CN106885905A

CN106885905A - 一种具有优越检测线和分析灵敏度的尿素检测试剂及检测方法

Info

Publication number: CN106885905A
Application number: CN201510942729.5A
Authority: CN
Inventors: 甘宜梧; 史秀明; 谭柏清
Original assignee: Biobase Biodustry Shandong Co Ltd
Current assignee: Biobase Biodustry Shandong Co Ltd
Priority date: 2015-12-16
Filing date: 2015-12-16
Publication date: 2017-06-23

Abstract

本发明涉及UREA检测技术领域，特别涉及一种UREA检测试剂，试剂R1中含有三羟甲基氨基甲烷缓冲液，NADPH，防腐剂；试剂R2中含有三羟甲基氨基甲烷缓冲液，脲酶，谷氨酸脱氢酶，α-酮戊二酸，XOD，POD，防腐剂。改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性，并且自身性能良好，大大增强了试剂的稳定性，符合相关临床应用要求。

Description

一种具有优越检测线和分析灵敏度的尿素检测试剂及检测方法

技术领域

本发明涉及尿素检测技术领域，特别涉及一种具有优越检测线和分析灵敏度的尿素检测试剂，还涉及使用此检测试剂的检测方法。

背景技术

尿素（UREA）是人体蛋白质代谢的终末产物。体内氨基酸经脱氨基作用分解成α-酮酸和NH₃，NH₃在肝细胞内进入尿素循环与CO₂生成尿素。尿素的生成量取决于饮食蛋白质摄入量、组织蛋白质的分解代谢和肝功能状况。生成的尿素经血液循环主要由肾脏排出。经唾液、胃液、胆汁及肠液排至消化道内的尿素，绝大部分分解成NH₃吸收后又经肝脏合成尿素仍从肾脏***。血浆中的尿素可全部从肾小球滤过，正常情况下约30%~40%被肾小球重吸收，肾小球亦可少量排泌尿素。血浆尿素浓度在一定程度上可反映肾小球的滤过功能，此外，肾外因素如组织分解代谢加快、消化道出血、摄食过多蛋白质等都可引起血浆尿素浓度升高，因而血浆尿素浓度测定亦不是肾功能损伤的特异指标。尽管如此，因为尿素是由肾脏***的低分子含氮废物的主要成分，血浆尿素浓度对慢性肾脏疾病的病程、病情观察及预后判断均有意义，且血浆尿素测定方法比较简单，所以血浆尿素测定仍是目前肾脏疾病的主要检查项目之一。

目前，文献报道的尿素活性的测定方法有尿素酶法、酚-次氯酸盐显色法、纳氏试剂显色法、二乙酰一肟法等。这些方法准确性差、灵敏度低、仪器设备要求高、试剂成本高，难于全面推广应用。

鉴于此，本发明对现有酶法尿素检测试剂进行了改良，并对其性能指标进行了评估。改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性，并且自身性能良好，符合相关临床应用要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测UREA的试剂及使用该试剂检测UREA含量的方法。该试剂盒采用脲酶-谷氨酸脱氢酶法，可以有效检测UREA的含量，抗干扰能力强，稳定性好等优点。

基本原理：尿素在脲酶作用下，生成NH4+和HCO3－，

脲酶

尿素 + H2O 2NH4+ + 2HCO3－

NH4 ⁺及α-酮戊二酸、还原型辅酶Ⅰ在谷氨酸脱氢酶催化下，生成L-谷氨酸和NAD⁺

谷氨酸脱氢酶

α-酮戊二酸 +NH4 + +NADH L-谷氨酸 + NAD + + H2O

通过测定NADH在340nm波长处吸光度的变化速率（ΔA/min）可测得UREA活性。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种UREA检酸测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

1）试剂R1的组分为：

缓冲液（pH值9.1)_{··········································}100mmol/L

NADPH_{····················································}0.3mmol/L

2）试剂R2的组分为：

缓冲液（pH值7.6）_{··········································}100mmol/L

脲酶_{·····················································}40KU/L

谷氨酸脱氢酶_{·············································}2KU/L

α-酮戊二酸_{···············································}30mmol/L

防腐剂_{···················································}0.8g/L；

以上试剂均用三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液。

以上UREA检测试剂，所述防腐剂为NaN3。

所述的UREA检测试剂来检测UREA的检测方法，使用全自动生化分析仪利用速率法进行测定，检测主波长为340nm。

所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为4:1。

本发明的有益效果：

1）采用新的缓冲体系和稳定剂，显著改善了试剂的稳定性；

2）改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性，并且自身性能良好，符合相关临床应用要求。

附图说明

图1为两种试剂的相关性曲线图，

图2为两种试剂效期稳定性曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

UREA的检测试剂，包试剂R1和试剂R2：

1）试剂R1的组分为：

缓冲液（pH值9.1)_{···············································}100mmol/L

NADPH_{·························································}0.3mmol/L

2）试剂R2的组分为：

缓冲液（pH值7.6）_{···············································}100mmol/L

脲酶_{··························································}40KU/L

谷氨酸脱氢酶_{··················································}2KU/L

α-酮戊二酸_{····················································}30mmol/L

防腐剂_{························································}0.8g/L；

3）本实施例试剂的使用方法：

本实施例描述的UREA检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用速率法进行测定。将R1和R2按照4:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1：

表1 实施例1试剂检测方法

计算：UREA含量（mmol/L）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准。

实施例2

干扰性试验：取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的UREA试剂同时对比测定血清中UREA的含量，对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差（%）=（干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值）/对照样本的测定均值×100%。

由表2可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸≤1704μmol/L、胆红素≤684μmol/L、血红蛋白≤5 g/L、甘油三酯≤22.6 mmol/L对测试结果没有明显干扰。而对照组试剂在上述浓度干扰物质存在时，受到明显干扰，这说明实施例1试剂的抗干扰性能远远优于对比试剂。

表2实施例试剂抗干扰性能比较

实施例3

相关性实验：利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的UREA试剂盒进行对照检测，同时检测了20个临床血清样本，检测结果如表3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线（如图1所示），通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为0.9974，说明了两者有极大的相关性。

表3实施例1试剂与市场常见并得到认可的UREA测定试剂盒对比检测结果

实施例4

试剂的稳定性对比试验：对实施例1中的试剂，均匀分装13组，每组的试剂量为R1为40mL，R2为10mL；并且取13组市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的UREA试剂盒作对照。放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一组试剂检测UREA质控品，检测结果如图2所示，实施例1试剂在2-8℃储存条件下比市场常见的UREA测定试剂盒更加稳定。

通过验证，本试剂与同类检测试剂对比相关性好，临床检测样本结果一致，能够达到市场对产品的应用要求，并且抗干扰性能好，是一种更加稳定、良好的UREA检测试剂。

Claims

1.一种UREA检测试剂，其特征在于包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

1）试剂R1的组分为：

缓冲液_{··························································}100mmol/L

NADPH_{···························································}0.3mmol/L

2）试剂R2的组分为：

脲酶_{····························································}40KU/L

谷氨酸脱氢酶_{····················································}2KU/L

α-酮戊二酸_{······················································}30mmol/L

防腐剂_{··························································}0.8g/L_·。

2.根据权利要求1所述的UREA检测试剂，其特征在于试剂R1中缓冲液为25℃，pH为9.1的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

3.根据权利要求1所述的UREA检测试剂，其特征在于试剂R2中缓冲液为25℃，pH为7.6的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

4.根据权利要求1所述的UREA检测试剂，其特征在于所述防腐剂为NaN₃。

5.一种使用权利要求1-4中任一项所述检测UREA的检测方法，其特征在于使用全自动生化分析仪利用速率法进行测定，检测主波长为340nm。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于R1试剂和R2试剂的比例为4:1。