙8.8kg；

生物多糖335g；

维生素A 18.0万IU；

维生素D3 3.0万IU；

烟酸440mg；

泛酸钙224mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

一种上述的绿色无公害育肥猪预混料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、根据配比，称取原料磷酸氢钙、碳酸钙、食盐，将磷酸氢钙、碳酸钙、食盐混合搅拌均匀得到混合物载体一，备用；

(2)、称取原料生物多糖，再根据配比将所需维生素A、维生素D3、烟酸、泛酸钙进行搅拌混合均匀，然后与步骤(1)得到的混合物载体一的0.1-50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，混合5～25分钟，得到混合物载体二；

(3)、根据配比所需嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌的有效活菌数,称取相应的菌粉，与步骤(1)得到的混合物载体一的0.1-50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，搅拌混合15～50分钟，得到混合物载体三。

(4)、再将将步骤(2)得到的混合物载体二、步骤(3)得到的混合物载体三、混合物载体一经过步骤(2)和步骤(3)的余量一起放入搅拌设备容器中，搅拌混合5～45分钟，即制得绿色无公害育肥猪预混料。

优选的，包括如下步骤：

(1)、根据配比，称取原料磷酸氢钙、碳酸钙、食盐，将磷酸氢钙、碳酸钙、食盐混合搅拌均匀得到混合物载体一，备用；

(2)、称取原料生物多糖，再根据配比将所需维生素A、维生素D3、烟酸、泛酸钙进行搅拌混合均匀，然后与步骤(1)得到的混合物载体一的50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，混合5～25分钟，得到混合物载体二；

(3)、根据配比所需嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌的有效活菌数,称取相应的菌粉，与步骤(1)得到的混合物载体一的另外50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，搅拌混合15～50分钟，得到混合物载体三。

(4)、再将将步骤(2)得到的混合物载体二、步骤(3)得到的混合物载体三一起放入搅拌设备容器中，搅拌混合5～45分钟，即制得绿色无公害育肥猪预混料。

一种上述的绿色无公害育肥猪预混料在育肥猪生长中的应用。

与现有技术相比，本发明的优点是：

1)本发明在绿色无公害育肥猪预混料中添加由嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌组成的复合微生态制剂实现了在饲料及养殖过程中完全替代以抗病促生长为目的的抗生素药物和微量元素(如Cu、Mn、Fe)的添加使用，有效解决病菌耐药和粪便重金属对环境的危害，促进人类健康，改善生态环境。

2)本发明绿色无公害育肥猪预混料，具有改善猪只肠道菌群平衡，增强猪只自身免疫能力和极大降低腹泻率及发病率，从而提高猪只健康水平及生长速度，提高饲料利用率和降低料肉比；

3)由于替代在饲料中添加抗生素药物和微量元素(如Cu、Mn、Fe)的使用，生产出的猪肉不但重金属含量低和风味品质好，而且健康安全环保无公害，符合国家提倡的开发和推广“无抗饲料”的发展方向。

附图说明

图1为本发明绿色无公害育肥猪预混料对育肥猪生长性能的影响；

图2为本发明绿色无公害育肥猪预混料对生长育肥猪血液生化指标的影响；

图3为本发明绿色无公害育肥猪预混料对生长育肥猪消化道内pH值的影响；

图4为本发明绿色无公害育肥猪预混料对生长育肥在猪群粪便中的重金属含量比较分析；

图5为本发明绿色无公害育肥猪预混料对生长育肥在瘦肉中的重金属残留比较分析；

图6为本发明绿色无公害育肥猪预混料对生长育肥在猪肝脏中的重金属残留比较分析；

图7为本发明青春双歧杆菌液体发酵工艺流程；

图8为本发明青春双歧杆菌发酵曲线图。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步阐述本发明。下述实施例中所涉及的试验方法或分析方法，如无特别说明，均为常规方法，所用试剂如无特别说明，均为市售，但不作为本发明的限定。

一、制备生物多糖

1、青春双歧杆菌液体发酵，如图1所示，

(1)摇瓶种子培养

用接种环蘸取少许斜面种子活化的青春双歧杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心，CICC 6175)接入种子培养基(葡萄糖10.0g/L、淀粉3.0g/L、蛋白胨12.0g/L、酵母提取物8.0g/L、牛肉浸膏5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L，乙酸钠4.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，FeSO₄·7H₂O0.15g/L，MnSO₄·H₂O 0.05g/L)中，于37℃，培养12h，即为种子液；

(2)种子罐培养

种子罐体积为30L，装液体种子培养基25L，灭菌温度115℃，20min；将摇瓶种子培养得到的种子液按照2％的接种体积比(即500ml)进入种子罐，发酵参数为：温度37℃，转速100r/min，初始pH 7.0，闭压0.05Mpa，用40％Na₂CO₃恒定pH不低于6.5；培养13h，即为二级种子液。所述种子罐培养基的配方为：葡萄糖10.0g/L、淀粉3.0g/L、蛋白胨12.0g/L、酵母提取物8.0g/L、牛肉浸膏5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L，乙酸钠4.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，FeSO₄·7H₂O0.15g/L，MnSO₄·H₂O 0.05g/L。

(3)发酵罐培养

发酵罐体积为1 500L，装载发酵培养基1 200L，灭菌温度115℃，20min；将种子罐培养得到的种子培养液全部泵入发酵罐，发酵参数为：温度37℃，转速150r/min，初始pH7.5；开始闭压0.05MPa，待pH降至6.8，变为负压0.06MPa继续培养；整个发酵周期用Na₂CO₃恒定pH不低于6.7；所述种子罐培养基的配方为：蔗糖40.0g/L、蛋白胨15.0g/L、酵母提取物10.0g/L、牛肉浸膏8.0g/L、K₂HPO₄ 2.0g/L，乙酸钠4.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.35g/L，FeSO₄·7H₂O 0.25g/L，MnSO4·H2O 0.15g/。

(4)发酵生长曲线

将上述培养每隔1h取样，用TPY琼脂培养基平板计数培养，并绘制其发酵生长曲线，如图8所示，在培养至18h时菌体浓度最高，达到3.45×1010cfu/ml

(5)生物多糖的分离提取

取20ml发酵液，于12 000rpm下离心15min；收集上清液，加入2倍体积无水乙醇，4℃静置12h，于12 000rpm下离心20min，得到多糖沉淀，用乙醇等有机溶剂洗涤3次，在70℃下烘干至恒重。在培养至19h时生物多糖达到0.031g/mL

2、生物多糖制备

将上述得到的青春双歧杆菌发酵液经GQ105R高速管式离心机，13000r/min将菌体细胞沉淀，收集发酵清液；

在上述收集发酵液清液中加入5％玉米粉作为填料,以20L/h的速度流加时,结合工作效率,选择最佳进风温度为170℃,料液温度为50℃,热风量为20m³/h,喷头转速为25000r/min，收集器内温度为45℃。对发酵清液进行喷雾干燥，得到粉末状为生物多糖，产量为81.25g/L。

二、制备预混料

一种绿色无公害育肥猪预混料，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于1.2万亿cfu；

粪肠球菌大于0.3万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.25万亿cfu；

食盐4.8kg；

磷酸氢钙6.2kg；

碳酸钙8.8kg；

生物多糖335g；

维生素A 18.0万IU；

维生素D3 3.0万IU；

烟酸440mg；

泛酸钙224mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

根据上述配比制备绿色无公害育肥猪预混料，包括如下步骤：

(1)、根据配比，称取原料磷酸氢钙、碳酸钙、食盐，将磷酸氢钙、碳酸钙、食盐混合搅拌均匀得到混合物载体一，备用；

(2)、称取原料生物多糖，再根据配比将所需维生素A、维生素D3、烟酸、泛酸钙进行搅拌混合均匀，然后与步骤(1)得到的混合物载体一的0.1％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，混合15分钟，得到混合物载体二；

(3)、根据配比所需嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌的有效活菌数,称取相应的菌粉，与步骤(1)得到的混合物载体一的1％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，搅拌混合30分钟，得到混合物载体三。

(4)、再将将步骤(2)得到的混合物载体二、步骤(3)得到的混合物载体三、混合物载体一经过步骤(2)和步骤(3)的余量(即100％-0.1％-1％＝98.9％)一起放入搅拌设备容器中，搅拌混合30分钟，即制得绿色无公害育肥猪预混料。

将基础日粮(如玉米和豆粕)进行预处理，经清选，粉碎后，根据配料设计要求重量配比，进行搅拌混合，混合均后，即制得无害化绿色育肥猪全价料。

其中，可往步骤(2)中的混合物载体二中再次加入步骤(1)中得到的混合物载体一的1％～2％进行搅拌混合，混合5～25分钟；混合完成后再次加入步骤(1)中得到的混合物载体一的10％～20％进行搅拌混合，混合5～25分钟；混合完成后加入步骤(4)中混合。

其中，可往步骤(3)中的混合物载体三中再次加入步骤(1)中得到的混合物载体一的10％～22％进行搅拌混合，混合15～50分钟，混合完成后加入步骤(4)中混合。

其中，可将步骤(1)的混合物载体一均分为两部分，一部分用于和步骤(2)中的维生素A、维生素D3、烟酸、泛酸钙进行搅拌混合均匀得到混合物载体二；另一部分用和于步骤(3)中的根据配比所需嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌的有效活菌数相应的菌粉进行搅拌混合均匀得到混合物载体三；在将步骤(2)得到的混合物载体二和步骤(3)得到的混合物载体三混合。

试验

本试验选用初始体重为(50.21±0.97)kg的健康无病、生长状况良好(杜×长×大)三元杂交猪300头，按体重、性别等相似条件，随机分为3组，每个组4个重复，每个重复25头猪。2015年8月13日开始试验，历时75天，

1、试验日粮与设计

试验共设3个处理组，对照组Ⅰ(常规料)：参照NRC(2010)配制基础日粮；对照组Ⅱ(重金属含抗组-含高铜高锌和抗生素金霉素)：在保证NRC(2010)配制基础日粮营养要求下，提高了Cu、Mn、Zn、Fe的添加量，同时还添加了抗生素(金霉素)到基础日粮中；试验组(本发明的绿色无公害育肥猪预混料)：参照NRC(2010)配制基础日粮使用本发明的2％添加绿色无公害育肥猪预混料，具体试验日粮的配方见表1

表1试验日粮的配方与营养水平

3、饲养管理

进栏前7d，清洗并消毒栏舍。预试期7d，正试期75d。群饲，每天喂料4次，饲料计量不限量，以食槽无剩余料为原则。保证充足清洁饮水，对猪舍每天打扫2次，及时观察猪的采食和腹泻等情况。按照常规饲养和免疫程序进行。

4、数据统计与分析

用SPSS17.0软件进行单因素方差统计分析，用Duncan's法进行最小显著性检验，取α＝0.05，结果以平均数±标准差表示，P＜0.05即为显著性差异，P＜0.01为极显著性差异。

结果分析

1、生长性能指标

①采食量：每天记录各栏猪耗料量，计算各栏猪平均采食量。

②日增重：记录正试期开始和结束时各栏猪质量，计算各栏猪平均增重

如图1所示，试验组(本发明育肥猪绿色生态料)与对照组Ⅰ(常规料)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)相比，生长育肥猪的平均日增重分别提高了24.4％和4.1％，料肉比分别降低了22.2％和15.7％(P<0.01)。

使用本发明的绿色无公害育肥猪预混料饲喂生长育肥猪后，可显著提高生长育肥猪平均日增重和降低平均日采食量(P<0.05)，显著降低其料肉比(P<0.01)，进一步证明了益生菌作为优势菌群在猪肠道内通过抑制病原菌生长、促进肠道微生物平衡、改善消化吸收功能，从而提高生长性能；另一方面是酵母菌和芽孢杆菌等好氧菌的存在为乳酸菌的生长繁殖创造了厌氧环境，而乳酸菌大量繁殖产生了乳酸，且提供许多生物活性物质，如功能性多肽、酶等，可将饲料中难以消化吸收的粗蛋白质、淀粉中的大分子物质分解成易消化吸收的葡萄糖、氨基酸和维生素等小分子营养物质，从而提高饲料的消化吸收率和营养价值，改善猪的生长性能。另外，本发明育肥猪饲料的作用效果显著优于含高铜高锌和抗生素的饲料，说明了使用本发明的绿色无公害育肥猪预混料可以省去微量元素(如锌、锰、铜、铁、等重金属元素)的添加，还可以减少对促生长药物金霉素的使用。

2、血液生化指标

试验结束时清晨空腹从各组随机抽出6头猪前腔静脉采血各5ml，血样于培养皿中37℃水浴静置，等析出血清后，吸取血清于离心管中，3 000r/min离心15min得血清样品。将各血清样品分装于管并浸入液氮中，快速冷冻处理后置于-30℃冰箱中保存备用，冷冻保存的血清。采用日立7020全自动生化分析仪测定以下指标：碱性磷酸酶，采用酶连续测定法；丙氨酸转氨酶，采用酶连续测定法；总蛋白，采用双缩脲法；白蛋白，采用溴甲酚绿法；总胆固醇，采用酶偶联比色法；尿素氮，采用酶偶联速率法。

猪血液生化指标的改变是组织细胞通透性发生改变和机体新陈代谢机能发生改变的反映。血清中丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶的活性均可反映畜禽对蛋白质和脂类的代谢效率，特别是碱性磷酸酶，作为具有遗传标记的同功酶，其活性的高低可反映动物的生长速度和生产性能。

如图2所示，试验组(本发明育肥猪绿色生态料)与对照组Ⅰ(常规料)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)，血清碱性磷酸酶活性分别提高了30.52％和21.29％(P<0.01)，丙氨酸转氨酶活性分别提高了23.03％和15.94％，差异显著(P<0.01)。本试验中饲料添加剂组的碱性磷酸酶和丙氨酸转氨酶活性显著高于其它各组(P<0.01)，也进一步证实了本发明的饲料添加剂可以提高猪的生长性能。

血清总蛋白浓度和血清尿素氮浓度可以较准确地反映动物体内蛋白质代谢和氨基酸之间的平衡状况，氨基酸平衡良好时血清总蛋白浓度上升和血清尿素氮浓度下降。

试验组(本发明育肥猪绿色生态料)中血清总蛋白浓度为59.6±2.01g/L，相比对照组Ⅰ(常规料组)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)，血清总蛋白浓度分别提高了20.16％和23.91％(P<0.01)；试验组(本发明育肥猪绿色生态料)中血清尿素氮浓度为2.99±0.15mmol/L，相比对照组Ⅰ(常规料组)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)，血清尿素氮含量分别降低了19.58％和15.04％(P<0.01)；白蛋白和球蛋白明显高于对照组和高铜高锌含抗组(P<0.05)；总胆固醇低于对照组，差异明显，可以降低人食用此类猪肉后对胆固醇的摄入量下，有效防止因食用猪肉导致胆固醇摄入过多而引起的一些疾病。本试验结果表明料添加剂组的血清总蛋白浓度显著高于其它各组(P<0.01)和血清尿素氮浓度显著低于其它各组(P<0.01)，表明本发明饲料添加剂可以提高育肥猪的蛋白质合成，增加机体氮沉积量，促进生长。

3、生长育肥猪消化道内pH值变化

消化道内容物pH采用上海精密仪器仪表有限公司生产的PHS-3C型精密酸度计(精确度±0.01)进行测定。

如图3所示，从胃开始，至消化道的末端(直肠)，选择了胃、十二指肠、小肠、盲肠、直肠五个部位的内容物进行测定，发现：试验组(本发明育肥猪绿色生态料)的pH值都比对照组Ⅰ(常规料)要低，分别下降0.12、0.17、0.36、0.43、0.59。进一步说明饲喂本发明育肥猪绿色生态预混料在猪消化道内产生了有机酸，使消化道酸度有了显著的降低，越到消化道末端，pH值降低越明显。

4、生长育肥猪在猪群粪便中的重金属含量情况比较

称取干燥后的样品0.5g于消煮管中，加入5mL浓硝酸浸泡过夜。次日，用控温消煮炉消煮样品，温度控制于120℃以内，消煮至管中的液体清亮，冷却至室温后加入2mL高氯酸，继续消煮并将温度控制于220℃以内，待管中液体清亮时冷却，用去离子水定容至50mL，将定容后的液样混匀、过滤(0.45μm孔径玻纤滤膜)，使用ICP-MS进行分析。每个样本做3个平行样。

Cu是一种抗菌剂和骨骼强壮剂，也是猪体内多种代谢所需关键酶的辅助因子，直接参与胆固醇代谢、骨骼矿化、免疫机能调节等代谢过程。Zn是多种酶的组分和激活剂，不仅可参与畜禽的多类代谢过程，高剂量的Zn还可以降低腹泻率，缓解腹泻引起的肠形态和肠通透性的改变，维持肠屏障的正常功能，猪日粮中添加高铜高锌可促进猪的快速生长和预防动物疾病。然而，由于生物利用率有限，大部分重金属元素会随着动物粪便排出体外。

如图4所示，试验组(本发明育肥猪绿色生态料)在基础日粮中未添加无机金属，试验发现试验组在粪便中铜、锰、锌的含量显著低于与对照组Ⅰ(常规料组)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)，并远低于《畜禽粪便安全使用准则》(NY/T 1334—2007)中对重金属含量的要求。

试验组与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比，在猪群粪便中的重金属Cu分别减少2.2倍和25倍，猪群粪便中的重金属Mn分别减少1.5倍和23倍，猪群粪便中的重金属Zn分别减少32.1％倍和6.6倍，猪群粪便中的P分别降低了49.04％和37.5％(P<0.05)。

猪饲料中高浓度的重金属添加剂，造成了猪粪中高含量的重金属残留，给其资源化利用带来很大的限制和风险，进一步验证使用本发明的育肥猪饲料可以提高对有机源的微量的有效利用，同时替代无机重金属在基础日粮中的添加。

5、生长育肥猪在瘦肉中的重金属残留分析

将肉清洗干净，除去表面血渍、毛发等杂物，剁碎，然后分别称量2.0g肉制品于白色溶样杯内，加5mL浓硝酸、1mL过氧化氢，扩口、装罐，将消解罐置于微波消解仪中，设定微波消解程序进行消解，之后取出溶样杯，将澄清透亮的溶液定容至25mL容量瓶中进行测定，并同时做空白对照。铅、镉、铜的测定采用微波消解-石墨炉火焰原子吸收光谱法；砷测定：标准砷斑法；汞测定：二硫腙比色法。不同重金属的测定均是国家标准检测方法。

《食品安全国家标准食品中污染物限量》(GB2762－2012)对禽畜肉及内脏中镉(肉0.1mg/kg；肝0.5mg/kg)、铅(肉0.2mg/kg；内脏0.5mg/kg)、汞(0.05mg/kg)、砷(0.5mg/kg)和《食品中铜限量卫生标准》(GB 15199—1994)肉类中铜(10mg/kg)均设置了限量标准，与《鲜(冻)畜肉卫生标准》(GB2707—2005)对禽畜肉和《无公害食品猪肉》(NY 5029—2008)对猪肉铅、镉和汞的限量标准一致。欧盟食品法典委员会对肉类铅和镉最大残留水平有更严格的要求，分别是0.1和0.05mg/kg。本试验采用《食品中污染物限量》(GB2762－2012)的限量标准对收集数据进行评价。

如图5所示，试验组在瘦肉中镉含量为4±0.25μg/Kg，远低于国家标准GB2762－2012(≤100μg/kg)，与对照组Ⅰ(常规料组)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)相比，在瘦肉中的重金属镉分别减少125％和150％；

铅毒性作用主要表现在对神经***的损害，早期可出现高级神经机能障碍，晚期则可造成器质性脑病及神经麻痹。常见的有模拟学习困难、空间综合能力下降、运动失调、多动、注意力不集中、侵袭性增强和智商下降等症状。铅还可通过取代钙离子或干扰钙离子的功能，来影响正常骨细胞的信息传导，干扰骨细胞的功能。试验组在瘦肉中铅含量为31±1.2μg/Kg，远低于国家标准GB2762－2012(≤200μg/kg)，与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比，在瘦肉中的重金属铅分别减少103％倍和135％；

试验组在瘦肉中汞含量为1.8±0.3μg/Kg，远低于国家标准GB2762－2012(≤50μg/kg)，与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比，在瘦肉中的重金属汞分别减少22.3％％和44.5％；

试验组在瘦肉中砷含量为8±0.8μg/Kg，远低于国家标准GB2762－2012(≤500μg/kg)，与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比，在瘦肉中的重金属砷分别降低了105％和175％；

试验组在瘦肉中铜含量为1.53±0.53mg/Kg，远低于国家标准《食品中铜限量卫生标准》(GB 15199—1994)肉类中铜(≤10mg/kg)，与对照组Ⅰ和对照组Ⅱ相比，在瘦肉中的重金属铜分别降低了128％和305％(P<0.05)。

6、生长育肥猪在猪肝中的重金属残留分析

镉被动物体吸收后主要与金属硫蛋白结合贮存，于肝、肾和骨骼中，代谢较慢，在脾、胰、甲状腺、毛发等组织也有一定的蓄积。镉对动物生长具有明显的毒害作用，长期摄入低浓度的镉或被镉污染的饲草和饮水，就会引起慢性镉中毒。临床上表现以骨骼疼痛、骨折、蛋白尿和肝功能障碍等。

如图6所示，试验组(本发明育肥猪绿色生态料)在基础日粮中未添加无机金属，试验发现试验组在瘦肉中镉、铅、汞、砷、铜的含量显著低于与对照组Ⅰ(常规料组)和对照组Ⅱ(含高铜高锌和抗生素的料)，并远低于国家标准《GB2762－2012食品安全国家标准食品中污染物限量》中对重金属含量的要求。

以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种绿色无公害育肥猪预混料，其特征在于，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于0.5万亿cfu；

粪肠球菌大于0.3万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.15万亿cfu；

食盐4.8～6.2kg；

磷酸氢钙6.2～10.5kg；

碳酸钙8.8～12.6kg；

生物多糖245～355g；

维生素A 17.0～19.0万IU；

维生素D3 2.8～3.2万IU；

烟酸420～460mg；

泛酸钙220～228mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

2.根据权利要求1所述的绿色无公害育肥猪预混料，其特征在于，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于0.5万亿cfu；

粪肠球菌大于0.6万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.15万亿cfu；

食盐6.2kg；

磷酸氢钙10.5kg；

碳酸钙12.6kg；

生物多糖245g；

维生素A 18.0万IU；

维生素D3 3.0万IU；

烟酸440mg；

泛酸钙224mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

3.根据权利要求1所述的绿色无公害育肥猪预混料，其特征在于，由下述配比的原料组成：

嗜酸乳酸菌大于1.2万亿cfu；

粪肠球菌大于0.3万亿cfu；

丁酸梭菌大于0.25万亿cfu；

食盐4.8kg；

磷酸氢钙6.2kg；

碳酸钙8.8kg；

生物多糖335g；

维生素A 18.0万IU；

维生素D3 3.0万IU；

烟酸440mg；

泛酸钙224mg；

用稻壳粉补充至20kg，混合均匀后即为2％添加的绿色无公害育肥猪预混料。

4.一种如权利要求1-3所述的绿色无公害育肥猪预混料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、根据配比，称取原料磷酸氢钙、碳酸钙、食盐，将磷酸氢钙、碳酸钙、食盐混合搅拌均匀得到混合物载体一，备用；

(2)、称取原料生物多糖，再根据配比将所需维生素A、维生素D3、烟酸、泛酸钙进行搅拌混合均匀，然后与步骤(1)得到的混合物载体一的0.1-50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，混合5～25分钟，得到混合物载体二；

(3)、根据配比所需嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌的有效活菌数,称取相应的菌粉，与步骤(1)得到的混合物载体一的0.1-50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，搅拌混合15～50分钟，得到混合物载体三。

(4)、再将将步骤(2)得到的混合物载体二、步骤(3)得到的混合物载体三、混合物载体一经过步骤(2)和步骤(3)的余量一起放入搅拌设备容器中，搅拌混合5～45分钟，即制得绿色无公害育肥猪预混料。

5.根据权利要求4所述的绿色无公害育肥猪预混料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、根据配比，称取原料磷酸氢钙、碳酸钙、食盐，将磷酸氢钙、碳酸钙、食盐混合搅拌均匀得到混合物载体一，备用；

(2)、称取原料生物多糖，再根据配比将所需维生素A、维生素D3、烟酸、泛酸钙进行搅拌混合均匀，然后与步骤(1)得到的混合物载体一的50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，混合5～25分钟，得到混合物载体二；

(3)、根据配比所需嗜酸乳酸菌、粪肠球菌、丁酸梭菌的有效活菌数,称取相应的菌粉，与步骤(1)得到的混合物载体一的另外50％一起放入搅拌设备容器中搅拌混合，搅拌混合15～50分钟，得到混合物载体三。

(4)、再将将步骤(2)得到的混合物载体二、步骤(3)得到的混合物载体三一起放入搅拌设备容器中，搅拌混合5～45分钟，即制得绿色无公害育肥猪预混料。

6.一种如权利要求1-3所述的绿色无公害育肥猪预混料在育肥猪生长中的应用。