CN107108706B - 蛇毒c片段多肽衍生物 - Google Patents

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Abstract

提供了一种蛇毒C片段直链多肽及其相关环肽的衍生物及其制备方法，所述衍生物含有如同式Ⅰ：R1‑P1‑Asp‑His‑P2‑Gly‑Thr‑Arg‑Ile‑Glu‑P3‑R2；或式Ⅱ：Cyclo(Cys‑Xaa1‑Xaa2‑Xaa3‑Xaa4‑Lys‑Asp‑His‑P2‑Gly‑Thr‑Arg‑Ile‑Glu‑P3)的母体肽序列，采用多肽固相合成方法制备,可制备镇痛药物。

Description

蛇毒C片段多肽衍生物
技术领域
本发明涉及多肽类药物领域，具体涉及一类具有镇痛作用的蛇毒C片段多肽衍生物以及镇痛药物。
背景技术
疼痛是一种出现于许多疾病中的常见临床症状，除了痛觉反应外，常引起失眠或其它生理功能的紊乱，如恐惧、紧张、焦虑不安、肢体回缩，剧烈地疼痛甚至可导致休克。临床上常用的镇痛药有：阿片类镇痛药如***、芬太尼、丁丙诺啡、曲马多等；麻醉浸润药如布比卡因、利多卡因、普鲁卡因和达克罗宁等；非甾体类抗炎止痛药如阿司匹林、吲哚美辛、氨基比林和保泰松等。
阿片类镇痛药是麻醉性镇痛药，临床限于急性锐痛的短期止痛，如外科手术中和术后止痛、骨折和急性内脏绞痛，也用于一些终末期病人无法治疗的顽固性疼痛，如晚期癌症的剧烈疼痛。这类药物的特点是起效快，镇痛作用强。缺点是有成瘾性，快速耐受性(即几次用药后疗效逐渐降低)，引起便秘和呼吸抑制等严重不良发应。麻醉浸润药虽然没有成瘾性，但是对于术后严重疼痛的治疗效果不明显，而且反复使用易产生药物依赖性、眩晕、恶心、呕吐、便秘、尿潴留、嗜睡、呼吸抑制、精神错乱和神经***毒性等危害，增加了患者的痛苦。解热镇痛药具有抗炎，退热和镇痛作用，临床用途较广。作为镇痛药主要用于慢性疼痛。这类药物的特点是镇痛作用温和，无成瘾性。缺点是镇痛作用强度不够，有比较严重的消化道不良反应，个别药物有心血管方面的副作用、肝脏毒性或过敏反应。慢性疼痛是一个困扰众多病人的共同临床症状之一，影响生活质量和工作，因此研究出作用强但不成瘾，可长期安全服用的镇痛药是目前亟需解决的难题。
国内外应用眼镜蛇毒缓解恶性肿瘤疼痛、各种神经痛、关节痛已有多年历史。蛇毒镇痛最明显的优点是连续使用不出现耐受及成瘾性，且副作用少，明显有别于***类药物。蛇毒镇痛的活性中心，神经毒素-C，为具有如下结构肽序列片段：Lys-Asp-His-Arg-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-Arg。我国昆明动物所早年从中华眼镜蛇的蛇毒中分离出神经毒素-C，并制成镇痛药克痛宁，后又研制出复方制剂复方克痛宁(含中华眼镜蛇神经毒素、曲马多和布洛芬)。后者目前临床用于癌症等引起的疼痛取得较好的效果。现在临床应用的还有中华眼镜蛇α-neurotoxin制成的科博肽注射液，用于镇痛。然而，传统的蛇毒类镇痛药物含有一定的神经毒性，从而导致了一定的不良反应的发生，不利于临床使用。
本发明通过对蛇毒C片段多肽进行结构修饰，制备出镇痛作用强、毒性小、有利于临床应用的蛇毒C片段多肽衍生物。
发明内容
一种蛇毒C片段多肽衍生物，其特征在于，具有如下结构式：
式Ⅰ：R1-P1-Asp-His-P2-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-P3-R2；或
式Ⅱ：
Cyclo(Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-Asp-His-P2-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-P3
其中，-R1的结构式为-NR3R4，-R3为-H、碳原子数量为1～16的烷基或碳原子数量为1～16的烷酰基，-R4为-H、碳原子数量为1～16的烷基或碳原子数量为1～16的烷酰基；
-R2的结构式为-CONR5R6或-COOR7，-R5为-H或碳原子数量为1～16的烷基，-R6为-H或碳原子数量为1～16的烷基，-R7为-H或碳原子数量为1～16的烷基；
-P1-为-Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-或-Lys-，
其中-Xaa1-为-Lys-或-Arg-，-Xaa2-为-Lys-或-Arg-，-Xaa3-为-Thr-或-Ser-，-Xaa4-为-Ala-或-Trp-；
-P2-为-Pro-Leu-Xaa5-Arg-或-Arg-，
其中-Xaa5-为-Lys-或-Arg-；
-P3-为-Cys-、-Gly-Cys-、-Arg-Xaa6-Cys-或-Arg-，
其中-Xaa6-为-Gly-或-Pro-；
且-P1-为-Lys-，-P2-为-Arg-，-P3-为-Arg，不同时存在。
在一个实施例中，-R1为-NH2。
在一个实施例中，-R2为-COOH。
在一个实施例中，-R3为-H、甲基、辛基、十六烷基、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
在一个实施例中，-R4为-H、甲基、辛基、十六烷基、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
在一个实施例中，-R5为-H、乙基、辛烷基或十六烷基。
在一个实施例中，-R6为-H、乙基、辛烷基或十六烷基。
在一个实施例中，-R7为-H、乙基、辛烷基或十六烷基。
在一个实施例中，式Ⅰ中，-P1-为-Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-。
在一个实施例中，-Xaa1-为-Lys-。
在一个实施例中，-Xaa2-为-Arg-。
在一个实施例中，-Xaa3-为-Ser-。
在一个实施例中，-Xaa4-为-Ala-。
在一个实施例中，式Ⅰ中，-P2-为-Pro-Leu-Xaa5-Arg-。
在一个实施例中，-Xaa5-为-Lys-。
在一个实施例中，式Ⅰ中，-P3-为-Cys、-Gly-Cys-或-Arg-Xaa6-Cys-。
在一个实施例中，-P3-优选为-Arg-Xaa6-Cys-或-Cys-。
在一个实施例中，-P3-更优选为-Arg-Xaa6-Cys-。
在一个实施例中，-Xaa6-为-Gly-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-Xaa1-为-Arg-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-Xaa2-为-Lys-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-Xaa3-为-Ser-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-Xaa4-为-Trp-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-P2-为-Pro-Leu-Xaa5-Arg-。
在一个实施例中，-Xaa5-为-Lys-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-P3-为-Cys-、-Gly-Cys-、-Arg-Xaa6-Cys-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-P3-更优选为-Cys-、-Gly-Cys-。
在一个实施例中，式Ⅱ中，-P3-最优选为-Cys-。
在一个实施例中，还包括溶剂，所述溶剂为水、乙醇或丙酮。
与所述蛇毒C片段多肽衍生物形成药学上可接受的盐的酸包括有机酸和无机酸，所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸，所述有机酸为醋酸、草酸、枸橼酸、富马酸、苹果酸或乳酸。
所述镇痛药物用于以下方面：各种疼痛如癌症疼痛、手术后疼痛、晚期艾滋病等引起的疼痛、严重慢性疼痛、骨伤疼痛、关节炎痛、神经疼痛及其他原因所致的中、重度疼痛。
这种蛇毒C片段多肽衍生物是从眼镜蛇神经毒素-C中通过水解、分离、纯化得到的10肽化合物进行改造后得到的，并且通过试验证明这种蛇毒C片段多肽衍生物是强效镇痛药，具有起效快、作用时间长、无耐受性、无成瘾性等特点。这种蛇毒C片段多肽衍生物在具有良好镇痛作用的同时，还去掉了原神经毒素-C所带有的神经毒性，这使得这种蛇毒C片段多肽衍生物在保持药效的同时，大大降低了不良反应的发生率，有利于临床使用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对蛇毒C片段多肽衍生物以及镇痛药物作进一步详细的说明。
一实施方式的一种蛇毒C片段多肽衍生物，具有如下结构式：
式Ⅰ：R1-P1-Asp-His-P2-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-P3-R2；或
式Ⅱ：
Cyclo(Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-Asp-His-P2-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-P3
-R1的结构式为-NR3R4，-R3、-R4为-H、碳原子数量为1～16的烷基或碳原子数量为1～16的烷酰基。
在一个优选的实施例中，-R3、-R4为-H、甲基、辛基、十六烷基、乙酰基、庚酰基或棕榈酰基。
特别的，-R1为-NH2。
-R2的结构式为-CONR5R6或-COOR7，-R5、-R6、-R7为-H或碳原子数量为1～16的烷基。
在一个优选的实施例中，-R5、-R6、-R7为-H、乙基、辛烷基或十六烷基。
特别的，-R2为-COOH。
式Ⅰ中，-P1-为-Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-或-Lys-。
一个优选的实施例中，-Xaa1-为-Lys-。
一个优选的实施例中，-Xaa2-为-Arg-。
一个优选的实施例中，-Xaa3-为-Ser-。
一个优选的实施例中，-Xaa4-为-Ala-。
式Ⅰ中，-P2-为-Pro-Leu-Xaa5-Arg-。
一个优选的实施例中，-Xaa5-为-Lys-。
式Ⅰ中，-P3-为-Arg-Xaa6-Cys-或-Cys-。
一个优选实施例中，-P3-为-Arg-Xaa6-Cys-。
一个优选的实施例中，-Xaa6-为-Gly-。
一个优选的实施例中，式Ⅱ中，-Xaa1-为-Arg-。
一个优选的实施例中，式Ⅱ中，-Xaa2-为-Lys-。
一个优选的实施例中，式Ⅱ中，-Xaa3-为-Ser-。
一个优选的实施例中，式Ⅱ中，-Xaa4-为-Trp-。
式Ⅱ中，-P2-为-Pro-Leu-Xaa5-Arg-。
一个优选的实施例中，-Xaa5-为-Lys-。
式Ⅱ中，-P3-为-Cys-、-Gly-Cys-、-Arg-Xaa6-Cys-。
一个优选的实施例中，-P3-更优选为-Cys-、-Gly-Cys-。
一个优选的实施例中，-P3-最优选为-Cys-。
具体的，这种蛇毒C片段多肽的序列可以为如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ IDNo.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、SEQ ID No.10、SEQ ID No.11、SEQ ID No.12或SEQ ID No.13所示。
这种蛇毒C片段多肽衍生物是从眼镜蛇神经毒素-C中通过水解、分离、纯化得到的10肽化合物进行改造后得到的，并且通过试验证明这种蛇毒C片段多肽衍生物是强效镇痛药，具有起效快、作用时间长、无耐受性、无成瘾性等特点。这种蛇毒C片段多肽衍生物在具有良好镇痛作用的同时，还去掉了原神经毒素-C所带有的神经毒性，这使得这种蛇毒C片段多肽衍生物在保持药效的同时，大大降低了不良反应的发生率，有利于临床使用。
本发明还公开了一种镇痛药物，包括上述的蛇毒C片段多肽衍生物或所述蛇毒C片段多肽衍生物药学上可接受的盐。
与所述蛇毒C片段多肽衍生物形成药学上可接受的盐的酸包括有机酸和无机酸，所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸，所述有机酸为醋酸、草酸、枸橼酸、富马酸、苹果酸或乳酸。
这种蛇毒C片段多肽衍生物可以用于镇痛，具体的，可以用于癌症疼痛、手术后疼痛、骨伤疼痛、关节炎痛、神经疼痛及其他原因所致的中、重度疼痛的镇痛。
在其他的实施例中，镇痛药物还包括溶剂。溶剂可以为水、乙醇或丙酮。
本发明的氨基酸序列包含用于天然存在的氨基酸的传统的三字母代码。
本发明的肽化合物包括通过肽键，即酰胺键，链接的氨基酸的直链骨架和环状结构。
肽制备
本领域技术人员知道多种不同的方法可以制备在本发明中描述的肽。这些方法包括但不限于合成方法和重组基因表达。因此，制备这些肽的一种方式是在溶液中合成或在固体支撑体上合成，以及随后的分离和纯化。制备该肽的不同方式是在宿主细胞中的基因表达，其中在该宿主细胞中导入了编码该肽的DNA序列。或者，基因表达可以不利用细胞***来实现。上述方法也可以以任何方式结合。
制备本发明所述蛇毒C片段多肽衍生物的优选方法为：
方法一：
化合物1～93的制备方法
(1)取替代度为0.8～1.3mmol/g的Wang或CTC树脂装入固相反应柱中，DMF洗两遍；加入DMF溶胀30min；用DMF溶解端位氨基被保护的氨基酸、DMAP和HOBt，冰浴10分钟，加入DIC，预活化2～5min，将活化好的溶液加入固相反应柱，搅拌反应5h，抽干，DMF洗6次；DCM洗3次，MeOH收缩三次，干燥后得到端位氨基被保护的氨基酸树脂，检测替代度，合成规模10.0mmol。
(2)加入DMF，使上述树脂完全浸入其中，搅拌30min，抽滤DMF，加入20％DBLK脱保护两次，抽干，用DMF溶解端位氨基被保护的氨基酸和HOBt，冰浴10分钟，加入DIC,预活化2～5min，将活化好的溶液加入固相反应柱，搅拌反应2h，茚三酮检测呈阴性。抽干，DMF洗3次，20％DBLK脱保护两次DMF洗涤6次；抽干，偶联下一个氨基酸。
(3)参照(2)的步骤，将其余的端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，干燥后得到树脂肽。
(4)裂解：冰浴下，将所得肽树脂分批加入到装裂解液(VTFA：VTIS：VH2O＝95：2.5：2.5)的反应器中，搅拌30min，升至室温，搅拌2.5h。抽滤裂解液，使用部***解液分两次洗涤树脂，洗涤液并入到裂解液中，将该裂解液滴入到约冷异丙醚中并激烈搅拌，离心，洗涤，干燥得粗肽。
(5)用反相高效液相法纯化粗肽，浓缩，冻干得纯品。通过LC-MS确定精肽的分子量。
方法二：
化合物94～127的制备方法
(1)：以1.99～2.66g MBHA树脂(2.14～2.86mmol)为固相载体，HBTU/DIEA为缩合剂，先将Trt-MPA与树脂连接，得到Trt-MPA-MBHA-Resin，按照从C端到N端的顺序，按标准的Boc固相多肽合成方法(参考文献：黄惟德，陈常庆著，多肽合成，科学出版社，1985)操作将端位氨基被保护的氨基依次缩合(顺序如序列SEQ ID No.11～SEQ ID No.13中从右至左)，将上述肽树脂干燥后放入HF切割仪的反应器中，加入1.0mL苯甲醚，1ml乙二硫醇，用液氮冷却反应器，转入约20mL液态HF，于0℃反应60分钟。用油泵抽走HF，取下反应器，加入冷无水***沉淀出固体，再将混悬液转移至砂芯漏斗中。用少量冷却的无水***洗涤三次，用水溶液冲洗至树脂不再相互粘附，收集洗涤液，冷冻干燥后得白色干粉。经RP-HPLC纯化得肽硫酯纯品。
(2)将冻干后的线性肽硫酯加入0.1M Na2HPO4并含3eq TCEP(三羧乙基膦)的50％(v/v)乙腈/水溶液中，使肽浓度约2mg/mL且pH约7.0，反应由HPLC监测。
(3)用反相高效液相法纯化粗肽，浓缩，冻干得纯品。通过LC-MS确定精肽的分子量。
以下为具体实施例，实施例中出现的各种仪器和试剂如果没有特别说明，均采用本领域常规仪器或试剂。下面结合具体实施例对蛇毒C片段多肽衍生物做进一步的详细说明。
实施例1～127化合物如表1所示。
实施例1：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例2：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-(Me)2-Cys(Trt)-OH。
实施例3：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-(Octyl)2-Cys(Trt)-OH。
实施例4：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-(Hexadecyl)2-Cys(Trt)-OH。
实施例5：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Me-Cys(Trt)-OH。
实施例6：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-(Octyl)-Cys(Trt)-OH。
实施例7：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-(Hexadecyl)-Cys(Trt)-OH。
实施例8：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-COO-Et；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在EtOH/DIEA/DMAP作用下得到产物。
实施例9：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-COO-Octyl；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在辛醇/DIC/DMAP作用下得到产物。
实施例10：化合物(10)的制备。
化合物(10)中，制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-COO-Hexadecyl；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后，用20％TFE/DCM裂解；在十六醇/DIC/DMAP作用下得到产物
实施例11：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CONH2；固相合成中的树脂载体换成Fmoc Rink Amide MBHA。
实施例12：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CONH-Me；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在HBTU/DIEA作用下与甲胺盐酸盐反应得到产物。
实施例13：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CONH-Octyl；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在HBTU/DIEA作用下与辛胺反应得到产物。
实施例14：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CONH-Hexadecyl；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在HBTU/DIEA作用下与十六胺反应得到产物。
实施例15：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CON(Me)2；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在HBTU/DIEA作用下与二甲胺盐酸盐反应得到产物。
实施例16：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CON(Octyl)2；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在HBTU/DIEA作用下与二辛胺反应得到产物。
实施例17：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：-R2为-CON(Hexadecyl)2；固相合成中的树脂载体换成CTC Resin；线性肽偶联完后用20％TFE/DCM裂解；在HBTU/DIEA作用下与二(十六)胺反应得到产物。
实施例18：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例19：化合物(19)的制备。
化合物(19)中，制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例20：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH。
实施例21：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例22：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例23：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例24：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例25：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。
实施例26：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。
实施例27：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例28：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例29：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例30：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例31：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例32：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.1。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例33：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.2。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例34：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.2。区别仅在于：在固相合成中氨基酸偶联完后使用Ac2O/DIEA封端。
实施例35：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.2。区别仅在于：在固相合成中氨基酸偶联完后使用辛酸酐/DIEA封端。
实施例36：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.2。区别仅在于：在固相合成中氨基酸偶联完后使用棕榈酰氯/DIEA封端。
实施例37：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.2。区别仅在于：在固相合成中位点8使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例38：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.3。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例39：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.3。区别仅在于：在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH。
实施例40：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.3。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Gly-OH。
实施例41：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.3。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Gly-OH；在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH。
实施例42：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例43：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例44：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。
实施例45：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH。
实施例46：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例47：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例48：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例49：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH，在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例50：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。通过LC-MS确定精肽的分子量。
实施例51：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例52：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例53：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例54：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例55：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.4。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH，在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH，在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH,在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例56：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例57：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例58：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例59：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例60：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例61：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例62：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例63：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。
实施例64：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例65：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH；在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例66：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例67：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH；在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例68：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.5。区别仅在于：在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例69：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.6。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例70：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.6。区别仅在于：在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例71：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.6。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例72：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.6。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例73：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.6。区别仅在于：在固相合成中位点8使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例74：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例75：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。
实施例76：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例77：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例78：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例79：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例80：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.7。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例81：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例82：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH。
实施例83：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例84：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例85：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例86：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例87：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例88：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点8使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例89：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.8。区别仅在于：在固相合成中位点8使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。
实施例90：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.9。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例91：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.9。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。
实施例92：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.10。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例93：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.10。区别仅在于：在固相合成中位点8使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例94：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例95：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例96：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH。
实施例97：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH。
实施例98：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例99：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例100：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH
实施例101：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH
实施例102：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例103：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例104：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；
实施例105：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.11。区别仅在于：在固相合成中位点11使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例106：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例107：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH。
实施例108：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例109：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例110：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例111：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例112：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例113：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点15使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例114：制备方法如方法二描述，肽链的序列为SEQ ID No.12。区别仅在于：在固相合成中位点12使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点13使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点14使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例115：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。将端位氨基被保护的氨基酸按照肽序列依次缩合，裂解、纯化，确定分子量。
实施例116：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例117：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例118：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例119：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例120：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例121：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点16使用氨基酸Fmoc-Trp(Boc)-OH；在固相合成中位点17使用氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点19使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例122：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH。
实施例123：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例124：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH；在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例125：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例126：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点2使用氨基酸Fmoc-Pro-OH；在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
实施例127：制备方法如方法一描述，肽链的序列为SEQ ID No.13。区别仅在于：在固相合成中位点10使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH；在固相合成中位点18使用氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH。
表1.实施例1～127化合物列表
Figure BDA0001288540160000201
Figure BDA0001288540160000211
Figure BDA0001288540160000221
Figure BDA0001288540160000231
Figure BDA0001288540160000241
Figure BDA0001288540160000251
Figure BDA0001288540160000261
实施例128：蛇毒C片段多肽衍生物对大鼠术后痛的影响试验
1、试验对象：选取70只雄性SD大鼠，体重为320-350g。
2、试验材料：实施例1、33、42、45、56、94、106、107、115制备的蛇毒C片段多肽衍生物)分别配制成浓度为0.5mg/mL的溶液备用，盐酸布比卡因注射剂，生理盐水。
3、建立大鼠术后痛模型：将适用适应性饲养2-3天后的SD大鼠，腹腔注射10％水合氯醛麻醉大鼠，距右脚后跟约0.5cm，用手术刀将大鼠右后脚足底竖向切开一个1cm长的伤口，然后找到皮下的脚筋与肌肉，用小弯头镊子挑起，用小刀竖切3-4刀，保持筋与肌肉不断，造成损伤，用脱脂棉吸干流血，褥式缝合足底皮肤，缝合后在左后肢肌肉注射50mg氨苄西林钠预防感染。
4、试验方法：
4.1、试验分组：
将建模后的大鼠休息一夜，第二天早晨使用机械刺痛-抬足法测定痛阈值，按照痛阈值随机分为7组，每组为10只，分别为模型组，盐酸布比卡因注射剂组，实施例1、33、42、45、56、94、106、107、115组。
4.2、给药方式：
在位于大鼠右股骨大转子和坐骨结节之间连线上，靠近右股骨大转子连线上1/3点处，朝前内侧方向针尾抬高45°进针，直至针尖碰到骨头后回缩1mm，最后注入药物。各组的给药量如下：
模型组：注射0.5ml的生理盐水；
盐酸布比卡因注射剂组：注射浓度为12mg/ml的盐酸布比卡因注射剂0.5ml；
实施例1、33、42、45、56、94、106、107、115组：分别注射浓度为0.5mg/mL的实施例1、33、42、45、56、94、106、107、115组制备的蛇毒C片段多肽衍生物溶液0.5ml。
4.3、检测方法：
采用机械刺痛-抬足法检测，令大鼠自由站立在铁网上，待其安静后，用电子VonFrey针对其右后脚进行测定，取max值作为痛阈值，每只大鼠各测定2次，期间间隔5分钟，取平均值。测定时间为给药前，给药后1h、2h、4h、8h、24h、28h、32h、48h、56h、72h。
5、试验结果：
采用SPSS软件进行统计学处理。计量资料采用单因素方差分析进行比较，以均数±标准差表示，P＜0.05表示具有统计学差异，P＜0.01表示具有显著统计学意义，结果如表1。
表2.蛇毒C片段多肽衍生物对大鼠术后痛感觉神经阻滞时间数据
Figure BDA0001288540160000272
Figure BDA0001288540160000273
Figure BDA0001288540160000271
Figure BDA0001288540160000281
注：与模型组相比较，**P＜0.01，*P＜0.05。
由表1的数据可知，盐酸布比卡因注射剂组可持续镇痛时间为8小时左右，而实施例1、33、42、45、56、94、106、107、115组蛇毒C片段多肽衍生物的持续性镇痛时间至少为48小时。
Figure BDA0001288540160000291
Figure BDA0001288540160000301
Figure BDA0001288540160000311
Figure BDA0001288540160000321
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳市健元医药科技有限公司
<120> 蛇毒C片段多肽衍生物
<160> 13
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工合成多肽1
<400> 1
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Arg Gly Thr Arg Ile Glu Cys
1 5 10 15
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工合成多肽2
<400> 2
Lys Asp His Pro Leu Lys Arg Gly Thr Arg Ile Glu Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工合成多肽3
<400> 3
Lys Asp His Pro Leu Arg Arg Gly Thr Arg Ile Glu Arg Pro Cys
1 5 10 15
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工合成多肽4
<400> 4
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Arg Gly Thr Arg Ile Glu Gly Cys
1 5 10 15
<210> 5
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工合成多肽5
<400> 5
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Pro Leu Lys Arg Gly Thr Arg Ile
1 5 10 15
Glu Arg Gly Cys
20
<210> 6
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工合成多肽6
<400> 6
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Pro Leu Lys Arg Gly Thr Arg Ile
1 5 10 15
Glu Cys
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工合成多肽7
<400> 7
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Arg Gly Thr Arg Ile Glu Arg Gly
1 5 10 15
Cys
<210> 8
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工合成多肽8
<400> 8
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Pro Leu Lys Arg Gly Thr Arg Ile
1 5 10 15
Glu Arg
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工合成多肽9
<400> 9
Lys Asp His Arg Gly Thr Arg Ile Glu Arg Gly Cys
1 5 10
<210> 10
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工合成多肽10
<400> 10
Lys Asp His Pro Leu Lys Arg Gly Thr Arg Ile Glu Cys
1 5 10
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工合成多肽11
<400> 11
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Arg Gly Thr Arg Ile Glu Cys
1 5 10 15
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工合成多肽12
<400> 12
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Arg Gly Thr Arg Ile Glu Gly Cys
1 5 10 15
<210> 13
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工合成多肽13
<400> 13
Cys Lys Lys Thr Ala Lys Asp His Pro Leu Lys Arg Gly Thr Arg Ile
1 5 10 15
Glu Arg Gly Cys
20

Claims (3)

1.一种蛇毒C片段多肽衍生物，其特征在于，具有如下结构式：
式Ⅰ：NH2-P1-Asp-His-P2-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-P3-COOH或
式Ⅱ：Cyclo(Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-Asp-His-P2-Gly-Thr-Arg-Ile-Glu-P3)
其中：-P1-为-Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Lys-或-Lys-，
-Xaa1-为-Lys-，
-Xaa2-为-Lys-，
-Xaa3-为-Thr-，
-Xaa4-选自-Ala-或-Trp-；
-P2-选自-Pro-Leu-Lys-Arg-或-Arg-；
-P3选自-Arg-Gly-Cys-、-Gly-Cys-、-Cys-、-Arg-；
-P1-为-Lys-时，-P2-为-Pro-Leu-Lys-Arg-，-P3-为-Arg-，
-Xaa4-为-Trp-时，-P2-为-Arg-，-P3-为-Gly-Cys-，
-Xaa4-为-Ala-且P2为-Arg-时，-P3-为-Gly-Cys-或-Cys-，
-Xaa4-为-Ala-且P2为-Pro-Leu-Lys-Arg-时，-P3为-Arg-Gly-Cys-。
2.一种镇痛药物，其特征在于，包括如权利要求1所述的蛇毒C片段多肽衍生物或所述蛇毒C片段多肽衍生物药学上可接受的盐。
3.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1所述的蛇毒C片段多肽衍生物和药学上可接受的赋形剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4126676A (en) * 1977-07-22 1978-11-21 Sanders Murray J Modified neurotoxin derived from naja genus snake venom
CN1210306C (zh) * 2000-09-18 2005-07-13 中山大学 平颏海蛇短链神经毒素以及编码该毒素的基因
CN101077888A (zh) * 2006-05-24 2007-11-28 上海医药工业研究院 聚乙二醇修饰的神经毒素,其制备方法及用途
CN105030775A (zh) * 2015-07-13 2015-11-11 广州金中健医疗器材有限公司 一种无成瘾性局部麻醉镇痛缓释递药***及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
烷基链长及肽链电荷分布对脂肽双亲分子自组装及水凝胶化的影响;王继乾 等;《物理化学学报》;20150715;第31卷(第7期);烷基链长及肽链电荷分布对脂肽双亲分子自组装及水凝胶化的影响 *

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