CN107619811A - 植物乳杆菌ccfm200菌株与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种植物乳杆菌CCFM200菌株与应用，该菌株的保藏编号为GDMCC No.60267，其用于制备预防和/或治疗炎症性肠病的药物或食品。本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株可代替药物预防和/或治疗炎症性肠病，且不具有药物的毒副作用。本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株可用作预防和/或治疗炎症性肠病的益生菌、发酵剂和药物，具有非常广泛的应用前景。

Description

植物乳杆菌CCFM200菌株与应用

技术领域

本发明属于微生物的技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌CCFM200菌株与应用。

背景技术

过去在西方国家，炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease，IBD)是一种常见的消化***自身免疫性疾病，其发病率高达每十万人口有5～12个患者，主要症型分为克罗恩病和溃疡性结肠炎。而随着中国国民生活压力提升以及饮食规律变化，国内炎症性肠病的发病率日益上升，比20年前提高了15倍以上，因此越来越多的研究机构和学者对IBD的发病机理及治疗方法进行了深入的探索。目前，IBD多发于青壮年群体，患者会发生强烈的应激性炎症反应，发展成结直肠癌的风险较健康人提高6倍。同时患者有体重骤降、反复腹痛、急性腹泻甚至便血等疾病症状，若延误病情可能导致器官功能衰竭，严重影响人们的工作和生活。另外，数据统计显示仅在欧洲IBD造成的直接医疗成本已经超过60亿人民币，因此IBD是目前全球急需解决的健康难题。

另外，人体内进行消化吸收的一个重要器官是肠道，同时它作为阻止肠道内病原微生物及其产生的有毒物质进入人体内环境的第一道屏障，在人类保持健康过程中起着关键作用。而这种能够阻止肠腔内病原菌和毒素穿过肠黏膜入侵到血液***和其它组织器官的结构和功能的总和称为肠道屏障。正常的肠道屏障功能依靠微生物屏障、免疫屏障、物理屏障和化学屏障结合在一起发挥作用，通过各自的生物学功能及信号通路进行分子调控。其中尤以物理屏障最为重要，包括了单层肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells，IECs)、细胞间紧密连接(Tight junctions，TJs)和肠粘膜表面粘液，肠道物理屏障一旦受损极易导致IBD甚至引发器官衰竭和功能障碍综合征。

针对IBD的治疗，传统的药物包括美沙拉嗪、柳氮磺胺吡啶、氢化可的松、氢化波尼松、硫唑嘌呤、甲氨喋呤和等，分别适用于IBD不同程度患者的治疗方法。也有病情严重的患者直接采用手术治疗方法，以避免器官坏死或癌症发生。

然而手术方法仅从缓解临床症状来维持IBD病人的生活质量和防止其它并发症的角度进行治疗，并没有从根本上解决病因。由于IBD是一个周期性反复性强的免疫疾病，长期服用化学合成药物会对患者身体带来较大的负担和较多的副作用。例如，氨基水杨酸类药物的副作用是头痛、恶心和呕吐，甚至可能导致男性患者***数量减少或活力降低；在使用糖皮质激素类药物时，需较大的用量，因此容易导致患者局部水肿、高血糖、白内障或肌病，同时造成情绪障碍；生物效应调节剂是通过干预免疫应答来治疗IBD重度患者，但也可能会诱发荨麻疹和全身性过敏。因此，为了降低患者的并发症风险，提高治疗效率，迫切需要有一种安全有效的治疗及缓解方法能应用到长期治疗过程中。近年来，益生菌被提出在干预炎症性肠病的过程中能起到有益作用。益生菌作为一类对人体健康有益的微生物，当一定数量的活的益生菌定植于宿主肠道内时，能通过改变肠道微生态等途径发挥有益的健康效应，作为抗生素类生长促进剂的替代品已经在动物生产上得以应用，在IBD的临床治疗上也具有广阔的应用空间。

国内外对植物乳杆菌的生理功能有大量的研究报道，但对植物乳杆菌预防炎症性肠病的功能性研究报道很少。

专利CN105434476A公开了一种脆弱拟杆菌在制备预防和/或治疗炎症性肠病的药物中的应用，用于制备食品和药物的组合物。CN102740867A公开了用于预防和治疗炎症性肠病(IBD)和肠易激综合征(IBS)的重组益生菌，与现有治疗相比，使用食品级细菌来递送如一的消炎分子可提供安全性和更好的效率。专利CN105029407A公开了炎性肠病医学配方食品，采用多种经预水解技术提取药食两用的中药提取物精华、多种微胶囊化的益生菌以及生物酶解提取的短肽、益生元、氨基酸、碳水化合物、有保健功能的油脂、多种维生素及矿物质一起混合等工艺加工制成。专利CN101744841A公开了用于治疗炎性疾病的双歧杆菌，用于预防和/或治疗不希望出现的炎性活动，尤其是胃肠道炎性活动例如炎症性肠病或过敏性肠综合征。

但是，上述专利的共同点都是使用混菌，或者菌与中药或益生元混合使用来预防和缓解炎症性肠病。到目前为止，还没有单菌缓解炎症性肠病或者调解肠道运动等性能的植物乳杆菌。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CCFM200菌株及应用，本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株具有加固肠道屏障、预防炎症性肠病的作用。

具体地，本发明提供了一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株，其保藏编号为GDMCC No.60267。

所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株，已于2017年11月1日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编：510075，该菌株的保藏编号为：GDMCC No.60267。

另外，本发明人发现，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株对人工模拟胃肠液具有较好的耐受能力，能够显著缓解DSS诱导的小鼠炎症性肠病的疾病活动指数，能够显著缓解DSS诱导的炎症性肠病小鼠的结肠缩短现象及结肠组织损伤，能够显著降低DSS诱导的炎症性肠病小鼠的结肠髓过氧化物酶活性及炎症水平，能够显著提高DSS诱导的炎症性肠病小鼠结肠的紧密连接蛋白水平，表明本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株在一定程度上通过缓解结肠组织炎症性损伤来阻止肠道物理屏障的破坏，本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株具有预防和/或治疗炎症性肠病的作用。

其中，本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株用作益生菌。

本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株不仅具有益生菌的益生保健作用，尤其能用于预防和/或治疗炎症性肠病，其作为益生菌使用，能够预防和/或治疗炎症性肠病。

本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株用作发酵剂。

本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株属于乳酸菌的一种，在发酵过程中生成乳酸，由于植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株具有预防和/或治疗炎症性肠病的作用，作为发酵剂发酵生成的发酵食品(乳制品、豆制品与果蔬制品)可用来预防和/或治疗炎症性肠病。

本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株用作药物。

由于植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株有预防和/或治疗炎症性肠病的作用，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株可用作药物或药物的有效成分来预防和/或治疗炎症性肠病。

本发明还提供了所述植物乳杆菌CCFM200菌株在制备预防和/或治疗炎症性肠病药物中的应用。

由于植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株有预防和/或治疗炎症性肠病的作用，使得应用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株制得的药物也具有预防和/或治疗炎症性肠病的作用。

本发明还提供了所述植物乳杆菌CCFM200菌株在制备预防和/或治疗炎症性肠病食品中的应用。

由于植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株有预防和/或治疗炎症性肠病的作用，使得应用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株制得的食品也具有预防和/或治疗炎症性肠病的作用。

本发明的有益效果为：

本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株可显著降低小鼠疾病活动指数，防止结肠长度骤减，阻止组织过度损伤，抑制髓过氧化物酶(MPO)活性，显著缓解过激的免疫应答，另外植物乳杆菌CCFM200菌株维持了ZO-1、Occludin和Claudin-1等紧密连接蛋白在结肠中的正确定位，阻止由DSS导致的紧密连接蛋白数量骤减，表明该乳杆菌可能在一定程度上通过缓解结肠组织炎症性损伤来阻止肠道物理屏障的破坏。因此，本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株可代替药物来预防和/或治疗炎症性肠病，且不具有药物的毒副作用。所以，本发明的植物乳杆菌CCFM200菌株可用作预防和/或治疗炎症性肠病的益生菌、发酵剂和药物，具有非常广泛的应用前景。

生物材料保藏信息：

本发明提供的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM200菌株，已于2017年11月1日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编：510075，该菌株的保藏编号为：GDMCC No.60267。

附图说明

图1为植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠长度的维持情况；

图2为不同处理组中小鼠的结肠组织石蜡切片HE染色图；

图3为不同处理组中小鼠结肠的组织损伤评分；

图4为植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠内髓过氧化物酶活性的影响；

图5为植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠上皮细胞ZO-1紧密连接蛋白表达水平及定位的影响；

图6为植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠上皮细胞Occludin紧密连接蛋白表达水平及定位的影响；

图7为植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠上皮细胞Claudin-1紧密连接蛋白表达水平及定位的影响。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明进行具体描述。

实施例1

植物乳杆菌CCFM200菌株的提取方法为：

(一)乳酸菌的分离筛选

(l)收集若干份泡菜样品，将样品在含有山梨醇MRS培养基中富集12h；

(2)将富集样品进行梯度稀释后涂布于添加了0.02％嗅甲酚紫的MRS固体平板上，培养24-48h；

(3)选取变色圈明显，并且符合乳酸菌基本形态的单菌落进行平板划线纯化，筛选分离出乳酸菌；

(4)将上述单菌落培养于液体MRS培养液中培养24h后进行革兰氏染色，选取革兰氏阳性菌进行后续试验。

(二)植物乳杆菌的初步鉴定：溶钙圈测定法

(l)将步骤(一)所筛选得到的乳酸菌在液体山梨醇MRS培养液中培养24h，然后取lmL培养物8000rpm离心2min；

(2)用0.05mol/LKH₂PO₄溶液洗涤两次；

(3)将所得菌泥重悬，划线在山梨醇MRS-0.75％CaCO₃的固体培养基上，培养24h；

(4)选取溶钙圈明显，且呈凸面圆形、细密色白、无菌丝体的菌落，即初步判定为乳杆菌。

(三)植物乳杆菌的分子生物学鉴定

(l)单菌基因组抽提

①将步骤(二)所筛选得到的乳杆菌培养过夜，取培养过夜的菌悬液lmL于1.5mL离心管，10000rpm离心2min，弃上清得菌体；

②用lmL无菌水吹洗菌体后，10000rpm离心2min，弃上清得菌体；

③加入200μLSDS裂解液，80℃水浴30min；

④加入酚-氯仿溶液200μL于菌体裂解液中，其中酚-氯仿溶液的组成成分及体积比为Tris饱和酚:氯仿:异戊醇＝25:24:1，颠倒混匀后，12000rpm离心5-10min，取上清200μL；

⑤加入400μL冰乙醇或冰异丙醇于200μL上清中，-20℃静置1h，12000rpm离心5-10min，弃上清；

⑥加入500μL70％(体积百分数)冰乙醇重悬沉淀，12000rpm离心1-3min，弃上清；

⑦60℃烘箱烘干，或者自然晾干；

⑧50μLddH₂O重溶沉淀以备PCR。

(2)16S rDNAPCR

①细菌16S rDNA 50μLPCR反应体系：

10×Taqbuffer，5μL；dNTP，5μL；27F，0.5μL；1492R，0.5μL；Taq酶，0.5μL；模板，0.5μL；ddH₂O，38μL。

②PCR条件：

95℃5min；95℃10s；55℃30s；72℃30s；step2-430×；72℃5min；12℃2min；

(3)制备1％琼脂糖凝胶，之后将PCR产物与10000×loading buffer混合，上样量5μL，120V跑30min，然后进行凝胶成像；

(4)将16S rDNA的PCR产物进行测序分析，将得到的序列结果使用BLAST在GeneBank中进行搜索和相似性比对，选取测序结果鉴定为植物乳杆菌的乳酸菌，-80℃保藏备用。

以下为植物乳杆菌CCFM200菌株16S rDNA序列：

GGCAGGGGGGGGGTGCTATACGTGGGGTCGTACGAACTGCTGGTATTGGATTGGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGCTTGAAAGATGGCTTCGGCTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTA TTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTAACCTTTAGGAACCAGCCGCCTAAGGTGGACCAGGG

得到的植物乳杆菌CCFM200菌株的特征如下：

(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，具有耐酸性，在pH 3.0-7.2环境条件下生长良好，不形成孢子。菌体约(0.9-1.2)μm×(3.0-8.0)μm，圆端直杆菌，单个、成对或短链状，通常缺乏鞭毛但能运动。

(2)菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0.3-3.0mm之间，圆形，凸面或透镜状，细密、色白，有平滑至粘液状的柔软表面，不形成菌丝体。

(3)生长特性：该菌为兼性厌氧菌，最适生长温度为36-38℃，32-38℃生长良好，15℃亦能生长。最适初始pH为6-7。在含有葡萄糖的培养液中生长良好。

实施例2

植物乳杆菌CCFM200菌株在对模拟胃肠液具有良好的耐受性：

将冷冻保存的植物乳杆菌CCFM200菌株划线接种于MRS固体培养基中，在温度37℃有氧静置培养24h，再经MRS培养液传代培养2～3次后，取植物乳杆菌CCFM200菌株培养液，8000×g离心5min收集菌体，重悬于(1:1)pH 2.5的人工模拟胃液(含1％胃蛋白酶、pH＝2.5的MRS培养基)混合，然后在37℃下有氧培养，分别在开始(0h)、1h、2h和3h时取样，用MRS琼脂培养基浇注培养进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。存活率是在该培养液中的活菌数与在第0h时活菌数之比，以％表示。

取植物乳杆菌CCFM200菌株的培养液，8000×g离心5min收集菌体，重悬于(1:1)人工模拟肠液(含0.3％牛胆盐、1％胰蛋白酶、pH＝8.0的MRS培养基)中，在37℃下有氧培养，分别在0h、1h、2h、3h和4h时取样，用MRS琼脂培养基浇注培养进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。存活率是在该培养液中取样时的活菌数与在第0h时活菌数之比，以％表示。实验结果如表1、表2所示，可以看出植物乳杆菌CCFM200菌株对人工胃、肠液具有良好的耐受性。

表1植物乳杆菌CCFM200菌株在人工模拟胃液中的耐受性

表2植物乳杆菌CCFM200菌株在人工模拟肠液中的耐受性

实施例3

植物乳杆菌CCFM200菌株对DSS诱导期间小鼠的炎症性肠病症状的缓解作用

将5周龄健康雌性C57BL6/J小鼠30只，随机分为5组，分别为空白对照组、模型组(DSS+载体)、药物治疗组(DSS+SASP)、益生菌组(DSS+CCFM200)、益生菌组(DSS+LGG)，每组含小鼠6只，置于24℃恒温室且每12h一个昼夜循环适应一周后进行实验，所有组均给予正常饮水与饲料。

将植物乳杆菌CCFM200菌株和鼠李糖乳杆菌GG株(LGG)重悬于3％蔗糖溶液中，制成浓度为1.0×10⁹CFU/mL的悬液，从第二周开始每日给予除空白对照组、模型组和药物治疗组外的所有益生菌组以该浓度菌悬液灌胃一次，灌胃量是0.25mL/只，持续灌胃两周；空白对照组和模型组则以同样的频率灌胃0.25mL/只的3％蔗糖溶液，药物治疗组则以同样的频率灌胃0.25mL含27.8mg/mL美沙拉嗪(SASP)的3％蔗糖溶液。

从第三周开始，除空白对照组以外的实验组均在饮水中加入2.5％葡聚糖硫酸钠(DSS)，持续一周以诱导小鼠患急性炎症性肠病。

其中用DSS诱导炎症性肠病期间小鼠的疾病活动指数(Disease activity index，DAI；疾病活动指数等于体重变化分数、便血分数和大便性状分数总和)列于表3中。表3的结果表明：灌胃植物乳杆菌CCFM200菌株组中小鼠的急性结肠炎得到了缓解，疾病活动指数的升高也显著地减缓，第七天的DAI值分别为6.25±0.57接近于药物SASP组，与模型组相比，DAI值降低了39.50％，有效地缓解了小鼠炎症性肠病。其效果显著好于LGG。

表3 DSS诱导期间小鼠疾病活动指数的变化

注：表中同一列上的不同字母表示其有显著性差异，P<0.05。

实施例4

植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠组织的保护作用

小鼠因患有由DSS诱导的急性结肠炎而导致其结肠长度缩短，此现象可作为表征炎症性肠病炎症程度的指标之一。实验中截取小鼠处死后的整段结肠进行测量和观察记录，结果如图1。

由图1可知，虽然SASP药物组小鼠的结肠长度变短趋势最小，但是植物乳杆菌CCFM200菌株有效地遏制了因患有DSS引起的炎症性肠病所导致的结肠缩短，其效果好于LGG。植物乳杆菌CCFM200菌株对结肠长度的影响和疾病活动指数评分基本保持了较好的相关性。

由图2和图3可知，模型组小鼠的结肠组织损伤评分为13.33±0.47远远高于空白对照组(1.67±0.47)；药物SASP处理组能显著地防止急性结肠炎的炎症恶化(4.67±0.47)，植物乳杆菌CCFM200菌株组的小鼠结肠组织损伤有不程度的减轻，绒毛、隐窝和腺体等结构也相对比较完整，尽管黏膜固有层内存在部分炎症细胞浸润现象，但是整体病变程度较模型组显著降低。另外，植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠的保护效果最为明显，仍然保留了完整的隐窝结构和整齐的绒毛，杯状细胞未见过量减少，不仅相较于其它乳杆菌组其水肿程度最轻，而且浸润到黏膜下层和浆膜层的炎症细胞数量也是最少的，5.67±0.47的组织损伤评分也非常接近药物SASP组，其缓解效果显著好于LGG。

髓过氧化物酶(MPO)是中性粒细胞浸润的标志物，可以反映结肠组织中炎症细胞的浸润程度，所以将其作为评价结肠炎症程度的指标之一。各组小鼠结肠段的MPO活性结果如图4所示，图中MPO活性越高表示炎症越严重。从图4中看出，模型组中小鼠结肠组织MPO值显著升高，表明小鼠机体产生强烈地氧化应激反应。而植物乳杆菌CCFM200菌株能阻止炎症性肠病导致的MPO值过度上升，其效果也显著好于LGG。

实施例5

植物乳杆菌CCFM200菌株对DSS诱导的炎症性肠病小鼠免疫应答的影响

表4为小鼠血清中免疫因子含量，模型组小鼠的血清中炎症因子水平远高于空白对照组，加剧了炎症并进一步破坏结肠组织，尤其是TNF-α提高了1.94倍以及IL-17提高了2.18倍，IL-1β和IL-6也有显著提高。由表可知，植物乳杆菌CCFM200菌株能够调节失衡的免疫反应，能够较好地促进小鼠分泌抑炎因子IL-10，抑制小鼠过度分泌炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6。其抗炎症作用与LGG相当。

表4小鼠血清中免疫因子的含量

注：表中同一列上的不同字母表示其有显著性差异，P<0.05。

实施例6

植物乳杆菌CCFM200菌株对小鼠结肠紧密连接相关蛋白的影响

细胞间紧密连接是肠道物理屏障的主要组成部分，连接细胞骨架，维护着正常的选择渗透性生理功能，其中连蛋白ZO-1、ZO-2、封闭蛋白Occludin、闭合蛋白Claudin-1和Claudin-3等都是有代表性的紧密连接蛋白，由表5可知，DSS显著下调了结肠的细胞紧密连接相关蛋白基因相对转录水平，导致了小鼠肠道物理屏障破坏，进而随着肠壁通透性增加，肠腔内有害菌和抗原入侵结肠组织，加剧结肠损伤和炎症反应。而相较于空白对照组，植物乳杆菌CCFM200菌株组ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin-1和Claudin-3相对转录水平发生了上调，说明植物乳杆菌CCFM200菌株在对肠上皮细胞结构的稳定有很好的维持作用，其中对ZO-1、Occludin和Claudin-1相对转录水平的上调程度相较于空白对照组高达4倍左右，表明该菌可能存在通过促进紧密连接蛋白基因转录来弥补紧密连接蛋白损失的一种肠道屏障修复机制。在蛋白表达水平上，由图5-7中可以看出，植物乳杆菌CCFM200菌株显著恢复了结肠上皮细胞中由于DSS导致的ZO-1、Occludin和Claudin-1紧密连接蛋白表达水平的降低，其对紧密连接蛋白量的上调作用以及在肠上皮细胞中的定位恢复能力显著强于LGG。

表5小鼠结肠的细胞紧密连接蛋白基因相对表达量

注：表中同一列上的不同字母表示其有显著性差异，P<0.05。

实施例7

利用本发明植物乳杆菌CCFM200菌株制备活菌乳

将原料乳脱脂奶在95℃热杀菌20min，然后冷却至4℃，再加入在植物乳杆菌CCFM200菌株，使其浓度达到10⁶CFU/ml以上，在4℃下冷藏保存，得到含有本发明植物乳杆菌CCFM200菌株活菌的牛乳。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明实质内容上所作的任何修改、等同替换和简单改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 光明乳业股份有限公司

<120> 植物乳杆菌CCFM200菌株与应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1473

<212> DNA

<213> 16S rDNA

<400> 1

ggcagggggg gggtgctata cgtggggtcg tacgaactgc tggtattgga ttggtgcttg 60

catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt aacacgtggg aaacctgccc 120

agaagcgggg gataacacct ggaaacagat gctaataccg cataacaact tggaccgcat 180

ggtccgagct tgaaagatgg cttcggctat cacttttgga tggtcccgcg gcgtattagc 240

tagatggtgg ggtaacggct caccatggca atgatacgta gccgacctga gagggtaatc 300

ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt 360

ccacaatgga cgaaagtctg atggagcaac gccgcgtgag tgaagaaggg tttcggctcg 420

taaaactctg ttgttaaaga agaacatatc tgagagtaac tgttcaggta ttgacggtat 480

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cttgtacaca ccgcccgtca caccatgaga gtttgtaaca cccaaagtcg gtggggtaac 1440

ctttaggaac cagccgccta aggtggacca ggg 1473

Claims (6)

1.一种植物乳杆菌CCFM200菌株，其特征在于，其保藏编号为GDMCC No.60267。

2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM200菌株，其特征在于，其用作益生菌。

3.根据权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM200菌株，其特征在于，其用作发酵剂。

4.根据权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM200菌株，其特征在于，其用作药物。

5.权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM200菌株在制备预防和/或治疗炎症性肠病药物中的应用。

6.权利要求1所述的植物乳杆菌CCFM200菌株在制备预防和/或治疗炎症性肠病食品中的应用。