CN106417378B - 一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药及制备方法，该农药包括200亿PIB/ml病毒悬液、纳米级二氧化硅、昆虫源氨基酸、芳香族氨基酸、荧光增白剂、木质素磺酸钠、昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲、昆虫几丁质合成抑制剂氟虫脲、***胶、油菜籽油、大豆油甲酯、2万IU/μg苏云金杆菌、无菌水，其制备方法包括：A、广谱杆状病毒的生产；B、生产中出现的死蛾废蛹污染物处理及昆虫源氨基酸提取；C、昆虫病毒制剂制备。本发明提供了一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药，尤其对农业上难以防治的玉米螟等螟虫有较好的防治效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物杀虫制剂及生产方法，更具体涉及一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药，同时还涉及一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药的制备方法，适用于螟虫和其他多种鳞翅目害虫的生物防治。
背景技术
杆状病毒包括甲型杆状病毒、乙型杆状病毒、丙型杆状病毒和丁型杆状病毒四个病毒属，是专一性感染昆虫和其它节肢动物的病毒。甲型杆状病毒是感染鳞翅目害虫的核型多角体病毒，乙型杆状病毒是感染昆虫的颗粒体病毒，丙型杆状病毒是感染膜翅目害虫的核型多角体病毒，丁型杆状病毒是感染双翅目害虫的病毒。杆状病毒可以让感染害虫罹患不治之症死亡。当害虫取食多角体病毒后，多角体蛋白在昆虫中肠强碱性环境下降解，将病毒粒子释放出来，侵入中肠细胞，在细胞核中呈数量级扩增。扩增的病毒粒子随血淋巴循环很快进入不同组织器官，对害虫进行全身性感染。昆虫所有组织被病毒感染后都产生大量病毒粒子，病毒粒子由多角体蛋白包埋，形成多角体，昆虫全身都被病毒多角体占据，虫体液化，只有幼虫的几丁质表皮包裹。病毒感染致死幼虫表皮破裂后，释放出多角体病毒继续感染目标害虫。这样，病毒就可以在害虫之间以及上下代之间进行传播，形成大面积的昆虫病毒病。
杆状病毒杀虫剂具有对目标害虫杀虫效果好，对人畜及其它高等动物安全，不污染环境，不伤害天敌，不易导致害虫产生抗性等诸多优点，国内外已有多种杆状病毒杀虫剂进行了工厂化生产和田间应用，我国也有十多种病毒杀虫剂完成农药登记注册。然而，在实际应用中，杆状病毒杀虫剂存在三个主要缺陷，一是杀虫谱窄，传统上一种昆虫病毒只能感染一种害虫，而田间往往同时发生多种害虫，用一种病毒制剂难以防治；二是昆虫病毒杀虫速度慢，施药后5－10天才看到明显杀虫效果，农民不易接受；三是昆虫病毒对紫外光敏感，在太阳光直射下容易失活。另外，昆虫病毒生产目前还主要依赖活体繁殖的方法生产，通过大量宿主幼虫，当幼虫长到四龄时，5-8％的幼虫继续在无病毒环境下饲养、化蛹、羽化成蛾交配产卵，繁殖下一代幼虫进行昆虫传代和病毒生产。92-95％的四龄幼虫接种病毒感染，大多数感染幼虫感染后5-10天死亡，病毒致死虫尸中充满病毒颗粒，收集虫尸提取病毒制备生物生物农药。在大规模工厂化生产中，大量成虫蛾子交配产卵后死亡，成为废物需要处理。病毒生产中为了获得较大病毒产量，常使用较大虫龄幼虫感染病毒生产，致使有3-8％的幼虫感染后不能致死而化蛹，这些蛹不能用于健康幼虫传代，也没有生产病毒的价值，因为蛹体内病毒含量极低，这些蛹只能作为废物丢弃。在昆虫病毒杀虫剂的生产和应用发展中，需要开发广谱、杀虫速度快、并具有抗紫外能力的新型制剂，并能对生产中的死蛾、废蛹等污染物进行再利用处理，避免环境污染，促进昆虫病毒生物农药产业的发展。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药，配方合理,使用方便,该生物农药突破了一种昆虫只能防治一种害虫的传统观念，一种病毒制剂可防治30多种害虫，尤其对农业上难以防治的玉米螟等螟虫有较好的防治效果。同时，该制剂中添加的光保护剂、增效剂和害虫引诱剂种类更多样，效果更完善，对环境更友好。
本发明的另一个目的是在于提供了一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药的制备方法，方法易行，操作简便，而且将生产中的死蛾和废蛹等废物处理变成生物农药的有用成份，实现循环经济模式，使生产和制备过程完全没有废物污染。
为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：
一种利用替代宿主玉米螟或棉铃虫生产广谱杆状病毒芹菜夜蛾核型多角体病毒(Anagrapha falcifera multiple nucleopolyhedrovirus，AnfaNPV)，有如下特征：该病毒形态为多角体。多角体大小约1.45μm,病毒粒子杆状，为多粒包埋型，病毒粒子大小约为38×306nm。病毒对Tn368等昆虫细胞系敏感，对玉米螟和棉铃虫等昆虫也敏感。申请人从污染的Tn368培养细胞中筛选得到一株广谱杆状病毒。开始只认为它是一株普通的AcMNPV，后来经过棉铃虫和玉米螟的扩增，发现它的杀虫谱和杀虫活性与AcMNPV不同。通过部分基因组序列测定，结合其他生理生化特征和分子特征，鉴定其为一种广谱芹菜夜蛾核型多角体病毒，命名为芹菜夜蛾核型多角体病毒C1株(Anagrapha falcifera multiplenucleopolyhedrovirus-C1)。该病毒株已于2016年7月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，湖北省武汉市武昌珞珈山)，保藏编号：CCTCC NO:V201640。
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：
所述的200亿PIB/ml病毒悬液(请见本发明制备步骤A).
所述的昆虫源氨基酸(请见本发明制备步骤B)。
所述的昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲、氟虫脲及2万IU/μg苏云金杆菌等均商品化产品。
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成(优选范围)：
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成(最好范围)：
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成(最佳值)：
一种防治螟虫广谱杆状病毒体病毒生物农药的制备方法，其步骤是：
A、广谱杆状病毒的生产：
使用人工饲料饲养玉米螟和棉铃虫幼虫，棉铃虫1-3龄群体饲养，4龄后单头饲养，玉米螟则在整个幼虫期都群体饲养。待幼虫长到4龄时，分别接种芹菜夜蛾核型多角体病毒进行感染。感染病毒的幼虫在温度27±1℃，相对湿度75-85％条件下继续培养，培养7-10天后，92-97％幼虫体内充满病毒颗粒而死亡，收集病毒致死虫尸加工制备200亿PIB/mL病毒悬液。
B、生产中出现的死蛾废蛹污染物处理及昆虫源氨基酸提取：
在工厂化病毒生产中，有3-8％的幼虫不能致死而进入化蛹。这些经病毒感染而没有在幼虫期死亡而化得蛹体内病毒含量极低，只能作为废物。虫种室每天数万头蛾子交配产卵后死亡成为污染物。为了处理这些废料并提取有用物质在病毒杀虫剂中应用，每天将死亡蛾子和废蛹分别收集，85-88℃浸煮5-10分钟，捞出后40-50℃烘干至含水量为5-8％，然后将两者混合，粉碎成浆糊状，按1:4重量比(死蛾废蛹1:盐酸4)加入5Mol/L盐酸溶液，在88－87℃反应缶中反应13－17小时，加氢氧化钠调节溶液pH至6.5-7终止反应。经网纱过滤，不能降解的渣子作为有机肥料组分使用，液体部分经测定总氨基酸含量作为昆虫源氨基酸在病毒杀虫剂中使用。液体中含有昆虫源短肽，并含有昆虫源油脂，在制备病毒杀虫剂时，这些短肽及油脂随昆虫源氨基酸一并加入，昆虫源油脂和短肽的特殊气味对害虫幼虫具有引诱作用，引诱幼虫从隐蔽植物部位出来取食喷施在植株表面的昆虫病毒，提高杀虫效果。
C、昆虫病毒制剂制备：
病毒制剂包括病毒悬液、纳米级二氧化硅、荧光增白剂、昆虫源氨基酸、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、植物源油脂、昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲和氟虫脲、***胶及无菌水。各原料成分按比例依次加入反应缶中，常温常压(不需要标注范围)下140－160转/分钟搅拌1－2小时，得到一种灰白色的悬浮剂产品，检验合格后分装入库。
所述病毒悬液由芹菜夜蛾核型多角体病毒感染替代宿主得到，替代宿主为玉米螟或棉铃虫。由于芹菜夜蛾没有人工饲养的报道，使用替代宿主生产，解决了该病毒不能利用原始宿主芹菜夜蛾生产的问题。同时，两种替代宿主人工饲养技术成熟，可全程群体饲养或半程群体饲养，对病毒敏感，单虫病毒产量高，可提高生产效率，减少生产成本。
本发明的主要特点就是用替代宿主玉米螟和棉铃虫交替生产芹菜夜蛾核型多角体病毒，维持病毒基因多样性和高效感染多种害虫的基因特性，同时将生产中废蛹和死蛾处理提取昆虫源氨基酸和短肽，作为光保护剂和害虫引诱剂在病毒杀虫剂中应用。由于申请人已有成熟的棉铃虫和玉米螟生产技术，芹菜夜蛾核型多角体病毒利用这两种替代宿主大量生产，成本较低，具有市场开发潜力。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
其一.实现了利用两种替代宿主交替生产病毒的方法，且成本较低廉。
芹菜夜蛾核型多角体病毒(AnfaNPV)是一种广谱杆状病毒，但其原始宿主不能人工饲养，不能在活体上大量增殖，细胞培养增殖既困难成本也十分高昂。我们用人工大量饲养的玉米螟或棉铃虫幼虫活体增殖生产，在保持病毒杀虫活性和广谱杀虫特性的同时，使该病毒生产方便，我们已有成熟的玉米螟和棉铃虫人工饲料和人工饲养技术，有提高杆状病毒产量的方法。利用替代宿主生产广谱杆状病毒，技术成熟，方法简便，幼虫可部分或全程群体饲养，单虫平均病毒产量高，生产成本低，市场竞争力强。
其二.杀虫谱宽，并对多种螟虫和其他重要害虫有很好的防效。
以前开发的昆虫杆状病毒杀虫剂，要么是杀虫谱窄，只对一两种害虫有控制作用；要么虽杀虫谱很宽，但对许多重要害虫杀虫活性很低，没有应用价值。大多数昆虫病毒杀虫剂对螟虫防效较低。本发明提供用替代宿主生产的广谱杆状病毒杀虫剂，不仅生产方便，而且对玉米螟等螟蛾科害虫有较好的防效，同时对棉铃虫、烟青虫、甜菜夜蛾等夜蛾科昆虫幼很好控制作用。本杀虫剂既保持病毒杀虫剂作为生物农药的特性，对人畜和高等动物安全，适于在蔬菜、玉米、水稻等作物上大量施用，又克服了杆状病毒杀虫谱窄和对螟虫防效差的缺陷，扩大了昆虫病毒杀虫剂的杀虫谱。一种剂型含一种杆状病毒就可同时防治包括多种螟虫在内的重要害虫，具有很好的应用前景和市场开发前景。
其三.增加昆虫源成分作为剂型中的光保护和取食引诱剂成分，既很好地处理了生产中死蛾和废蛹的污染问题，又使剂型组分更完善。
杆状病毒作为生物杀虫剂的另一个缺陷是病毒对紫外光有一定的敏感性，长期在阳光下暴晒易丧失活性。为了弥补这一缺陷，需要在病毒杀虫剂中添加光保护剂。以前的病毒杀虫可湿性粉剂和其它剂型中添加的光保护剂主要是活性炭及刚果红等染料，光保护效果也不理想。还有的仅加入荧光增白剂和纳米无机材料，由于光保护剂品种单一，剂量较少，保护作用也不明显。本发明提供的抗螟虫广谱杆状病毒杀虫剂中，除添加微量无机纳米材料、芳香族族氨基酸和少量荧光增白剂外，增加昆虫源成分作为剂型中的光保护剂和幼虫取食引诱剂组分。在从死蛾和废蛹中提取虫源氨基酸的过程中，改变传统的提取方法，不经过提取昆虫脂肪油的步骤直接进行酸解提取昆虫源氨基酸，也不用等电点法分离溶液中未降解的昆虫源短肽。这些昆虫源短肽和昆虫源脂肪油都包含在昆虫源氨基酸溶液中。在剂型制备过程中，这些短肽和油脂随昆虫源氨基酸按比例加入剂型中，成为剂型的组分。来源于昆虫身体的成分昆虫源氨基酸和昆虫源短肽对昆虫病毒有更好的保护作用，而昆虫源脂肪油和昆虫源氨基酸由于具有特殊的气味对昆虫幼虫有很好引诱作用，引诱害虫取食昆虫病毒，提高昆虫病毒杀虫剂的杀虫效率和杀虫速度，田间应用效果大大提高。
具体实施方式
本发明提供的抗螟虫广谱杆状病毒杀虫剂，包括昆虫病毒悬液、纳米级二氧化硅、荧光增白剂、芳香族氨基酸、昆虫源氨基酸、木质素磺酸钠、植物油脂、昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲、高效Bt和无菌水。所述病毒悬液由芹菜夜蛾核型多角体病毒感染替代宿主得到的，替代宿主为玉米螟或棉铃虫。所述广谱杆状病毒杀虫剂的组分及其重量配比是：200亿PIB/ml病毒悬液5-15％，纳米级二氧化硅0.1-0.2％，昆虫源氨基酸0.05-0.1，芳香族氨基酸0.1-0.15％，荧光增白剂0.5-1％，木质素磺酸钠0.1-0.5％，昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲0-0.05％(也可以不加，照样获得同样的技术效果)，昆虫几丁质合成抑制剂氟虫脲0-0.1％(也可以不加，照样获得同样的技术效果)，***胶0.05-0.1％，油菜籽油0.1-4.0％，大豆油甲酯0.5-2.0，2万IU/μg苏云金杆菌0-5％(也可以不加，照样获得同样的技术效果)，无菌水余量。
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：
一种防治螟虫广谱杆状病毒芹菜夜蛾核型多角体病毒生物农药的制备方法，其步骤是：
A、广谱杆状病毒的生产：
广谱杆状病毒为芹菜夜蛾核型多角体病毒，替代宿主为玉米螟，用500万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄玉米螟幼虫生产芹菜夜蛾核型多角体病毒。按重量计，该玉米螟幼虫的人工饲料配方是：大豆粉8.4％，玉米粉10.7％，酵母粉5％，白糖4.2％，Vc0.28％，50万单位/克红霉素0.07％，琼脂0.84％，山梨酸0.28％，无菌水70.23％。病毒感染替代宿主后6-10天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。
B、生产中出现死蛾和废蛹污染物的处理及昆虫源氨基酸的提取：
病毒生产中，有6或7或8％的幼虫不能致死而进入化蛹。这些经病毒感染而没有在幼虫期死亡而化得蛹体内病毒含量极低，只能作为废物，虫种室每天大量蛾子交配产卵后死亡成为污染物。为处理这些死蛾废蛹，每天将死亡蛾子和废蛹分别收集，83或84或85或86或87℃浸煮5或7或9或10分钟，捞出后40或42或45或47或49或50℃烘干至含水量为5或6或7或8％，然后将两者混合，粉碎后不进行脱脂处理，直接进行酸解。按1:4重量比(死蛾废蛹1:盐酸4)加入5Mol/L盐酸溶液，在83或84或85或86或87℃反应缶中反应13或14或15或16或17小时，加氢氧化钠调节溶液pH至6.5或6.7或7终止反应。经网纱过滤，不能降解的渣子作为有机肥料组分使用，液体部分经测定总氨基酸含量作为昆虫源氨基酸在病毒杀虫剂中使用。液体中含有昆虫源短肽，并含有昆虫源油脂，在制备病毒杀虫剂时，这些短肽及油脂随昆虫源氨基酸比例一并加入。昆虫源油脂和短肽的特殊气味对害虫幼虫具有引诱作用，引诱幼虫从隐蔽植物部位出来取食喷施在植株表面的昆虫病毒，提高杀虫效果。
C、广谱杆状病毒生物农药的制备：
病毒制剂包括病毒悬液、纳米级二氧化硅、荧光增白剂、昆虫源氨基酸、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、植物源油脂、几丁质合成抑制剂氟啶脲和氟虫脲、阿拉胶及无菌水。各组分依次加入反应缶中，常温常压下150转/分钟搅拌1.5小时，得到一种灰白色的悬浮剂产品，检验合格后分装。
所述病毒悬液由芹菜夜蛾核型多角体病毒感染替代宿主得到，替代宿主为玉米螟。由于芹菜夜蛾没有人工饲养的报道，使用替代宿主生产，解决了该病毒不能利用原始宿主芹菜夜蛾生产的问题。同时，替代宿主玉米螟人工饲养技术成熟，可全程群体饲养，对病毒敏感，单虫病毒产量达72亿-95亿PIB，生产效率高，生产成本低，具有市场开发潜力。
实施例2：
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药的制备方法，其步骤是：
A、广谱杆状病毒为芹菜夜蛾核型多角体病毒，替代宿主为棉铃虫，用200万PIB/mL病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄棉铃虫幼虫生产芹菜夜蛾核型多角体病毒。按重量计，该棉铃虫幼虫的人工饲料配方是：黄豆粉、小麦粉、玉米粉各6％，酵母粉1.2％，琼脂条1％，Vc和复合Vb各0.1％,山梨酸和尼泊金乙酯各0.03％，无菌水79.57％。病毒感染替代宿主后5或6或7或8天收集病毒病致死虫尸处理，加工成200亿PIB/mL的病毒悬液。
B、生产中出现死蛾和废蛹污染物的处理及昆虫源氨基酸的提取
病毒生产中，有3-5％的幼虫不能致死而进入化蛹，成为废物需要处理，虫种室每天大量蛾子交配产卵后死亡成为污染物。这些废物经85℃高温处理后，请分别去鳞毛或去蛹皮后直接进行酸解提取昆虫源氨基酸、昆虫源多肽和昆虫源脂肪酸混合物。提取方法与实施例1相同，测定其中的氨基酸含量，称为昆虫源氨基酸。
C、病毒杀虫剂制备：各组分依次加入反应缶中，常温常压下150转/分钟搅拌1.5小时，得到一种灰白色的悬浮剂产品，检验合格后分装。
所述病毒悬液由芹菜夜蛾核型多角体病毒感染替代宿主得到，替代宿主为棉铃虫。使用替代宿主棉铃虫生产，也解决该病毒不能利用原始宿主芹菜夜蛾生产的问题。同时，棉铃虫人工饲养技术成熟，1-3龄幼虫可群体饲养，对病毒敏感，单虫病毒产量达100-150亿PIB，生产效率高，生产成本低，也具有市场开发潜力。另外，利用棉铃虫和玉米螟交替生产广谱杆状病毒，保持了病毒的基因多样性，克服病毒长期在单一替代宿主中复致繁殖可能出现变异而失去广谱行特征的风险，使病毒广谱性持续保持。
实施例2的昆虫病毒杀虫剂在江西吉安和安徽怀宁防治水稻螟虫，防治对象为稻纵卷叶螟1-2龄幼虫。病毒制剂按照1,000，750，500倍稀释，用背负式喷雾器对水稻叶片正、反面喷药，亩喷药液量60公斤。等量清水为空白对照(CK)，化学防治田作为对比。药后虫口调查每隔1d进行1次，共调查4次。计算虫口减退率和校正防治效果。结果显示，施药后第2天，没有虫口死亡。施药后第4天就出现防治效果。施药后第4、6、8、10天，校正防效分别为18.28-25.12％、54.16-63.81％，81.61-86.96％和89.88-91.37％。试验结果表明，一种防治螟虫广谱杆状病毒杀虫剂杀虫速度明显比其他昆虫病毒制剂杀虫速度快，并具有很好的防治效果。另外，该产品在江西水稻上应用，发现有促分蘖作用。在安徽应用，通过测产发现还有增产作用，与完全用化学农药防治的稻田相比，增产10.2-15.0％。
实施例3-6：
一种抗螟虫防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：
其制备步骤与实施例1相同。
Claims (7)
1.一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：
所述的病毒为芹菜夜蛾核型多角体病毒C1株，保藏编号CCTCC NO:V201640；
所述的昆虫源氨基酸按照下述方法制得：分别收集玉米螟、棉铃虫产完卵后的死亡成虫蛾子及经芹菜夜蛾核型多角体病毒C1株感染后而没有死亡幼虫所化的需要废弃的虫蛹，85-88℃浸煮5-10分钟，捞出后40-50℃烘干至含水量为5-8％，然后将两者混合，粉碎成浆糊状，按死蛾废蛹:盐酸的质量为1:4加入5Mol/L盐酸溶液，在88－87℃反应缶中反应13－17小时，加氢氧化钠调节溶液pH至6.5-7终止反应，经网纱过滤，不能降解的渣子作为有机肥料组分使用，液体部分经测定总氨基酸含量作为昆虫源氨基酸在病毒杀虫剂中使用，液体中含有昆虫源短肽，并含有昆虫源油脂。
2.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：
6.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：
7.权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药的制备方法，其步骤是：
A、广谱杆状病毒的生产：
使用人工饲料饲养玉米螟和棉铃虫幼虫，棉铃虫1-3龄群体饲养，4龄后单头饲养，玉米螟则在整个幼虫期都群体饲养，待幼虫长到4龄时，分别接种芹菜夜蛾核型多角体病毒进行感染，感染病毒的幼虫在温27±1℃，相对湿度75-85％条件下继续培养，培养7-10天后，92-97％幼虫体内充满病毒颗粒死亡，收集病毒致死虫尸加工制备200亿PIB/mL病毒悬液；
B、生产中出现的死蛾废蛹污染物处理及昆虫源氨基酸提取：
在工厂化病毒生产中，有3-8％的幼虫不能致死而进入化蛹，这些经病毒感染没有在幼虫期死亡化得蛹体内病毒含量低，只能作为废物，虫种室每天数万头蛾子交配产卵后死亡成为污染物，为了处理这些废料并提取有用物质在病毒杀虫剂中应用，每天将死亡蛾子和废蛹分别收集，85-88℃浸煮5-10分钟，捞出后40-50℃烘干至含水量为5-8％，然后将两者混合，粉碎成浆糊状，将死蛾废蛹:盐酸按1:4重量比加入5Mol/L盐酸溶液，在88－87℃反应缶中反应13－17小时，加氢氧化钠调节溶液pH至6.5-7终止反应，经网纱过滤，不能降解的渣子作为有机肥料组分使用，液体部分经测定总氨基酸含量作为昆虫源氨基酸在病毒杀虫剂中使用，液体中含有昆虫源短肽，并含有昆虫源油脂，在制备病毒杀虫剂时，这些短肽及油脂随昆虫源氨基酸一并加入；
C、昆虫病毒制剂制备：
病毒制剂包括病毒悬液、纳米级二氧化硅、荧光增白剂、昆虫源氨基酸、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、植物源油脂、昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲和氟虫脲、***胶及无菌水，各原料成分按比例依次加入反应缶中，常温常压下14－16转/分钟搅拌1－2小时，得到一种灰白色的悬浮剂。
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| 芹菜夜蛾核型多角体病毒毒力的生物测定;鲁晓知等;《中国生物防治》;19971231;第13卷(第4期);第151-153页 * |
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