CN107367507A - 糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片 - Google Patents

糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片 Download PDF

Info

Publication number
CN107367507A
CN107367507A CN201710271265.9A CN201710271265A CN107367507A CN 107367507 A CN107367507 A CN 107367507A CN 201710271265 A CN201710271265 A CN 201710271265A CN 107367507 A CN107367507 A CN 107367507A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mentioned
space
glycated proteins
analysis
substrate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710271265.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107367507B (zh
Inventor
中村勤
滨隆志
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Arkray Inc
Original Assignee
Arkray Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP2017081508A external-priority patent/JP6817135B2/ja
Application filed by Arkray Inc filed Critical Arkray Inc
Publication of CN107367507A publication Critical patent/CN107367507A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107367507B publication Critical patent/CN107367507B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/521—Single-layer analytical elements
    • G01N33/523—Single-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/525—Multi-layer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片。本发明提供能够更简便且准确地分析生物试样中的糖化蛋白质的方法。本发明的生物试样中的糖化蛋白质的分析方法的特征在于，包含使下式(1)所示的发色剂与生物试样反应的反应工序及对上述发色剂的发色反应进行测定的测定工序。所述式(1)中，X为碱金属离子。

Description

糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试 验片
技术领域
本发明涉及糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片。
背景技术
作为短期的血糖控制的指标，利用血中的糖化蛋白质。血中的蛋白质在其N末端或侧链的氨基上键合葡萄糖的醛基，进而通过阿马多里(アマドリ)重排而生成作为阿马多里化合物的糖化蛋白质。所生成的糖化蛋白质由于侧链呈果糖结构，因此也被称为果糖胺。果糖胺是存在于血中的糖化蛋白质的总称。
糖化蛋白质为还原性物质，因此使用通过与还原性物质反应而发色的基质(例如2-(4-吲哚苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-氯化四氮唑(INT)等)，通过基质的发色程度来测定糖化蛋白质。但是，上述基质也测定糖化蛋白质以外的血中还原性物质(例如尿酸等)，因此存在不能得到血中的糖化蛋白质的准确值的问题。
因此，为了避免糖化蛋白质以外的还原性物质的影响，报道了以下的方法。第一方法为如下方法：对于试样，使用与包含糖化蛋白质的血中还原性物质反应的第一试剂来测定吸光度变化量，另一方面，使用与糖化蛋白质以外的血中还原性物质反应的第二试剂来测定吸光度变化量，从前者中减去后者，由此求出糖化蛋白质的实际的吸光度变化(专利文献1)。第二方法为如下方法：利用分解尿酸的尿酸酶、作为不溶性载体的葡糖胺聚糖等来进行试样的前处理，由此避免糖化蛋白质以外的血中还原性物质的影响(专利文献2及3)。
但是，第一方法中，对于试样，需要使用不同试剂的两种反应体系(双反应体系)，费事且成本上升。另外，在第二方法的情况下，尿酸酶的使用中，反应液产生浑浊，存在对吸光度测定产生影响的问题，另外，上述作为不溶性载体的葡糖胺聚糖的使用中，需要其固定化，由于清洗、反应停止等而使操作变得繁杂。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开平06-308129号公报
专利文献2：日本特开平07-151761号公报
专利文献3：日本特开平08-226920号公报
发明内容
发明所要解决的问题
因此，本发明的目的在于提供能够更简便且准确地分析糖化蛋白质的方法。
用于解决问题的方法
本发明的糖化蛋白质的分析方法的特征在于，包含使下式(1)所示的发色剂与生物试样反应的反应工序及对上述发色剂的发色反应进行测定的测定工序。
上述式(1)中，X为碱金属离子。
本发明的糖化蛋白质的分析试剂的特征在于，含有下式(1)所示的发色剂，在上述本发明的分析方法中使用。
上述式(1)中，X为碱金属离子。
本发明的糖化蛋白质的分析试剂盒的特征在于，含有上述本发明的分析试剂，在上述本发明的分析方法中使用。
本发明的糖化蛋白质的分析用试验片的特征在于，
含有基板，
上述基板具有试样供给区域和反应区域，
上述试样供给区域和上述反应区域利用流路进行连接，
在上述反应区域配置上述本发明的分析试剂，
上述基板中的上述反应区域为透明构件。
发明效果
根据本发明，通过使用上述式(1)所示的发色剂，能够更简便且准确地分析糖化蛋白质。
附图说明
图1是本发明的分析用试验片的一例，(A)是上述分析用试验片的俯视图，(B)是上述(A)所示的上述分析用试验片的从I-I方向观察的截面图。
图2是表示本发明的实施例1中的吸光度的结果的图。
图3是表示本发明的比较例1中的吸光度的结果的图。
图4是表示本发明的比较例2中的吸光度的结果的图。
图5A是表示本发明的实施例2中的吸光度的结果的图。
图5B是表示本发明的实施例2中的吸光度的结果的图。
图6A是表示本发明的实施例2中的吸光度的结果的图。
图6B是表示本发明的实施例2中的吸光度的结果的图。
符号说明
1 分析用试验片
2 基板
2a 上基板
2b 下基板
3 试样供给区域
3a、5c 开口部
3b 第一空间
4 第二空间
5a、5b 流路
具体实施方式
本发明的糖化蛋白质的分析方法中，例如，上述生物试样为血液试样。
本发明的糖化蛋白质的分析方法中，例如，上述血液试样为血清试样或血浆试样。
本发明的糖化蛋白质的分析方法中，例如，在上述反应工序中，通过在干燥状态的上述发色剂中添加液体状态的上述生物试样而使两者反应。
本发明的糖化蛋白质的分析用试验片中，例如，
上述基板为含有上基板和下基板的层叠体，
上述层叠体的内部具有第一空间、第二空间及将上述第一空间与上述第二空间连通的上述流路，
上述上基板在与上述第一空间对应的部位具有开口部，
上述上基板的上述开口部和上述第一空间为上述试样供给区域，
上述开口部为试样供给口，
上述第二空间为上述反应区域，
在与上述第二空间对应的上述上基板的区域及上述下基板的区域中的至少一个区域配置有上述本发明的分析试剂。
(生物试样中的糖化蛋白质的分析方法)
如上所述，本发明的糖化蛋白质的分析方法(以下称为“本发明的分析方法”)的特征在于，包含使下式(1)所示的发色剂与生物试样反应的反应工序及对上述发色剂的发色反应进行测定的测定工序。
上述式(1)中，X为碱金属离子。
虽然理由不清楚，但根据本发明，通过使用上述发色剂作为上述四氮唑盐，能够避免作为还原性物质的尿酸的影响而进行与生物试样中的糖化蛋白质的反应。因此，例如，即使在生物试样中除了糖化蛋白质以外还共存有尿酸的情况下，也能够抑制由于与尿酸的反应使表观发色增加，由此，能够测定与上述试样中所含的糖化蛋白质的量对应的发色程度。另外，本发明中，例如，由于将尿酸的影响排除，因此不需要上述那样的、使用两种以上的试剂的双反应体系中的测定，仅至少1个反应体系的测定即足矣(但是，并不意图从本发明中排除使用两种以上试剂的双反应体系中的测定)。另外，本发明中，例如，除了上述发色剂以外，也不需要组合使用用于避免尿酸的影响的上述尿酸酶、上述不溶性载体。
血中的糖化蛋白质是血中所含的蛋白质在体内循环的期间被血中的葡萄糖糖化而生成的阿马多里化合物，通过使用上述发色剂来测定糖化蛋白质的还原力。即，可以通过使用上述发色剂来测定的糖化蛋白质中，包含可在血中被糖化的全部蛋白质的糖化物。作为这样的糖化蛋白质，可以列举糖化白蛋白、糖化血红蛋白及糖化球蛋白等。
本发明的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片的分析对象不仅包含糖化蛋白质总量(即，果糖胺)，而且包含个别的或特定的糖化蛋白质的组。例如，通过对试样进行前处理，将分析对象以外的糖化蛋白质从试样中去除或不使其与上述发色剂反应，由此测定作为目标的特定糖化蛋白质，这种方式也包含在本发明的范围内。
本发明的分析方法的特征在于，在上述反应工序中，使上述发色剂与生物试样反应，其他的工序及条件没有特别限制。
本发明的分析方法例如可以是分析糖化蛋白质的有无的定性分析，也可以是分析糖化蛋白质的量的定量分析。另外，本发明的分析方法也可以称为例如糖化蛋白质的测定方法。
如上所述，上述发色剂中，X为碱金属离子。上述碱金属离子可以列举例如锂离子、钠离子、钾离子、铷离子、铯离子、钫离子，优选为钠离子(Na+)。
上述发色剂的具体例可以列举例如下式(2)所示的2-(4-硝基苯基)-5-苯基-3-[4-(4-磺苯基偶氮)-2-磺苯基]-2H-四氮唑钠盐(也称为“WST-9”)。
在上述反应工序中，上述发色剂相对于上述生物试样的添加比例没有特别限制。相对于上述生物试样1μL，上述发色剂例如为1～20nmol、1～10nmol、1～7.5nmol。
本发明的分析方法中，上述生物试样没有特别限制，可以列举例如预料到存在糖化蛋白质的试样，可以是含有糖化蛋白质的试样，也可以是不含糖化蛋白质的试样。上述生物试样可以列举例如血液试样等。上述血液试样可以列举例如红细胞、全血、血清、血浆等试样。上述血液试样例如含有血球时，可以为溶血试样。
上述反应工序中，上述发色剂与上述生物试样的反应体系例如可以进一步含有其他添加成分。上述添加成分可以列举例如缓冲剂、表面活性剂、赋形剂、酶等。
上述反应体系的pH没有特别限制，例如可以根据上述发色剂适当决定。上述反应体系的pH例如为9.5～11.5，在上述发色剂为WST-9的情况下，上述反应体系的pH例如为9.5～11.5。上述反应体系的pH可以利用例如上述缓冲剂进行调整。作为缓冲剂，可以适当使用以往已知的缓冲剂，可以列举例如CHES(N-Cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid，N-环己基-2-氨基乙磺酸)、CAPS(N-Cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid，N-环己基-3-氨基丙磺酸)、碳酸钠缓冲剂等。
上述酶可以列举例如抗坏血酸氧化酶等酸化还原酶。
上述表面活性剂可以列举例如：聚氧乙烯失水山梨醇烷基酯(吐温系表面活性剂等)、牛磺脱氧胆酸钠、3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙磺酸盐、月桂酰胺丙基甜菜碱、辛基酚乙氧基化物、十二烷基二甲基(3-磺丙基)氢氧化铵内盐、聚氧乙烯月桂基醚及胆酸钠等。上述吐温系表面活性剂可以列举例如商品名吐温-20(ナカライテスク公司制造)，上述牛磺脱氧胆酸钠可以列举例如商品名牛磺脱氧胆酸钠(ナカラテスク公司制造)，上述3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙磺酸盐可以列举例如商品名CHAPS(同仁化学研究所公司制造)，上述月桂酰胺丙基甜菜碱可以列举例如商品名AmphItol 20AB(花王公司制造)，上述辛基酚乙氧基化物可以列举例如商品名TrItonX-100(ナカライテスク公司制造)，上述十二烷基二甲基(3-磺丙基)氢氧化铵内盐可以列举例如商品名カプリリルスルホベタイン(东京化成工业公司制造)，上述聚氧乙烯月桂基醚可以列举例如商品名BrIg35(和光纯药工业公司制造)。
上述赋形剂可以列举例如山梨醇、蔗糖及木糖醇等。
如上所述，本发明的分析方法不需要上述尿酸酶、上述不溶性载体(例如葡糖胺聚糖)。因此，本发明的分析方法例如优选在上述尿酸酶的非存在下进行，具体而言，优选在不来自上述分析对象的生物试样的、来自外部的尿酸酶的非添加状态下进行。另外，本发明的分析方法例如优选在上述不溶性载体(例如葡糖胺聚糖)的非存在下进行。
本发明的分析方法中，上述反应工序中的上述发色剂与上述生物试样的反应例如可以在湿式体系中进行，也可以在干式体系中进行。前者例如为在含有上述发色剂的液体中的反应，后者例如为在配置有上述发色剂的试验片中的反应。如上所述，本发明的分析方法可以在单反应体系中进行测定，另外，不需要上述尿酸酶、上述不溶性载体(例如葡糖胺聚糖)，因此特别适合于后者的干式体系。
以下，对于本发明的分析方法，例示干式体系的形态。需要说明的是，本发明并不受该形态的限制。另外，在本发明的分析方法为干式体系的情况下，例如可以使用后述的本发明的分析用试验片。
在本发明的分析方法为干式体系的情况下，例如，在上述反应工序中，通过在含有上述发色剂的干燥试剂中添加液体状态的上述生物试样而使两者反应。根据该形态，例如，通过在上述干燥试剂中添加上述生物试样而两者混合，可以使上述干燥试剂中的上述发色剂与上述生物试样反应。
上述反应工序的上述干燥试剂例如可以为含有上述发色剂的一种干燥试剂，也可以为两种以上的干燥试剂的组合使用。例如，在将两种以上的干燥试剂组合使用时，在使含有上述发色剂的干燥试剂与试样反应之前，也可以使其他干燥试剂与试样接触，进行pH的调节或酶反应等前处理。
在上述一种干燥试剂的情况下，上述干燥试剂含有上述发色剂，可以进一步含有上述添加成分。上述干燥试剂例如可以通过制备含有上述发色剂和任意的上述添加成分的液体试剂并将上述液体试剂干燥来制备。上述液体试剂例如优选设定为适合于上述发色剂的pH，上述pH例如可以利用缓冲液进行调节。上述pH例如为9.5～11.5，作为上述缓冲液，例如优选碳酸钠缓冲液。
在使用上述两种以上的干燥试剂的情况下，至少一种干燥试剂含有上述发色剂即可。例如，在将第一干燥试剂及第二干燥试剂组合使用作为上述两种干燥试剂的情况下，上述第一干燥试剂例如含有至少上述发色剂和至少一种上述添加成分，上述第二干燥试剂例如含有至少一种上述添加成分。
上述第一干燥试剂优选含有例如缓冲剂、上述表面活性剂、上述赋形剂及上述酶(例如抗坏血酸氧化酶)中的至少一种作为上述添加成分。上述第一干燥试剂例如可以通过制备含有上述发色剂和上述添加成分的第一液体试剂并将上述第一液体试剂干燥来制备。上述第一干燥试剂中的上述缓冲剂例如为上述第一液体试剂所含的上述缓冲液干燥后的物质。上述第一液体试剂例如可以设定为适合于上述发色剂的pH，pH例如为5.5～6.5。通过将pH设定为5.5～6.5的范围，能够提高上述第一液体试剂所含的成分的稳定性。上述pH例如可以利用缓冲液进行调节，作为上述缓冲液，可以使用例如MES-KOH缓冲液等。
在使用上述两种以上的干燥试剂的情况下，按照在反应体系中达到适合于发色剂的pH、例如9.5～11.5的方式将缓冲剂配合于上述两种以上的干燥试剂即可。本领域技术人员可以根据目标pH来选择缓冲剂的种类及浓度。
上述第一干燥试剂中，例如，从提高干燥时的平滑性的观点出发，上述表面活性剂可以列举聚氧乙烯失水山梨醇烷基酯(吐温系表面活性剂等)、牛磺脱氧胆酸钠、正辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺、辛基酚乙氧基化物及3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙磺酸盐等。上述吐温系表面活性剂可以列举例如商品名吐温-20(ナカライテスク公司制造)，上述牛磺脱氧胆酸钠可以列举例如商品名牛磺脱氧胆酸钠(ナカラテスク公司制造)，上述正辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺可以列举例如商品名MEGA8(同仁化学研究所公司制造)，上述辛基酚乙氧基化物可以列举例如商品名TrItonX-100(ナカライテスク公司制造)，上述3-[3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙磺酸盐可以列举例如商品名CHAPS(同仁化学研究所公司制造)。上述第一试剂中，上述赋形剂可以列举例如山梨醇、蔗糖及木糖醇等。
上述第二干燥试剂优选含有例如缓冲剂、上述表面活性剂、上述赋形剂中的至少一种作为上述添加成分。与上述第一干燥试剂同样，上述第二干燥试剂例如可以通过制备含有上述添加成分的第二液体试剂并将上述第二液体试剂干燥来制备。上述第二干燥试剂中的上述缓冲剂例如为上述第二液体试剂所含的上述缓冲液干燥后的物质。上述第二液体试剂的pH没有特别限制，例如为9.5～11.5。上述pH例如可以利用缓冲液进行调节，作为上述缓冲液，可以使用例如碳酸钠缓冲液等。
上述第二干燥试剂中，例如，从提高干燥时的平滑性及反应的特异性的观点出发，上述表面活性剂可以列举正辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺、月桂酰胺丙基甜菜碱、牛磺脱氧胆酸钠、胆酸钠、3-[(3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙磺酸盐、聚氧乙烯月桂基醚、十二烷基二甲基(3-磺丙基)氢氧化铵内盐及聚氧乙烯失水山梨醇烷基酯(吐温系表面活性剂等)等。上述正辛酰基-N-甲基-D-葡糖胺可以列举例如商品名MEGA-8(同仁化学研究所公司制造)，上述月桂酰胺丙基甜菜碱可以列举例如商品名AmphItol 20AB(花王公司制造)，上述牛磺脱氧胆酸钠可以列举例如商品名牛磺脱氧胆酸钠(ナカラテスク公司制造)，上述3-[3-胆酰胺丙基)二甲基铵]丙磺酸盐可以列举例如CHAPS(同仁化学研究所公司制造)，上述聚氧乙烯月桂基醚可以列举例如BrIg35(和光纯药工业公司制造)，上述十二烷基二甲基(3-磺丙基)氢氧化铵内盐可以列举例如商品名カプリリルスルホベタイン(东京化成工业公司制造)，上述吐温系表面活性剂等可以列举例如吐温-20(ナカライテスク公司制造)。上述第二干燥试剂中，上述赋形剂可以列举例如山梨醇、蔗糖及木糖醇等。
上述干燥试剂例如优选配置于载体上，作为上述载体，可以列举例如后述那样的基板。在使用上述两种以上的干燥试剂的情况下，可以在上述基板的同一部位配置上述两种以上的干燥试剂，也可以在上述基板的不同部位配置上述两种以上的干燥试剂。在后者的情况下，优选按照通过上述生物试样的添加使上述生物试样与上述全部干燥试剂混合的方式来配置上述两种以上的干燥试剂。
上述测定工序中，上述发色反应的测定例如为通过上述发色反应而产生的上述发色剂的发色的测定。上述发色例如可以以光学信号的形式进行测定。上述光学信号没有特别限制，可以列举例如吸光度、反射率、透射率等，优选为吸光度。
上述测定工序中，上述发色反应的测定例如优选在上述发色剂的发色显示峰值的波长范围内进行。上述波长范围例如可以根据上述发色剂的种类来适当决定。在上述发色剂为WST-9的情况下，测定波长例如为400～700nm、450～660nm、500～610nm的范围。
本发明的测定方法中，可以说上述测定工序中测定的上述发色反应的测定值与上述生物试样中的糖化蛋白质呈相对关系。因此，可以将上述测定工序中的测定结果直接作为间接表示上述生物试样中的糖化蛋白质量或糖化蛋白质浓度的值，也可以由上述测定工序中的测定结果算出上述生物试样中的糖化蛋白质量或糖化蛋白质浓度。在后者的情况下，例如可以基于上述发色反应的测定结果(例如光学信号的测定值)与上述生物试样中的糖化蛋白质浓度的相关关系来算出。
上述发色反应的测定例如可以使用干式临床化学分析装置(商品名：スポットケムEZ、スポットケムD-Concept、スポットケムII糖化蛋白质单项测定装置、爱科来株式会社制造)等。上述装置可以在例如在干式体系中使用上述分析用试验片的情况下使用。
关于本发明的分析方法，在湿式体系的情况下，除了使用上述液体试剂来代替上述干燥试剂以外，可以引用上述干式体系的方法及条件同样地进行。
(糖化蛋白质的分析试剂)
本发明的糖化蛋白质的分析试剂(以下称为“本发明的分析试剂”)的特征在于，含有上述发色剂，在上述本发明的分析方法中使用。本发明的分析试剂的特征在于含有上述发色剂，其他的构成及条件没有特别限制。例如，具有与后述的糖化蛋白质的分析用试验片的结构不同的结构的试验片，只要含有上述发色剂则也包含在本发明的分析试剂中。本发明的分析试剂例如为上述本发明的分析方法中的上述干燥试剂或上述液体试剂，可以引用上述记载。
(糖化蛋白质的分析试剂盒)
本发明的生物试样中的糖化蛋白质的分析试剂盒(以下称为“本发明的分析试剂盒”)的特征在于，含有上述本发明的分析试剂，在上述本发明的分析方法中使用。本发明的分析试剂盒的特征在于含有上述分析试剂，其他的构成及条件没有特别限制。本发明的分析试剂盒例如可以进一步含有使用说明书。本发明的分析试剂盒例如可以引用上述本发明的分析方法中的上述干燥试剂及上述液体试剂的记载。
(糖化蛋白质的分析用试验片)
本发明的糖化蛋白质的分析用试验片(以下称为“本发明的分析用试验片”)的特征在于，含有基板，上述基板具有试样供给区域和反应区域，上述试样供给区域与上述反应区域利用流路进行连接，在上述反应区域配置上述本发明的分析试剂，上述基板中的上述反应区域为透明构件。
本发明的分析用试验片的特征在于，上述本发明的分析试剂配置在上述反应区域，其他的构成及条件没有特别限制。
将本发明的分析用试验片的一例示于图1。图1(A)为分析用试验片1的俯视图，图1(B)为从图1(A)的I-I方向观察的截面图。
如图1(A)及(B)所示，分析用试验片1具有上基板2a与下基板2b层叠而成的基板2、及本发明的分析试剂。基板2的内部具有第一空间3b、第二空间4、及将第一空间3b与第二空间4连通的流路5a。上基板2a在与第一空间3b对应的部位具有开口部3a，上基板2a的开口部3a和第一空间3b为试样供给区域3，开口部3a为试样供给口。第二空间4为反应区域4，与反应区域4对应的基板2的区域兼作检测区域。另外，基板2具有开口部5c及将第二空间4与开口部5c连通的流路5b，开口部5c成为空气口。
在分析用试验片1中，上述本发明的分析试剂例如为上述干燥试剂。上述分析试剂的配置部位例如为反应区域4，配置在与第二空间4对应的上基板2a的区域及下基板2b的区域中的至少一个区域。在本发明的分析试剂如上所述为两种以上的干燥试剂的情况下，例如优选在与第二空间4对应的上基板2a的区域及下基板2b的区域分别配置各干燥试剂。
基板2的材料没有特别限制，可以列举例如玻璃制、树脂制等的基板。基板2中的、具体而言与基板2(上基板2a及下基板2b)中的反应区域对应的部位兼作检测区域，因此优选由透明构件形成。作为上述透明构件，可以列举例如PS(聚苯乙烯)、PET(聚对苯二甲酸乙二醇酯)、PC(聚碳酸酯)、PMMA(聚丙烯酸类树脂)等。上基板2a及下基板2b的材料可以相同也可以不同。
在本发明的分析用试验片中，例如上述本发明的分析试剂的配置方法没有特别限制，可以引用本发明的分析方法中的干式体系的说明。即，将本发明中的上述液体试剂滴加到上述基板的期望位置后进行干燥，由此，可以配置上述干燥试剂。
本发明的分析用试验片例如可以如下使用。首先，将上述生物试样从开口部3a供给到第一空间3b。上述生物试样从第一空间3b通过流路5a而到达第二空间4(反应区域)。然后，在第二空间4中，使上述生物试样与上述配置后的上述本发明的分析试剂混合，上述生物试样与上述分析试剂反应，发生上述发色剂的发色反应。从与反应区域4对应的上基板2a侧或与反应区域4对应的下基板2b侧，对该发色进行测定。
本发明的分析用试验片的尺寸没有特别限制，可以例示例如以下条件。需要说明的是，以下中，长度方向是指从上述试样供给区域朝向上述反应区域的方向，宽度方向是指与上述长度方向垂直的方向，厚度方向是指从上基板朝向下基板的方向。
长度方向的长度(全长)：5～20mm(10mm)
宽度方向的长度(宽度)：3～10mm(5.1mm)
厚度方向的长度(厚度)：0.25～3mm(1mm)
试样供给区域3的尺寸：
直径1～8mm(2.5mm)深度0.1～1.0mm(0.25mm)
反应区域4的尺寸：
直径1～8mm(2.5mm)深度0.1～1.0mm(0.25mm)
流路5a的长度方向的长度：0.2～10mm
[实施例]
以下，对本发明的实施例进行说明。但是，本发明不受下述实施例的限制。只要没有特别声明，则市售的试剂基于它们的规程来使用。
[实施例1]
关于本发明的糖化蛋白质的分析方法，通过果糖胺的测定来确认可以不受作为血中还原性物质的尿酸的影响地测定糖化蛋白质浓度。
(1)试样
准备果糖胺浓度198.5μmol/L的血清1(尿酸未添加-)和果糖胺浓度503μmol/L的血清2(尿酸未添加-)、以及在上述血清1及上述血清2中分别以达到20mg/100mL的方式添加有尿酸的血清1(尿酸添加+)和血清2(尿酸添加+)，作为血清试样。
(2)分析用试剂片的制作
使用下述组成的第一液体试剂及第二液体试剂，如以下所示那样制作上述图1所示的实施例的分析用试验片。
＜第一试剂＞
＜第二试剂＞
在上基板2a的与下基板2b对置的面中、与反应区域4对应的区域滴加上述第二试剂1.5μL。另外，在下基板2b的与上基板2a对置的面中、与反应区域4对应的区域滴加上述第一试剂1.5μL。然后，将上基板2a及下基板2b在20℃、相对湿度1％的条件下实施20小时干燥处理。通过该干燥处理，将第二干燥试剂配置在上基板2a上，将第一干燥试剂配置在下基板2b上。然后，将上基板2a与下基板2b层叠并使两者贴合，制作图1所示的分析用试验片1。
分析用试验片1的尺寸及材质如下所述。
上基板及下基板的材质：聚苯乙烯(透明构件)
长度方向的长度(全长)：10mm
宽度方向的长度(宽度)：5.1mm
厚度方向的长度(厚度)：1.2mm
试样供给区域3的尺寸：直径2.5mm×深度0.25mm
反应区域4的尺寸：直径2.5mm×深度0.25mm
流路5a的长度方向的长度：1mm
(3)果糖胺浓度的测定
将上述血清试样添加到分析用试验片1的试样供给区域3中，将分析用试验片1设置到干式临床化学分析装置(商品名スポットケムEZ、爱科来株式会社制造)中。然后，将从上述试样的添加起480秒后作为测定开始，对于分析用试验片1中的反应区域4，对测定波长550nm下的吸光度经时地进行测定。进而，由测定时间x的吸光度(Ax)利用测定时间y的吸光度的差分(Ay-Ax)算出每单位时间的吸光度的变化量。需要说明的是，在相同条件下测定两次吸光度的情况下，算出上述差分的平均值作为每单位时间的吸光度的变化量。
另一方面，作为比较例1，使用2-(4-吲哚苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-氯化四氮唑(INT、同仁化学研究所公司制造)代替发色剂WST-9，除此以外，同样地制作分析用试验片1。作为比较例2，使用2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四氮唑(WST-8、同仁化学研究所制造)代替发色剂WST-9，除此以外，同样地制作分析用试验片1。另外，对于比较例1，准备果糖胺浓度198.5μmol/L的血清1(尿酸未添加-)和果糖胺浓度786μmol/L的血清3(尿酸未添加-)、以及在上述血清1及上述血清3中分别以达到20mg/100mL的方式添加有尿酸的血清1(尿酸添加+)和血清3(尿酸添加+)，作为血清试样。对于比较例2，准备与上述(1)同样的血清作为血清试样。然后，使用比较例1和比较例2的分析用试验片1、以及上述各血清试样，同样地进行吸光度的测定。对于比较例1的分析用试验片1，将测定波长设定为550nm，对于比较例2的分析用试验片1，将测定波长设定为450nm。
将这些结果示于图2～图4。图2～图4是表示使用各分析用试验片的上述发色反应的吸光度的结果的图。图2是使用实施例1的分析用试验片的结果，图3及4分别示出使用比较例1和2的分析用试验片的结果。各图中，左列的图是表示经时的吸光度的图，右列的图是表示每单位时间的吸光度变化量的图。
图2中，(A)为使用实施例1的分析用试验片来分析血清1而得到的结果，(B)为使用实施例1的分析用试验片来分析血清2而得到的结果。如图2(A)及(B)所示，在使用WST-9的实施例1的情况下，即使添加尿酸，也与未添加尿酸时同样地，在左侧图中可以确认到与经过时间显示高相关性的吸光度的增加，另外，在右侧图中可以确认到每单位时间的吸光度变化量也没有变化。
另一方面，在图3中，(A)为使用比较例1的分析用试验片来分析血清1而得到的结果，(B)为使用比较例1的分析用试验片来分析血清3而得到的结果。另外，在图4中，(A)为使用比较例2的分析用试验片来分析血清1而得到的结果，(B)为使用比较例2的分析用试验片来分析血清2而得到的结果。如图3及4所示，确认到如下变化：在左侧图中，添加尿酸的血清试样与未添加尿酸的血清试样相比，显示出高吸光度，另外，在右侧图中，添加尿酸的血清试样与未添加尿酸的血清试样相比，每单位时间的吸光度变化量减小。
由这些结果可知，通过使用WST-9作为发色剂，能够避免尿酸的影响而以优良的精度分析果糖胺。
[实施例2]
对于本发明的糖化蛋白质的分析方法，通过果糖胺的测定来确认在多个WST-9浓度下可以不受作为血中还原性物质的尿酸的影响地测定糖化蛋白质浓度。
作为实施例2，将上述第二液体试剂中的发色剂WST-9的浓度分别设定为1mmol/L、2.5mmol/L、5mmol/L、7.5mmol/L、10mmol/L及20mmol/L，除此以外，与上述实施例1(2)同样地进行，分别制作WST-9的浓度不同的6种分析用试验片1。另外，作为血清试样，准备果糖胺浓度220.3μmol/L的血清4(尿酸未添加-)和果糖胺浓度486.5μmol/L的血清5(尿酸未添加-)、以及在上述血清4和上述血清5中分别以达到20mg/100mL的方式添加有尿酸的血清4(尿酸添加+)和血清5(尿酸添加+)。然后，使用上述WST-9浓度不同的6种分析用试验1和上述各血清试样，与上述实施例1同样地进行吸光度的测定。
将这些结果示于图5及图6。图5A及图5B对于血清4示出各WST-9浓度下的经时的吸光度，图6A及图6B对于血清5示出各WST-9浓度下的经时的吸光度。
如图5A、图5B、图6A及图6B所示，在任一个WST-9浓度下，即使添加尿酸，也与未添加尿酸时同样地，均可以确认到与经过时间显示高相关性的吸光度的增加。
由这些结果可知，在多个WST-9浓度下，可以不受作为血中还原性物质的尿酸的影响地测定果糖胺浓度。
同样地，对于糖化白蛋白、糖化血红蛋白及糖化球蛋白等糖化蛋白质而言，也可以不受作为血中还原性物质的尿酸的影响地测定浓度。
产业上的可利用性
如上所述，根据本发明，通过含有上述发色剂，可以不受作为血中还原性物质的尿酸的影响地测定糖化蛋白质浓度。因此可以说，本发明在医药、诊断药、测定等领域中极其有用。

Claims (14)

1.一种糖化蛋白质的分析方法，其特征在于，包含：
使下式(1)所示的发色剂与生物试样反应的反应工序、及
对所述发色剂的发色反应进行测定的测定工序，
所述式(1)中，X为碱金属离子。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述生物试样为血液试样。
3.根据权利要求2所述的分析方法，其中，所述血液试样为血清试样或血浆试样。
4.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述反应工序中，通过在干燥状态的所述发色剂中添加液体状态的所述生物试样而使两者反应。
5.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述糖化蛋白质为果糖胺。
6.一种糖化蛋白质的分析试剂，其特征在于，
含有下式(1)所示的发色剂，
在权利要求1～5中任一项所述的生物试样中的糖化蛋白质的分析方法中使用，
所述式(1)中，X为碱金属离子。
7.一种糖化蛋白质的分析试剂盒，其特征在于，
含有权利要求6所述的分析试剂，
在权利要求1～5中任一项所述的生物试样中的糖化蛋白质的分析方法中使用。
8.一种糖化蛋白质的分析用试验片，其特征在于，
含有基板，
所述基板具有试样供给区域和反应区域，
所述试样供给区域与所述反应区域利用流路进行连接，
在所述反应区域配置权利要求6所述的分析试剂，
所述基板中的所述反应区域为透明构件。
9.根据权利要求8所述的分析用试验片，其中，
所述基板为含有上基板和下基板的层叠体，
所述层叠体的内部具有第一空间、第二空间及将所述第一空间与所述第二空间连通的所述流路，
所述上基板在与所述第一空间对应的部位具有开口部，
所述上基板的所述开口部和所述第一空间为所述试样供给区域，
所述开口部为试样供给口，
所述第二空间为所述反应区域，
在与所述第二空间对应的所述上基板的区域及所述下基板的区域中的至少一个区域配置有所述分析试剂。
10.含有下式(1)所示的发色剂的分析试剂在权利要求1～5中任一项所述的生物试样中的糖化蛋白质的分析方法中的应用，
所述式(1)中，X为碱金属离子。
11.根据权利要求10所述的应用，其中，所述分析试剂包含在糖化蛋白质的分析试剂盒中。
12.根据权利要求10所述的应用，其中，所述分析试剂包含在糖化蛋白质的分析用试验片中。
13.根据权利要求10所述的应用，其中，
所述分析用试验片含有基板，
所述基板具有试样供给区域和反应区域，
所述试样供给区域与所述反应区域利用流路进行连接，
在所述反应区域配置所述分析试剂，
所述基板中的所述反应区域为透明构件。
14.根据权利要求13所述的应用，其中，
所述基板为含有上基板和下基板的层叠体，
所述层叠体的内部具有第一空间、第二空间及将所述第一空间与所述第二空间连通的所述流路，
所述上基板在与所述第一空间对应的部位具有开口部，
所述上基板的所述开口部和所述第一空间为所述试样供给区域，
所述开口部为试样供给口，
所述第二空间为所述反应区域，
在与所述第二空间对应的所述上基板的区域及所述下基板的区域中的至少一个区域配置有所述分析试剂。
CN201710271265.9A 2016-04-25 2017-04-24 糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片 Active CN107367507B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016087040 2016-04-25
JP2016-087040 2016-04-25
JP2017081508A JP6817135B2 (ja) 2016-04-25 2017-04-17 糖化タンパク質の分析方法、分析試薬、分析キットおよび分析用試験片
JP2017-081508 2017-04-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107367507A true CN107367507A (zh) 2017-11-21
CN107367507B CN107367507B (zh) 2022-02-11

Family

ID=58672330

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710271265.9A Active CN107367507B (zh) 2016-04-25 2017-04-24 糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片

Country Status (2)

Country Link
EP (1) EP3239709B1 (zh)
CN (1) CN107367507B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112326639A (zh) * 2020-11-25 2021-02-05 迈克生物股份有限公司 检测果糖胺的试剂盒和方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005056823A1 (ja) * 2003-12-12 2005-06-23 Arkray, Inc. 糖化アミンの測定方法
CN1823049A (zh) * 2003-07-14 2006-08-23 株式会社同仁化学研究所 水溶性四唑鎓化合物
WO2008013874A1 (en) * 2006-07-25 2008-01-31 General Atomics Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin
US20090169430A1 (en) * 2006-04-04 2009-07-02 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Panel for analyzing sample liquid
CN101680891A (zh) * 2007-11-21 2010-03-24 爱科来株式会社 测定试剂、使用其的免疫比浊法和待测物分析用具
CN103197084A (zh) * 2013-03-28 2013-07-10 山东博科生物产业有限公司 一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用
US20160084850A1 (en) * 2013-05-31 2016-03-24 Panasonic Healthcare Holdings Co., Ltd. Method for quantifying glycated hemoglobin

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5312760A (en) 1992-06-08 1994-05-17 Modrovich, Ivan Endre Fructosamine reagent and calibrator system
CA2127679A1 (en) 1993-07-27 1995-01-28 Ewald Vorberg Set of reagents for determining the fructosamine content
JPH08226920A (ja) 1995-02-20 1996-09-03 Masashi Funayama グリコヘモグロビンおよびフルクトサミンの定量方法
EP1329721B8 (en) * 2000-09-28 2010-05-26 ARKRAY, Inc. Method of quantifying hemoglobin and method of measuring glycation ratio of hemoglobin

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1823049A (zh) * 2003-07-14 2006-08-23 株式会社同仁化学研究所 水溶性四唑鎓化合物
WO2005056823A1 (ja) * 2003-12-12 2005-06-23 Arkray, Inc. 糖化アミンの測定方法
US20090169430A1 (en) * 2006-04-04 2009-07-02 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Panel for analyzing sample liquid
WO2008013874A1 (en) * 2006-07-25 2008-01-31 General Atomics Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin
CN101680891A (zh) * 2007-11-21 2010-03-24 爱科来株式会社 测定试剂、使用其的免疫比浊法和待测物分析用具
CN103197084A (zh) * 2013-03-28 2013-07-10 山东博科生物产业有限公司 一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用
US20160084850A1 (en) * 2013-05-31 2016-03-24 Panasonic Healthcare Holdings Co., Ltd. Method for quantifying glycated hemoglobin

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112326639A (zh) * 2020-11-25 2021-02-05 迈克生物股份有限公司 检测果糖胺的试剂盒和方法
CN112326639B (zh) * 2020-11-25 2024-01-05 迈克生物股份有限公司 检测果糖胺的试剂盒和方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107367507B (zh) 2022-02-11
EP3239709B1 (en) 2019-06-05
EP3239709A1 (en) 2017-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5829766B2 (ja) 酵素法を利用したヘモグロビンＡ１ｃ定量分析のための溶血試薬組成物
DK2733217T3 (en) A method of detecting moisture-damaged urine test strips
JP5646323B2 (ja) 溶血させた全血を用いる血中成分の測定方法及びそのキット
WO2012020744A1 (ja) 糖化ヘモグロビンの測定方法
CN110042146B (zh) 血样本的化验方法
JP4803696B2 (ja) ヘモグロビンの測定方法及びヘモグロビン糖化率の測定方法
EP1873522B1 (en) Method for determination of hemoglobin derivative, and reagent composition, assay kit, analysis device and analysis system for use in the method
Dubourg et al. Adaptation of an enzymatic polyfructosan assay to clinical practice
JP5955220B2 (ja) 糖化ヘモグロビンの測定方法
JP6817135B2 (ja) 糖化タンパク質の分析方法、分析試薬、分析キットおよび分析用試験片
US20190194717A1 (en) Method and kit for detecting pathogenic microorganism
US20230194540A1 (en) Digital microfluidics analytical techniques
US20210025904A1 (en) Glycated hemoglobin measurement
US11262365B2 (en) Kit for hemoglobin A1C quantitative analysis
Murata et al. Analytical performance of the Abaxis Piccolo Xpress® point of care analyzer in whole blood, serum, and plasma
Chattopadhyay et al. Smartphone-based automated estimation of plasma creatinine from finger-pricked blood on a paper strip via single-user step sample-to-result integration
CN107367507A (zh) 糖化蛋白质的分析方法、分析试剂、分析试剂盒及分析用试验片
US10054603B2 (en) Systems and methods for reagentless test strips
KR101974515B1 (ko) 당화혈색소 정량분석용 키트
Mai et al. Association of hyperuricemia and microalbuminuria in acute myocardial infarction in non-diabetic and non-hypertensive patients.
JPWO2005024430A1 (ja) タンパク質の分析方法およびそれに用いるタンパク質分析試薬

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant