CN107048361B - 一种红枣大芸石榴皮复合酵素及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红枣大芸石榴皮复合酵素及其制备方法，包括以下步骤：将红枣、石榴皮和大芸加水按照料水比为1:3～5进行榨汁或磨浆，得到浆液；以果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶作为复合酶与浆液混合，在50～60℃下酶解3～4小时得到酶解液；所述复合酶的添加质量为所述浆液质量的0.2％～0.6％；以酵母菌、乳酸菌和醋酸菌用作种子液，接入酶解液中，接入质量为所述酶解液重量的2～4％，在28～32℃下发酵50～60d，得到发酵液；将所述发酵液浓缩，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。整个制作过程中不添加任何的化学物质或添加剂，具有较好的抗氧化防衰老、增强机体免疫力、抑癌防癌、增强体力抗疲劳、补肾阳益经血等多重保健功效。
Description
技术领域
本发明涉及酵素，特别涉及一种红枣大芸石榴皮复合酵素及其制备方法。
背景技术
酵素采用多种植物、蔬果、种子、草药、海藻等纯植物为原料制备。酵素的主要成分除多种食用酵素外，还有微量元素、矿物质、维生素、氨基酸、蛋白质、碳水化合物等，具有纯天然特点。但是，选用的植物、蔬果、种子、草药等植物原料不相同，具体的制备方法因厂家各异，其主要成分也有差异。
中药肉苁蓉又名金笋、地精、苁蓉、大芸，为列当科植物肉苁蓉或管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎。《药典》记载肉苁蓉，味甘、咸，性温，有补肾阳，益经血，润肠通便等功效，用于腰膝酸软，筋骨无力，阳痿，女子***，肠燥便秘等。其化学成分主要有苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木质素类、氨基酸、糖类、烃类、生物碱、黄酮类、D-甘露醇、β-谷甾、醇等。现代药理研究也证实肉苁蓉除了具有补肾壮阳、润肠通便的作用外，还具有抗疲劳、抗衰老、增强机体免疫力及增强记忆力等作用。基于肉苁蓉的多种功效，在进一步开展有效部位和活性成分研究基础上，肉苁蓉有望开发成为提高性功能、抗老年痴呆、保肝、通便、肿瘤辅助治疗、抗辐射等作用的药物，同时可开发成运动员增强体力、抗疲劳和延缓衰劳的保健品。
石榴皮是石榴的干燥果皮，含有多种物质和氨基酸。石榴皮含鞣质10.4～21.3％、蜡0.8％、树脂4.5％、甘露醇1.8％、糖2.7％、树胶3.2％、菊粉1.0％、粘质0.6％、没食子酸4.0％、苹果酸、果胶、草酸钙、异槲皮甙和石榴皮碱等。石榴皮含有的氨基酸为天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸等，其中谷氨酸含量最高，每100g石榴皮中约0.97g，其次是组氨酸。石榴皮中也含有多种元素。在药理作用方面，石榴皮性酸、味涩，具有涩肠止血、杀虫之功效。主要治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾和多种感染性疾病。石榴皮中的鞣质因其能凝固微生物体内的原生质及对多种酶的影响，对多种细菌、真菌、病毒有抑制作用，还具有免疫调节有作用。
现有技术中有关酵素的研究主要存在以下几点缺陷：1)原料不处理直接发酵利用率低，酵素活性物质提取率低。2)纯种发酵菌种代谢产物功能单一，无特性；发酵方式采用传统自然菌群发酵、现代复配纯种发酵或二者的结合，过于传统，无创新；3)酵素生物活性及稳定性差，保质期短；4)口感和风味适应性差、食欲性低。
目前尚无以红枣大芸和石榴皮为原料制备复合酵素的方法研究。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种红枣大芸石榴皮复合酵素及其制备方法，利用生物酶对原料进行降解，采用不同发酵菌种进行发酵，提高发酵的利用率。整个过程中不添加任何化学成分和添加剂，最大程度的降低酵素成品的生物活性损失，使酵素经人体摄取后发挥其最大活性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种红枣大芸石榴皮复合酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将6～8重量份红枣、2～3重量份石榴皮和0.5～1重量份大芸加水按照料水比为1:3～5进行榨汁或磨浆，得到浆液；
(2)以果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶作为复合酶，与步骤(1)所述浆液混合，在50～60℃下酶解3～4小时得到酶解液；
所述复合酶的添加质量为所述浆液质量的0.2％～0.6％；
(3)以酵母菌、乳酸菌和醋酸菌用作种子液，接入步骤(2)所述酶解液中，接入质量为所述酶解液重量的2～4％，在28～32℃下发酵50～60d，得到发酵液；所述种子液中所述酵母菌、所述乳酸菌和所述醋酸菌的总浓度为105～108CFU/mL；
(4)将步骤(3)所述发酵液浓缩，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
优选的，所述果胶酶、所述纤维素酶和所述木聚糖酶的重量比为2～4：3～5：1～3。
优选的，所述酵母菌、所述乳酸菌和所述醋酸菌的重量比为0.8～1.2：0.4～0.6：0.4～0.6。
进一步优选的，所述酵母菌为啤酒酵母、面包酵母和葡萄酒酵母中的一种或多种。
进一步优选的，所述乳酸菌为植物乳杆菌。
更优选的，所述植物乳杆菌的保藏编号为CCTCC No：M2015453。
优选的，步骤(4)中，所述浓缩的条件为：将步骤(3)所述发酵液在真空度0.05～0.1MPa、温度40～45℃下低温真空浓缩。
进一步优选的，所述浓缩在水浴中旋转进行，将所述发酵液蒸发至原体积的1/2～1/3，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
优选的，所述红枣在使用前进行预煮和去核。
本发明还包括由上述方法制备得到的红枣大芸石榴皮复合酵素。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明以红枣、大芸和石榴皮为原料，采用酶解和微生物发酵的方法制备复合酵素。整个制作过程中不添加任何的化学物质或添加剂，采用生物酶解发酵的方法得到高生物活性的酵素。
(2)本发明采用果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶将红枣、大芸和石榴皮中的大分子物质进行分解，得到的酶解液更有利于微生物的发酵，提高发酵效率。
(3)本发明采用酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的多个菌种对酶解液进行发酵，代谢产物多样，使发酵得到的酵素中含有多种有益成分，保健功能多样，口感和风味丰富，适应性好。
(4)本发明的复合酵素兼具三种原材料的保健功能，并且在经过复合酶解和微生物发酵之后，将大分子成分转变成小分子活性成分，具有较好的抗氧化防衰老、增强机体免疫力、抑癌防癌、增强体力抗疲劳、补肾阳益经血等多重保健功效。
(5)石榴皮是石榴加工的副产物，总多酚含量达到10％。本发明为深度利用石榴皮，合理利用这部分废弃资源，将石榴皮用于生产植物酵素，从而为石榴皮药用价值的利用、相关产品的开发以及标准化生产提供依据。
生物保藏说明
植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，于2015年7月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉武汉大学，菌株保藏编号为CCTCC No：M 2015453。
附图说明
图1为果胶酶添加量单因素试验结果；
图2为纤维素添加量单因素试验结果；
图3为木聚糖酶添加量单因素试验结果；
图4为酶解温度单因素试验结果；
图5为酶解时间单因素试验结果；
图6为料液比单因素试验结果。
具体实施方式
本发明提供了红枣大芸石榴皮复合酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将6～8重量份红枣、2～3重量份石榴皮和0.5～1重量份大芸加水按照料水比为1:3～5进行榨汁或磨浆，得到浆液；
(2)以果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶作为复合酶，与步骤(1)所述浆液混合，在50～60℃下酶解3～4小时得到酶解液；
所述复合酶的添加质量为所述浆液质量的0.2％～0.6％；
(3)以酵母菌、乳酸菌和醋酸菌用作种子液，接入步骤(2)所述酶解液中，接入质量为所述酶解液重量的2～4％，在28～32℃下发酵50～60d，得到发酵液；所述种子液中所述酵母菌、所述乳酸菌和所述醋酸菌的总浓度为105～108CFU/mL；
(4)将步骤(3)所述发酵液浓缩，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
本发明以红枣、大芸和石榴皮为原料制备复合酵素，使制备得到的复合酵素中含有红枣、大芸和石榴皮的作用和功效，增加酵素的保健范围。本发明以红枣作为主要原料，添加了部分常作为加工副产物的石榴皮和具有多种保健功效的中药大芸，提高了复合酵素中的保健成分。
在本发明中，红枣的添加量为6～8重量份，优选为7重量份。本发明对红枣的来源和品种没有特殊的限定，采用市售红枣即可。在本发明实施例中，采用的是新疆和田红枣，味道甜美可口、营养丰富，每100g鲜枣可食部分含糖量24％，还含有蛋白质、脂肪及钙、磷、铁等人体必需的矿质元素和多种维生素，尤其是Vc的含量每100g鲜枣可食部分高达540mg，比苹果高100多倍，比柑橘高7～10倍，具有养血健脾、补五脏、治虚损等功效，对高血压、肝硬化等多种疾病有良好的疗效。
本发明为了便于红枣进行酶解，优选将红枣进行预煮后，去核。本发明首先将新鲜红枣用流动水清洗，除去粘着的泥土等杂质。本发明对红枣预煮及去核的方法没有特殊的限定，采用本领域的常规方法将红枣进行预煮，达到方便去核的程度。在本发明具体实施例中，将红枣在100℃水中预煮，预煮时间为10～20min，进一步为13～17min。将预煮后的红枣去核。本发明对去核的方式没有特殊限定，可以采用手工去核或机械去核。去核后的红枣用于榨汁或磨浆。
本发明添加石榴皮为2～3重量份，优选为2.2～2.8重量份。本发明对石榴皮的来源及石榴品种没有特殊限定，可以采用收购市面上石榴产品的加工副产物。石榴皮的功效来自于果实中的多酚类物质，其中以果皮中含量最为丰富。石榴皮占石榴的20％～30％，目前除少数药用外，大多被废弃。因此，开发利用这一生物资源，具有重要的理论意义及实际应用价值。在本发明具体实施例中，石榴皮优选采用新疆种植的石榴品种。本发明应用的石榴皮优选将石榴皮破碎成小块后，再用于榨汁或磨浆。
本发明大芸添加量为0.5～1重量份，进一步的为0.7～0.8重量份。基于大芸的多种功效，其有望开发成为提高性功能、抗老年痴呆、保肝、通便、肿瘤辅助治疗、抗辐射等多种作用的药物，同时可开发成运动员增强体力、抗疲劳和延缓衰劳的保健品。大芸可以药食通用，不仅味道鲜美、独特，且兼具滋补功用。本发明优选将大芸破碎成小块后，再用于榨汁或磨浆。
本发明将红枣、石榴皮和大芸加水后，按照一定料水比进行榨汁或磨浆，得到浆液。本发明对榨汁的设备没有特殊限定，采用市售榨汁机进行榨汁即可。本发明还可以将原料进行磨浆得到浆液。榨汁或磨浆过程中以肉眼不能明显观察到原料块为原则制备浆液。得到的浆液用于复合酶的酶解。将红枣、大芸和石榴皮榨汁或磨浆后得到浆液，有利于增加原料与复合酶的接触面积，使原料与复合酶能够充分接触，酶解过程更加彻底。
本发明将上述得到的浆液用复合酶进行酶解。本发明中的复合酶是指含有果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶的复合酶。本发明对复合酶酶解进行单因素试验和多因素试验，以确定最佳的酶解条件。
复合酶解单因素试验如下：
(1)果胶酶用量：在酶解温度50℃、酶解时间4h、原料:水＝1:3的条件下，采用不同的加酶量(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)提汁，研究加酶量对提汁效果的影响。结果表明：果胶酶添加量为0.3％时酶解液中可溶性固形物含量达到最大值；
(2)纤维素酶用量：在酶解温度50℃、酶解时间4h、原料:水＝1:3的条件下，采用不同的加酶量(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)提汁，研究加酶量对提汁效果的影响。结果表明：纤维素酶添加量为0.4％时酶解液中的可溶性固形物含量达到最大值。
(3)木聚糖酶用量：在酶解温度50℃、酶解时间4h、原料:水＝1:3的条件下，采用不同的加酶量(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％)提汁，研究加酶量对提汁效果的影响。结果表明：木聚糖酶添加量为0.2％时酶解液中的可溶性固形物含量达到最大值。
(4)酶解温度：在酶解时间4h、果胶酶0.3％、纤维素酶0.4％、木聚糖酶0.2％、原料:水＝1:3的条件下，采用不同的酶解温度(30℃、40℃、50℃、60℃)酶解，研究酶解温度对酶解效果的影响。结果表明：酶解温度为50℃时酶解液中可溶性固形物含量达到最大值。
(5)酶解时间：在酶解温度50℃、果胶酶0.3％、纤维素酶0.4％、木聚糖酶0.2％，原料:水＝1:4的条件下，采用不同的酶解时间(1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h)酶解，研究酶解时间对酶解效果的影响。结果表明：酶解时间为4～5小时酶解液中可溶性固形物含量达到最大值；
(6)料液比：在酶解温度50℃、酶解时间4h、果胶酶0.3％、纤维素酶0.4％、木聚糖酶0.2％的条件下，以添加量分别为原料重量2倍、3倍、4倍、5倍、6倍和7倍的水进行酶解试验、研究加水量对酶解效果的影响。结果表明：料液比为1:4～5时酶解液中可溶性固形物含量相对较高，并且酶解液粘稠度较好。
复合酶解正交试验如下：
选用L4(32)正交表进行三因素两水平正交试验，确定优化工艺条件。以可溶性固形物、还原糖及总糖含量为试验指标。
表1复合酶添加量正交试验因素水平表
选用L9(43)正交表进行四因素三水平正交试验，确定优化工艺条件。以可溶性固形物、还原糖及总糖含量为试验指标。(因素水平见表2)
表2复合酶解正交试验因素水平
表3复合酶解正交试验结果
由正交试验表3可知，9组试验中的最优组合为9号试验，即A3B3C2D1，可溶性固形物含量的变化量为2.25％；其次为3号试验A1B3C3D3，可溶性固形物含量的变化量为1.25％。根据极差R的大小，确定影响因素的主次为B>A>D>C，最佳配比为A3B3C2D1，即混合酶的添加量为0.48％，酶解温度为55℃，酶解时间为4h，料液比为1:3。
经过以上试验得出本发明优选的酶解条件：
本发明将红枣、石榴皮和大芸加水进行榨汁或磨浆，得到浆液。所述浆液的料水比为1:3～5，进一步优选为1:3.5～4.5。本发明所述复合酶中，果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶的重量比优选为2～4：3～5：1～3有较好的酶解效果。将所述复合酶与所述浆液混合后进行发酵。在本发明中，所述复合酶的添加量为所述浆液质量的0.2％～0.6％，优选为0.3％～0.5％。本发明的酶解温度为50～60℃，优选为54～58℃。酶解时间为3～4小时，优选为3.2～3.7小时。浆液通过复合酶酶解之后，将浆液中的大分子物质分解为有利于微生物发酵的小分子物质，以提高发酵过程中微生物对发酵液中原料的利用率。
将酶解液用微生物种子液发酵制备发酵液。
本发明中所用的微生物为酵母菌、乳酸菌和醋酸菌，其重量比为0.8～1.2：0.4～0.6：0.4～0.6。其中，所述酵母菌为啤酒酵母、面包酵母和葡萄酒酵母中的一种或多种。本发明对酵母菌的来源没有特殊限定，采用市售酵母菌即可。本发明所述乳酸菌为植物乳杆菌，优选采用从新疆传统民族奶制品—酸***中分离得到的菌株，已保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏编号为CCTCCNo：M2015453。本发明所用的植物乳杆菌的特点是胞外多糖产量很高，其胞外多糖产量高达383.2μg/mL。本发明所述醋酸菌为醋酸杆菌，本发明对醋酸菌的来源没有特殊限定，采用市售产品即可。
本发明制备种子液的过程可以采用本领域的常规方法进行制备。具体地，所述酵母菌用麦芽汁培养基进行培养，所述乳酸菌用MRS培养基进行培养，所述醋酸菌用醋酸菌培养基进行培养。培养温度为25～30℃，优选为26～28℃。将上述菌种进行培养后在菌种生长的对数期再进行扩大培养，制成所述种子液。
将含有酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的种子液按照上述比例混合接入上述制备得到的酶解液中进行发酵。所述种子液中所述酵母菌、所述乳酸菌和所述醋酸菌的总浓度为105～108CFU/mL，进一步优选为106～107CFU/mL；优选种子液的接入质量为所述酶解液重量的2～4％，更优选为2.5～3.5％。本发明中，酶解液的发酵温度为28～32℃，优选为29～31℃；发酵时间为50～60d，进一步优选为54～58d。经微生物发酵后，发酵液中的可溶性固形物含量和总糖含量明显降低，还原糖含量升高，总酸含量为4.9～5.1g/L。
将微生物发酵后得到的发酵液进行浓缩，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。在本发明中，优选在低温真空下进行浓缩，以最大限度的保留酵素中的生物活性。优选的，本发明的低温真空浓缩条件为：真空度为0.08～0.1MPa；温度为40～45℃，进一步为42～44℃。本发明将发酵液在上述低温真空条件下水浴旋转蒸发，至发酵液的体积浓缩至原体积的1/2～1/3，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。本发明的低温真空浓缩工艺，既能提高浓缩效率又能节能，还最大程度的保存了益生菌的活性。
本发明还包括由上述方法制备得到的红枣大芸石榴皮复合酵素。该酵素兼具三种原材料的保健功能，并且在经过复合酶解和微生物发酵之后，将大分子成分转变成小分子活性成分，具有较好的抗氧化防衰老、增强机体免疫力、抑癌防癌、增强体力抗疲劳、补肾阳益经血等多重保健功效。
下面结合实施例对本发明进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将6kg新鲜红枣用流动水清洗，除去粘着的泥土等杂质，将红枣放入水中，加热温度为100℃对红枣进行预煮16min，将预煮后的红枣去核。将2kg石榴皮和0.5kg大芸粉粹成小块后，与去核的红枣一起倒入榨汁机中加水按照料水比为1:4进行打浆，至肉眼不能看出明显的果肉块为止，得到浆液。
将果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶按照质量比为2:3:1进行混合得到复合酶。在浆液中添加浆液质量0.31％的复合酶，在50℃下酶解4小时得到酶解液。
将酵母菌、乳酸菌和醋酸菌分别接种于培养基中，在26℃下进行培养，再扩大培养制成种子液。将酶解液在115℃下灭菌15min后，接入酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的重量比为0.8：0.4：0.4的种子液，种子液中酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的总浓度为108CFU/mL，种子液接入量为所述酶解液重量的2％，在28℃下发酵60d，得到发酵液。
将发酵液在真空度0.1MPa、温度40℃下水浴旋转，蒸发至发酵液原体积的1/2-1/3，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
实施例2
将8kg新鲜红枣用流动水清洗，除去粘着的泥土等杂质，将红枣放入水中，加热温度为100℃对红枣进行预煮20min，将预煮后的红枣去核。将3kg石榴皮和1kg大芸粉粹成小块后，与去核的红枣一起倒入榨汁机中加水按照料水比为1:5进行打浆，至肉眼不能看出明显的果肉块为止，得到浆液。
将果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶按照质量比为4:5:3进行混合得到复合酶。在浆液中添加浆液质量0.37％的复合酶，在60℃下酶解4小时得到酶解液。
将酵母菌、乳酸菌和醋酸菌分别接种于培养基中，在28℃下进行培养，再扩大培养制成种子液。将酶解液在115℃下灭菌15min后，接入酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的重量比为1.2：0.6：0.5的种子液，种子液中酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的总浓度为107CFU/mL，种子液接入量为所述酶解液重量的4％，在32℃下发酵50d，得到发酵液。
将发酵液在真空度0.08MPa、温度45℃下水浴旋转，蒸发至发酵液原体积的1/2-1/3，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
实施例3
将7kg新鲜红枣用流动水清洗，除去粘着的泥土等杂质，将红枣放入水中，加热温度为100℃对红枣进行预煮14min，将预煮后的红枣去核。将2kg石榴皮和0.6kg大芸粉粹成小块后，与去核的红枣一起倒入榨汁机中加水按照料水比为1:3进行打浆，至肉眼不能看出明显的果肉块为止，得到浆液。
将果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶按照质量比为3:4:2进行混合得到复合酶。在浆液中添加浆液质量0.48％的复合酶，在55℃下酶解4小时得到酶解液。
将酵母菌、乳酸菌和醋酸菌分别接种于培养基中，在30℃下进行培养，再扩大培养制成种子液。将酶解液在115℃下灭菌15min后，接入酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的重量比为1.0：0.5：0.4的种子液，种子液中酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的总浓度为106CFU/mL，种子液接入量为所述酶解液重量的3％，在30℃下发酵55d，得到发酵液。
将发酵液在真空度0.09MPa、温度42℃下水浴旋转，蒸发至发酵液原体积的1/2-1/3，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种红枣大芸石榴皮复合酵素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将6～8重量份红枣、2～3重量份石榴皮和0.5～1重量份大芸加水按照料水比为1:3～5进行榨汁或磨浆，得到浆液；
(2)以果胶酶、纤维素酶和木聚糖酶作为复合酶，与步骤(1)所述浆液混合，在50～60℃下酶解3～4小时得到酶解液；
所述复合酶的添加质量为所述浆液质量的0.2％～0.6％；
(3)以酵母菌、乳酸菌和醋酸菌用作种子液，接入步骤(2)所述酶解液中，接入质量为所述酶解液重量的2～4％，在28～32℃下发酵50～60d，得到发酵液；所述种子液中所述酵母菌、所述乳酸菌和所述醋酸菌的总浓度为105～108CFU/mL；
(4)将步骤(3)所述发酵液浓缩，得到红枣大芸石榴皮复合酵素；
所述酵母菌、乳酸菌和醋酸菌的重量比为0.8～1.2：0.4～0.6：0.4～0.6；
所述乳酸菌为植物乳杆菌，保藏编号为CCTCCNo：M2015453；
所述酵母菌为啤酒酵母、面包酵母和葡萄酒酵母中的一种或多种；
所述果胶酶、所述纤维素酶和所述木聚糖酶的重量比为2～4：3～5：1～3。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述浓缩为：将步骤(3)所述发酵液在真空度0.05～0.1MPa、温度40～45℃下低温真空浓缩。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述浓缩在水浴中旋转进行，将所述发酵液蒸发至原体积的1/2～1/3，得到红枣大芸石榴皮复合酵素。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述红枣在使用前进行预煮和去核。
5.根据权利要求1～4任意一项所述方法制备得到的红枣大芸石榴皮复合酵素。
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