CN105106246A - 一种植物乳杆菌zs2058及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物乳杆菌(Lactobacillus？plantarum)ZS2058及其用途。本发明植物乳杆菌ZS2058能够有效改善小鼠腹泻、大便隐血、便血等结肠炎症状，并能够抑制疾病活动指数(DAI)的升高，改善小鼠结肠长度的变化，显著减低髓过氧化物酶(MPO)活性，可以制备用于预防和治疗肠道炎症的药物或者用于生产益于肠道健康的食品。

Description

一种植物乳杆菌ZS2058及其用途

【技术领域】

本发明属于微生物技术领域。更具体地，本发明涉及一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058，本发明还涉及所述植物乳杆菌的用途。

【背景技术】

炎症性肠病(InflammatoryBowelDisease,IBD)是一组慢性、复发性的肠道炎症疾病，分为溃疡性结肠炎(UlcerativeColitis,UC)和克罗恩病(Crohn'sDisease,CD)，发病机理尚不明确。但根据目前对IBD发病机理的研究，普遍认为IBD可能与易感基因、粘膜免疫、肠道微生物和环境四个因素有关，且粘膜免疫在IBD发病过程中具有重要地位。本病呈世界性分布。近年来,随着人们生活水平的提高以及饮食结构的变化，该病在我国的患病率正逐年上升。

IBD严重影响人们的生活质量和身体健康，耗费卫生资源。目前IBD的治疗药物有抗生素、氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫抑制剂(6-MP，AZA，MTX)和生物制剂(infliximab)等，但副作用大，很难实现IBD长期治疗，如生物制剂infliximab是TNF-α单克隆抗体，能有效达到IBD的治疗目标，但使用infliximab常见的不良反应有感染、充血性心力衰竭、自身免疫反应、神经***病变、肝损害、恶性肿瘤等。所以需要寻找新的IBD预防和治疗新方法。

肠道微生物与人体健康息息相关，且被形象的称为“微生物器官”。利用肠道益生菌来预防和治疗肠道疾病越来越受到关注。例如CN102210717A公开了含有与丹宁组合的一种或多种产生丹宁酶的乳杆菌菌株的组合物，所述菌株具有粘附到人肠粘膜上的能力，该组合物可以用于治疗IBD。肠道益生菌可通过调节粘膜免疫***，增强肠上皮细胞间的紧密连接，降低肠道通透性，抑制肠上皮细胞凋亡，改善肠道物理屏障功能，调节肠道菌群平衡等作用来减轻肠道炎症。乳酸菌是存在于人体肠道内的益生菌，近年来，乳酸菌对结肠炎治疗的研究报道有增无减，且产生着积极的影响。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058的用途。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种植物乳杆菌ZS2058，该菌株已于2006年4月10日在武汉市武昌珞珈山武汉大学内中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNo.M206033。

本发明还涉及所述的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058在制备用于治疗、预防或辅助治疗炎症性肠病的药物组合物中的用途。

根据本发明的一种优选实施方式，所述的炎症性肠病是溃疡性结肠炎或克罗思病。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的药物组合物是由植物乳杆菌ZS2058菌剂与在药学上可接受的载体组成的。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的植物乳杆菌ZS2058菌剂是将含有所述植物乳杆菌ZS2058的菌液通过常规冷冻干燥工艺制备所得到的粉剂，它含有10¹⁰CFU/g以上植物乳杆菌ZS2058。

根据本发明的另一种优选实施方式，在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的载体。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的药物组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型。

下面将更详细地描述本发明。

本发明涉及一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058，该菌株已于2006年4月10日在武汉市武昌珞珈山武汉大学内中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNo.M206033，已公开于中国发明专利CN200610041191.1，即该专利中的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZH008CCTCCNo.M206033。

本发明的菌株ZS2058是由江南大学食品生物技术中心菌种保藏库提供的植物乳杆菌ZH008，采用了包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤细菌16SrDNA序列测序法进行种属鉴定，确定为植物乳杆菌。

本发明的植物乳杆菌ZS2058(植物乳杆菌ZH008)即具有下述生物学特性：

菌体特征：植物乳杆菌ZS2058菌体呈乳白色。

菌落特征：植物乳杆菌ZS2058在MRS固体平板上菌落呈凹透镜状突起，光滑、圆形、乳白色、半透明、直径为1～2mm。

生长特性：在37℃恒温的条件下，让植物乳杆菌ZS2058在MRS培养基中培养约14h达到对数末期。

本发明植物乳杆菌ZS2058的保存方法：1mL菌液离心后移去上清液，再用以体积计30％甘油溶液重悬后保藏于温度-80℃的冰箱中。本发明植物乳杆菌ZS2058的培养方法与培养条件：

1、活化培养：

培养基制备：植物乳杆菌ZS2058的培养基为MRS培养基，具体组成如下：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、柠檬酸氢二铵2g、醋酸钠5g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、一水合硫酸锰0.25g与吐温801mL，加水至1000mL。

培养条件：在温度37℃下恒温静置培养。

培养目标:挑单菌落于液体MRS培养基中，在恒温培养箱中在温度37℃下静置培养约16h，活化植物乳杆菌ZS2058。

2、一级培养：

培养基制备：MRS培养基具体组成如下：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、柠檬酸氢二铵2g、醋酸钠5g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、一水合硫酸锰0.25g与吐温801mL，加水至1000mL。培养条件：在温度37℃下恒温静置培养。

培养目标:将上述培养的植物乳杆菌ZS2058以培养基计1％接种量转接至液体MRS培养基，如此再转接一代，使植物乳杆菌ZS2058进一步活化，活力更好。

3、二级培养：

二级培养基是MRS培养基，具体组成如下：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、柠檬酸氢二铵2g、醋酸钠5g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、一水合硫酸锰0.25g与吐温801mL，加水至1000mL。

培养条件：在温度37℃下恒温静置培养。

培养目标：将上述二级培养中培养好的植物乳杆菌ZS2058以培养基体积计1％接种量转接至1LMRS液体培养基中，在温度37℃下在恒温培养箱中静置培养约16h，收集菌体。

本发明还涉及所述的植物乳杆菌ZS2058在制备用于治疗、预防或辅助治疗炎症性肠病的药物组合物中的用途。

所述的炎症性肠病是溃疡性结肠炎或克罗思病。溃疡性结肠炎是一种病因尚不十分清楚的结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，病变局限于大肠黏膜及黏膜下层，病变多位于乙状结肠和直肠，也可延伸至降结肠，甚至整个结肠。病程漫长，常反复发作。克罗恩病是一种原因不明的肠道炎症性疾病，在胃肠道的任何部位均可发生。克罗恩病临床表现为腹痛、腹泻、肠梗阻，伴有发热、营养障碍等肠外表现。克罗恩病尚无根本的治愈方法，还会出现并发症，需手术治疗，而术后复发率很高。

所述的药物组合物是由植物乳杆菌ZS2058菌剂与在药学上可接受的载体组成的。

所述的植物乳杆菌ZS2058菌剂是将含有所述植物乳杆菌ZS2058的菌液通过常规冷冻干燥工艺制备所得到的粉剂，它含有10¹⁰CFU/g以上植物乳杆菌ZS2058。

在本发明中，植物乳杆菌ZS2058含量的测定方法是常规的MRS平板菌落技术法。

根据本发明，在药学上可接受的载体应该是指在药学领域中的常规药物载体，例如是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的载体。

根据本发明，所述的填充剂应该理解是一种用来增加药物与载体重量和体积，以利于将它们压制成片剂的稀释剂；或者应该理解是用以吸收药物与载体中多余液体成分的辅料吸收剂。凡是具有这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙或微晶纤维素，优选地选自淀粉、蔗糖或微晶纤维素，更优选地选自淀粉或微晶纤维素。

根据本发明，所述的润湿剂应该理解是一种在药物本身无粘性时能够使其药物润湿并诱发其具有粘性，于是能够制成颗粒的液体。凡是具有这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的润湿剂选自水、乙醇、淀粉或糖浆，优选地选自水、乙醇或淀粉，更优选地选自水或淀粉。

根据本发明，所述的崩解剂应该理解是一种能够促进片剂在胃肠液中快速崩解成细小粒子的辅料。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠，优选地选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂或碳酸氢钠，更优选地选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素或碳酸氢钠。

根据本发明，所述的粘合剂应该理解是当药物本身无粘性或粘性不足时需要加入一种粘性物质以便将其药物制成颗粒剂，这种粘性物质称为粘合剂。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，优选地选自纤维素衍生物、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，更优选地选自明胶或聚乙烯吡咯烷酮。

根据本发明，所述的润滑剂应该理解是一种在制粒过程中能够提高片剂流动性，防止片剂粘附在制片机上，有利于片剂脱模的物质。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇，优选地选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇，更优选地选自滑石粉或硬脂酸钙。

根据本发明，所述的矫味剂应该理解是一种在药品中用以改善或屏蔽药物不良气味和味道(例如强烈苦味或其它异味等)的辅料。凡是具有这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的矫味剂选自单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、枸橼糖浆、樱桃糖浆甜味剂；柠檬、茴香、薄荷油芳香剂；海藻酸钠、***胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠胶浆剂；枸橼酸、酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂，优选地选自单糖浆、蔗糖、橙皮糖浆、樱桃糖浆甜味剂；柠檬、薄荷油芳香剂；海藻酸钠、***胶、明胶、羧甲基纤维素钠胶浆剂；酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂，更优选地选自蔗糖、橙皮糖浆、樱桃糖浆甜味剂；柠檬芳香剂；海藻酸钠、***胶胶浆剂；酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂。

在本发明中，填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的用量应该根据实际使用的需要进行确定，这些对于制药技术领域的技术人员而言是不存在任何技术困难的。

本发明的植物乳杆菌ZS2058菌剂可以与在药学上可接受的载体或赋形剂组合制成各种剂型，例如颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液，其中在药学上可接受的载体或赋形剂可以根据不同剂型进行选择，所使用的这些载体或赋形剂及其用量对于制药技术领域的技术人员都是容易确定的，也是显而易见的。

所述的剂型一般应该理解是适用于人的单剂量药物形式，单个剂型含有为达到所需药物量的预定活性物质，例如本发明的植物乳杆菌ZS2058菌剂。

[有益效果]

本发明的有益效果是：

本发明植物乳杆菌ZS2058能够有效改善小鼠腹泻、大便隐血、便血等结肠炎症状，并能够抑制疾病活动指数(DAI)的升高，改善小鼠结肠长度的变化，显著减低髓过氧化物酶(MPO)活性，可以制备用于预防和治疗肠道炎症的药物。

植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058即植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZH008已于2005年4月10日在武汉市武昌珞珈山武汉大学内中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNo.M206033。

【附图说明】

图1表示各组造模期间疾病活动指数的变化，植物乳杆菌ZS2058显著降低小鼠的疾病活动指数；

图中：*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001。

图2表示各组结肠长度的变化，植物乳杆菌ZS2058改善DSS(葡聚糖硫酸钠)诱导结肠炎后小鼠结肠长度变化；

图中：*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001。

图3表示各组髓过氧化物酶(MPO)活力的变化，植物乳杆菌ZS2058显著降低髓过氧化物酶活力；

图中：ns：P>0.05，*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001。

图4表示各组结肠组织HE染色(图4-A，图4-B，图4-C)及组织损伤评分(图4-B)，

图4-A：正常组；

图4-B：造模组；

图4-C：植物乳杆菌ZS2058处理组；

图4-D：植物乳杆菌ZS2058显著降低DSS诱导结肠炎后小鼠结肠病理评分；

图中：*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001。

图5表示植物乳杆菌ZS2058调节肠道免疫应答；

图中：ns：P>0.05，*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001。

【具体实施方式】

通过下述实施例将能够更好地理解本发明。

实施例1：植物乳杆菌ZS2058改善DSS诱导的结肠炎的动物实验

具体实验如下：

1、实验动物

6-8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠24只，它购自苏州苏普思生物科技有限公司，在温度22±2℃、自由取食、自由饮水和12h昼夜交替的条件下饲养，所用饲料为苏州双狮实验动物饲料科技有限公司生产的小鼠繁殖配合饲料，普通饮食饲养适应一周后进行实验。

2、植物乳杆菌ZS2058培养

将植物乳杆菌ZS2058菌体在固体MRS平板上划线，挑单菌落于液体MRS培养基中培养12h，传两代后用于后续实验。

将活化的植物乳杆菌ZS2058按照以MRS培养基体积计1％接种量接种到液体MRS培养基中，在温度37℃的条件下在恒温培养箱中培养12h，然后收集菌体，再用pH7.4的PBS洗掉两遍，接着重悬于浓度以重量计13％脱脂乳溶液中，活菌数为1×10¹⁰CFU/mL，用于后续试验。

3、实验方法

(1)结肠炎小鼠模型的建立

C57BL/6J小鼠自由饮用2％DSS(葡聚糖硫酸钠，MW:36000-50000，购自MP公司)溶液，连续7天。

(2)实验分组及给药

将24只C57BL/6J小鼠随机分为3组，即正常组，模型组和植物乳杆菌ZS2058处理组，每组8只。植物乳杆菌ZS2058处理组给药方式为灌胃，灌胃剂量为2×10⁹CFU/200μL/只/天。ZS2058处理组在造模前7天开始每天灌胃植物乳杆菌ZS2058，直到实验结束(含造模过程)，连续14天，正常组和模型组均用灌胃重悬后的13％脱脂乳粉作为对照，连续14天，至实验结束。

(3)指标测定

Ⅰ.小鼠造模期间，观察小鼠进食、活动状态、毛发整齐程度，每日称量体重，观察粪便性状及检测粪便隐血情况按照文献(MurthySNS,DigDisSci,1993)进行疾病活动指数(DiseaseActivityIndex,DAI)评分，DAI＝体重下降分数+大便性状+便血分数，具体评分标准见表1。

表1：DAI评分标准

表中：

*正常大便：成形大便；松散大便：不粘附于***的糊状、半成形大便；稀便：可粘附于***的稀水样便；

^#便血情况：鼠粪便正常者为便血阳性，粪便呈红色或褐色者为肉眼血便，对肉眼血便不明显又可疑隐血者，用四甲基联苯胺检测隐血情况。

Ⅱ.处死小鼠，取结肠，测量结肠长度；取远端结肠1cm于Carnoy’sSolution固定、常规组织脱水、石蜡包埋、切片、H&E染色；根据组织学损伤评分标准(MurthySNS,DigDisSci,1993)对结肠进行组织学损伤评分，具体评分标准见表2。

表2：组织学损伤评分标准

Ⅲ.结肠样品髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)测定

按照由南京建成生物工程研究所有限公司销售的MPO试剂盒使用说明书描述的方法进行测定。

Ⅳ.处死小鼠后取1cm结肠样品放入液氮，再转入温度-80℃下保存，待用；用TRIzol(购自Invitrogen)提取结肠样品总RNA，取1μgRNA按照PrimeScript^TM1stStrandcDNASynthesisKit的说明书进行反转录，参照iTaq^TMUniversalGreenSupermix的说明书准备实时荧光定量体系，用Bio-RadCFXConnect^TMReal-timeSystem进行实时荧光定量PCR分析，同时通过溶解曲线和扩增曲线评估RT-qPCR数据的质量。qPCR程序如下：50℃2min；95℃10min；40个循环(95℃15s，60℃30s)；95℃15s，所检测基因引物序列见表3，数据用2^-ΔΔCt法(Li-XuanSang,Int.J.Mol.Sci,2014)分析。

表3：RT-qPCR引物序列表

4、实验结果

(1)植物乳杆菌ZS2058显著降低小鼠的疾病活动指数

通过日常称量小鼠体重，观察小鼠粪便性状、检测粪便隐血及肉眼血便情况，根据疾病活动指数评分标准得到的结果列于附图1。造模期间，正常组小鼠活泼好动，毛发光亮，体重持续增长，大便正常；模型组小鼠第三天开始大便开始松散，大便开始出现褐红色血迹，体重下降，倦卧懒动，并随着造模时间的推移，模型组小鼠体重持续下降，大便不成形，且粘附于***，肉眼血便，且***出现红色的血迹；植物乳杆菌ZS2058处理组与模型组相比，上述临床症状均有不同程度减轻，显著降低了DAI评分，具体结果参见附图1。

(2)植物乳杆菌ZS2058改善DSS诱导的小鼠结肠组织病变

DSS结肠炎模型有结肠缩短、水肿的特征，结肠长度的缩短在一定程度上可以作为反映炎症严重程度的一个指标。各组结肠长度的变化，植物乳杆菌ZS2058改善DSS诱导结肠炎后小鼠结肠长度变化结果列于附图2中。附图2表明，模型组小鼠与正常组相比对肠长度明显缩短，植物乳杆菌ZS2058可一定程度上抑制这种结肠缩短的趋势。

MPO活性反映了中性粒细胞侵润数目和活性，已被公认为评价炎症严重程度的一个指标。各组髓过氧化物酶(MPO)活力的变化，植物乳杆菌ZS2058显著降低髓过氧化物酶活力结果列于附图3。附图3表明模型组髓过氧化物酶活力较正常组明显增加，而植物乳杆菌ZS2058处理组较造模组显著下降，说明植物乳杆菌ZS2058能有效减轻结肠组织的中性粒细胞浸润。

在处死小鼠后取各组每只小鼠远端结肠样本，H&E染色考察各组小鼠病变病理情况，其结果列于附图4-A。如图4-A所示，正常组小鼠粘膜上皮排列整齐，隐窝腺体明显完整，无炎性细胞浸润；DSS诱导的结肠炎组织病变主要表现为溃疡形成，粘膜上皮细胞变性坏死脱落、缺损最严重者可达肌层，并伴有大量炎性细胞浸润，隐窝腺体变形或消失，粘膜下层和肌层有不同程度的血管扩张充血和细胞浸润；而通过病理切片和组织损伤评分可以看出，植物乳杆菌ZS2058可显著的抑制上述症状，保护了上皮结构，减轻了炎症细胞浸润和水肿程度。

(3)植物乳杆菌ZS2058改善DSS引起的肠道免疫应答紊乱

各组结肠组织HE染色及组织损伤评分结果分别列于图4-A，图4-B，图4-C中，这些结果清楚表明，植物乳杆菌ZS2058显著降低DSS诱导结肠炎后小鼠结肠病理评分(图4-D)。植物乳杆菌ZS2058调节肠道免疫应答结果列于附图5中。与正常组相比，模型组的核转录因子NF-κBp65及促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α显著升高，而植物乳杆菌ZS2058抑制了这种上升趋势，并显著降低了核转录因子NF-κBp65及促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α在mRNA的转录水平，且植物乳杆菌ZS2058促进核转录因子PPARγ及抗炎细胞因子IL-10的上调(附图5)，总体表明，植物乳杆菌ZS2058能通过显著上调抑炎性因子并下调促炎性因子转录，以改善炎症反应，对免疫有一定的调节作用，最终体现为对结肠炎具有较显著的缓解效果。

这些实验结果表明，植物乳杆菌ZS2058能够有效改善小鼠腹泻、大便隐血、便血等结肠炎症状，并能够抑制疾病活动指数(DAI)的升高，改善小鼠结肠长度的变化，显著减低髓过氧化物酶(MPO)活性。结肠病理切片结果表明，植物乳杆菌ZS2058可显著改善DSS引起的小鼠结肠的病理损伤，有效降低炎性细胞浸润、上皮细胞紊乱程度和隐窝破坏。RT-qPCR结果表明，植物乳杆菌ZS2058还可调节结肠免疫***稳态，包括上调抑炎性细胞因子IL-10及核转录因子PPARγ的mRNA转录量，并显著下调促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及核转录因子NF-κBp65和TNF-α的mRNA水平。总之，植物乳杆菌ZS2058可显著改善DSS诱导的小鼠结肠炎，它可以制备用于预防和治疗肠道炎症的药物，或者生产益于肠道健康的产品，如益生菌饮料、酸豆奶、发酵果冻、发酵茶饮料或奶制品如酸奶，奶酪制品，乳酸菌奶粉等。

应用实施例1：制备含有植物乳杆菌ZS2058菌剂的片剂

具体制作工艺基本步骤如下：菌种活化、扩大培养、收集菌体、菌悬液制备、冷冻干燥、总混与压片。

具体实施步骤如下：

1.菌种活化：植物乳杆菌ZS2058以培养基体积计1％的接种量在MRS培养基中在温度37℃下恒温静置培养，连续活化两代。

2.扩大培养：将前述步骤活化的植物乳杆菌ZS2058以培养基体积计1％的接种量转接到1LMRS培养基中进行扩大培养，在温度37℃下恒温静置培养12h。

3.收集菌体、制备菌悬液：培养结束后，在温度4℃低温离心收集菌体，用PBS(pH7.4)洗两次后，用以重量计13％脱脂乳水溶液制成10¹¹CFU/mL的菌悬液。

4.冷冻干燥：冷冻干燥制成菌粉。

5.总混：加入2％硬脂酸作润滑剂，3％CMC-Na作粘合剂混匀。

6.压片：使用目前市场上销售的压片机采用常规方法进行压片。

应用实施例2：制备含有植物乳杆菌ZS2058菌剂的粉剂

具体制作工艺基本步骤如下：菌种活化、扩大培养、收集菌体、菌悬液制备、冷冻干燥。

具体实施步骤如下：

1.菌种活化：植物乳杆菌ZS2058以培养基体积计1％的接种量在MRS培养基中在温度37℃下恒温静置培养，连续活化两代。

2.扩大培养：将前述活化植物乳杆菌ZS2058以培养基体积计1％的接种量转接到1LMRS培养基中进行扩大培养，在温度37℃下恒温静置培养12h。

3.收集菌体、制备菌悬液：培养结束后，在温度4℃下低温离心收集菌体，用PBS(pH7.4)洗两次后，用13％脱脂乳溶液制成10¹¹CFU/mL的菌悬液。

4.冷冻干燥：使用目前市场上销售的冷冻干燥设备进行冷冻干燥，制成菌粉。

Claims (6)

1.一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058在制备用于治疗、预防或辅助治疗炎症性肠病的药物组合物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的炎症性肠病是溃疡性结肠炎或克罗思病。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物组合物是由植物乳杆菌ZS2058菌剂与在药学上可接受的载体组成的。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述的植物乳杆菌ZS2058菌剂是将含有所述植物乳杆菌ZS2058的菌液通过常规冷冻干燥工艺制备所得到的粉剂，它含有10¹⁰CFU/g以上植物乳杆菌ZS2058。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的载体。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型。