CN107635553B

CN107635553B - 作为激酶抑制剂的嘧啶衍生物和它们的治疗应用

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Publication number: CN107635553B
Application number: CN201680018774.4A
Authority: CN
Inventors: 陶春林; 王庆伟; L·纳兰; D·霍; T·波拉特; F·阿普; P·温加腾
Original assignee: Changshan Kaijiejian Biological Drug R & D Hebei Co ltd
Current assignee: Changshan Kaijiejian Biological Drug R & D Hebei Co ltd
Priority date: 2015-02-27
Filing date: 2016-02-29
Publication date: 2020-08-14
Anticipated expiration: 2036-02-29
Also published as: RU2017133419A3; ES2746007T3; IL254152B; EP3261637A4; WO2016138527A1; RU2017133419A; EP3261637A1; RU2701188C2; CA2977764C; JP6442071B2; EP3261638B1; HK1248601A1; EP3261637B1; AU2016224969A1; RU2718915C2; BR112017018183A2; CN107708690A; JP6444525B2; AU2015383881A1; EP3261638A1

Abstract

本发明提供了具有抗增殖活性的激酶抑制剂，其包括取代的嘧啶衍生物及其药学上可接受的制剂。此外，本发明提供了制备新化合物的方法和使用所述化合物的方法。

Description

作为激酶抑制剂的嘧啶衍生物和它们的治疗应用

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年2月27日提交的PCT/US2015/018085的权益，通过引用将其以全文引入。

关于联邦资助的研究与开发的声明

本发明没有政府支持而完成。

电子方式提交的材料的援引加入

无

关于发明人或共同发明人的在先公开的声明

不存在本发明的在先公开。

发明领域

本发明一般地涉及化合物治疗多种障碍、疾病和病理学病症中的用途，并且更具体地涉及取代的嘧啶衍生物用于调节蛋白激酶和治疗蛋白激酶介导的疾病中的用途。

发明背景

蛋白激酶组成结构上相关的蛋白质的酶的大家族，所述酶负责控制真核细胞内的多种信号转导通路。包含类似的250-300氨基酸催化结构域的蛋白激酶催化靶蛋白底物的磷酸化。蛋白激酶本身是最有希望的小分子药物靶标之一。

可以通过在磷酸化中的底物(例如，蛋白-酪氨酸、蛋白-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)将激酶分类为多个家族。酪氨酸磷酸化是调节多种生物过程如细胞增殖、迁移、分化和存活中的中心事件。受体和非受体酪氨酸激酶的几个家族通过催化将磷酸盐从ATP转移至特定的细胞蛋白质靶点的酪氨酸残基来控制这些事件。已经确定序列基序，其一般相当于这些激酶家族中的每一个[Hanks等，FASEB J.，(1995)，9，576-596；Knighton 等，Science，(1991)，253，407-414；Garcia-Bustos等，EMBO J.，(1994)， 13:2352-2361)。蛋白激酶中的激酶的实例包括(但是不限定于)：abl、Akt、 bcr-abl、Blk、Brk、Btk、c-kit、c-Met、c-src、c-fms、CDK1、CDK2、 CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、cRaf1、 CSF1R、CSK、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4、Erk、Fak、fes、FGFR1、 FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR5、Fgr、flt-1、Fps、Frk、Fyn、Hck、 IGF-1R、INS-R、Jak、KDR、Lck、Lyn、MEK、p38、PDGFR、PIK、 PKC、PYK2、ros、Tie、Tie-2、TRK、Yes和Zap70。

研究表明蛋白激酶在调节和维持多种多样的细胞过程中起中心作用。例如，激酶活性起调节细胞增殖、激活和/或分化的分子的开关的作用。在很多疾病状态中已经观察到不受控制的或过度的激酶活性(无论是来自突变型激酶还是野生型激酶)，所述疾病状态包括良性和恶性的增殖障碍以及由免疫***的不适当的激活(自身免疫性障碍)、同种异体移植排斥和移植物抗宿主病产生的疾病。

已经报道许多疾病与由蛋白激酶介导的事件触发的不正常的细胞应答有关。这些疾病包括自身免疫性疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢疾病、神经***和神经变性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘症、阿尔茨海默病和激素相关的疾病。另外，内皮细胞特异性受体PTKs(如 VEGF-2和Tie-2)介导血管生成过程并参与支持癌症的发展和包括不受控制的血管化的其他疾病的发展。因此，在药物化学中已作出实质努力来寻找作为治疗剂有效的蛋白激酶抑制剂。

许多癌症特征在于导致癌细胞不受控制的增长和增殖的细胞的发信号途径的中断。受体酪氨酸激酶(RTKs)在这些将胞外的分子信号传送至细胞的细胞质和/或细胞核中的发信号途径中起关键性的作用。RTKs为跨膜蛋白，其一般包含胞外的配体结合结构域、跨膜结构域和催化胞质酪氨酸激酶结构域。配体结合至胞外的部分被认为促进二聚作用，导致反式-磷酸化作用和激活胞内酪氨酸激酶结构域(Schlessinger等Neuron 1992；9:383-391)。

考虑到缺乏当前可用的用于与蛋白激酶有关的绝大多数病症的治疗选择，对抑制蛋白激酶的新的治疗剂仍然有巨大需要。尤其是存在对还是非毒性且对某些蛋白激酶特异性的高活性激酶抑制剂的需要。

发明简述

下式的化合物或其药学上可接受的盐

其中：

W选自：F、Cl、Br、I、CN、C₁-C₄烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、CF₃、CF₂H、CFH₂、C₂-C₆炔基、CON(R1)R2。

R1和R2表示氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、芳基、芳基烷基。

Ar表示杂芳基或芳基，其每一个被0至4个取代基取代，所述取代基独立地选自：

(1)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO₂NH₂、氧代、硝基和烷氧羰基；和

(2)NR1

(3)式(Ia)的基团：

其中：

R₄表示氢、C₁-C₄烷基、氧代；

当R₃为氢时，X为CH；或X-R₃为O；或X为N，R₃表示以下基团：氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₁₀芳基或杂芳基、(C₃-C₇环烷基)C₁-C₄烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷硫基、C₂-C₆烷酰基、C₁-C₆烷氧羰基、C₂-C₆烷酰氧基、单-和二-(C₃-C₈环烷基)氨基 C₀-C₄烷基、(4-至7-元杂环)C₀-C₄烷基、C₁-C₆烷基磺酰基、单-和二-(C₁-C₆烷基)磺酰氨基以及单-和二-(C₁-C₆烷基)氨基羰基，其每一个被0至4个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、-COOH 和氧代。

吲哚上的取代基为如下：R₅和R₆独立地选自：氢、F、Cl、Br、CN、 C₁-C₄烷基、C₁-C₆烷氧基。

R₇、R₈和R₉独立地选自氢、C₁-C₄烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、 C₃-C₁₀芳基或杂芳基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷硫基、C₂-C₆烷酰基、C₁-C₆烷氧羰基、C₂-C₆烷酰氧基。

药物组合物，其包含至少一种权利要求I的化合物或它的药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、晶体形式盐及其单独的非对映异构体，以及药学上可接受的载体。

因此，本发明的目的在于提供包含式(I)中描述的取代的嘧啶衍生物的抗肿瘤剂，其药学上可接受的制剂，制备新化合物的方法和使用所述化合物的组合物。所述化合物和包含式(I)中的化合物的组合物具有治疗各种疾病的效用。

可以通过制备式(I)的取代的嘧啶衍生物和其它治疗剂作为单独的药物制剂，然后同时、半同时、单独或经过定期间隔将其向患者施用来提供本文中所描述的组合疗法。

本发明提供了使用某些化合物如激酶抑制剂治疗各种疾病、障碍和病理，例如癌症和血管障碍如心肌梗死(MI)、中风或缺血的方法。本发明中描述的化合物除阻断其它受体和非受体激酶的活性之外，还可以阻断一些或许多FGFR激酶家族成员的酶活性。

附图简述

图1描述了化合物19的剂量响应曲线。

图2描述了化合物19的抗肿瘤活性。

图3描述了化合物19在大鼠中基于体重损失的毒性。

发明详述

本发明涉及具有通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐

其中：

W选自：F、Cl、Br、I、CN、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6 烯基、CF3、CF2H、CFH2、C2-C6炔基、CON(R1)R2。

(2)NR1

(3)式(Ia)的基团：

下式的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

1.R1和R2表示氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、芳基、芳基烷基。

2.Ar表示杂芳基或芳基，其每一个被0至4个取代基取代，所述取代基独立地选自：

(2)NR1

(3)式(Ia)的基团：

其中：

R₄表示氢、C₁-C₄烷基、氧代；

3.吲哚上的取代基为如下：

R₅和R₆独立地选自：氢、F、Cl、Br、CN、C₁-C₄烷基、C₁-C₆烷氧基。

4.R₇、R₈和R₉独立地选自氢、C₁-C₄烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、 C₃-C₁₀芳基或杂芳基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷硫基、C₂-C₆烷酰基、C₁-C₆烷氧羰基、C₂-C₆烷酰氧基。

5.药物组合物，其包含至少一种权利要求I的化合物或它的药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、晶体形式盐及其单独的非对映异构体，以及药学上可接受的载体。

其中：

R₄表示氢、C₁-C₄烷基、氧代；

当R₃为氢时X为CH；或X-R₃为O；或X为N，R₃表示以下基团：氢、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₁₀芳基或杂芳基、(C₃-C₇环烷基)C₁-C₄烷基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷硫基、C₂-C₆烷酰基、C₁-C₆烷氧羰基、C₂-C₆烷酰氧基、单-和二-(C₃-C₈环烷基)氨基 C₀-C₄烷基、(4-至7-元杂环)C₀-C₄烷基、C₁-C₆烷基磺酰基、单-和二-(C₁-C₆烷基)磺酰氨基以及单-和二-(C₁-C₆烷基)氨基羰基，其每一个被0至4个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、-COOH 和氧代。

术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

除非另有指明，否则术语“烷基”在本文中单独或作为另一基团的一部分是指包含1至12个碳原子的一价的烷烃(烃)衍生的基团。烷基可以在任意可用的连接点处被取代。被另一烷基取代的烷基也被称为“支链烷基”。示例性烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、二甲基戊基、辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。示例性取代基包括但不限于以下基团的一个或多个：烷基、芳基、卤代(如F、Cl、Br、I)，卤代烷基(如CCl₃或CF₃)、烷氧基、烷硫基、羟基、羧基(-COOH)、烷氧羰基(-C(O)R)、烷基羰氧基(-OCOR)、氨基(-NH₂)、氨基甲酰基 (-NHCOOR-或-OCONHR-)、脲(-NHCONHR-)或硫醇(-SH)。在本发明的一些优选的实施方案中，烷基被例如氨基，杂环烷基如吗啉、哌嗪、哌啶、氮杂环丁烷，羟基，甲氧基或杂芳基如吡咯烷取代。

术语“环烷基”在本文中单独或作为另一基团的一部分是指具有3 至9个，优选3至7个碳原子的完全饱和的和部分不饱和的烃环。实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基等。此外，环烷基可以被取代。取代的环烷基是指具有选自以下的一个、两个或三个取代基的这样的环：卤代、烷基、取代的烷基、烯基、炔基、硝基、氰基、氧代(＝O)、羟基、烷氧基、硫代烷基、-CO₂H、-C(＝O)H、CO₂-烷基、-C(＝O)烷基、酮、＝N-OH、＝N-O-烷基、芳基、杂芳基、杂环、-NR'R"、-C(＝O)NR'R"、 -CO₂NR'R"、-C(＝O)NR'R"、-NR'CO₂R"、-NR'C(＝O)R"、-SO₂NR'R" 和-NR'SO₂R"，其中R'和R"的每一个独立地选自氢、烷基、取代的烷基和环烷基，或R'和R"一起形成杂环或杂芳基环。

术语“烯基”在本文中单独或作为另一基团的一部分是指直链、支链或环状的包含2至12个碳原子和至少一个碳碳双键的烃基。这样的基团的实例包括乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、 1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-庚烯基等。烯基还可以在任意可用的连接点处被取代。烯基的示例性取代基包括上文对烷基列出的那些，并且特别包括C3至C7环烷基如环丙基、环戊基和环己基，其可以另外被例如氨基、氧代、羟基等取代。

术语“炔基”是指直链或支链炔基团，其具有一个或多个不饱和碳碳键，它们的至少一个是三键。炔基包括C2-C8炔基、C₂-C₆炔基和C₂-C₄炔基，它们分别具有2至8个、2至6个或2至4个碳原子。示例性炔基包括乙炔基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、戊烯基和己烯基。炔基还可以在任意可用的连接点处被取代。炔基的示例性取代基包括上文对烷基列出的那些，如氨基、烷基氨基等。在符号“C”之后的下标中的数字限定了特定基团可以包含的碳原子的数量。

术语“烷氧基”单独或作为另一基团的一部分表示通过氧连接基(-O-) 键合的上述烷基。优选的烷氧基具有1至8个碳原子。这样的基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、正己氧基、环己氧基、正庚氧基、正辛氧基和2-乙基己氧基。

术语“烷硫基”是指经由硫桥连接的上述烷基。优选的烷氧基和烷硫基是其中经由杂原子桥连接烷基的那些。优选的烷硫基具有1至8个碳原子。这样的基团的实例包括甲硫基、乙硫基、正丙硫基、正丁硫基等。

本文中所使用的术语“氧代”是指酮(C＝O)基团。作为非芳族碳原子的取代基的氧代基团导致-CH₂-转变成-C(＝O)-。

本文中单独或作为另一基团的一部分使用的术语“烷氧羰基”表示通过羰基键合的烷氧基。烷氧羰基通过式：-C(O)OR表示，其中R基团为直链或支链C₁-C₆烷基、环烷基、芳基或杂芳基。

本文中单独或作为另一基团的一部分使用的术语“芳基烷基”表示通过如上文描述的通过烷基键合的芳环(如苄基)。

本文中单独或作为另一基团的一部分使用的术语“芳基”是指单环或双环芳环，例如苯基、取代的苯基等，以及稠合的基团，例如萘基、菲基等。芳基因此包含至少一个具有至少6个碳原子的环，其中存在至多五个这样的环，其中包含至多20个原子，其中双键在相邻的碳原子或合适的杂原子之间交替(共振)。芳基可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于卤素如I、Br、F或Cl；烷基如甲基、乙基、丙基；烷氧基如甲氧基或乙氧基，羟基，羧基，氨基甲酰基，烷氧羰基，硝基，烯氧基，三氟甲基，氨基，环烷基，芳基，杂芳基，氰基，烷基 S(O)m(m＝0、1、2)或巯基。

术语“芳(族)”是指环状共轭的分子实体，其由于离域而具有明显大于假设定域的结构如凯库勒结构的稳定性。

本文中单独或作为另一基团的一部分使用的术语“氨基”是指-NH₂。 “氨基”可以任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基可以相同或不同，如烷基、芳基、芳基烷基、烯基、炔基、杂芳基、杂芳基烷基、环杂烷基、环杂烷基烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、硫烷基、羰基或羧基。这些取代基可以进一步被羧酸、在本文中列出的任意烷基或芳基取代基取代。在一些实施方案中，氨基被羧基或羰基取代，以形成N-酰基或N-氨基甲酰基衍生物。

术语“烷基磺酰基”是指式(SO₂)-烷基的基团，其中硫原子是连接点。优选地，烷基磺酰基包括C₁-C₆烷基磺酰基，其具有1至6个碳原子。甲基磺酰基是一个代表性烷基磺酰基。

术语“杂原子”是指不同于碳的任意原子，例如N、O或S。

本文中单独或作为另一基团的一部分使用的术语“杂芳基”是指取代的或未取代的芳族5或6元单环基团、9或10元双环基团和11至14 元三环基团，其在所述环之一中具有至少一个杂原子(O、S或N)。包含杂原子的杂芳基的每个环可以包含一个或两个氧或硫原子和/或一个至四个氮原子，条件是在每个环中的杂原子总数为四个以下和每个环具有至少一个碳原子。

本文中单独或作为另一基团的一部分使用的术语“杂环”或“杂环烷基”是指其中所述环中的碳原子之一被选自O、S或N的杂原子替代的环烷基(非芳族)。所述“杂环”具有1至3个稠合的、侧接的或螺环，所述环的至少一个为杂环(即一个或多个环原子为杂原子，其中剩余的环原子为碳)。杂环可以任选地被取代，这意味着杂环可以在一个或多个可取代的环位置处被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自烷基(优选低级烷基)、杂环烷基、杂芳基、烷氧基(优选低级烷氧基)、硝基、单烷基氨基(优选低级烷基氨基)、二烷基氨基(优选烷基氨基)、氰基、卤代、卤代烷基(优选三氟甲基)、烷酰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基酰氨基(优选低级烷基酰氨基)、烷氧基烷基(优选低级烷氧基；低级烷基)、烷氧羰基(优选低级烷氧羰基)、烷基羰氧基(优选低级烷基羰氧基)和芳基(优选苯基)，所述芳基任选地被卤代、低级烷基和低级烷氧基取代。杂环基团通常可以经由任意环或取代基原子连接，条件是产生稳定的化合物。N-连接的杂环基团经由组成部分氮原子连接。

典型地，杂环包括1-4杂原子；在某些实施方案之内，每个杂环每个环具有1或2个杂原子。每个杂环通常含有3至8环成员(在某些实施方案中记载了至7个环成员的环)和包括稠合的、侧接的或螺环的杂环典型地包含9至14个环成员，其由碳原子组成并且包含一个、两个或三个选自氮、氧和/或硫的杂原子。

“杂环”或“杂环烷基”的实例包括哌嗪、哌啶、吗啉、硫代吗啉、吡咯烷、咪唑烷和噻唑烷。

本文中所使用的术语“取代基”是指共价地键合至感兴趣的分子内的原子的分子结构部分。例如，“环取代基”可以为结构部分如卤素、烷基、卤代烷基或本文中讨论的其它基团，其共价地键合至作为环成员的原子(优选碳或氮原子)。

术语“任选取代的”是指芳基或杂环基或其它基团可以在一个或多个可取代位置处被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自烷基(优选低级烷基)、烷氧基(优选低级烷氧基)、硝基、单烷基氨基(优选具有一个至六个碳)、二烷基氨基(优选具有一个至六个碳)、氰基、卤代、卤代烷基(优选三氟甲基)、烷酰基、氨基羰基、单烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基酰氨基(优选低级烷基酰氨基)、烷氧基烷基(优选低级烷氧基和低级烷基)、烷氧羰基(优选低级烷氧羰基)、烷基羰氧基(优选低级烷基羰氧基)和芳基(优选苯基)，所述芳基任选地被卤代、低级烷基和低级烷氧基取代。任选的取代还由短语“被0至X个取代基取代”表明，其中X 为可能的取代基的最大数量。某些任选取代的基团被0至2、3或4个独立地选择的取代基取代。

不在两个字母或符号之间的破折号("-")用于表明取代基的连接点。例如-CONH₂通过碳原子连接。

位于杂环状环内的虚线的环用于表明共轭体系。两个原子之间的键可以为单键或双键。术语“激酶”是指催化磷酸根基团到蛋白质残基的加成的任意酶；例如丝氨酸和苏氨酸激酶催化磷酸根基团到丝氨酸和苏氨酸残基的加成。

术语“治疗有效量”是指将会引起研究者、兽医、医师或其它临床医生所寻求的组织、***、动物或人的生物学或医学响应(例如复原或维持血管瘀滞或防止妥协或损失或血管瘀滞；减少肿瘤负担；降低发病率和/或死亡率)的化合物或药物组合物的量。

术语“药学上可接受的”是指这样的事实：载体、稀释剂或赋形剂与制剂的其它成分相容并且对其接受者无害。

术语“给予化合物”或“将化合物给药”是指将本发明的化合物或药学组合物提供给需要治疗的受试者的行动。

术语“保护的”是指基团处于经修饰的形式以防止在经保护的位点处的不期望的副反应。将会由本申请考虑到本领域的技术水平并且参考标准教科书如Greene,T.W.等人，Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York(1999)而识别出本发明的化合物的合适的保护基团。

本文中记载的化合物的术语“药学上可接受的盐”是酸或碱盐，其适合于与人类或动物的组织接触使用而没有过度的毒性或致癌性，并且优选没有刺激性、***反应或其它问题或并发症。这样的盐包括碱性残基如胺的无机或有机酸盐，以及酸性残基如羧酸的碱金属或有机盐。具体的药学上的盐包括但不限于酸的盐，所述酸如盐酸、磷酸、氢溴酸、苹果酸、羟乙酸、富马酸、硫酸、氨基磺酸、磺胺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、乙烷二磺酸、2-羟乙基磺酸、硝酸、苯甲酸、2-乙酰氧苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂酸、水杨酸、谷氨酸、抗坏血酸、双羟萘酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙酸、羟基马来酸、氢碘酸、苯乙酸、链烷酸如乙酸，HOOC-(CH₂)n-COOH，其中n为0-4等。类似地，药学上可接受的阳离子包括但不限于，钠、钾、钙、铝、锂和铵。本领域普通技术人员将会识别出本文中提供的化合物的另外的药学上可接受的盐。通常，可以通过任意常规的化学方法从包含碱性或酸性结构部分的母体化合物合成药学上可接受的酸或碱盐。简而言之，这样的盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常优选使用非水性介质，如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。将显而易见的是，每个式I的化合物可以，但不必被配制成水合物、溶剂合物或非共价络合物。此外，各种晶体形式和多晶型在本发明的范围内。本文中还提供式 I的化合物的前药。

式(I)的优选的W基团为：F、Cl、Br、CN、CF₃、CF₂H、CFH₂、 CH₃、OCH₃、NH₂和以下列表：

式(I)的优选的取代的吲哚基团列于以下：

式(I)的优选的Ar基团为如下：

本发明的具体化合物的实例为以下定义的这些化合物：

在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法。本发明的化合物通常使用具有在“5”位上的各种取代基的4,6-二氯嘧啶制备。化合物(I)可以包含各种立体异构体、几何异构体、互变异构体等。所有可能的异构体和它们的混合物包括在本发明中，并且没有特别限制混合比例。

本发明中的式(I)的嘧啶衍生物化合物可以从商业上可得的前体使用已确立的规程合成。举例而言，可以使用类似于任意以下方案中所示的合成路线，连同合成有机化学领域已知的合成方法或本领域技术人员认识到的其变型。以下方案中的每个变量是指与本文中提供的化合物描述一致的任意基团。

在以下方案中，术语“还原”是指将硝基官能团还原至氨基官能团的过程或将酯官能团转变成醇的过程。硝基的还原可以以许多有机合成领域技术人员公知的方式进行，包括但不限于催化氢化、用SnCl₂还原和二氯化钛还原。在以下方案中，术语“水解”是指底物或反应物与水的反应。更具体而言，“水解”是指将酯或亚硝酸根官能团转变成羧酸。该过程可以通过有机合成领域的技术人员公知的各种酸或碱来催化。

式(I)的化合物可以通过使用已知化学反应和程序来制备。提出以下一般性制备方法来帮助本领域技术人员合成抑制剂，其中在描述具体实施例的试验部分提出更详细的实例。

式(III)中定义的丙烯-吡唑胺不是商业上可得的。其可以通过早先描述的若干方法制备(例如参见美国临时申请号61/555,738)。

式(III)中定义的取代的吲哚-5-醇的前体可以购自供应商或从商业上可得的前体使用以确立的规程合成。(WO 2004/009542，第33-38页； Journal of MedicinalChemistry,2006，第49卷，第7期，第2143-2146 页；Org.Lett.，第10卷，第12期，2008，第2369-2372页；WO 00/47212，第245-250页；WO 2009036055 A1，第57页)。

特别是，以前没有报道过式(IIIa)中定义的前体4,7-二氟吲哚-5-醇并且其可以通过早先描述的若干方法制备(WO2014145403A1)。

式(IV)中定义的5-取代的4,6-二氯-嘧啶的前体可以购自供应商。特别是，式(IVa)中定义的前体可以从商业上可得的前体使用已确立的规程合成(PCT国际申请2010141406，2010年12月9日，化合物310F)。

通常，ArNH₂的前体可以购自供应商。式(V)中定义的ArNH₂的前体可以购自供应商或从商业上可得的前体使用已确立的规程制备。(J. Med.Chem.2010,53,7938–7957，特别是第7949页)。

本发明中的式(I)的化合物的制备可以通过在方案1中列出的方法进行。

如方案1中所示，可以通过以下合成嘧啶衍生物(I)：5-取代的4,6- 二氯嘧啶与一系列取代的吲哚-5-醇反应以产生化合物b的一氯嘧啶中间体，其可以与ArNH₂反应以产生最终化合物(I)。所述反应可以为分步的或一锅法。也可以将交替顺序用于制备嘧啶衍生物。

方案1

如方案2中所示，(I-b)中定义的最终化合物可以从相应的前体合成，其中W为“CN”。

方案2

反应优选在惰性溶剂的存在下进行。如果待使用的溶剂对反应或者参与的试剂没有负面作用并且待使用的溶剂可以至少某种程度地溶解所述试剂，则对待使用的溶剂的本质没有特别的限制。合适溶剂的实例包括：脂族烃如己烷、庚烷、轻石油和石油醚；芳族烃如苯、甲苯和二甲苯；卤代烃，特别是芳族和脂族烃，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯以及二氯苯；酯如甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯和碳酸二乙酯；醚如***、二异丙醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷和二乙二醇二甲基醚；酮如丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、异佛尔酮和环己酮；硝基化合物，其可以为硝基烷烃或芳硝基化合物 (nitroaranes)如硝基乙烷和硝基苯；腈如乙腈和异丁腈；酰胺类，其可以为脂肪酸酰胺如甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和六甲基磷酸三酰胺；和亚砜如二甲基亚砜和环丁砜。

反应可以在宽的温度范围内进行，并且精确的反应温度对本发明不是关键的。通常，申请人发现反应在-50℃至100℃的温度方便地进行。

本发明提供物质的组合物，其为一种或多种活性药物和药学上可接受的载体的制剂。在这方面，本发明提供给予哺乳动物受试者的组合物，其可以包含式I的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的化合物的药学上可接受的盐包括从药学上可接受的无机和有机酸和碱衍生的那些。合适酸的盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐(glucoheptanoate)、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、 2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐 (pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐(3-phenyl propionate)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。其它酸如草酸，当它们自身不为药学上可接受的形式时，可以在盐的制备中使用，所述盐作为中间体用于得到本发明的化合物和它们药学上可接受的酸加成盐。

从适当的碱衍生的盐包括碱金属(例如，钠和钾)盐、碱土金属(例如，镁)盐、铵盐和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明也设想本文公开的任何化合物的包含碱性氮的基团的季铵化作用。也可以通过这样的季铵化作用得到水溶性或油溶性或可分散的产物。

本发明的组合物可以口服地、肠胃外地、通过吸入喷雾地、局部地、经直肠地、经鼻地、经颊地、经***地或经由植入型储库给予。本文所用的术语“肠胃外的”包括皮下的、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或灌输技术。组合物优选口服、腹膜内或静脉内给予。

本发明的药学上可接受组合物可以以任何口服可接受的剂型口服给予，所述剂型包括但不限于，胶囊剂、片剂、药片、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂、咀嚼胶剂、水混悬剂或溶液剂。

口服的组合物可以包含另外的成分，如：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如藻酸、玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁；助流剂如胶体二氧化硅；和甜味剂如蔗糖或糖精或矫味剂如薄荷、水杨酸甲酯或柑橘调味料。当单位剂型为胶囊时，其可以另外包含液体载体如脂肪油。其它单位剂型可以包含许多其它物质，所述物质改变剂量单元的物理形式，例如包衣。因此，片剂或丸剂可以用糖、虫胶、或其它肠溶包衣剂包衣。除了活性成分之外，糖浆剂还可以包含作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料和着色剂和香料。用于制备许多这些组合物的物质应当在使用的量时为药学上或兽医学上纯的和无毒的。

出于肠胃外治疗给予的目的，可以将活性成分并入溶液剂或混悬剂中。该溶液剂或混悬剂也可以包含以下成分：无菌的稀释剂如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及用于调节张度的试剂如氯化钠或右旋糖。可以将肠胃外的制剂封闭在由玻璃或塑料所制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。

适于注射使用的药物形式包括无菌溶液剂、分散剂、乳剂和无菌粉剂。最终形式在生产和储存的条件下应该为稳定的。另外，最终的药物形式应该防止污染，因此其应该能够抑制微生物如细菌或真菌的生长。可以施用单次静脉内的或腹膜内的剂量。或者，可以使用缓释长期的灌输或多重短期的每日灌输，典型地持续1至8天。可以使用间隔天的给药或每几天一次的给药。

可以通过将所需要量的化合物引入一种或多种适当的溶剂中来制备无菌的、可注射的溶液剂，可以按照需要将以上列出的或本领域技术人员已知的其它成分添加至所述溶剂中。可以通过将所需要量的化合物与许多其它所需要的成分一起引入适当的溶剂中来制备无菌的可注射的溶液剂。然后可以接着进行灭菌程序如过滤。典型地，可以通过将化合物引入无菌媒介物中制备分散剂，所述无菌媒介物还包含分散介质和如上指出的所需要的其它成分。在无菌粉剂的情况下，优选的办法包括真空干燥或冻干向其中添加任何所需要的成分的所述无菌粉剂。

合适的药物载体包括无菌水；盐水、右旋糖；水或盐水中的右旋糖；蓖麻油和氧化乙烯的缩合产物，每摩尔蓖麻油合并约30至约35摩尔的氧化乙烯；液体酸；低级链烷醇；油如玉米油；花生油、芝麻油等，连同乳化剂如脂肪酸的甘油单酯或甘油二酯、或磷脂，例如，卵磷脂等；二醇；聚亚烷基二醇；含水介质，在混悬剂存在下，例如，羧甲基纤维素钠；藻酸钠；聚(乙烯吡咯烷酮)；等，单独或连同合适的分散剂如卵磷脂；聚氧亚乙基硬脂酸酯等。该载体也可以包含与渗透促进剂一起的辅料如保存稳定剂、润湿剂、乳化剂等。在所有情况下，所标注的最终形式必须为无菌的，并且还应当能够容易地通过注射装置如空心针。可以通过合适地选择溶剂或赋形剂实现和保持合适的粘性。此外，可以使用分子的或粒子的包衣如卵磷脂、合适选择分散剂中粒度或使用具有表面活性剂性质的物质。

根据本发明，提供了包含嘧啶衍生物的组合物，以及用于体内递送纳米颗粒形式的嘧啶衍生物(适合任何以上所述的给药途径)的方法。

美国专利号5,916,596、6,506,405和6,537,579教导了从生物相容的聚合物如白蛋白制备纳米颗粒。因此，根据本发明，提供了用于通过溶剂蒸发技术从在高剪力(例如声处理、高压均质化等)条件下制备的水包油乳剂形成本发明的纳米颗粒的方法。

或者，本发明的药学上可接受的组合物可以以用于直肠给药的栓剂形式给予。这些可以通过将药剂与合适的不刺激的赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体，但是在直肠温度下为液体，所以其将在直肠中融化释放药物。该物质包括可可脂、蜂蜡或聚乙二醇。

特别当治疗靶标包括通过局部应用可以容易地接近的区域或器官时，本发明的药学上可接受的组合物也可以局部地给予，所述治疗靶标包括眼、皮肤或低位肠道的疾病。容易制备用于这些区域或器官的每个的合适的局部制剂。

可以以直肠的栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠剂制剂进行低位肠道的局部应用。也可以使用局部的-经皮的贴剂。

对于局部应用，可以将药学上可接受的组合物配制成包含混悬的或溶解在一种或多种载体中的活性成分的合适的软膏剂。用于本发明的化合物局部应用的载体包括但不限于，矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧亚乙基、聚氧亚丙基化合物、乳化蜡和水。或者，可以将药学上可接受的组合物配制成包含混悬于或溶于一种或多种药学上可接受的载体的活性成分的合适的洗剂或乳膏剂。合适的载体包括但不限于，矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、 2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

对于眼科使用，可以将药学上可接受的组合物配制为在等渗的、pH 调节的无菌盐水中的微粒化混悬剂，或者优选在等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液剂，所述混悬剂或溶液剂含有或不含有防腐剂，例如苯扎氯铵。或者对于眼科使用，可以将药学上可接受的组合物配制成软膏剂，如凡士林。

本发明的药学上可接受的组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入剂给予。这样的组合物根据药物制剂领域公知的技术制备，并且可以被制备为在盐水中的溶液剂，使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂来增强生物利用度，氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂。

最优选地，将本发明的药学上可接受的组合物配制用于口服给药。

根据本发明，可以将本发明的化合物用于治疗与细胞增殖或增殖过度有关的疾病，如癌症，其包括但不限于鼻腔、鼻旁窦、鼻咽、口腔、口咽、喉、下咽、唾液腺的肿瘤和副神经节瘤。也可以将本发明的化合物用于治疗肝和胆系的癌症(特别是肝细胞癌)，肠癌，特别是结肠直肠癌，卵巢癌，小细胞和非小细胞肺癌、乳腺癌、肉瘤(包括纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、胚胎成横纹肌细胞肉瘤(embryonal rhabdomysocarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomysosarcoma)、神经纤维肉瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤、脂肪肉瘤和软组织腺泡状肉瘤)、中枢神经***的肿瘤(特别是脑癌)，以及淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、B-谱系大细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和T-细胞渐变性大细胞淋巴瘤)。

本发明的化合物和方法，当单独或与其它药剂(例如，如下所述的化疗剂或蛋白质治疗剂)组合给药时，也用于治疗许多障碍，包括但不限于例如：中风、心血管病、心肌梗死、充血性心力衰竭、心肌病、心肌炎、缺血性心脏病、冠脉疾病、心源性休克、血管性休克、肺动脉高血压、肺水肿(包括心源性肺水肿)、胸腔积液、风湿样关节炎、糖尿病视网膜病变、色素性视网膜炎和视网膜病变，包括糖尿病视网膜病变和早产儿视网膜病、炎性疾病、再狭窄、哮喘症、急性或成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、狼疮、血管渗漏，免于缺血性损伤或再灌注损伤(如在器官移植和移植耐受诱导过程中招致的缺血性损伤或再灌注损伤)；血管成形术之后的缺血性损伤或再灌注损伤；关节炎(如风湿样关节炎、牛皮癣关节炎或骨关节炎)；多发性硬化；炎症性肠病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病；狼疮(全身性红斑狼疮)；移植物抗宿主疾病；T-细胞介导的超敏反应疾病，包括接触性超敏反应、迟发型超敏反应和谷蛋白敏感性肠病(乳糜泻)；1型糖尿病；银屑病；接触性皮炎(包括有毒常春藤导致的接触性皮炎)；桥本甲状腺炎；干燥综合征；自身免疫性甲状腺功能亢进症如格雷夫斯病；阿狄森病(肾上腺的自身免疫性疾病)；自身免疫性多腺病(也被称为自身免疫性多内分泌腺综合征)；自身免疫性脱发；恶性贫血；白癜风；自身免疫性垂体功能减退症；格-巴二氏综合征；其它自身免疫性疾病；癌症，包括激酶如Src-家族激酶激活或过度表达的癌症，例如结肠癌和胸腺瘤，或激酶活性促进肿瘤生长或存活的癌症；肾小球肾炎、血清病；荨麻疹；过敏性病如呼吸***的过敏(哮喘症、花粉热、变应性鼻炎)或皮肤过敏；蕈样真菌病；急性炎性反应(如急性或成人呼吸窘迫综合症和缺血性再灌输损伤)；皮肌炎；斑秃；慢性光化性皮炎；湿疹；贝切特病；掌跖脓疱症(Pustulosis palmoplanteris)；坏疽性脓皮症(Pyoderma gangrenum)；赛杂瑞综合征；特应性皮炎；全身性硬化；硬斑病；外周肢体缺血和缺血性肢体病；骨疾病如骨质疏松症、骨软化、甲状旁腺功能亢进、佩吉特病和肾性骨营养障碍；血管渗漏综合症，包括由化疗或免疫调节剂如 IL-2诱导的血管渗漏综合症；脊髓和脑的损伤或创伤；青光眼；视网膜疾病，包括黄斑变性；玻璃体视网膜的疾病；胰腺炎；血管炎病 (vasculatides)，包括脉管炎、川崎病、闭塞性血栓性脉管炎、韦格纳肉芽肿病和贝切特病；硬皮病；先兆子痫；地中海贫血；卡波西肉瘤；希- 林二氏病等。

根据本发明，可以将本发明的化合物用于治疗与不期望的细胞性增殖或增殖过度有关的疾病，包括确定患有所述疾病或病症的动物和对所述患病的动物给予包含式(I)的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与激酶有关。

本发明也提供用于治疗患有以上疾病和病症的动物的方法。本发明的化合物(其可以与载体物质组合来制备单一剂型的组合物)的量将取决于治疗的宿主、给药的特定模式改变。优选地，应当配制组合物使得可以向接受这些组合物的患者给予剂量在0.01-100mg/kg体重/日之间的抑制剂。

在一方面，本发明化合物与化疗剂、抗炎剂、抗组胺药、化疗剂、免疫调节剂、治疗性抗体或蛋白激酶抑制剂，例如酪氨酸激酶抑制剂，组合给予需要这样的治疗的受试者。

所述方法包括向患病的哺乳动物给予一种或多种本发明的化合物。所述方法可以另外包括给予第二种活性剂如细胞毒素剂，包括烷基化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂(intercalators)、微管蛋白抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。所述第二种活性剂可以在相同的组合物或第二种组合物中共同给药。合适的第二种活性剂的实例包括但不限于，细胞毒类药物如阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；AcrQnine；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；乙酸阿美蒽醌；氨基格鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双萘法德；比泽来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡芦睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫斯汀；盐酸卡柔比星；卡泽来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉立滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎呱宁；甲磺酸地扎呱宁；地吖醌；多西他赛；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸甲雄烷酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸(Eflomithine Hydrochloride)；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸伊索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；乙碘油131；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法罗唑啉；法扎拉滨；芬维A 胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟脲嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；金Au198；羟基尿素；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；依莫福新；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸依立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦辛；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；美仑孕酮乙酸盐；美法仑；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托克星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司陪；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺拉霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；波尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌罗霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑霉素；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈(Safmgol)；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸螺旋锗；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；氯化锶Sr 89；磺氯苯脲；他利霉素；紫杉烷；紫杉烷类(二萜)化合物；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；赛替派；噻唑羧胺核苷；替拉扎明；盐酸托泊替康；枸橼酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙(Trimetrexate Glucuronate)；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸环氧长春碱；酒石酸长春瑞滨；硫酸异长春碱；硫酸长春利定；伏罗唑；泽尼铂；净司他丁；和盐酸佐柔比星。

根据本发明，为了实现在治疗非肿瘤的障碍如心脏病、中风和神经变性的疾病中的高选择性活性，化合物和组合物可以在亚-细胞毒素的水平与其它药剂组合使用(Whitesell等，Curr Cancer Drug Targets(2003)， 3(5)，349-58)。

可以与本发明的化合物组合给药的示例性治疗剂包括EGFR抑制剂如吉非替尼、埃罗替尼和西妥昔单抗。Her2抑制剂包括卡纽替尼、 EKB-569和GW-572016。也包括Src抑制剂、达沙替尼以及康士得(比卡鲁胺)，他莫昔芬、MEK-1激酶抑制剂、MARK激酶抑制剂、PI3抑制剂和PDGF抑制剂如伊马替尼，Hsp90抑制剂如17-AAG和17-DMAG。也包括抗血管生成剂剂和抗血管剂，其通过阻断血液流向实体瘤剥夺营养致使癌细胞休眠。也可以使用致使雄激素依赖的癌不增生的去势。也包括IGF1R抑制剂，非受体和受体酪氨酸激酶的抑制剂和整联蛋白的抑制剂。

本发明的药物组合物和方法可以另外组合其它蛋白质治疗剂如细胞因子、免疫调节剂和抗体。本文中使用的术语“细胞因子”包括趋化因子、白细胞介素、淋巴因子、单核因子、集落刺激因子以及受体相关的蛋白质及其功能片段。本文中使用术语“功能片段”是指具有通过确定功能测定确认的生物功能或活性的多肽或肽。所述细胞因子包括内皮的单核细胞激活多肽II(EMAP-II)、粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)、粒细胞-CSF(G-CSF)、巨噬细胞-CSF(M-CSF)、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、 IL-5、IL-6、IL-12和IL-13，干扰素等，并且所述细胞因子在细胞或细胞机制中与特别的生物的、形态学的或表型改变有关。

用于组合疗法的其它治疗剂包括环孢菌素(例如，环孢菌素A)、 CTLA4-Ig，抗体例如ICAM-3、抗-IL-2受体(抗-Tac)、抗-CD45RB、抗 -CD2、抗-CD3(OKT-3)、抗-CD4、抗-CD80、抗-CD86，阻断CD40和 gp39(即CD154)之间相互作用的活性剂如对CD40和对gpn39特异的抗体，从CD40和gp39构成的融合蛋白(CD40Ig和CD8gp39)，抑制剂如 NF-κB功能的核转位抑制剂如脱氧精胍菌素(DSG)，胆固醇生物合成抑制剂如HM:G CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀和辛伐他汀)，非胆固醇类抗炎的药物(NSAID)如布洛芬和环加氧酶抑制剂如罗非昔布，类固醇如泼尼松或地赛米松、金化合物，抗增殖剂如甲氨蝶呤、FK506(他罗利姆、普乐可复)、麦考酚酸吗乙酯，细胞毒素药物如硫唑嘌呤和环磷酰胺， TNF-a抑制剂如替尼达普、抗-TNF抗体或可溶解的TNF受体和纳巴霉素(西罗莫司或雷帕鸣)或其衍生物。

当将其它治疗剂与本发明的化合物组合使用时，它们可以以例如 PhysicianDesk Reference(PDR)中记录的或如本领域普通技术人员另外确定的量使用。

下文展示了可用于合成61个“化合物”的2个“中间体”的合成和化学结构。将测试所述61个化合物抑制一定范围的激酶的能力。

所有合成都在无水条件下(即，干燥溶剂)在氩气气氛中进行，除非该处有说明，所有实验使用经烘箱干燥的装置并使用标准技术处理空气敏感性物质。使碳酸氢钠(NaHCO3)的水溶液和氯化钠的水溶液(盐水)饱和。

在Merck Kiesel胶60F254板上进行分析薄层色谱法(TLC)，通过紫外线和/或茴香醛、高锰酸钾或磷钼酸蘸液显谱。

NMR谱：在400MHz记录1H核磁共振谱。如下呈现数据：化学位移，多重性(s＝单峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，qn＝五重峰， dd＝双二重峰，m＝多重峰，bs＝宽单峰)，偶合常数(J/Hz)和积分。直接从谱图取得和计算偶合常数，并且没有修正偶合常数。

低分辨率质谱：使用电喷雾(ES+)电离。引用质子化的母离子(M+H) 或母钠离子(M+Na)或最高质量的碎片。除非另有说明，否则在5分钟内从水中的10％ACN上升至100％ACN组成分析梯度。

使用高效液相色谱法(HPLC)分析衍生物的纯度。使用配备 SPD-M10A磷光体二极管矩阵检测器的岛津(Shimadzu)***在 Phenomenex Synergi Polar-RP，4u，80A，150x4.6mm柱上进行HPLC。移动相A为水和移动相B为乙腈，梯度为60分钟内20％至80％B，并以A/B(80:20)再平衡10分钟。在220和54nm进行UV检测。

下文展示两个本领域技术人员已知已用于合成可能具有激酶抑制活性的嘧啶衍生物的中间体化合物(“中间体1”和“中间体2”)的化学结构和合成。

中间体1

向4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-醇(200mg,1.21mmol)在乙腈(4mL)与 N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合物中的溶液添加碳酸钾(200mg,1.45 mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后添加4,6-二氯嘧啶-5-甲腈(221 mg,1.27mmol)在3mL乙腈中的悬浮液。将该混合物在室温搅拌1h。检查TLC并且完成反应。将混合物用水和乙酸乙酯稀释。分层并且将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相用水洗涤一次，然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且将滤液在真空中浓缩，以产生棕色固体状期望产物(365mg，99％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.46 (br,1H),8.83(s,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,1H),7.00(t,J＝7.6Hz,1H), 6.27(s,1H),2.41(s,3H)；ESI-MS：(C14H8ClFN4O)计算值302，实测值 303(MH⁺)。

中间体2

向4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-醇(500mg,2.73mmol)在乙腈(9mL) 与N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合物中的溶液添加碳酸钾(453mg,3.28 mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min.，然后添加2,4-二氯5-氰基嘧啶(499mg,2.87mmol)在乙腈/DMF(2.5mL/2.5mL)中的悬浮液。将该混合物在0℃搅拌2h。检查TLC并且完成反应。将混合物用水/盐水和乙酸乙酯稀释。分层并且将水相用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相用水洗涤一次/盐水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤，并且将滤液在真空中浓缩，以产生紫色粘性固体状期望产物(890mg，100％收率，包含一些 DMF)。将产物不经进一步纯化使用。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.91(br,1H),8.84(s,1H),7.03(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.35(br, 1H),2.39(s,3H)；ESI-MS：(C14H7ClF2N4O)计算值320，实测值321 (MH⁺)。

下文展示了作为本文中公开的一般型化合物类型的61个嘧啶衍生物 (“化合物1”至“化合物61”)的化学结构和合成方法。

化合物1

将中间体1(100mg,0.33mmol)、2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺 (73mg,0.33mmol)和DIPEA(0.08ml,0.49mmol)在DMSO(5ml)中的混合物在室温搅拌30min。在检查TLC之后，将混合物添加至水(100ml) 中。在用冰浴冷却之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤。将粗产物通过柱色谱法纯化(硅胶，0-15％MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(64mg，40％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.34(br, 1H),9.45(br s,1H),8.15(s,1H),7.13(m,2H),6.93(m,1H),6.65(m,1H), 6.50(m,1H),6.23(s,1H),3.77(s,3H),3.18(m,4H),2.46(m,4H),2.39(s, 3H),2.23(s,3H)；ESI-MS：C26H26FN7O2计算值487，实测值488 (MH⁺)。HPLC：停留时间：18.63min。纯度：96％。

化合物2

将中间体1(100mg,0.33mmol)、3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(69 mg,0.33mmol)和DIPEA(0.15ml,0.82mmol)在DMSO(5ml)中的混合物在室温搅拌30min。在检查TLC之后，将混合物添加至水(100ml)中。在用冰浴冷却之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤。将粗产物通过柱色谱法纯化(硅胶，0-15％MeOH于DCM中)，以产生浅棕色固体状期望产物(90mg，57％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36(br, 1H),10.0(s,1H),8.30(s,1H),7.41(m,1H),7.26(m,1H),7.13(m,1H), 6.98(m,2H),6.24(br s,1H),3.00(m,4H),2.50(m,4H),2.40(s,3H),2.23 (s,3H)；ESI-MS：C25H23F2N7O计算值475，实测值476(MH⁺)。HPLC：停留时间：19.15min。纯度：95％。

化合物3

将中间体1(100mg,0.33mmol)、4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(68 mg,0.33mmol)和DIPEA(0.15ml,0.82mmol)在DMSO(5ml)中的混合物在室温搅拌30min。在检查TLC之后，将混合物添加至水(100ml)中。在用冰浴冷却之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤。将粗产物通过柱色谱法纯化(硅胶，0-15％MeOH于DCM中)，以产生灰白色固体状期望产物(41mg，26％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.34(br s, 1H),8.24(m,1H),7.12(m,1H),6.92(m,1H),6.22(s,1H),3.95(m,4H), 2.41s(m,4H),2.39(s,3H),2.24(s,3H)；ESI-MS：C19H19FN6O计算值 366，实测值367(MH⁺)。HPLC：停留时间：12.36min。纯度：98％。

化合物4

将中间体1(100mg,0.33mmol)、4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(72 mg,0.33mmol)和DIPEA(0.15ml,0.82mmol)在DMSO(5ml)在室温搅拌30min。在检查TLC之后，将混合物添加至水(100ml)中。在用冰浴冷却之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤。将粗产物通过柱色谱法纯化(硅胶，0-15％MeOH于DCM中)，以产生灰白色固体状期望产物(18 mg，11％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.34(br s,1H),8.24(s, 1H),7.12(m,1H),6.92(m,1H),6.23(s,1H),3.96(m,4H),2.52(m,3H), 2.45(m,4H),1.23(m,2H),1.050(m,3H)；ESI-MS：C20H21FN6O计算值380，实测值381(MH⁺)。HPLC：停留时间：13.77min。纯度：93％。

化合物5

步骤1：在室温向氟代吲哚(415mg,2.51mmol)和4,6-二氯-5-(二氟甲基)吡啶(500mg,2.51mmol)在DMSO(3ml)中的溶液添加碳酸钾(695mg, 5.03mmol)并且将混合物在室温加热过夜。检查TLC并且消耗起始原料。将反应混合物添加至具有水/盐水(50ml/50ml)的烧瓶并且将混合物在室温搅拌1小时，然后用冰浴冷却。通过过滤收集固体并且通过水洗涤，以获得黄色固体状期望产物(803mg，98％收率)。不进行进一步纯化并且将产物用于下一步反应。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.39(br,1H), 8.71(s,1H),7.51(t,J＝52.4Hz,1H),7.15(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(t,J＝ 7.6Hz,1H),6.25(s,1H),2.40(s,3H)；ESI-MS：(C14H9ClF3N3O)计算值 327，实测值328(MH⁺)。

步骤2：将上述中间体(125mg,0.61mmol)、4-(4-乙基哌嗪-1-基))苯胺(200mg,0.61mmol)和DIPEA(0.27ml,1.52mmol)在DMSO(3.0ml) 中的混合物在100℃搅拌2h，然后在室温搅拌过夜。检查TLC并且完成反应。将混合物添加至水/饱和NH₄Cl(50ml/50ml)并且在室温搅拌30 min。使用2N HCl将混合物的pH调节至～6。在4℃冷却并且通过过滤收集固体，通过水洗涤，以产生粘性的细微的粗制产物。将所述粗产物溶于DCM/MeOH(2ml/2ml)中，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物在柱上纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(103mg， 34％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.32(br,1H),10.49(br, 1H),8.93(s,1H),8.12(s,1H),7.36(d,J＝8.8Hz,2H),7.10(d,J＝8.8 Hz,1H),7.00(d,J＝9.2Hz,2H),6.86(t,J＝7.6Hz,1H),6.21(s,1H),3.80 (br,2H),3.55(br,2H),3.10(m,6H),2.39(s,3H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)； ESI-MS：(C26H27F3N6O)计算值496，实测值497(MH⁺)。

化合物6

向烧瓶装入中间体1(150mg,0.5mmol)、1-(4-氨基苯甲酰基)-4-甲基哌嗪(109mg,0.5mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃ 维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用DCM/(10 mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(160mg，66％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36(br, 1H),10.17(br,1H),8.34(s,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),7.39(d,J＝8.8 Hz,2H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),6.96(t,J＝7.6Hz,1H),6.24(s,1H), 3.80-3.40(br,4H),2.40(s,3H),2.36-2.24(br,4H),2.19(s,3H)；ESI-MS： (C26H24FN7O2)计算值485，实测值486(MH⁺)。

化合物7

向烧瓶装入中间体1(100mg,0.33mmol)、4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯胺(86mg,0.33mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用 DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(103mg，60％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.36(br,1H),10.18(br,1H),8.33(s,1H),7.90-7.80(m,2H),7.55(d,J＝ 8.8Hz,1H),7.13(d,J＝8.8Hz,1H),6.95(t,J＝7.2Hz,1H),6.24(s,1H), 2.85(m,4H),2.49-2.32(m,7H),2.23(s,3H)；ESI-MS：(C26H23F4N7O) 计算值525，实测值526(MH⁺)。

化合物8

向烧瓶装入中间体1(100mg,0.33mmol)、4-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-氟苯胺(74mg,0.33mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃ 维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用DCM/ (10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(120mg，74％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36 (br,1H),9.99(br,1H),8.29(s,1H),7.39(dd,J＝2.0Hz,J＝14.4Hz,1H), 7.26(d,J＝8.8Hz,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.01(t,J＝9.2Hz,1H), 6.95(t,J＝8.0Hz,1H),6.24(s,1H),3.00(m,4H),2.60-2.45(m,4H),2.40 (m,5H),1.02(t,J＝7.2Hz,3H)；ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490(MH⁺)。

化合物9

将中间体1(100mg,0.33mmol)、4-(4-氨基-2-氟苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(97mg,0.33mmol)和DIPEA(0.15ml,0.82mmol)在DMSO(5ml)中的混合物在室温搅拌30min.在检查TLC之后，将混合物添加至水 (100ml)中。在用冰浴冷却之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤。在室温空气干燥过夜之后，将固体悬浮至DCM/MeOH(10/1，5mL)中并且添加1ml的TFA。将混合物在室温搅拌过夜。在浓缩之后，将残余物溶于DCM/MeOH(8/2，15ml)中并且添加饱和碳酸氢钠溶液至pH约7。将有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物通过柱色谱法纯化(硅胶，0-15％ MeOH于DCM中)，以产生灰白色固体状期望产物(60mg，39％收率)。 ¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36(br,1H),8.30(s,1H),7.43(m,1H), 7.28(m,1H),7.14(m,1H),7.02(m,1H),6.94(m,1H),6.24(s,1H),2.97 (m,8H),2.40(m,3H)；ESI-MS：C24H21F2N7O计算值461，实测值 462(MH⁺)。HPLC：停留时间：NA。

化合物10

将中间体1(100mg,0.33mmol)、4-(4-氨基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (96mg,0.33mmol)和DIPEA(0.15ml,0.82mmol)在DMSO(5ml)中的混合物在室温搅拌30min。在检查TLC之后，将混合物添加至水(100ml) 中。在用冰浴冷却之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤。在室温空气干燥过夜之后，将固体悬浮至DCM/MeOH(10/1，5mL)中并且添加1ml 的TFA。将混合物在室温搅拌过夜。在浓缩之后，将残余物溶于 DCM/MeOH(8/2，15ml)中并且添加饱和碳酸氢钠溶液至pH约7。将有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物通过柱色谱法纯化(硅胶，0-15％ MeOH于DCM中)，以产生浅黄色固体状期望产物(15mg，10％收率)。 ¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.48(br,1H),10.06(s,1H),8.90(m, 2H),8.28(m,1H),7.48(m,2H),7.29(m,2H),7.13(m,1H),6.94(m,1H), 6.23(s,1H),3.53(m,2H),3.09(m,4H),2.54(m,4H),2.40(m,3H)； ESI-MS：C25H24FN7O计算值457，实测值458(MH⁺)。HPLC：停留时间：13.75min。纯度：91％。

化合物11

步骤1：将1-氟-4-硝基苯(3.00g,21.3mmol)、N,N-二甲基哌啶-4-胺二盐酸盐(4.70g,23.4mmol)和DIPEA(15mL,86.1mmol)的混合物在 95℃搅拌18h。将混合物冷却至室温，用1:1EtOAc/己烷(100mL)稀释，用葡糖酸钙水溶液(100mL每次，50％饱和度)洗涤两次，分离有机层并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，以生成红色油状期望产物(4.1g,77％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.03(d,J＝9.6Hz,1H),7.01(d,J＝ 9.6Hz,1H),4.04–4.01(m,2H),3.02–2.95(m,2H),2.39–2.32(m,1H),2.17 (s,6H),1.85–1.81(m,2H),1.44–1.34(m,2H)；MS(ESI)：C13H19N3O2 计算值249，实测值250(MH⁺)。

步骤2：将N,N-二甲基-1-(4-硝基苯基)哌啶-4-胺(1.5g,6.0mmol)、氯化锡(II)二水合物(6.8g,30mmol)和甲醇(100mL)的混合物在70℃搅拌19h。将混合物冷却至室温，用4:1 EtOAc/己烷(200mL)稀释，用5M NaOH水溶液(200mL)洗涤和分离有机层并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析法在硅胶上使用0–20％的DCM中的 MeOH(v/v)作为洗脱剂纯化，以提供浅黄色固体状期望产物1-(4-氨基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(340mg，26％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400 MHz)δ6.67(d,J＝8.8Hz,2H),6.47(d,J＝8.8Hz,2H),4.53(br s,2H), 3.37–3.34(m,2H),2.48–2.42(m,2H),2.18(s,6H),2.11–2.05(m,1H), 1.80–1.77(m,2H),1.51–1.41(m,2H)；MS(ESI)：C13H21N3计算值219，实测值220(MH⁺)。

步骤3：向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(200 mg,0.661mmol)和1-(4-氨基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(142mg,0.647 mmol)在无水DMSO(2.0mL)中的混合物添加TEA(0.28mL；1.98 mmol)，并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌19h。将所得混合物用4:1 EtOAc/己烷(100mL)稀释并且用NH₄Cl水溶液(每次约 100mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL；50％饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过从 EtOAc结晶出来而纯化，以提供黄色固体状期望产物(254mg,81％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.35(br s,1H),9.83(br s,1H), 8.21(s,1H),7.30–7.28(m,2H),7.13–7.11(m,1H),6.95–6.91(m,2H),6.23 (s,1H),3.71–3.68(m,2H),2.69–2.62(m,2H),2.40(s,3H),2.24–2.21(m, 1H),2.19(s,6H),1.84–1.81(m,2H),1.52–1.42(m,2H)；MS(ESI)： C27H28FN7O计算值485，实测值486(MH⁺)。

化合物12

将中间体1(150mg,0.50mmol)、4-咪唑-1-基-苯基胺(91mg, 0.57mmol)和DIPEA(0.22ml,1.245mmol)在DMSO(3.0ml)中的混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且完成反应。将混合物添加至饱和NH₄Cl/ 水(25ml/50ml ml)并且在室温搅拌30min。使用2N HCl将混合物的pH 调节至约6。在用冰冷却1h之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤，以产生粗产物。将粗产物通过柱在硅胶上纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(140mg，66％收率)。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ11.36(br,1H),10.16(s,1H),8.31(s,1H),8.24(s,1H),7.66 (m,5H),7.14(m,2H),6.95(t,J＝7.6Hz,1H),6.24(s,1H),2.40(s,3H)；ESI-MS：(C23H16FN7O)计算值425，实测值426(MH⁺)。

化合物13

将中间体1(150mg,0.50mmol)、4-(2-甲基咪唑-1-基-苯基胺(99mg, 0.57mmol)和DIPEA(0.22ml,1.245mmol)在DMSO(3.0ml)中的混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且完成反应。将混合物添加至饱和NH₄Cl/ 水(25ml/50ml ml)中并且在室温搅拌30min。用2N HCl将混合物的pH 调节至约6。在用冰冷却1h之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤，以产生粗产物。将粗产物通过柱在硅胶上纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(108mg,50％收率)。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ11.36(br,1H),10.16(br,1H),8.33(s,1H),7.70(d,J＝8.8Hz, 2H),7.42(d,J＝8.8Hz,2H),7.28(br,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),6.96(t,J ＝7.6Hz,1H),6.25(s,1H),2.41(s,3H),2.30(s,3H)；ESI-MS： (C24H18FN7O)计算值439，实测值440(MH⁺)。

化合物14

将中间体2(150mg,0.47mmol)、4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (149mg,0.54mmol)和DIPEA(0.21ml,1.17mmol)在DMSO(3.0ml)中的混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且完成反应。将混合物添加至饱和 NH₄Cl/水(25ml/50ml ml)并且在室温搅拌30min。使用2N HCl将混合物的pH调节至约6。在用冰冷却1h之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤，以产生粗产物。将粗产物悬浮在DCM(10ml)中并且添加1ml的TFA (混合物变成清澈溶液)。将混合物在室温搅拌过夜。将在水中的磷酸钾添加至混合物(pH约8)，并且用DCM/MeOH萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，浓缩并且通过柱在硅胶上纯化(5-15％MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(97mg,45％收率)。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.90(br,1H),8.24(s,1H),7.32(d,J＝8.8Hz, 2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s,1H), 3.14(m,4H),2.99(m,4H),2.41(s,3H)(NH可能隐藏在溶剂峰下)； ESI-MS：(C24H21F2N7O)计算值461，实测值462(MH⁺)。

化合物15

向烧瓶装入中间体1(100mg,0.33mmol)、5-氨基-2-甲基苯磺酰胺(77 mg,0.41mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃维持 4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3) 萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(79mg,53％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36(br,1H), 10.25(br,1H),8.30(s,1H),8.07(br,1H),7.69(dd,J＝2.4Hz,J＝8.4Hz,1H), 7.39(br,2H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(d,J＝8.8Hz,1H),6.95(t,J＝ 7.6Hz,1H),6.24(s,1H),2.57(s,3H),2.40(s,3H)；ESI-MS： (C21H17FN6O3S)计算值452，实测值453(MH⁺)。

化合物16

向烧瓶装入中间体1(100mg,0.33mmol)、4-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪 -1-基)-3-氟苯胺(92mg,0.41mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(118mg,73％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ11.35(br,1H),9.98(br,1H),8.29(s,1H),7.40(dd,J＝2.4Hz,J＝14.4Hz, 1H),7.26(dd,J＝2.0Hz,J＝8.4Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),6.95(m, 2H),6.24(s,1H),3.17(d,J＝9.6Hz,2H),2.91(m,2H),2.40(s,3H),2.19(m, 3H),1.00(s,3H),0.98(s,3H)；ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490(MH⁺)。

化合物17

向烧瓶装入中间体1(100mg,0.33mmol)、4-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪 -1-基)苯胺(85mg,0.41mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至100℃维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用 DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(122mg,78％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.36(br,1H),9.84(br,1H),8.21(s,1H),7.28(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J ＝8.8Hz,1H),6.92(m,3H),6.24(s,1H),3.51(m,2H),2.84(m,2H),2.40 (s,3H),2.11(m,3H),1.03(s,3H),1.01(s,3H)；ESI-MS：(C26H26FN7O) 计算值471，实测值472(MH⁺)。

化合物18

向烧瓶装入中间体1(100mg,0.33mmol)、4-(4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪 -1-基)苯胺(86mg,0.33mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至100℃维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用 DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％EtOAc于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(73mg,42％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.36(br,1H),9.86(br,1H),8.21(s,1H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J ＝8.4Hz,1H),6.94(m,3H),6.24(s,1H),3.23(q,J＝10Hz,2H),3.13(m, 4H),2.76(m,4H),2.34(s,3H)；ESI-MS：(C26H23F4N7O)计算值525，实测值526(MH⁺)。

化合物19

向烧瓶装入中间体2(100mg,0.31mmol)、4-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪 -1-基)苯胺(80mg,0.39mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至100℃维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用 DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(146mg,95％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.83(br,1H),9.86(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(dd, J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s,1H),3.51(m, 2H),2.84(m,2H),2.41(s,3H),2.11(m,2H),1.02(d,J＝6.4Hz,6H)； ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490(MH⁺)。

化合物20

向烧瓶装入中间体2(100mg,0.31mmol)、4-(4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪 -1-基)苯胺(101mg,0.39mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至100℃维持4h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，然后用 DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％EtOAc于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(101mg,60％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.83(br,1H),9.88(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(dd, J＝5.6Hz,J＝10.8Hz,1H),6.94(d,J＝9.2Hz,2H),6.34(s,1H),3.25(q, J＝10.0Hz,2H),3.14(m,4H),2.76(m,4H),2.41(s,3H)；ESI-MS： (C26H22F5N7O)计算值543，实测值544(MH⁺)。

化合物21

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(200mg,0.661mmol)和3-吗啉代苯胺(124mg,0.694mmol)在无水DMSO(2.0mL) 中的混合物添加TEA(0.28mL；1.98mmol)，并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌18h。将所得混合物用EtOAc(100mL)洗涤并且用NH₄Cl水溶液(每次约100mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL；50％饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过从EtOAc结晶出来，以提供棕色固体状期望产物(123mg,42％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.36(br s,1H), 9.89(br s,1H),8.28(s,1H),7.23–7.19(m,1H),7.14–7.10(m,2H), 7.05–7.03(m,1H),6.96–6.92(m,1H),6.79–6.77(m,1H),3.75–3.73(m, 4H),3.11–3.09(m,4H),2.40(s,3H)；MS(ESI)：C24H21FN6O2计算值 444，实测值445(MH⁺)。

化合物22

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(200mg,0.661mmol)和3-(4-乙基哌嗪-1-基)苯胺(193mg,0.694mmol)在无水 DMSO(2.0mL)中的混合物添加TEA(0.28mL；1.98mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌18h。将所得混合物用EtOAc (100mL)稀释并且用NH₄Cl水溶液(每次约100mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL；50％饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过从EtOAc结晶出来，以提供棕色固体状期望产物(221mg,69％收率)。¹HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.36(br s,1H),9.86(br s,1H),8.28(s,1H),7.20–7.08(m,3H),7.02–6.92(m,2H), 6.78–6.75(m,1H),3.14–3.12(4H),2.48(m,4H)；被DMSO信号遮蔽),2.40 (s,3H),2.37(q,J＝7.2Hz,2H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)；MS(ESI)： C26H26FN7O计算值471，实测值472(MH⁺)。

化合物23

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(200mg,0.330mmol)和苯胺(33μL,0.363mmol)在无水DMSO(2.0mL)中的混合物添加TEA(0.14mL；0.99mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌18h。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用 NH₄Cl水溶液(每次约100mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL； 50％饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用在己烷中的0–100％EtOAc(v/v) 纯化，以提供灰白色固体状期望产物(93mg,78％收率)。¹H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.36(br s,1H),10.04(br s,1H),8.29(s,1H), 7.53(d,J＝7.6Hz,2H),7.39–7.35(m,2H),7.20–7.12(m,2H),6.97–6.93 (m,1H),6.24(s,1H),2.40(s,3H)；MS(ESI)：C20H14FN5O计算值359，实测值360(MH⁺)。

化合物24

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和苯胺(33μL,0.363mmol)在无水DMSO(2.0mL)中的混合物添加TEA(0.14mL；0.99mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌18h。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用 NH₄Cl水溶液(每次约100mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL； 50％饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用在己烷中的0–100％EtOAc(v/v) 纯化，以提供灰白色固体状期望产物(93mg,78％收率)。¹H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.35(br s,1H),9.82(br s,1H),8.21(d,J＝0.8 Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),6.95–6.90(m,3H),6.23(d,J＝0.8Hz,1H),3.14–3.11(m,4H),2.40(s,3H),1.65–1.51(m, 6H)；MS(ESI)：C25H23FN6O计算值442，实测值443(MH⁺)。

化合物25

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和N-(4-氨基苯基)乙酰胺(54mg,0.36mmol)在无水DMSO (2.0mL)中的混合物添加TEA(0.14mL；0.99mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌18h。将所得混合物用EtOAc(100 mL)稀释并且用NH₄Cl水溶液(每次约100mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL；50％饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过从EtOAc结晶出来，以提供灰白色固体状期望产物N-(4-((5-氰基-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)乙酰胺(88mg,64％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 11.37(br s,1H),9.99(br s,1H),9.98(br s,1H),8.25(s,1H),7.57–7.55 (m,2H),7.42–7.40(m,2H),7.14–7.11(m,1H),6.96–6.92(m,1H),6.24(s, 1H),2.40(s,3H),2.04(s,3H)；MS(ESI)：C22H17FN6O2计算值416，实测值417(MH⁺)。

化合物26

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和N-(4-氨基苯基)甲磺酰胺(68mg,0.36mmol)在无水异丙醇 (5.0mL)中的混合物添加TFA(0.05mL；0.65mmol)并且将所得混合物在 80℃在氩气气氛下高效搅拌22h。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过从EtOAc 结晶出来，提供灰白色固体状期望产物(97mg,65％收率)。¹H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.35(br s,1H),10.02(br s,1H),9.71(br s,1H), 8.27(s,1H),7.49–7.46(m,2H),7.21–7.11(m,3H),6.96–6.92(m,1H),6.24 (s,1H),2.98(s,3H),2.40(s,3H)；MS(ESI)：C21H17FN6O3S计算值452，实测值453(MH⁺)。

化合物27

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和4-(4-氨基苯基)哌嗪-2-酮(69mg,0.36mmol)在无水DMSO (3.0mL)中的混合物添加TEA(0.14mL；0.99mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌27h。所得混合物用EtOAc(100mL) 稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供黄色固体状期望产物(88mg,64％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.34(br s,1H),9.86(br s,1H), 8.22(s,1H),8.04(br s,1H),7.35–7.33(m,2H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H), 6.95–6.91(m,2H),6.24–6.23(m,1H),3.71(s,2H),3.41–3.38(m,2H),3.32–3.29(m,2H；被水信号遮蔽),2.40(s,3H)；MS(ESI)：C24H20FN7O2 计算值457，实测值458(MH⁺)。

化合物28

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和2-(4-氨基苯基)异噻唑烷1,1-二氧化物(77mg,0.36mmol) 在无水异丙醇(5.0mL)中的混合物添加TFA(0.05mL；0.65mmol)并且将所得混合物在80℃在氩气气氛下搅拌22h。将所得混合物用EtOAc(100 mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度) 洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供灰白色固体状期望产物(97mg, 65％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.37(br s,1H),10.06(br s, 1H),8.26(s,1H),7.52–7.49(m,2H),7.22–7.19(m,2H),7.12(d,J＝8.4Hz, 1H),6.97–6.93(m,1H),3.74(t,J＝6.4Hz,2H),3.51(t,J＝7.2Hz,2H), 2.44–2.37(m,2H),2.40(s,3H)；MS(ESI)：C23H19FN6O3S计算值478，实测值479(MH⁺)。

化合物29

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和4-乙氧基苯胺(47μL,0.36mmol)在无水DMSO(3.0mL) 中的混合物添加TEA(0.14mL；0.99mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌23h。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用在己烷中的0–100％EtOAc(v/v)纯化，以提供黄色固体状期望产物(111mg,83％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.35(br s,1H), 9.90(br s,1H),8.22(s,1H),7.37(d,J＝9.2Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz, 1H),6.95–6.90(m,3H),6.23(s,1H),4.02(q,J＝6.8Hz,2H),2.40(s,3H), 1.33(t,J＝6.8Hz,3H)；MS(ESI)：C22H18FN5O2计算值403，实测值 404(MH⁺)。

化合物30

步骤1：向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(200 mg,0.661mmol)和4-(4-氨基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(201mg,0.727 mmol)在无水DMSO(3.0mL)中的混合物添加TEA(0.28mL；1.98mmol) 并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌20h。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％ NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用在己烷中的0–100％ EtOAc(v/v)纯化，以提供黄色固体状期望产物(322mg,90％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.36(br s,1H),9.98(br s,1H),8.25(s, 1H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J＝8.4Hz, 1H),6.96–6.92(m,1H),6.24–6.23(m,1H),4.11–4.06(m,1H),2.84–2.78 (m,2H),2.70–2.64(m,2H),2.40(s,3H),1.77–1.74(m,2H),1.54–1.41(m, 2H),1.42(s,9H)；MS(ESI)：C30H31FN6O3计算值542，实测值442 (M-BOC+H⁺)。

步骤2：将4-(4-((5-氰基-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4- 基)氨基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.369mmol)的混合物搅拌至 8％的在DCM中的TFA(10mL)中并且将所得混合物在室温搅拌17h。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100 mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤。浓缩母液，以提供玻璃状白色固体期望产物(60mg,40％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.37(br s,1H),9.99(br s,1H), 8.26(s,1H),7.44–7.42(m,2H),7.23–7.20(m,2H),7.13(d,J＝8.8Hz,1H), 6.96–6.92(m,1H),6.24–6.23(m,1H),3.13–3.10(m,2H),2.72–2.60(m, 3H),2.40(s,3H),1.77–1.72(m,2H),1.62–1.52(m,2H)；MS(ESI)： C25H23FN6O计算值442，实测值443(MH⁺)。

化合物31

步骤1：向4-氟硝基苯(2.0g,14.16mmol)在AcN(15mL)中的溶液添加2-(哌嗪-1-基)乙醇(1.85g,14.17mmol)和DIEA(2.97mL,17.01mmol)。将混合物回流15h(在密封的管中)。在冷却之后，将所得混合物倒入水 (300ml)中。将混合物在室温搅拌30min。通过过滤收集固体并且用水洗涤，以提供灰白色固体状期望产物(2.74g,72％收率)。ESI-MS：(C12H17N3O3)计算值251，实测值252[M+H]⁺。

步骤2：在10％Pd/C(270mg)存在下通过使用H₂气球氢化上述产物(2.74g)在甲醇(50mL)中的溶液。在16h之后将反应混合物通过Celite 垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩成浅黄色固体状期望产物(2.70g)。将产物直接用于下一步骤而不进一步纯化。ESI-MS： (C13H21N3)计算值219，实测值220(MH⁺)。

步骤3：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、2-(4-(4-氨基苯基) 哌嗪-1-基)乙醇(30.4mg,0.16mmol)、DIPEA(60uL)、DMSO(2mL)。将反应在室温搅拌过夜。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于 DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(42mg,54％收率)。¹HNMR (400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.86(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d, J＝8.4Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H), 6.34(s,1H),3.51(m,2H),2.84(m,2H),2.41(s,3H),2.11(m,2H),1.03(s, 3H),1.01(s,3H)；ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490 (MH⁺)。

化合物32

向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、2-(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1- 基)乙醇(30.4mg,0.16mmol)、DIPEA(60uL)、DMSO(2mL)。将在室温搅拌过夜。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(42mg,54％收率)。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.86(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz, 2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s, 1H),3.51(m,2H),2.84(m,2H),2.41(s,3H),2.11(m,2H),1.03(s,3H), 1.01(s,3H)；ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490(MH⁺)。

化合物33

步骤1：向4-氟硝基苯(0.5g,3.54mmol)在AcN(30mL)中的溶液添加(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.71g,3.54mmol)和DIEA(0.74mL, 4.25mmol)。将混合物回流15h(在密封的管中)。在冷却之后，所得混合物倒入水(300ml)中。将混合物在室温搅拌30min。将所得反应混合物用 EtOAc(3x30mL)和无水Na₂SO₄萃取并且在真空中浓缩。将所得粗产物通过Teledyne-Isco快速***通过EtOAc/Hex，0至30％的在己烷中的乙酸乙酯纯化，以提供浅黄色固体状化合物(S)-4-(4-硝基苯基)-2-甲基哌嗪 -1-甲酸叔丁酯(710mg,62％)，灰白色固体。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ8.01(d,J＝9.6Hz,2H),6.97(d,J＝9.2Hz,2H),3.84(m,2H), 2.95-2.50(m,4H),2.40(m,1H),2.30(br,1H),1.00(d,J＝6.0Hz,3H)； ESI-MS：(C11H15N3O2)计算值221，实测值222(MH⁺)。

步骤2：在10％Pd/C(70mg)存在下通过使用H₂气球氢化(S)-4-(4- 硝基苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯在甲醇(30mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供浅黄色固体状标题化合物(S)-4-(4-氨基苯基)-2-甲基哌嗪 -1-甲酸叔丁酯(0.62g,97％)。将产物直接用于下一步骤而不进一步纯化。 ESI-MS：(C13H21N3)计算值219，实测值220(MH⁺)。

步骤3：将中间体2(150mg,0.47mmol)、(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(LN927,0.05g,0.016mmol)和DIPEA(60uL,0.037mmol)在DMSO (3.0ml)中的混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且完成反应。将混合物添加至饱和NH₄Cl/水(25ml/50ml ml)并且在室温搅拌30min。使用2N HCl将混合物的pH调节至约6。在用冰冷却1h之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤，以产生粗产物。将粗产物悬浮在DCM(10ml)中并且添加1ml的TFA(混合物变成清澈溶液)。将混合物在室温搅拌过夜。将在水中的磷酸钾添加至混合物(pH约8)并且用DCM/MeOH萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，浓缩并且通过柱在硅胶上纯化(5-15％MeOH 于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(97mg,45％收率)。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.90(br,1H),8.24(s,1H),7.32(d, J＝8.8Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H), 6.34(s,1H),3.14(m,4H),2.99(m,4H),2.41(s,3H)(NH可能隐藏在溶剂峰下)；ESI-MS：(C24H21F2N7O)计算值461，实测值462(MH⁺)。

化合物34

步骤1：向4-氟硝基苯(0.5g,3.54mmol)在AcN(30mL)中的溶液添加(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.71g,3.54mmol)和DIEA(0.74mL, 4.25mmol)。将混合物回流15h(在密封的管中)。在冷却之后，将所得混合物倒入水(300ml)中。将混合物在室温搅拌30min。将所得反应混合物用EtOAc(3x30mL)萃取并且经无水Na₂SO₄干燥和在真空中浓缩。将所得粗产物通过Teledyne-Isco快速***通过使用EtOAc/Hex，0至30％的在己烷中的乙酸乙酯纯化，以提供浅黄色固体状期望产物(S)-2-甲基-4-(4- 硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(720mg,63％)，灰白色固体。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δ8.01(d,J＝9.6Hz,2H),6.97(d,J＝9.2Hz,2H),3.84(m, 2H),2.95-2.50(m,4H),2.40(m,1H),2.30(br,1H),1.00(d,J＝6.0Hz,3H)； ESI-MS：(C11H15N3O2)计算值221，实测值222(MH⁺)。

步骤2：在10％Pd/C(70mg)存在下通过使用H₂气球氢化(S)-2-甲基-4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.7g)在甲醇(30mL)中的溶液。在 16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供浅黄色固体状标题化合物(S)-4-(4-氨基苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.61g,95％)。将产物直接用于下一步骤而不进一步纯化。ESI-MS：(C13H21N3)计算值219，实测值220(MH⁺)。

步骤3：将中间体3(150mg,0.47mmol)、(S)-4-(4-氨基苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.05g,0.016mmol)和DIPEA(60uL,0.037mmol)在 DMSO(3.0ml)中的混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且完成反应。将混合物添加至饱和NH₄Cl/水(25ml/50ml ml)并且在室温搅拌30min。使用2N HCl将混合物的pH调节至约6。在用冰冷却1h之后，通过过滤收集固体，通过水洗涤，以产生粗产物。将粗产物悬浮在DCM(10ml) 中并且添加1ml的TFA(混合物变成清澈溶液)。将混合物在室温搅拌过夜。将在水中的磷酸钾添加至混合物(pH约8)并且用DCM/MeOH萃取。将合并的有机物通过盐水洗涤，浓缩并且通过柱在硅胶上纯化(5-15％ MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(97mg,45％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.90(br,1H),8.24(s,1H), 7.32(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz, 2H),6.34(s,1H),3.14(m,4H),2.99(m,4H),2.41(s,3H)(NH可能隐藏在溶剂峰下)；ESI-MS：(C24H21F2N7O)计算值461，实测值462(MH⁺)。

化合物35

步骤1：将4-硝基苯胺(1.0g,7.24mmol)和环丙基羰基氯(0.83g,7.96 mmol)溶于干燥THF(30mL)。将DIPEA(3.16mL,18.10mmol)添加至上述反应混合物并且在室温搅拌过夜。将混合物在室温搅拌30min。将所得粗混合物用EtOAc(3x30mL)萃取并且经无水Na₂SO₄干燥和在真空中浓缩。将所得粗产物通过Teledyne-Isco快速***通过使用EtOAc/Hex， 0至30％的在己烷中的乙酸乙酯纯化，以提供灰白色固体状期望产物(4- 硝基苯基)环丙烷甲酰胺(880mg,62％)。ESI-MS：(C10H10N2O3)计算值 206，实测值207(MH⁺)。

步骤2：在10％Pd/C(70mg)存在下通过使用H₂气球氢化(4-硝基苯基)环丙烷甲酰胺(0.7g)在甲醇(30mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供浅黄色固体状标题化合物(4-氨基苯基)环丙烷甲酰胺。将产物直接用于下一步骤而不进一步纯化。

步骤3：将烧瓶装入FA425_1(100mg,0.312mmol)、N-(4-氨基苯基) 环丙烷甲酰胺(LN933_1,0.055g,0.312mmol)、DIPEA(60uL)、DMSO(2 mL)。将在室温搅拌过夜。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于 DCM中)，以提供浅黄色固体状期望产物(85mg,54％收率)。¹HNMR (400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.86(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d, J＝8.4Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H), 6.34(s,1H),3.51(m,2H),2.84(m,2H),2.41(s,3H),2.11(m,2H),1.03(s, 3H),1.01(s,3H)；ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490 (MH⁺)。

化合物36

向4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.330mmol)和4-氨基苯甲酰胺(47mg,0.34mmol)在无水DMSO(1.5mL) 中的混合物添加TEA(0.13mL；0.93mmol)并且将所得双相混合物在室温在氩气气氛下高效搅拌约17h。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用0.5–15％的在DCM中的MeOH(v/v)纯化，以提供白色固体状期望产物(42mg,32％收率)。¹HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.85 (br s,1H),10.22(br s,1H),8.35(s,1H),7.91(br s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz, 2H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(br s,1H),7.04–7.00(m,1H),6.35(s, 1H),2.42(s,3H)；MS(ESI)：C21H14F2N6O2计算值420，实测值421 (MH⁺)。

化合物37

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和4-氨基-N-甲基苯甲酰胺(45mg,0.30mmol)在无水DMSO (1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用0.5–15％的在DCM中的MeOH(v/v)纯化，以提供白色固体状期望产物(18mg,17％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.85 (br s,1H),10.23(br s,1H),8.37–8.34(m,2H),7.81(d,J＝8.8Hz,2H), 7.64–7.62(m,2H),7.04–7.00(m,1H),6.35(s,1H),2.78(d,J＝4.0Hz,3H),2.42(s,3H)；MS(ESI)：C22H16F2N6O2计算值434，实测值435(MH⁺)。

化合物38

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和4-氨基-N,N-二甲基苯甲酰胺(49mg,0.30mmol)在无水 DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。使所得残余物通过结晶 (DCM)纯化，以提供白色固体状期望产物(49mg,44％收率)。¹H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.85(br s,1H),10.20(brs,1H),8.33(s,1H), 7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.04–7.00(m,1H),6.35(s, 1H),2.97(s,6H),2.42(s,3H)；MS(ESI)：C23H18F2N6O2计算值448，实测值449(MH⁺)。

化合物39

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和4-氟苯胺(33mg,0.30mmol)在无水DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过结晶(DCM)纯化，以提供白色固体状期望产物(65mg,66％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 11.84(br s,1H),10.10(br s,1H),8.29(s,1H),7.54–7.51(m,2H), 7.23–7.29(m,2H),7.03–6.99(m,1H),6.34(s,1H),2.42(s,3H)；MS(ESI)： C20H12F3N5O计算值395，实测值396(MH⁺)。

化合物40

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和4-氯苯胺(33mg,0.30mmol)在无水DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过结晶(DCM)纯化，以提供白色固体状期望产物(65mg,44％收率).¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 11.85(br s,1H),10.15(br s,1H),8.34(d,J＝1.2Hz,1H),7.59–7.57(m, 2H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),7.04–7.00(m,1H),6.35(s,1H),2.42(s,3H)； MS(ESI)：C20H12ClF2N5O计算值411，实测值412(MH⁺)。

化合物41

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和1-(4-氨基苯基)吡咯烷-2-酮(53mg,0.30mmol)在无水 DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过结晶 (DCM)纯化，以提供白色固体状期望产物(56mg,49％收率)。¹H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.34(br s,1H),10.07(brs,1H),8.26(s,1H), 7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.48(d,J＝8.8Hz,2H),7.03–6.99(m,1H),6.34(s, 1H),3.84(t,J＝6.8Hz,2H),2.50–2.48(m,2H；被DMSO信号遮蔽),2.42 (s,3H),2.11–2.03(m,2H)；MS(ESI)：C24H18F2N6O2计算值460，实测值461(MH⁺)。

化合物42

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和1H-吲哚-5-胺(40mg,0.30mmol)在无水DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用 0.5–15％的在DCM中的MeOH(v/v)纯化，以提供白色固体状期望产物 (32mg,33％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.83(br s,1H), 11.14(br s,1H),10.00(br s,1H),8.21(s,1H),7.58(s,1H),7.39–7.36(m, 2H),7.14–7.11(m,1H),7.03–6.99(m,1H),6.44–6.42(m,1H),6.34(s,1H),5.76(d,J＝0.8Hz,1H),2.41(s,3H)；MS(ESI)：C22H14F2N6O计算值 416，实测值417(MH⁺)。

化合物43

向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(80mg,0.25mmol)和1H-吲哚-5-胺(40mg,0.30mmol)在无水DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.122mL；0.875mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌约3天。所得混合物用EtOAc(100mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用 0.5–15％的在DCM中的MeOH(v/v)纯化，以提供白色固体状期望产物 (32mg,33％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.84(br s,1H), 9.76(br s,1H),9.57(br s,1H),8.24(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H), 7.13–7.09(m,1H),7.02–6.98(m,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.84–6.80 (m,1H),6.34(d,J＝3.2Hz,1H),2.41(s,3H)；MS(ESI)：C20H13F2N5O2 计算值393，实测值394(MH⁺)。

化合物44

将4-氯-6-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.31mmol)、4-硝基苯胺(47mg,0.34mmol)、Pd(OAc)₂(10mg,0.045 mmol)、xantphos(45mg,0.078mmol)、K₂CO₃(150mg,1.09mmol)和无水二噁烷(12mL)的混合物密封在可在微波中使用的管中并且用氩气脱气10min。然后在微波辐射下将混合物加热至120℃维持20min。将混合物冷却至室温并且在EtOAc与NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％饱和NaHCO₃)之间分配，并且分离有机层，经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物提取至EtOAc中，过滤并且用另外的EtOAc洗涤以生成浅黄色固体状期望产物(54mg,41％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.86(br s,1H),10.59(br s,1H),8.47(s,1H),8.26–8.23(m,2H), 7.92–7.88(m,2H),7.06–7.02(m,1H),6.36(s,1H),2.42(s,3H)；MS(ESI)： C20H12F2N6O3计算值422，实测值423(MH⁺)。

化合物45

步骤1：向4-氟硝基苯(3g,21.26mmol)在AcN(60mL)中的溶液添加顺式-2,6-二甲基哌嗪(2.55g,22.32mmol)和DIEA(3.90mL,22.32 mmol)。将混合物搅拌并且回流18h。冷却所得混合物直至室温并且蒸发以提供。添加EtOAc和水。将混合物用EtOAc萃取三次。将有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将残余物从EtOAc中结晶以产生副产物的翻转连接的黄色固体(300mg)。将母液浓缩至最小量的溶剂，然后添加己烷，以形成黄色沉淀物。通过过滤收集固体并且用己烷洗涤，以提供浅黄色固体状期望化合物(3R,5S)-3,5-二甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪 (2.60g,52％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.02(d,J＝9.6Hz,2H),7.02(d,J＝9.2Hz,2H),3.90(m,2H),2.78(m,2H),2.40(m,2H),1.03 (d,J＝5.6Hz,6H)；ESI-MS：(C12H17N3O2)计算值235，实测值236 (MH⁺)。

步骤2：向(3R,5S)-3,5-二甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(600mg,2.55mmol) 在DMF(6mL)中的溶液分批添加氢化钠(60％,122mg g,3.06mmol)并且将混合物在室温搅拌30min，然后添加碘甲烷(0.19ml g,3.06mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且消耗起始原料。将反应混合物分批倒入冷水并且将混合物用EtOAc(3x50ml)萃取。将合并的有机相用水萃取，经硫酸钠干燥并且浓缩，以产生黄色固体状4-((3R,5S)-3,4,5- 三甲基哌嗪-1-基)硝基苯(100mg,15％收率)。不进行进一步纯化。 ESI-MS：(C13H19N3O2)计算值249，实测值250(MH⁺)。

步骤3：在10％Pd/C(10mg)存在下使用H₂气球氢化(3R,5S)-3,5- 二甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(～100mg)在甲醇(20mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供红色固体状期望产物4-((3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基) 苯胺(51mg,9％的两步收率)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。ESI-MS：(C13H21N3)计算值219，实测值220(MH⁺)。

步骤4：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、4-((3R,5S)-3,4,5- 三甲基哌嗪-1-基)苯胺(38mg,0.17mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至80℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(51mg,65％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(br,1H), 9.87(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝ 10.4Hz,1H),6.91(d,J＝9.2Hz,2H),6.34(s,1H),3.54(d,J＝11.2Hz,2H), 2.41(s,3H),2.34(d,J＝11.6Hz,2H),2.24(m,2H),2.19(s,3H),1.07(d, J＝6.0Hz,6H)；ESI-MS：(C27H27F2N7O)计算值503，实测值504(MH⁺)。

化合物46

步骤1：向4-氟硝基苯(1.80g,12.76mmol)在AcN(18mL)中的溶液添加2-甲基哌嗪(3.19g,31.89mmol)和DIEA(3.34mL,19.14mmol)。将混合物在75℃搅拌3h(在密封的管中)。冷却所得混合物直至室温，然后转移至水(300ml)中。将混合物在室温搅拌30min，然后用冰冷却。通过过滤收集固体并且用水洗涤，以提供粗产物，将其通过住色谱法纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望化合物3-甲基-1-(4- 硝基苯基)哌嗪(2.03g,72％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.01 (d,J＝9.6Hz,2H),6.97(d,J＝9.2Hz,2H),3.84(m,2H),2.95-2.50(m,4H), 2.40(m,1H),2.30(br,1H),1.00(d,J＝6.0Hz,3H)；ESI-MS： (C11H15N3O2)计算值221，实测值222(MH⁺)。

步骤2：向3-甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(600mg,2.71mmol)在DMF(6 mL)中的溶液分批添加氢化钠(60％,130mg g,3.25mmol)并且将混合物在室温搅拌30min，然后添加碘甲烷(0.20ml g,3.25mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且消耗起始原料。将混合物分批倒入冷水中并且将混合物用EtOAc(3x50ml)萃取。将组合的有机相用水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩，以通过柱色谱(0-10％MeOH于DCM中)纯化产生黄色油状粗产物。ESI-MS：(C12H17N3O2)计算值235，实测值 236(MH⁺)。

步骤3：在Pd/C(25mg)存在下使用H₂气球氢化4-(3,4-二甲基哌嗪 -1-基)硝基苯在甲醇(～20mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过 Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩成棕色固体状期望产物4-(3,4-二甲基哌嗪-1-基)苯胺(398mg,两步收率72％)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 6.65(d,J＝8.4Hz,2H),6.45(d,J＝8.0Hz,2H),4.51(br,2H),3.17(m,2H),2.74(m,1H),2.57(m,1H),2.30-2.00(m,5H),0.98(d,J＝6.0Hz,3H)； ESI-MS：(C12H19N3)计算值205，实测值206(MH⁺)。

步骤4：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、4-(3,4-二甲基哌嗪 -1-基)苯胺(35mg,0.17mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至80℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用DCM/ (10mlx3)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(60mg,79％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.88(br,1H), 8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H), 6.90(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s,1H),3.51(m,2H),2.83-2.70(m,2H),2.41(s, 3H),2.36(t,J＝10.4Hz,1H),2.30-2.05(m,5H),1.03(d,J＝6.4Hz,3H)； ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490(MH⁺)。

化合物47

步骤1：向4-氟硝基苯(3g,21.26mmol)在AcN(60mL)中的溶液中添加顺式-2,6-二甲基哌嗪(2.55g,22.32mmol)和DIEA(3.90mL,22.32 mmol)。将混合物搅拌并且回流18h。冷却所得混合物直至室温和蒸发以提供。添加EtOAc和水。将混合物用EtOAc萃取三次。将有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将残余物从EtOAc中结晶以产生副产物的翻转连接的黄色固体(300mg)。将母液浓缩至最小量的溶剂，然后添加己烷，以形成黄色沉淀物。通过过滤收集固体并且用己烷洗涤，以提供浅黄色固体状期望化合物(3R,5S)-3,5-二甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(2.60 g,52％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.02(d,J＝9.6Hz,2H), 7.02(d,J＝9.2Hz,2H),3.90(m,2H),2.78(m,2H),2.40(m,2H),1.03(d, J＝5.6Hz,6H)；ESI-MS：(C12H17N3O2)计算值235，实测值236(MH⁺)。

步骤2：向(3R,5S)-3,5-二甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(650mg,2.76mmol) 和碘乙烷(453mg,2.90mmol)在DMF(6mL)中的溶液添加碳酸钾(573 mg g,4.15mmol)并且将混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且消耗起始原料。将混合物倒入冷水并且用DCM(3x15ml)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥和浓缩，以产生粗产物，将其通过柱层析纯化(0-10％的MeOH于DCM中)，以产生黄色油。ESI-MS：(C14H21N3O2)计算值263，实测值264(MH⁺)。

步骤3：在Pd/C(50mg)存在下使用H₂气球氢化上述制备的硝基苯在甲醇(～30mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供棕色固体状期望产物4-((3R,5S)-4-乙基-3,5-二甲基哌嗪-1-基)苯胺(520mg，两步收率81％)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.65(d,J＝7.2Hz,2H),6.47(d,J＝7.6Hz,2H),4.52(br,2H), 3.20(d,J＝10.8Hz,2H),2.81(q,J＝7.2Hz,2H),2.66(m,2H),2.18(t, J＝10.4Hz,2H),1.00(d,J＝6.4Hz,6H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)；ESI-MS： (C14H23N3)计算值233，实测值234(MH⁺)。

步骤4：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、4-((3R,5S)-4-乙基 -3,5-二甲基哌嗪-1-基)苯胺(40mg,0.17mmol)、TFA(50uL)、异丙醇 (5mL)。将反应加热至80℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(65mg,80％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84 (br,1H),9.87(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(dd, J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s,1H),3.54(d, J＝11.6Hz,2H),2.85(q,J＝7.2Hz,2H),2.67(m,2H),2.41(s,3H),2.33(t, J＝10.8Hz,2H),1.05(d,J＝6.0Hz,6H),0.86(t,J＝7.2Hz,3H)；ESI-MS：(C28H29F2N7O)计算值517，实测值518(MH⁺)。

化合物48

步骤1：向4-氟硝基苯(1.80g,12.76mmol)在AcN(18mL)中的溶液添加2-甲基哌嗪(3.19g,31.89mmol)和DIEA(3.34mL,19.14mmol)。将混合物在75℃搅拌3h(在密封的管中)。冷却所得混合物直至室温，然后转移至水(300ml)中。将混合物在室温搅拌30min，然后用冰冷却。通过过滤收集固体并且用水洗涤，以提供粗产物，将其通过柱层析纯化(0-10％ MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望化合物3-甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(2.03g,72％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.01(d, J＝9.6Hz,2H),6.97(d,J＝9.2Hz,2H),3.84(m,2H),2.95-2.50(m,4H),2.40 (m,1H),2.30(br,1H),1.00(d,J＝6.0Hz,3H)；ESI-MS:计算值 (C11H15N3O2)221，实测值222(MH⁺)。

步骤2：向3-甲基-1-(4-硝基苯基)哌嗪(610mg,2.76mmol)和碘乙烷 (452mg,2.89mmol)在DMF(6mL)中的溶液添加碳酸钾(572mg g,4.14 mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。检查TLC并且消耗起始原料。将混合物倒入冷水并且用DCM(3x15ml)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥和浓缩，以产生粗产物，将其通过柱层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以产生黄色油状1-乙基-2-甲基-4-(4-硝基苯基)哌嗪。ESI-MS： (C13H19N3O2)计算值249，实测值250(MH⁺)。

步骤3：在Pd/C(50mg)存在下使用H₂气球氢化1-乙基-2-甲基-4-(4- 硝基苯基)哌嗪在甲醇(～30mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供棕色油状期望产物(560mg，两步收率92％)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.66(d,J＝8.4Hz,2H),6.48(d,J＝8.0Hz,2H),4.53(br,2H),3.15(m,2H),2.85-2.70(m,2H),2.60 (m,1H),2.48-2.20(m,4H),1.00(d,J＝6.0Hz,3H),0.97(t,J＝7.2Hz,3H)； ESI-MS：(C13H21N3)计算值219，实测值220(MH⁺)。

步骤4：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、胺(38mg,0.17 mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至80℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH 于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(63mg,80％收率)。¹H NMR (400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.88(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d, J＝8.8Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H), 6.34(s,1H),3.44(m,2H),3.00-2.70(m,3H),2.50-2.20(m,7H),1.05(d, J＝5.2Hz,3H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)；ESI-MS：(C27H27F2N7O)计算值 503，实测值504(MH⁺)。

化合物49

步骤1：在Pd/C(28mg)存在下使用H₂气球氢化(2S,6R)-2,6-二甲基 -1-(4-硝基苯基)哌嗪(290mg,1.23mmol)在甲醇(～20mL)中的溶液。在16 h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供紫色固体状期望产物(265mg,100％收率)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 6.72(d,J＝7.2Hz,2H),6.50(d,J＝7.2Hz,2H),4.60(br,2H),3.50-3.20(m,6H),2.55(m,1H),1.26(d,J＝6.0Hz,3H)；ESI-MS：(C12H19N3)计算值 205，实测值206(MH⁺)。

步骤2：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、4-((2S,6R)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)苯胺(35mg,0.17mmol)、TFA(50uL)、异丙醇(5mL)。将反应加热至100℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用 DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(50mg,65％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.87 (br,1H),8.23(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4 Hz,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s,1H),3.51(d,J＝9.6Hz,2H),2.84 (m,2H),2.41(s,3H),2.11(t,J＝10.8Hz,2H),1.02(d,J＝6.0Hz,6H),(NH，缺少)；ESI-MS：(C26H25F2N7O)计算值489，实测值490(MH⁺)。

化合物50

步骤1：向4-氟硝基苯(0.61ml,5.71mmol)在AcN(6mL)中的溶液添加八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(600mg,4.75mmol)和DIEA(1.2mL,7.13 mmol)。将混合物在75℃搅拌过夜(在密封的管中)。冷却所得混合物至室温，然后浓缩。将粗产物通过柱色谱法纯化(0-5％MeOH于DCM中)，以提供黄色油状期望化合物(1.09g,92％收率)。ESI-MS：(C13H17N3O2) 计算值247，实测值248(MH⁺)。

步骤2：在10％Pd/C(0.08g)存在下使用H₂气球氢化上述制备的硝基苯(1.09g,4.41mmol)在甲醇(30mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供红色固体状期望产物(0.93g,4.28mmol,92％)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.69(d, J＝6.8Hz,2H),6.47(d,J＝6.8Hz,2H),4.53(br,2H),3.41(d,J＝10.8Hz,1H), 3.27(d,J＝10.8Hz,1H),2.98(m,2H),2.58(t,J＝10.8Hz,1H),2.30-2.00(m, 4H),1.85-1.65(m,3H),1.32(m,1H)；ESI-MS：(C13H19N3)计算值217，实测值218(MH⁺)。

步骤3：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、苯胺(39mg,0.18 mmol)、TFA(25uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％MeOH 于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(56mg,72％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.88(br,1H),8.23(s,1H),7.30(d, J＝8.4Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H), 6.34(s,1H),3.76(d,J＝10.8Hz,1H),3.62(d,J＝11.6Hz,1H),3.03(m,2H), 2.73(t,J＝11.6Hz,1H),2.41(s,3H),2.40-2.30(m,1H),2.22(t,J＝8.0Hz, 1H),2.12-2.08(m,2H),1.90-1.60(m,3H),1.42-1.32(m,1H)；ESI-MS： (C27H25F2N7O)计算值501，实测值502(MH⁺)。

化合物51

步骤1：4-氟硝基苯(0.55ml,5.13mmol)在AcN(6mL)中的溶液添加八氢-1H-吡啶并[1,2-a]吡嗪(600mg,4.28mmol)和DIEA(1.1mL,6.42 mmol)。将混合物在75℃搅拌过夜(在密封的管中)。冷却所得混合物至室温，然后浓缩。将粗产物通过柱色谱法纯化(0-5％MeOH于DCM中)，以提供黄色油状期望产物(1.03g,92％收率)。ESI-MS：(C14H19N3O2) 计算值261，实测值262(MH⁺)。

步骤2：在10％Pd/C(0.08g)存在下使用H₂气球氢化上述硝基苯 (1.03g,3.94mmol)在甲醇(30mL)中的溶液。在16h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(3x15mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供红色固体状期望产物(0.89g,7.85mmol,92％)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.65(d,J＝6.8Hz,2H),6.47(d,J＝6.8Hz,2H),4.52(br,2H),3.23(d,J＝10.8Hz,1H),3.16(d, J＝10.8Hz,1H),2.72(m,2H),2.56(t,J＝11.2Hz,1H),2.19(m,2H),1.93(t, J＝10.8Hz,2H),1.75-1.35(m,4H),1.30-1.00(m,2H)；ESI-MS： (C14H21N3)计算值231，实测值232(MH⁺)。

步骤3：向烧瓶装入中间体2(50mg,0.16mmol)、上述制备的苯胺(42 mg,0.18mmol)、TFA(25uL)、异丙醇(3mL)。将反应加热至100℃过夜。将反应混合物用饱和磷酸钾水溶液碱化，然后用DCM/(10mlx3)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥和浓缩。将粗产物用快速层析纯化(0-10％ MeOH于DCM中)，以提供黄色固体状期望产物(62mg,77％收率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.83(br,1H),9.87(br,1H),8.23(s,1H), 7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.00(dd,J＝5.6Hz,J＝10.4Hz,1H),6.91(d, J＝7.6Hz,2H),6.33(s,1H),3.70-3.40(m,2H),2.90-2.60(m,3H),2.41(s, 3H),2.40-2.10(m,2H),2.00-1.90(m,2H),1.80-1.10(m,5H)；ESI-MS： (C28H27F2N7O)计算值515，实测值516(MH⁺)。

化合物52

将QW823(粗品，70mg,0.22mmol)、N-(3-氨基苯基)丙酰胺(43mg, 0.26mmol)和DIPEA(0.08ml,0.44mmol)在DMSO(2ml)中的混合物在室温搅拌2小时。检查TLC并且完成反应。添加乙酸乙酯(15ml)，然后添加NH4Cl(20mL)。在分离之后，将水相用EtOAc(15mlx1)萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥和浓缩。将粗产物通过柱在硅胶上纯化 (0-10％MeOH于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(57mg,58％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.84(br,1H),10.10(br,1H),9.91 (s,1H),8.31(s,1H),7.84(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.27(t,J＝8.0Hz, 1H),7.18(d,J＝8.0Hz,1H),7.00(dd,J＝5.2Hz,J＝10.4Hz,1H),6.34(s,1H), 2.42(s,3H),2.32(q,J＝7.6Hz,2H),1.08(t,J＝7.6Hz,3H)；ESI-MS：(C23H18F2N6O2)计算值448，实测值449(MH⁺)。

化合物53

步骤1：向3-硝基苯胺(5.00g,36.2mmol)在干燥THF(50mL)中的溶液添加TEA(7.50mL,54.3mmol)。将混合物在室温搅拌10min，然后在0℃滴加丙烯酰氯(7.38mL,90.50mmol)。然后将混合物在室温搅拌 4小时。通过碳酸氢钠猝灭所得混合物并用EtOAc萃取三次。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。将粗产物从EtOAc/己烷中结晶，以产生黄色固体状期望产物(3.37g,48％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.65(br,1H),8.71(s,1H),8.00-7.90(m, 2H),7.63(t,J＝8.0Hz,1H),6.50-6.30(m,2H),5.84(d,J＝10.0Hz,1H)； ESI-MS：(C9H8N2O3)计算值192，实测值193(MH⁺)。

步骤2：向N-(3-硝基苯基)丙烯酰胺(2.06g,10.72mmol)在MeOH(40 mL)与THF(40mL)的混合物中添加氯化锡(II)二水合物(12.09g,53.60 mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩。将残余物用饱和Na2CO3 水溶液处理至pH＝10-11。将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥和浓缩。将残余物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。(黄色油，1.49g,85％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆) δ9.81(br,1H),6.99(s,1H),6.95(t,J＝9.2Hz,1H),6.76(d,J＝7.6Hz,1H), 6.41(m,1H),6.30-6.10(m,2H),5.6(d,J＝10.4Hz,1H),5.07(br,2H)； ESI-MS：(C9H10N2O)计算值162，实测值163(MH⁺)。

步骤3：将中间体2(粗品,70mg,0.22mmol)、苯胺(43mg,0.26mmol) 和DIPEA(0.08ml,0.44mmol)在DMSO(2ml)中的混合物在室温搅拌2 小时。检查TLC并且完成反应。添加乙酸乙酯(15ml)，然后添加NH4Cl (20mL)。在分离之后，将水相用EtOAc(15mlx1)萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥和浓缩。将粗产物通过柱在硅胶上纯化(0-10％MeOH 于DCM中)，以产生黄色固体状期望产物(50mg,51％收率)。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δ11.84(br,1H),10.20(br,1H),10.14(s,1H),8.32(s, 1H),7.93(s,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(t,J＝8.0Hz,1H),7.23(d, J＝8.0Hz,1H),7.00(dd,J＝5.2Hz,J＝10.4Hz,1H),6.46(dd,J＝10.0Hz, J＝17.2Hz,1H),6.34(s,1H),6.26(d,J＝16.8Hz,1H),5.76(d,J＝10.0Hz,1H),2.42(s,3H)；ESI-MS：(C23H16F2N6O2)计算值446，实测值447 (MH⁺)。

化合物54

将4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.31mmol)、4-氨基苯甲酸甲酯(47mg,0.34mmol)、Pd(OAc)₂(10mg, 0.045mmol)、xantphos(45mg,0.078mmol)、K₂CO₃(150mg,1.09mmol) 和无水二噁烷(12mL)的混合物密封在可在微波中使用的管中并且用氩气脱气10min。然后在微波辐射下将混合物加热至120℃维持20min。将混合物冷却至室温并且在EtOAc与NaHCO₃水溶液(每次约100mL； 50％饱和NaHCO₃)之间分配。分离有机层并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供白色固体状期望产物(68mg,50％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.85 (br s,1H),10.39(br s,1H),8.38–8.37(m,1H),7.95–7.93(m,2H), 7.75–7.73(m,2H),7.04–7.00(m,1H),6.35(s,1H),3.84(s,3H),2.42(s, 3H)；MS(ESI)：C22H15F2N5O3计算值435，实测值436(MH⁺)。

化合物55

将4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(100mg,0.31mmol)、4-氨基苯甲腈(40mg,0.34mmol)、Pd(OAc)₂(10mg,0.045 mmol)、xantphos(45mg,0.078mmol)、K₂CO₃(150mg,1.09mmol)和无水二噁烷(12mL)的混合物密封在可在微波中使用的管中并且用氩气脱气10min。然后在微波辐射下将混合物加热至120℃维持20min。将混合物冷却至室温并且在EtOAc和NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％ NaHCO₃饱和度)之间分配。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供白色固体状期望产物(58mg,45％收率).¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.85 (br s,1H),10.48(br s,1H),8.38(s,1H),7.81–7.77(m,4H),7.04–7.00(m, 1H),6.35(d,J＝0.8Hz,1H),2.42(s,3H)；MS(ESI):计算值 C21H12F2N6O:402，实测值403(MH⁺)。

化合物56

步骤1：向4-硝基苯胺(3.0g,22mmol)和TEA(9.2mL,66mmol)在 THF(100mL)中的混合物添加丙烯酰氯(1.9mL；24mmol)，和使混合物升温至室温并且搅拌17h。然后添加另外的TEA(9.2mL,66mmol)和丙烯酰氯(1.9mL；24mmol)和将混合物搅拌另外2h。将混合物在EtOAc 和NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)之间分配并将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供黄色固体状期望产物(1.9g,45％收率)。 ¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.76(br s,1H),8.25–8.23(m,2H), 7.93–7.91(m,2H),6.51–6.44(m,1H),6.37–6.32(m,1H),5.88–5.85(m, 1H)；MS(ESI)：C9H8N2O3计算值192，实测值193(MH⁺)。

步骤2：向N-(4-硝基苯基)丙烯酰胺(800mg,4.16mmol)在5:1EtOH/ 水(21mL)中的悬浮液添加铁粉(469mg,8.40mmol)和饱和NH4Cl水溶液(2.1mL)，并将混合物在80℃搅拌3h。然后添加另外添加的铁粉(500 mg,8.95mmol)和NH4Cl粉末(700mg,13.1mmol)并将混合物搅拌另外 17h。将混合物在EtOAc和NaHCO₃水溶液(每次100mL)之间分配并将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩。将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用0.5–15％的在DCM中的MeOH(v/v)纯化，以提供黄色固体状期望产物(216mg,32％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 9.71(br s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),6.51(d,J＝8.0Hz,2H),6.40–6.33(m,1H),6.18–6.13(m,1H),5.66–5.63(m,1H)；MS(ESI)：C9H10N2O计算值162，实测值163(MH⁺)。

步骤3：向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(230mg,0.71mmol)和N-(4-氨基苯基)丙烯酰胺(120mg,1.0mmol)在无水DMSO(5.0mL)中的混合物添加DIPEA(0.43mL；2.5mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌20h。将所得混合物用1:9 MeOH/EtOAc(100mL)稀释并且用NH₄Cl水溶液(约100mL；50％ NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(100mL)洗涤。将有机层分离并且经无水 Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供灰白色固体状期望产物(219mg,69％收率)。¹HNMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.84(br s,1H),10.18(br s,1H),10.04(br s,1H), 8.29(d,J＝0.4Hz,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,2H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H), 7.03–6.99(m,1H),6.47–6.41(m,1H),6.34–6.24(m,2H),5.77–5.74(m, 1H),2.42(s,3H)；MS(ESI)：C23H16F2N6O2计算值446，实测值447 (MH⁺)。

化合物57

步骤1：向N-(4-硝基苯基)丙酰胺(1.00g,5.15mmol)在MeOH(100 mL)中的溶液添加10％Pd/C(100mg)并将所得混合物在H₂(1atm)小搅拌21h。然后将混合物在Celite上过滤和浓缩，以提供橙色油状期望产物(858mg,约100％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.39(br s, 1H),7.20(d,J＝8.8Hz,2H),6.48(d,J＝8.4Hz,2H),4.79(br s,2H),2.22 (q,J＝7.6Hz,2H),1.05(t,J＝7.6Hz,3H)。

步骤2：向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈 (80mg,0.25mmol)和N-(4-氨基苯基)丙酰胺(69mg,0.42mmol)在无水 DMSO(1.5mL)中的混合物添加TEA(0.10mL；0.75mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌20h。将所得混合物用1:9MeOH/EtOAc (100mL)稀释并且用NH₄Cl水溶液(约10mL；50％NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(10mL)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供灰白色固体状期望产物(69mg,62％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.83 (br s,1H),10.00(br s,1H),9.89(br s,1H),8.27(d,J＝0.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),7.03–6.99(m,1H),6.34(s, 1H),2.41(s,3H),2.32(q,J＝7.6Hz,2H),1.09(t,J＝7.6Hz,3H)；MS (ESI)：C23H18F2N6O2计算值448，实测值449(MH⁺)。

化合物58

步骤1：向在0℃搅拌的4-硝基苯胺(5.0g,36mmol)和TEA(5.0mL, 36mmol)在THF(100mL)中的混合物添加2-氯乙酰氯(1.9mL；24mmol) 并使混合物升温至室温和搅拌17h。将混合物在1:9MeOH/EtOAc与 NaHCO₃水溶液(每次约100mL；50％NaHCO₃饱和度)之间分配并将有机层用盐水(约100mL；50％饱和度)洗涤，分离并经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，因此形成沉淀物。将沉淀物过滤并且用EtOAc洗涤，以提供黄色固体状期望产物2-氯-N-(4-硝基苯基)乙酰胺(6.17g,80％收率)。¹H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ10.90(br s,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,2H),7.84(d, J＝9.2Hz,2H),4.34(s,2H)；MS(ESI)：C8H7ClN2O3计算值214，实测值为弱信号。

步骤2：将2-氯-N-(4-硝基苯基)乙酰胺(500mg,2.33mmol)和吗啉(2.0 mL,23mmol)在异丙醇(约5mL)中的混合物在80℃搅拌约17h。将混合物在EtOAc和NaHCO₃水溶液(每次约10mL；50％NaHCO₃饱和度) 之间分配，将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥，以提供黄色固体状期望产物(323mg,52％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.36(br s, 1H),8.24–8.21(m,2H),7.92–7.89(m,2H),3.63(d,J＝3.2Hz,4H),3.31 (br s,4H),3.21(s,2H)；MS(ESI)：C12H15N3O4计算值265，实测值 266(MH⁺)。

步骤3：向2-吗啉代-N-(4-硝基苯基)乙酰胺(320mg,1.21mmol)在 MeOH(70mL)中的溶液添加10％Pd/C(80mg)并将所得混合物在H₂(1 atm)下搅拌23h。然后在Celite上过滤混合物并且浓缩，以提供橙色油状期望产物(314mg,约100％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 9.28(br s,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,2H),6.50(d,J＝8.8Hz,2H),4.86(br s,2H),3.64–3.62(m,4H),3.04(s,2H),2.51–2.47(m,4H)；MS(ESI):计算值C12H17N3O2:235，实测值236(MH⁺)。

步骤4：向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈 (80mg,0.25mmol)和N-(4-氨基苯基)-2-吗啉代乙酰胺(68mg,0.29mmol) 在无水DMSO(1.5mL)中的混合物添加DIPEA(0.15mL；0.87mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌1.5天。所得混合物用1:9 MeOH/EtOAc(10mL)稀释并且用NH₄Cl水溶液(约10mL；50％NH₄Cl 饱和度)，然后用盐水(10mL)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，以提供灰白色固体状期望产物(142mg,约100％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.84(s,1H),10.03(s,1H),9.77(s,1H), 8.28(s,1H),7.63–7.61(m,2H),7.44(d,J＝8.8Hz,2H),7.03–6.99(m,1H),6.34(br s,1H),3.65–3.63(m,4H),2.54–2.52(m,4H；被DMSO信号遮蔽), 2.41(s,3H)；MS(ESI)：C26H23F2N7O3计算值519，实测值520(MH⁺)。

化合物59

步骤1：将2-氯-N-(4-硝基苯基)乙酰胺(500mg,2.33mmol)和N-甲基哌嗪(2.6mL,23mmol)在异丙醇(约5mL)中的混合物在80℃搅拌约17h。将混合物在EtOAc和NaHCO₃水溶液(每次约10mL；50％NaHCO₃饱和度)之间分配，和将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥，以提供黄色固体状期望产物(513mg,79％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 10.32(br s,1H),8.23–8.21(m,2H),7.91–7.89(m,2H),3.31(s,2H),2.51 (br s,4H),2.33(br s,4H),2.17(s,3H)；MS(ESI)：C13H18N4O3:278，实测值279(MH⁺)。

步骤2：向2-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-硝基苯基)乙酰胺(500mg,1.80 mmol)在MeOH(70mL)中的溶液添加10％Pd/C(75mg)并将所得混合物在H₂(1atm)下搅拌19h。然后将混合物在Celite上过滤和浓缩，以提供灰白色固体状期望产物(456mg,约100％收率)。¹HNMR(DMSO-d6, 400MHz)δ9.21(br s,1H),7.22(d,J＝8.8Hz,2H),6.49(d,J＝8.4Hz, 2H),4.86(br s,2H),3.01(s,2H),2.50(br s,4H),2.36(br s,4H),2.16(s, 3H)；MS(ESI)：C13H20N4O计算值248，实测值249(MH⁺)。

步骤3：向4-氯-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈 (80mg,0.25mmol)和N-(4-氨基苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰胺(71mg, 0.29mmol)在无水DMSO(1.5mL)中的混合物添加DIPEA(0.15mL； 0.87mmol)并且将所得双相混合物在室温高效搅拌18h。将所得混合物用1:9MeOH/EtOAc(10mL)稀释并用NH₄Cl水溶液(约10mL；50％ NH₄Cl饱和度)，然后用盐水(10mL)洗涤。将有机层分离并且经无水 Na₂SO₄干燥和浓缩，并将所得残余物通过快速柱层析在硅胶上使用 0–20％的在DCM中的MeOH(v/v)纯化，以提供灰白色固体状期望产物 (54mg,41％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.84(s,1H),10.03 (s,1H),9.71(s,1H),8.28(s,1H),7.63–7.60(m,2H),7.45–7.42(m,2H), 7.03–6.99(m,1H),6.35(br s,1H),2.55–2.52(m,4H；被DMSO信号遮蔽), 2.41(s,3H),2.40–2.37(m,4H),2.17(s,3H)；MS(ESI)：C27H26F2N8O2 计算值532，实测值533(MH⁺)。

化合物60

向4-((4-氨基苯基)氨基)-6-((4,7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-5-甲腈(64mg,0.16mmol)和吡啶(39mg,0.49mmol)在DCM(3.0mL) 中的混合物添加巴豆酰氯(51mg,0.49mmol)。将所得混合物在室温高效搅拌1h，因此其变成均匀的。将所得混合物用EtOAc(10mL)稀释并且用NaHCO₃水溶液(约10mL；50％NaHCO₃饱和度)洗涤。将有机层分离并且经无水Na₂SO₄干燥和浓缩，以提供灰白色固体状期望产物(51mg, 68％收率)。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.84(br s,1H),10.03(s, 1H),9.82(s,1H),8.29(s,1H),7.68–7.65(m,2H),7.46–7.43(m,2H), 7.03–6.99(m,1H),6.34(d,J＝0.8Hz,1H),5.80(s,1H),5.52(s,1H),2.42 (s,3H),1.96(s,3H)；MS(ESI)：C27H26F2N8O2计算值532，实测值533 (MH⁺)。

化合物61

步骤1：向2-氯-5-硝基吡啶(10.00g,63.07mmol)和顺式-2,6-二甲基哌嗪(9.00g,78.84mmol)在DMSO(50ml)中的溶液添加碳酸钾(10.90g, 78.84mmol)。将混合物在50℃搅拌18h。冷却所得混合物直至室温并且添加至包含水/盐水(600ml)的烧瓶。将混合物在室温搅拌30min，然后冷却至0℃。通过过滤收集固体，用水(100mlx3)洗涤。将固体用己烷研磨，通过过滤收集并且在真空线上进一步干燥，以产生黄色固体状产物 (13.82g,92％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.93(d,J＝2.8Hz, 1H),8.17(dd,J＝2.8Hz,J＝9.6Hz,1H),6.94(d,J＝9.6Hz,1H),4.40(br, 2H),2.69(m,2H),2.49-2.30(m,3H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H)；ESI-MS： (C11H16N4O2)计算值236，实测值237(MH⁺)。

步骤2：在10％Pd/C(0.60g)存在下使用H₂气球(3x)氢化QW910 (13.72g,58.07mmol)在甲醇(350mL)中的溶液。在48h之后，将反应混合物通过Celite垫过滤并且用甲醇(250mL)冲洗。将滤液浓缩，以提供紫色固体状期望产物(12.00g,100％收率)。将产物直接用于下一步骤反应而不进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.58(d,J＝2.8Hz,1H), 6.88(dd,J＝8.8Hz,J＝2.8Hz,1H),6.58(d,J＝8.8Hz,1H),4.50(br,2H), 3.80(m,2H),2.75(m,2H),2..02(m,3H),0.98(d,J＝6.0Hz,3H)；ESI-MS： (C11H18N4)计算值206，实测值207(MH⁺)。

步骤3：向在步骤2中制备的苯胺(141mg,0.68mmol)在异丙醇(3mL) 中的溶液添加TFA(50uL)并且充分振动。添加中间体2(200mg,0.62 mmol)在异丙醇(5ml)中的溶液。将反应加热至85℃维持16h。在冷却至室温之后，添加己烷(～8ml)，用冰冷却并且过滤，以产生紫色固体。将固体悬浮在水(50ml)/MeOH(5ml)中并添加饱和NaHCO₃(～20ml) (pH>8)。将混合物在室温搅拌45min，然后用冰冷却。通过过滤收集固体，用水(～5ml)和己烷(10ml)洗涤。获得紫色固体状产物(263mg,86％)。 HPLC为95％并且不进行进一步纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 11.85(br,1H),9.93(br,1H),8.24(s,1H),8.17(d,J＝2.4Hz,1H),7.62(dd, J＝2.4Hz,J＝9.2Hz,1H),7.00(dd,J＝5.2Hz,J＝10.4Hz,1H),6.87(d, J＝9.2Hz,1H),6.34(s,1H),4.22(d,J＝12Hz,2H),2.90(br,2H),2.46-2.00 (m,6H),1.11(d＝6.4Hz,6H)；ESI-MS：(C25H24F2N8O)计算值490，实测值491(MH⁺)。

实施例

提供以下实施例以进一步说明本发明，但是当然不应当解读为以任意形式限制其范围。

实施例1

该实施例测试了来自上文公开的化合物1至化合物61的示例性化合物的激酶抑制活性。大量这些化合物具有在广泛的激酶中的激酶抑制活性。

使用本领域普通技术人员公知的激酶测定规程。具体而言，缓冲液组合物为如下：20mM MOPS、1mM EDTA、0.01％Brij-35、5％甘油、 0.1％β-巯基乙醇、1mg/mL BSA。将测试化合物最初以期望的浓度溶于 DMSO中，然后连续稀释至激酶测定缓冲液。将25μL的最终反应体积的FGFR1(h)(5-10mU)和KDR(h)(5-10mU)用8mM MOPS pH 7.0、0.2 mM EDTA、200μM LRRASLG(Kemptide)、10mM醋酸镁和[γ³³P-ATP] 温育。通过添加MgATP混合物开始反应。在室温温育40分钟后，通过添加5μL的3％磷酸溶液停止反应。然后将10μL反应点至P30过滤垫上，并在50mM磷酸中洗涤三次持续五分钟，和在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。将包含基质但是不包含激酶的孔和包含磷酸肽对照物的孔分别用于设定0％和100％磷酸化值。

表1显示本发明化合物抑制激酶的代表性数据。FGFR1和KDR激酶会被本领域普通技术人员认为与癌症相关。

表1.在两种与癌症相关的激酶中的抑制激酶活性。

实施例2

进行许多研究来分析细胞系中的酪氨酸激酶抑制的结果。为此，将 1000个细胞以27μl/孔接种在384孔微孔板中，然后将其置于在37℃的加湿的CO₂温育器过夜。在下一天添加3μl/孔的10倍浓缩的药物，并将所述板返回温育器维持72小时。在72小时温育之后，移除所述板并且添加6μl/孔CellTiterblue(Promega)可见性试剂。将所述板返回温育器维持3小时，其后在Victor X3读板仪(Perkin Elmer)上读取荧光测量。使用Excel(Microsoft)分析数据，并且使用Prism(Graphpad)测定GI₅₀值。

为了磷-FGFR，使用以下测定规程。将25,000个细胞以90μl/孔接种在96孔微孔板中，然后将其置于在37℃的加湿的CO₂温育器过夜。将 96孔ELISA板(MesoscaleDiscovery)用捕获抗体(R&D Systems Duo-Set) 以4μg/ml，30μl/孔涂布。在下一天添加10μl/孔的10倍浓缩的药物，并将所述板返回温育器维持20min。使用自动化板洗涤机(BioTek Instruments)洗涤ELISA板。在30min之后，将细胞倒置并且轻柔地敲击以除去过量培养基并且立即置于冰上。向每个孔添加30l mPer具有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的细胞溶解试剂(Thermo Scientific)。在冰上15min 之后，将溶解产物混合并将30μl转移至ELISA板。将板温育2小时，洗涤并且添加30μl/孔检测抗体。在1小时之后，洗涤板并且添加30μl “SulfoTag”(MesoScale Discovery)检测试剂。在1小时之后，洗涤板并且添加150μl/孔读数溶液。在Mesoscale Discovery Sector Imager 2000上测定电化学发光。使用Excel(Microsoft)分析数据，使用Prism(Graphpad) 测定EC₅₀值。

表2显示了用于抑制所选择的癌细胞系的代表性GI50数据。本领域普通技术人员认识到每个细胞系是特定类型癌症的替代物。该实施例确认蛋白质激酶抑制剂可以具有对细胞增殖的影响。本领域普通技术人员会惊讶于激酶抑制的特异性。本文中测试的全部激酶抑制剂已与癌症相关。

表2.增殖的抑制

实施例3

在该实施例中，使用AML的技术领域认可的异种移植模型测试本发明的化合物14、17、19、45和48的抗肿瘤活性。(“T/C”是指所治疗的动物中的肿瘤尺寸相比于对照的未治疗的动物中的肿瘤尺寸的比例。 “BWC”是指“体重改变”)。

表3.先导化合物对TG1a人AML异种移植的抗肿瘤效力

“Qdx10”，每天一次维持10天

实施例4

该实施例证实了本发明的实施方案化合物19的生物活性和药物适用性。提供该实施例作为由本申请公开的本发明化合物的特征的示例。然而，该实施例绝不意味着限制所获得的保护范围。

在开发药物的所有步骤中，最难的是找到有希望的化合物(例如参见 Malo等人，"Statistical practice in high-throughput screening data analysis,"NatureBiotechnology,2006,24,167-75)。激酶抑制剂还经常具有抗增殖效果。激酶抑制剂(如实施例2的化合物)的该特征吸引力是它们抑制激酶的突变形式的能力，这已被证明在正常细胞转化成癌细胞中是重要的。使用实施例3中描述的激酶测定测试化合物19的激酶抑制活性。表4和5证实了化合物19的激酶抑制活性。不可预见地，化合物19对成纤维细胞生长因子受体激酶的野生型和突变形式是高度活性的。测试的激酶中的这些突变被认为在一些癌症的转化中具有重要作用。此外，表4还证明了化合物19具有对成纤维细胞生长因子受体激酶的合理选择性。

在开发药物的所有步骤中，最难的是找到有希望的化合物。

表4.PHD

图1证实了在使用专为表达特异性激酶的BaF3细胞的模型***中化合物19相对于特定激酶的激酶抑制剂量响应曲线。在图1中，这些激酶来自成纤维细胞生长因子受体类激酶(FGFR1-FGFR4)。表5中还描述了化合物19激酶抑制活性FGFR1-FGFR4。总体而言，化合物19展示了明显的激酶抑制活性。

表5.化合物19对成纤维细胞生长因子受体激酶的活性

化合物19还具有明显的抗增殖性质。表6汇总了通过实施例2中描述的增殖测定测试的化合物19的结果。

如表6中所示，化合物19针对一些，但非全部测试的细胞系的明显的抗增殖活性。要注意的是，易感细胞的共同特征是其表达成纤维细胞生长因子受体之一。在该测定中，化合物19在由急性髓性白血病(“AML”) 形式制成的细胞系的KG1a中特别有效。

表6.化合物19的细胞活性

癌症	细胞系	EC50(nM)
			急性髓性白血病(AML)	KG1a(mFGFR1)	0.06
急性髓性白血病(AML)	pFGFR1、KG1a	0.49
			胃	pFGFR2、Kato III	0.20
肝	HepG2-C3A	1900
			子宫肉瘤	MES-SA	0.65
胰	BxPC3	>500
			胰	Panc1	>500
子宫颈	Hela	>500

表7中呈现了化合物19在大鼠中的药代动力学特性。本领域普通技术人员会认识到，虽然并非完全预测，但是在其它动物(例如人类患者) 中，这些结果将是相似的。化合物19的药代动力学特性与被用作治疗剂的化合物19一致。

表7.化合物19在大鼠中的药代动力学特性

表7中呈现了在人类、大鼠和小鼠模型***中测定化合物19的代谢半衰期。本领域普通技术人员将会理解这些结果表明化合物19在体内相当稳定。

表8.化合物19的代谢稳定性

表9公开了来自本领域普通技术人员公知的各种毒性测试的化合物 19的毒性数据。这些结果表明没有会暗示反对建立化合物19的第一阶段试验的内容。

表9.化合物19毒性评价

出人意料地发现，化合物19在AML的裸鼠模型中具有明显的抗肿瘤活性。图2证实了两个化合物19剂量测试都导致接近完全地抑制肿瘤细胞扩增。图3证实了被用作毒性的替代标志的动物体重在对照和经化合物19处理的动物之间没有显示区别。这些结果在相同动物模型中的剂量响应研究中得以确认。(值得注意的是，最高剂量的化合物19(20mg/kg) 导致明显的体重减轻，表明存在广泛的毒性，而不是对癌细胞的特异性效果)

总体而言，这些关于化合物19的性能的数据完美地与将该化合物开发成抗增殖/抗肿瘤剂一致。

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本文描述了本发明的优选实施方式，其包括发明人已知最好的进行本发明的方式。当本领域的普通技术人员阅读上述说明书时，那些优选实施方式的变化形式可以成为显而易见的。发明人期望技术人员适当地使用这样的变化形式，并且发明人希望能够以除本文明确描述的内容之外的其它方式实践本发明。因此，本发明包括适用法律允许的权利要求中所叙述主题的所有修改和等同体。另外，除非本文另有标明或与上下文明显抵触矛盾，本发明包括以上所述要素在其所有可能变化形式中的任何组合。