CN107367562A - 硫酸多黏菌素b的分析检测方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种硫酸多黏菌素B的分析检测方法。该检测方法包含以下步骤：采用高效液相色谱法联合蒸发光散射器，对硫酸多黏菌素B进行分析检测，即可。该方法实现了将硫酸多黏菌素B中四个组分完全分离，专属性强，操作简单，且不受其他有机杂质干扰，效果与EP 9.0原料药的HPLC方法接近、灵敏度高、简单快速，能更准确地用于测定硫酸多黏菌素B制剂中各组分含量。

Description

硫酸多黏菌素B的分析检测方法及应用

技术领域

本发明涉及硫酸多黏菌素B分析检测方法及应用。

背景技术

多黏菌素B(polymyxin B)是由多黏芽胞杆菌产生的、由多种氨基酸和脂肪酸组成的一种碱性多肽类抗生素。目前的生产主要采用微生物发酵法生物合成，再经提取精制得到。临床使用其硫酸盐，主要作为抗感染类药物使用，治疗由绿脓杆菌等革兰氏阴性菌引起的皮肤创面、泌尿***以及眼、耳、气管等部位感染，也可用于败血症、腹膜炎等。硫酸多黏菌素B为结构相似的多组分混合物，包括多黏菌素B₁、B₂、B₃、B₁-I。其中，B₁和B₂是有效成分，B₃和B₁-I为主要杂质。化学结构式如下：

具体地，多黏菌素B₁、B₂、B₃和B₁-I结构上的区别如下所示：

目前，欧洲药典EP 9.0、美国药典USP 40及中国药典ChP 2015均收载了硫酸多黏菌素B或其制剂的相关分析检测方法。

其中，在EP 9.0中硫酸多黏菌素B含量测定采用硫酸钠-磷酸-水-乙腈体系的反相高效液相色谱法等度洗脱，紫外波长215nm处检测，外标法计算各组分含量，单针分析时间约50min。无相关制剂的检测方法；

USP 40和ChP 2015虽采用微生物抗生素效价法计算硫酸多黏菌素B及其制剂的含量，但在多黏菌素组分检查项下也采用了和EP 9.0一致的高效液相色谱法，且均要求以干燥品计，B1、B2、B3、B1-I总和≥80.0％，B3≤6.0％、B1-I≤15.0％；

Orwa等采用乙腈-硫酸钠水溶液(0.7％，m/v)-磷酸水溶液(5.8％，v/v)-水(22.25：50：5：22.75)为基础流动相，在215nm考察了不同pH下硫酸多黏菌素B₁、B₂、B₃的分离情况(Journal of Chromatography A,870(2000)237–243)。

由于硫酸多黏菌素B中的各组分结构相似，仅在脂肪酸链和Z位氨基酸残基有区别，且各单组分的含量差异大。加之硫酸多黏菌素B在215nm下吸收较弱，采用上述方法时各组分的信号强度低，所以会一定程度影响定量分析时色谱积分的准确性；并且，等度洗脱方法也有导致分离各组分的柱效低、分析时间较长等缺点。因此，开发一种快速、灵敏、准确、同时能对各组分进行定量分析的方法，对药品的质量控制有重要意义。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于为了克服现有技术中采用抗生素微生物效价法测定硫酸多黏菌素B时专属性差、精密度低、或者采用高效液相色谱联用紫外检测器对硫酸多黏菌素B进行分析检测时，存在流动相配制复杂、灵敏度低、重复性差、分析时间长等问题，从而提供了一种硫酸多黏素菌B的分析检测方法及其应用，该分析方法相对于抗生素微生物效价法专属性强操作简单，可以将四个组分完全分离，且不受其他有机杂质干扰，效果与EP 9.0原料药的HPLC方法接近、灵敏度高、简单快速，能更准确地用于测定硫酸多黏菌素B制剂中各组分含量。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的。

本发明提供了一种硫酸多黏菌素B的分析检测方法，其包含以下步骤：采用高效液相色谱法联合蒸发光散射器，对硫酸多黏菌素B进行分析检测，即可；

所述的高效液相色谱法中的色谱柱为反相分析柱，色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶；例如Kromasil 100-5C18柱；

所述的高效液相色谱法中的流动相为极性有机溶剂和三氟乙酸水溶液，所述三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的体积百分含量为0.01％～0.3％；所述三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的体积百分含量的计算方法为三氟乙酸的体积占三氟乙酸水溶液总体积的比例。

本发明中，所述硫酸多黏菌素B为多黏菌素B₁、B₂、B₃和B₁-I混合物。

本发明中，所述的高效液相色谱法可采用梯度洗脱，所述梯度洗脱时所述三氟乙酸水溶液与所述极性有机溶剂的体积比可为85:15～60:40。

本发明中，所述梯度洗脱中，所述流动相比例随时间的变化范围可如表1所示：

表1

再可如表2或表3所示：

表2

时间(min)	极性有机溶剂(％，v/v)
		0	24
5.00	24
		5.01～8.00	24～29
8.01～15.00	29～32
		15.01～20.00	32～40

表3

时间(min)	极性有机溶剂(％，v/v)
		0	24
5.00	24
		5.01～8.01	24～27
8.01～15.00	27～30
		15.01～20.00	30～40

本发明中，所述三氟乙酸水溶液中的三氟乙酸的体积百分含量可为0.05％～0.1％。

本发明中，所述极性有机溶剂可采用本领域中高效液相色谱中常用的极性有机溶剂，例如甲醇、乙醇和乙腈中的一种或多种。

本发明中，所述高效液相色谱法中的高效液相色谱仪可采用本领域的常规高效液相色谱仪，例如厂家为Waters的型号为Alliance e2695高效液相色谱仪。

本发明中，所述色谱柱的规格可为本领域常规分析柱规格，可选择以下规格的色谱柱：所述色谱柱的填料颗粒度可为2.7μm～5μm；例如3μm～5μm；所述色谱柱的长度可为100mm～250mm，例如150mm；所述色谱柱的进样体积可为1～50μL，例如20μL。

本发明中，所述高效液相色谱法中的柱温可为本领域该类操作的常规温度，例如20～40℃，再例如35℃。

本发明中，所述的流动相的流速可参考领域的常规操作，例如0.5～1.5mL/min，再例如0.8～1.0mL/min。

本发明中，所述蒸发光散射器可采用本领域常规的与高效液相色谱仪联用的蒸发光散射器，例如厂家为Waters的型号为2424的蒸发光散射器，所述蒸发光散射器的参数设置方式可为常规设置方式，例如：

所述蒸发光散射器的漂移管温度可为40～80℃；例如60～70℃；

所述蒸发光散射器的载气压力可为20～45psi；例如25～35psi；

所述蒸发光散射器的雾化口温度可为12℃～35℃；例如12～30℃。

本发明中，所述的硫酸多黏素B还可替换为硫酸多黏素B的原料药，或者硫酸多黏素B的制剂，或者硫酸多黏素B中B1、B2、B3、B1-I两种或两种以上组分的混合物。

本发明还提供了所述分析检测方法在硫酸多黏菌素B原料药或制剂含量检测中的应用，其包含以下步骤：

步骤(1)、分别配置一定浓度的对照品溶液和硫酸多黏菌素B原料药或制剂待测品溶液，采用上述分析检测方法对所述对照品溶液和所述硫酸多黏菌素B制剂待测品溶液进行分析检测；测得所述对照品溶液和所述硫酸多黏菌素B制剂中各组分的峰面积；

步骤(2)、根据所述对照品溶液中所述硫酸多黏菌素B中各组分的峰面积和相应的组分浓度，得到回归方程；

步骤(3)、所述硫酸多黏菌素B原料药或制剂的各组分的含量由步骤(1)中测得的各组分的峰面积的代入步骤(2)中得到的回归方程，即可。

所述制剂可为注射用无菌粉末。

所述步骤(1)中，所述对照品可为硫酸多黏菌素B USP对照品，例如，批号为N1M425，每100mg所述对照品中含有B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃ 3.2mg、B₁-I 6.1mg；

所述步骤(1)中，所述对照品溶液和所述硫酸多黏菌素B制剂待测品溶液的配制可采用能将其溶解的常规溶剂，例如乙腈和水的混合溶剂，例如乙腈和水的体积比为8:2的混合溶剂；

所述对照品溶液的浓度可参考本领域制作浓度与峰面积的双对数回归方程时的浓度，例如0.3mg/mL～1.5mg/mL；所述硫酸多黏菌素B制剂待测品溶液的浓度可根据对照品浓度的范围进行选择，例如0.5mg/mL。

所述步骤(2)中，所述回归方程的获得可参考本领域的常规计算方法，例如，以所述对照品溶液中所述硫酸多黏菌素B中各组分的峰面积取10为底的对数为横坐标，以相应组分的质量浓度取10为底的对数为纵坐标，拟合二次曲线，计算得所述回归方程。

所述步骤(3)中，所述硫酸多黏菌素B制剂的各组分的含量可由步骤(1)中测得的各组分的峰面积的取10为底的对数代入步骤(2)中得到的回归方程。

所述分析检测方法在硫酸多黏菌素B制剂含量检测中的应用，可包含以下步骤：

(1)称取硫酸多黏菌素B对照品(为各组分含量已知的混合物，以USP对照品为例，每100mg中含B1 69.7mg、B2 15.9mg、B3 3.2mg、B1-I 6.1mg)适量，置于容量瓶中，以水-乙腈(80:20)作溶剂溶解并稀释至刻度，得到硫酸多黏菌素B的总浓度为5.0mg/mL的溶液，作为对照品溶液A；从溶液A中取适量分别置于容量瓶中，配制成总浓度分别为0.3mg/mL～1.5mg/mL的对照品溶液；

取硫酸多黏菌素B原料药或制剂供试品适量，以水-乙腈(80:20，体积比)为溶剂配制成浓度为0.5mg/mL的供试品溶液；

(2)取所述对照品溶液和供试品溶液各20μL进样，采用上述分析检测方法，根据所述对照品溶液中硫酸多黏菌素B各组分的峰面积和相应的溶液组分质量浓度，各自取对数后拟合二次曲线；

(3)所述供试品溶液中各组分的含量由测得的峰面积的对数代入标准曲线计算得；硫酸多黏菌素B各组分含量之和即为总含量。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和仪器均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

(1)该分析检测方法具有操作简单、专属性强、灵敏度高和简单快速等特点。

(2)该分析检测方法对于多黏菌素B各组分浓度对数-峰面积对数在各国药典规定的的质量控制范围内具有良好的线性；

(3)该分析检测方法适用于硫酸多黏菌素B中各组分的鉴定或定量检测，也可用于硫酸多黏菌素B原料药或制剂中硫酸多黏菌素B的含量检测，或进一步用于监测硫酸多黏菌素B、其原料药或制剂的制备工艺，实用性强。

附图说明

图1为实施例1中硫酸多黏菌素B的分析检测方法的HPLC图；

图2～图5为实施例2中硫酸多黏菌素B各组分的浓度-峰面积双对数拟合曲线图；

图6为实施例3中硫酸多黏菌素B原料药中各组分含量检测的HPLC图；

图7为实施例4中注射用硫酸多黏菌素B中各组分含量检测的HPLC图；

图8为实施例5中注射用硫酸多黏菌素B中各组分含量检测的HPLC图；

图9为实施例6中注射用硫酸多黏菌素B中各组分含量检测的HPLC图；

图10为对比实施例1中硫酸多黏菌素B的分析检测方法的HPLC图；

图11为对比实施例2中硫酸多黏菌素B的分析检测方法的HPLC图；

图12为对比实施例3中硫酸多黏菌素B的分析检测方法的HPLC图；

图13为对比实施例4中硫酸多黏菌素B原料药的分析检测方法的HPLC图；

图14为对比实施例5中硫酸多黏菌素B原料药的分析检测方法的HPLC图；

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

分析方法的专属性及灵敏度

实验条件：

三氟乙酸(HPLC级，美国天地有限公司)；

乙腈(HPLC级，赛默飞世尔科技有限公司)；

硫酸多黏菌素B USP对照品(批号N1M425，每100mg中含B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃3.2mg、B₁-I 6.1mg)；

高效液相色谱仪：Alliance e2695高效液相色谱仪(Waters)；

蒸发光散射检测器：2424型蒸发光散射检测器(Waters)；

Empower 3高效液相色谱仪数据处理***；

色谱柱：Kromasil 100-5 C18色谱柱(5μm，4.6×250mm)；

流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液(pH值为1.95)，流动相B为乙腈，乙腈体积比的梯度变化为0min至5min，保持在24％；5min至8min，从24％升至29％；8min至15min，从29％升至32％；15min至20min，从32％升至40％。流速1.0mL/min，柱温35℃。

检测器漂移管温度60℃，雾化口温度12℃，载气压力35.0psi，增益800。

实验步骤

精密称取硫酸多黏菌素B USP对照品50mg，置于100mL容量瓶中，以水-乙腈(80:20)为溶剂溶解并稀释至刻度。进样20μL，重复进样6次。记录色谱图。

计算各组分六针峰面积对数的RSD，硫酸多黏菌素B₂、B₃、B₁-I、B₁的RSD依此为0.22％、0.50％、0.29％和0.13％。以第一针进样的谱图为例，如图1所示，并结合表4可知：硫酸多黏菌素B₂、B₃、B₁-I、B₁的保留时间依次为10.904min、11.230min、11.854min、12.409min，四组分间完全分离，且其他杂质无干扰。结果表明***精密良好，本方法对硫酸多黏菌素B的各组分具有良好的专属性。

表4

组分名称	保留时间/min	峰面积	分离度
				多黏菌素B2	10.904	521591	-
多黏菌素B3	11.230	38276	1.9
				多黏菌素B1-I	11.854	101355	3.8
多黏菌素B1	12.409	5242581	3.1

此外，取相同的对照品溶液，采用USP40中多黏菌素B组分检查项下方法进样检测，结果显示除多黏菌素B₁外，各组分响应值均小于50mAU。将本方法与USP40的分析检测方法的信噪比和理论塔板数进行比较，结果如表5所示：

表5

结果表明，本方法中相对含量差异较大的硫酸多黏菌素B各组分的检测灵敏度和柱效均得到了显著的提高，有利于提高色谱峰面积的积分准确度。

实施例2

分析方法的线性和范围

实验条件

采用与实施例1类似的实验条件进行实验。硫酸多黏菌素B USP对照品(批号N1M425，每100mg中含B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃ 3.2mg、B₁-I 6.1mg)。

实验步骤

精密称取硫酸多黏菌素B USP对照品100mg，置于20mL容量瓶中，以水-乙腈(80:20)为溶剂溶解并稀释至刻度，吸取该母液600μL、800μL、900μL、1000μL、1100μL、1200μL、1400μL、2000μL和3000μL,分别置于10mL容量瓶中，稀释定容后作为对照液。取上述溶液各20μL进样，记录色谱图。以各组分峰面积的取10为底的对数为横坐标，以相应组分的质量浓度的取10为底的对数为纵坐标，拟合二次曲线。

经计算，在浓度0.0457mg/mL～0.165mg/mL范围内，多黏菌素B₂的回归方程为y＝-3.4464x²–4.7041x+4.7527，R²＝0.9978；在浓度0.0092mg/mL～0.0499mg/mL范围内，多黏菌素B₃的回归方程为y＝-1.8517x²–3.5x+4.3049，R²＝0.9959；在浓度0.0175mg/mL～0.0951mg/mL范围内，多黏菌素B_1-I的回归方程为y＝-2.2471x²–3.5297x+4.8556，R²＝0.9964；在浓度0.2003mg/mL～0.4673mg/mL范围内，多黏菌素B₁的回归方程为y＝-2.773x²–0.0979x+7.3827，R²＝0.9980。如图2～图5所示。

结果表明，本方法对于多黏菌素B各组分浓度对数-峰面积对数在各国药典规定的的质量控制范围内具有良好的线性。

实施例3

硫酸多黏菌素B原料药中各组分的含量检测

实验条件

采用与实施例1类似的实验条件进行实验。不同之处仅在于：乙腈体积比的梯度变化为0min至5min，保持在24％；5min至8min，从24％升至27％；8min至15min，从27％升至30％；15min至20min，从30％升至40％。载气压力为30psi。硫酸多黏菌素B USP对照品的批号为N1M425，每100mg中含B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃ 3.2mg、B₁-I 6.1mg。硫酸多黏菌素B原料药的批号为A1411105，购自丹麦Xellia制药公司。

实验步骤

精密称取硫酸多黏菌素B USP对照品50mg，置于10mL容量瓶中，以水-乙腈(80:20)为溶剂溶解并稀释至刻度，吸取该母液600μL、900μL、1000μL、1100μL、1400μL、2000μL和3000μL，分别置于10mL容量瓶中，稀释定容后作为对照液。精密称取硫酸多黏菌素B 50mg，置于100Ml容量瓶中，以水-乙腈(80:20)为溶剂溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。取上述溶液各20μL进样，记录色谱图。以对照液各组分峰面积的取10为底的对数为横坐标，以相应组分的质量浓度的取10为底的对数为纵坐标，拟合二次曲线。供试品中各组分的含量由测得的峰面积的对数代入标准曲线计算得。硫酸多黏菌素B各组分含量之和即为总含量。

如图6所示，多黏菌素B各组分分离度良好，多黏菌素B₂峰和B₃峰的分离度为2.1，多黏菌素B₃峰和B₁-I峰的分离度为3.9，多黏菌素B₁-I峰和B₁峰的分离度为2.8。经计算，多黏菌素B₂、B₃、B₁-I、B₁的含量分别为64.4％、11.2％、3.7％和9.2％，多黏菌素B的含量为88.5％。

实施例4

注射用硫酸多黏菌素B的含量检测

实验条件

采用与实施例3类似的实验条件和步骤进行实验，其中流动相中的水相替代为体积百分含量为0.1％的三氟乙酸水溶液。雾化口温度为30℃，漂移管温度为70℃。注射用硫酸多黏菌素B为自制，批号1507801。

如图7所示，多黏菌素B各组分分离度良好，多黏菌素B₂峰和B₃峰的分离度为1.8，多黏菌素B₃峰和B₁-I峰的分离度为3.8，多黏菌素B₁-I峰和B₁峰的分离度为3.2。经计算，多黏菌素B₂、B₃、B₁-I、B₁的含量分别为64.5％、11.0％、3.4％和7.3％，多黏菌素B的含量为86.2％。

实施例5

采用与实施例1类似的实验条件和步骤进行实验，其中流动相中的水相替代为体积百分含量为0.01％的三氟乙酸水溶液。硫酸多黏菌素B USP对照品的批号为N1M425，每100mg中含B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃ 3.2mg、B₁-I 6.1mg。

如图8所示，多黏菌素B各组分分离度良好，多黏菌素B₂峰和B₃峰的分离度为2.1，多黏菌素B₃峰和B₁-I峰的分离度为3.1，多黏菌素B₁-I峰和B₁峰的分离度为2.0。以多黏菌素B₁峰计，理论塔板数18243，信噪比S/N为1149。

实施例6

采用与实施例1类似的实验条件和步骤进行实验，其中流动相中的水相替代为体积百分含量为0.01％的三氟乙酸水溶液。硫酸多黏菌素B USP对照品的批号为N1M425，每100mg中含B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃ 3.2mg、B₁-I 6.1mg。

如图9所示，多黏菌素B各组分分离度良好，多黏菌素B₂峰和B₃峰的分离度为2.1，多黏菌素B₃峰和B₁-I峰的分离度为3.1，多黏菌素B₁-I峰和B₁峰的分离度为2.0。以多黏菌素B₁峰计，理论塔板数18243，信噪比S/N为1149。

对比实施例1

采用与实施例1类似的实验条件和步骤进行实验，其中流动相中的水相替代为体积百分含量为0.01％的三氟乙酸水溶液。硫酸多黏菌素B USP对照品的批号为N1M425，每100mg中含B₁ 69.7mg、B₂ 15.9mg、B₃ 3.2mg、B₁-I 6.1mg。

如图10所示，多黏菌素B各组分分离度良好，多黏菌素B₂峰和B₃峰的分离度为2.1，多黏菌素B₃峰和B₁-I峰的分离度为3.1，多黏菌素B₁-I峰和B₁峰的分离度为2.0。以多黏菌素B₁峰计，理论塔板数18243，信噪比S/N为1149。

对比实施例2

参考实施例1，不同之处仅在于水相为20mmol/L的甲酸铵(pH 2.1)水溶液，无法将多黏菌素B₁-I和B₁分离开。如图11所示，各组分保留很弱，且无法分离。

对比实施例3

参考实施例1，不同之处仅在于水相为0.1％甲酸，无法将多黏菌素B的各组分分离开。如图12所示，各组分保留很弱，且无法分离。

对比实施例4

该对比实施例中，采用与实施例3类似的实验条件和步骤进行硫酸多黏菌素B的含量检测，不同之处仅在于水相为0.1％甲酸；使用Kromasil C18(4.6×250mm,5μm)；乙腈体积比的梯度变化为0min至5min，保持在12％；5min至8min，从12％升至20％；8min至15min，从20％升至30％；15min至20min，从30％升至40％。；蒸发光散射使用的检测器的漂移管温度为70℃；流动相流速0.8ml/min；蒸发光散射使用的检测器的漂移管温度为40℃。

如图13所示，本实施例下无法将多黏菌素B₁-I和B₁分离。

对比实施例5

本实施例中，采用与实施例3类似的实验条件和步骤进行硫酸多黏菌素B的含量检测，不同之处仅在于水相为20mM醋酸铵水溶液(pH 4.6)；乙腈体积比的梯度变化为0min至5min，保持在15％；5min至8min，从15％升至24％；8min至15min，从24％升至32％；15min至20min，从32％升至40％；蒸发光散射使用的检测器的漂移管温度为70℃；载气压力为35psi。

如图14所示，本实施例下无法将多黏菌素B的各组分分离。

Claims (10)

1.一种硫酸多黏菌素B的分析检测方法，其特征在于，包含以下步骤：采用高效液相色谱法联合蒸发光散射器，对硫酸多黏菌素B进行分析检测，即可；

所述的高效液相色谱法中的色谱柱为反相分析柱，所述色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶；

所述的高效液相色谱法中的流动相为极性有机溶剂和三氟乙酸水溶液，所述三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的体积百分含量为0.01％～0.3％。

2.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述的高效液相色谱法采用梯度洗脱，所述梯度洗脱时所述三氟乙酸水溶液与所述极性有机溶剂的体积比为85:15～60:40。

3.如权利要求2所述的分析检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱中，所述流动相比例随时间的变化范围如表1所示：

表1

4.权利要求2或3所述的分析检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱中，所述流动相比例随时间的变化范围如表2或表3所示：

表2

表3

5.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述三氟乙酸水溶液中的三氟乙酸的体积百分含量为0.05％～0.1％。

6.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述极性有机溶剂选自甲醇、乙醇和乙腈中的一种或多种；

和/或，所述高效液相色谱法中的高效液相色谱仪为Waters的型号为Alliance e2695高效液相色谱仪；

和/或，所述色谱柱为Kromasil 100-5C18柱；

和/或，所述色谱柱的填料颗粒度为2.7μm～5μm；优选3μm～5μm；所述色谱柱的长度为100mm～250mm，优选250mm；

和/或，所述色谱柱的进样体积为1～50μL，优选20μL；

和/或，所述高效液相色谱法中的柱温为20～40℃，优选35℃；

和/或，所述的流动相的流速为0.5～1.5mL/min，优选0.8～1.0mL/min。

7.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述蒸发光散射器为厂家为Waters的型号为2424的蒸发光散射器；

和/或，所述蒸发光散射器的漂移管温度为40～80℃，优选60～70℃；

和/或，所述蒸发光散射器的载气压力为20～45psi，优选25～35psi；

和/或，所述蒸发光散射器的雾化口温度为12℃～35℃；优选12～30℃。

8.一种如权利要求1-7任一项所述的分析检测方法在硫酸多黏菌素B原料药或制剂含量检测中的应用。

9.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述制剂为注射用无菌粉末。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，包含以下步骤：步骤(1)、分别配置一定浓度的对照品溶液和硫酸多黏菌素B原料药或制剂待测品溶液，采用上述分析检测方法对所述对照品溶液和所述硫酸多黏菌素B制剂待测品溶液进行分析检测；测得所述对照品溶液和所述硫酸多黏菌素B制剂中各组分的峰面积；

步骤(2)、根据所述对照品溶液中所述硫酸多黏菌素B中各组分的峰面积和相应的组分浓度，得到回归方程；较佳地，所述回归方程通过拟合二次曲线计算获得；

步骤(3)、所述硫酸多黏菌素B原料药或制剂的各组分的含量由步骤(1)中测得的各组分的峰面积的代入步骤(2)中得到的回归方程，即可。