CN107074873B - 作为抗癌药的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶衍生物 - Google Patents

作为抗癌药的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶衍生物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及新系列的具有以下式I结构的经取代的7‑(吗啉基)‑2‑(N‑哌嗪基)甲基噻吩并[2，3‑c]吡啶。其中定义了R1、R2、R3和R4。

Description

作为抗癌药的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c] 吡啶衍生物
技术领域
本发明涉及一系列新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶，其可用于治疗脑、乳腺、肺、胰腺和***等的多种癌症。本发明提供了一系列式I的新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶或其药学上可接受的盐，
Figure GDA0001970636590000011
其中，
R1可以是-H、-C1-C6烷基、-C3-C6环烷基、-C(O)R5、-S(O)2R5、-C(O)2R5、被R6取代的-C1-C6烷基、被R6取代的-C3-C6环烷基、-芳基、被R6取代的-芳基、被R6取代的-杂芳基等，
R2、R3和R4可以独立地为-H，-OH，-SH，-卤素，-氨基，-氰基、硝基，-C1-C6烷基，-C3-C6环烷基，-芳基，-低级烷氧基，-C(O)R5，-S(O)2R5、-C(O)2R5、-C＝C(H)-R6、被R6取代的-氨基羰基、被R6取代或任选地含有-C3-C6的环烷基的-烷基氨基，烷基氨基羰基，-芳基氨基羰基，杂芳基，任选被H、氨基、含有C3-C6碳原子的氨基环烷基或氨基烷基取代的经取代杂芳基，含有1、2或3个杂原子(例如N、O、S)的稠合双环或三环杂芳基，任选被羟基、羟基烷基、氨基、氨基烷基、氨基羰基、炔基、氰基、卤素、低级烷氧基或芳氧基取代或者任选被R6取代的经取代芳基等，
R5可以是-H、-烷基、氨基、-氨基烷基、-N(alk)2、被R6取代的-芳基、被R6取代的杂芳基、被R6取代的-稠合杂芳基、-三氟甲基等，
R6可选自-H、羟基、卤素、氰基、硝基、氨基、-C1-C6烷基、-N(alk)2、-被取代的烷基(CH)0-6、-任选被取代的芳基、-任选被取代的杂芳基、-任选被取代的芳烷氧基、-芳基(羟基)烷基、-芳香族酰基氨基、-芳基磺酰基氨基、-低级烷氧基芳基磺酰基氨基、-羟基低级烷氧基苯乙烯基、-低级烷氧基芳氧基、-任选被取代的芳基烯基、-杂芳基烯基、-杂芳基炔基、-芳香族酰基炔基、-任选被N-取代的氨基低级烷基、-芳基氨基、-芳基烷基氨基等。
背景技术
PCT申请WO 2007/122410描述了通过PI3激酶机制工作并可用于治疗脑、乳腺、肺等的多种增殖性疾病的某些噻吩并[2，3-c]嘧啶化合物。先导化合物GDC-0941(现称为Pictilisib)的结构如下：
Figure GDA0001970636590000021
某些作为PI3激酶的噻吩并[2，3-c]嘧啶
WO2009071901A1描述了一类作为PI3激酶抑制剂的稠合三环***和噻吩衍生物，其有益于治疗炎性、自身免疫、心血管、神经变性、代谢性、肿瘤、伤害感受性或眼部疾病。
美国专利申请no.20090247567A1描述了作为PI3激酶抑制剂的某些噻吩并[2，3-c]吡啶、稠合苯并吡喃和稠合苯并氧杂环庚三烯(benzoxipen)。
US8653089描述了作为PI3激酶的p110δ同种型的选择性抑制剂的杂环化合物的制剂，其用于治疗炎症、免疫疾病和某些形式的癌症。
用于其他应用的噻吩并[2，3-c]吡啶
US3579526A描述了作为可用的染料中间体、杀虫剂、除草剂、农药和润滑油添加剂的一系列噻吩并吡啶化合物。
GB2010249A描述了某些噻吩并[2，3-c]-[3.2-c]吡啶及其作为炎症抑制剂的治疗应用。
GB2031428A描述了新的噻吩并[2，3-c]吡啶衍生物及其作为抗炎化合物的治疗应用。
EP0292051A2描述了作为抗溃疡剂的2-[(噻吩并吡啶基甲基)硫基]苯并咪唑的制备。这些苯并咪唑和噻吩并吡啶衍生物是优良的抗溃疡剂。
WO2000075145A1和US6232320描述了作为细胞黏附抑制性抗炎化合物的噻吩并吡啶和噻吩并嘧啶的制备。
WO2005110410A2描述了作为激酶抑制剂的稠合杂环的制备。本发明提供了作为激酶抑制剂(特别是COT或MK2激酶)的化合物或药学上可接受的盐。
本发明
本发明的主要目的是提供一系列具有上述通式I的新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个目的是提供一系列具有上述通式I的新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶及其药学上可接受的盐，其是有效且选择性的P13激酶抑制剂，并因此有益于治疗和预防多种人疾病(例如癌症)。
而本发明的另一个目的是提供一系列具有上述通式I的新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶及其药学上可接受的盐，其对例如肺、胰腺等的实体瘤具有优异的体内活性。
本发明的另一个目的是提供一系列具有上述通式I的新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶及其药学上可接受的盐的制备方法。
附图说明
图1示出化合物-1和2对多种实体瘤细胞系的抗增殖活性。
图2示出化合物1和化合物2在裸鼠中抵抗由胰腺细胞系MIAPaca-2诱导的肿瘤的抗肿瘤活性。
图3示出化合物1抵抗由NCI-H292(肺癌/厄洛替尼抗性)诱导的肿瘤的抗肿瘤活性。
图4示出化合物2抵抗由NCI-H292(肺癌/厄洛替尼抗性)诱导的肿瘤的抗肿瘤活性。
发明详述
因此，根据本发明的化合物是有效且选择性的PI3激酶抑制剂，并因此在治疗和预防多种人疾病(例如癌症)中是有益的。
本发明涉及式I化合物及其药学上可接受的盐，其可以通过已知适用于化学相关化合物的任何方法制备。
本发明涉及式I的新的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶，
Figure GDA0001970636590000041
其中，
R1可以是-H、-C1-C6烷基、-C3-C6环烷基、-C(O)R5、-S(O)2R5、-C(O)2R5、被R6取代的-C1-C6烷基、被R6取代的-C3-C6环烷基、-芳基、被R6取代的-芳基、被R6取代的-杂芳基等，
R2、R3和R4可以独立地为-H，-OH，-SH，-卤素，-氨基，-氰基，硝基，-C1-C6烷基，-C3-C6环烷基，-芳基，-低级烷氧基，-C(O)R5，-S(O)2R5，-C(O)2R5，-C＝C(H)-R6，被R6取代的-氨基羰基，被R6取代或任选地含有-C3-C6的环烷基的-烷基氨基，烷基氨基羰基，-芳基氨基羰基，杂芳基，任选被H、氨基、含有C3-C6碳原子的氨基环烷基或氨基烷基取代的经取代杂芳基，含有1、2或3个杂原子(例如N、O、S)的稠合双环或三环杂芳基，任选被羟基、羟基烷基、氨基、氨基烷基、氨基羰基、炔基、氰基、卤素、低级烷氧基或芳氧基取代或者任选被R6取代的经取代芳基等，
R5可以是-H、-烷基、氨基、-氨基烷基、-N(alk)2、被R6取代的-芳基、被R6取代的杂芳基、被R6取代的-稠合杂芳基、-三氟甲基等，
R6可选自-H、羟基、卤素、氰基、硝基、氨基、-C1-C6烷基、-N(alk)2、-被取代的烷基(CH)0-6、-任选被取代的芳基、-任选被取代的杂芳基、-任选被取代的芳烷氧基、-芳基(羟基)烷基、-芳香族酰基氨基、-芳基磺酰基氨基、-低级烷氧基芳基磺酰基氨基、-羟基低级烷氧基苯乙烯基、-低级烷氧基芳氧基、-任选被取代的芳基烯基、-杂芳基烯基、-杂芳基炔基、-芳香族酰基炔基、-任选被N-取代的氨基低级烷基、-芳基氨基、-芳基烷基氨基等。
式I化合物及其药学上可接受的盐可以通过已知适用于化学相关化合物的任何方法制备。
一般而言，该活性化合物可由合适的经取代的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基-噻吩并[2，3-c]吡啶化合物制备，其来自于前体经取代噻吩并[2，3-c]吡啶衍生物。
本发明的活性化合物可以通过以下合成方案I制备。
Figure GDA0001970636590000061
方案1
其中R1、R2、R3和R4如上文中所定义。
多种式I化合物通过以下方法制备：
a)式III的制备
Figure GDA0001970636590000062
在氢溴酸存在下，用亚硝酸钠溶液处理化合物II，并将重氮化的溶液缓慢添加至溴化铜(I)以得到式III。其中R2如上定义。卤化剂可以是氢溴酸水溶液、乙酸中的氢溴酸、盐酸。该反应可以在没有任何溶剂的情况下或者用氢溴酸、DM水等进行。将反应温度保持在-5℃至110℃，优选卤化剂的回流温度。
b)式IV的制备
Figure GDA0001970636590000071
将式III化合物的酯基水解为式III化合物的羧酸衍生物。在四氢呋喃、甲醇和水的存在下，用氢氧化钠溶液处理式III化合物。最后用盐酸酸化以得到式IV(其中R2如上文中所定义)。将反应温度保持在5℃至110℃，优选25℃至35℃。
c)式VI的制备
Figure GDA0001970636590000072
在醇钠和低级醇作为溶剂的存在下或在水、盐酸等的存在下，使用氰化剂(例如经取代的苯甲酰基乙腈)，并将式IV化合物转化为式VI的噻吩的氰甲基衍生物(其中R2如上文中所定义)。将反应温度保持在5℃至110℃，优选溶剂的回流温度。
d)式VII的制备
Figure GDA0001970636590000073
用三卤化磷、催化量的二甲基甲酰胺(纯净地或在溶剂如卤代芳基或烷烃存在下)处理式VI化合物以得到式VII化合物(其中R2、R3和X如上文中所定义)。将反应温度保持在25℃至180℃，优选120℃至125℃。
e)式VIII的制备
Figure GDA0001970636590000081
将式VII化合物用吗啉和乙醇处理以得到式VIII化合物(其中R2、R3和X如上文中所定义)。将反应温度保持在25℃至140℃，优选105℃至110℃。
f)式IX的制备
Figure GDA0001970636590000082
在己烷和二甲基甲酰胺中用正丁基锂处理式VIII化合物以得到式Ⅸ化合物(其中R2、R3和X如上文中所定义)。将反应温度保持在-80℃至0℃，优选-60℃至-70℃。
g)式XI的制备
Figure GDA0001970636590000091
用式X和原甲酸三甲酯、三乙酰氧基硼氢化钠处理式Ⅸ化合物以得到式XI化合物(其中R1、R2、R3和X如上文中所定义)。将反应温度保持在0℃至110℃，优选在25℃至35℃。
h)式I的制备
Figure GDA0001970636590000092
在双三苯基膦(II)二氯化物、碳酸钠水溶液和甲苯和乙醇的存在下，用式XII的硼酸酯或硼酸处理式XI化合物以得到式I化合物(其中R1、R2、R3和R4如上文中所定义)。将反应温度保持在0℃至160℃，优选115℃至120℃。
或者，式XVII化合物可以通过以下方案II制备：
方案II
Figure GDA0001970636590000101
i)式XIV化合物的制备
Figure GDA0001970636590000102
在丙酮溶剂中用硫酸二甲酯和碳酸钾处理经取代的3-甲基-2-噻吩羧酸(式XIII)以得到式XIV化合物。将反应温度保持在15℃至55℃，优选25℃至30℃。
j)式XV化合物的制备
Figure GDA0001970636590000103
以在四氯化碳溶剂中的N-氯代琥珀酰亚胺和过氧化苯甲酰处理式XIV化合物以得到式XV化合物。将反应温度保持在25℃至110℃，优选在40℃至80℃，更优选在75℃至80℃。
k)式XVI化合物的制备
Figure GDA0001970636590000111
在水中用***处理式XV化合物以得到式XVI化合物。将反应温度保持在25℃至90℃，优选在50℃至55℃。
I)式XVII化合物的制备
Figure GDA0001970636590000112
在四氢呋喃和甲醇存在下，用氢氧化钠溶液处理式XVI化合物，并最后用盐酸溶液酸化以得到式XVII。将反应温度保持在25℃至60℃，优选25℃至30℃。
本发明最特别地涉及作为抗癌药物的合成的新的稠合吡啶衍生物。
Figure GDA0001970636590000113
Figure GDA0001970636590000121
Figure GDA0001970636590000131
本发明的细节在下面给出的实施例中给出，其仅提供以用于举例说明，因此这些实施例不应解释为限制本发明的范围。
实施例1：3-溴-4-甲基-2-噻吩羧酸甲酯的制备
Figure GDA0001970636590000141
向搅拌中的在110ml氢溴酸中的50g(0.292mol)3-氨基-4-甲基噻吩-2-羧酸甲酯溶液中滴加在50ml水中的21.17g(0.306mol)亚硝酸钠溶液，同时通过在冰水浴中冷却将反应混合物的温度保持在0-5℃。当完成添加时，将溶液在0-5℃下搅拌60分钟。将重氮化的溶液滴加到在130ml氢溴酸中的44.0g(0.306mol)溴化铜(I)溶液中，同时通过在冰水浴中冷却将反应混合物的温度保持在0-5℃。当完成添加时，将溶液在0-5℃下搅拌30分钟，然后将反应混合物在65℃的恒温浴中加热2小时。将反应混合物用600ml水稀释，同时通过冷却保持在25-30℃，并用两份400ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用400ml份的水洗涤两次，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到65.5g(95.3％)作为黄色固体的3-溴-4-甲基-2-噻吩羧酸甲酯，熔点73℃至76.5℃，HPLC纯度为86％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：2.21(d，CH3，3H)，3.82(s，O-CH3，3H)，7.759-7.761(d，1H).13CNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：15.80(1C)，52.13(1C)，119.21(1C)，126.37(1C)，128.38(1C)，138.98(1C)，160.38(1C).质量：237.0[M+2]，235.0[M].
实施例2：3-溴-4-甲基噻吩-2-羧酸的制备
Figure GDA0001970636590000151
将3-溴-4-甲基-2-噻吩羧酸甲酯(64.0g，0.272mol)溶于甲醇(288ml)和四氢呋喃(288ml)的混合物中，并添加1N氢氧化钠水溶液(420ml)。将混合物在室温下搅拌2小时，并用1N盐酸酸化以得到35.5g(59.0％)作为灰白色固体的3-溴-4-甲基噻吩-2-羧酸，熔点227℃至229℃，HPLC纯度为97.3％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：2.21(d，CH3，3H)，7.692-7.794(d，1H)，13.30(s，OH，1H)13CNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：15.98(1C)，118.45(1C)，127.70(1C)，128.24(1C)，138.96(1C)，161.54(1C).质量：221.0[M].
实施例3：3-(氰甲基)-4-甲基-噻吩-2-羧酸的合成
Figure GDA0001970636590000152
将苯甲酰基乙腈(73.8g，0.508mol)添加到冷却的乙醇钠溶液(通过将19.5g钠金属0.847mol溶解在乙醇1125ml中制备)中。添加3-溴-4-甲基-噻吩-2-羧酸(75.0g，0.339m0l)，并将混合物在室温下搅拌2小时。添加4.5g(0.0247mol，0.07meq)无水乙酸铜(II)，并将混合物在回流下沸腾2小时。添加4.5g(0.0247mol，0.07meq)无水乙酸铜(II)，并将混合物在回流下沸腾8小时。将混合物冷却至室温，并将该物料过滤。通过在60℃的温度下真空蒸馏除去乙醇。将反应混合物用750ml水稀释，同时通过冷却保持在25-30℃，并将溶液用盐酸酸化，并用两份750ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，并用750ml份的5％碳酸钠溶液萃取两次。合并水性碳酸钠萃取液，将溶液用盐酸酸化，并用两份325ml乙酸乙酯萃取。通过真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到粗制产物并从异丙醚中重结晶粗制产物以得到35.10g(57.14％)黄色固体，熔点140℃至143℃，HPLC纯度为94.1％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：2.24(s，CH3，3H)，4.25(s，CH2，2H)，7.58(d，1H)，13.65(s，OH，1H).13CNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：14.05(1C)，117.46(1C)，128.10(1C)，130.18(2C)，135.58(1C)，138.55(1C)，163.02(1C).质量：180.1[M-1]
实施例4：5，7-二溴-3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶的制备
Figure GDA0001970636590000161
在120-125℃下将3-(氰甲基)-4-甲基-2-噻吩羧酸(56.0g，0.309mol)在三溴化磷(371ml)和二甲基甲酰胺(35ml)中反应4小时。将反应混合物冷却至室温。在冷却下，将反应混合物添加至冰水(3920ml)中以得到固体粗制产物。将粗制产物溶于二氯甲烷(560ml)中，用560ml水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过在真空下蒸馏来除去二氯甲烷，并将固体用己烷研磨以得到做为浅棕色固体的67.7g(71.2％)，熔点148℃至150℃，HPLC纯度为94.3％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：2.41(d，3H)，7.41(d，1H)，7.76(s，1H)13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：13.78(1C)，119.46(1C)，130.03(1C)，132.37(1C)，133.31(1C)，134.06(1C)，138.68(1C)，148.18(1C).质量：308.12[M+1].
实施例5：4-(5-溴-3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)-吗啉的制备
Figure GDA0001970636590000162
将溶于275ml乙醇中的100g(0.325mol)5，7-二溴-3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶和284.4g(3.271mol)吗啉的溶液在密封管中在105-110℃下恒温加热4小时。通过真空蒸馏除去乙醇和过量的吗啉，将粗制产物溶于二氯甲烷(2000ml)中，用四份600ml水洗涤，用无水硫酸钠干燥。通过在真空下蒸馏除去二氯甲烷，并将固体用二异丙醚研磨以得到61.17g(60.0％)浅棕色固体，HPLC纯度为97.4％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：2.36(d，CH3，3H)，3.71-3.73(t，4H，2CH2)，3.86-3.88(t，4H，2CH2)，7.19-7.20(d，1H)，7.27(s，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：13.65(1C)，48.08(2C)，66.82(2C)，112.11(2C)，122.07(1C)，126.13(1C)，130.78(1C)，133.93(1C)，149.74(1C)，154.95(1C).质量：313.21[M]
实施例6：1-甲烷磺酰基哌嗪的制备
Figure GDA0001970636590000171
在25-30℃下，向搅拌中的2000ml二氯甲烷中的100.0g(1.16mol)哌嗪溶液中滴加133.2g(1.16mol)甲磺酰氯。当完成添加时，将反应混合物搅拌16小时，并将物料用25％w/v氢氧化钠水溶液碱化。将反应物料过滤并用800ml水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过真空蒸馏除去二氯甲烷以得到81.2g(42.5％)灰白色固体，化学测定纯度为98.3％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：1.64(s，NH，1H)，2.77(s，CH3，3H)，2.95-2.98(t，4H，2CH2)，3.18-3.21(t，4H，2CH2).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：33.85(1C)，45.34(2C)，46.54(2C).质量：165.1[M+1]
实施例7：5-溴-3-甲基-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶的制备
Figure GDA0001970636590000172
在-60℃到-70℃下向搅拌中的无水四氢呋喃(750ml)中的50g(0.1597mol)4-(5-溴-3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)-吗啉的溶液中添加120ml(0.192mol)的1.6M正丁基锂的己烷溶液。搅拌11/2小时后，添加29.0g(0.39mol)无水二甲基甲酰胺。在-60°至-70℃下将反应混合物搅拌1小时，然后缓慢升温至室温。再保持室温2小时后，将反应混合物倒入冰/水(2250ml)中，并用两份1000ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到35.30g(64.7％)黄色固体，熔点170℃至182.5℃，HPLC纯度为96.4％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：2.41(s，3H，CH3)，3.63(t，4H，2CH2)，3.73(t，4H，2CH2)，8.16(s，1H)，10.34(s，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：11.9(1C)，48.7(2C)，66.6(2C)，112.4(1C)，123.2(1C)，132.4(1C)，134.5(1C)，147.3(1C)，150.0(1C)，155.1(1C)，183.8(1C，C＝O).质量：340.9[M]
实施例8：4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉的制备
Figure GDA0001970636590000181
向搅拌中的107.0g(0.3137mol)5-溴-3-甲基-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶的溶液中添加82.0g(0.50mol)1-甲磺酰基哌嗪和在3210ml 1，2-二氯乙烷中的700g原甲酸三甲酯持续4小时。添加700g原甲酸三甲酯，在室温下将反应混合物搅拌16小时。向其中添加205.5g(0.9693mol)三乙酰氧基硼氢化钠和1070ml 1，2-二氯乙烷。将反应混合物在室温下搅拌4小时。然后将混合物用5350ml水淬灭，用两份1750ml二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷萃取液，并用无水硫酸钠干燥。通过在真空下蒸馏来除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物从乙腈(640ml)中重结晶两次以得到84.2g(54.87％)棕色固体，熔点212℃至215℃，HPLC纯度为94.7％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：2.27(s，3H，CH3)，2.64(t，4H，2CH2)，2.8(s，3H，CH3)，3.27(t，4H，2CH2)，3.67(t，4H，2CH2)，3.79(s，2H，1CH2)，3.85(t，4H，2CH2)，7.20(s，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值ppm)11.7(1C)，34.4(1C)，45.7(2C)，48.1(2C)，52.5(2C)，54.9(2C)，66.8(1C)，112.0(1C)，120.7(1C)，128.5(1C)，134.0(1C)，141.3(1C)，150.9(1C)，154.6(1C).质量：491.1[M+2]，489.1[M]
实施例9：5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺(化合物-1)的制备。
Figure GDA0001970636590000191
在密封的玻璃管中将44.0g(0.0899mol)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、21.80g(0.0986mol，1.10meq)2-氨基嘧啶-5-硼酸片呐醇酯、4.0g(0.0056mol，0.06meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(300ml)、甲苯(300ml)、水(100ml)和33.30g(0.3146mol，3.50meq)碳酸钠的混合物加热至125-130℃持续5小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏来除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物通过酸碱纯化方法纯化以得到35.10g(77.65％)的浅棕色固体，HPLC纯度为99.7％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：2.36(s，3H，CH3)，2.58(t，4H，2-CH2)，2.89(s，3H)，3.13(t，4H，2-CH2)，3.59(t，4H，2-CH2)，3.79(t，4H，2-CH2)，3.83(s，2H，CH2)，5.24(s，2H，NH2)，7.70(s，1H)，9.00(s，2H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值ppm)：11.5(1C)，33，7(1C)，45.3(2C)，47.9(2C)，51.8(2C)，53.9(2C)，66.1(1C)，103.6(1C)，119.6(1C)，121.4(1C)，129.1(1C)，140.7(1C)，145.4(1C)，149.5(1C)，154.4(1C)，156.1(2C)，163.2(1C).质量：504.1[M+1]
实施例10：5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺二盐酸盐(化合物-1.2HCl)的制备。
Figure GDA0001970636590000201
向搅拌中的在75.0ml浓盐酸中的15.0g的5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺溶液添加600ml水。将反应混合物在室温下搅拌2小时，在此期间黄色沉淀逐渐析出。将固体过滤并用1N盐酸洗涤，在80-85℃下真空干燥以得到15.10g(88.0％)的黄色固体，HPLC纯度为99.4％，并且二盐酸盐理论含量为99.13％。
实施例11：5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺对甲苯磺酸盐(化合物-1.对甲苯磺酸盐)的制备
Figure GDA0001970636590000202
向搅拌中在二氯甲烷(500ml)和甲醇(100ml)中的10.0g(0.01985mol)5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(8.30g，0.04367mol，2.20meq)。然后通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到黄色固体。然后将固体用300ml丙酮研磨，在40-45℃真空干燥以得到15.10g(89.97％)黄色固体，HPLC纯度为99.7％，对甲苯磺酸盐理论含量为100.5％w/w。
实施例12：5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺二甲磺酸盐(化合物-1.二甲磺酸盐)的制备
Figure GDA0001970636590000211
向搅拌中的在二氯甲烷(600ml)和甲醇(120ml)中的12.0g(0.02382mol)的5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺溶液中添加9.40g(0.0952mol，4.0meq)甲磺酸。将反应混合物在室温下搅拌3小时，在此期间黄色沉淀逐渐析出。将固体过滤并用丙酮(180ml)浸取，在50-55℃下真空干燥以得到16.10g(97.16％)黄色固体，HPLC纯度为99.8％，并且二甲磺酸盐理论含量为99.6％w/w。
实施例13：4-[5-(1H-吲唑-4-基)-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉(化合物-6)的制备
Figure GDA0001970636590000212
将200mg(0.40mmol)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、200mg(0.80mmol，2.0meq)4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧代环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑、50.0mg(0.07mmol，0.17meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(4ml)、甲苯(4ml)、水(1ml)、200mg碳酸钠的混合物在密封的玻璃管中加热至115-120℃持续3小时。将反应混合物冷却，通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。粗制产物通过使用己烷和乙酸乙酯的柱色谱纯化以得到120mg(55.8％)浅棕色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：2.37(s，3H，CH3)，2.59(t，4H，2-CH2)，2.90(s，3H)，3.15(t，4H，2-CH2)，3.64(t，4H，2-CH2)，3.84(t，4H，2-CH2)，3.92(2H，CH2)，7.45(s，1H)，7.94(s，1H)，7.56(d，1H)，7.58(d，1H)，7.69(d，1H)，13.1(s，1H).质量：527.2[M+1]
实施例14：[3-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯基]甲醇(化合物-7)的制备
Figure GDA0001970636590000221
将200mg(0.40mmol)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、124mg(0.8mmol，2.0meq)3-(羟甲基)苯基硼酸、50.0mg(0.142mmol，0.17meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(4ml)、甲苯(4ml)、水(1ml)和200mg碳酸钠的混合物在密封的玻璃管中加热至115-120℃持续3小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏来除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物通过使用己烷和乙酸乙酯的柱色谱纯化以得到95mg(45.2％)黄色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO)δ-值(ppm)：2.40(s，3H，CH3)，2.59(t，4H，2-CH2)，2.90(s，3H，CH3)，3.14(t，4H，2-CH2)，3.60(t，4H，2-CH2)，3.82(t，4H，2-CH2)，3.85(s，2H，CH2)，4.58(d，2H)，5.24(t，1H，)，7.33(d，1H)，7.41(t，1H)，7.76(s，1H)，8.0(d，1H)，8.10(s，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值ppm)：11.7(1C)，33.9(1C)，45.4(2C)，48.2(2C)，51.9(2C)，54.0(1C)，63.0(1C)，66.2(2C)，105.7(1C)，120.6(1C)，124.6(1C)，125.0(1C)，126.6(1C)，128.4(1C)，129.5(1C)，139.2(1C)，140.9(1C)，142.7(1C)，149.0(1C)，149.6(1C)，154.5(1C).质量：517.3[M+1]
实施例15：3-溴-2-噻吩羧酸甲酯的制备
Figure GDA0001970636590000231
将3-氨基-2-噻吩羧酸甲酯(100g，0.6369mol)悬浮于氢溴酸(220ml)中，将混合物在室温下搅拌15分钟。将混合物冷却至0-5℃，并在低于5℃下滴加亚硝酸钠(46.0g，0.666mol)的水(100ml)溶液。将混合物搅拌1小时，然后在室温下添加至氢溴酸(260ml)中的溴化铜(I)(96.0g，0.6692mol)中。将所得混合物在60-65℃搅拌2小时。将反应混合物用1200ml水稀释，同时通过冷却保持在25-30℃，用两份600ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用600ml份的水洗涤两次，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到129.0g(91.6％)黄色固体，熔点47℃至48℃，HPLC纯度为96％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：3.90(s，O-CH3，3H)，7.09(d，1H)，7.46(d，1H).
13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：52.10(1C)，116.96(1C)，127.12(1C)，130.61(1C)，133.63(1C)，161.0(1C).质量：222.8[M+1].
实施例16：3-溴-2-噻吩羧酸的制备
Figure GDA0001970636590000241
将3-溴-2-噻吩羧酸甲酯128.0g(0.5791mol)溶于甲醇(576ml)和四氢呋喃(576ml)的混合物中，并且添加1N氢氧化钠水溶液(876ml)。将混合物在室温下搅拌2小时，并用1N盐酸酸化，并用两份740ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用740ml水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。所得产物为灰白色固体，熔点192℃至198.5℃，HPLC纯度为98.1％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：7.25-7.26(d，1H)，7.91-7.93(d，1H)，13.43(s，OH，1H).13CNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：116.02(1C)，128.35(1C)，133.19(2C)，161.66(1C).质量：207[M].
实施例17：3-氰甲基-2-噻吩羧酸的制备
Figure GDA0001970636590000242
将苯甲酰基乙腈(73.8g，0.508mol)添加到冷却的乙醇钠(由19.5g，0.847mol钠和1125ml乙醇制备)的溶液中。添加3-溴-2-噻吩-2-羧酸(75.0g，0.362mol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。添加4.5g(0.0247mol)无水乙酸铜(II)，并使混合物在回流下沸腾2小时。添加4.5g(0.0247mol)无水乙酸铜(II)，并使混合物在回流下沸腾8小时。将混合物冷却至室温并将该物料过滤。通过在60℃的温度下真空蒸馏除去乙醇。将反应混合物用750ml水稀释，同时通过冷却保持在25-30℃，将溶液用盐酸酸化，并用两份750ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用750ml份的5％碳酸钠溶液萃取两次。合并水性碳酸钠萃取液，溶液用盐酸酸化，并用两份325ml乙酸乙酯萃取。通过在真空下蒸馏来除去乙酸乙酯以得到粗制产物并从异丙醚中重结晶粗制产物以得到34.8g(56.65％)黄色固体，熔点102℃至106℃，HPLC纯度为97.1％。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：4.25[s，CH2(2H)]，7.24(d，1H)，7.88(d，1H)，13.44[s，(宽)，OH，1H].13CNMR(400MHz，DMSO-d6)δ-值(ppm)：17.72(1C)，118.5(1.C)，129.5(1C)，130.6(1C)，132.46(1C)，137.0(1C)，162.9(1C).质量：167.0[M]，166.0[M-1]
实施例18：5，7-二溴噻吩并[2，3-c]吡啶的制备
Figure GDA0001970636590000251
在120-125℃下将3-(氰甲基)-2-噻吩羧酸(56.0g，0.335mol)在三溴化磷(371ml)和二甲基甲酰胺(35ml)中反应4小时。将反应混合物冷却至室温。在冷却下，将反应混合物添加至冰水(3920ml)中以得到固体粗制产物。将粗制产物溶于二氯甲烷(560ml)中，用560ml水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过在真空下蒸馏除去二氯甲烷，并将固体用己烷(400mI)研磨以得到67.7g(71.2％)浅棕色固体，熔点114℃至126.8℃。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：7.42(d，1H)，7.80(d，1H)，7.87(s，1H)13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：121.0(1C)，123.31(1C)，133.49(1C)，133.9(1C)，134.9(1C)，138.4(1C)，147.8(1C).质量：295.9[M+2]，293.9[M]
实施例19：4-(5-溴噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)吗啉的制备
Figure GDA0001970636590000252
将溶于230ml乙醇中的50g(0.1706mol)5，7-二溴噻吩并[2，3-c]吡啶和230g吗啉的溶液在密封管中在105-110℃的恒温下加热4小时。通过真空蒸馏除去乙醇和过量的吗啉，将粗制产物溶于二氯甲烷(1200ml)中，用四份400ml的水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过在真空下蒸馏除去二氯甲烷以得到45.7g(89.5％)浅棕色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)6-值(ppm)：3.62(t，4H，2CH2)，3.76(t，4H，2CH2)，7.43(d，1H)，7.37(s，1H)8.05(d，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)6-值(ppm)：47.50(2C)，65.90(2C)，113.0(1C)，120.89(1C)，123.19(1C)，132.80(1C)，133.0(1C)，149.7(1C)，154.2(1C).
质量：299.15[M]，297.2[M-2]
实施例20：5-溴-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-2-甲醛的制备
Figure GDA0001970636590000261
在-60℃至-70℃下向搅拌中的在无水四氢呋喃(750ml)中的42g(0.1404mol)4-(5-溴噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)吗啉溶液中添加105ml(0.168mol)己烷中的1.6M正丁基锂。搅拌11/2小时后，添加20.5g(0.28mol)无水二甲基甲酰胺。将反应混合物在-60℃至-70℃下搅拌1小时，然后缓慢升温至室温。在室温下再反应2小时后，将反应混合物倒入冰/水(1000ml)中，并用两份420ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到38.40g(83.7％)黄色固体，熔点为140℃至153.5℃，HPLC纯度为95.0％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)6-值(ppm)：3.75(t，4H，2CH2)，3.86(t，4H，2CH2)，7.43(s，1H)，7.88(s，1H)，10.13(s，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：48.0(2C)，66.6(2C)，114.3(1C)，123.7(1C)，131.54(1C)，134.6(1C)，146.2(1C)，148.2(1C)，155.0(1C)，184.3(1C).质量：328.0[M+1]
实施例21：4-[5-溴-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉的制备
Figure GDA0001970636590000271
向搅拌中的在1500ml 1，2-二氯乙烷中的50.0g(0.1529mol)5-溴-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-2-甲醛的溶液中添加40.0g(0.2439mol，1.60meq)1-甲磺酰基哌嗪和325g原甲酸三甲酯持续4小时。添加325g原甲酸三甲酯，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。向其中添加100g(0.4716mol，3meq)的三乙酰氧基硼氢化钠和1000ml的1，2-二氯乙烷。将反应混合物在室温下搅拌4小时。然后将混合物用2500ml水淬灭，用两份2000ml二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷萃取液，并用无水硫酸钠干燥。通过在真空下蒸馏来除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物从乙腈(300ml)中重结晶两次以得到45.1g(62.1％)棕色固体，熔点218℃至224℃，HPLC纯度为95.4％。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：2.64(t，4H，2CH2)，2.79(s，3H，CH3)，3.27(t，4H，2CH2)，3.68(t，4H，2CH2)，3.83(s，2H，1CH2)，3.85(t，4H，2CH2)，7.0(s，1H)，7.2(s，1H)，质量：477.01[M+2]
实施例22：5-[2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2.3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺(化合物-2)的制备
Figure GDA0001970636590000272
将40.0g(0.08421mol)4-[5-溴-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、20.4g(0.0923mol，1.10meq)2-氨基嘧啶-5-硼酸片呐醇酯、3.54g(0.0056mol，0.06meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(300ml)、甲苯(300ml)、水(100ml)、31.20g碳酸钠(0.2943mol，3.50meq)的混合物在密封的玻璃管中加热至125-130℃持续5小时。将反应混合物冷却，并且通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物通过酸碱纯化方法纯化以得到33.150g(80.15％)浅棕色固体，HPLC纯度为99.6％。
实施例23：4-[5-(1H-吲唑-4-基)-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉(化合物-3)的制备
Figure GDA0001970636590000281
将1.0g(2.1mmol)4-[5-溴-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、1.02g(4.2mmol，2.0meq)4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧代环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑、200.0mg(0.28mmol，0.13meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(20ml)、甲苯(40ml)、水(4ml)、800mg碳酸钠的混合物在密封的玻璃管中加热至115-120℃持续3小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物通过使用己烷和乙酸乙酯通过柱色谱纯化以得到0.8g(74.7％)浅棕色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ-值(ppm)：2.59(t，4H，2-CH2)，2.90(s，3H)，3.15(t，4H，2-CH2)，3.64(t，4H，2-CH2)，3，84(t，4H，2-CH2)，3.92(2H，CH2)，7.45(s，1H)，7.94(s，1H)，7.56(d，1H)，7.58(d，1H)，7.69(d，1H)，7.43(d，1H)，13.1(s，1H).质量：514.0[M+2]，513.0[M+1]
实施例24：[3-[2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯基]甲醇(化合物-4)的制备
Figure GDA0001970636590000291
将0.5g(1.05mmol)4-[5-溴-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、0.32g(2.10mmol，2.0meq)3-(羟甲基)苯基硼酸、100.0mg(0.142mmol，0.13meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(20ml)、甲苯(20ml)、水(2m1)、400mg碳酸钠的混合物在密封的玻璃管中加热至115-120℃持续3小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物通过使用己烷和乙酸乙酯通过柱色谱纯化以得到450mg(86.5％)黄色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO)δ-值(ppm)：2.57(t，4H，2-CH2)，2.89(s，3H，CH3)，3.14(t，4H，2-CH2)，3.60(t，4H，2-CH2)，3.82(t，4H，2-CH2)，3.89(s，2H，CH2)，4.47(d，1H)，4.57(d，2H)，7.29(t，2H)，7.42(t，2H)，7.99(s，1H)，8.0(s，1H).13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值ppm)：33.8(1C)，45.4(2C)，48.3(2C)，51.8(2C)，56.2(1C)，59.8(1C)，63.1(1C)，66.2(2C)，107.1(1C)，121.4(1C)，122.8(1C)，i24.8(1C)，126.6(1C)，127.2(1C)，132.5(1C)，139.0(1C)，141.2(1C)，142.8(1C)，147.7(1C)，154.4(1C).质量：504.1[M+2]，503.1[M+1]
实施例25：3-[2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯胺(化合物-5)的制备
Figure GDA0001970636590000292
将1.0g(2.1mmol)4-[5-溴-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、0.65g(4.2mmol，2.0meq)3-氨基苯基硼酸一水合物、200.0mg(0.28mmol，0.13meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(20ml)、甲苯(40ml)、水(4ml)、800mg碳酸钠的混合物在密封的玻璃管中加热至125-130℃持续5小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将粗制固体产物通过使用己烷和乙酸乙酯重结晶来纯化以得到0.78g(76.4％)浅棕色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO)δ-值(ppm)：2.57(t，4H，2-CH2)，2.89(s，3H，CH3)，3.14(t，4H，2-CH2)，3.61(t，4H，2-CH2)，3.80(t，4H，2-CH2)，3.87(s，2H，CH2)，5.13(s，2H，NH2)，6.57(d，1H)，7.0(t，1H)，7.21(d，1H)，7.38(s，1H)，7.68(1H).
13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值ppm)：33.8(1C)，45.4(2C)，48.1(2C)，51.8(2C)，56.3(1C)，66.2(2C)，106.9(1C)，112.1(1C)，114.2(1C)，114.3(1C)，121.1(1C)，122.9(1C)，129.1(1C)，139.9(1C)，147.5(1C)，148.6(1C)，148.7(1C)，149.7(1C)，154.3(1C).质量：488.3[M+1]
实施例26：3-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯胺(化合物8)的制备
Figure GDA0001970636590000301
将1.0g(2.1mmol)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、0.92g(4.2mmol，2.0meq)3-氨基苯基硼酸片呐醇酯、200.0mg(0.28mmol，0.13meq)双(三苯基膦)二氯化钯(II)、乙醇(20ml)、甲苯(40ml)、水(4ml)、800mg碳酸钠的混合物在密封的玻璃管中加热至125-130℃持续5小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。粗制固体产物通过使用己烷和乙酸乙酯纯化以得到0.82g(80％)浅棕色固体。
1HNMR(400MHz，DMSO)6-值(ppm)：2.57(t，4H，2-CH2)，2.89(s，3H，CH3)，3.14(t，4H，2-CH2)，3.60(t，4H，2-CH2)，3.79(t，4H，2-CH2)，3.88(s，2H，CH2)，6.87(s，2H，NH2)，7.32(s，1H)，7.73(s，1H)，8.93(s，2H).
13CNMR(400MHz，CDCl3)δ-值ppm)：33.8(1C)，45.4(2C)，48.0(2C)，51.8(2C)，56.2(1C)，66.2(2C)，105.1(1C)，120.6(1C)，121.5(1C)，121.5(1C)，122.7(1C)，145.5(1C)，147.8(1C)，148.6(1C)，154.5(1C)，156.2(1C)，163.2(1C).
质量：491.3[M+2]，490.3[M+1]
实施例27：3-甲基噻吩-2-羧酸甲酯的制备
Figure GDA0001970636590000311
向搅拌中的在1000ml丙酮中的100g(0.7023mol)3-甲基-2-噻吩羧酸溶液中添加在500ml丙酮中的122.0g(0.8827mol)碳酸钾的溶液，并滴加89.0g(0.7056mol)硫酸二甲酯，同时将反应混合物的温度保持在25-30℃。当完成添加时，将溶液在25-30℃下搅拌4小时。通过真空蒸馏除去丙酮，并用3000ml水稀释反应混合物，同时通过冷却保持在25-30℃，并用三份1000ml的乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用1000ml份的水洗涤两次，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到105.2g(95.6％)淡黄色油状物，HPLC纯度为99.8％。
实施例28：3-(溴甲基)噻吩-2-羧酸甲酯的制备
Figure GDA0001970636590000312
向搅拌中的在1220ml四氯化碳中的200g(1.2805mol)3-甲基噻吩-2-羧酸甲酯溶液中添加228.0g(1.2805mol)N-溴代琥珀酰亚胺和12.40g(0.0512mol)过氧化苯甲酰，同时将反应混合物的温度保持在25-30℃。当完成添加时，将反应混合物加热至75-80℃并搅拌4小时。将反应混合物过滤并用100ml四氯化碳洗涤。将过滤物用1660ml份的5％碳酸钠洗涤两次，并用1660ml份的水洗涤两次，并用无水硫酸钠干燥。通过在65℃下真空蒸馏除去四氯化碳以得到粗制产物。然后将粗制产物用己烷(540ml)研磨以得到190.0g(63.0％)固体，HPLC纯度为97.4％。
实施例29：3-氰甲基-2-噻吩-2-羧酸甲酯的制备
Figure GDA0001970636590000321
向搅拌中的在220ml水中的51.50g(1.05mol)***溶液中添加185.0g(0.7868mol)3-(溴甲基)噻吩-2-羧酸酯和500ml甲醇。当完成添加时，将反应混合物加热至50-55℃并搅拌2小时。将反应混合物用4800ml水稀释，同时通过冷却保持在25-30℃，并用两份1800ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用1800ml份的水洗涤两次，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到粗制产物。然后将粗制产物用己烷(680ml)研磨以得到119.0g(83.0％)淡棕色固体，HPLC纯度为88.8％。
实施例30：3-氰甲基-2-噻吩羧酸的制备
Figure GDA0001970636590000322
将115.0g(0.6352m0l)3-氰甲基-2-噻吩-2-羧酸酯溶于甲醇(575ml)和四氢呋喃(575ml)的混合物中，并添加1N氢氧化钠水溶液(900ml)。将混合物在室温下搅拌2小时，并将反应混合物用3450ml水稀释，并用1N盐酸酸化，并用两份1725ml乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，用3450ml水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过在60℃下真空蒸馏除去乙酸乙酯以得到粗制产物。然后将粗制产物用己烷(1150ml)研磨以得到95.2g(89.7％)灰白色固体，HPLC纯度为89.4％。
实施例31：5-溴-3-甲基-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-2-甲醛的制备：
Figure GDA0001970636590000331
将13g(38mmol)5-溴-3-甲基-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-2-甲醛在5-10℃下在4颈圆底烧瓶中在乙酸(200mL)中与11.2mL(95mmol，2.3meq)70％硝酸反应1小时。将反应混合物在碎冰中淬灭并过滤以得到12.5g作为黄绿色固体的5-溴-3-甲基-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-2-甲醛。
1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：2.58(s，3H，CH3)；3.89(m，8H，4X CH2)；10.34(s，1H，CHO).质量：388.1[M+2]
实施例32：4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉的制备
Figure GDA0001970636590000332
在5.92g(55.8mmol，40meq)原甲酸三甲酯(TMOF)存在下，将混合物500mg(1.3mmol)5-溴-3-甲基-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-2-甲醛与366mg(2.2mmol，1.6meq)1-甲磺酰基哌嗪反应，然后在室温下使用1.37g(6.5mmol，5.0meq)三乙酰氧基硼氢化钠(STAB)在二氯甲烷中还原。将反应混合物在水中淬灭并用二氯甲烷萃取。通过蒸馏除去溶剂，并将所得粗制产物使用乙酸乙酯和己烷通过柱色谱纯化以得到600mg作为黄色固体的4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉。
1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：2.07(s，3H，CH3)；2.60-2.62(m，4H，2X CH2)；2.90(s，3H，CH3)；3.12-3.13(m，4H，2X CH2)，3.76(s，8H，4X CH2)；3.89(s，2H，CH2).
实施例33：5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺(化合物9)的制备
Figure GDA0001970636590000341
将750mg(14.4mmol)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉、640mg(28.9mmol，2.0meq)5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-胺、甲苯(30ml)、乙醇(15ml)、碳酸钠水溶液(3ml)和132mg(0.13meq)PdCl2(TPP)2的混合物在密封的玻璃管中加热至115-120℃，持续2.5小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将粗制产物通过使用乙酸乙酯、己烷和甲醇的混合物通过柱色谱纯化以得到500mg作为黄色粉末的5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺。
1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：2.11(s，3H，CH3)；2.60-2.62(m，4H，2X CH2)；2.90(s，3H，CH3)；3.13-3.14(m，4H，2X CH2)，3.74-3.78(s，8H，4X CH2)；3.90(s，2H，CH2)；8.41(s，2H，Ar-H).
实施例34：5-(2-氨基-嘧啶-5-基)-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-4-胺(化合物10)的制备
Figure GDA0001970636590000342
在50-55℃在氮气氛下，通过在甲醇(5mL)中使用120mg(0.9mmol，10.0meq)锌-铜络合物和80％水合肼(2.4mL)还原50mg(0.09mmol)5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺的混合物，持续7小时。将反应混合物冷却，并在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将产物用氯仿(200mL)萃取并用水洗涤。将溶液用无水硫酸钠干燥并过滤。通过使用真空蒸馏除去溶剂以得到20mg作为浅黄色固体的5-(2-氨基-嘧啶-5.基)-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-4-胺。HPLC纯度>95％。
1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：2.64(s，3H，CH3)；2.66-2.68(m，4H，2X CH2，)；2.81(s，3H，CH3)；3.28-3.30(m，4H，2X CH2)，3.36-3.38(m，4H，2X CH2)；3.78(s，2H，CH2)；3.88-3.90(m，4H，2X CH2)；4.00(bs，2H，NH2，D2O可交换的)；5.18(s，2H，NH2，D2O可交换的)；8.69(s，2H，Ar-H).质量：519.6[M+1]
实施例35：5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺(化合物11)的制备
Figure GDA0001970636590000351
将55mg(0.106mmol)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉与粗制5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼环戊烷-2-基)嘧啶-2，4-二胺(通过在1，4-二氧六环中的PdCl2(TPP)2和乙酸钾的存在下使0.5g 2，4-二氨基-5-溴嘧啶和1.34g双(片呐醇基)二硼反应来制备)缩合，并将其与甲苯(4ml)、乙醇(4ml)、碳酸钠水溶液(0.4ml)和10mg PdCl2(TPP)2的混合物在密封的玻璃管中加热至115-120℃，持续2.5小时。将反应混合物冷却，并通过在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将粗制产物通过使用乙酸乙酯、己烷和甲醇的混合物通过柱色谱纯化以得到10mg作为黄色固体的5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺。
1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：2.18(s，3H，CH3)；2.67-2.69(m，4H，2X CH2)；2.82(s，3H，CH3)；3.29-3.30(m，4H，2X CH2)；3.72-3.74(m，4H，2X CH2)；3.82(s，2H，CH2)；3.88-3.89(m，4H，2X CH2)；5.12(bs，2H，NH2，D2O可交换的)；5.50(bs，2H，NH2，D2O可交换的)；7.94(s，1H，Ar-H).质量：564.06[M+1]；DSC：249-252℃.
实施例36：5-[4-氨基-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺(化合物12)的制备
Figure GDA0001970636590000361
通过在50-55℃在氮气气氛下使用甲醇(20mL)中的300mg(1.95mmol，10.0meq)锌-铜络合物和80％水合肼(6.0mL)，将110mg(0.19mmol)5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺的混合物还原7小时。将反应混合物冷却，并在真空下蒸馏除去溶剂以得到粗制产物。将产物用氯仿(200mL)萃取并用水洗涤。将溶液用无水硫酸钠干燥并过滤。通过使用真空蒸馏除去溶剂，随后经柱纯化以得到57mg作为浅黄色固体的5-[4-氨基-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺。HPLC纯度>95％。
1HNMR(400MHz，CDCl3，δppm)：2.63(s，3H，CH3)；2.67-2.68(m，4H，2X CH2，)；2.81(s，3H，CH3)；3.30-3.32(m，8H，4X CH2)；3.78(s，2H，CH2)；3.89-3.90(m，4H，2X CH2)；4.03(s，2H，NH2，D2O可交换的)；4.84(s，2H，NH2，D2O可交换的)；5.55(bs，2H，NH2，D2O可交换的)；8.17(s，1H，Ar-H).质量：534.2[M+1]
生物学测试
A：体外研究：将化合物-1和2以10mM的浓度溶于细胞培养基和DMSO中以用于体外研究。用相同的细胞培养基进一步稀释储备溶液，并以0.01μm至10μm的浓度使用。对于该研究，本文中其结果公开了肺、乳腺、胰腺、***和神经胶质瘤的实体瘤细胞系。
如下进行通过MTT测定的细胞增殖：在96孔板中每孔接种1000至10,000个细胞，并一式三份添加10μm至0.1μm的不同浓度的化合物1和2。在将细胞与化合物-1和2孵育24-72小时的所需时间后，添加15μl的5mg/mlMTT，并在37℃和5％CO2下另外孵育4小时。4小时后，将甲
Figure GDA0001970636590000373
晶体在37℃溶解在增溶缓冲液中过夜。在570-630nm的双波长下在Elisa阅读器上测量吸光度。通过MTT测定，计算化合物1和2的IC 50值。通过MTT测定获得的IC 50值列于图1所示的表中。
B：体内研究：
a.MTD(小鼠最大耐受剂量研究)
该方法按照OECD程序进行。使用重量为18-30克的5只(2只雄性+3只雌性)SwissAlbino小鼠进行研究。所有动物在经口施用药物之前禁食3小时。在准备样品后立即按其体重施用于所有动物。施用药物后，观察所有动物1/2小时、1小时、2小时、4小时，并观察死亡率14天。在14天结束时，将所有存活的动物尸检，切开胃并观察通过GIT的药物吸收。结果在图1中给出。
Figure GDA0001970636590000371
化合物2：MTD＞2000mg.kg，p.o(单剂量14天观察)
Figure GDA0001970636590000372
化合物1：MTD＝500mg/kg，p.o(单剂量14天观察)
b.对MIAPaca-2在裸鼠中诱导肿瘤的拮抗作用：
该研究用20只雄性裸鼠进行。在接种细胞系之前，首先进行裸鼠的称重，并分成四组。
组-I：阳性对照(5只雄性)
组-II：化合物2(5只雄性)(200mg/kg，p.o)
组-III：化合物1(5只雄性)(50mg/kg，p.o)
组-IV：标准(5只雄性)(盐酸厄洛替尼-50mg/kg，p.o，以及盐酸吉西他滨-120mg/kg，i.p.)
将细胞系以1×107个细胞/0.2ml的强度皮下接种到裸鼠的右后肢胁部。每天观察动物的肿瘤出现。使用公式1/2l X w2(l＝肿瘤长度，且w＝肿瘤宽度)测量肿瘤体积。当平均肿瘤体积记录为400mm3以上时，开始用上述药物治疗。除了盐酸吉西他滨在每周的第1天和第3天施用外，将上述药物每天经口施用30天。每天在给药前称取裸鼠的体重，并且使用数字游标卡尺在隔天进行肿瘤测量。在完成30天给药后处死存活动物，并收集器官(具有皮肤的肿瘤和胰腺)。
在实验进程中死亡的小鼠，收集具有皮肤的肿瘤和胰腺，并将带有皮肤的肿瘤储存在10％缓冲的***中，并将胰腺储存在Bouin氏溶液中。收集后的所有器官用于组织病理学。观察结果如下所述。
对照：可以看出，平均肿瘤面积为33.13mm2。5个肿瘤中的两个(40％)没有显示任何向周围组织的侵袭，而相等数量(40％)则显示血管侵袭。一个肿瘤显示向真皮扩散。
化合物2(200mg/kg，p.o)：平均肿瘤面积为10.90mm2。5个肿瘤中的三个(60％)是局限性的，没有看到肿瘤侵袭，而其余(40％)显示血管入侵。
化合物1(50mg/kg，p.o)：平均肿瘤面积为8.60mm2，并且仅有1/5(20％)显示侵袭到下面的肌肉，而其余的80％显示没有太多的活性。
结果如图2中所示。
标准[厄洛替尼(50mg/kg，p.o)+吉西他滨(120mg/kg，i.p)]：平均肿瘤面积为11.10mm2。1个样品没有肿瘤存在，而60％的肿瘤没有显示出侵袭，且仅有1个(20％)显示血管侵袭。
c.对NCI-H292在裸鼠中诱导肿瘤的拮抗作用：
用15只裸鼠(8只雄性+7只雌性)进行研究。在接种细胞系之前首先进行裸鼠的称重并分成组。分组如下：
组-I：阳性对照(4只雄性+1只雌性)
组-II：化合物2(2只雄性+3只雌性)(200mg/kg，p.o)(如图4中所示)
组-III：化合物1(2只雄性+3只雌性)(50mg/kg，p.o)(如图3中所示)将细胞系以6.25×105个细胞/0.2ml的强度皮下接种到裸鼠的右后肢胁部。每天观察动物的肿瘤出现。使用公式1/2l X w2(l＝肿瘤长度，且w＝肿瘤宽度)测量肿瘤体积。当平均肿瘤体积记录为400mm3以上时，开始用上述药物治疗。将上述药物每天经口给药保持40天。每天在给药前称取裸鼠的体重，并且使用数字游标卡尺在隔天进行肿瘤测量。在完成40天给药后处死存活的动物，并收集器官(具有皮肤的肿瘤和肝)。在实验进程中死亡的小鼠，收集具有皮肤的肿瘤和肝并储存在10％缓冲的***中。收集后的所有器官用于组织病理学。
组织病理学观察：
组织病理学报告表明，在阳性对照中，发现在所有动物(5只动物)中存在具有肌肉侵袭的皮下肿瘤。化合物2以200mg/kg的剂量水平治疗7天显示所有动物中肿瘤的清除(5/5)。化合物1以50mg/kg的剂量水平治疗15天显示在80％动物中的肿瘤清除(4/5)。因此表明对NCI-H292(厄洛替尼抗性肺癌)的抗肿瘤活性。
优势：
1.可用于治疗温血物种中癌症疾病的式I的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶的新化合物。
2.该方法导致提供新的中间体。
3.该方法还导致式I的纯级噻吩并[2，3-c]吡啶衍生物的制备方便地用于任何规模的操作。

Claims (8)

1.式I的7-(吗啉基)-2-(N-哌嗪基)甲基噻吩并[2，3-c]吡啶化合物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0003284364080000011
其中，
R1是-S(O)2R5；
R2、R3和R4各自独立地为H，卤素，氨基，氰基，-硝基，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，任选被羟基、羟基甲基或氨基取代的芳基，或任选被H或氨基取代的杂芳基，所述杂芳基含有选自N、O和S的1、2或3个杂原子；以及
R5是C1-C6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为：
i)5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺；
ii)5-[2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺；
iii)4-[5-(1H-吲唑-4-基)-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉；
iv)[3-[2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯基]甲醇；
v)3-[2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯胺；
vi)4-[5-(1H-吲唑-4-基)-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉；
vii)[3-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯基]甲醇；
viii)3-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]苯胺；
ix)5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2-胺；
x)5-(2-氨基-嘧啶-5-基)-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-4-胺；
xi)5-[3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺；或
xii)5-[4-氨基-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-7-吗啉代-噻吩并[2，3-c]吡啶-5-基]嘧啶-2，4-二胺。
3.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物为式II化合物：
Figure FDA0003284364080000021
其中X是卤素。
4.根据权利要求3所述的化合物，所述化合物为：
i)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-4-硝基-噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉；
ii)4-[5-溴-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉；或
iii)4-[5-溴-3-甲基-2-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]吗啉。
5.药物组合物，其包含：
(a)治疗有效量的如权利要求1或权利要求2所定义的化合物或其药学上可接受的盐；和
(b)药学上可接受的载体、稀释剂或载剂。
6.如权利要求1或权利要求2所定义的化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗癌症的药物的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述癌症是肺癌、胰腺癌、***癌、乳腺癌、脑癌或卵巢癌。
8.根据权利要求6所述的用途，其中所述治疗癌症包括向人经口、胃肠外或经直肠施用有效抗癌量的所述化合物或其药学上可接受的盐。
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