CN107311986A - 四氢异喹琳‑3‑羧酸类热休克蛋白90抑制剂及其应用 - Google Patents

四氢异喹琳‑3‑羧酸类热休克蛋白90抑制剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种四氢异喹琳‑3‑羧酸类热休克蛋白90抑制剂，该热休克蛋白90抑制剂是具有通式(Ⅰ)的化合物，或其光学异构体、非对映异构体或其消旋体混合物，或其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药。本发明还公开了所述抑制剂在制备预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物中的应用。实验证实：本发明的四氢异喹琳‑3‑羧酸类热休克蛋白90抑制剂对多种组织类型包括乳腺，生殖和呼吸***来源的肿瘤细胞具有显著的抑制作用，但对人正常肝细胞毒性小，具有较好的成药性。临床应用前景广阔。

Description

四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂及其应用
技术领域
本发明涉及一种热休克蛋白90抑制剂及其应用，具体涉及一种四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂及其制备方法和应用，属于有机化合物合成与医药应用技术领域。
背景技术
热休克蛋白90(Hsp90)是生物进化过程中一类结构高度保守的蛋白质。作为分子伴侣，Hsp90在调节细胞生长、分化、凋亡等方面发挥着重要的作用。近年来的研究证明，Hsp90与肿瘤发生、发展、生物学行为及其预后有密切的关系，很多癌基因蛋白均为Hsp90的作用靶点。而Hsp90抑制剂将促使在肿瘤生长信号通路中起重要作用的Hsp90效应蛋白降解，从而阻断肿瘤增殖信号通路的多个靶点，有效阻止肿瘤的生长。体内外实验也证实Hsp90抑制剂的抗肿瘤活性。同时基于相关结构的小分子抑制剂的设计也引起日益广泛的关注。
发明人在前期的研究中，为了发现结构新颖的强效Hsp90抑制剂，通过理性设计和进一步的化合物结构修饰发现了先导化合物LCP1074具有较强的Hsp90抑制活性(Chuan-Peng Liang，European Journal of Medicinal Chemistry 121(2016)272e282)。其中LCP1074结构式如下：
基于对该化合物进行进一步的结构修饰，有望得到了一类Hsp90抑制活性和抗细胞增殖活性都有很大提高的化合物。
发明内容
针对现有技术的基础，本发明要解决的问题是提供一种四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂及其制备方法和应用。
本发明所述的四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂，其特征在于：所述热休克蛋白90抑制剂是具有通式(Ⅰ)的化合物，或其光学异构体、非对映异构体或其消旋体混合物，或其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药；
其中：
R1选自氢基，卤素，或C1-8烷基；
R2与R3各自独立选自氢基，氘基，或膦酸基；
Ar选自取代的芳香环；芳香环选自苯环、五元芳杂环、六元芳杂环、六元并五元杂环、六元并六元杂环、五元并五元杂环、苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；取代表示单取代、双取代或三取代；取代基选自氢原子烃基，卤素，羟基，氨基，二甲氨基，硝基，C1-8烷氧基，C1-8杂烷氧基，三氟甲氧基，氰基，羧基，磺酸基或磷酸基，或者是其酯或盐；
苯环A任选被氢基，一个或多个R4X基团取代；
X选自N、O、S原子或酰基；
R4选自氢基，C1-8烷基或5-6个环成员的环烷基，取代基选自C1-2烷氧基，单-或二-C1-2烷基氨基，5-6个环成员的含氮或含氧杂环基，羟基，氨基，硝基，氰基，酰胺基，甲磺酰氨基，甲基砜基，异羟肟酸基，甲氧羰基，酰肼基，羧基，磺酸基，磷酸基，或者是其酯或盐；
*是立体构型为S或R光学纯度或其消旋体。
进一步的，上述热休克蛋白90抑制剂优选是下述化合物之一：
R1选自卤素；R2与R3均为氢基；苯环A的7位被R4X基团取代；X选自O原子；*是立体构型为R光学纯度。
最优选的实施方式是：所述热休克蛋白90抑制剂是化合物L10、L15、L22或L41，其化学名称顺序是：
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-3-(N-对氰基苄基-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L10)；
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-3-(N-(吡啶-4-甲基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L15)；
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-3-(N-(吡啶-4-甲基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L22)；
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-7-(2-吗啉代乙氧基)-3-(N-对氰基苄基-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L41)。
上述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂的制备方法是如下合成路线1或合成路线2，具体的反应步骤和反应式如下：
合成路线1：
以2，4-二羟基苯甲酸甲酯、光学纯度的四氢异喹琳-3-羧酸为起始原料。2，4-二羟基苯甲酸甲酯经3位氯代、苄基保护后水解，与四氢异喹琳-3-羧酸甲酯成酰胺，再经酯水解后与各种胺反应，再脱苄基得到目标化合物L1-20；反应式如下：
其中，Ar选自取代的芳香环；芳香环选自苯环、五元芳杂环、六元芳杂环、六元并五元杂环、六元并六元杂环、五元并五元杂环、苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；取代表示单取代、双取代或三取代；取代基选自氢原子烃基，卤素，羟基，氨基，二甲氨基，硝基，C1-8烷氧基，C1-8杂烷氧基，三氟甲氧基，氰基，羧基，磺酸基或磷酸基，或者是其酯或盐；
上述合成路线反应式中的试剂：(a)磺酰氯，无水二氯甲烷；(b)苄溴，碳酸钾，N,N-二甲基甲酰胺；(c)氢氧化钾水溶液，甲醇；(d)二氯亚砜，甲醇；(e)1-羟基苯并***,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,二氯甲烷；(f)氢氧化钠水溶液，甲醇；(g)各种芳环甲基胺类，1-羟基苯并***,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,N,N-二甲基甲酰胺；(h)三氯化硼，无水二氯甲烷。
合成路线1的目标化合物的结构式如下：
合成路线2：
以光学纯的3,5-二碘酪氨酸为原料，经Pictet-Spengler环合得到化合物10，化合物10相继经Boc保护仲胺基、氢化还原脱碘得到关键中间体12。中间体12与各种芳香甲基胺经多肽缩合连接不同的Ar基团得到化合物13.13脱Boc分别与中间体4缩合得到相应的化合物15。化合物15与各种卤代物或醇经威廉姆森缩合反应或光延反应成醚，再脱苄基得到目标化合物L21-45；反应式如下：
其中，Ar选自取代的芳香环；芳香环选自苯环、五元芳杂环、六元芳杂环、六元并五元杂环、六元并六元杂环、五元并五元杂环、苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；取代表示单取代、双取代或三取代；取代基选自氢原子烃基，卤素，羟基，氨基，二甲氨基，硝基，C1-8烷氧基，C1-8杂烷氧基，三氟甲氧基，氰基，羧基，磺酸基或磷酸基，或者是其酯或盐；R4选自氢基，C1-8烷基或5-6个环成员的环烷基，取代基选自C1-2烷氧基，单-或二-C1-2烷基氨基，5-6个环成员的含氮或含氧杂环基，羟基，氨基，硝基，氰基，酰胺基，甲磺酰氨基，甲基砜基，异羟肟酸基，甲氧羰基，酰肼基，羧基，磺酸基，磷酸基，或者是其酯或盐；
上述合成路线反应式中的试剂：(a)多聚甲醛，浓盐酸，乙二醇二甲醚；(b)l mol/L的氢氧化钠溶液,碳酸二叔丁酯，四氢呋喃；(c)钯碳，氢气，三乙胺，甲醇；(d)各种芳环甲基胺类，1-羟基苯并***,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,N,N-二甲基甲酰胺；(e)三氟乙酸，三乙胺,二氯甲烷；(f)中间体4，1-羟基苯并***,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,N,N-二甲基甲酰胺；(g)各种卤代物，碳酸铯,N,N-二甲基甲酰胺；(h)三氯化硼，无水二氯甲烷。
合成路线2的目标化合物的结构式如下：
上述化合物制备的具体操作步骤在实施例中将加以详细说明。
本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可据本领域的基本知识确定合成的路线，如选择反应物，溶剂和温度，可以通过使用各种常规保护基以避免副反应的发生从而提高收率。
本发明所述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂在制备预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物中的应用。
其中：所述与热休克蛋白90相关的疾病是：癌症，神经变性疾病，病毒感染，炎症，白血病，疟疾或糖尿病。
本发明还公开了一种适于口服给予哺乳动物的预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物组合物，其特征在于：该药物组合物含有治疗有效量的本发明所述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
本发明还公开了一种适于胃肠外给予哺乳动物的预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物组合物，其特征在于：该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1、2或3所述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
上述载体可以是盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油，乙醇或它们的结合物；或者是固体载体乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝胶，琼脂，果胶，***胶，硬脂酸镁或硬脂酸等等。
本发明基于对化合物LCP1074进行进一步的结构修饰，筛选获得了一类Hsp90抑制活性和抗细胞增殖活性有显著提高的化合物，提供了一种四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂，以及适于口服给予哺乳动物的或适于胃肠外给予哺乳动物的预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物组合物。实验证实：本发明的四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂对多种组织类型包括乳腺，生殖和呼吸***来源的肿瘤细胞具有显著的抑制作用，但对人正常肝细胞毒性小，具有较好的成药性。临床应用前景广阔。
附图说明
图1：化合物L15胞内抑制Hsp90活性评价。
具体实施方式
为使本领域相关研究人员能够全面理解本发明，下面结合实施例来阐述本发明的几种实施方式，尽管相关描述较为具体和详细，但并不能因此来限制本发明。
实施例1：化合物L1-20的合成，以L1为例。
1)5-氯-2,4-二羟基苯甲酸甲酯2
将化合物1即2,4-二羟基苯甲酸甲酯(8.0g,47.6mmol)溶于无水二氯甲烷中，冷却至0℃后加入磺酰氯(4.0mL,49.4mmol),室温搅拌13小时后，再次加入磺酰氯(2mL,24.7mmol)，搅拌6小时后加入饱和NaHCO3(7.5mL)猝灭反应。萃取收集有机相，水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂后硅胶柱层析纯化得白色固体化合物2共5.78g，收率：60％。1H NMR(600MHz,CDCl3,r.t.)δ10.82(s,1H),7.82(s,1H),6.61(s,1H),5.94(s,1H),3.93(s,3H).
2)2,4-二苄氧基-5-氯-苯甲酸甲酯3
将化合物2(5.78g,28.56mmol)和碳酸钾(8.68g,62.83mmol)溶于50mL的DMF,搅拌5分钟后加入8.20mL苄溴。60℃下反应6小时,冷却至室温后，加入水和乙酸乙酯，萃取分层，有机相用饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂后硅胶柱层析纯化得9.43g白色固体3。收率:86.2％。1H NMR(600MHz,CDCl3,r.t.)δ7.94(s,1H),7.44-7.31(m,10H),6.56(s,1H),5.12(s,2H),5.10(s,2H),3.87(s,3H).HR ESIMS:m/z 405.0869[M+Na]+(calcd.405.0870).
3)2,4-二苄氧基-5-氯-苯甲酸4
将化合物3(9.43g，24.62mmol)加到50mL的甲醇后，加入20mL氢氧化钾(7.06g)的水溶液,回流搅拌24小时。反应液冷却至室温后，加入5％的盐酸液至酸性后，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水处理，无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂得白色固体4共8.8g,收率：97％。1H NMR(600MHz,CDCl3,r.t.)δ8.19(s,1H),7.41-7.36(m,10H),6.61(s,1H),5.19(s,2H),5.18(s,2H).HR ESIMS:m/z 367.0739[M-H]-(calcd.367.0737).
4)1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯盐酸盐6
将化合物5(4.27g,20mmol)加到20mL甲醇中，冷却至0℃后滴入5.2mL二氯亚砜,室温搅拌100小时后，减压旋干，残留物用***洗涤，干燥后得到4.3g淡黄色固体化合物6，收率：94.4％。1H NMR(300MHz,D2O,r.t.)δ7.45-7.24(m,4H),4.60(d,J＝5.5Hz,1H),4.56(d,J＝5.4Hz,1H),4.53(br s,1H),3.93(s,3H),3.53(dd,J＝17.4,5.5Hz,1H),3.53(dd,J＝17.4,5.5Hz,1H),3.32(dd,J＝17.3,10.9Hz,1H),3.32(dd,J＝17.3,10.9Hz,1H).HRESIMS:m/z192.1028[M+H]+(calcd.192.1025).
5)2-(2,4-二苄氧基-5-氯-苯甲酰基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯7
化合物4(2.213g,6mmol)与化合物6(1.639g,7.2mmol)溶于30mL无水二氯甲烷中，依次加入1-羟基苯并***(HOBt,0.973g,7.2mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,1.38g,7.2mmol)、N-甲基吗啉(NMM,2.012mL,18mmol),室温搅拌12小时。反应液依次用水、5％的盐酸溶液、饱和NaHCO3、饱和食盐水处理，分离有机相，无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂后硅胶柱层析纯化得2.89g化合物7,收率：81％.1H NMR(300MHz,CDCl3,r.t)δ7.52–7.05(m,16H),5.30–5.12(m,4H),4.41(s,1H),3.59–3.45(m,2H),3.30(s,3H),3.14–3.00(m,2H).HR ESIMS:m/z 542.1731[M+H]+(calcd.542.1734).
6)R-2-(2,4-二苄氧基-5-氯-苯甲酰基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸8
将化合物7(2.89g,5.338mmol)溶于16mL的甲醇中，加入0.62mL2mol/L的氢氧化钠水溶液。室温搅拌12h。反应完毕后加酸液调pH值到弱酸，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥后蒸干得2.68g化合物8,收率：95％.1H NMR(300MHz,CDCl3,r.t)δ12.85(s,1H),7.52–7.05(m,16H),5.30–5.12(m,4H),4.41(s,1H),3.59–3.45(m,2H),3.14–3.00(m,2H).HR ESIMS:m/z526.1418[M-H]-(calcd.526.1421).
7)R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-3-(N-对氯苄基-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉L1
化合物8(100mg,0.19mmol)、1-羟基苯并***(HOBt,30.8mg,0.228mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,43.7mg,0.228mmol)溶于3mL DMF中,搅拌3分钟后加入115μL的对氯苄胺，室温搅拌12小时。反应液依次用水、饱和NaHCO3、5％的盐酸溶液、饱和食盐水处理，分离有机相，无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂,所得化合物不经纯化直接用于下一步。所得化合物溶于无水二氯甲烷中，N2保护下冷却至0℃后加入0.57mL三氯化硼溶液(3eq)，20min后室温搅拌2小时，冰浴下加入饱和碳酸氢钠溶液至弱碱，猝灭反应，移走二氯甲烷层,乙酸乙酯萃取水相，盐水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干溶剂后硅胶柱层析纯化得81.3mg白色固体A1.产率：76％。1H NMR(400MHz,Acetone)δ7.70(br s,1H),7.36(s,1H),7.27–7.20(m,3H),7.19(br s,1H),7.10(s,1H),7.09(s,1H),7.04-7.00(m,1H),6.88(brs,1H),6.61(s,1H),5.14(br s,1H),4.80-4.70(m,2H),4.37(dd,J＝15.2,5.7Hz,1H),4.28(dd,J＝15.3,5.3Hz,1H),3.37(dd,J＝15.4,4.9Hz,1H),3.27(dd,J＝15.5,6.0Hz,1H).HRESIMS:m/z for 471.0846[M+H]+,(calcd.471.0878)。
实施例2：化合物L21-45的合成，以L21为例。
1)R-7-羟基-6,8-二碘-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸盐酸盐10
向8mL浓盐酸中加入3,5-二碘-D-酪氨酸(1.0g,2.31mmol),乙二醇二甲醚(0.7mL)和多聚甲醛(0.26g,8.67mmol),并逐渐升温至72℃。0.5小时后,再加入浓盐酸(1.7mL),乙二醇二甲醚(0.33mL)和多聚甲酸(0.17g,5.78mmol),油浴控温在72-75℃继续反应18小时。反应混悬液冰浴冷却并过滤,滤饼用乙二醇二甲醚充分洗漆,干燥后得0.53g淡黄色粉末。1H NMR(300MHz,DMSO-d6,r.t)δ3.07(dd,J＝16.8Hz,10.8Hz,1H),3.22(dd,J＝16.8Hz,4.8Hz,1H),4.02(d,J＝16.2Hz,1H),4.15(d,J＝16.2Hz,1H),4.32(dd,J＝4.8Hz,10.8Hz,1H),7.73(s,1H),9.68(s,1H),10.00(br s,2H),14.17(br s,1H),ESI-MS m/z:446.2[M+H]+
2)R-2-叔丁氧羰基7-羟基-6,8-二碘-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸盐酸盐11
化合物10(0.53g)溶于2.5mLlmol/L的氧氧化钠溶液中,并加入0.6mL碳酸二叔丁酯(0.27g)的四氢呋喃溶液。反应过程中用1mol/L的氢氧化钠溶液控制反应液pH在9-11。室温反应6小时后,蒸除反应液中的四氢呋喃,再用石油酸将反应液萃取3次,并用1mol/L的柠檬酸溶液酸化至pH4-5,然后用乙酸乙酯萃取三次,有机相合并后用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂得0.8g黄色粉末11。产率:92％,1H NMR(300MHz,DMSO-d6,r.t)δ1.34+1.40(s,9H),2.87-3.00(m,2H),4.13-4.41(m,2H),4.61-4.75(m,1H),7.57(s,1H),9.41(brs,1H),12.71(br s,1H)。
3)R-2-叔丁氧羰基7-羟基-1,2,3,4-四氧异喹啉-3-羧酸盐酸盐12
化合物11(0.8g)溶于10mL无水甲醇中,并向其中加入三乙胺(480μL)和10％钯碳(0.08g)。通入氢气反应5小时后,用硅藻土滤除催化剂,蒸除甲醇,加入1mol/L的柠檬酸溶液至pH4-5,然后用乙酸乙酯萃取三次,合并乙酸乙酯层后用饱和食盐水洗漆,无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂得0.36g黄色粉末12。产率:75％,1H NMR(300MHz,DMSO-d6,r.t)δ1.39+1.45(s,9H),2.92-3.04(m,2H),4.26-4.51(m,2H),4.57-4.82(m,1H),6.52(s,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),9.28(s,1H),12.60(s,1H)。
4)R-2-叔丁氧羰基-7-羟基-3-(N-(吡啶-4-甲基)-酰胺基)-1,2,3,4-四氢异喹啉13
化合物12(0.36g)、4-甲氨基吡啶(500μL)溶于10mL的DMF中，依次加入1-羟基苯并***(HOBt,0.2g)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,0.28g),室温搅拌12小时。反应液依次用水、饱和NaHCO3、10％的拧檬酸溶液、饱和食盐水处理，分离有机相，无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂后硅胶柱层析的白色固体0.26g.产率:75％,1H NMR(300MHz,Acetone-d6,r.t)δ1.39+1.45(s,9H),2.92-3.04(m,2H),3.57-3.82(m,2H),4.26-4.51(m,2H),4.57-4.82(m,1H),6.72-6.80(m,4H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),7.68(s,1H),8.31-8.37(m,2H).
5)R-2-(2,4-二苄氧基-5-氯-苯甲酰基)-7-羟基-3-(N-(吡啶-4-甲基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉14
向化合物13(410mg)的3mL二氯甲烧溶液中加入1mL三氟乙酸,反应结束后向反应液中加入过量三乙胺至碱性待用。向溶有中间体4(413mg,1eq)的3mL无水四氧呋喃溶液中,加入三乙胺,1-羟基苯并***(HOBt,182mg)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI258mg),室温搅拌15分钟后,将此反应液倒入上述二氯甲院溶液中。反应过夜后蒸除溶剂,加入乙酸乙酯,依次用水、饱和NaHCO3、饱和食盐水处理，分离有机相，无水硫酸钠干燥,蒸干溶剂后硅胶柱层析的白色固体600mg.
7)R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-7-甲氧基-3-(N-对氯苄基-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉L21
化合物14(50mg,)的4mLDMF溶液中加入碳酸铯粉末(150mg,)和N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(37mg),室温搅拌过夜后乙酸乙酯萃取三次,合并乙酸乙酯层后用饱和食盐水洗漆,无水硫酸镁干燥,蒸干溶剂得产物粗品。所得化合物不经纯化直接用于下一步。所得化合物溶于无水二氯甲烷中，N2保护下冷却至0℃后加入0.57mL三氯化硼溶液，20min后室温搅拌2小时，冰浴下加入饱和碳酸氢钠溶液至弱碱，猝灭反应，移走二氯甲烷层,乙酸乙酯萃取水相，盐水洗，无水Na2SO4干燥，蒸干溶剂后硅胶柱层析纯化得81.3mg白色固体A1.产率：76％。1H NMR(400MHz,Acetone-d6,r.t)δ7.70(br s,1H),7.36(s,1H),7.27–7.20(m,3H),7.19(br s,1H),7.10(s,1H),7.09(s,1H),7.04-7.00(m,1H),6.61(s,1H),5.14(br s,1H),4.80-4.70(m,2H),4.37(dd,J＝15.2,5.7Hz,1H),4.28(dd,J＝15.3,5.3Hz,1H),3.76(s,3H),3.37(dd,J＝15.4,4.9Hz,1H),3.27(dd,J＝15.5,6.0Hz,1H)。
实施例3：四氢异喹琳-3-羧酸类衍生物体外抗肿瘤细胞活性筛选试验
测试方法：
用SRB法对各种化合物的抗肿瘤活性进行评价。取处于对数生长期的细胞，以2000-8000cells/well的密度接种于96孔板中，12h细胞贴壁后加药(化合物L1-L45)，继续培养72h。细胞培养结束后每孔加100μL 10％三氯醋酸(TCA)固定，静置5min转至4℃放置1h。细胞固定完毕，弃TCA，用蒸馏水洗5遍，甩干并在空气中静止5min干燥。每孔加入50μL4mg/mLSRB溶液，室温条件下静置染色10分钟，用1％冰乙酸洗去未与蛋白结合的SRB，洗5遍后甩干并置于空气中干燥。与蛋白结合的SRB，每孔加入200μL 10mM Tris非缓冲溶液，用手轻拍1min充分溶解。最后用分光光度计测定OD值，测定波长为570nm。
对肿瘤细胞增殖的抑制率按下式计算：
IC50表示样品对肿瘤细胞的抑制率为50％时的浓度。
测试材料：
人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453；人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y；人胶质瘤细胞U251；人结肠癌细胞HCT116、SW480；人肺癌细胞H1299、A549；人***细胞HeLa、人***癌PC3；人肝癌细胞HepG2；人正常肝细胞HL7702。购于ATCC。
测试结果：见表1。
表1：部分四氢异喹琳-3-羧酸类衍生物对12株细胞的活性
综上所述，化合物L10、L15、L22和L41对多种组织类型包括乳腺，生殖和呼吸***来源的肿瘤细胞具有显著的抑制作用，但对人正常肝细胞毒性小，具有较好的成药性。
实施例4：Hsp90抑制活性评价
选取代表性化合物L15，检测其在细胞水平对Hsp90相关蛋白的影响。Hsp90客户蛋白水平的下调和Hsp70的回补上调是两个最常见的衡量化合物抑制Hsp90的生物指标。Westernblot结果表明，化合物L15胞内作用于Hsp90。
测试方法：
取处于对数生长的MDA-MB231细胞接种于细胞培养皿中，待细胞生长至70％密度时，加药处理相应时间，吸弃培养基，用冰上预冷的PBS洗涤一次，加入细胞裂解液处理。溶解产物加入等体积2×SDS样品缓冲液，加热煮沸5min使蛋白彻底变性。变性的样品首先经过8％-12％SDS-PAGE，然后电转至甲醇活化的聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。将电转移后的PVDF膜置于封闭液(5％BSA)中，脱色摇床室温封闭1h。随后，加入用5％BSA按相应比例稀释的一抗溶液，4℃封闭过夜，TBST洗3次，每次10min。再加入对应的偶联辣根过氧化物酶的二抗溶液，置于脱色摇床振摇1h，TBST洗3次，每次10min。将洗后的PVDF膜用新配的增强型化学发光剂溶液浸润，置于ChemDoc XRS+凝胶成像仪中拍照观察。
测试结果：见图1。

Claims (7)

1.一种四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂，其特征在于：所述热休克蛋白90抑制剂是具有通式(Ⅰ)的化合物，或其光学异构体、非对映异构体或其消旋体混合物，或其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药；
其中：
R1选自氢基，卤素，或C1-8烷基；
R2与R3各自独立选自氢基，氘基，或膦酸基；
Ar选自取代的芳香环；芳香环选自苯环、五元芳杂环、六元芳杂环、六元并五元杂环、六元并六元杂环、五元并五元杂环、苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；取代表示单取代、双取代或三取代；取代基选自氢原子烃基，卤素，羟基，氨基，二甲氨基，硝基，C1-8烷氧基，C1-8杂烷氧基，三氟甲氧基，氰基，羧基，磺酸基或磷酸基，或者是其酯或盐；
苯环A任选被氢基，一个或多个R4X基团取代；
X选自N、O、S原子或酰基；
R4选自氢基，C1-8烷基或5-6个环成员的环烷基，取代基选自C1-2烷氧基，单-或二-C1-2烷基氨基，5-6个环成员的含氮或含氧杂环基，羟基，氨基，硝基，氰基，酰胺基，甲磺酰氨基，甲基砜基，异羟肟酸基，甲氧羰基，酰肼基，羧基，磺酸基，磷酸基，或者是其酯或盐；
*是立体构型为S或R光学纯度或其消旋体。
2.如权利要求1所述的四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂，其特征在于：所述热休克蛋白90抑制剂是下述化合物之一：
R1选自卤素；R2与R3均为氢基；苯环A的7位被R4X基团取代；X选自O原子；*是立体构型为R光学纯度。
3.如权利要求2所述的四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂，其特征在于：所述热休克蛋白90抑制剂是化合物L10、L15、L22或L41，其化学名称顺序是：
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-3-(N-对氰基苄基-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L10)；
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-3-(N-(吡啶-4-甲基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L15)；
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-7-(2-甲氧基乙氧基)-3-(N-(吡啶-4-甲基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L22)；
R-2-(5-氯-2，4-二羟基苯甲酰基)-7-(2-吗啉代乙氧基)-3-(N-对氰基苄基-酰胺基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(L41)。
4.权利要求1、2或3所述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂在制备预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述与热休克蛋白90相关的疾病是：癌症，神经变性疾病，病毒感染，炎症，白血病，疟疾或糖尿病。
6.一种适于口服给予哺乳动物的预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物组合物，其特征在于：该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1、2或3所述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
7.一种适于胃肠外给予哺乳动物的预防或治疗与热休克蛋白90相关疾病的药物组合物，其特征在于：该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1、2或3所述四氢异喹琳-3-羧酸类热休克蛋白90抑制剂和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
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