CN106432412A - 一种采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及丙氨酰谷氨酰胺生产技术领域,尤其涉及丙氨酰谷氨酰胺的分离提纯技术领域,公开了一种采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,首先将灭活后的转化液中的可见杂质通过抽滤或离心分离等方法去除,得到澄清的转化液;再将所得澄清的转化液依次通过两次树脂,进行杂质的吸附处理,收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液,再进行溶媒结晶,分离得到丙氨酰谷氨酰胺粗品。本发明方法具有操作方便、提取所得粗品纯度高的优点,适于规模化生产应用。
Description
技术领域
本发明涉及丙氨酰谷氨酰胺生产技术领域,尤其涉及丙氨酰谷氨酰胺的分离提纯技术领域。
背景技术
丙氨酰谷氨酰胺又称丙谷二肽,分子式为C8H15N3O4,是白色或类白色的疏松块状物。丙氨酰谷氨酰胺是肠外营养的一个组成部分,适用于需要补充谷氨酰胺的病人,比如处于分解代谢或高代谢状况的病人。
目前,丙氨酰谷氨酰胺已经可以采用酶促合成方法进行生产,这种合成方法是使用生物酶作为催化剂,能够快速高效地合成丙氨酰谷氨酰胺,相对于传统的化学合成法,酶促合成方法工艺简洁、成本低廉,因此,目前酶促合成丙氨酰谷氨酰胺的方法已经得到大量应用。
但是,使用酶促法得到的丙氨酰谷氨酰胺转化液中不仅夹杂有反应原料和反应副产物,还含有大量生物酶,对于这种转化液使用传统的分离方法效果并不理想,从而造成最终的丙氨酰谷氨酰胺产品质量较差,这就降低了酶促合成方法在丙氨酰谷氨酰胺合成领域中的应用价值。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术的不足,提供一种采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,能够从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,具有操作方便、提取所得粗品纯度高的优点,适于规模化生产应用。
为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案是:一种采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,其包含如下步骤:
(1)将灭活后的转化液中的可见杂质分离去除,得到澄清的转化液;
(2)将所得澄清的转化液通过WA30大孔树脂,进行第一次树脂吸附处理,收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液;
(3)将步骤(2)所得流出液通过JK008树脂,进行第二次树脂吸附处理,收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液;
(4)向步骤(3)所得流出液中加入溶媒,使丙氨酰谷氨酰胺结晶析出,然后过滤、干燥,即得丙氨酰谷氨酰胺粗品。
所述WA30大孔树脂是高多孔弱碱性阴离子交换树脂,以苯乙烯/二乙烯苯共聚物为基体,具有再生效率高的叔丁基胺基官能团。作为优选,所用WA30大孔树脂为H型。如三菱化学公司WA30树脂产品。
所述JK008树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂。如安徽三星树脂公司的JK008树脂产品。
所述第一次树脂吸附处理和第二次树脂吸附处理中液体流经树脂的流速均为8~10ml/min。
所述步骤(4)所用溶媒为无水乙醇。
所述流出液包含原始液体流经树脂所得的流出液和使用去离子水顶洗树脂所得到的流出液。
所述步骤(1)中转化液所含可见杂质通过过滤或离心去除。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于:本发明方法采用阴阳离子交换树脂从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,除杂效果明显,且收率较高,具有成本低、操作简单的优点,可用于丙氨酰谷氨酰胺的规模化生产。
具体实施方式
丙氨酸谷氨酰胺是一种带有特殊基团的小分子物质,能够通过特定性质的树脂进行吸附和解析以达到纯化和浓缩的目的。基于此,本发明选用特定的树脂对丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液进行处理,可以达到非常好的分离效果和提纯目的,其在大生产上的应用具有重要意义。
本发明为采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,首先将灭活后的转化液中的可见杂质通过抽滤或离心分离等常规方法去除,得到澄清的转化液;再将所得澄清的转化液依次通过两次树脂,进行杂质的吸附处理,收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液,再进行溶媒结晶,分离得到丙氨酰谷氨酰胺粗品。
其中,两次树脂吸附处理依次序分别采用WA30大孔树脂和008树脂,液体流经树脂的流速均控制在8~10ml/min,料液过流完上述树脂之后,用去离子水顶洗树脂,顶洗树脂流出液含有丙氨酰谷氨酰胺,与料液流出液合并处理。
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
以下各实施例,从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,采用如下步骤:
(1)将转化液在温度为65~90℃、pH=5~9的条件下保持30~45分钟,以对转化液中的酶进行灭活;
(2)将灭活的转化液进行抽滤,分离收集转化液,去除可见杂质;
(3)将预处理后的转化液,经过WA30大孔树脂进行吸附分离,待流出液中检测到有丙氨酰谷氨酰胺时开始收集流出液,待将料液过流完之后用去离子水顶洗WA30树脂,并收集流出液至流出液出口没有丙氨酰谷氨酰胺为止;液体流经树脂的流速均控制在8~10ml/min;
(4)将步骤(3)所收集的含丙氨酰谷氨酰胺流出液再经过008树脂,进行第二次树脂吸附处理,方法同步骤(3),收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液;
(5)将步骤(4)所得含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液浓缩,并流加溶媒,溶媒为无水乙醇,使得丙氨酰谷氨酰胺结晶析出,待结晶完成,过滤并干燥晶体,即得丙氨酰谷氨酰胺粗品。
实施例1
取酶转化液1L,丙氨酰谷氨酰胺含量53g/L,调pH为5.0,在65℃的水浴锅中恒温搅拌30min,用布氏漏斗抽滤分离,得到转化液清液980ml,转化清液流经WA30大孔树脂柱,去除色素和硫酸根,并用200ml纯化水将WA30树脂柱中的料液顶洗干净,收取下柱液A共1080ml,再将下柱液A流经008树脂柱,去除铵根离子,并用200ml纯化水将该树脂柱中的料液顶洗干净,收取下柱液B共1280ml,向下柱液B中加溶媒结晶出丙氨酰谷氨酰,抽滤,干燥得粗粉,经测定其纯度为95.0%,收率85.0%。
实施例2
取酶转化液1.2L,丙氨酰谷氨酰胺含量51.5g/L,调pH为5.0,在70℃的水浴锅中恒温搅拌30min,用布氏漏斗抽滤分离,得到转化液清液1180ml,转化清液流经WA30大孔树脂,去除色素和硫酸根,并用200ml纯化水将树脂柱中的料液顶洗干净,收取下柱液A共1380ml,再将下柱液A流经008树脂柱,去除铵根离子,并用200ml纯化水将树脂柱中的料液顶洗干净,收取下柱液B共1580ml,向下柱液B中加溶媒结晶出丙氨酰谷氨酰,抽滤,干燥得粗粉。经测定其纯度为94.7%,收率84.1%。
实施例3
取酶转化液1L,丙氨酰谷氨酰胺含量52g/L,调pHWie5.0,在65℃的水浴锅中恒温搅拌30min,用布氏漏斗抽滤分离,得到转化液清液980ml,转化清液流经WA30大孔树脂,去除色素和硫酸根,并用200ml纯化水将树脂柱中的料液顶洗干净,收取下柱液A共1080ml,再将下柱液A流经008树脂柱,去除铵根离子,并用200ml纯化水将树脂柱中的料液顶洗干净,收取下柱液B共1280ml,向下柱液B中加溶媒结晶出丙氨酰谷氨酰,抽滤,干燥得粗粉。经测定其纯度为95.0%,收率84.7%。
本发明实施例用以提取纯化丙氨酰谷氨酰胺的树脂交换容量大,树脂处理重复利用率高,在生产上操作方便。
需要指出的是,以上具体实施方式只是本专利实现方案的具体个例,没有也不可能覆盖本专利的所有实现方式,因此不能视作对本专利保护范围的限定;凡是与以上案例属于相同构思的实现方案,均在本专利的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,其特征在于:从丙氨酰谷氨酰胺的酶促合成转化液中提取丙氨酰谷氨酰胺粗品,其包含如下步骤:
将灭活后的转化液中的可见杂质分离去除,得到澄清的转化液;
将所得澄清的转化液通过WA30大孔树脂,进行第一次树脂吸附处理,收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液;
将步骤(2)所得流出液通过JK008树脂,进行第二次树脂吸附处理,收集含有丙氨酰谷氨酰胺的流出液;
向步骤(3)所得流出液中加入溶媒,使丙氨酰谷氨酰胺结晶析出,然后过滤、干燥,即得丙氨酰谷氨酰胺粗品。
2.根据权利要求1所述的采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,其特征在于:所述WA30大孔树脂为H型。
3.根据权利要求1所述的采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,其特征在于:所述第一次树脂吸附处理和第二次树脂吸附处理中液体流经树脂的流速均为8~10ml/min。
4.根据权利要求1所述的采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,其特征在于:所述步骤(4)所用溶媒为无水乙醇。
5.根据权利要求1所述的采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,其特征在于:所述流出液包含原始液体流经树脂所得的流出液和使用去离子水顶洗树脂所得到的流出液。
6.根据权利要求1所述的采用树脂提取丙氨酰谷氨酰胺的方法,其特征在于:所述步骤(1)中转化液所含可见杂质通过过滤或离心去除。
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