CN110402965A - 甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物及其杀虫增效方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物及其杀虫增效方法。包括甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂，由甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂和介体生物寄线虫相混合制成。由于本发明的寄线虫能主动找到害虫，能通过口腔、气门、***等多种途径侵入虫体，并在害虫体内寄生造成众多伤口，缩短了病毒侵染时间，增加了甘蓝夜蛾核型多角体病毒侵染害虫机率，缩短了害虫致死时间，提高了甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫效率。

Description

甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物及其杀虫增效方法

技术领域：

本发明属于生物杀虫技术领域，具体涉及一种病毒杀虫混合物及其制备方法，特别是一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物及其杀虫增效方法。

背景技术：

当前，在全球范围内每年因病虫害的影响，造成约三分之一的粮食产量的减产；而为了减轻病虫害对粮食产量的影响，长期的、大量的、反复的使用化学农药，以杀灭作物虫害，但是由于大量的反复使用化学农药，一方面造成了害虫的抗药性，另一方面，又由于化学农药的大量使用对人类的生存环境造成较大的影响。因此，人们开始寻求其他的杀灭害虫的方法及药物，如以昆虫病毒作为杀虫剂即是一种行之有效的方法之一。

如中国专利公告号为CN107183063A公开的《一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒复合增效型生物农药》，其是先从甘蓝夜蛾死虫中分离甘蓝夜蛾核型多角体病毒株，饲喂活体增值，分离纯化，并与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒等非同源性病毒加工处理，从而筛选出有利于扩大甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫范围和杀虫速度的增效因子。还有如中国专利公告号为CN106577764A《一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫悬浮剂及其制备方法》，其包括甘蓝夜蛾核型多角体病毒原粉、Y-聚谷氨酸、稳定剂、表面活性剂、增效剂、光保护剂，分散剂及水等组成。其可增强甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫效率，具有耐水冲刷，杀活虫效率高，从而延长了残效期限等。但是上述方案均存在杀虫制剂或悬剂的成本高，杀虫率仍存在不足等问题。

由于甘蓝夜蛾核型多角体病毒(简称MbNPV)是甘蓝夜蛾的主要病原性天敌，对甘蓝夜蛾等幼虫致病力强，自然感染率高，又能在自然界造成流行病，还可导致相继世代害虫持续带毒，在相当长时间内可自然控制害虫消长，且安全、不产生抗药性，因此甘蓝夜蛾核型多角体病毒作为微生物杀虫剂有很大潜力。但是，经过连续转育的甘蓝夜蛾核型多角体病毒加工成的杀虫制剂存在稳定性差、杀虫作用较慢、推广较困难等问题。甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫作用慢表现之一就是通过昆虫口腔、消化道进入虫体，侵入时间长；另外病毒侵入虫体途径单一，导致杀虫作用较慢。因此如何来克服上述技术缺点等，实现对介体斯氏线虫增强病毒侵染害虫能力能对害虫具主动搜寻能力。

因此，如何来提供一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒混合物，其能对甘蓝夜蛾等幼虫具有致病力强，自然感染率高，又能在自然界造成流行病，还可导致相继世代害虫持续带毒，在相当长时间内可自然控制害虫消长，且安全、不产生抗药性，因此甘蓝夜蛾核型多角体病毒作为微生物杀虫剂有很大潜力。

发明内容

本发明提供一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物及其杀虫增效方法。包括甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂，由甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂和介体生物寄线虫相混合制成。由于本发明的寄线虫能主动找到害虫，能通过口腔、气门、***等多种途径侵入虫体，并在害虫体内寄生造成众多伤口，缩短了病毒侵染时间，增加了甘蓝夜蛾核型多角体病毒侵染害虫机率，缩短了害虫致死时间，提高了甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫效率。

本发明公开的一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，包括甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂，其所述甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物是由甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂和介体生物寄线虫相混合制成。

所述的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，其所述介体生物寄线虫为夜蛾斯氏线虫；所述夜蛾斯氏线虫为侵染期幼虫。

所述的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，所述甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂量为150-250亿PIB/ml病毒悬液，夜蛾斯氏线虫为1.50×10⁵-2.5×10⁵条/ml；控制甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂和夜蛾斯氏线虫按体积比为1：1-1.1。

所述甘蓝夜蛾核型多角体病毒通过棉铃虫饲喂增殖；所述夜蛾斯氏线虫通过液体发酵培养。

一种利用甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物杀虫增效方法，其是在于甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂中，添加侵染期幼虫的夜蛾斯氏线虫进行混合，在防治害虫时，利用介导法，甘蓝夜蛾核型多角体病毒在介体生物夜蛾斯氏线虫帮助下快速侵入害虫体内，在害虫低龄时进行，并选择在25℃时的潮湿阴天或傍晚、雨后喷洒。

本发明公开的一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物及其杀虫增效方法。有益效果是通过引入介体生物寄生线虫即夜蛾斯氏线虫S.feltiae，携带甘蓝夜蛾核型多角体病毒，通过寄生侵入害虫，由于本发明的该夜蛾斯氏线虫能主动找到害虫，缩短了病毒侵染时间，另外由于该夜蛾斯氏线虫活跃，能通过口腔、气门、***等多种途径侵入害虫体内，并在害虫体内寄生造成众多伤口，增加了甘蓝夜蛾核型多角体病毒侵染害虫机率，缩短了害虫致死时间，提高了甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫效率。解决甘蓝夜蛾核型多角体病毒入侵途径单一、入侵慢的缺点。

由于甘蓝夜蛾核型多角体病毒(简称MbNPV)是甘蓝夜蛾的主要病原性天敌，对甘蓝夜蛾等幼虫致病力强，自然感染率高，又能在自然界造成流行病，还可导致相继世代害虫持续带毒，在相当长时间内可自然控制害虫消长，且安全、不产生抗药性，因此甘蓝夜蛾核型多角体病毒作为微生物杀虫剂有很大潜力。

但是，经过连续转育的甘蓝夜蛾核型多角体病毒加工成的杀虫制剂存在稳定性差、杀虫作用较慢、推广较困难等瓶颈。甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫作用慢表现之一就是通过昆虫口腔、消化道进入虫体，侵入时间长；另外病毒侵入虫体途径单一，导致杀虫作用较慢。为了克服这个缺点，本技术引入介体斯氏线虫增强病毒侵染害虫能力，斯氏线虫是重要的昆虫病原线虫，对害虫具主动搜寻能力。

经实验证明，本发明中所用的昆虫病原线虫侵染期幼虫在侵入寄主昆虫后，将共生细菌释放到昆虫体腔，细菌迅速繁殖，在24-48h内将昆虫杀死。线虫取食昆虫组织进行繁殖，待昆虫体内营养耗尽后，产生携带共生细菌的侵染期幼虫寻求新的寄主昆虫。由于夜蛾斯氏线虫对寄主有主动搜寻能力，可在侵染期从昆虫的***、气孔、节间膜或随食物进入昆虫体内，穿过肠壁进入血腔，是甘蓝夜蛾核型多角体病毒传播、入侵夜蛾类昆虫良好的介体。通过携带多角体病毒，并从多种途径侵入，可显著提高甘蓝夜蛾核型多角体病毒入侵甘蓝夜蛾、小菜蛾、棉锦虫等害虫速率，缩短寄主昆虫死亡时间，提高甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫效率，解决甘蓝夜蛾核型多角体病毒入侵途径单一、入侵慢的缺点。由于昆虫病毒和昆虫病原线虫均是昆虫自然天敌、无污染，对环境友好，用于防治害虫，对我国农业可持续发展有极其重要意义。

具体实施方式：

以下实施例进一步说明本发明的内容，仅仅是为清楚说明本发明所作的举例，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对所属领域的普通技术人员来说，对本发明方法、步骤或条件所作的变化、变动、修改或替换，仍属于本发明的范围。

本发明的实施方式的实施例的夜蛾斯氏线虫是以甘蓝夜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾作为试虫，探讨本发明的复合型的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物的毒杀效果，并拓展复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒应用范围。

1、材料与方法

1.1材料

供试病毒为甘蓝夜蛾核型多角体病毒(M_bNPV):2.0×10⁹PIB﹒mL^-1,由江西某生物科技有限公司提供(下同)。苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(A_CNPV):1.0×10⁹PIB﹒mL^-1，由江西某生物科技有限公司。供试幼虫为室内饲养的第3代甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾、斜纹夜蛾2龄幼虫。

1.2方法

病毒制剂复配将甘蓝夜蛾核型多角体病毒:2.0×10⁹PIB﹒mL^-1和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒1.0×10⁹PIB﹒mL^-1按0.5﹕1混合后，用蒸馏水稀释成所需的5种浓度，即2.0×10³、2.0×10⁴、2.0×10⁵、2.0×10⁶、2.0×10⁷PIB﹒mL^-1备用。

处理方法

用已消毒毛笔将2龄斜纹夜蛾幼虫接入灭菌的干净养虫管内，每管1头，饥饿8小时后。取新鲜甘蓝嫩叶洗净晾干，经紫外灯照射20min后，剪成3cm×5cm长方形，分别浸入上述复合剂不同浓度病毒悬浮液中2～3s，取出晾干，分别移入各处理养虫管中，每养虫管1片。每30管为一浓度处理组，每组重复3次。以同样方法，将2龄甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾幼虫分别处理。以上各虫各浓度均设无菌水处理为对照，各处理均在26℃室内饲养感染36h后，去掉残余叶片，用无毒新鲜甘蓝嫩叶继续饲养。

测定项目及方法：每天观察幼虫取食情况，记载各处理幼虫死亡数、各虫死亡率、校正死亡率，并对数据进行方差分析和新复极差测验，绘死亡率曲线图表进行分析。

2、结果与分析

2.1饲毒后第2天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾死亡情况分析

饲毒后第1天，甘蓝夜蛾行动迟缓，取食较少，而斜纹夜蛾和甜菜夜蛾仍有进食现象。到第2天，浓度较高的处理组斜纹夜蛾和甜菜夜蛾出现死亡状况，浓度低于2.0×10⁵斜纹夜蛾和甜菜夜蛾不取食，行动迟缓。而甘蓝夜蛾在浓度低于2.0×10⁵也出现死亡，因此甘蓝夜蛾对复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒敏感性大于斜纹夜蛾、甜菜夜蛾(见表1)。

表1饲毒后第2天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾死亡率比较

Table 1 effect of HIV on the 2nd day,beet armyworm,cabbage armywormspodoptera litura mortality

将表1数据进一步处理，并经F测验表明：F＝3.01＜F_0.05＝4.46、F＝3.01＜F_0.01＝8.65用药后第2天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾3虫之间对复合剂甘蓝夜蛾核型多角体病毒敏感性差异不显著，尤其是斜纹夜蛾与甜菜夜蛾2虫对复合剂敏感性差异很小。由于F＝5.85^*＞F_0.05＝3.84，F＝5.85^*＜F_0.01＝7.01，即甘蓝夜蛾核型多角体病毒复合剂不同浓度的处理死亡率有显著差异。

由表1可知，本发明的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物或叫复合剂(下同)2.0×10⁷浓度与其它处理间存在极显著差异达α＝0.01水平；其余处理间皆无显著差异。

2.2饲毒后第3天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾死亡情况分析

从表2可以看出：饲毒后的第3天甘蓝夜蛾在复合剂浓度2.0×10⁵～1.5×10⁷范围甘蓝夜蛾死亡率均在80％以上，而甜菜夜蛾在复合剂较高浓度2.0×10⁷下死亡率才达到80％；斜纹夜蛾在5种浓度下死亡率均较低，均在64％以下，即对甘蓝夜蛾核型多角体病毒复合剂敏感较低。

表2饲毒后第3天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾死亡率比较

Table 2 effect of HIV on the 3nd day,beet armyworm,cabbage armywormspodoptera litura mortality

说明：经F测验表明：F＝24.01＞F_0.05＝4.46、F＝24.01＞F_0.01＝8.65即饲毒后第3天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾3虫之间对复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒敏感性差异极显著。由F＝13.14＞F_0.05＝3.84、F＝13.14＞F_0.01＝7.01知，甘蓝夜蛾核型多角体病毒复合剂不同浓度处理死亡率极显著差异。

由表2知，饲毒后的第3天复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒浓度2.0×10⁷与1.5×10⁵、2.0×10⁶与2.0×10⁴、2.0×10⁵与1.5×10³差异显著达α＝0.05水平；2.0×10⁷与2.0×10⁴、2.0×10³差异极显著，2.0×10⁶与2.0×10³也差异极显著达α＝0.01水平；其他处理无显著差异；

据上所述，饲毒后第3天甘蓝夜蛾核型多角体病毒复合剂二浓度2.0×10⁷和2.0×10⁶处理试虫效果最好，甘蓝夜蛾、甜菜夜蛾对病毒复合剂的敏感性较强，斜纹夜蛾对病毒复合剂的敏感性较低。

饲毒后第4天病毒复合剂对斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾的死亡情况分析表3。

表3饲毒后第4天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾死亡率比较

Table 3 effect of HIV on the 4nd day,beet armyworm,cabbage armywormspodoptera litura mortality

说明，从表3可以看出：饲毒后的第4天甘蓝夜蛾和甜菜夜蛾死亡率均在80％以上，而斜纹夜蛾在2.0×10⁶～2.0×10⁷范围内的死亡率达到80％以上；但在2.0×10³～2.0×10⁶范围内，死亡率相对较低。

经F测验结果表明：F＝24.94^**＞F_0.05＝4.46，F＝24.94^**＞F_0.01＝8.65饲毒后第4天斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾3虫死亡率存在极显著差异，由F＝8.13＞F_0.05＝3.84、F＝8.13＞F_0.01＝7.01，复合剂不同浓度之间死亡率差异显著和极显著。

由表3可见：饲毒后的第4天复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒2.0×10⁷与2.0×10⁵、2.0×10⁴间存在显著差异，2.0×10⁶与2.0×10⁴也存在显著差异达α＝0.05水平；复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒2.0×10⁷与2.0×10³、2.0×10⁶与2.0×10³间存在极显著差异达α＝0.01水平。

据上所述，饲毒后第四天3虫对复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒敏感性均较强，死亡率均比第2、3天高。尤其是甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾对各浓度的死亡率均在80％以上，而斜纹夜蛾在浓度低于2.0×10⁶与时，死亡率相对较低。

3、结论与讨论：

由试验结果知，甘蓝夜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾对复合型的甘蓝夜蛾核型多角体病毒均比较敏感，通过方差分析和新复极差法测验，复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒对斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾毒杀效果差异显著。饲毒后第2天，甘蓝夜蛾对复合剂较敏感；饲毒后第3天3虫对复合剂敏感性均增强；饲毒后第4天，甜菜夜蛾、甘蓝夜蛾死亡率均在80％以上，斜纹夜蛾死亡率在60％以上。可见，随着时间的推移，病毒作用效果更趋明显。斜纹夜蛾对复合型的甘蓝夜蛾核型多角体病毒敏感性相对弱一些，抗病毒能力强，因此田间防治时，防治时间稍提前，防治斜纹夜蛾时，复合型甘蓝夜蛾核型多角体病毒浓度稍提高些，以大于2.0×10⁶为宜。

因此，本发明制备的甘蓝夜蛾核型多角体病毒与介体生物寄线虫的夜蛾斯氏线多角体病毒复合后，能显著提高甘蓝夜蛾核型多角体病毒毒杀害虫幼虫的效果。

Claims (5)

1.一种甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，包括甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂，其特征是所述甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物是由甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂和介体生物寄线虫相混合制成。

2.根据权利要求1所述的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，其特征是所述介体生物寄线虫为夜蛾斯氏线虫；所述夜蛾斯氏线虫为侵染期幼虫。

3.根据权利要求1所述的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，其特征是所述甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂量为150-250亿PIB/ml病毒悬液， 夜蛾斯氏线虫为1.50 ×10⁵-2.5×10⁵条/ml；控制甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂和夜蛾斯氏线虫按体积比为1：1-1.1。

4.根据权利要求1所述的甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物，其特征是所述甘蓝夜蛾核型多角体病毒通过棉铃虫饲喂增殖；所述夜蛾斯氏线虫通过液体发酵培养。

5.一种利用甘蓝夜蛾核型多角体病毒杀虫混合物杀虫增效方法，其特征是在于甘蓝夜蛾核型多角体病毒制剂中，添加侵染期幼虫的夜蛾斯氏线虫进行混合，在防治害虫时，利用介导法，甘蓝夜蛾核型多角体病毒在介体生物夜蛾斯氏线虫帮助下快速侵入害虫体内，在害虫低龄时进行，并选择在25℃时的潮湿阴天或傍晚、雨后喷洒。