CN106456639B - Hiv逆转录酶抑制剂的前药 - Google Patents

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Abstract

描述了式I化合物：I其中R1和R2如本文定义。式I化合物可用于抑制HIV逆转录酶、预防和治疗HIV感染和预防、延迟AIDS的发作或进展以及治疗AIDS。所述化合物可以用作药物组合物的成分，其任选与其它抗病毒剂、免疫调节剂、抗生素或疫苗组合。

Description

HIV逆转录酶抑制剂的前药
本申请的序列表经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以文件名“23744-US-PSP-SEQLIST-01APR2014”电子提交，其具有2014年4月1日的创建日期和1.92kb的大小。经由EFS-Web提交的该序列表是本说明书的一部分，并且以其整体通过引用并入本文。
发明背景
命名为人免疫缺陷病毒(HIV)的逆转录病毒，尤其称为1型HIV(HIV-1)和2型HIV(HIV-2)的株系，已与称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的免疫抑制疾病病因学关联。HIV血清反应阳性的个体最初无症状，但通常发展AIDS相关症候群(ARC)，随后是AIDS。受影响的个体展现严重免疫抑制，这使其对致虚弱和最终致命的机会性感染高度易感。由宿主细胞复制HIV需要将病毒基因组整合至宿主细胞的DNA中。由于HIV为逆转录病毒，所以HIV复制周期需要经由称为逆转录酶(RT)的酶将病毒RNA基因组转录成DNA。
逆转录酶具有三种已知酶促功能：所述酶充当RNA依赖性DNA聚合酶、核糖核酸酶和DNA依赖性DNA聚合酶。在其作为RNA依赖性DNA聚合酶的作用中，RT转录病毒RNA的单链DNA拷贝。作为核糖核酸酶，RT破坏初始病毒RNA且使刚刚由初始RNA产生的DNA游离。且作为DNA依赖性DNA聚合酶，RT使用第一DNA链作为模板产生第二互补DNA链。两条链形成双链DNA，其通过整合酶整合至宿主细胞的基因组中。
已知抑制HIV RT的酶促功能的化合物将抑制受感染细胞中的HIV复制。这些化合物可用于预防或治疗人中的HIV感染。批准用于治疗HIV感染和AIDS的化合物是RT抑制剂3'-叠氮基-3'-脱氧胸苷(AZT)、2',3'-双脱氧肌苷(ddI)、2',3'-双脱氧胞苷(ddC)、d4T、3TC、奈韦拉平(nevirapine)、地拉韦啶(delavirdine)、依法韦仑(efavirenz)、阿巴卡韦(abacavir)、恩曲他滨(emtricitabine)和替诺福韦(tenofovir)。目前的护理标准是采用高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)。HAART疗法被定义为来自至少2种不同机制类别的3种药剂的组合。尽管采用RT抑制剂的基于HAART的治疗方案有效治疗HIV感染和AIDS，但仍需要开发额外的HIV抗病毒药物，包括额外的RT抑制剂。具体问题是产生对已知抑制剂耐药的突变HIV株系。使用RT抑制剂治疗AIDS通常导致病毒对抑制剂较不敏感。该耐药性通常是pol基因的逆转录酶区段中产生突变的结果。继续使用抗病毒化合物治疗HIV感染将不可避免地导致出现新耐药的HIV株系。因此，特别需要有效针对突变HIV株系的新RT抑制剂。
WO 2009/067166和WO 2011/126969公开了某些RT抑制剂前药。Clemo等人，J. Chem. Soc. 1954, 第2693-2702 页公开了4-氧代-3-(2-吡啶基)吡啶并可啉***的某些衍生物，并特别公开了6-甲基-6'-苯氧基-2,2'-亚甲基联吡啶。Sweeney等人，Bioorganic & Medicinal Chem. Letters 2008, 第18卷, 第4348-4351页公开了一系列***啉酮类，其被发现是HIV逆转录酶的非核苷抑制剂。WO 2001/034578公开了具有抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)活性的某些取代的唑类(包括，例如，某些咪唑类和苯并咪唑类)。具体而言，WO '578公开了1-[(3-甲基-4-苯氧基-2-吡啶基)甲基]-1H-苯并咪唑(参见第40页的化合物91)。WO 2004/085406和相应的US 7189718公开了作为逆转录酶抑制剂的某些苄基哒嗪酮类。WO 2005/102989和相应的US 7166738公开了作为非核苷逆转录酶抑制剂的某些N-苯基2-苯基乙酰胺类。WO 2006/067587公开了作为逆转录酶的调节剂的某些联芳基醚衍生物。WO 2007/045572和WO 2007/045573公开了作为非核苷逆转录酶抑制剂的某些2-(2-苯氧基苯基)N-苯基乙酰胺类。WO 2008/076225公开了作为HIV逆转录酶抑制剂的某些吲唑类、苯并***类和相关的双环化合物。WO 2009/067166公开了某些芳氧基-、环烷基氧基-和杂环基氧基-吡啶类以及相关的化合物。所述化合物是例如适合于治疗HIV感染的HIV逆转录酶抑制剂。在公开的化合物中的是某些3-(3,5-二取代的苯氧基)-1-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基甲基)-4-(取代的)吡啶-2(1H)-酮类。US 2004/0192704公开了某些3-(苯氧基)苄基取代的5-元***酮类、噁二唑酮类(oxadiazolones)和噻二唑酮类(thiadiazolones)。所述化合物被公开为非核苷逆转录酶抑制剂，其可用于治疗或预防HIV介导的疾病。US 2007/0021442和WO 2007/015812公开了某些取代的芳族化合物。所述化合物是例如适合于治疗HIV感染的HIV逆转录酶抑制剂。WO 2009/067166和WO 2011/120133公开了HIV非核苷逆转录酶抑制剂。WO 2011/126969公开了HIV非核苷逆转录酶抑制剂的前药。
发明概述
本发明涉及4-嘧啶酮类的某些衍生物。式I化合物据信是前药，其可以在体内代谢为(下文定义的)式I'化合物，其是HIV逆转录酶的抑制剂。式I'化合物抑制HIV-1逆转录酶的聚合酶功能，并更具体地抑制HIV-1逆转录酶的RNA依赖性DNA聚合酶活性。式I'化合物还表现出针对HIV的耐药形式(例如，HIV-1的突变株系，其中逆转录酶在赖氨酸103→天冬酰胺(K103N)和/或酪氨酸181→半胱氨酸(Y181C)处具有突变)的活性。因此，可用于促进式I'化合物的给药的式I化合物可以表现出针对目前批准的抗病毒疗法的减少的交叉抗性。因此，式I化合物(包括其水合物和溶剂合物)可用于例如抑制HIV逆转录酶，预防HIV感染，治疗HIV感染，以及预防、治疗和延迟AIDS和/或ARC的发作或进展，其作为化合物本身或作为药物组合物成分，无论是否与其它HIV抗病毒剂、抗感染剂、免疫调节剂、抗生素或疫苗组合。
发明详述
本发明涵盖结构式I的化合物或其药学上可接受的盐：
I，其中R1是 ；
R2是卤素或被1至3个-F取代的-C1-3烷基；
R3是(a)卤素，(b)被1至3个-F取代的-C1-3烷基，或(3)被卤素取代的苯基；且
R4是。
在本发明的实施方案A中的是式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是。
在本发明的实施方案B中的是式I化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是。
在本发明的另一个实施方案中的是式I或实施方案A或实施方案B的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是被1、2或3个-F取代的甲基；或被1、2或3个-F取代的乙基；且更具体地R2是-CHF2、-CF3或-CF2CH3。
在本发明的另一个实施方案中的是式I或实施方案A或实施方案B的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是-F；-Cl；被1、2或3个-F取代的甲基；被1、2或3个-F取代的乙基；或被-F取代的苯基；且更具体地R3是-Cl、-CHF2、-CF3、-CF2CH3或被-F 取代的苯基。
在本发明的另一个实施方案中的是式I、实施方案A或实施方案B的化合物或其药学上可接受的盐，其中：R2是被1、2或3个-F取代的甲基；或被1、2或3个-F取代的乙基；且更具体地R2是-CHF2、-CF3或-CF2CH3；
R3是-F，-Cl，被1、2或3个-F取代的甲基；被1、2或3个-F取代的乙基；或被-F取代的苯基；且更具体地R3是-Cl、-CHF2、-CF3、-CF2CH3或被-F 取代的苯基；且R4是。
如本文所使用，术语“烷基”是指具有指定范围内的碳原子数的直链或支链、饱和脂族烃基。因此，例如，“-C1-3烷基”意指具有指定数目的碳原子的直链或支链烷基，包括所有异构体，即正丙基和异丙基(Pr =丙基)、乙基(Et)和甲基(Me)。
术语“卤素”(或“卤代”)是指氟、氯、溴或碘(或者称为氟代、氯代、溴代和碘代)。氟代或氯代是优选的。
式I化合物据信充当前药，其在体内转化为其式I'的药学活性对应物，其中式I'与式I相同，除了R4被-H替代。对于式I的具体化合物，相应的式I'化合物在本文中可以称为“母体”化合物(无论相应化合物之一或两者是否是盐形式，除非另有说明)，例如，
。
式I'化合物是HIV逆转录酶抑制剂。实施例1-8的化合物的大鼠AUC数据提供于下表3中。
本文所述的所有结构式、其实施方案和类别包括其中定义的化合物的药学上可接受的盐。本文提及式I化合物涵盖式I和其所有实施方案和类别的化合物。除非另外规定，否则作为特定式或实施方案(例如式I或其实施方案)或任何其它通用结构式的化合物或本文描述或请求保护的特定化合物提及本发明化合物意欲涵盖落入该式或实施方案范围内的一种或多种特定化合物，包括其盐(尤其药学上可接受的盐)、此类化合物的溶剂合物(包括水合物)以及其溶剂化盐形式，其中此类形式为可能的。
本发明包括本文所述的各实施例和其药学上可接受的盐。本发明还涵盖药物组合物，其包含有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
除非明确规定为相反，否则允许在链或环中任何原子上被命名取代基取代，只要此类取代是化学允许的且导致稳定化合物。"稳定"化合物是可制备和分离的化合物且其结构和特性保持或可使其基本上保持不变，持续足以允许将化合物用于本文所述的目的的时间段(例如，向对象治疗或预防性给药)。本发明化合物限于式I和其实施方案涵盖的稳定化合物。
在取代基和取代基模式提供本发明化合物中的互变异构体(例如，酮 - 烯醇互变异构体)的存在的程度上，这些化合物的所有互变异构形式，无论单独存在或以混合物存在，都在本发明的范围内。应当理解，对能够互变异构的化合物的提及在其范围内包括对每种单独互变异构体及其组合(例如酮和烯醇形式)的提及。
在式I化合物中，原子可展现其天然同位素丰度，或一种或多种原子可人工富集具有相同原子序数、但原子质量或质量数与自然界中主要存在的原子质量或质量数不同的特定同位素。本发明意欲包括式I化合物的所有合适同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(1H)和氘((2H)。氕是自然界中存在的主要氢同位素。针对氘的富集可提供某些治疗优势，诸如增加体内半衰期或减少剂量需求，或可提供可用作表征生物样品的标准品的化合物。式I内的同位素富集化合物无需过度实验即可通过本领域技术人员众所周知的常规技术或通过与本文的方案和实施例中所述的方法类似的方法使用适当同位素富集试剂和/或中间体来制备。
化合物可以药学上可接受的盐的形式给药。术语"药学上可接受的盐"是指生物或其它方面没有不合需要的盐(例如对其接受者既无毒又无害)。当式I化合物含有一个或多个酸性或碱性基团时，本发明还包括相应药学上可接受的盐。因此，含有酸性基团的式I化合物可根据本发明作为例如但不限于碱金属盐、碱土金属盐或铵盐使用。此类盐的实例包括但不限于钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或具有氨或有机胺(例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸)的盐。含有一个或多个碱性基团(即可质子化的基团)的式I化合物可根据本发明以其与无机或有机酸的酸加成盐形式使用，例如但不限于与以下物质的盐：盐酸、溴化氢、磷酸、硫酸、硝酸、苯磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸等。如果式I化合物在分子中同时含有酸性和碱性基团，则除了提及的盐形式外，本发明还包括药学上可接受的内盐或内铵盐(betaines)(两性离子)。可通过本领域技术人员已知的惯用方法，例如通过与有机或无机酸或碱在溶剂或分散剂中组合，或通过与其它盐阴离子交换或阳离子交换，由式I化合物获得盐。本发明还包括式I化合物的所有盐，其由于低生理学相容性而不适于直接用于药物中，但其可例如用作化学反应的中间体或用于制备药学上可接受的盐。
作为实例，式I化合物包括但不限于此类化合物，其中R4的磷酸烷基酯盐（alkyl-phosphate）可以是碱式盐，其是指由从一个或多个正抗衡离子(例如，碱金属阳离子)平衡的基团损失至少一个质子代表的药学上可接受的盐。R4的碱式盐可以代表为：
或 或 ，其中X+和X2+是正抗衡离子。可以通过用合适的无机或有机碱处理式I化合物的游离形式而形成碱式盐。合适的无机碱包括但不限于氢氧化铵、碱金属氢氧化物(例如，NaOH或KOH)、碱土金属氢氧化物等。合适的有机碱包括碱金属烷基羧酸盐(例如，乙酸钾或乙酸钠)、烷基氢氧化铵等。
本发明的另一个实施方案是式I化合物，其中该化合物或其盐为基本上纯形式。如本文所使用，"基本上纯"意指合适地至少约60重量%，通常至少约70重量%，优选至少约80重量%，更优选至少约90重量%(例如，约90重量%至约99重量%)，甚至更优选至少约95重量%(例如约95重量%至约99重量%，或约98重量%至100重量%)，且最优选至少约99重量%(例如100重量%)的含有式I化合物或其盐的产物(例如，从反应混合物分离、提供所述化合物或盐的产物)由所述化合物或盐组成。所述化合物和盐的纯度水平可使用标准分析方法(诸如薄层色谱、凝胶电泳、高效液相色谱和/或质谱)测定。如果采用多于一种分析方法且所述方法提供测定的纯度水平方面的实验上的显著差异，则以提供最高纯度水平的方法为准。100%纯度的化合物或盐是如标准分析方法测定不含可检测杂质的化合物或盐。
此外，本发明化合物可以非晶形形式和/或一种或多种结晶形式存在，且因此式I化合物的所有非晶形和结晶形式和其混合物意欲包括于本发明的范围内。此外，本发明的化合物可与水(即水合物)或常见有机溶剂形成溶剂合物。所述溶剂合物包括化学计量和非化学计量的溶剂合物两者。本发明化合物的此类溶剂合物和水合物(尤其是药学上可接受的溶剂合物和水合物)同样与非溶剂化和无水形式一起涵盖于本发明范围内。
因此，通用结构式、实施方案范围内的化合物和本文描述和请求保护的特定化合物涵盖其盐、所有可能立体异构体和互变异构体、物理形式(例如非晶形和结晶形式)、溶剂合物和水合物形式和这些形式的任何组合，以及其盐，其中除非另外规定，否则此类形式是可能的。
本发明还涵盖用于在有需要的对象中治疗或预防HIV感染、抑制HIV逆转录酶、或治疗、预防或延迟AIDS发作的方法，其包括将有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐给药至所述对象。
本发明还涵盖本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备用于在有需要的对象中治疗或预防HIV感染、用于抑制HIV逆转录酶或用于治疗、预防或延迟AIDS发作的药物。
本发明还涵盖药物组合物，其包含有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体，且进一步包含有效量的抗HIV剂，其选自HIV抗病毒剂、免疫调节剂和抗感染剂。在该实施方案内，抗HIV剂是选自以下的抗病毒剂：HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV进入抑制剂和HIV成熟抑制剂。
本发明的其它实施方案包括以下：
(a) 药物组合物，其包含有效量的如上文定义的式I或实施方案A或B的化合物或其前药或药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
(b) 药物组合物，其包含通过组合(例如，混合)有效量的如上文定义的式I或实施方案A或B的化合物或其前药或药学上可接受的盐和药学上可接受的载体制备的产物。
(c) (a)或(b)的药物组合物，其进一步包含有效量的选自HIV抗病毒剂、免疫调节剂和抗感染剂的抗HIV剂。
(d) (c)的药物组合物，其中所述抗HIV剂是选自以下的抗病毒剂：HIV蛋白酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂。
(e) 组合，其为(i)如上文定义的式I或实施方案A或B的化合物或其前药或药学上可接受的盐，和(ii)选自HIV抗病毒剂、免疫调节剂和抗感染剂的抗HIV剂；其中所述化合物和抗HIV剂各自以使组合有效抑制HIV逆转录酶、用于治疗或预防HIV感染或用于治疗、预防或延迟AIDS发作或进展的量采用。
(f) (e)的组合，其中所述抗HIV剂是选自以下的抗病毒剂：HIV蛋白酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂。
(g) 用于抑制有需要的对象中的HIV逆转录酶的方法，其包括将有效量的式I或实施方案A或B的化合物或其前药或药学上可接受的盐给药至对象。
(h) 用于预防或治疗有需要的对象中的HIV(例如，HIV-1)感染的方法，其包括将有效量的式I或实施方案A或B的化合物或其前药或药学上可接受的盐给药至对象。
(i) (h)的方法，其中将式I或实施方案A或B的化合物与有效量的至少一种选自以下的其它HIV抗病毒剂组合给药：HIV蛋白酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂。
(j) 用于预防、治疗或延迟有需要的对象中的AIDS发作或进展的方法，其包括将有效量的式I或实施方案A或B的化合物或其前药或药学上可接受的盐给药至对象。
(k) (j)的方法，其中将所述化合物与有效量的至少一种选自以下的其它HIV抗病毒剂组合给药：HIV蛋白酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV融合抑制剂和HIV进入抑制剂。
(l) 用于抑制有需要的对象中的HIV逆转录酶的方法，其包括将(a)、(b)、(c)或(d)的药物组合物或(e)或(f)的组合给药至对象。
(m) 用于预防或治疗有需要的对象中的HIV(例如，HIV-1)感染的方法，其包括将(a)、(b)、(c)或(d)的药物组合物或(e)或(f)的组合给药至对象。
(n) 用于预防、治疗或延迟有需要的对象中的AIDS发作或进展的方法，其包括将(a)、(b)、(c)或(d)的药物组合物或(e)或(f)的组合给药至对象。
本发明还包括式I或实施方案A或B的化合物或其药学上可接受的盐，其(i)用于以下，(ii)用作用于以下的药物或(iii)用于制造/制备用于以下的药物：(a)治疗(例如，人体的治疗)，(b)药物，(c)抑制HIV逆转录酶，(d)治疗或预防HIV感染，或(e)治疗、预防或延迟AIDS发作或进展。在这些用途中，本发明化合物可任选地与一种或多种选自HIV抗病毒剂、抗感染剂和免疫调节剂的其它抗HIV剂组合使用。
本发明的其它实施方案包括上文(a)至(n)中所述的药物组合物、组合和方法以及前述段落中所述的用途(i)(a)-(e)至(iii)(a)-(e)，其中采用的本发明化合物是上文所述的实施方案、方面、类别、子类或特征之一的化合物。在所有这些实施方案等中，所述化合物可任选地以药学上可接受的盐的形式使用。
本发明的其它实施方案包括前述段落中所述的药物组合物、组合、方法和用途中的每一种，其中采用的本发明化合物或其盐是基本上纯的。关于包含式I化合物或药学上可接受的载体和任选一种或多种赋形剂的药物组合物，应理解术语"基本上纯的"是关于式I化合物或其盐本身。
本发明的还有其它实施方案包括上文(a)-(n)中所述的药物组合物、组合和方法以及上文所述的用途(i)(a)-(e)至(iii)(a)-(e)，其中受关注的HIV是HIV-1。因此，例如，在药物组合物(d)中，式I化合物以有效针对HIV-1的量采用，且抗HIV剂是选自以下的HIV-1抗病毒剂：HIV-1蛋白酶抑制剂、HIV-1逆转录酶抑制剂、HIV-1整合酶抑制剂、HIV-1融合抑制剂和HIV-1进入抑制剂。
除非明确地相反指出，否则本文引用的所有范围都包括端值。还应当理解，本文引用的任何范围在其范围内都包括该范围内的所有子范围。例如，描述为任选被“1至3个取代基”取代的基团意欲包括作为其方面的被1至3个取代基、2或3个取代基、3个取代基、1或2个取代基、2个取代基或1个取代基取代的此类基团。作为另一个实例，在1至500毫克范围内的剂量意味着所述剂量可以是1 mg或500 mg或其之间的任何量。
本发明的方法涉及本发明的化合物在抑制HIV逆转录酶(例如，野生型HIV-1和其它株系)、预防或治疗HIV感染以及预防、治疗或延迟随后的病理状况诸如AIDS的发作或进展中的用途。预防AIDS、治疗AIDS、延迟AIDS的发作或进展或治疗或预防HIV感染被定义为包括但不限于治疗广泛范围的HIV感染状态：AIDS，ARC，有症状和无症状，以及实际或潜在的HIV暴露。例如，本发明可以用于在通过方式诸如输血、体液交换、叮咬、意外针刺或在外科手术期间暴露于患者血液而怀疑过去暴露于HIV之后治疗HIV感染。作为另一个实例，本发明还可以用于经由给药有效量的式I化合物而抑制HIV从感染HIV的怀孕女性传播至她未出生的儿童或者给儿童喂奶(即，母乳喂养)的感染HIV的女性传播至儿童。
关于式I化合物的术语"给药(administration)"和其变体(例如"给药(administering)"化合物)意指向需要治疗或预防的个体提供化合物且包括自身给药和由另一人向患者给药。当化合物与一种或多种其它活性剂(例如，可用于治疗或预防HIV感染或AIDS的抗病毒剂)组合提供时，"给药"和其变体各自理解为包括同时或在不同时间提供提供化合物和其它药剂。当组合的药剂同时给药时，其可在单个组合物中一起给药或其可分开给药。
如本文所使用，术语"组合物"意欲涵盖包含指定成分的产物以及由组合指定成分产生的任何产物。
"药学上可接受"意指药物组合物的成分必须彼此相容且对其接受者无害。
如本文所使用的术语"对象"或"患者"是指动物，优选哺乳动物，最优选人，其已为治疗、观察或实验的目标。
如本文所使用的术语"有效量"意指足以在给药后抑制HIV逆转录酶、抑制HIV复制、发挥预防作用和/或发挥治疗作用的量。"有效量"的一个实施方案是"治疗有效量"，其为化合物在患者中有效抑制HIV复制(其也可在本文中称为"抑制有效量")、治疗HIV感染、治疗AIDS、延迟AIDS发作和/或减缓AIDS进展的量。"有效量"的另一个实施方案为"预防有效量"，其为化合物在患者中有效预防HIV感染或预防AIDS的量。应理解，有效量可同时为治疗有效量(例如，用于治疗HIV感染)和预防有效量(例如，用于预防或降低发展AIDS的风险)两者。当式I化合物作为盐给药时，所述化合物的量是指化合物的游离形式(即非盐形式)。
在本发明的方法(例如，抑制HIV逆转录酶、治疗或预防HIV感染、抑制HIV复制、治疗或预防AIDS、延迟AIDS发作或延迟或减缓AIDS进展)中，任选地为盐形式的式I化合物可通过导致活性剂与药剂作用部位的接触的方式给药。其可作为单独治疗剂或以治疗剂组合的形式通过适于与药物结合使用的常规方式给药。其可以单独给药，但通常与基于所选给药途径和标准药学实践选择的药学载体一起给药。本发明化合物可例如以含有有效量的化合物和常规无毒药学上可接受的载体、辅助剂和媒介物的药物组合物的单位剂量形式经口、肠胃外(包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术)、吸入喷雾或经直肠给药。适于经口给药的液体制剂(例如悬浮液、糖浆、酏剂等)可根据本领域中已知的技术制备，且可采用任何常见介质，诸如水、二醇类、油类、醇类等。适于经口给药的固体制剂(例如，粉末、丸剂、胶囊和片剂)可根据本领域中已知的技术制备，且可采用固体赋形剂诸如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。肠胃外组合物可根据本领域中已知的技术制备且通常采用作为载体的无菌水和任选其它成分，诸如溶解助剂。可注射溶液可根据本领域中已知的方法制备，其中所述载体包含盐水溶液、葡萄糖溶液或含有盐水与葡萄糖的混合物的溶液。适用于制备用于本发明的药物组合物的方法以及适用于所述组合物的成分的进一步描述提供于Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，A. R. Gennaro编，MackPublishing Co.,1990以及Remington - The Science and Practice of Pharmacy，第22版，Pharmaceutical Press and Philadelphia College of Pharmacy at University ofthe Sciences出版，2012, ISBN 978 0 85711-062-6和先前版本中。
式I化合物可以单次剂量或分次剂量，以每天0.001至1000 mg/kg哺乳动物(例如人)体重的剂量范围经口给药。一个优选的剂量范围是以单次剂量或分次剂量经口每天0.01至500 mg/kg体重。另一个优选的剂量范围是以单次剂量或分次剂量经口每天0.1至100 mg/kg体重。对于经口给药，可提供含有1至500毫克本发明化合物，尤其是1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400和500毫克本发明化合物(针对待治疗患者症状调整剂量)的片剂或胶囊形式的组合物。用于任何特定患者的特定剂量水平和剂量频率可变化且将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用长度、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药模式和时间、***速率、药物组合、特定病况的严重程度和经历治疗的主体。本发明化合物可以作为单次剂量每天一次或以较低频率给药。
除非明确规定为相反，否则本文前述段落或别处提及本发明的化合物的量的给药是提及相应的非盐（salt-free）式I化合物的量(即，量)。
如上所示，本发明还涉及式I化合物与一种或多种抗HIV剂的用途。"抗HIV剂"是直接或间接有效抑制HIV逆转录酶或对于HIV复制或感染所需的另一种酶或蛋白、治疗或预防HIV感染和/或治疗、预防或延迟AIDS的发作或进展的任何药剂。应理解，抗HIV剂有效治疗、预防或延迟HIV感染或AIDS和/或由其产生或与其相关的疾病或病况的发作或进展。例如，无论在暴露前和/或暴露后的时段，本发明化合物均可与有效量的一种或多种选自HIV抗病毒剂、免疫调节剂、抗感染剂或可用于治疗HIV感染或AIDS的疫苗的抗HIV剂组合有效给药。用于与本发明化合物组合使用的合适的HIV抗病毒剂包括例如下表1中所列的那些：
表1
名称 类型
阿巴卡韦，ABC，Ziagen® nRTI
阿巴卡韦 +拉米夫定，Epzicom® nRTI
阿巴卡韦 + 拉米夫定 + 齐多夫定，Trizivir® nRTI
安普那韦，Agenerase® PI
阿扎那韦，Reyataz® PI
AZT，齐多夫定，叠氮胸苷，Retrovir® nRTI
卡普韦林（capravirine） nnRTI
地瑞那韦，Prezista® PI
ddC，扎西他滨，二脱氧胞苷，Hivid® nRTI
ddI，地达诺新，二脱氧肌苷，Videx® nRTI
ddI (肠溶包衣)，Videx EC® nRTI
地拉夫定，DLV，Rescriptor® nnRTI
度鲁特韦，Tivicay® InI
doravirine，MK-1439 nnRTI
依法韦仑，EFV，Sustiva®，Stocrin® nnRTI
依法韦仑 + 恩曲他滨 + 替诺福韦DF，Atripla® nnRTI + nRTI
EFdA (4'-乙炔基-2-氟-2'-脱氧腺苷) nRTI
埃替拉韦 InI
恩曲他滨，FTC，Emtriva® nRTI
恩曲他滨 + 替诺福韦DF，Truvada® nRTI
乙米韦林（emvirine），Coactinon® nnRTI
恩夫韦地，Fuzeon® FI
肠溶包衣的地达诺新，Videx EC® nRTI
依曲韦林，TMC-125，Intelence® nnRTI
福沙那韦钙，Lexiva® PI
茚地那韦，Crixivan® PI
拉米夫定，3TC，Epivir® nRTI
拉米夫定 + 齐多夫定，Combivir® nRTI
洛匹那韦 PI
洛匹那韦 + 利托那韦，Kaletra® PI
马拉韦罗，Selzentry® EI
奈非那韦，Viracept® PI
奈韦拉平，NVP，Viramune® nnRTI
PPL-100 (也称为PL-462) (Ambrilia) PI
雷特拉韦，MK-0518，Isentress<sup>TM</sup> InI
利匹韦林 nnRTI
利托那韦，Norvir® PI
沙奎那韦，Invirase®，Fortovase® PI
司他夫定，d4T，二脱氢脱氧胸苷，Zerit® nRTI
替诺福韦DF (DF = 替诺福韦富马酸酯(disoproxil fumarate))，TDF，Viread® nRTI
替诺福韦，十六烷氧基丙基(CMX-157) nRTI
替拉那韦，Aptivus® PI
vicriviroc EI
EI=进入抑制剂；FI=融合抑制剂；InI=整合酶抑制剂；PI=蛋白酶抑制剂；nRTI=核苷逆转录酶抑制剂；nnRTI=非核苷逆转录酶抑制剂。表中所列的一些药物以盐形式使用；例如阿巴卡韦硫酸盐、地拉韦啶甲磺酸盐、茚地那韦硫酸盐、阿扎那韦硫酸盐、奈非那韦甲磺酸盐、沙喹那韦甲磺酸盐。
应理解，本发明化合物与抗HIV剂的组合的范围不限于表A中所列的HIV抗病毒剂，但在原则上包括与可用于治疗或预防AIDS的任何药物组合物的任何组合。HIV抗病毒剂和其它药剂通常将以这些组合以本领域中所报道的其常规剂量范围和方案采用，包括例如Physicians' Desk Reference, Thomson PDR, Thomson PDR，第57版(2003)，第58版(2004)或第59版(2005)以及现行Physicians' Desk Reference (第68版).(2014),Montvale, NJ：PDR Network中所述的剂量。本发明化合物在这些组合中的剂量范围可与上述剂量范围相同。
尽管不希望受任何特定理论束缚，但据信本发明的化合物充当前药，其中所述化合物在低pH(例如，pH = 1至3)下相对稳定，但将在生理pH(例如，约7的pH)下通过水解或环化转化成其游离碱，由此在体内释放活性物质。据信，R4的磷酸酯基团首先在肠中通过内腔中的磷酸酶裂解，并且其次在刷状缘由磷酸酶裂解，在体内释放活性物质。所述转化可以描绘如下：
。
本文采用的缩写和缩略语包括以下：
AcOH = 乙酸 mHz =兆赫
ACN = 乙腈 min = 分钟
AIDS = 获得性免疫缺陷综合征 mL = 毫升
ARC = AIDS相关症候群； mmol = 毫摩尔
BSA = 牛血清白蛋白 Ms = SO<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>
CAN = 硝酸铈铵 MS (ESI) =质谱(电喷雾电离)
DAST =(二乙基氨基)三氟化硫 NBS = <i>N</i>-溴代琥珀酰亚胺
DCE = 1,2-二氯乙烷 NHS =正常人血清
DCM = 二氯甲烷 nM = 纳摩尔
DEAD = 偶氮二甲酸二乙酯 NMP = <i>N</i>-甲基-2-吡咯烷酮
戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin periodinane) = 1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮 NMR =核磁共振
DHP = 3,4-二氢-2<i>H</i>-吡喃 PBS =磷酸盐缓冲盐水
DIPEA – 二异丙基乙胺 PEG =聚乙二醇
dppf = 1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁 PMB = 4-甲氧基苄基
DMF = <i>N</i>,<i>N</i>-二甲基甲酰胺 PMBCl = 4-甲氧基苄基氯
DMSO = 二甲亚砜 PPTS = 4-甲苯磺酸
DNA = 脱氧核糖核酸 RNA = 核糖核酸
EDTA = 乙二胺四乙酸 r.t. = 室温
EGTA = 乙二醇四乙酸 TBAF =四丁基氟化铵
Et = 乙基 TBDPS = 叔丁基二苯基甲硅烷基
EtOAc = 乙酸乙酯 TBS = 叔丁基二甲基甲硅烷基
EtOH = 乙醇 TBS-Cl = 叔丁基二甲基甲硅烷基氯
FBS = 胎牛血清 THP = 四氢吡喃
HIV = 人免疫缺陷病毒 t-Bu = 叔丁基
HPLC = 高效液相色谱 t-BuOH = 叔丁醇
hr = 小时 TEA = 三乙胺
LCAP = 液相色谱面积百分比 TGA =热重分析
LC-MS = 液相色谱-质谱 THF = 四氢呋喃
LiHMDS = 双(三甲基甲硅烷基)氨基锂 TFA = 三氟乙酸
m-CPBA = 3-氯过苯甲酸 TFAA =三氟乙酸酐
Me = 甲基 TLC =薄层色谱
MeOH = 甲醇 TMSCl = 三甲基甲硅烷基氯
Me-THF = 2-甲基四氢呋喃
以下实施例仅用于举例说明本发明及其实践。所述实施例不应被解释为对本发明的范围或精神的限制。在这些实施例中，术语“室温”是指在约20℃至约25℃的范围内的温度。
中间体A
3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1: 6-(二氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮
将钠(2.91 g, 126.5 mmol)于甲醇(70 mL)的混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加乙酸甲脒(6.3 g, 60 mmol)和4,4-二氟-3-氧代丁酸乙酯(5.0 g, 30.1 mmol)。将混合物在80℃下搅拌4小时。冷却至环境温度之后，将混合物用HCl酸化至pH = 6，并用乙酸乙酯(200 mL×5)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到6-(二氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮。MS (ESI): m/z 147 (M+H) +。
步骤2: 6-(二氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮
在氮气气氛下向化合物6-(二氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮(2.0 g, 13.7 mmol)和乙酸钾(4.0 g, 41.4 mmol)于乙酸(20 mL)中的混合物中添加溴(3.3 g, 20.5 mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌4小时。然后将混合物倒入冰水中，并通过过滤收集沉淀物，以得到5-溴-6-(二氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮。MS (ESI): m/z 225, 227 (M+H) +。
步骤3: 5-溴-6-(二氟甲基)-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-4(3H)-酮
在环境温度下在氮气气氛下将5-溴-6-(二氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮(1.01 g, 4.49mmol)、PMBCl(735 mg, 4.71 mmol)、碳酸钾(1.24 g, 8.98 mmol)于DMF(10 mL)中的混合物搅拌4小时。添加15 mL水，并通过过滤收集沉淀物，以得到5-溴-6-(二氟甲基)-3-(4-甲氧基苄基) 嘧啶-4(3H)-酮。MS (ESI): m/z 345, 347 (M+H) +。
步骤4: 3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶 -5- 基)氧基)苯甲腈
将3-氯-5-羟基苯甲腈(1.57 g, 11.6 mmol)、5-溴-6-(二氟甲基)-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-4(3H)-酮(2.0 g, 5.81 mmol)和t-BuOK (1.43 g, 12.8 mmol)于NMP (10 mL)中的混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至环境温度之后，将混合物用20 mL水稀释，并用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后添加甲醇(10 mL)，并通过过滤收集沉淀物，以提供3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI): m/z 418, 420 (M+H) +。
步骤5: 3-氯-5-((4-(二氟甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
将化合物3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(400 mg, 0.96 mmol)于TFA(5 mL)中的溶液在微波辐射下在100℃下搅拌10分钟。冷却至环境温度之后，将混合物在减压下浓缩。然后添加甲醇(10 mL)，并通过过滤收集沉淀物，以提供3-氯-5-((4-(二氟甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI): m/z 298, 300 (M+H) +。
步骤6: 6-甲氧基哒嗪-3-甲醛
向(6-甲氧基哒嗪-3-基)甲醇(13 g，93 mmol)于500 mL无水二氯甲烷中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin periodinane)(59 g, 139 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(15:1至10:1)作为洗脱液)，以提供6-甲氧基哒嗪-3-甲醛。MS (ESI) m/z 139 (M+H)+。
步骤7: 3-(二氟甲基)-6-甲氧基哒嗪
向6-甲氧基哒嗪-3-甲醛(6.0 g, 43.4 mmol)于100 mL无水二氯甲烷中的搅拌溶液中添加DAST (22.7 g, 141.3 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用碳酸氢钠水溶液(0.5 N, 100 mL)、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(15:1至10:1)作为洗脱液)，以提供3-(二氟甲基)-6-甲氧基哒嗪。MS (ESI) m/z 161 (M+H)+。
步骤8: 4-(叔丁氧基甲基)-6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪
向叔丁氧基-乙酸(0.92 g, 6.88 mmol)于THF/水(20 mol%, 7.76 mL)中的溶液中添加3-(二氟甲基)-6-甲氧基哒嗪(0.7 g, 4.3 mmol)和AgNO3(74 mg, 0.43 mmol)。将混合物在室温下在搅拌下通过N2脱气。然后将混合物加热至70℃，然后逐滴添加水(10 mL)中的(NH4)2S2O8（1.7 g, 7.31 mmol)。添加之后，将混合物在70-80℃下搅拌40分钟。冷却至室温之后，将混合物用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(15:1至10:1)作为洗脱液)，以提供4-(叔丁氧基甲基)-6-(二氟甲基) -3-甲氧基哒嗪。
MS (ESI) m/z 247 (M+H)+。
步骤9: (6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇
将4-(叔丁氧基甲基)-6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪(480 mg, 1.95 mmol)于THF/DCE(1.3 mL/4.5 mL)中的溶液在60℃下搅拌1小时。冷却至室温之后，将混合物在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(2:1)作为洗脱液)，以得到(6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇。MS (ESI) m/z 191 (M+H)+。
步骤10: 4-(氯甲基)-6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪
在0℃下向化合物(6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇(600 mg, 3.1 mmol)于无水二氯甲烷(20 mL)中的溶液中分别逐滴添加甲磺酰氯(1.08 g, 9.4 mmol)和DIPEA(1.22 g, 9.4 mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。然后将混合物用水淬灭并用二氯甲烷萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供4-(氯甲基)-6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪。MS (ESI) m/z 209, 211 (M+H) +。
步骤11: 3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-((6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲 基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
向3-氯-5-((4-(二氟甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(150 mg,0.5 mmol)于DMF(15 mL)中的溶液中添加K2CO3(139 mg, 1.0 mmol)、LiBr(88 mg, 1.0mmol)和4-(氯甲基)-6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪(105 mg, 0.5 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩，以提供3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-((6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈，其未经进一步纯化。MS (ESI) m/z 470, 472 (M+H)+。
步骤12: 3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒 嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在室温下向化合物3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-((6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(200 mg, 0.42 mmol)和KI (142mg, 0.84 mmol)于乙腈(3 mL)中的混合物中添加TMSCl (93 mg, 0.84 mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌1.5小时。冷却至室温之后，将混合物用EtOAc稀释，并用Na2S2O3水溶液和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供期望产物3-氯-5-((4-(二氟甲基)-1-((6-(二氟甲基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。1H NMR: (甲醇–d4, 400 MHz)δ13.60 (s, 1H),8.66 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.62 (s, 2H), 7.59 (s, 1H), 6.98 (t, J = 52.0 Hz,1H), 6.77 (t, J = 54.0 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H)。
MS (ESI) m/z 456, 458 (M+H)+。
实施例1
磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-4-(二氟甲基)-6-氧代嘧啶-1(6H)-基)甲基)-3-(二氟甲基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
通过遵循与实施例7步骤1-2中所述的类似程序制备上述化合物。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.70 (s, 1H), 7.65 – 7.75 (m, 4H), 6.74 – 7.02 (m, 2H), 5.71(d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H)。MS: 566 (M+H)+。
中间体B
3-氯-5-((1-((6-氯-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-4-(二氟甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1:3,6-二氯哒嗪-4-甲酸甲酯
在0℃下向3,6-二氯哒嗪-4-甲酸(5.5 g, 28.5 mmol)于DCM(50.0 ml)和MeOH(10ml)中的悬浮液中缓慢添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2 M，在己烷中, 15 ml, 30.0mmol)。添加之后，其变成澄清溶液。将其搅拌30分钟，并添加另一15 mL三甲基甲硅烷基重氮甲烷，并搅拌30分钟。将其用2 mL乙酸淬灭，浓缩并通过ISCO (80g, 己烷中的0-40%乙酸乙酯)纯化，以得到标题化合物。MS (ESI): m/z 206 (M+H) +。
步骤2:6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-甲酸甲酯
将3,6-二氯哒嗪-4-甲酸甲酯(2 g, 9.66 mmol)称重至装有磁力搅拌棒的干净干燥烧瓶中。将其密封并用氮气吹扫两次，并溶解于无水THF(40 ml)中。将溶液在冰-水浴中冷却，并以一份添加甲醇钠(0.69 g, 12.77 mmol)。将其搅拌30分钟。LC-MS显示反应完成。将其用饱和氯化铵水溶液(20 mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3x40 mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过ISCO (80g，己烷中的0-30％乙酸乙酯)纯化，以得到标题化合物。MS (ESI): m/z 203 (M+H) +。
步骤3:6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-甲酸
将6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-甲酸甲酯(510 mg, 2.52 mmol)于四氢呋喃(5 ml)和甲醇(5.00 mL)中的溶液用4 M LiOH水溶液(5 mL, 20.00 mmol)处理15分钟。将其用1N HCl中和并浓缩。将残余物在真空下干燥，并且未经纯化即使用。MS (ESI): m/z 189 (M+H) +。
步骤4: (6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇
将6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-甲酸(270 mg, 1.432 mmol)和羰基二咪唑(697 mg,4.30 mmol)于THF(12 mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将溶液冷却至0℃，并添加硼氢化钠(271 mg, 7.16 mmol)，随后添加水(4 mL)。将其搅拌15分钟，并用5 mL饱和氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯(4x20 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(5 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过ISCO (40g，己烷中的0-50％乙酸乙酯)纯化，以得到标题化合物。MS (ESI): m/z 175 (M+H) +。
步骤5:6-氯-4-(氯甲基)-3-甲氧基哒嗪
在0℃下向(6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇(100 mg, 0.573 mmol)于DCM(5 ml)中的溶液中添加甲磺酰氯(0.134 ml, 1.718 mmol)和Hunig氏碱(0.300 ml, 1.718mmol)。将其在0℃下搅拌15分钟，并将其温热至室温过夜。将其在减压下浓缩。将残余物通过ISCO (24g，0-30% EtOAc/己烷梯度)纯化，以提供标题化合物。MS (ESI): m/z 192 (M+H)。
步骤6:3-氯-5-((1-((6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-4-(二氟甲基)-6-氧代- 1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
以与中间体A，步骤11相同的方式制备化合物。
步骤7:3-氯-5-((1-((6-氯-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-4-(二氟甲基)- 6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
以与中间体A，步骤12相同的方式制备化合物。
1H NMR: (DMSO–d 6 , 500 MHz) δ8.66 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.69 (s, 1H),7.65 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.02 (t, J = 52.0 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H)。MS (ESI)m/z 440.1 (M+H)+。
实施例2
磷酸二氢(3-氯-5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-4-(二氟甲基)-6-氧代嘧啶-1(6H)-基)甲基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
通过遵循与实施例7步骤1-2中所述的类似程序制备上述化合物。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1H), 7.64 – 7.75 (m, 4H), 7.03 (t, J = 55 Hz, 1H),5.63 (d, J = 8.05 Hz, 2H), 5.01 (s, 2H)。MS: 550 (M+H)+。
中间体C
3-氯-5-((1-((6-氯-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1:
Eur. J. Org. Chem. 2004, 3714-37188。
步骤2:5-溴-6-(三氟甲基)-4(3H)-嘧啶酮
向6-(三氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮(0.3 g, 1.8 mmol)于乙酸(2 mL)中的溶液中添加CH3COOK (0.54 g, 5.5 mmol)。然后向混合物中逐滴添加Br2于乙酸中的溶液(1 mL)。将混合物加热至80℃并搅拌过夜。冷却至室温之后，将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并蒸发，以提供5-溴-6-(三氟甲基)-4(3H)-嘧啶酮。
步骤3: 5-溴-3-(4-甲氧基苄基)-6-(三氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮
向5-溴-6-(三氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮(190 mg, 0.91 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中添加K2CO3 (250 mg, 1.82 mmol)和PMBCl (210mg, 1.3 mmol)。将混合物在室温下搅拌5小时。将混合物倒入水中，并用EtOAc (40 mL × 3)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(5:1至1:1)作为洗脱液)，以提供5-溴-3-(4-甲氧基苄基)-6-(三氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮。1H-NMRJ000159069 H11896-016-3 CDCl3, 400 MHz δ 7.97 (s,1H, ArH), 7.27 (d, J=8.8,2H, ArH), 6.87 (d, J=8.8, 2H, ArH), 5.04 (s, 2H, CH), 3.78 (s, 3H, CH)。
步骤4: 3-氯-5-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6- 二氢嘧啶-5- 基氧基)苯甲腈
向5-溴-3-(4-甲氧基苄基)-6-(三氟甲基)嘧啶-4(3H)-酮(5 g, 13.8 mmol)于NMP(50 mL)中的溶液中添加K2CO3(5.7 g, 41.3 mmol)和3-氯-5-羟基-苯甲腈(3.2 g,20.7 mmol)。将混合物在120℃下搅拌20小时。将混合物倒入水中，并用EtOAc (60 mL×3)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(5:1至1:1)作为洗脱液)，以提供3-氯-5-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6- 二氢嘧啶-5-基氧基)苯甲腈。1H-NMR J000169946 H11896-128-3DMSO, 400 MHz δ 8.86 (s,1H, ArH), 7.76 (s,1H, ArH), 7.70 (s,1H, ArH), 7.68(s,1H, ArH), 7.34 (d, J=8.6, 2H, ArH), 6.90 (d, J=8.6, 2H, ArH), 5.10 (s, 2H,CH), 3.72 (s, 3H, CH)。
步骤5: 3-氯-5-(6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基氧基)苯甲腈
向3-氯-5-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6- 二氢嘧啶-5-基氧基)苯甲腈(2 g, 4.6 mmol)于CH3CN(20 mL)和H2O(8 mL)中的溶液中分批添加Ce(NH4)2(NO3)6 (10 g, 18.4 mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后倒入水中，并用EtOAc (60mL × 3)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(5:1至1:1)作为洗脱液)，以提供3-氯-5-(6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基氧基)苯甲腈。1H-NMR J000170654 H11896-138-3 DMSO, 400MHz δ 13.59 (s,1H, NH), 8.36 (s,1H, ArH), 7.76 (s,1H, ArH), 7.73 (s,1H, ArH),7.70 (s,1H, ArH)。
步骤6: 3-氯-5-((1-((6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)- 1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
向3-氯-5-((6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(100 mg,0.32 mmol)于DMF(5 mL)中的溶液中添加6-氯-4-(氯甲基)-3-甲氧基哒嗪(55 mg, 0.29mmol, 实施例2, 步骤5)和K2CO3(80 mg, 0.58 mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌2小时。冷却至室温之后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到期望产物3-氯-5-((1-((6-氯-3-甲氧基-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS (ESI) m/z 472, 474, 476 (M+H)+。
步骤7: 3-氯-5-((1-((6-氯-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在室温下向化合物3-氯-5-((1-((6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(110 mg, 0.23 mmol)和KI (77 mg, 0.46mmol)于乙腈(10 mL)中的混合物中添加TMSCl (50 mg, 0.46 mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌1小时。冷却至室温之后，将混合物用EtOAc稀释，并用Na2S2O3水溶液和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供3-氯-5-((1-((6-氯-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。1H NMR (甲醇–d4, 400 MHz) : δ 8.60 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.47 (s, 1H),7.28 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.07 (s, 2H), 1.92 (t, J=18.4 Hz, 6H)。
MS (ESI) m/z 458, 460, 462 (M+H)+。
实施例3
磷酸二氢(3-氯-5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
通过遵循与实施例7步骤1-2中所述的类似程序制备上述化合物。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) 8.79 (s, 1H), 7.80-7.70 (m, 3H), 7.70 (s, 1H), 5.60 (d, 2H),5.00 (s, 2H)。MS: 568 (M+H)+。
中间体D
3-氯-5-((1-((6-(二氟甲基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪 -4-基)甲基) -6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1:5-(羟基甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-甲酸甲酯
将(6-氯-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇(4.6 g, 26.4 mmol)、三乙胺(7.4 mL)和Pd(dppf)2Cl2 (0.5 g, 1mmol)于30 mL甲醇和乙酸乙酯(10 mL)中的溶液在一氧化碳(50psi)下在70℃下搅拌过夜。然后将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。将有机萃取物用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过柱纯化(石油醚/乙酸乙酯(5:1至2:1)作为洗脱液)，以得到5-(羟基甲基) -6-甲氧基哒嗪-3-甲酸甲酯。MS (ESI) m/z 199 (M+H)+。
步骤2: 5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-甲酸甲酯
在室温下向5-(羟基甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-甲酸甲酯(2.1 g, 10.6 mmol)于THF(150 mL)中的溶液中添加TBSCl (4.55 g, 30.2 mmol)和咪唑(2.05 g, 30.2 mmol)。然后将所得反应物在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤，并将滤液用水洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-甲酸甲酯。MS (ESI) m/z 313 (M+H)+。
步骤3: (5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)甲醇
在0℃下向5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-6- 甲氧基哒嗪-3-甲酸甲酯(2.1 g, 6.7 mmol)于乙醇(15 mL)中的溶液中添加NaBH4 (0.38 g, 10.0 mmol)和CaCl2 (0.37 g, 3.4 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后通过添加水(20 mL)淬灭，使用HCl溶液(2 M)酸化至pH = 8，并用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基) 氧基)甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)甲醇。MS (ESI) m/z 285 (M+H)+。
步骤4:4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃 -2-基)氧基)甲基)哒嗪
在室温下向(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)甲醇(1.5 g, 5.3 mmol)于乙腈(10 mL)中的溶液中添加DHP(0.53 g, 6.3 mmol)和PPTS(126mg, 0.5 mmol)。将混合物在80℃下搅拌16小时。冷却至室温之后，将混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(10:1)作为洗脱液)，以得到4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)哒嗪。MS(ESI) m/z 369 (M+H)+。
步骤5: (3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)哒嗪-4-基)甲醇
将4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲氧基 -6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)哒嗪(0.9 g, 2.4 mmol)和TBAF (3.2 g, 12.2 mmol)于THF (20.0 mL)中的溶液在室温下搅拌1.0小时。添加水，并将所得混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(1:2)作为洗脱液)，以得到(3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)哒嗪-4-基)甲醇。MS (ESI) m/z 255 (M+H)+。
步骤6: 3-氯-5-((1-((3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)哒嗪 - 4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在0℃下在氮气气氛下向(3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基) 哒嗪-4-基)甲醇(0.6 g, 2.4 mmol)、3-氯-5-((6-氧代-4-(三氟甲基) -1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈 (0.76 g, 2.4 mmol, 实施例3, 步骤5)和三苯基膦(1.3 g, 4.8 mmol)于二氯甲烷(10.0 mL)中的溶液中添加DEAD (0.84 g, 4.8 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，用水(10 mL)淬灭并用二氯甲烷(20 mL × 3)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(1:1)作为洗脱液)，以得到3-氯-5-((1-((3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z 552, 554(M+H)+。
步骤7: 3-氯-5-((1-((6-(羟基甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三 氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在室温下向3-氯-5-((1-((3-甲氧基-6-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基) 哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(1.2 g, 2.2mmol)于甲醇(10 mL)中的溶液中添加HCl/甲醇(1 N, 10 mL)。将所得混合物在室温下搅拌1小时，并在减压下浓缩，以得到3-氯-5-((1-((6-(羟基甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z 468, 470 (M+H)+。
步骤8: 3-氯-5-((1-((6-甲酰基-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲 基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在0℃下在氮气气氛下向3-氯-5-((1-((6-(羟基甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基) 甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(1.0 g, 2.1 mmol)于二氯甲烷(20 mL)中的溶液中添加戴斯-马丁氧化剂(1.36 g, 3.2 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，用水(10 mL)淬灭并用二氯甲烷(20 mL × 3)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(1:1)作为洗脱液)，以得到3-氯-5-((1-((6-甲酰基-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基) 苯甲腈。MS (ESI) m/z 466, 468 (M+H)+。
步骤9: 3-氯-5-((1-((6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三 氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在室温下向3-氯-5-((1-((6-甲酰基-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(0.14 g, 0.3 mmol)于二氯甲烷(5 mL)中的搅拌混合物中添加DAST (0.43 g, 1.6 mmol)，并将混合物在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物用H2O淬灭并用二氯甲烷萃取。将有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(2:1)作为洗脱液)，以得到3-氯-5-((1-((6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z 488, 490 (M+H)+。
步骤10: 3-氯-5-((1-((6-(二氟甲基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪 -4-基)甲基) -6- 氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
向3-氯-5-((1-((6-(二氟甲基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(90 mg, 0.2 mmol)和KI (100 mg, 0.6 mmol)于乙腈(3 mL)中的混合物中添加TMSCl (33 mg, 0.3 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供3-氯-5-((1-((6-(二氟甲基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。1HNMR(甲醇-d4, 400 MHz) δ 13.62 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.71 (s, 1H),7.68 (s,1H), 7.66 (s,1H), 6.78 (t, J = 56.0 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H)。MS (ESI) m/ z 474, 476 (M+H)+。
实施例4
磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-3-(二氟甲基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
通过遵循与实施例7步骤1-2中所述的类似程序制备上述化合物。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.76 (s, 1H), 7.72 – 7.78 (m, 4H), 6.85 (t, J = 53 Hz, 1H),5.71 (d, J = 7.81 Hz, 2H), 5.08 (s, 2H)。MS: 584 (M+H)+。
中间体E
3-氯-5-((1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1: 4-(叔丁氧基甲基)-6-(1-乙氧基乙烯基)-3-甲氧基哒嗪
在N2下向4-(叔丁氧基甲基)-6-氯-3-甲氧基哒嗪(1 g, 5.7 mmol)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(6.2 g, 17.2 mmol)于甲苯(10 mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4(0.6 g,0.57 mmol)。将所得悬浮液在氮气气氛下在120℃下搅拌过夜。冷却至室温之后，将混合物倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，并将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(5:1至2:1)作为洗脱液)，以提供4-(叔丁氧基甲基)-6-(1-乙氧基乙烯基)-3-甲氧基哒嗪。MS (ESI): m/z 267(M+H)+。
步骤2: 1-(5-(叔丁氧基甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)乙酮
向4-(叔丁氧基甲基)-6-(1-乙氧基乙烯基)-3-甲氧基哒嗪(400 mg, 1.5 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(6 mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二氧杂环己烷(3N, 6 mL)，并将溶液在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(1:1)作为洗脱液)，以得到1-(5-(叔丁氧基甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)乙酮。MS (ESI) m/z 239(M+H)+。
步骤3: 4-(叔丁氧基甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪
向1-(5-(叔丁氧基甲基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)乙酮(240 mg, 1.0 mmol)于二氯甲烷(8 mL)中的溶液中添加DAST (0.8 mL, 6.1 mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。LCMS显示反应完成。将混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到4-(叔丁氧基甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪。MS (ESI) m/z 261 (M+H)+。
步骤4: (6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇
向4-(叔丁氧基甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪(150 mg, 0.58 mmol)于二氯甲烷(8 mL)中的溶液中添加4N HCl/甲醇(3 mL)。将混合物在室温下搅拌3小时，然后用水淬灭并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，并通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(1:1.5)作为洗脱液)，以得到(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇。MS (ESI) m/z 205 (M+H)+。
步骤5: 甲磺酸(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲酯
向(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇(110 mg, 0.54 mmol)于二氯甲烷(6 mL)中的溶液中逐滴添加DIPEA (209 mg, 1.6 mmol)和甲磺酰氯(75 mg, 0.62mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到甲磺酸(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪 -4-基)甲酯。MS (ESI) m/z 283 (M+H)+。
步骤6: 3-氯-5-((1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代 - 4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
向甲磺酸(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲酯(120 mg, 0.54 mmol)于DMF(5 mL)中的溶液中添加3-氯-5-((6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(187 mg, 0.59 mmol, 实施例3, 步骤5)、TEA(0.23 mL, 1.6 mmol)。将混合物在30℃下搅拌2小时。冷却至室温之后，将混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到3-氯-5-((1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z 502,504 (M+H)+。
步骤7: 3-氯-5-((1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)- 6-氧代 -4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在室温下向3-氯-5-((1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基) -6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(120 mg, 0.24 mmol)和KI(79.5 mg,0.48 mmol)于乙腈(4 mL)中的混合物中逐滴添加TMSCl(51.7 mg, 0.48 mmol)。添加之后，将混合物在30℃下搅拌3小时。冷却至室温之后，将混合物用MeOH淬灭并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供3-氯-5-((1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基) -1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。1H NMR(DMSO-d6, 400MHz): δ 13.53 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.67-7.72 (m, 4H), 5.10 (s,2H), 1.85-1.90 (m, 3H)。MS (ESI): m/z 488, 490 (M+H) +。
实施例5
磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
通过遵循与实施例7步骤1-2中所述的类似程序制备上述化合物。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) 8.90 (s, 1H), 7.80-7.70 (m, 4H), 5.70 (d, 2H), 5.05 (s, 2H),2.0-1.95 (t, 3H)。MS: 598 (M+H)+。
中间体F
3-氯-5-((6-氧代-1-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1: 6-(溴甲基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮
在室温下向6-甲基-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(2 g, 11.2 mmol)于20 mLCCl4中的混合物中添加NBS (3 g, 17.2 mmol)和过氧化苯甲酰(100 mg)。将所得混合物在回流下加热18小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入冰水中并用二氯甲烷萃取。将合并的萃取物干燥并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(5:1)作为洗脱液)，以提供6-(溴甲基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮。
步骤2: 3-氯-5-((6-氧代-1-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲 基)-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
将3-氯-5-(6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基氧基)苯甲腈 (400 mg,1.27 mmol, 实施例3, 步骤5)、6-(溴甲基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(260 mg, 1.0mmol)和碳酸钾(170 mg, 1.23 mmol)于DMF(6 mL)中的混合物在室温下搅拌18小时。将混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供3-氯-5-((6-氧代-1-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-3-基) 甲基)-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.72 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.02(s, 1H),7.78 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.68 (s,1H), 5.19 (s,2H)。MS (ESI) m/z 492, 494 (M+H)+。
实施例6
(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6H)-基)甲基磷酸酯钠盐。
步骤1: 二-叔丁基((3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1 (6H)-基)甲基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6H)-基)甲基)磷酸酯
向3-氯-5-((6-氧代-1-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(1.5 g, 3.05 mmol)于二氧杂环己烷:DMF(5:1, 25 mL)中的溶液中添加碳酸钾(0.843 g, 6.1 mol)。将反应混合物在室温下搅拌0.5小时。在-30℃下添加磷酸二叔丁酯氯甲酯(1.19 g, 4.58 mmol)。将所得混合物在微波下在40℃下搅拌2.5小时。冷却至室温之后，将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供期望产物二-叔丁基((3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6- 氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6H)-基)甲基)磷酸酯。MS (ESI): m/z 736 (M+Na) +.. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.63-7.74 (m, 3H),5.59 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.21 (s, 2H)。
步骤2: (3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲 基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6H)-基)甲基磷酸酯钠盐
向二-叔丁基((3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6H)-基)甲基)磷酸酯(260 mg, 0.36 mmol)于二氯甲烷(7 mL)中的溶液中添加CF3COOH(0.14 mL)于二氯甲烷(0.5 mL)中的溶液。在室温下搅拌2小时之后，将混合物在真空中浓缩。将残余物溶解于甲醇(5 mL)中，然后添加甲醇(0.6 mL)中的乙酸钠(59.8 mg, 0.73 mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物冻干，并将固体用甲醇洗涤，并在真空中干燥，以提供(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6H)-基)甲基磷酸酯钠盐。1H NMR (DMSO&D2O, 400 MHz) δ 8.65 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.60-7.69 (m,3H), 5.59 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.14 (s, 2H)。
中间体G
3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基) -6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1: 2-(4-氟苯基)-2-氧代乙酸乙酯
向用惰性氮气气氛吹扫并维持的10-L圆底烧瓶中放置草酸二乙酯(360 g, 2.46mol, 1.00当量)于四氢呋喃(3000 mL)中的溶液。其随后在-78℃下在搅拌下在2.5小时内逐滴添加4-氟苯基溴化镁于四氢呋喃中的溶液(1.9 L, 1 N 0.78当量)。将所得溶液在-78℃下搅拌30分钟，然后缓慢温热至-20℃。然后通过添加500 mL的 2 M HCl来淬灭反应物。将所得溶液用2 × 500 mL乙酸乙酯萃取，并合并有机层。将所得混合物用2 × 200 mL盐水洗涤。将混合物经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将粗产物通过在减压(5 mmHg)下蒸馏来纯化，并在106℃下收集馏分，以提供2-(4-氟苯基)-2-氧代乙酸乙酯。
步骤2:5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-(4-氟苯基)-2-羟基-4-氧代戊酸乙 酯
向用惰性氮气气氛吹扫并维持的250-mL密封管中放置2-(4-氟苯基)-2-氧代乙酸乙酯(55 g, 280 mmol, 1.00当量)、1-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]丙-2-酮(110 g,352 mmol, 1.26当量)、乙酸(33 g, 550 mmol, 1.96当量)、吡咯烷(7.8 g, 93 mmol,0.33当量)。将所得溶液在85℃下搅拌过夜，然后施加至硅胶柱上，使用乙酸乙酯/石油醚(1:60-1:10)，以得到5-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]-2-(4-氟苯基)-2-羟基-4-氧代戊酸乙酯。
步骤3: 6- [[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-4-(4-氟苯基)-2,3-二氢哒 嗪 -3-酮
向用惰性氮气气氛吹扫并维持的1000-mL 4-颈圆底烧瓶中放置5-[(叔丁基二苯基甲硅烷基) 氧基]-2-(4-氟苯基)-2-羟基-4-氧代戊酸乙酯(292 g, 574 mmol)于乙酸(520 mL)中的溶液。其随后在低于30℃下在30分钟内在搅拌下逐滴添加肼水合物(115 g,2.30 mol)。将所得溶液在室温下搅拌3小时，然后加热至80℃，持续2小时。然后将反应混合物倒入2000 mL水/冰中。将所得溶液用3 × 1000 mL乙酸乙酯萃取，并合并有机层。将所得混合物用2000 mL 的5%NaHCO3和1000 mL盐水洗涤。将混合物经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将粗产物通过从正己烷重结晶来纯化，以提供6-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-4-(4-氟苯基)-2,3-二氢哒嗪-3-酮。
步骤4: 6-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-4-(4-氟苯基)-2-(氧杂环己 烷-2-基（oxan-2-yl）)- 2,3-二氢哒嗪-3-酮
向用惰性氮气气氛吹扫并维持的2000-mL圆底烧瓶中放置6-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基] -4-(4-氟苯基)-2,3-二氢哒嗪-3-酮(150 g, 327 mmol, 1.00当量)于甲苯(1.2 L)中的溶液、3,4-二氢-2H-吡喃(80 g, 951 mmol, 2.91当量)、PPTS(15 g,59.8 mmol, 0.18当量)。将所得溶液在90℃下搅拌5小时。向其中添加额外的DHP (55 g,654 mmol)，并将混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，然后倒入1000 mL的5% NaHCO3中。将所得溶液用2 × 500 mL乙酸乙酯萃取，并合并有机层。将所得混合物用500 mL盐水洗涤。将混合物经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。这提供(粗制) 6-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-4-(4-氟苯基)-2-(氧杂环己烷-2-基)-2,3-二氢哒嗪-3-酮。
步骤5: 4-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-(氧杂环己烷-2-基)-2,3-二氢哒嗪-3- 酮
向用惰性氮气气氛吹扫并维持的2000-mL圆底烧瓶中放置6-[[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基]-4-(4-氟苯基)-2-(氧杂环己烷-2-基)-2,3-二氢哒嗪-3-酮(220 g,324 mmol, 1.00当量, 80%)于四氢呋喃(1.1 L)中的溶液。其随后在20℃下在5分钟内分批添加TBAF (87 g, 333 mmol, 1.03当量)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟，然后倒入1000mL的5% NaHCO3中。将所得溶液用2 × 500 mL乙酸乙酯萃取，并合并有机层。将所得混合物用1000 mL盐水洗涤。将混合物经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物施加至硅胶柱上，使用乙酸乙酯/石油醚(1:10-1:1)，以提供4-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-(氧杂环己烷-2-基)-2,3-二氢哒嗪-3-酮。MS (ESI) m/z 305 (M+H)+。
步骤6: 6-(溴甲基)-4-(4-氟苯基)-2-(四氢-2H-吡喃- 2-基)哒嗪-3(2H)-酮
在0℃下向4-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-(四氢-2H- 吡喃-2-基)哒嗪-3(2H)-酮(10 g, 32.9 mmol)于DCM(40 mL)中的搅拌溶液中添加四溴化碳(13.08 g, 39.4mmol)，随后缓慢添加三苯基膦(10.34 g, 39.4 mmol)于DCM(10 mL)中的溶液。将所得混合物在0℃下搅拌1小时，然后在减压下浓缩。将二***(500 mL)添加至粗混合物，并过滤出固体。将滤液在减压下浓缩，并将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/己烷(0％-60％)作为洗脱液)，以提供6-(溴甲基)-4-(4-氟苯基)- 2-(四氢-2H-吡喃- 2-基)哒嗪-3(2H)-酮。MS (ESI) m/z 367, 369 (M+H)+。
步骤7: 3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,6 -二 氢哒嗪-3-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在0℃下向6-(溴甲基)-4-(4-氟苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-2-基) 哒嗪-3(2H)-酮(10.59 g, 28.8 mmol)和3-氯-5-((6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6- 二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(9.10 g, 28.8 mmol, 实施例3, 步骤5)于DMF (35 mL)中的混合物中添加DIPEA(6.55 mL, 37.5 mmol)。30分钟之后，将反应混合物温热至室温，并继续搅拌额外1小时。将混合物在减压下浓缩并添加水(200 mL)。将所得沉淀物通过过滤收集，并用水(2 × 50mL)、随后二***(3 × 50 mL)洗涤，以提供3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z 601, 602 (M+H)+。
步骤8: 3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-6-氧 代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
将3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-2-基) -1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基) 苯甲腈(15.78 g,26.2 mmol)于TFA(40.4 mL, 524 mmol)中的溶液在室温下搅拌1小时。在减压下去除TFA并添加二***(250 mL)。将所得固体通过过滤收集，并用二***(2 × 125 mL)洗涤，以提供3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z 518, 520 (M+H)+ ; 1H NMR: (DMSO-d6,400 MHz) δ 13.13 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.87 (t, J =6.8 Hz, 2H), 7.62-7.72(m, 4H), 7.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 5.14 (s, 2H)。
实施例7
磷酸二氢(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯。
步骤1: 二叔丁基((3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1 (6H)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲基)磷酸酯
在0℃下向3-氯-5-((1-((5-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢哒嗪-3-基)甲基)-6-氧代-4-(三氟甲基)-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(250 mg, 0.48 mmol)和碘化钠(94mg, 0.63 mmol)于THF(3.8 mL)中的浆料中添加叔丁醇锂(1M，在THF中)(0.56 mL, 0.56mmol)，随后添加磷酸二叔丁酯氯甲酯(0.13 mL 0.63 mmol)。将反应混合物温热至室温，并进一步搅拌16小时。在反应完成时，将其冷却至0℃，并用几滴水来淬灭。通过旋转蒸发来去除溶剂，保持水浴的温度不超过25℃。将残余物溶解于DCM (25 mL)中，并用饱和NaHCO3 (1x 5 ml)、盐水(1 x 5 ml)洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩，保持水浴的温度不超过25℃，以提供二-叔丁基((3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲基)磷酸酯，其未经纯化即用于下一步骤。
步骤2: 磷酸二氢(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1 (6H)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
在0℃下向二-叔丁基((3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲基)磷酸酯(357 mg, 0.48mmol)于二氯甲烷(5.8 mL)中的粗溶液中添加三氟乙酸(149 µl, 1.932 mmol)。将反应混合物温热至环境温度，并进一步搅拌16小时。在反应完成时，将混合物过滤并通过反相HPLC纯化(ACN/具有有0.1％ TFA改性剂的水)，以提供磷酸二氢(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6H)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯。MS: 628 (M+H)+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.76 (s, 1H), 7.71 – 7.86 (m, 6H), 7.33(t, J = 8.7 Hz, 2H), 5.7 1(d, J = 7.7 Hz, 2H), 5.19 (s, 2H)。
中间体H
3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
步骤1:4,4-二氟-3-氧代戊酸乙酯
在-78℃下在N2保护下向化合物2,2-二氟丙酸乙酯(10.6 g, 76.8 mmol)和乙酸乙酯(8.11 g, 92.1 mmol, 经MgSO4干燥)于THF(100 mL)中的溶液中添加LiHMDS(92 mL,92.1 mmol)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后将混合物在20℃下搅拌另外1.5小时。用HCl溶液(1 N)缓慢淬灭反应物。将混合物用EtOAc (100 mL x 3)萃取，用盐水(200 mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供期望产物。残余物未经进一步纯化即直接使用。
步骤2:6-(1,1-二氟乙基)嘧啶-4(3H)-酮
将乙酸甲脒(formimidamide acetate)(16.0 g, 153.6 mmol)和甲醇钠(16.6 g,307 mmol)于甲醇(140 mL)中的溶液在室温下搅拌20分钟，然后添加4,4-二氟-3-氧代戊酸乙酯(14 g 粗品, 76.8 mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌14小时。冷却至室温之后，将混合物用水(200 mL)稀释，用EtOAc (200 mL x 3)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供期望产物。1HNMR: (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1H), 6.77 (s,1H), 1.90 (t, J = 18.8 Hz, 3H)。MS (ESI) m/z 161.21 (M+H)+。
步骤3:5-溴-6-(1,1-二氟乙基)嘧啶-4(3H)-酮
将化合物6-(1,1-二氟乙基)嘧啶-4(3H)-酮(9.5 g, 59 mmol)和乙酸钾(11.6 g,119 mmol)于乙酸(100 mL)中的溶液在室温下搅拌30分钟，然后在室温下逐滴添加Br2 (11.2 g, 71 mmol)。将所得混合物在回流下搅拌2小时。冷却至室温之后，将混合物用Na2SO3(饱和)淬灭，直到颜色变为浅黄色，并用EA (200 mL x 3)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供期望产物。MS (ESI) m/z 238.8, 240.8 (M+H)+。
步骤4:5-溴-6-(1,1-二氟乙基)-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-4(3H)-酮
向化合物5-溴-6-(1,1-二氟乙基)嘧啶-4(3H)-酮(15.0 g, 59 mmol)于DMF(150mL)中的溶液中添加K2CO3 (17.4 g,126 mmol)和PMBCl (108. g, 69 mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌3小时。冷却至室温之后，将混合物用H2O (100 mL)稀释，并用EtOAc (200 mLx 3)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE/EA=10/1至5/1)，以提供期望产物。1HNMR: (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H),7.96 (s, 1H), 7.28 (d, 2H, J=8.4 Hz), 6.85 (s, 2H, J=8.4 Hz), 5.04 (s, 2H),3.75 (s, 2H), 1.92 (t, J=18.4 Hz, 3H)。MS (ESI) m/z 359.1, 361.1 (M+H)+。
步骤5:3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶 -5-基)氧基)苯甲腈
向化合物5-溴-6-(1,1-二氟乙基)-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-4(3H)-酮(3.0 g,8.56 mmol)于NMP(50 mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.31 g, 16.70 mmol)和3-氯-5-羟基苯甲腈(3.86 g, 25.07 mmol)。将混合物加热至140℃持续6小时，然后冷却至130℃，将混合物在130℃下搅拌过夜。冷却之后，将混合物用水(200 mL)稀释，并用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(20:1至8:1)作为洗脱液)，以得到3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。
MS (ESI) m/z 432, 434 (M+H)+。
步骤6: 3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
将3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(10 g, 23.2 mmol)于混合溶剂(TFA/TFAA = 48 mL/24 mL)中的溶液在100℃下搅拌4小时。冷却至室温之后，将混合物在减压下浓缩，以得到粗产物3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈，其未经进一步纯化即使用。MS(ESI) m/z 312, 314 (M+H)+。
步骤7: 3-(1-乙氧基乙烯基)-6-甲氧基哒嗪
在氮气气氛下向3-氯-6-甲氧基哒嗪(15 g, 103.8 mmol)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(82.44 g, 228.3 mmol)于甲苯(200 mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4 (6 g, 5.19mmol)。将所得悬浮液用氮气吹扫三次，然后在110℃下搅拌36小时。冷却至室温之后，将混合物倒入冰水中，过滤通过Celite®垫。将滤液用乙酸乙酯萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(15:1至10:1)作为洗脱液)，以提供期望产物3-(1-乙氧基乙烯基)-6-甲氧基哒嗪。MS(ESI) m/z 181 (M+H)+。
步骤8: 1-(6-甲氧基哒嗪-3-基)乙酮
在0℃下向3-(1-乙氧基乙烯基)-6-甲氧基哒嗪(12 g, 66.59 mmol)于1,4-二氧杂环己烷(120 mL)中的溶液中逐滴添加HCl/1,4-二氧杂环己烷(24 mL, 4 M)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(10:1至8:1)作为洗脱液)，以提供1-(6-甲氧基哒嗪-3-基)乙酮。MS (ESI) m/z 153 (M+H)+。
步骤9: 3-(1,1-二氟乙基)-6-甲氧基哒嗪
在0℃下向1-(6-甲氧基哒嗪-3-基)乙酮(4.2 g, 27.6 mmol)于二氯甲烷(45 mL)中的溶液中逐滴添加DAST (13.35 mg, 82.81 mmol)。将混合物在40 ℃下搅拌24小时。冷却至室温之后，将混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(15:1至10:1)作为洗脱液)，以提供3-(1,1-二氟乙基)-6-甲氧基哒嗪。MS (ESI) m/z 175 (M+H)+。
步骤10: (6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇
向叔丁氧基-乙酸(4.23 g, 32.04 mmol)于TFA/水(20 mol%, 30 mL)中的混合物中添加3-(1,1-二氟乙基)-6-甲氧基哒嗪(3.1 g, 17.8 mmol)和AgNO3(303 mg, 1.78 mmol)。将混合物在室温下在搅拌下用氮气吹扫，然后将混合物加热至70℃，并逐滴添加水(40 mL)中的(NH4)2S2O8 (8.12 g, 35.6 mmol)。添加之后，将混合物在75℃下搅拌40分钟。冷却至室温之后，将混合物用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供粗产物。将4-(叔丁氧基甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪于TFA/DCE (10 mL/40 mL)中的溶液在60℃下搅拌1小时。冷却至室温之后，将混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(20 mL)中，用碳酸钾水溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯(8:1至5:1)作为洗脱液)，以提供(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇。MS(ESI) m/z 205 (M+H)+。
步骤11: 4-(氯甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪
在0℃下向(6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲醇(180 mg, 0.88 mmol)于二氯甲烷(3 mL)中的溶液中添加三乙胺(268 mg, 2.64 mmol)和甲磺酰氯(303 mg,2.64 mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时，用水淬灭并用二氯甲烷萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚/乙酸乙酯(2:1)作为洗脱液)，以提供4-(氯甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪。MS (ESI) m/z 223(M+H)+。
步骤12: 3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪- 4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
向3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈 (500mg, 1.60 mmol)于DMF (2 mL)中的溶液中添加碳酸钾(443 mg, 3.21 mmol)和4-(氯甲基)-6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪(如实施例178的步骤1-5中所述)(82 mg, 0.27mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。冷却至室温之后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(石油醚/EtOAc = 1:1)纯化，以提供期望产物3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。MS (ESI) m/z498, 500 (M+H)+。
步骤13: 3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-氧代-2,3-二 氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈
在室温下向化合物3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-甲氧基哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈(250 mg, 0.50 mmol)和KI(166 mg, 1.0 mmol)于乙腈(3 mL)中的混合物中添加TMSCl (109 mg, 1 mmol)。将所得混合物加热并在70℃下搅拌1小时。冷却至室温之后，将混合物用EtOAc稀释，并用Na2S2O3水溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，以提供3-氯-5-((4-(1,1-二氟乙基)-1-((6-(1,1-二氟乙基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-基)甲基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-5-基)氧基)苯甲腈。1H NMR (甲醇–d 4, 400 MHz) : δ 8.60(s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.07 (s,2H), 1.92 (m, 6H)。MS (ESI) m/z 484, 486 (M+H)+。
实施例8
磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-4-(1,1-二氟乙基)-6-氧代嘧啶-1(6H)-基)甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)甲酯
通过遵循与实施例7步骤1-2中所述的类似程序制备上述化合物。1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.68 (s, 1H), 7.61 – 7.75 (m, 4H), 5.70 (d, J = 8.2 Hz, 2H),5.06 (s, 2H), 1.90 – 1.99 (m, 6H)。MS: 594 (M+H)+。
HIV-1逆转录酶抑制活性的测定
通过将DNA引物（primer）、生物素化的pD500(Sigma Aldrich, USA, 5'-生物素--ttg aaa tga ctg cgg tac ggc-3’) (SEQ ID NO: 1)退火（annealing）至核苷酸RNA模板t500(源自丙型肝炎病毒[HCV]序列，IBA, Germany，5' – GAG GUU CAG GUG GUU UCC ACCGCA ACA CAA UCC UUC CUG GCG ACC UGC GUC AAC GGC GUG UGU UGG ACC GUU UAC CAUGGU GCU GGC UCA AAG ACC UUA GCC GGC CCA AAG GGG CCA AUC ACC CAG AUG UAC ACUAAU GUG GAC CAG GAC CUC GUC GGC UGG CAG GCG CCC CCC GGG GCG CGU UCC UUG ACACCA UGC ACC UGU GGC AGC UCA GAC CUU UAC UUG GUC ACG AGA CAU GCU GAC GUC AUUCCG GUG CGC CGG CGG GGC GAC AGU AGG GGG AGC CUG CUC UCC CCC AGG CCU GUC UCCUAC UUG AAG GGC UCU UCG GGU GGU CCA CUG CUC UGC CCU UCG GGG CAC GCU GUG GGCAUC UUC CGG GCU GCC GUA UGC ACC CGG GGG GUU GCG AAG GCG GUG GAC UUU GUG CCCGUA GAG UCC AUG GAA ACU ACU AUG CGG UCU CCG GUC UUC ACG GAC AAC UCA UCC CCCCCG GCC GUA CCG CAG UCA UUU CAA-3'), (SEQ ID NO: 2)而生成在HIV-1 RT聚合酶反应中使用的异二聚体核酸底物。将HIV-1 RT野生型酶(83 pM的最终浓度)与抑制剂或二甲亚砜(DMSO，在最终的反应混合物中的10%)在测试缓冲液(62.5 mM Tris-HCl[pH7.8]、1.25mM二硫苏糖醇、7.5 mM MgCl2、100 mM KCl、0.03% CHAPS和125µM EGTA)中组合。然后，在微量滴定板(Costar 3365, Corning, USA)中，将混合物在定轨振荡器上在室温下预培育30分钟。通过添加RNA模板/pD500 DNA引物杂合物(RNA/DNA杂合物最终为16.6 nM)和dNTPs(2µM dATP、dGTP、dCTP和66.6 nM Ru-dUTP(Meso Scale Discovery, USA))而引发聚合反应。将板密封，并在定轨振荡器上在室温下培育5-10分钟。然后，将板在37℃下培育90分钟，并用60µl淬灭缓冲液(50 mM EDTA、0.7% BSA、0.7% Tween-20、PBS中的0.017%叠氮化钠)淬灭反应物。将所得溶液在室温下培育额外5分钟，然后将50µL转移至预先封闭的Avidin板(L15AA, Meso Scale Discovery)中。在室温下，用100µL PBS中的5% BSA将Avidin板的每个孔封闭1小时。通过在滤纸上剧烈拍击而去除封闭溶液，以去除所有过量液体。在预先封闭的抗生物素蛋白板上的反应在室温下进行60分钟，然后通过在滤纸上剧烈拍击去除内容物，以去除所有过量液体。用150µL 1X PBS洗板3次并在循环之间印迹干燥之后，添加150µL1X读取缓冲液T(4X读取缓冲液T, Meso Scale Discovery)，并在室温下培育5分钟，然后在Sector Imager S6000(Meso Scale Discovery)上计数。根据标准程序，使用四参数逻辑拟合法计算滴定曲线和IC50值。简而言之，%抑制=100 x((样品原始值)-(低对照或0%抑制的平均值))/((代表100%抑制的孔的平均值)-(0%抑制的平均值))。在该测定中，低对照孔含有DMSO (0%抑制)，且100%抑制孔含有1µM依法韦仑(efavirenz)。
上述测定中测试的本发明化合物的结果显示于下表2中。
表2
以下的母体化合物： IC<sub>50 </sub>(nM)
实施例编号1 6.0
实施例编号2 3.3
实施例编号3 2.7
实施例编号4 3.2
实施例编号5 4.6
实施例编号6 7.9
实施例编号7 3.7
实施例编号8 4.7
药代动力学研究
所有动物研究都在非临床实验室研究的良好实验室操作规程下实施。所有动物圈养和护理程序都遵循联邦动物福利法案和实验动物资源研究所(Federal Animal WelfareAct and the Institute for Laboratory Animal Resources)。对动物实施的所有程序都由机构动物护理和使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee)审查和批准。动物设施由实验室动物护理国际评估和认证协会(Association for Assessmentand Accreditation of Laboratory Animal Care International)完全认证。
从Charles River (Raleigh, North Carolina, U.S.A.)获得两只或三只称重为250至350克的雄性Wistar-Hannover大鼠，其具有供应商放置的颈动脉导管。使动物在通风塑料笼中适应12小时光:暗循环最少三天，其随意获得食物和水。以最长达24小时的指定时间间隔使用Instech自动采血仪(ABS, Plymouth Meeting, PA)自动收集血液样品，并在24小时后手动收集。
将动物禁食过夜，然后经由口服管饲法以表3中指定的剂量和在媒介物中向大鼠给药实施例1-8(式I’)的母体化合物或实施例1至8(式I)的化合物。使动物随意获得水，而在给药后4小时返回食物。
在给药前和所有化合物给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12、18、24、30和48小时以及额外地实施例1、3、4、5和7的化合物给药后72小时，从置于颈静脉中的导管抽取血液。通过离心(10000 rpm，2分钟)分离血浆并储存在70℃下，直至进一步分析。
使用液相色谱和串联质谱法(LC-MS/MS)进行化合物的定量分析。在提取之前根据需要稳定血浆样品。在Hamilton工作站上使用自动化蛋白沉淀程序提取五十微升的每种未知物连同标准品和质量控制样品。离心提取物并转移上清液用于分析。通过Thermo AriaLX-2 LC***在反相柱(例如Waters XSelect HSS T3 XP (50 x 2.1mm x 2.5u)或Phenomenex Beta测试柱(50 x 2.1 mm))上实现分离。使用选择的反应监测(SRM)方法通过AB Sciex API5000质谱仪以正或负电离模式检测化合物。此外，用基线至基线分离色谱拆分实施例1-8(式I’)的母体化合物和实施例1至8(式I)的化合物的色谱峰。
使用非房室法(Watson®)获得药代动力学参数。使用线性梯形或线性/对数线性梯形规则以可测量的药物浓度(即，给药每种母体和实施例化合物之后获得的母体(式I’化合物)的浓度)从第一时间点(0分钟)直至最后时间点计算血浆浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)。通过将在最后时间点观察到的浓度除以消除速率常数来估计剩余的血浆浓度-时间曲线下面积(AUCt-∞)。将该值添加至AUC0-t以估计AUC0-∞。通过检查血浆浓度-时间数据获得最大血浆浓度(Cmax)和最大浓度出现的时间(Tmax)。
表3提供这些研究中获得的AUC值。在表3中，每个实施例编号的母体是指所述实施例编号化合物的母体对应化合物，其中R4被-H替代。
表3 - PK研究的结果
剂量 大鼠AUC<sub> (0-∞)</sub> 媒介物
实施例1 6.2 mg/kg PO 14.3 μM•小时 0.5%甲基纤维素
实施例2的母体 5 mg/kg PO 15.3 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例2 6.25 mg/kg PO 16.0 μM•小时 0.5%甲基纤维素
实施例3的母体 5 mg/kg PO 10.2 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例3 6.2 mg/kg PO 14.0 μM•小时 0.5%甲基纤维素
实施例4的母体 5 mg/kg PO 21.0 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例4 6.2 mg/kg PO 15.0 μM•小时 0.5%甲基纤维素
实施例5的母体 5 mg/kg PO 29.1 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例5 6.2 mg/kg PO 28.2 μM•小时 0.5%甲基纤维素
实施例6的母体 5 mg/kg PO 2.0 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例6 6.6 mg/kg PO 5.7 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例7的母体 5 mg/kg PO 8.2 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例7 6.2 mg/kg PO 11.6 μM•小时 0.5%甲基纤维素
实施例8的母体 5 mg/kg PO 13.9 μM•小时 40% PEG400/10% Tween-80/50%水
实施例8 5 mg/kg PO 21.6 μM•小时 0.5%甲基纤维素
尽管前述说明书教导本发明的原理(其中实施例出于举例说明的目的提供)，但本发明的实践涵盖随附权利要求书的范围内的所有通常变化、改编和/或修改。权利要求中无指定特定立体构型或少于全部手性中心具有此类指定的特定化合物(即物质)的记载或描述意欲涵盖化合物的外消旋物、外消旋混合物、各个别对映异构体、非对映异构混合物和各个别非对映异构体，其中此类形式由于存在一个或多个不对称中心而是可能的。本文引用的所有出版物、专利和专利申请均以其整体通过引用并入本公开。

Claims (20)

1.结构式I的化合物或其药学上可接受的盐：
I，其中R1是；
R2是卤素或被1至3个-F取代的-C1-3烷基；
R3是(a)卤素，(b)被1至3个-F取代的-C1-3烷基，或(3)被卤素取代的苯基；且
R4是。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐 ，
其中R1是 。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐 ，
其中R1是。
4.权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是被1、2或3个-F取代的甲基；或被1、2或3个-F取代的乙基。
5.权利要求4的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是-CHF2、-CF3或-CF2CH3。
6.权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R3是-F；-Cl；被1、2或3个-F取代的甲基；被1、2或3个-F取代的乙基；或被-F取代的苯基。
7.权利要求6的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R3是-Cl、-CHF2、-CF3、-CF2CH3或被-F 取代的苯基。
8.权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，
其中R4是：
, 或 ，
其中X+和X2+是正抗衡离子。
9.权利要求1至3或8中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
R2是-CHF2、-CF3或-CF2CH3；
R3是-Cl、-CHF2、-CF3、-CF2CH3或被-F 取代的苯基；且
R4是。
10.权利要求1的化合物，其为：
1) 磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-4-(二氟甲基)-6-氧代嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-3-(二氟甲基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯； 2) 磷酸二氢(3-氯-5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-4-(二氟甲基)-6-氧代嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯； 3) 磷酸二氢3-氯-5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯 4) 磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-3-(二氟甲基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯； 5) 磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯； 6) 磷酸二氢(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-6-氧代-5-(三氟甲基)哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯 7) 磷酸二氢(3-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-6-氧代-4-(三氟甲基)嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-5-(4-氟苯基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯；或 8) 磷酸二氢(5-((5-(3-氯-5-氰基苯氧基)-4-(1,1-二氟乙基)-6-氧代嘧啶-1(6<i>H</i>)-基)甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-6-氧代哒嗪-1(6<i>H</i>)-基)甲酯；
或其药学上可接受的盐。
11.药物组合物，其包含有效量的权利要求1至8或10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
12.药物组合物，其包含有效量的权利要求1至8或10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体，并且进一步包含有效量的选自抗HIV抗病毒剂、免疫调节剂或抗感染剂的抗HIV剂。
13.权利要求12的药物组合物，其中所述抗HIV抗病毒剂是HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV进入抑制剂或HIV成熟抑制剂。
14.权利要求1至8或10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备可用于抑制HIV复制、治疗或预防HIV感染或治疗、预防或延迟AIDS发作的药物中的用途。
15.权利要求1的化合物，其为：
。
16.权利要求1的化合物，其为的药学上可接受的盐。
17.药物组合物，其包含有效量的权利要求15或16的化合物和药学上可接受的载体。
18.药物组合物，其包含有效量的权利要求15或16的化合物和药学上可接受的载体，并且进一步包含有效量的选自抗HIV抗病毒剂、免疫调节剂或抗感染剂的抗HIV剂。
19.权利要求18的药物组合物，其中所述抗HIV抗病毒剂是HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV进入抑制剂或HIV成熟抑制剂。
20.权利要求15或16的化合物在制备可用于抑制HIV复制、治疗或预防HIV感染或治疗、预防或延迟AIDS发作的药物中的用途。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3470B1 (ar) 2012-10-08 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme مشتقات 5- فينوكسي-3h-بيريميدين-4-أون واستخدامها كمثبطات ناسخ عكسي ل hiv
US10004740B2 (en) 2014-04-01 2018-06-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Prodrugs of HIV reverse transcriptase inhibitors
CN106008362B (zh) * 2016-05-24 2018-08-10 杰达维（上海）医药科技发展有限公司 一种嘧啶衍生物的制备方法
JP7253498B2 (ja) 2017-12-22 2023-04-06 住友化学株式会社 複素環化合物及びそれを含有する有害節足動物防除剤
CR20210317A (es) * 2018-12-18 2021-07-14 Merck Sharp & Dohme Derivados de pirimidona como agentes citotóxicos selectivos contra células infectadas por vih
BR112021016488A2 (pt) 2019-02-20 2021-10-26 Sumitomo Chemical Company, Limited Composto de éter e composição de controle de artrópode nocivo contendo o mesmo
KR20220011673A (ko) * 2019-05-22 2022-01-28 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Hiv 감염된 세포에 대한 선택적 세포독성제로서의 피리디논 유도체
WO2022208370A1 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Pi Industries Ltd. Fused heterocyclic compounds and their use as pest control agents

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000003998A1 (en) * 1998-07-17 2000-01-27 Novirio Pharmaceuticals Limited Substituted 6-benzyl-4-oxopyrimidines, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US20050065145A1 (en) * 2003-09-08 2005-03-24 Syrrx, Inc. Dipeptidyl peptidase inhibitors
US20130040914A1 (en) * 2010-04-08 2013-02-14 Samson M. Jolly Prodrugs of an hiv reverse transcriptase inhibitor

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5519021A (en) 1992-08-07 1996-05-21 Merck & Co., Inc. Benzoxazinones as inhibitors of HIV reverse transcriptase
SE9904045D0 (sv) 1999-11-09 1999-11-09 Astra Ab Compounds
AP2065A (en) 2003-02-07 2009-11-26 Janssen Pharmaceutica Nv Pyrimidine derivatives for the prevention of HIV infection
TW200423930A (en) 2003-02-18 2004-11-16 Hoffmann La Roche Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
TW200505441A (en) 2003-03-24 2005-02-16 Hoffmann La Roche Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitorsⅠ
JP4485520B2 (ja) 2003-03-24 2010-06-23 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 逆転写酵素阻害剤としてのベンジル−ピリダジノン類
US7288942B2 (en) * 2003-10-02 2007-10-30 Naoyuki Sato Plasma potential measuring method and apparatus, and plasma potential measuring probe
CN1934093A (zh) 2004-01-12 2007-03-21 吉里德科学公司 嘧啶基膦酸酯抗病毒化合物和使用方法
EP1730120A1 (en) 2004-03-23 2006-12-13 F.Hoffmann-La Roche Ag Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
US7166738B2 (en) 2004-04-23 2007-01-23 Roche Palo Alto Llc Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
DK1742908T3 (da) 2004-04-23 2010-01-18 Hoffmann La Roche Ikke nukleosid revers transkriptase inhibitorer
CA2592092A1 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Pfizer Limited Nonnucleoside inhibitors of hiv-1 reverse transcriptase
AR057455A1 (es) 2005-07-22 2007-12-05 Merck & Co Inc Inhibidores de la transcriptasa reversa de vih y composicion farmaceutica
BRPI0617720A2 (pt) 2005-10-19 2011-08-02 Hoffmann La Roche compostos inibidores de nnrt de fenil-acetamida, usos dos referidos compostos e composição farmacêutica que os contém
WO2007045572A1 (en) 2005-10-19 2007-04-26 F. Hoffmann-La Roche Ag N-phenyl phenylacetamide non-nucleoside reverse transcriptase inihibitors
US7803940B2 (en) 2006-11-24 2010-09-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heteromonocyclic compound or a salt thereof having strong antihypertensive action, insulin sensitizing activity and the like production thereof and use thereof for prophylaxis or treatment of cardiovascular diseases, metabolic diseases and/or central nervous system diseases
BRPI0719060A2 (pt) 2006-11-24 2014-02-04 Takeda Pharmaceutical Composto, prodroga, agente farmacêutico, métodos para inibir um receptor de angiotensina ii e/ou ativar um receptor ativado com proliferador de peroxisoma, e para prevenir ou tratar doenças ou condições, e, uso de um composto
TW200831085A (en) 2006-12-13 2008-08-01 Merck & Co Inc Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
US8404253B2 (en) 2006-12-28 2013-03-26 Newport Laboratories, Inc. Modified live (JMSO strain) Haemophilus parasuis vaccine
DE102007032507A1 (de) * 2007-07-12 2009-04-02 Merck Patent Gmbh Pyridazinonderivate
RU2010125220A (ru) * 2007-11-20 2011-12-27 Мерк Шарп Энд Домэ Корп. (Us) Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы
CN101918372B (zh) 2008-01-08 2014-03-26 默沙东公司 用于制备n-取代的羟基嘧啶酮羧酰胺类化合物的方法
MX2012011379A (es) 2010-03-30 2012-11-30 Merck Canada Inc Inhibidores no nucleosidicos de la transcriptasa inversa.
JO3470B1 (ar) * 2012-10-08 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme مشتقات 5- فينوكسي-3h-بيريميدين-4-أون واستخدامها كمثبطات ناسخ عكسي ل hiv
US10004740B2 (en) 2014-04-01 2018-06-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Prodrugs of HIV reverse transcriptase inhibitors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000003998A1 (en) * 1998-07-17 2000-01-27 Novirio Pharmaceuticals Limited Substituted 6-benzyl-4-oxopyrimidines, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US20050065145A1 (en) * 2003-09-08 2005-03-24 Syrrx, Inc. Dipeptidyl peptidase inhibitors
US20130040914A1 (en) * 2010-04-08 2013-02-14 Samson M. Jolly Prodrugs of an hiv reverse transcriptase inhibitor

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