CN107475159A - 枯草芽孢杆菌及其在酱香风味白酒中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于白酒酿造的枯草芽孢杆菌，菌剂及其组合物在发酵白酒中的应用。本发明提供的枯草芽孢杆菌具有产生酱香风味和高产丙酸等白酒风味成分的能力，同时既具有蛋白酶活性高，又具有耐高温、耐酸和耐乙醇能力强的特性。该菌株可用于发酵生产白酒，提高白酒丙酸含量、提高出酒率和白酒风味。

Description

枯草芽孢杆菌及其在酱香风味白酒中的应用

技术领域

本发明属于白酒酿造领域，具体地说涉及一种枯草芽孢杆菌，以及该枯草芽孢杆菌在白酒生产中的应用。

背景技术

酱香白酒生产过程中的制曲、堆积和发酵等工艺中可富集大量芽孢杆菌，它们是形成酱香型白酒风味成分的基础和关键。其中蜡样芽孢杆菌、泛酸枝芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌这五类菌株是酱香型白酒主要的产香功能菌(钟姝霞，等.现代食品科技，2017,33(4)：89-95)。酱香型大曲成品曲中芽孢杆菌最多，芽孢杆菌的种类和数量将直接决定曲的优劣，进而影响酒醅发酵程度和酒的风格特征。酱香酒醅具有堆积温度高、pH值低并含5％左右乙醇的特点，因此，具有耐高温、耐高乙醇浓度和酸度的芽孢杆菌将具有明显的生存优势。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是产淀粉酶和蛋白酶的重要菌类，同时也是酱香型白酒中风味物质的主要产生菌之一。白酒中许多香味物质来源于蛋白质，蛋白质及其酶的作用对白酒的风味影响至关重要(聂慧芳，等.酿酒科技，2015,12:41-44)。林群等(酿酒科技,2013,11:30-32)从白酒生产用大曲和酒醅中分离纯化得到1株枯草芽孢杆菌,以高粱为发酵底物，从菌株发酵产香风味物质的GC-MS分析定性检测出30多种发酵代谢产物，包括吡嗪类、酸类、酯类、醇类、酮类及芳香族化合物等。乙偶姻和氨是微生物发酵生产四甲基吡嗪的前体物质,在酿造体系中加入高产蛋白酶的菌株能够增加体系中的前体物氨，从而提高白酒中四甲基吡嗪的含量(徐岩，等.酿酒科技2011,7：37-40)。芽孢杆菌的使用能有效提高酒基中总酸、总酯和各主要风味物质的含量(曾婷婷，等.酿酒科技,2012,7：32-34)。

有机酸是白酒的重要呈味物质，也是香味成分的前驱物质。它们的分子量越大,口味越软。丙酸的呈香呈味特征表现为闻有酸味，进口柔和和微涩(沈怡方，白酒生产技术全书，2013，p768)。衡水老白干酒中含有乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸和乳酸等6种有机酸。在其大曲、酒醅中分离得到69株产酸菌，其中具有代表性的醋酸菌1株，乳酸菌4株，丙酸菌2株(孙鹏飞，等.中国酿造，2016,35(3)：36-40)。乳酸及乳酸乙酯含量过高影响白酒的风味，甚至出酒率。丙酸菌可利用乳酸作为碳源发酵生成丙酸，具有“增丙降乳”的效果，基酒风格突出、口感较好(辛秀明，等.食品工业科技，2012,6,240-243)。丙酸及其衍生物是世界上公认的无毒抑菌剂,在谷物仓贮和新鲜饲料保存方面有很好的防腐防霉作用,且对人畜基本无害,对动物还有营养价值,因而作为良好的食品防腐剂、谷物和饲料添加剂、除草剂被人们广泛应用(徐虹,等.食品与发酵工业,1997,23(6):62-65)。

中国专利(CN 102703358A)公布了一种芽孢杆菌高温大曲的制备方法。中国专利(CN 103865833A)公布了一种嗜热的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法。中国专利(CN101445786A)公布了一株高产四甲基吡嗪的枯草芽孢杆菌及其发酵生产四甲基吡嗪的方法。中国专利(CN 104745503A)公布了一种枯草芽孢杆菌及其在淡雅型白酒中的应用。中国专利(CN 104388284A)公布了提高特香型白酒中丙酸乙酯含量的方法。

白酒发酵过程中的高产蛋白酶活菌株一方面可提高氨基酸含量，从而增加白酒中的风味物质，另一方面还可提高白酒的产量和质量。高产蛋白酶细菌的分离筛选，有助于酱香大曲中高产蛋白酶微生物的研究，对生产出优良的酱香大曲和酱香白酒具有重要意义。目前已报道的发酵白酒的枯草芽孢杆菌菌株仅涉及产四甲基吡嗪以及菌株的耐热性方面，存在菌株功能单一、综合性能不足等缺点。目前尚未有兼具产蛋白酶活性高、酱香风味突出、耐受性好、产丙酸等白酒风味物质能力强的枯草芽孢杆菌及其在白酒中应用的报道。改善白酒品质和风味，适应市场需求总是白酒厂商面临的问题。

发明技术内容：

本发明的一个目的是提供一株枯草芽孢杆菌菌株，该菌株产酱香风味能力好、蛋白酶活性高、产丙酸能力强、具有较强耐受能力、可用于发酵生产白酒。

本发明的另一个目的是提供含有枯草芽孢杆菌的菌剂。

本发明的另一个目的是提供枯草芽孢杆菌发酵白酒的方法。

本发明的再一个目的是提供制备枯草芽孢杆菌固体菌剂的方法。

本发明的再一个目的是提供一种枯草芽孢杆菌及菌剂在发酵白酒中的应用。

本发明公开了一株新的枯草芽孢杆菌，其特征在于,该菌株为枯草芽孢杆菌S10Bacillus subtilis S10，保藏于国家知识产权局指定的保藏机构-中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017466，保藏日期是2017年9月1日。中国典型培养物保藏中心简称CCTCC，位于湖北省武汉市武汉大学校内，邮编430072，电话：027-68752319，Email:[email protected]。

枯草芽孢杆菌S10菌株是从湖北省某白酒厂酒醅中经分离筛选获得。该菌株有如下特征：枯草芽孢杆菌S10在产蛋白酶培养基中发酵产碱性蛋白酶活达241.69(U/mL)。该菌株对乙醇、有机酸和高温具有较强的耐受性。该菌株能够发酵高粱糖化液产丙酸含量达305.4mg/L,产乙偶姻含量达254.5mg/L。该菌株固态发酵高粱能产生纯正酱香风味，添加该菌株酿造的白酒原酒酱香突出，口感好。

枯草芽孢杆菌S10株形态特征是：菌落呈乳白色，表面平整粗糙，比较干燥，边缘不整齐，细胞为短杆状，产芽孢。

枯草芽孢杆菌S10株生化特征是：可利用葡萄糖，蔗糖、甘露醇、D-木糖、淀粉。能在含7％NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基中生长。

枯草芽孢杆菌S10株生长特征是：牛肉膏蛋白胨平板上划线接种，分别在37℃至45℃下培养均生长良好。

枯草芽孢杆菌S10株16S rDNA基因序列分析显示：枯草芽孢杆菌S10株与Bacillussubtilis CICC 10071菌株的同源性大于99％。

本发明还公开了一种含枯草芽孢杆菌S10的菌剂，该菌剂主要成份是枯草芽孢杆菌S10株及其胞外产物和发酵基质。

本发明的还公开了枯草芽孢杆菌S10及其微生物菌剂在发酵白酒中的应用。

本发明的还公开了枯草芽孢杆菌S10菌剂组合物在发酵白酒中的应用。

在本发明中采用的参比菌株均为普通微生物菌种，其中枯草芽孢杆菌CICC10071登载于中国工业微生物菌种保藏管理中心目录中，处于公开状态，科学工作者可向该菌种保藏中心索取。酿酒酵母CCTCC AY92003为常用普通微生物菌种，登载于中国典型培养物保藏中心目录，处于公开状态，科学工作者可向中国典型培养物保藏中心索取。

本发明公开的菌剂为固态或液态。优先的，本发明公开的S10芽孢杆菌菌剂为固态。

本发明还公开了制备固态菌剂的方法，包括如下步骤：

(1)S10菌种活化：用接种环挑取一环S10菌种接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基中，置37℃恒温培养箱中培养20-24h；

(2)种子液的制备：挑取一环经活化的S10菌株接入装有100mL的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃、180r/min摇床培养24h备用；

(3)固体发酵培养基制备：按麸皮40％，米糠30％，豆粕30％，料：水＝1:1，pH自然，混合均匀，配制成固体发酵培养基，并分装于耐高温的塑料方盒中，121℃灭菌30min后冷却待用；

(4)固体菌剂培养：按5-10％接种量接入预先培养好的S10种子液至固体发酵培养基中，混合均匀后置30℃恒温培养箱中培养2天，每12h搅拌一次；

(5)干燥及粉碎：将上述发酵完毕的S10固体培养物置于55℃烘箱中烘至含水率低于15％，用万能粉碎机将干燥的培养物粉碎、过100目筛后，制备成固体粉末状菌剂并装入密封的塑料袋中，放置干燥、阴凉处或冰箱保鲜层中保藏；其中，菌剂样品中S10芽孢杆菌的活菌数达40-300亿cfu/克。

(6)混合与包装：将酿酒酵母CCTCC AY92003与S10按活菌数比＝10:1比例混合后塑料袋后封口制成酿酒菌剂组合物。

本发明的优点：

1、本发明提供的枯草芽孢杆菌S10株是一株新的菌株，该菌株具有很强的耐高温、耐酸和耐乙醇生长能力。该菌株在45℃下仍能生长良好，与37℃培养温度相比，其相对生长量达到62.6％，比标准菌株CICC1007高19.6％。S10菌株可耐受6％左右的乙醇浓度，较标准菌株耐酒精能力强。S10菌株可耐受的pH为4.5的酸性生长环境，较标准菌株耐酸能力强。

2、枯草芽孢杆菌S10株发酵高粱酱香风味突出,感官评价效果好。

3、枯草芽孢杆菌S10株产蛋白酶活性高，产酱香风味前体物质乙偶姻能力强。S10产蛋白酶和乙偶姻的能力分别比标准菌株CICC1007高324.7％和18.3％。

4、枯草芽孢杆菌S10株产丙酸等风味物质能力强。S10产丙酸、己酸能力分别比标准菌株CICC1007高60.7％和29.8％。同时S10株产健康因子ɑ-亚麻酸及风味物质β-苯乙醇的含量均比标准菌株高。

5、添加枯草芽孢杆菌S10的复合酿酒菌剂出酒率高，发酵白酒风味感官好，口感柔和。

即枯草芽孢杆菌S10株与标准菌株CICC1007相比具有较高的耐高温、耐乙醇、耐酸能力以及产白酒风味成分前体物质乙偶姻的能力，蛋白酶活性高，酱香风味突出，并具有高产丙酸的特性，发酵白酒口感好的特点。

附图说明

图1是枯草芽孢杆菌S10菌株的***发育树图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应当理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不能限制本发明的保护范围。

实施例

实施例1枯草芽孢杆菌S10菌株的分离与鉴定

1.1枯草芽孢杆菌S10菌株的分离:从湖北省某白酒厂采集酒醅样品，称取酒醅样品10g，加至装有90mL无菌水的三角瓶中，振荡均匀后置于80℃恒温水浴锅中处理20min，摇匀稀释后，取10-3、10-4、10-5三个稀释梯度涂布到牛肉膏蛋白胨培养基上，每个稀释梯度做3个重复，置37℃恒温培养箱中培养36h，获得单菌落经进一步划线分离纯化保存用于蛋白酶活性测定。将分离自酒醅的25株芽孢杆菌及1株标准枯草芽孢杆菌CICC10071菌株经牛肉膏平板活化后接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃、170rpm摇床培养12h,将培养的种子液按照3％的接种量接种至产蛋白酶发酵培养基中，37℃、170rpm培养48h，离心(4000r，10min)，取上清液为待测样品，按照国标福林-酚试剂法测定各菌株发酵液碱性蛋白酶活，每个菌株3瓶重复。各芽孢杆菌菌株蛋白酶活测定结果如表1所示。采用此方法经筛选后获得1株在能产生较高蛋白酶活性的芽孢杆菌，菌株编号为S10,其在产蛋白酶发酵培养基中的碱性蛋白酶活性达241.69U/mL。

将上述芽孢杆菌菌株分别接种至葡萄糖蛋白胨液体培养基37℃、170rpm培养24h，按照10％的接种比例接种至小麦固体培养基中，并设置空白组(未接种小麦固体培养基)，按照35℃→45℃→55℃升温培养，每个温度段各培养2d，参照色泽、香气、粘性的曲香感官评定标准,筛选出具有产酱香功能的芽孢杆菌。每个菌株3瓶重复，综合评分是重复3次试验的综合评价结果。其中6株芽孢杆菌及标准菌株发酵产酱香风味感官评价结果见表2。从表2可以看出：碱性蛋白酶活较高菌株S10产酱香能力明显较其他菌株强，表明芽孢杆菌的产酱香能力与其产蛋白酶活的高低有一定的相关性。

表1芽孢杆菌碱性蛋白酶活检测结果

表2不同芽孢杆菌产酱香能力比较结果

本发明人将分离的一株新的枯草芽孢杆菌S10株(Bacillus subtilis S10)保藏于国家知识产权局指定的保藏机构-中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017466，保藏日期是2017年9月1日。中国典型培养物保藏中心简称CCTCC，位于湖北省武汉市武汉大学校内，邮编430072，电话：027-68752319，Email:[email protected]。

1.2枯草芽孢杆菌S10株的鉴定：通过形态特征观察、生理生化测定及16S rDNA基因序列分析结果对S10进行鉴定。在鉴定中，本实验选择枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisCICC10071菌株作为对照菌株。枯草芽孢杆菌为常用普通微生物菌种，登载于中国工业菌种保藏中心目录中，处于公开状态，科学工作者可向保藏中心索取。

1.2.1枯草芽孢杆菌S10株形态特征是：菌落呈乳白色，表面平整粗糙，不透明，边缘不整齐，细胞为短杆状，产芽孢。

1.2.2通过16S rDNA序列分析进行***发育地位鉴定：

将分离纯化得到的细菌菌株接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在37℃，170rpm的条件下振荡培养16h，再利用细菌基因组试剂盒提取基因组DNA。

采取试剂盒抽提得到细菌DNA后，通过PCR扩增16S rDNA，配置50μL的反应体系，细菌的16S rDNA引物为27F(5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和1492R(5'-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3')。

PCR循环程序为：94℃预变性5min，94℃50s，54℃50s，72℃90s，30个循环；72℃延伸10min。扩增得到的细菌PCR产物送至金唯智生物科技有限公司测序，测序的长度在1400bp左右，测序结果采用BioaEdit软件序列图谱人工校对拼接，拼接后的序列在NCBI核酸序列数据库中进行同源序列搜索比对。根据同源序列搜索结果，选取测试菌株关系较近的模式菌株的16S rDNA序列区序列，用MEGA软件采取邻接法构建***发育树。

实验得到1042bp的基因序列，在Genbank核酸序列数据库中进行同源序列搜索，S10与Bacillus subtilis CICC10071的同源性超过99％，符合Kuttzman&Robnett所定的同种内不同菌株见差异不超过1％的标准。图1是根据16S rDNA序列所做的***发育树。

1.2.3：枯草芽孢杆菌S10株的生理生化实验测定结果：见表3。根据16S rDNA序列分析结果和生理生化实验测定结果，参照文献报道(东秀珠,蔡妙英.常见细菌***鉴定手册.北京:科学出版社,2001,267-295.),可判断S10菌为枯草芽孢杆菌。

表3枯草芽孢杆菌S10株的生理生化实验结果

测定项目	结果	测定项目	结果
				接触酶	+	葡萄糖	+
厌氧生长	－	木糖	+
				甲基红试验	+	甘露醇	+
硝酸盐还原	+	蔗糖	+
				45℃生长	+	甘油	－
pH 5.7生长	+	分解酪素	+
				7％NaCl生长	+	淀粉水解	+
利用柠檬酸盐	+	发酵葡萄糖产气	－

实施例2枯草芽孢杆菌S10抗性能力比较分析

2.1枯草芽孢杆菌S10株与标准菌株CICC 1007耐酒精能力比较

将菌株S10和标准菌株CICC1007的种子液接入含有乙醇浓度(v/v)分别为2％、4％、6％、8％的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于37℃、170rpm摇瓶培养24h后，菌液稀释10倍后用分光光度计测OD₆₀₀值。如表4所示，在添加了6％(v/v)乙醇的培养基中，S10仍生长较好，但CICC1007菌株则不生长，表明S10耐乙醇的能力明显高于CICC1007菌株。

表4枯草芽孢杆菌S10株与标准菌株CICC1007耐酒精能力比较

注：“—”表示不生长

2.2枯草芽孢杆菌S10株与标准菌株CICC1007耐酸能力比较

使用醋酸：乳酸＝1:1分别调节LB液体培养基pH至4.0、4.5、5.0、5.5。将菌株S10和标准菌株CICC1007的种子液分别转接到pH分别为4.0、4.5、5.0、5.5的LB液体培养基中，置于37℃、170rpm摇瓶培养24h，稀释10倍后测OD₆₀₀值。从表5可以看出，枯草芽孢杆菌S10在pH4.5的LB培养基中仍有一定生长，而标准菌株CICC1056不生长。S10株在pH5.0的LB培养基中已生长较好，而CICC1056株仅有微弱生长。表明S10耐酸能力明显高于CICC1007菌株。

表5枯草芽孢杆菌S10株与标准菌株CICC1007耐酸能力比较

注：“—”表示不生长

2.3枯草芽孢杆菌S10耐高温生长能力测定

将培养的两种枯草芽孢杆菌种子液按相同比例分别接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，分别在37℃、45℃和50℃下170rpm摇床培养24h，测定OD₆₀₀值。检测结果见表6，结果表明S10菌株在45℃下仍能正常生长，具有很强的耐高温性，与37℃培养的生长量相比，45℃下的相对生长量达62.6％，其耐高温能力比标准菌株CICC1007好。

表6 S10与标准菌株CICC1007的耐高温生长能力测定结果

实施例3、枯草芽孢杆菌S10菌株纯种发酵风味成分比较检测

将枯草芽孢杆菌S10和标准菌株CICC1007分别接种高粱糖化液，按照液态法白酒发酵条件进行纯种发酵试验，发酵结束后对发酵醪蒸馏样品进行气相色谱分析，结果见表7。从表7中可以看出，S10株产乙偶姻、丙酸和己酸的能力分别比CICC1007株高18.3％、60.7％和29.8％。

将两株芽孢杆菌分别接种于小麦固体培养基中进行发酵，其发酵产物的GC-MS分析结果表明(表8)：S10株发酵产生的白酒风味物质异戊酸、β-苯乙醇、肉豆蔻酸和具有健康功能的α-亚麻酸的含量均显著高于标准菌株CICC1007。

表7枯草芽孢杆菌S10株和CICC1007纯种发酵结果(mg/L)

表8两株芽孢杆菌发酵产物的GC-MS分析结果(相对含量/％)

实施例4 S10芽孢杆菌酿酒菌剂及其组合物的制备方法

按照如下步骤进行：

(1)S10菌种活化：用接种环挑取一环S10菌种接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基中，置37℃恒温培养箱中培养20-24h。

(2)种子液的制备：挑取一环经活化的S10菌株接入装有100mL含0.2％亚硫酸钠的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃、180r/min摇床培养24h备用。

(3)固体发酵培养基制备：按麸皮40％，米糠30％，豆粕30％，料：水＝1:1，pH自然，混合均匀，配制成固体发酵培养基，并分装于耐高温的塑料方盒中，121℃灭菌30min后冷却待用。

(4)固体菌剂培养：按5-10％接种量接入预先培养好的S10种子液至固体发酵培养基中，混合均匀后置30℃恒温培养箱中培养2天，每12h搅拌一次。

(5)干燥及粉碎：将上述发酵完毕的S10固体培养物置于55℃烘箱中烘至含水率低于15％，用万能粉碎机将干燥的培养物粉碎、过100目筛后，制备成固体粉末状菌剂并装入密封的塑料袋中，放置干燥、阴凉处或冰箱保鲜层中保藏。取样采用稀释平板测数法检测样品中S10芽孢杆菌的活菌数达40-300亿cfu/克。

(6)混合与包装：将含S10株的固体菌剂装塑料袋后封口后制成含单一菌种的酿酒菌剂；将酿酒酵母CCTCC AY92003与S10按活菌数比＝10:1比例混合后塑料袋后封口制成酿酒菌剂组合物。

实施例5 S10酿酒菌剂在液态白酒发酵中的应用

将酿酒酵母AY92003与枯草芽孢杆菌S10酿酒菌剂分别按1:0、10:1、1:1、1:10和0:1的菌数比混合接种高粱糖化液进行液态白酒发酵。发酵结束后对发酵液进行气相色谱分析，结果见表9。从表中可以看出，当酿酒酵母AY92003与枯草芽孢杆菌S10菌数按10:1混合发酵时，发酵液中乙醇、乙酸乙酯、醋嗡、丙酸、己酸等含量最高。表明在酿酒酵母中添加一定比例的S10酿酒菌剂后，对于提高白酒出酒率及白酒风味物质含量具有明显的促进作用。

表9酿酒酵母AY92003与S10不同比例混合发酵结果分析(mg/L)

实施例6 S10酿酒组合菌剂在提高白酒出酒率和酒品质量中的应用

6.1试验方法

将某白酒企业酿酒车间蒸馏后的酒醅摊凉后按照200kg/组分堆，对照组接种高温大曲比例为投料量的15％，两个实验组接种高温大曲比例均为投料量的10％(减少大曲用量33.3％)，同时分别加入实施例6制备的S10酿酒菌剂组合物(S10组)和用枯草芽孢杆菌标准菌株替代S10的CICC1007酿酒菌剂组合物(CICC1007组)，接种比例均为投料量的0.5％(体积百分比)，替代33.3％的高温大曲。接种后进行高温堆积发酵3天，堆料温度达45℃后入池发酵30d，取样蒸馏。每个处理三个平行样。对蒸馏的样品中的醇类、酸类、酯类等成分含量进行气相色谱分析。主要仪器：气相色谱分析仪。

6.2酒质色谱分析结果及感官品评

由表10可以看出：含S10酿酒菌剂组合物的实验组酒醅中酒精度可达5.5％，比CICC1007组提高了12.2％。S10组中乙酸乙酯、丙酸、己酸、β-苯乙醇和乙偶姻的产量分别较CICC1007组提高了21.2％、34.8％、12.0％、15.5％和19.0％。对提高原酒的酱香风味和改善口感作用明显。表明酒醅中添加含S10酿酒菌剂组合物对于提高原酒出酒率和酒品质量有明显的促进作用，并可减少高温大曲用量33.3％。

表10发酵酒醅蒸馏酒样中各成分气相色谱分析结果

感官品评对比为：对照组酒样分数在85-90，评语是绵甜醇厚、香味较谐调、酒体较丰满；CICC1007组酒样分数在90-95,评语为绵甜醇厚、香味较谐调、酒体较醇厚；S10组酒样分数在95-100，评语为酱香突出、绵柔醇厚、香味谐调、酒体丰满。表明高温大曲配合使用枯草芽孢杆菌S10菌剂可以明显改善酒质，由于乙酸乙酯、丙酸、己酸和乙偶姻等白酒的主要香味成分含量的增加，使酒中的香气更加协调，口感更佳。

Claims (7)

1.一株能产生酱香风味并高产丙酸用于白酒酿造的枯草芽孢杆菌，其特征在于,该菌株为枯草芽孢杆菌S10 Bacillus subtilis S10，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017466。

2.一种含权利要求1中所述的枯草芽孢杆菌S10的微生物菌剂，其特征在于其活性成分为枯草芽孢杆菌S10菌体及其代谢产物。

3.权利要求1所示枯草芽孢杆菌的加量是高温大曲的0.5％(体积百分比)。

4.根据权利要求2中所述的微生物菌剂，其特征在于所述的菌剂为固态菌剂。

5.制备权利要求2中所述的菌剂的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1)S10菌种活化：用接种环挑取一环S10菌种接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基中，置37℃恒温培养箱中培养20-24h；

(2)种子液的制备：挑取一环经活化的S10菌株接入装有100mL的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃、180r/min摇床培养24h备用；

(3)固体发酵培养基制备：按麸皮40％，米糠30％，豆粕30％，料：水＝1:1，pH自然，混合均匀，配制成固体发酵培养基，并分装于耐高温的塑料方盒中，121℃灭菌30min后冷却待用；

(4)固体菌剂培养：按5-10％接种量接入预先培养好的S10种子液至固体发酵培养基中，混合均匀后置30℃恒温培养箱中培养2天，每12h搅拌一次；

(5)干燥及粉碎：将上述发酵完毕的S10固体培养物置于55℃烘箱中烘至含水率低于15％，用万能粉碎机将干燥的培养物粉碎、过100目筛后，制备成固体粉末状菌剂并装入密封的塑料袋中，放置干燥、阴凉处或冰箱保鲜层中保藏；其中，菌剂样品中S10芽孢杆菌的活菌数达40-300亿cfu/克；

(6)混合与包装：将酿酒酵母CCTCC AY92003与S10按活菌数比＝10:1比例混合后塑料袋后封口制成酿酒菌剂组合物。

6.权利要求2所述的枯草芽孢杆菌S10菌剂在白酒酿造中的应用。

7.权利要求3中所述的酿酒菌剂组合物在在白酒酿造中的应用。