CN106501420A - 一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用 - Google Patents
一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106501420A CN106501420A CN201610874160.8A CN201610874160A CN106501420A CN 106501420 A CN106501420 A CN 106501420A CN 201610874160 A CN201610874160 A CN 201610874160A CN 106501420 A CN106501420 A CN 106501420A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- neophytadiene
- sample
- extraction
- purification
- tobacco
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- NIDGCIPAMWNKOA-UHFFFAOYSA-N neophytadiene Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(=C)C=C NIDGCIPAMWNKOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- NIDGCIPAMWNKOA-WOJBJXKFSA-N Neophytadiene Natural products [C@H](CCC[C@@H](CCCC(C)C)C)(CCCC(C=C)=C)C NIDGCIPAMWNKOA-WOJBJXKFSA-N 0.000 title claims abstract description 71
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 title claims abstract description 49
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 69
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 24
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 23
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 19
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 9
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 9
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 abstract description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 9
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001707 (E,7R,11R)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-en-1-ol Substances 0.000 description 4
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N Phytol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C=CO BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofarnesol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)=CCO HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N all-rac-phytol Natural products CC(C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)=CCO BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N 0.000 description 4
- 239000003546 flue gas Substances 0.000 description 4
- BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N phytol Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCC\C(C)=C\CO BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical class ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 2
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 2
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 2
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 108010025790 chlorophyllase Proteins 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- QDOXWKRWXJOMAK-UHFFFAOYSA-N dichromium trioxide Chemical compound O=[Cr]O[Cr]=O QDOXWKRWXJOMAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 150000002240 furans Chemical class 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- -1 plant furans etc. Chemical class 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000012855 volatile organic compound Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本发明公开了一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用。所述提取纯化方法：向烟草样品中加入分析纯二氯甲烷，超声提取，滤纸过滤，取一定量粗提液过硅胶柱进行初步的分离纯化，用石油醚洗脱，将洗脱液浓缩，用制备色谱进一步纯化、浓缩，并用色谱纯二氯甲烷反提得到新植二烯样品。本方法以初烤烟叶为原料直接进行提取，取材方便、廉价易得。与化学合成相比，本方法步骤少、操作简单，经分析检测，本发明制备得到的新植二烯纯度高达99.42％，远高于市面所售新植二烯纯度，且不含新植二烯二聚体，因此作为标准物质进行烟草香气物质及其前体物的定量分析时更为准确。
Description
技术领域
本发明属于烟草技术领域，涉及烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用。
背景技术
标准物质(Reference Material,RM),是一种已经充分地确定了其一种或几种特性，用于校准测量器具，评价测量方法或确定材料特性量值的物质。标准物质已成为分析中传递准确度的基准物质和实验室分析质量控制的重要工具，是量值溯源的重要手段，保证了不同时间与空间测量结果的可比性、一致性。
目前，烟草中绝大部分香气物质及其前体物的定量分析基本能全部实现，但仍有少部分香气物质没有标准物质或标准物质价格昂贵使常规检测分析难以承受(如新植二烯)，在进行分析时只能采取半定量模式，制约了烟草中香气物质研究的深入开展。
新植二烯是一种聚类异戊二烯，具20个碳原子，结构为3-亚甲基-7，11，15-三甲基-1-十六烯，在一个标准大气压下，沸点为344.5±9.0℃，为半挥发性有机化合物。它是由美国学者R.L.Rowland在1957年首次从烤烟中分离出来，并将其命名为新植二烯。后来日本学者I.Onishi和美国学者R.N.GLADDING从白肋烟和卷烟烟气中分离得到新植二烯。
新植二烯是烟草中的非色素类萜烯，占烟叶鲜重的0.06％～0.10％。它是烤烟叶绿素降解的产物之一，在成熟和烘烤中，烟叶叶绿素在叶绿素酶的作用下降解产生植醇，约15％～30％的植醇再脱水，便形成新植二烯。新植二烯自身具有清香气且刺激性较强，而叶绿素和叶绿醇则具有青杂气，在调制过程中随着叶绿素和叶绿醇大量转化成新植二烯，烟叶的青杂气消除，进而产生清香气。新植二烯在烟草挥发物性香味物质中含量最高，是烟叶中重要的致香物质。新植二稀还可在醇化过程中发生降解反应生成具有清醇香味的小分子化合物，如植物呋喃等，这些化合物对烤烟清香气的产生具有积极的作用，从而进一步增加了烟叶香气和吃味。另外，新植二烯在烟草燃烧时可直接进入烟气，具有减少刺激性、醇和烟气的作用，同时还可以作为捕集烟气气溶胶内香气成分的载体，具有携带烟叶中挥发性香气成分物质进入烟气的能力，因而是烟叶的重要增香剂。
烟叶中新植二烯含量的高低是遗传因素、生态环境和栽培措施共同作用的结果。叶片中新植二烯的含量在基因型和烟叶各部位间存在着较大的差异，不仅与地区、海拔、光照等生态环境因素密切相关，还受到施肥等一系列栽培措施的影响。
新植二烯含量与烟草香型风格也有密切的关系，研究表明清香型烤烟的新植二烯含量显著高于浓香及中间香型的烤烟。它对提高对改善烟草香气品质、合理利用烟叶原料具有重要的意义，因此对烟叶中新植二烯的含量进行准确测定很有必要。目前烟草及烟草制品中新植二烯检测所用到的新植二烯的标准品是化工合成的，价格高昂，而且化工合成的新植二烯是一种单体及二聚体的混合物，而实际上烟草中的新植二烯是以单体形式存在的，因此使用化工合成的新植二烯作为标准物质在测量时并不准确。
发明内容
基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种烟草中新植二烯的提取纯化方法，解决新植二烯标准品价格昂贵，进口标物订购时间长等问题，为萜类香味物质的分离纯化提供依据，有利于烟草中香气物质及前体物质的定量分析，进而促进烟草中香味物质的研究。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
首先，本发明公开了一种烟草中新植二烯的提取纯化方法，所述提取纯化方法包括如下步骤：
(1)向烟草样品中加入卤化烃类有机溶剂进行超声处理，超声处理期间间隔震荡若干次，过滤得粗提液；
(2)将步骤(1)得到的粗提液进行旋蒸浓缩处理，加入卤化烃类有机溶剂溶解将样品转移至硅胶上进行拌样处理，然后再转移至硅胶柱中进行上样处理；
(3)使用洗脱剂进行洗脱处理，收集洗脱液；
(4)将步骤(3)得到的洗脱液旋蒸浓缩近干，使用醇类有机溶剂溶解后过有机相滤膜并用制备色谱进一步纯化；
(5)将步骤(4)制备色谱分离纯化后的溶液旋蒸浓缩并用卤化烃类有机溶剂反提除水得新植二烯样品。
优选的，所述步骤(1)中，烟草样品与卤化烃类有机溶剂的质量体积比为1g：8-10ml，进一步优选的，所述烟草样品与卤化烃类有机溶剂的质量体积比为1g：10ml；所述卤化烃类有机溶剂为分析纯二氯甲烷；
优选的，所述步骤(1)中，超声处理条件为：超声频率为18-20KHz，超声处理时间共计0.5-1h，超声处理期间每隔10min震荡一次；
优选的，所述步骤(2)中，旋蒸处理温度为30-35℃，卤化烃类有机溶剂为分析纯二氯甲烷；拌样处理中的硅胶目数为100-200目；所述样品净含量与所述硅胶的质量比为1:1；所述硅胶柱目数为100-200目；所述硅胶柱中硅胶目数为200-300目；
优选的，所述步骤(3)中，洗脱剂为石油醚；洗脱处理具体为：第一个柱体积洗脱液舍弃(洗脱液可用于下一次的洗脱，重新富集新植二烯)，收集后两个柱体积洗脱液；
优选的，所述步骤(4)中，旋蒸处理温度为30-35℃；醇类有机溶剂为色谱纯甲醇；有机相滤膜规格为0.45μm有机相滤膜；
优选的，所述步骤(4)中，制备色谱进一步纯化所采用的条件为：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％甲酸；0min,A:B＝90：10；6min，A:B＝98：2；9min，A:B＝90：10；12min，A:B＝90：10；进样量为2mL，扫描波长220-260nm，收集4.2min-5.4min之间的组分。
优选的，所述步骤(5)中，旋蒸处理温度为30-35℃，卤化烃类有机溶剂为色谱纯二氯甲烷。
本发明还公开了一种由上述提取纯化方法制备得到的新植二烯。
此外，本发明公开了一种上述新植二烯的检测方法，所述方法采用气相色谱分析检测，检测条件为：色谱柱DB-5弹性毛细管色谱柱，规格为30m×0.25mm×0.25μm；火焰离子化检测器(FID)；进样口：250℃；初始温度80℃，保持0min，以20℃/min速率升至300℃，保持15min，以2℃速率升至310℃，保持15min，总运行时间为46min。
最后，本发明公开了上述新植二烯作为标准物质在烟草香气物质及其前体物的定量分析中的应用。
本发明的有益效果：
(1)初烤烟叶中新植二烯含量丰富，本方法以初烤烟叶为原料直接进行提取，取材方便、廉价易得。
(2)与化学合成相比，本方法步骤少、操作简单、成本低，仅使用一步超声萃取、硅胶柱初步分离纯化后经反相制备色谱即可得到纯度极高的新植二烯样品，经分析检测，本发明制备得到的新植二烯纯度高达99.42％。
(3)本方法制得的新植二烯纯度远高于市面所售新植二烯纯度，且不含新植二烯二聚体，因此作为标准物质进行烟草香气物质及其前体物的定量分析时更为准确。
附图说明
图1为新植二烯标准品(200μg/mL)气相色谱图；
图2为新植二烯粗提物气相色谱图；
图3为新植二烯凝胶柱分离纯化气相色谱图；
图4为新植二烯纯化制备后气相色谱图。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实施例1
1、仪器与试剂：
美国安捷伦6890N气相色谱仪；美国Waters Prep150制备色谱；旋转蒸发仪(瑞士步琦公司)；氮吹仪；BS214S分析天平(德国Sartorius公司)；玻璃柱(40×650mm)。
分析纯二氯甲烷(国药)；分析纯石油醚(60-90℃，国药)；色谱纯二氯甲烷(德国默克)；色谱纯甲醇(德国默克)；蒸馏水，符合GB/T6682中一级水的要求。
2、样品提取及初步分离：
(1)新植二烯提取：称20g的烟末于300mL的锥形瓶中，加入200mL分析纯二氯甲烷，封口膜封口，超声频率为18kHz，超声30min，期间每隔10min震荡一次，滤纸过滤于250mL平底烧瓶中得新植二烯粗提物。
(2)硅胶柱装柱：柱子清洗烘干备用，柱子底部用少量棉花塞住，松紧适度，后用铁架台固定并与水平面垂直，于1000mL烧杯中加入150g的300目的硅胶，用石油醚调成匀浆，注入柱子，并用洗耳球轻轻敲打柱身，沉降约2h，待用。
(3)拌样：将步骤1得到的粗提液在35℃水浴的旋转蒸发仪中浓缩近干，分三次依次加入2mL分析纯的二氯甲烷，将样品完全转移到与其净重1:1的100目硅胶上，并充分搅拌挥干，待用。
(4)上样：将步骤3拌好的样品通过漏斗加入步骤(2)的柱子中沉降，并用石油醚将研钵和漏斗冲洗干净，使样品全部转移到柱子中。
(5)洗脱：将步骤4上样后的柱子中加入适量的棉花保护样品面，然后用石油醚进行洗脱，其中第一个柱体积洗脱液舍弃(洗脱液可用于下一次的洗脱，重新富集新植二烯)，收集并合并后两个柱体积洗脱液。
3、制备色谱的进一步纯化：
(1)将上述步骤(5)的洗脱液在35℃旋蒸浓缩近干，用色谱纯甲醇进行溶解，过0.45μm有机相滤膜，用制备色谱进一步纯化(制备色谱进一步纯化所采用的条件为：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％甲酸；0min,A:B＝90：10；6min，A:B＝98：2；9min，A:B＝90：10；12min，A:B＝90：10；)，进样量为2mL，扫描波长220-260nm，收集4.2min-5.4min之间的组分。
(2)将步骤(1)制备色谱所分离纯化的样品35℃水浴的旋转蒸发仪中浓缩，经色谱纯二氯甲烷反提除水后得新植二烯样品。
实施例2
1、仪器与试剂：
美国安捷伦6890N气相色谱仪；美国Waters Prep150制备色谱；旋转蒸发仪(瑞士步琦公司)；氮吹仪；BS214S分析天平(德国Sartorius公司)；玻璃柱(40×650mm)。
分析纯二氯甲烷(国药)；分析纯石油醚(60-90℃，国药)；色谱纯二氯甲烷(德国默克)；色谱纯甲醇(德国默克)；蒸馏水，符合GB/T6682中一级水的要求。
2、样品提取及初步分离：
(1)新植二烯提取：称20g的烟末于300mL的锥形瓶中，加入160mL分析纯二氯甲烷，封口膜封口，超声频率为20kHz，超声60min，期间每隔10min震荡一次，滤纸过滤于250mL平底烧瓶中得新植二烯粗提物。
(2)硅胶柱装柱：柱子清洗烘干备用，柱子底部用少量棉花塞住，松紧适度，后用铁架台固定并与水平面垂直，于1000mL烧杯中加入150g的300目的硅胶，用石油醚调成匀浆，注入柱子，并用洗耳球轻轻敲打柱身，沉降约2h，待用。
(3)拌样：将步骤1得到的粗提液在35℃水浴的旋转蒸发仪中浓缩近干，分三次依次加入2mL分析纯的二氯甲烷，将样品完全转移到与其净重1:1的200目硅胶上，并充分搅拌挥干，待用。
(4)上样：将步骤3拌好的样品通过漏斗加入步骤(2)的柱子中沉降，并用石油醚将研钵和漏斗冲洗干净，使样品全部转移到柱子中。
(5)洗脱：将步骤4上样后的柱子中加入适量的棉花保护样品面，然后用石油醚进行洗脱，其中第一个柱体积洗脱液舍弃(洗脱液可用于下一次的洗脱，重新富集新植二烯)，收集并合并后两个柱体积洗脱液。
3、制备色谱的进一步纯化：
(1)将上述步骤(5)中的洗脱液在35℃旋蒸浓缩近干，用10ml色谱纯甲醇进行溶解，过0.45μm有机相滤膜，用制备色谱进一步纯化(制备色谱进一步纯化所采用的条件为：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％甲酸；0min,A:B＝90：10；6min，A:B＝98：2；9min，A:B＝90：10；12min，A:B＝90：10；)，进样量为2mL，扫描波长220-260nm，收集4.2min-5.4min之间的组分。
(2)将步骤1制备色谱所分离纯化的样品35℃旋蒸浓缩，经色谱纯二氯甲烷反提除水后得新植二烯样品。
实验例
为进一步验证本申请技术方案，购买市面上销售的新植二烯标准品(气相色谱图如图1所示，各组分面积百分比如表1所示)作对比进行实验验证。
表1新植二烯标准品面积百分比
| 保留时间/min | 峰面积/(Pa*s) | 峰面积/％ |
| 8.033 | 4.15E-01 | 0.31 |
| 8.115 | 1.13E+02 | 84.98 |
| 8.242 | 1.95E+00 | 1.47 |
| 8.334 | 1.08E+00 | 0.82 |
| 8.442 | 1.65E+01 | 12.42 |
具体实施方式如下：
1、仪器与试剂：
美国安捷伦6890N气相色谱仪；美国Waters Prep150制备色谱；旋转蒸发仪(瑞士步琦公司)；氮吹仪；BS214S分析天平(德国Sartorius公司)；玻璃柱(40×650mm)。
分析纯二氯甲烷(国药)；分析纯石油醚(60-90℃，国药)；色谱纯二氯甲烷(德国默克)；色谱纯甲醇(德国默克)；蒸馏水，符合GB/T6682中一级水的要求。
2、新植二烯气相色谱检测条件：色谱柱DB-5弹性毛细管色谱柱，规格为30m×0.25mm×0.25μm；火焰离子化检测器(FID)；进样口：250℃；初始温度80℃，保持0min，以20℃/min速率升至300℃，保持15min，以2℃速率升至310℃，保持15min，总运行时间为46min。
3、样品提取及初步分离：
(1)新植二烯提取：称20g的烟末于300mL的锥形瓶中，加入200mL分析纯二氯甲烷，封口膜封口，超声45min，期间每隔10min震荡一次，滤纸过滤于250mL平底烧瓶中，取1mL于35℃水浴的氮吹浓缩近干，用1mL的色谱纯二氯甲烷进行溶解，过0.45μm有机相滤膜，用气相色谱(FID检测器)进行纯度的检测，其余粗提液待纯化。
气相色谱结果显示，共检测出67种物质，其中新植二烯占16.8％。虽然新植二烯的相对含量最高，但其他杂质高达66种，占总量的83.2％。分析结果见图2、表2。
表2新植二烯粗提液面积百分比
(2)硅胶柱装柱：柱子清洗烘干备用，柱子底部用少量棉花塞住，松紧适度，后用铁架台固定并与水平面垂直，于1000mL烧杯中加入150g的300目的硅胶，用石油醚调成匀浆，注入柱子，并用洗耳球轻轻敲打柱身，沉降约2h，待用。
(3)拌样：将步骤1得到的粗提液在35℃水浴的旋转蒸发仪中浓缩近干，分三次依次加入2mL分析纯的二氯甲烷，将样品完全转移到与其净重1:1的100目硅胶上，并充分搅拌挥干，待用。
(4)上样：将步骤3拌好的样品通过漏斗加入步骤(2)的柱子中沉降，并用石油醚将研钵和漏斗冲洗干净，使样品全部转移到柱子中。
(5)洗脱：将步骤4上样后的柱子中加入适量的棉花保护样品面，然后用石油醚进行洗脱，第一个半柱体积舍弃，后3.5个柱体积分为7个半柱体积分别收集到250mL的平底烧瓶中，待进一步纯化。
(6)将步骤5得到的洗脱液在35℃水浴的旋转蒸发仪中浓缩近干，分别用3mL的色谱纯二氯甲烷溶解，并重复两遍，使分离到的样品完全转移到10mL样品瓶中，待用。
(7)将步骤6得到的7个半柱体积目标物的二氯甲烷溶液，以及200ug/mL新植二烯的标准品，分别取1mL过0.45μm有机相滤膜，用气相色谱(FID检测器)进行浓度和纯度的检测，确定洗脱体积。
气相色谱检测结果显示：200ug/mL新植二烯标准品检测纯度显示为84.98％，8.442min的色谱峰经谱库检索为新植二烯二聚体，峰面积占12.42％；第2个半柱体积新植二烯的峰面积为2.9E-1，纯度为0.052％，其浓度和纯度都很低，应舍弃。第7和第8个半柱体积新植二烯虽然纯度达到了57％，但浓度最高不足标准品的一半，考虑到成本，应舍弃(其洗脱液用于下一次的洗脱，重新富集新植二烯)。第3-6个半柱体积其纯度都在48％以上，最大的浓度达到了标准品的15倍，最小浓度也大于标准品，所以确定收集的柱体积为第3-6个半柱体积，即第2和第3个柱体积。分析结果见表5。以第四个半柱体积为例，粗提液经硅胶柱纯化后杂质由前面的66种降低为34种，新植二烯的含量也由16.78％纯化到56.17％。分析结果见图3、表3。
表3新植二烯凝胶柱分离纯化面积百分比
4、制备色谱的进一步纯化：
(1)将第2和第3个柱体积的二氯甲烷溶液合并后35℃水浴的氮吹浓缩近干，用适量的色谱纯甲醇进行溶解，过0.45μm有机相滤膜，用制备色谱进一步纯化，收集4.2min-5.4min之间的组分。
(2)将步骤1制备色谱所分离纯化的样品35℃水浴的旋转蒸发仪中浓缩，经色谱纯二氯甲烷反提除水后，用气相色谱(FID检测器)检测其纯度。
如图4、表4所示，气相色谱检测结果显示，新植二烯经制备色谱进一步纯化后，杂质由硅胶柱分离后的34种降低到1种，新植二烯的纯度达到99.42％，相比标准品的84.98％提高了14.44％。
表4新植二烯制备纯化面积百分比
| 保留时间/min | 峰面积/(Pa*s) | 峰面积/％ |
| 8.112 | 112.06 | 99.42 |
| 8.675 | 0.66 | 0.58 |
上述虽然结合实施例对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
Claims (10)
1.一种烟草中新植二烯的提取纯化方法，其特征在于，所述提取纯化方法包括如下步骤：
(1)向烟草样品中加入卤化烃类有机溶剂进行超声处理，超声处理期间间隔震荡若干次，过滤得粗提液；
(2)将步骤(1)得到的粗提液进行旋蒸浓缩处理，加入卤化烃类有机溶剂溶后将样品转移至硅胶上进行拌样处理，然后转移至硅胶柱中进行上样处理；
(3)使用洗脱剂进行洗脱处理，收集洗脱液；
(4)将步骤(3)得到的洗脱液旋蒸浓缩近干，使用醇类有机溶剂溶解后过有机相滤膜并用制备色谱进一步纯化；
(5)将步骤(4)制备色谱分离纯化后的溶液旋蒸浓缩并用卤化烃类有机溶剂反提除水得新植二烯样品。
2.如权利要求1所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)中，烟草样品与卤化烃类有机溶剂的质量体积比为1g：8-10ml，进一步优选的，所述烟草样品与卤化烃类有机溶剂的质量体积比为1g：10ml；所述卤化烃类有机溶剂为分析纯二氯甲烷；
超声处理条件为：超声频率为18-20KHz，超声处理时间共计0.5-1h，超声处理期间每隔10min震荡一次。
3.如权利要求1所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中，旋蒸处理温度为30-35℃，卤化烃类有机溶剂为分析纯二氯甲烷；拌样处理中的硅胶目数为100-200目；所述样品净含量与所述硅胶的质量比为1:1；所述硅胶柱目数为100-200目；所述硅胶柱中硅胶目数为200-300目。
4.如权利要求1所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(3)中，洗脱剂为石油醚；洗脱处理具体为：第一个柱体积洗脱液舍弃，收集后两个柱体积洗脱液。
5.如权利要求1所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(4)中，水浴处理温度为30-35℃；醇类有机溶剂为色谱纯甲醇；有机相滤膜规格为0.45μm有机相滤膜。
6.如权利要求1所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(4)中，制备色谱进一步纯化所采用的条件为：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％甲酸；0min，A:B＝90：10；6min，A:B＝98：2；9min，A:B＝90：10；12min，A:B＝90：10；进样量为2mL，扫描波长220-260nm，收集4.2min-5.4min之间的组分。
7.如权利要求1所述的一种提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(5)中，旋蒸处理温度为30-35℃，卤化烃类有机溶剂为色谱纯二氯甲烷。
8.一种新植二烯，其特征在于，所述新植二烯由权利要求1-7任意一种提取纯化方法制备得到。
9.如权利要求8所述的新植二烯的检测方法，其特征在于，所述方法采用气相色谱分析检测，检测条件为：色谱柱DB-5弹性毛细管色谱柱，规格为30m×0.25mm×0.25μm；火焰离子化检测器；进样口：250℃；初始温度80℃，保持0min，以20℃/min速率升至300℃，保持15min，以2℃速率升至310℃，保持15min，总运行时间为46min。
10.如权利要求8所述的新植二烯作为标准物质在烟草香气物质及其前体物的定量分析中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610874160.8A CN106501420B (zh) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | 一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610874160.8A CN106501420B (zh) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | 一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106501420A true CN106501420A (zh) | 2017-03-15 |
| CN106501420B CN106501420B (zh) | 2018-07-03 |
Family
ID=58293568
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610874160.8A Expired - Fee Related CN106501420B (zh) | 2016-09-30 | 2016-09-30 | 一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106501420B (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106997216A (zh) * | 2017-05-19 | 2017-08-01 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种香烟吸烟机用的恒压仓及其抽吸实验的方法 |
| CN109134179A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-04 | 云南中海路德科技有限公司 | 从废弃烟叶中同时提取分离茄尼醇及新植二烯的工艺方法 |
| CN109134180A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-04 | 云南中海路德科技有限公司 | 一种废弃烟叶回收利用方法 |
| CN109222213A (zh) * | 2018-08-03 | 2019-01-18 | 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 | 一种烟草原料中新植二烯的绿色提取富集及分离纯化方法 |
| CN110584186A (zh) * | 2019-10-30 | 2019-12-20 | 云南省烟草公司玉溪市公司 | 一种烟油及其制备方法 |
| CN111272921A (zh) * | 2020-03-28 | 2020-06-12 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测烟叶、烟丝中新植二烯的快速恒压反吹gc-fid方法 |
| CN114805004A (zh) * | 2022-04-13 | 2022-07-29 | 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 | 一种从新鲜烟叶中制备高纯度新植二烯的绿色工艺 |
| CN116138488A (zh) * | 2021-11-19 | 2023-05-23 | 湖南中烟工业有限责任公司 | 一种烟草本色本香精分液及其制备和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101692075A (zh) * | 2009-09-10 | 2010-04-07 | 广东中烟工业有限责任公司 | 一种卷烟主流烟气的分析方法 |
| CN102495163A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-06-13 | 云南省烟草烟叶公司 | 一种烤烟gc/ms指纹图谱的建立方法及应用 |
| US20120272976A1 (en) * | 2011-04-27 | 2012-11-01 | R.J. Reynolds Tobacco Company | Tobacco-derived components and materials |
| CN103235066A (zh) * | 2013-04-16 | 2013-08-07 | 云南省烟草公司大理州公司 | 一种提取烟叶中香气成分的悬滴液相微萃取方法 |
-
2016
- 2016-09-30 CN CN201610874160.8A patent/CN106501420B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101692075A (zh) * | 2009-09-10 | 2010-04-07 | 广东中烟工业有限责任公司 | 一种卷烟主流烟气的分析方法 |
| US20120272976A1 (en) * | 2011-04-27 | 2012-11-01 | R.J. Reynolds Tobacco Company | Tobacco-derived components and materials |
| CN102495163A (zh) * | 2011-11-17 | 2012-06-13 | 云南省烟草烟叶公司 | 一种烤烟gc/ms指纹图谱的建立方法及应用 |
| CN103235066A (zh) * | 2013-04-16 | 2013-08-07 | 云南省烟草公司大理州公司 | 一种提取烟叶中香气成分的悬滴液相微萃取方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| M. R. GUERIN ET AL: "Gas chromatographic determination of neophytadiene as a measure of the terpenoid contribution to experimental tobacco smoke carcinogenesis", 《ENVIRONMENTAL LETTERS》 * |
| 唐纲岭 等: "固相微萃取_气相色谱_质谱法定性定量分析烟叶中香味物质的研究", 《中国烟草学报》 * |
| 赵铭钦 等: "种植密度和留叶数对延边烤烟中性致香物质含量及评吸质量的影响", 《浙江农业学报》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106997216A (zh) * | 2017-05-19 | 2017-08-01 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种香烟吸烟机用的恒压仓及其抽吸实验的方法 |
| CN109222213A (zh) * | 2018-08-03 | 2019-01-18 | 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 | 一种烟草原料中新植二烯的绿色提取富集及分离纯化方法 |
| CN109222213B (zh) * | 2018-08-03 | 2021-08-20 | 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 | 一种烟草原料中新植二烯的绿色提取富集及分离纯化方法 |
| CN109134179A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-04 | 云南中海路德科技有限公司 | 从废弃烟叶中同时提取分离茄尼醇及新植二烯的工艺方法 |
| CN109134180A (zh) * | 2018-09-17 | 2019-01-04 | 云南中海路德科技有限公司 | 一种废弃烟叶回收利用方法 |
| CN110584186A (zh) * | 2019-10-30 | 2019-12-20 | 云南省烟草公司玉溪市公司 | 一种烟油及其制备方法 |
| CN111272921A (zh) * | 2020-03-28 | 2020-06-12 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测烟叶、烟丝中新植二烯的快速恒压反吹gc-fid方法 |
| CN111272921B (zh) * | 2020-03-28 | 2023-04-25 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测烟叶、烟丝中新植二烯的快速恒压反吹gc-fid方法 |
| CN116138488A (zh) * | 2021-11-19 | 2023-05-23 | 湖南中烟工业有限责任公司 | 一种烟草本色本香精分液及其制备和应用 |
| CN114805004A (zh) * | 2022-04-13 | 2022-07-29 | 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 | 一种从新鲜烟叶中制备高纯度新植二烯的绿色工艺 |
| CN114805004B (zh) * | 2022-04-13 | 2023-08-08 | 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 | 一种从新鲜烟叶中制备新植二烯的工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106501420B (zh) | 2018-07-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106501420B (zh) | 一种烟草中新植二烯的提取纯化和检测方法及其应用 | |
| Kingman et al. | Isolation, purification and quantitation of several growth regulating substances in Ascophyllum nodosum (Phaeophyta) | |
| CN104678039B (zh) | 基于液相色谱-串联质谱联用同时测定烟草及烟草制品中四种黄曲霉毒素含量的方法 | |
| CN105675757B (zh) | 一种同时测定卷烟主流烟气中烟草特有n‑亚硝胺和多环芳烃的方法 | |
| CN103323543B (zh) | 一种检测卷烟烟气中17种多环芳烃的方法 | |
| CN102401820A (zh) | 小麦中几种真菌毒素含量的检测方法 | |
| CN105527356B (zh) | 一种基于吸头‑微萃取的卷烟主流烟气中烟草特有n‑亚硝胺和多环芳烃的同时测定方法 | |
| CN104049050B (zh) | 一种基于磁性固相萃取的卷烟主流烟气中苯并[a]芘的测定方法 | |
| CN104807688B (zh) | 一种萃取富集大体积环境水样中微量多环芳烃的方法 | |
| CN104931301B (zh) | 一种熏香烟气捕集装置及熏香烟气挥发性成分的检测方法 | |
| CN103558319B (zh) | 一种测定卷烟主流烟气中甲基丁香酚的方法 | |
| CN106226417A (zh) | 一种电子烟烟液中多元醇醚及其酯类化合物的检测方法 | |
| Frohlich et al. | Quantitation of ochratoxin A: use of reverse phase thin-layer chromatography for sample cleanup followed by liquid chromatography or direct fluorescence measurement | |
| CN106226426A (zh) | 一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法 | |
| CN102759590A (zh) | 一种卷烟烟气中苯并[a]芘的提取净化方法 | |
| CN102778519B (zh) | 一种gc/ms联用检测卷烟侧流烟气中氨基甲酸乙酯含量的方法 | |
| CN206411077U (zh) | 用于分析烟液成分的分析装置 | |
| CN105911200B (zh) | 一种卷烟主流烟气中4‑(n‑甲基‑n‑亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑丁酮的测定方法 | |
| CN104569253B (zh) | 一种卷烟主流烟气中苯并[a]芘的测定方法 | |
| CN104316484B (zh) | 一种中、高温煤沥青中苯并（a）芘的检测方法 | |
| CN106970178B (zh) | 一种基于疏水离子交换固相萃取的卷烟主流烟气中烟草特有n-亚硝胺的提取及测定方法 | |
| Isidorov et al. | Gas chromatographic determination of extractable compounds composition and emission rate of volatile terpenes from larch needle litter | |
| Berezkin et al. | The development of planar chromatography in 1980–1990 and 2000–2010 (the Scientometric Study) | |
| CN104049056B (zh) | 烟气总粒相物中苯并[α]芘含量的测定方法 | |
| CN111040002A (zh) | 从川麦冬中提取分离的化合物及其方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180703 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |