CN106883991A - 一株球孢白僵菌及其在防治作物虫害中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于害虫生物防治技术领域，涉及一种球孢白僵菌及其在防治作物虫害中的应用。该球孢白僵菌菌株为球孢白僵菌（Beaueria bassaria）RBBA1209，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏号为CCMCC No.8461。该球孢白僵菌菌株可用于防治刺吸式害虫粉虱、蚜虫，可在无公害和绿色食品蔬菜生产温室中使用。
Description
技术领域
本发明属害虫生物防治技术领域，涉及一株球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株及其在防治刺吸式害虫粉虱、蚜虫上的应用。
背景技术
随着生活水平的不断提高，人们对食品质量的要求也越来越高，对食品安全和环境污染问题也越来越关注，无公害食品和绿色食品生产应运而生。农产品安全问题往往是国际贸易壁垒中的筹码，绿色植保也倍受关注。保护地刺吸式害虫粉虱、蚜虫繁殖力强，易对化学药剂产生抗药性，迫切需要发展绿色防控措施来替代或减少化学农药的使用。球孢白僵菌是一种昆虫病原真菌，分布广泛，可以用于防治蛴螬、小地老虎、粉虱、蚜虫、蓟马、叶甲、棉铃虫、玉米螟、天牛等害虫，其中著名的应用是防治蛴螬、玉米螟、松毛虫、茶小绿叶蝉，具有很好的应用效果。球孢白僵菌作为一种活体生物农药，具有不同于化学杀虫剂的全新的作用机理、对环境友好的特征，可以作为防治某些对化学杀虫剂产生抗药性的害虫的替代防治药物，开发利用球孢白僵菌具有重要的经济意义。科学研究表明，不同地理种群或不同株系的球孢白僵菌对害虫的毒力存在较大的差异，即使同一株系的球孢白僵菌对不同种类害虫的毒力也不相同，因此在应用真菌进行生物防治的过程中针对不同种类的害虫经常要筛选高毒力菌株。本发明针对这一农业生产的重要需求而研发，发现一株与以往菌株不同的高效生防菌株，测定了了该菌株的特征和生物学特性，建立了该菌株的防治应用技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一株对环境友好、对刺吸式害虫粉虱、蚜虫高效寄生的球孢白僵菌菌株。
本发明的再一个目的在于提供球孢白僵菌在作物病虫防治上的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明首先提供了一株球孢白僵菌。所述的球孢白僵菌菌株RBBA1209，白僵菌属，分离于河北廊坊地区被侵染的烟粉虱虫体上，菌株保藏号为CCMCC No.8461，2013年11月11日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。
所述的球孢白僵菌菌株形态特征：
菌落背面无色至淡黄色，分生孢子梗多着生在营养菌丝上，粗1.2～2.1µm，产孢细胞浓密簇生于菌丝、分生孢子梗或膨大的泡囊上，球形至瓶形，颈部明显延长成粗1.1µm、长达2.2µm的产孢轴，轴上有小齿突，呈膝状弯曲。产孢细胞和泡囊在分生孢子梗或菌丝上聚成球形至卵形的孢子头，分生孢子球形或近球形，透明，光滑，2.1～3.1×2～2.6µm。
所述的球孢白僵菌菌株的培养特性：
在基础培养基（氯化钾0.50g， 七水硫酸亚铁0.01g， 磷酸氢二钾1.0g，七水硫酸镁0.50g，硝酸钠2g，蔗糖30g，琼脂15g，水1000ml，pH自然）的基础上，用等当量的不同的碳源取代基础培养基中的碳源。不同碳源上的菌丝生长和产孢量的结果显示，球孢白僵菌菌株RBBA1209菌丝生长偏好蔗糖，第14天时在蔗糖培养基上菌落直径为5.69cm（见表1）；产孢也偏好蔗糖，第14天时在蔗糖上产孢量为 13.96×109个孢子/ml（见表2）。
表1 不同碳源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的菌落生长特征
| 碳源 | 第6天 | 第8天 | 第10天 | 第12天 | 第14天 |
| 葡萄糖 | 1.21±0.05 | 1.84±0.04 | 2.62±0.04 | 3.01±0.02 | 3.37±0.15 |
| 麦芽糖 | 1.22±0.06 | 2.14±0.06 | 3.17±0.01 | 4.08±0.04 | 5.03±0.09 |
| 蔗糖 | 1.62±0.01 | 2.79±0.0 | 3.63±0.03 | 4.39±0.05 | 5.69±0.09 |
| 可溶性淀粉 | 1.32±0.01 | 1.98±0.05 | 2.74±0.08 | 3.53±0.08 | 4.21±0.12 |
| 乳糖 | 1.24±0.05 | 1.94±0.05 | 2.86±0.04 | 3.72±0.02 | 4.62±0.03 |
| 甘油 | 1.21±0.02 | 1.93±0.02 | 2.82±0.04 | 3.56±0.04 | 4.32±0.03 |
注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）
表2 不同碳源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的产孢特征
| 碳源种类 | |
| 葡萄糖 | 5.26±0.29 |
| 麦芽糖 | 4.88±0.75 |
| 蔗糖 | 13.96±0.25 |
| 可溶性淀粉 | 2.08±0.34 |
| 乳糖 | 3.98±0.82 |
| 甘油 | 2.64±0.26 |
注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）
用麦芽糖替代基础培养基中的蔗糖，以等当量的5种氮源[蛋白胨、硝酸钾、硫酸铵、脲（尿素）和酵母浸粉]分别替代基础培养基中的硝酸钠（以硝酸钠作对照）。不同氮源上的菌丝生长和产孢量的结果显示，球孢白僵菌菌株RBBA1209菌丝生长偏好酵母浸粉，第14天时在酵母浸粉培养基上的菌落直径为5.29cm（见表3）；产孢偏好蛋白胨，第14天时在蛋白胨培养基上产孢量为51.20 ×108个孢子/ml（见表4）。
表3 不同氮源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的菌落生长特征
| 氮源 | 第6天 | 第8天 | 第10天 | 第12天 | 第14天 |
| 硝酸钾 | 1.32±0.03 | 2.07±0.05 | 2.84±0.06 | 3.67±0.05 | 4.33±0.10 |
| 硫酸铵 | 1.42±0.07 | 1.91±0.06 | 2.15±0.08 | 2.35±0.10 | 2.50±0.13 |
| 蛋白胨 | 1.64±0.02 | 2.43±0.05 | 3.36±0.01 | 4.24±0.03 | 4.98±0.05 |
| 酵母浸粉 | 1.95±0.04 | 2.82±0.07 | 3.79±0.10 | 4.61±0.15 | 5.29±0.19 |
| 脲 | 1.51±0.05 | 2.21±0.04 | 3.05±0.05 | 3.82±0.06 | 4.51±0.07 |
| 硝酸钠 | 1.36±0.06 | 1.71±0.06 | 2.08±0.07 | 2.90±0.08 | 3.66±0.04 |
注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）
表4 不同氮源上球孢白僵菌菌株RBBA1209的产孢特征
| 碳源种类 | |
| 硝酸钾 | 15.72±2.25 |
| 硫酸铵 | 7.28±0.83 |
| 蛋白胨 | 51.20±3.35 |
| 酵母浸粉 | 11.04±1.73 |
| 脲 | 19.68±1.27 |
| 硝酸钠 | 10.08±0.83 |
注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）
在改良的PDA培养基(马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，琼脂20g/L，加蒸馏水定容1000ml)上，不同温度下的菌丝生长和产孢量的结果显示，球孢白僵菌菌株RBBA1209菌落生长最适温度为27℃，在此温度下第14天时的菌落生长直径为5.21cm（见表5）；产孢最适温度也是27℃，在此温度下第14天时的产孢量为115.46×106个孢子/ml（见表6）。
表5 不同温度下球孢白僵菌菌株RBBA1209的菌落生长特征
| 温度（℃） | 第6天 | 第8天 | 第10天 | 第12天 | 第14天 |
| 15 | 0.27±0.02 | 0.63±0.02 | 1.05±0.01 | 1.39±0.01 | 1.72±0.01 |
| 19 | 0.56±0.05 | 1.07±0.04 | 1.62±0.02 | 2.07±0.02 | 2.55±0.04 |
| 23 | 0.98±0.02 | 1.38±0.03 | 2.00±0.07 | 2.48±0.11 | 2.92±0.14 |
| 27 | 1.79±0.08 | 2.45±0.12 | 3.00±0.23 | 3.99±0.40 | 5.21±0.61 |
| 29 | 1.02±0.09 | 2.10±0.12 | 3.00±0.29 | 3.57±0.44 | 4.04±0.48 |
| 31 | 1.10±0.01 | 1.93±0.01 | 2.80±0.03 | 3.81±0.02 | 3.81±0.02 |
注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）
表6 不同温度下球孢白僵菌菌株RBBA1209的产孢特征
| 温度（℃） | |
| 15 | 11.79±6.65 |
| 19 | 18.73±1.91 |
| 23 | 56.16±39.29 |
| 27 | 115.46±29.72 |
| 29 | 106.88±24.83 |
| 31 | 97.46±21.00 |
注：表中数据为3次重复的平均值±标准误（S.E）
所述球孢白僵菌菌株在防治刺吸式害虫粉虱、蚜虫上的应用：
球孢白僵菌菌株产生的分生孢子，对温室害虫粉虱、蚜虫具有高侵染能力，孢子能附着在昆虫的表皮，并萌发产生芽管，菌株借助芽管从昆虫的节间膜侵入，继而消化和破坏昆虫的组织，杀死昆虫。菌株孢子的应用制剂，可配制成10%球孢白僵菌可湿性粉剂进行植物叶面喷雾杀虫，其配方组成含量比例（重量比）为：球孢白僵菌纯孢粉（200亿孢子/克）10%，葡萄糖（粉末）2%、木质素磺酸钠1%、淀粉3%，分散剂BD55 3%、洗衣粉3%、高岭土补至100%。田间应用时将该制剂加水稀释2000倍，其悬浮液中蜡蚧轮枝菌孢子的浓度为106个/ml，使用大容量喷雾器均匀喷洒在有害虫（粉虱、蚜虫）的植物表面，在相对湿度85%的温室环境中，对白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）、棉蚜（Aphis gossypii）7天的累计防治效果分别达到98.7%和99.6%，可有效控制害虫种群，可用于无公害蔬菜和绿色食品蔬菜的生产温室。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：
本发明使用的菌株是从河北廊坊地区被侵染的烟粉虱虫体上分离获得，为中国本土的菌株，能很好地适应本地的自然环境。本专利中的球孢白僵菌RBBA1209是从众多同类菌株中筛选出来，专门用于防治粉虱等害虫的球孢白僵菌优势菌株，具有毒力强、杀虫速度快、对环境友好特点。本发明适应了有机食品生产的需求，对粉虱、蚜虫等害虫有特殊的防治效果。
具体实施方式
发明人通过大量的室内筛选和田间试验，发现球孢白僵菌对粉虱、蚜虫等害虫具有良好防控效果。为了更好的理解发明的实质，下面结合实例对本发明的技术内容作详细的说明，但本发明的内容并不局限如此，不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。
实施例1：真菌孢子的大量培养
将球孢白僵菌菌株的菌种在25℃的摇瓶中培养48 h~72 h，将其作为种子，按8%的体积量接到玉米粉与稻壳组成的固体培养上，25℃无菌袋内培养7天，开袋培养2天。培养结束后，35℃的烘房中烘干2天，粉碎烘干的培养物，过筛（250目、320目、400目），即可得到纯孢粉（含孢子95%）。这种纯孢粉可用于配制田间应用的制剂，用于防治温室害虫。
实施例2：防治温室蔬菜上的白粉虱
将生产所得到的纯孢粉，按：球孢白僵菌纯孢粉（200亿孢子/克）10%，葡萄糖（粉末）2%、木质素磺酸钠1%、淀粉3%，分散剂BD55 3%、洗衣粉3%、高岭土补至100%，混合后制得10%球孢白僵菌可湿性粉剂。混配制剂加水2000倍稀释，喷雾防治温室黄瓜上的白粉虱（Trialeurodes vaporariorum），当温室室内温度为26℃，相对湿度85%时，7天的累计防治效果可达到98.7%。
实例3：防治温室蔬菜上的棉蚜
将生产所得到的纯孢粉，按：球孢白僵菌纯孢粉（200亿孢子/克）10%，葡萄糖（粉末）2%、木质素磺酸钠1%、淀粉3%，分散剂BD55 3%、洗衣粉3%、高岭土补至100%，混合后制得10%球孢白僵菌可湿性粉剂。混配制剂加水2000倍稀释，喷雾防治温室黄瓜上的棉蚜（Aphis gossypii），当温室室内温度为26℃，相对湿度85%时，7天的累计防治效果可达到99.6%。
Claims (2)
1.一种球孢白僵菌，其特征在为球孢白僵菌（Beaueria bassaria）RBBA1209，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏号为CCMCC No.8461。
2.权利要求1所述的一种球孢白僵菌菌株在防治刺吸式害虫粉虱、蚜虫中的应用。
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