CN108184906A - 一种果蝇诱杀剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及农药技术领域，具体涉及一种果蝇诱杀剂的制备方法。本发明以乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯为原料，经酶促还原反应合成了一种与果蝇雄虫体内性激素类似的产物，贝克酵母菌繁殖能力强，活性比较高，在此状态下进行酶促反应，所得的产物纯度、活性高，提取效率也随之提高，通过果蝇性信息素的发散，吸引异性果蝇聚集，有效保护和利用天敌，减少污染、保护环境，对集中杀灭果蝇群体有很好的功效，杀灭基数大，防治效果佳；本发明将性引诱剂与病原微生物菌联用，先对果蝇进行聚集，再通过生物防治菌种对果蝇进行侵染，杀灭，过程中无化学残留，不会造成二次污染，从而达到了果蝇的生物防治和控制的效果。

Description

一种果蝇诱杀剂的制备方法
技术领域
本发明涉及农药技术领域，具体涉及一种果蝇诱杀剂的制备方法。
背景技术
目前，新型农业正处于发展状态，果园的种类及面积在不断扩大，然而果蝇是果树的害虫，它的生活习性使得它分布于整个热带及亚热带地区，而果树却正好种植与这些地区，每年果园里总有一大部分果子遭受果蝇的残害，使果农损失惨重。
果蝇属双翅目实蝇科小昆虫。它分布于世界各大洲，危害水果蔬菜，已知品种253个，使世界各国果蔬农蒙受巨大经济损失，在非洲果蝇传播病疾，危害人类身体健康。
果蝇在我国南方各省的出现引起国家的高度重视。果蝇作为农业中常见的害虫，在很多场合下需要对其进行灭杀。目前国内外使用雄性化学性诱剂和化学药物毒杀果蝇，控制灾害。西方大量使用“马拉芬”神经性毒杀剂，杀虫效力虽好，但对人、畜、授粉昆虫有害，影响果蔬产量。“马拉芬”使人呕吐、头痛、呼吸困难，危害人体健康。我国目前使用的化学农药，存在污染环境，农药残留，对动物和授粉昆虫有害等弊端。此外，现有技术中很多农药均可通过喷洒进行灭杀。但喷洒农药费时费力，并且农药容易残留在果实、树木中，对其以后的生产、食用造成不必要的影响。此类杀虫剂经常使用化学杀虫成分，其生物降解性差，导致其对环境造成污染，并且其有效时间较短。
综上所述，现有的果蝇诱杀剂主要存在以下的缺陷：基本为化学合成物，有效时间短，生物降解性能差，易造成农药残留的危害，且会对人体和环境造成二次污染。
因此，我们有必要重新的制备出一种新型的果蝇诱杀剂，以此来解决现在水果种植行业所存在的果蝇问题，以此来更好的适应于社会与有关行业的需求，这将是一件十分有意义的事情。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对目前现有的果蝇诱杀剂，基本为化学合成物，有效时间短，生物降解性能差，易造成农药残留的危害，且会对人体和环境造成二次污染的问题，提供一种果蝇诱杀剂的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
一种果蝇诱杀剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基中培养，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，混合反应，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，旋转蒸发，干燥，得基体物；
（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，反应，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：12~15：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合1~2h，得混合物，按质量份数计，取10~12份混合物，5~6份基体物，2~3份四氢呋喃，20~30份氯化铵水溶液混合，搅拌反应，得反应物B，用***萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；
（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔10~15个，于25~28℃、保持土壤湿度50~60%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中培养，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中培养，重复划线培养2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液接种至发酵培养基中，发酵培养，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，a即得果蝇诱杀剂。
所述步骤（1）中酵母培养基为按质量份数计，取1~2份NaH2PO4，0.8~1.2份(NH4)2SO4，0.2~0.4份MgSO4·7H2O，0.3~0.5份CaCl2·2H2O，1~2份酵母膏，15~30份葡萄糖，1~2份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。
所述步骤（1）中贝克酵母培养条件为28~30℃培养18~24h；反应条件为：25~28℃反应10~15h。
所述步骤（2）反应物A反应条件为：23~25℃反应1~2h；反应物B反应条件为：1~4℃搅拌反应12~15h。
所述步骤（3）中分离纯化培养基：按质量份数计，取180~200份马铃薯，20~25份葡萄糖，20~23份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min；发酵培养基：按质量份数计，取10~15份玉米粉，25~30份麦麸，12~14份米粉，20~25份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。
所述步骤（3）中人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为温度28~30℃、相对湿度40~70%、光周期 L/D=16h/8h；土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。
所述步骤（3）中分离培养条件：23~28℃培养3~5d；纯化培养条件为：25~28℃培养2~3d；菌悬液的接种量为10%，发酵培养条件：30~35℃发酵培养2~3d。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明以乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯为原料，经酶促还原反应合成了一种与果蝇雄虫体内性激素类似的产物，贝克酵母菌繁殖能力强，活性比较高，在此状态下进行酶促反应，所得的产物纯度、活性高，提取效率也随之提高，通过果蝇性信息素的发散，吸引异性果蝇聚集，有效保护和利用天敌，减少污染、保护环境，对集中杀灭果蝇群体有很好的功效，杀灭基数大，防治效果佳；
（2）本发明通过采集果蝇喜欢居住场所的土壤，通过将饲养的果蝇幼虫置于土壤中，收集染病、死亡果蝇残体进行打浆，分离纯化得到一株对果蝇有高致病力的菌株，再通过扩大发酵培养，增强了获得菌株的活性，该菌株分生孢子外壁具有较强的分解寄主昆虫表皮的酶活性，在侵染初期，孢子表面会产生特殊的蛋白质和酶，这类蛋白质和酶能与碳水化合物相结合，从而使孢子和寄主之间的结合变得更容易，孢子萌发的芽管在适宜的条件下会长出一种具有粘性物质的附着胞，使孢子能进一步特异性地固定在寄主表皮，之后伸出侵入刺，由上表皮钻出一个小孔，侵入到外表皮，侵入刺的先端沿着与表皮层平行的方向膨大成平板状，末端伸长成菌丝状，借助物理机械压力的作用，菌丝逐渐侵入内表皮，最后到达真皮层虫生真菌穿透寄主表皮的过程是机械压力和酶的联合作用，侵入结构穿透体壁后，通过菌丝的生长延长而进入血腔，产生菌丝段或延长形成菌丝，当病菌增殖超过一定数量时，果蝇抵抗不再有效，菌丝不断增殖，逐渐侵入各个内部器官，最终充满体腔，导致果蝇的死亡；
（3）本发明将性引诱剂与病原微生物菌联用，先对果蝇进行聚集，再通过生物防治菌种对果蝇进行侵染，杀灭，过程中无化学残留，不会造成二次污染，从而达到了果蝇的生物防治和控制的效果。
具体实施方式
贝克酵母：购于Sigam公司。
人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为：温度28~30℃、相对湿度40~70%、光周期 L/D=16h/8h。
土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。
分离纯化培养基：按质量份数计，取180~200份马铃薯，20~25份葡萄糖，20~23份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min。
酵母培养基：按质量份数计，取1~2份NaH2PO4，0.8~1.2份(NH4)2SO4，0.2~0.4份MgSO4·7H2O，0.3~0.5份CaCl2·2H2O，1~2份酵母膏，15~30份葡萄糖，1~2份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。
发酵培养基：按质量份数计，取10~15份玉米粉，25~30份麦麸，12~14份米粉，20~25份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。
一种果蝇诱杀剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基，于28~30℃培养18~24h，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，于25~28℃反应10~15h，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，干燥，旋转蒸发，得基体物；
（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，于23~25℃反应1~2h，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：12~15：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合1~2h，得混合物，按质量份数计，取10~12份混合物，5~6份基体物，2~3份四氢呋喃，20~30份氯化铵水溶液混合，于1~4℃搅拌反应12~15h，得反应物B，用***萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；
（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔10~15个，于25~28℃、保持土壤湿度50~60%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中，于23~28℃培养3~5d，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中，25~28℃培养2~3d，重复划线培养2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液按10%的接种量接种至发酵培养基中，于30~35℃发酵培养2~3d，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，即得果蝇诱杀剂。
实施例1
贝克酵母：购于Sigam公司。
人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为：温度28℃、相对湿度40%、光周期 L/D=16h/8h。
土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。
分离纯化培养基：按质量份数计，取180份马铃薯，20份葡萄糖，20份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min。
酵母培养基：按质量份数计，取1份NaH2PO4，0.8份(NH4)2SO4，0.2份MgSO4·7H2O，0.3份CaCl2·2H2O，1份酵母膏，15份葡萄糖，1份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。
发酵培养基：按质量份数计，取10份玉米粉，25份麦麸，12份米粉，20份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。
一种果蝇诱杀剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基，于28℃培养18h，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，于25℃反应10h，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，干燥，旋转蒸发，得基体物；
（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，于23℃反应1h，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：12：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合1h，得混合物，按质量份数计，取10份混合物，5份基体物，2份四氢呋喃，20份氯化铵水溶液混合，于1℃搅拌反应12h，得反应物B，用***萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；
（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔10个，于25℃、保持土壤湿度50%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中，于23℃培养3d，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中，25℃培养2d，重复划线培养2次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液按10%的接种量接种至发酵培养基中，于30℃发酵培养2d，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，即得果蝇诱杀剂。
实施例2
贝克酵母：购于Sigam公司。
人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为：温度29℃、相对湿度50%、光周期 L/D=16h/8h。
土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。
分离纯化培养基：按质量份数计，取190份马铃薯，22份葡萄糖，22份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min。
酵母培养基：按质量份数计，取1份NaH2PO4，1.0份(NH4)2SO4，0.3份MgSO4·7H2O，0.5份CaCl2·2H2O，1份酵母膏，20份葡萄糖，1份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。
发酵培养基：按质量份数计，取12份玉米粉，27份麦麸，13份米粉，23份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。
一种果蝇诱杀剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基，于29℃培养20h，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，于27℃反应13h，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，干燥，旋转蒸发，得基体物；
（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，于24℃反应1h，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：13：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合1h，得混合物，按质量份数计，取11份混合物，5份基体物，2份四氢呋喃，25份氯化铵水溶液混合，于3℃搅拌反应13h，得反应物B，用***萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；
（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔12个，于27℃、保持土壤湿度55%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中，于24℃培养4d，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中，27℃培养2d，重复划线培养2次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液按10%的接种量接种至发酵培养基中，于33℃发酵培养2d，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，即得果蝇诱杀剂。
实施例3
贝克酵母：购于Sigam公司。
人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为：温度30℃、相对湿度70%、光周期 L/D=16h/8h。
土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。
分离纯化培养基：按质量份数计，取200份马铃薯，25份葡萄糖，23份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min。
酵母培养基：按质量份数计，取2份NaH2PO4，1.2份(NH4)2SO4，0.4份MgSO4·7H2O，0.5份CaCl2·2H2O，2份酵母膏，30份葡萄糖，2份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。
发酵培养基：按质量份数计，取15份玉米粉，30份麦麸，14份米粉，25份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。
一种果蝇诱杀剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基，于30℃培养24h，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，于28℃反应15h，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，干燥，旋转蒸发，得基体物；
（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，于25℃反应2h，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：15：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合2h，得混合物，按质量份数计，取12份混合物，6份基体物，3份四氢呋喃，30份氯化铵水溶液混合，于4℃搅拌反应15h，得反应物B，用***萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；
（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔15个，于28℃、保持土壤湿度60%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中，于28℃培养5d，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中，28℃培养3d，重复划线培养3次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液按10%的接种量接种至发酵培养基中，于35℃发酵培养3d，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，即得果蝇诱杀剂。
对比例：广州某生物科技有限公司生产的果蝇诱杀剂
方法：选择一块20亩大的桃园，将其分为四组，使用由实施例与对比例所制备的果蝇诱杀剂。检测用药后24h内果蝇的防治效果。
果蝇诱杀剂的具体检测情况如表1
表1
由上可知，本发明所制备的果蝇诱杀剂可以有效的引诱果蝇，并将其灭除，且本发明的果蝇诱杀剂所使用的组分均为安全无刺激的成分，此外，本发明的制备方法简单易操作且成本低廉，是一种安全且高效的果蝇诱杀剂的制备方法，值得推广和使用。

Claims (7)

1.一种果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：
（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基中培养，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，混合反应，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，旋转蒸发，干燥，得基体物；
（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，反应，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：12~15：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合1~2h，得混合物，按质量份数计，取10~12份混合物，5~6份基体物，2~3份四氢呋喃，20~30份氯化铵水溶液混合，搅拌反应，得反应物B，用***萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；
（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔10~15个，于25~28℃、保持土壤湿度50~60%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中培养，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中培养，重复划线培养2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液接种至发酵培养基中，发酵培养，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，即得果蝇诱杀剂。
2.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中酵母培养基为按质量份数计，取1~2份NaH2PO4，0.8~1.2份(NH4)2SO4，0.2~0.4份MgSO4·7H2O，0.3~0.5份CaCl2·2H2O，1~2份酵母膏，15~30份葡萄糖，1~2份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。
3.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中贝克酵母培养条件为28~30℃培养18~24h；反应条件为：25~28℃反应10~15h。
4.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）反应物A反应条件为：23~25℃反应1~2h；反应物B反应条件为：1~4℃搅拌反应12~15h。
5.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中分离纯化培养基：按质量份数计，取180~200份马铃薯，20~25份葡萄糖，20~23份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min；发酵培养基：按质量份数计，取10~15份玉米粉，25~30份麦麸，12~14份米粉，20~25份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。
6.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为温度28~30℃、相对湿度40~70%、光周期 L/D=16h/8h；土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。
7.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中分离培养条件：23~28℃培养3~5d；纯化培养条件为：25~28℃培养2~3d；菌悬液的接种量为10%，发酵培养条件：30~35℃发酵培养2~3d。
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