CN104770575B - 一种黄芪微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄芪微生态制剂及其制备方法和应用，属于饲料添加剂和生物发酵中药技术领域。该微生态制剂，主要由黄芪、乳酸菌种子液和固体培养基发酵而成；乳酸菌种子液为屎肠球菌和植物乳杆菌按2～8：8～2的比例混合培养制得；每25～75克黄芪对应接种的乳酸菌种子液中活菌的个数为25×10⁹个，发酵后相比传统的直接将乳酸菌和黄芪混合的添加剂，本发明黄芪微生态制剂提高了粗多糖的得率和乳酸菌的数量。本发明黄芪微生态制剂的制备方法，通过选择合适的发酵温度和发酵时间，提高黄芪和乳酸菌的协同作用效果。本发明黄芪微生态制剂作为畜禽饲料添加剂。

Description

一种黄芪微生态制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于饲料添加剂和生物发酵中药技术领域，具体涉及一种微生态制剂和制备方法和应用。

背景技术

随着抗生素、激素等作为饲料添加剂的滥用，其危害性已逐渐被人们认识，因此，禁止以添加剂形式添加抗生素和激素类物质已经成为现代饲料行业的发展趋势，安全高效的微生态制剂作为饲料添加剂在畜牧业生产中将会有越来越重要的应用。微生态制剂是益生菌、益生元，以及益生菌和益生元组合物，其中益生菌和益生元的重要来源分别使乳酸菌和植物多糖，但是传统的微生态制剂是将乳酸菌和植物多糖简单组合，并没有发挥微生物发酵的巨大潜力，研究表明微生物发酵中药具有提高中药活性成分含量，提高药效和降低毒副作用等突出优点。

乳酸菌是一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的统称，是动物肠道内的常在菌，具有调节畜禽硝化到菌群平衡，提高动物免疫性能的作用，目前市场上常用的乳酸菌微生态制剂多以普通培养基培养乳酸菌，然后以液体或粉剂形式存在；黄芪是一种常用中药，主要活性物质为多糖、皂苷和总黄酮，具有提高动物机体免疫力和生产性能的作用。朱新术在《发酵黄芪的乳酸菌选育与发酵参数优化研究》中公开了乳杆菌发酵黄芪水提取物提高黄芪多糖的得率和菌体数量，并优化出发酵培养的培养基为玉米粉42.10g/L，氮源7.45g/L，胡萝卜粉0.80g/L，KH₂PO₄-K₂HPO₄ 2.18g/L，肉膏6.25g/L，发酵培养基的初始PH为6.7、发酵时间为68h、发酵温度为38℃，发酵后微生态制剂的粗多糖增率最高达到83.43％，采用该公开的发酵培养基利用乳酸菌发酵黄芪，虽然增加了粗多糖的得率，但是粗多糖增率有待进一步的提高，而且该发酵培养基成本高，并且添加使用无机磷，存在增加畜禽粪便无机磷污染的问题。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种粗多糖增率高的黄芪微生态制剂。

本发明的目的之二在于提供一种黄芪微生态制剂的制备方法。

同时，本发明还在于提供一种黄芪微生态制剂的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种黄芪微生态制剂，主要由黄芪、乳酸菌种子液和固体培养基发酵而成；其中所述乳酸菌种子液由屎肠球菌和植物乳杆菌按2～8：8～2的比例混合培养制得；每25～75克黄芪对应接种的乳酸菌种子液的活菌个数为25×10⁹个。

所述固体培养基为乳酸菌发酵过程中提供必要的氮源和碳源。

所述固体培养基由玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按质量比为玉米粉：麸皮：苹果渣：木瓜渣＝(1～4)：(1～4)：(1～4)：(1～4)组成。

为了进一步提高乳酸菌发酵黄芪的效果，提高微生态制剂中乳酸菌和粗多糖的含量，优选的，所述固体培养基由玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣等质量比组成。

所述黄芪与固体培养基的质量比为(2～1)：1。

为了进一步提高乳酸菌发酵黄芪的效果，提高微生态制剂中乳酸菌和粗多糖的含量，优选的，所述黄芪与固体培养基的质量比为2：1。

为了进一步提高乳酸菌发酵黄芪的效果，提高微生态制剂中乳酸菌和粗多糖的含量，优选的，该黄芪微生态制剂由黄芪、乳酸菌种子液、膨润土和固体培养基发酵而成；其中膨润土与固体培养基的质量比为1：1。

为了进一步提高微生态制剂中乳酸菌种子液和黄芪的互作作用效果，提高乳酸菌和粗多糖的含量，优选乳酸菌种子液由以下方法混合培养制得：将屎肠球菌和植物乳杆菌按2～8：8～2的比例接入MRS培养基，37℃～39℃厌氧培养24h～36h，即得。

所述的MRS培养基由酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得。

上述黄芪微生态制剂的制备方法，包括将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣、木瓜渣、和/或膨润土混合后，接入乳酸菌种子液，混合均匀，密封，37℃～39℃发酵培养18～30天，即得。

上述黄芪微生态制剂的制备方法，还包括将屎肠球菌和植物乳杆菌按比例计入MRS培养基，337℃～39℃厌氧培养24h～36h制得乳酸菌种子液。

上述黄芪微生态制剂的制备方法，还包括取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基。

上述黄芪微生态制剂的制备方法，还包括将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣粉碎过40目筛。使乳酸菌种子液接种基体需要具有合适的孔隙率，确保乳酸菌种子液的活性，提高乳酸菌种子液的发酵效果。

上述黄芪微生态制剂作为畜禽饲料添加剂的应用，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

本发明黄芪微生态制剂，由黄芪、乳酸菌种子液、固体培养基和/或膨润土发酵制成，通过选择乳酸菌种子液为屎肠球菌和植物乳杆菌按2～8：8～2的比例培养的菌种，并选择合适的乳酸菌接种量和黄芪的加入量，使黄芪和乳酸菌之间产生互作作用，相比传统的直接将乳酸菌和黄芪混合的添加剂，本发明黄芪微生态制剂提高了粗多糖的得率和乳酸菌的数量，粗多糖增率达到184％，高于现有的单纯的采用乳酸杆菌发酵黄芪的微生态制剂的粗多糖增率。

优选的，本发明黄芪微生态制剂所用的固体培养基为玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按比例组成的培养基，使用农业废渣为原料，如苹果渣和木瓜渣，变废为宝，降低成本，并且不使用无机磷，使该微生态制剂作为饲料添加剂时，降低畜禽粪便中无机磷的含量，降低无机磷对环境的污染。

本发明黄芪微生态制剂的制备方法，通过选择合适的发酵温度和发酵时间，提高制备的微生态制剂中粗多糖和乳酸菌含量，提高黄芪和乳酸菌的互作作用效果，操作简便，易于控制，适于工业化推广应用。

本发明黄芪微生态制剂作为畜禽饲料添加剂，利用屎肠球菌和植物乳杆菌复配的乳酸菌在合适的固体发酵培养基中发酵黄芪，使黄芪和乳酸菌产生协同增效作用，增加黄芪粗多糖含量和乳酸菌活菌量，使该微生态制剂添加于畜禽饲料中，提高动物生产性能、消化率和机体免疫力。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

下述实施例中植物乳杆菌和屎肠球菌均购自中国普通微生物菌种保藏中心；植物乳杆菌的CGMCC编号为1.557；屎肠球菌的CGMCC编号为1.130。

实施例1

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按5：5比例接入MRS培养基，37℃厌氧培养24h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按等质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪25g、固体培养基25g和膨润土50g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，37℃发酵18天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

实施例2

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按5：5比例接入MRS培养基，38℃厌氧培养30h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按等质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪50g、固体培养基25g和膨润土25g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，38℃发酵25天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

实施例3

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按5：5比例接入MRS培养基，39℃厌氧培养36h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按等质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪75g、固体培养基25g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，39℃发酵30天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

实施例4

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按2：8比例接入MRS培养基，37℃厌氧培养24h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按4：2：3：1质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪50g、固体培养基25g和膨润土25g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，37℃发酵18天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

实施例5

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按8：2比例接入MRS培养基，37℃厌氧培养24h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按2：4：1：3质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪50g、固体培养基25g和膨润土25g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，37℃发酵18天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

实施例6

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按6：4比例接入MRS培养基，37℃厌氧培养24h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按3：2：4：2质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪50g、固体培养基25g和膨润土25g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，37℃发酵18天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

实施例7

本实施例黄芪微生态制剂，由以下方法制备而得，具体操作步骤为：

1)原料预处理：

A：将黄芪、玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣，粉碎过40目筛；

B：制备乳酸菌种子液：取酪蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏8g、葡萄糖5g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、Tween-80 1g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、水1000mL，调pH为6.8，高压灭菌制得MRS培养基，将屎肠球菌与植物乳杆菌按4：6比例接入MRS培养基，37℃厌氧培养24h，即得；

C：取玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按1：3：2：4质量比混合制成固体培养基；

2)发酵黄芪：将步骤A粉碎过筛后的黄芪50g、固体培养基25g和膨润土25g混合后，接入步骤B制备的乳酸菌种子液，接种的活菌个数为25×10⁹个，混合均匀后密封，37℃发酵18天，即得。

本实施例制备的黄芪微生态制剂可作为畜禽饲料添加剂，畜禽饲料中黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4％～0.6％。

对比例1

本对比例的黄芪微生态制剂由黄芪50g，接入活菌数量为25×10⁹个的乳酸菌种子液，密封，37℃培养18天制得；其中乳酸菌种子液同实施例2。

对比例2

本对比例的黄芪微生态制剂不接入乳酸菌种子液，其他具体操作步骤和原料及用量同实施例2。

对比例3

本对比例的黄芪微生态制剂采用接入活菌数量为25×10⁹个的植物乳杆菌发酵黄芪，具体操作步骤和原料及用量同实施例2。

对比例4

本对比例的黄芪微生态制剂采用接入活菌数量为25×10⁹个的屎肠球菌发酵黄芪，具体操作步骤和原料及用量同实施例2。

试验例

1、分别检测实施例1～7和对比例1、3、4制备的黄芪微生态制剂发酵18天中乳酸菌含量，结果如下表1所示；检测方法为：称取25g微生态制剂，置于装有225mL生理盐水的无菌三角瓶内，150r/min摇床摇30min，制成1：10的样品匀液；然后吸取1mL样品匀液注入装有9mL生理盐水的无菌试管中，混匀，制成1:100的样品匀液。按照上述操作顺序，依次倍比稀释到适宜浓度。选择3个连续的适宜稀释度，每个稀释度取0.1mL样品稀释液，分别置于2个MRS琼脂平板上，涂布均匀，37℃，厌氧培养48h，对平板上的所有菌落进行计数。然后根据公式：每克样品中菌落数＝平板上菌落数×稀释倍数/平板中菌液添加量来计算微生态制剂中细菌总数。

表1 实施例1～7和对比例1、3、4制备的黄芪微生态制剂中乳酸菌含量变化

由表1显示的数据可知：实施例1～7制备的微生态制剂中乳酸菌的数量均高于对比例1，表明发酵过程中乳酸菌中黄芪之间存在互作作用，促进乳酸菌的增值，提高乳酸菌的活菌个数；对比实施例1、实施例2、实施例3发酵后乳酸菌活菌个数实施例2＞实施例3＞实施例1，表明黄芪的添加量对发酵结果具有影响作用，当黄芪的加入量为50％时(实施例3中黄芪50g、固体培养基25g、膨润土25g，黄芪的加入量为50％)，发酵72h，乳酸菌的活菌数最大达到9.8×10⁹；相比对比例1中将黄芪和乳酸菌种直接混合，实施例1～3发酵后的乳酸菌含量均大于对比例1，表明发酵过程中乳酸菌和黄芪之间存在协同提高乳酸菌含量的作用；相比对比例3和对比例4中采用单一的乳酸菌发酵，实施例1～3发酵后的乳酸菌含量均高于对比例3和对比例4，表明采用本发明选择的屎肠球菌和植物乳杆菌复配的乳酸菌种的发酵效果均由于单一的屎肠球菌和单一的植物乳酸杆菌，表明在发酵过程中屎肠球菌和植物乳杆菌复配的乳酸菌种具有协同提高发酵效果，增加乳酸菌含量的作用。

2、分别检测实施例1～7和对比例1～4制备的黄芪微生态制剂发酵18天中黄芪粗多糖的含量，结果如下表2所示；检测方法为：按照硫酸苯酚法测定多糖，取试样，加8倍水水煮，不断搅拌，水提1h，过滤。滤渣加8倍水水提，重复两次，合并三次滤液。滤液4000r/min离心15min，弃沉淀，上清液浓缩至料水比为1：2。取浓缩液，加3倍95％乙醇，静置过夜，4000r/min离心20min，回收乙醇，沉淀即为粗多糖。取沉淀置于电热鼓风干燥箱60℃烘干，称重。研成粉末后，取适量，用蒸馏水稀释后供多糖测定，具体的测定方法为：

A：葡萄糖标准溶液的配制

取适量葡萄糖，105℃烘干至恒重，精密称取200mg，用蒸馏水溶解定容到100mL容量瓶，配得浓度为2mg/mL的葡萄糖溶液。取上葡萄糖溶液2mL，用蒸馏水定容到50mL容量瓶，得0.08mg/mL葡萄糖标准溶液。

B：葡萄糖标准曲线的制备

分别吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL葡萄糖标准溶液于标有编号的洁净试管中，每管分别加蒸馏水至2mL，摇匀。分别加5％的苯酚溶液1mL，摇匀。再迅速加入5mL浓硫酸，摇匀。温室下静置10min，然后沸水浴15min，再冰浴冷却至室温。用紫外-可见分光光度计在490nm波长下测吸光度，以葡萄糖浓度作为横坐标(x)，吸光度为纵坐标(y)，绘制葡萄糖标准曲线。

C：取4个带塞的干净试管，蒸馏水作为空白对照，其余3管加试样，分别吸取2mL，按上操作处理，测吸光度。用3个试管的吸光度求平均值，从标准曲线上查出相应的多糖浓度。以下公式计算多糖含量。

公式中：W——多糖的含量；

C——标准曲线中计算的多糖浓度；

V——试样稀释的体积

M——样品的质量；

表2 实施例1～7和对比例1～4制备的黄芪微生态制剂中黄芪粗多糖的含量变化

由表2显示的数据可知：相比对比例1，实施例1～7制备的微生态制剂中黄芪粗多糖得率均有所增加，表明发酵过程中乳酸杆菌和屎肠球菌对黄芪多糖具有明显的促进效果；相比对比例3和对比例4，实施例1～3发酵后的黄芪多糖得率均大于对比例3和对比例4，表明采用屎肠球菌和植物乳杆菌复配发酵黄芪的效果均由于采用单一的屎肠球菌和单一的植物乳杆菌，表明屎肠球菌和植物乳杆菌复配发酵具有协同提高发酵效果，增加发酵后黄芪多糖含量的效果。对比例实施例1～3，当黄芪添加比例为50％时(实施例2)，发酵9d，黄芪粗多糖的得率最高，达到7.31％，相比对比例1，实施例2粗多糖增率达到160％，相比对比例2，实施例2粗多糖增率达到184％，相比对比例3，实施例2粗多糖增率达到153％，相比对比例4，实施例2粗多糖增率达到151％。

3、发酵黄芪制剂在断奶仔猪上的应用

试验在河南省洛阳市孟津县农鑫养殖场进行，选择体重相近的35(±3)日龄“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪。试验在同一个密闭保育舍内进行，自由采食，自由饮水，驱虫和免疫按猪场正常程序进行。本试验采用单因子设计，将160头断奶仔猪随机分成五个组，每组4个重复，每个重复8头猪。对照组使用基础日粮加硫酸粘杆菌素，试验组为A、B、C、D组，分别添加0.2％、0.4％、0.6％、0.8％实施例2制备的黄芪微生态制剂(其中的添加量表示饲料中含有的添加剂的质量百分含量)。具体分组如表3。

表3 仔猪试验分组情况

测试指标：

平均日采食量：根据每天记录的耗料量计算平均日采食量。

平均日增重：分别在试验的第1天、第14天、第28天早上对各组仔猪空腹称重，以计算不同阶段的平均日增重。料肉比＝阶段耗料量/阶段增重

血样采集：分别在试验第14天、第28天上午8:00，从每个重复随机选取2头仔猪前腔静脉采血6mL，10000r/min离心5min，收集血清，EP管-20℃冻存，用于测定血清中IgG、IgA的含量。IgG、IgA的测定方法按试剂盒说明书操作。

测试结果：(1)黄芪微生态制剂对1-28d断奶仔猪生长性能的影响见表4。

表4 黄芪微生态制剂对1～28d断奶仔猪生长性能的影响

生长性能指标	对照组	A组	B组	C组	D组
						平均日采食量/g	763±14c	764±18c	798±16b	856±18a	841±10a
平均日增重/g	393±12c	391±8c	436±13b	471±11a	460±10a
						料肉比	1.94±0.03a	1.95±0.02a	1.83±0.04b	1.82±0.04b	1.83±0.03b

注：同行标注小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同行无标注或小写字母相同表示不差异显著(P>0.05)。

从表4中可以看出，B组、C组和D组平均日采食量较对照组分别提高了4.6％(P<0.05)、12.2％(P<0.05)、10.2％(P<0.05)，而A组与对照组差异不显著(P>0.05)；C组和D组的采食量与A组、B组差异都显著(P<0.05)，两组之间差异不显著(P>0.05)，B组与A组差异显著(P<0.05)。对于平均日增重，B组、C组和D组比对照组分别提高了10.9％(P<0.05)、19.8％(P<0.05)、17.0％(P<0.05)；A组日增重低于对照组，差异不显著(P>0.05)，C组和D组较A组、B组差异显著(P<0.05)，B组较A组显著(P<0.05)，C组和D组之间不显著(P>0.05)。料肉比方面，B组、C组、D组较对照组差异显著，同时和A组差异显著，A组料肉比稍高于对照组，差异不显著，B组、C组、D组组间差异不显著。从整个试验期的生长性能指标来看，与添加抗生素相比，在饲料中添加0.4％、0.6％、0.8％的发酵黄芪能明显提高断奶仔猪的采食量和日增重，降低料肉比，其中0.6％和0.8％的添加量效果好于添加0.4％，但两组间的效果差别不大，而添加0.2％发酵黄芪，生长性能稍低于抗生素对照组，综合考虑，添加0.6％最适宜。(2)黄芪微生态制剂对断奶仔猪血清免疫球蛋白的影响

A：黄芪微生态制剂对断奶仔猪血清IgG的影响见表5。

表5 黄芪微生态制剂对断奶仔猪血清IgG的影响

免疫指标	对照组	A组	B组	C组	D组
						14d	2.124±0.080c	2.173±0.093c	2.434±0.116b	2.847±0.062a	2.865±0.123a
28d	3.312±0.186c	3.251±0.139c	3.856±0.148b	4.311±0.132a	4.243±0.174a

注：同行标注小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同行无标注或小写字母相同表示不差异显著(P>0.05)。

从表5中可以看出，在14d，与对照组相比，各试验组发酵黄芪均能提高仔猪血清IgG的含量，其中B组、C组、D组与对照组差异显著(P<0.05)，但A组与对照组差异不显著(P>0.05)，C组和D组较A组和B组差异显著(P<0.05)，C组和D组差异不显著(P>0.05)，B组比A组差异显著(P<0.05)。在28天，可以看出C组血清IgG含量最高，较对照组提高了30.2％(P<0.05)；B组和D组血清IgG比对照组也有一定程度的提高，差异显著(P<0.05)；A组血清IgG略低于对照组，但差异不显著(P>0.05)；C组和D组血清IgG与A组、B组差异显著(P<0.05)，两组间差异不显著(P>0.05)，B组和A组差异显著(P<0.05)。从整体上看，较对照组，发酵黄芪添加量增加时，断奶仔猪血清IgG的含量随之增加，前期D组最高，后期C组最高，综合考虑添加0.6％更合适。

B：黄芪微生态制剂对断奶仔猪血清IgA的影响见表6。

表6 黄芪微生态制剂对断奶仔猪血清IgA的影响

免疫指标	对照组	A组	B组	C组	D组
						14d	0.311±0.025b	0.305±0.030b	0.386±0.021a	0.422±0.033a	0.408±0.017a
28d	0.402±0.018b	0.424±0.016b	0.465±0.011a	0.491±0.024a	0.477±0.019a

注：同行标注小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同行无标注或小写字母相同表示不差异显著(P>0.05)。

从表6中可以看出，在14d，B组、C组、D组血清IgA含量较对照组分别提高了24.1％(P<0.05)、35.7％(P<0.05)、31.2％(P<0.05)；A组低于对照组，但差异不显著(P>0.05)；B组、C组和D组与A组差异显著(P<0.05)，三组间差异不显著(P>0.05)。在28天，各试验组血清IgA含量较对照组分别提高了5.5％(P>0.05)、15.7％(P<0.05)、22.1％(P<0.05)、18.6％(P<0.05)，同时B组、C组和D组与A组差异显著(P<0.05)，三组间差异不显著(P>0.05)。总体来看，与对照组相比，发酵黄芪的不同添加量均能提高断奶仔猪血清IgA的含量，其中C组效果最明显。

实施例1、3、4、5、6、7制备的黄芪微生态制剂作为畜禽添加剂的应用效果同实施例2。

Claims (8)

1.一种黄芪微生态制剂，其特征在于，主要由黄芪、乳酸菌种子液和固体培养基发酵而成；其中所述乳酸菌种子液由屎肠球菌和植物乳杆菌按（2~8）：（8~2）的比例混合培养制得；每25~75克黄芪对应接种的乳酸菌种子液的活菌个数为25×10⁹个；所述固体培养基由玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按质量比为玉米粉：麸皮：苹果渣：木瓜渣=（1~4）：（1~4）：（1~4）：（1~4）组成；所述黄芪与固体培养基的质量比为（2~1）：1。

2.如权利要求1所述的黄芪微生态制剂，其特征在于，所述固体培养基由玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣按质量比玉米粉：麸皮：苹果渣：木瓜渣=1：1：1：1组成。

3.如权利要求1所述的黄芪微生态制剂，其特征在于，所述黄芪与固体培养基的质量比为2：1。

4.如权利要求1所述的黄芪微生态制剂，其特征在于，由黄芪、乳酸菌种子液、膨润土和固体培养基发酵而成；其中膨润土与固体培养基的质量比为1：1。

5.如权利要求1或4所述的黄芪微生态制剂，其特征在于，所述乳酸菌种子液由以下方法混合培养制得：将屎肠球菌和植物乳杆菌按（2~8）：（8~2）的比例接入MRS培养基，37℃~39℃厌氧培养24h~36h，即得。

6.一种如权利要求1或4所述的黄芪微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括将黄芪、固体培养基混合后，接入乳酸菌种子液，混合均匀，密封，37~39℃发酵培养18~30天，即得；

或将黄芪、固体培养基、膨润土混合后，接入乳酸菌种子液，混合均匀，密封，37~39℃发酵培养18~30天，即得。

7.如权利要求6所述的黄芪微生态制剂的制备方法，其特征在于，还包括将黄芪粉碎过40目筛；将固体培养基的原料玉米粉、麸皮、苹果渣和木瓜渣粉碎过40目筛。

8.一种如权利要求1或4所述的黄芪微生态制剂作为畜禽饲料添加剂的应用，其特征在于，畜禽饲料中所述黄芪微生态制剂的质量百分含量为0.4%~0.6%。