一种中草药联合卵黄抗体提取副产物发酵制备微生态制剂的
生产***及工艺
技术领域
本发明属于中草药微生态制剂发酵领域,具体涉及一种中草药联合卵黄抗体提取副产物发酵制备微生态制剂的生产***及工艺。
背景技术
卵黄抗体(egg yolk antibodies,IgY)是存在于禽类卵黄中的免疫球蛋白,是指产蛋鸡受特定抗原免疫后产生并转移和贮存在卵黄中的特异性抗体,从蛋黄中将IgY提取并应用在动物疾病的防治中已得到广泛认可。由于其具有良好的治疗效果、较高的特异性、安全无残留、不产生耐药性菌、且制备量大、工艺简单等优势在抗生素替代品的研究热潮中脱颖而出。自1898年由Klemperer 首次发现以来,已广泛应用于畜禽疾病的防治和疾病诊断等方面。美国食品和药品管理局 (FDA) 将卵黄抗体列入“公认安全使用物质(Generally Recognized As Safe, GRAS)”,把卵黄抗体看作药效营养品(Nutraceuticals)。总的来讲,卵黄抗体对动物没有毒副作用,用卵黄抗体治疗动物疾病不但避免了血清价格昂贵、产量低的缺点,而且可以避免血清在治疗过程中引起的副作用,是一种很有前途的发明免疫球蛋白制剂。因此,卵黄抗体在禽畜疾病诊断、治疗和预防的应用越来越多。在卵黄抗体提取的过程中会产生副产物,目前大部分都是干燥后作为饲料或者是直接排放而没有得到有效利用。
中草药微生态制剂是中草药物中加入有益微生物经发酵制成的生物制剂,用于提高畜、禽自身免疫能力的中药加活菌的微生态制剂。通过调整动物体内肠道微生态平衡和激发动物自身的非特异性免疫功能,起到有病治病、没病防病的作用,减少病毒性疾病的发生,避免了抗生素的滥用,以达到提高养殖效益,提高食品安全的目的。目前中草药微生态制剂己被广泛应用养殖领域中。特别近几年来,家禽家畜养殖业中中草药微生态制剂已经在逐步地取代传统的添加剂。尤其现在抗生素的使用越来越受限制,肠道保健越来越重要,中草药微生态制剂的使用必将越来越广泛。
如能巧妙地将卵黄抗体提取副产物和中草药联合制成微生态制剂,无疑将显著增加卵黄抗体提取副产物的附加价值,同时还可以减少环境污染。
发明内容
为克服现有技术中卵黄抗体提取副产物的利用不足,本发明的目的旨在提供一种中草药联合卵黄抗体提取副产物发酵制备微生态制剂的生产***及工艺。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案如下:
一种中草药联合卵黄抗体提取副产物发酵制备微生态制剂的生产***:该生产***包括打蛋器、卵黄分离仪、卵黄储罐、动力泵I、动力泵II、动力泵III、动力泵IV、动力泵V、动力泵VI、动力泵VII、动力泵VIII、罐体I(用于高免卵黄稀释和消毒)及其外界附属***、罐体II(用于卵黄液酸化分层和抗体提取)及其外界附属***、稀释熟化罐I、稀释熟化罐II、水解罐I、水解罐II、调制罐、喷雾干燥机、筛分粉碎机、混料罐、分装机、发酵车间、板框过滤机、发酵种子罐、上料机;
罐体I底部设有出口腔I和基架I;罐体I顶部设有封口法兰I,封口法兰I上配合连接有固定法兰I,固定法兰I上设有卵黄液进口、温度表插孔I、罐内灯开关I、搅拌电机I、蒸馏水进口、喷淋液进口I和高温蒸汽进口;罐体I内设有与罐内灯开关I配合连接的罐内灯I(可耐高温高压和腐蚀)、与喷淋液进口I配合连接的喷淋头I、与搅拌电机I配合连接的搅拌轴I,搅拌轴I下端设有搅拌桨I;罐体I外壁设有夹层I,夹层I上下两端分别设有夹层进口I和夹层出口I,罐体I外壁上同时设有内窥镜I,内窥镜I一端位于夹层I内、另一端伸出夹层I;
罐体I的外界附属***包括罐外夹层控温装置I,所述罐外夹层控温装置I包括泵I和恒温水箱I(可控温:50~90℃),夹层出口I、恒温水箱I、泵I、夹层进口I通过管路依次串连形成一封闭循环***;
罐体II底部设有出口腔II和基架II;罐体II顶部设有封口法兰II,封口法兰II上配合连接有固定法兰II,固定法兰II上设有进料口、温度表插孔II、罐内灯开关II、搅拌电机II、气路口、喷淋液进口II和pH耦合试剂液进口;罐体II内设有与罐内灯开关II配合连接的罐内灯II(可耐高温高压和腐蚀)、与喷淋液进口II配合连接的喷淋头II、与搅拌电机II配合连接的搅拌轴II,搅拌轴II下端设有搅拌桨II;罐体II外壁设有夹层II,夹层II上下两端分别设有夹层进口II和夹层出口II,罐体II外壁上同时设有内窥镜II,内窥镜II一端位于夹层II内、另一端伸出夹层II;
罐体II的外界附属***包括罐外夹层控温装置II、罐内流体密度超声监测装置、罐体气压动力装置和pH耦合试剂输出装置;
所述罐外夹层控温装置II包括泵II和恒温水箱II(可控温:0~37℃),夹层出口II、恒温水箱II、泵II、夹层进口II通过管路依次串连形成一封闭循环***;
所述罐内流体密度超声监测装置包括超声波发射接收器、反射板、信号转换器、时间继电器和电磁阀,超声波发射接收器和反射板设在出口腔II中部相对两侧,电磁阀位于出口腔II末端,超声波发射接收器通过电路依次串连信号转换器、时间继电器和电磁阀,电磁阀则再通过两支管路分别连接有储罐I(用于存储卵黄抗体提取废弃副产物)和储罐II(用于存储卵黄抗体前提取液),电磁阀连接储罐I的管路上设有阀门I,电磁阀连接储罐II的管路上设有阀门II;
所述罐体气压动力装置包括真空泵、稳压器、压力表、阀门III和空气过滤器,真空泵通过管路依次串连稳压器、压力表、阀门III和空气过滤器至气路口;
所述pH耦合试剂输出装置包括pH传感器、pH控制器、恒流泵、流量计I、阀门IV、阀门V、试剂罐I和试剂罐II,pH传感器设在罐体II外壁上,pH传感器一端位于夹层II内,另一端伸出夹层II后通过电路依次串连pH控制器、恒流泵,恒流泵的输入端通过两支管路分别连接试剂罐I(存储酸化液)和试剂罐II(存储正辛酸试剂液),试剂罐I连接恒流泵的管路上设有阀门IV,试剂罐II连接恒流泵的管路上设有阀门V,恒流泵的输出端则通过管路再串连流量计I至pH耦合试剂液进口;
打蛋器通过管路依次串连卵黄分离仪、卵黄储罐、动力泵I至罐体I的卵黄液进口,罐体I的出口腔I通过管路依次串连止回阀、流量计II至罐体II的进料口;
卵黄分离仪在与卵黄储罐连接的同时,通过另一支路依次串连动力泵II、稀释熟化罐I、动力泵III、水解罐I、动力泵IV、调制罐、动力泵V、喷雾干燥机、筛分粉碎机、混料罐、分装机、发酵车间;
罐II的储罐I通过管路依次串连动力泵VI、稀释熟化罐II、动力泵VII、板框过滤机、水解罐II、动力泵VIII至调制罐的顶端;
筛分粉碎机在与混料罐连接的同时,通过另一支路串连发酵种子罐至混料罐的顶端,混料罐的顶端同时与上料机相连。
较好地,在上述生产***基础上还可以增加与卵黄抗体的制备加工相配套的设施,即所述生产***增设有动力泵IX、过滤组件、真空冷冻仪、成品储罐;过滤组件由过滤器I、过滤器II、过滤器III依次串连而成;过滤器I、过滤器II、过滤器III的滤芯孔径分别为0.65~1μm、0.4~0.45μm、0.2~0.22μm;罐体II的储罐II通过管路依次串连动力泵IX、过滤组件、真空冷冻仪和成品储罐。
较好地,封口法兰I与固定法兰I之间、封口法兰II与固定法兰II之间均设有垫片且通过螺栓孔及螺栓实现配合连接。
较好地,罐体I为圆筒形罐体,材质为不锈钢,耐温≥121℃,耐压≥2个大气压强,罐体I的径高比范围为1/5~1/3,底部为锥形结构,锥角角度为160度;罐体II为圆筒形罐体,材质为不锈钢,耐温≥121℃,耐压≥2个大气压强,罐体II的径高比范围为1/6~1/4,底部为锥形结构,锥角角度为120度;出口腔II腔体内径为罐体II内径的1/6~1/5,出口腔II腔体长度为出口腔II腔体内径的2~2.5倍。
较好地,搅拌桨I和搅拌桨II材质均为硬质不锈钢且呈弯月状。
较好地,搅拌桨I上方的搅拌轴I上通过不锈钢实心支杆对称连接有若干层搅拌桨I',搅拌桨I'材质为硬质不锈钢,形状为长方形且表面均匀分布有网孔,网孔孔径为3~8mm;搅拌桨II上方的搅拌轴II上通过不锈钢实心支杆对称连接有若干层搅拌桨II',搅拌桨II'材质为硬质不锈钢,形状为长方形。更好地,搅拌桨I上方的搅拌轴I上通过不锈钢实心支杆对称连接有两层搅拌桨I';搅拌桨II上方的搅拌轴II上通过不锈钢实心支杆对称连接有一层搅拌桨II'
较好地,空气过滤器的滤孔孔径为0.2~0.22μm。
一种利用所述生产***制备卵黄抗体的工艺:该工艺包括卵黄抗体提取副产物的制备、卵黄抗体提取副产物的加工、卵黄抗体提取副产物联合中草药固体发酵生产微生态制剂三部分;其中,所述卵黄抗体提取副产物的制备包括蛋清液的分离获取和卵黄液酸化分层物的分离获取,所述卵黄抗体提取副产物的加工包括蛋清液的加工和卵黄液酸化分层物的加工;
所述蛋清液的分离获取包括如下步骤:
S1.1消毒和清洗处理:利用人工将高免鸡蛋进行外壳消毒和清洗处理;
S1.2打蛋:将高免鸡蛋置于打蛋器内,进行打蛋;
S1.3卵黄和蛋清的分离:将高免鸡蛋传输至卵黄分离仪内,进行卵黄和蛋清的分离,分别获得卵黄和蛋清液,然后对卵黄进行搅拌获得卵黄液;
所述卵黄液酸化分层物的分离获取包括如下步骤:
S2.1卵黄临时储存:将S1.3获得的卵黄液经管路输送至卵黄储罐内临时储存;
S2.2卵黄稀释和消毒:
(a)关闭阀门I、阀门II、阀门III、阀门IV、阀门V和固定法兰I及固定法兰II上的所有进口,打开高温蒸汽进口,使高温灭菌蒸汽先进入罐体I,后经出口腔I、管路由进料口进入罐体II,进而进行罐体I、罐体II和管路灭菌工序;
(b)灭菌工序后,待罐体I罐温下降至60~70℃时关闭出口腔I,动力泵I将卵黄储罐内临时储存的卵黄液经卵黄液进口输进罐体I,输入完毕关闭卵黄液进口;
(c)仍关闭出口腔I,同时开启搅拌电机I和泵I,搅拌电机I带动搅拌轴I进行搅拌,同步将卵黄液体积3~5倍的弱酸性蒸馏水经蒸馏水进口输入罐体I内,泵I同步将在恒温水箱I加热到预定设置温度65~70℃的热水经管路由夹层进口I输入进夹层I,再由夹层出口I经管路输回恒温水箱I,控制30~40min进而达到卵黄稀释液的消毒作用;
S2.3卵黄液酸化分层和抗体提取:
(a)先开启泵II,泵II将在恒温水箱II制冷到预定设置温度30~37℃的温水经管路由夹层进口II输入进夹层II,再由夹层出口II经管路输回恒温水箱II;待罐体II内温度下降到工艺要求温度30~37℃时关闭泵II,打开阀门III和启动真空泵,待罐体II的上端压力表指针指向负压时打开罐体II的出口腔II,打开卵黄液进口,S2.2处理后的卵黄稀释液便由出口腔I经管路通过进料口输入罐体II内;
(b)关闭真空泵、阀门III、卵黄液进口、出口腔I和进料口,开启搅拌电机II和恒流泵,打开阀门IV,搅拌轴II匀速转动,酸化液由试剂罐I经管路通过pH耦合试剂液进口恒速输入罐体II内,待混合液pH值达到设定值5.0~5.5时,pH传感器将信号传至pH控制器,由pH控制器经电路控制并关闭恒流泵,关闭阀门IV和搅拌电机II;再开启泵II,泵II将在恒温水箱II制冷到预定设置温度3~5℃的冷水经管路由夹层进口II输入进夹层II,再由夹层出口II经管路输回恒温水箱II,罐体II内温度下降到工艺所需温度值3~5℃时保持工艺既定时间12~20h;
(c)保持工艺既定时间结束时罐体II内的流体已完成分层:下层为沉淀、上层为上清液,启动罐内流体密度超声监测装置,罐内流体密度超声监测装置在线监测到分层的流体密度的差异,然后信号转换器将根据监测到的不同信号转换成不同指令经时间继电器自动控制电磁阀进而自动控制不同密度流体从出口腔II末端流出罐体II;首先打开阀门I,罐内流体密度超声监测装置在线监测到下层沉淀部分流体使得控制电磁阀进而完成该流体经管路进入储罐I进行临时存储的工作,待下层沉淀部分流体排出罐体II后电磁阀会听从指令及时关闭,关闭阀门I,保证上清液不得排出;
(d)开启搅拌电机II和恒流泵,打开阀门V,搅拌轴II匀速转动,正辛酸试剂液由试剂罐II经管路通过pH耦合试剂液进口恒速输入罐体II内,待罐体II内上清液pH值达到设定值4.0~4.5时,pH传感器将信号传至pH控制器,由pH控制器经电路控制并关闭恒流泵,关闭阀门V和搅拌电机II,按照工艺要求时间6~10h静止;待工艺既定静止时间结束时,罐体II内的流体再次分层:下层为沉淀、中层为上清液、顶层为悬浮物,启动罐内流体密度超声监测装置,罐内流体密度超声监测装置在线监测到分层的流体密度的差异,然后由信号转换器将根据监测到的不同信号转换成不同指令经时间继电器自动控制电磁阀进而自动控制不同密度流体从出口腔II末端流出罐体II,下层沉淀部分流体排出罐体II的操作参照S2.3之(c),下层沉淀部分流体排出后及中层上清液排出前先关闭阀门I并打开阀门II,进而保障中层流体顺利进入储罐II进行临时储存,中层流体即为卵黄抗体提取液,该步骤已完成卵黄抗体前提取工序;同样顶层悬浮物也根据相同原理经管路进入储罐I进行临时存储;储罐I内临时存储的物料即为卵黄液酸化分层物;
所述蛋清液的加工包括如下步骤:
S3.1蛋清液稀释和熟化:将经卵黄分离仪获取的蛋清液由动力泵II提供动力经管路进入稀释熟化罐I内,再向其内加水稀释蛋清液,蛋清液与水的体积百分比为20~35%;蛋清液稀释后进行升温熟化,熟化温度为80~100℃,保持时间为20~30min;整个S3.1工序中全程搅拌(速率为80~100 rpm/min);
S3.2水解:将S3.1获得的蛋清液作为底物I,由动力泵III提供动力经管路进入水解罐I内,向其内加入复合酶I,而后再加1M NaOH溶液升高体系的pH值至7~9,在45~60℃下水解3~5h;其中,所述复合酶I为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活力分别为80万~90万U/g和20万~30万U/g,木瓜蛋白酶和和碱性蛋白酶的质量比为2:1~4:1;以g/mL计,复合酶I占底物I的5~8%;整个S3.2工序中全程搅拌(速率为80~100rpm/min);
S3.3酶灭活:升高水解罐I罐体温度达80~100℃,使复合酶I活性灭活;
所述卵黄液酸化分层物的加工包括如下步骤:
S4.1卵黄液酸化分层物稀释和熟化:将储罐I内的卵黄液酸化分层物由动力泵VI提供动力经管路进入稀释熟化罐II内,再向其内加水稀释卵黄液酸化分层物,以g/mL计,卵黄液酸化分层物占水的20~35%;卵黄液酸化分层物稀释后进行升温熟化,熟化温度为80~100℃,保持时间为20~30min;待熟化过程结束后降温至室温,再加入1M NaOH溶液使体系pH值为中性;整个S4.1工序中全程搅拌(速率为80~100 rpm/min);
S4.2板框过滤:将S4.1工序获得的中性熟化液由动力泵VII提供动力经管路进入板框过滤机内(输入压力达0.2~0.4Mpa)进行连续性过滤,进而获得固形物;
S4.3水解:将S4.2工序获得的固形物投料至水解罐II内,加水和氯化钙,保证钙离子在水中浓度达10~30mM,固形物与水以g/mL计为20~30%,获得底物II;加入复合酶II,而后再加1M NaOH溶液升高体系的pH值至7~8.5,在45~60℃下水解2~3h;其中,所述复合酶II为木瓜蛋白酶和磷脂酶A的混合物,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的酶活力分别为80万~90万U/g和50~60万U/g,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的质量比为1:1~3:1;以g/mL计,复合酶II占底物II的5~7%;整个S4.3工序全程搅拌(速率为80~100 rpm/min);
S4.4酶灭活:升高水解罐II罐体温度达80~100℃,使复合酶II活性灭活;
所述卵黄抗体提取副产物联合中草药固体发酵生产微生态制剂包括如下步骤:
S5.1营养培养基组分的配制:将S3.3和S4.4获得的两种水解液全部分别由动力泵IV和动力泵VIII经管路输入调制罐内,然后以g/mL计,分别加入占混合水解液15~20%的红糖、5~10%的葡萄糖、8~10%的磷酸氢二钾、0.8~1%的七水硫酸镁、1~2%的氯化钠、8~10%的柠檬酸二铵、0.5~1%的氯化铵、3~5%的吐温-80,然后搅拌(速率90~100 rpm/min)混合并将pH值调至6.8~7.0;
S5.2营养培养基组分的后处理:将配制好的营养培养基组分由动力泵V经管路输送至喷雾干燥机进行喷雾干燥,喷雾干燥条件为:进口温度120~160℃,出口温度60~80℃;然后再将喷雾干燥后获得的固形物送至筛分粉碎机进行筛分粉碎(粉碎目数为80~100目);
S5.3菌种培养:将S5.2后处理的营养培养基组分投料进入发酵种子罐内,加水,接种培养菌,在28~37℃培养24~48h,获得菌种培养液;其中,以g/mL计,营养培养基组分占水的3~6%,培养菌占水的0.25~0.5%;所述培养菌为枯草芽孢杆菌粉、多粘芽孢杆菌粉、地衣芽孢杆菌粉、乳酸菌粉、酵母菌粉和酪酸梭菌粉中的一种或两种以上的混合,培养菌的总活菌数≥1.0×1010 cfu/g;
S5.4中草药及发酵物料混匀:同时向混料罐内添加S5.3获得的菌种培养液和S5.2后处理的营养培养基组分,另外利用上料机向混料罐内添加中草药,然后搅拌(速率90~100rpm/min)混合(20~30min);其中,以质量百分比计,营养培养基组分占中草药的10~15%;以ml/g计,菌种培养液占中草药的30~40%;所述中草药为不会对培养菌生长产生抑制作用的一种或多种中草药复方;
S5.5发酵袋分装和车间发酵:将混料罐内混匀的物料送至分装机分装入发酵袋,所述发酵袋为顶部设置有气体单向阀的透明塑料袋;将已分装结束的发酵袋直接运输至发酵车间,在发酵车间内将发酵袋排列堆放,要求发酵车间内30~37℃恒温和避光,发酵15~30d,发酵结束后发酵袋内容物即为微生态制剂。
较好地,在上述工艺步骤基础上,S2.3卵黄液酸化分层和抗体提取工序在步骤(d)之后包括步骤(e)两罐体清洗和灭菌:两罐体清洗时,打开喷淋液进口I和喷淋液进口II,将洁净水经喷淋头I和喷淋头II进入两罐体进行清洗,待两罐体清洗结束时,开启罐体气压动力装置将罐体I内的洗涤水输入罐体II内,再开启电磁阀将罐体II内洗涤水经管路输入储罐I进行排出;待两罐体清洗结束后进行高温蒸汽灭菌,操作方法同S2.2之(a);整个制备工艺还可以包括卵黄抗体的制备,步骤如下:
S6.1过滤:动力泵IX将储罐II内临时储存的中层流体即卵黄抗体提取液经管路输送至过滤组件内依次通过过滤器I、过滤器II、过滤器III实现粗过虑和精过滤;
S6.2真空冷冻干燥:将S6.1制取的滤液经管路输送进入真空冷冻仪内,并加入冻干保护剂,进行真空冷冻干燥;其中,所述冻干保护剂为葡萄糖,以g/mL计,葡萄糖占滤液的3~5%;
S6.3卵黄抗体成品储存:真空冷冻干燥后制得成品,成品临时输送到成品储罐内储存。
较好地,弱酸性蒸馏水为pH值为4.0~6.0的无菌蒸馏水;酸化液为1mol/L盐酸进行调节的无菌纯化水,酸化液终pH值为3.2~4.0;正辛酸试剂液为体积百分比浓度0.35~0.39%的正辛酸水溶液;该正辛酸水溶液可由正辛酸溶解在40~50℃的温水中制备而成。
辛酸在水中溶解度极低(0.062g/L),因此在水溶性物质中辛酸残留量极微。在医学工业中辛酸已被广泛应用,对生物不具毒副作用。辛酸法是目前广泛应用的IgY提取方法。辛酸法的原理是利用IgY的特殊化学性质进行的:在低离子强度、pH值酸性条件下,辛酸可与绝大多数的卵黄蛋白发生反应,形成不可逆的沉淀,只有IgY不发生反应,留在上清液中,离心除去沉淀,收集上清液,再进行后续的抗体纯化和制备。
本发明生产***就是依据辛酸法制取卵黄抗体的工艺要求,针对其抗体前提取过程的特点而设计,其中涉及的卵黄抗体提取装置部分完全满足产业化进行卵黄抗体前提取工艺中的事项要求,适于鸭病毒性肝炎、黄病毒病、新城疫、法式囊病等卵黄抗体的提取;此外,针对辛酸法卵黄抗体提取过程中产生的副产物,在本发明生产***中也到了合理设计,副产物得到巧妙到利用。
有益效果:
1、本发明依据中草药固体发酵生产微生态制剂原理和微生物营养学的原理进行设计,巧妙地将卵黄抗体提取副产物应用到中草药微生态制剂发酵中,实现了卵黄抗体提取副产物与固体发酵工艺的有机结合,充分综合利用卵黄抗体提取副产物,变废为宝,大大提升了蛋类产品的开发价值,节约工业化生产成本,降低环境污染,增加就业岗位。从微生物营养学考究,本发明工艺利用卵黄抗体提取副产物所制备的营养培养基组分可完全满足规模化中草药固体发酵中的益生菌的营养需求,发酵成品中的益生菌检测指标均符合企业标准要求;
2、本发明生产***中抗体提取装置部分还具有如下优点:
①具有结构精密、坚固耐用、易于规模流程标准化操作使用、可连续化操作、显著提高卵黄抗体前提取效率,降低劳动强度的特点;
②还具有密封性高、降低外界微生物或杂质污染、保证产品质量的优点,同时该装置的特性(卵黄自动稀释消毒、流体无菌气压传输、流体密度在线监测、pH耦合试剂输出)极利于卵黄抗体产业化运营,利于卵黄抗体提取生产的标准化;
③在罐体II中,集同一罐体在位冷却、在位灭菌、辛酸自动添加、自动控温、混合搅拌、自动分层出液等多功能于一体,提高抗体提取率,后期抗体纯化过程中抗体损失少,促进卵黄抗体提取生产的标准化,并减少不同规格罐体的配置所造成的不同批次的产品品质影响。
附图说明
图1:本发明生产***的结构示意图;
图2:罐体I及其外界附属***、罐体II及其外界附属***之间连接关系的结构示意图;
图3:固定法兰I的俯视结构示意图;
图4:固定法兰II的俯视结构示意图;
附图标记说明:1-罐体I;1'-罐体II;2-出口腔I;2'-出口腔II;3-基架I;3'-基架II;4-封口法兰I;4'-封口法兰II;5-固定法兰I;5'-固定法兰II;6-垫片I;6'-垫片II;7-螺栓孔I;7'-螺栓孔II;8-螺栓I;8'-螺栓II;9-卵黄液进口;101-温度表插孔I;101'-温度表插孔II;102-温度表I;102'-温度表II;11-罐内灯开关I;11'-罐内灯开关II;12-搅拌电机I;12'-搅拌电机II;13-蒸馏水进口;14-喷淋液进口I;14'-喷淋液进口II;15-高温蒸汽进口;16-罐内灯I;16'-罐内灯II;17-喷淋头I;17'-喷淋头II;18-搅拌轴I;18'-搅拌轴II;19-搅拌桨I;19'-搅拌桨II;20-搅拌桨I';20'-搅拌桨II';21-夹层I;21'-夹层II;22-夹层进口I;22'-夹层进口II;23-夹层出口I;23'-夹层出口II;24-内窥镜I;24'-内窥镜II;25-泵I;25'-泵II;26-恒温水箱I;26'-恒温水箱II;27-进料口;28-气路口;29-pH耦合试剂液进口;30-超声波发射接收器;31-反射板;32-信号转换器;33-时间继电器;34-电磁阀;35-储罐I;35'-储罐II;361-阀门I;362-阀门II;363-阀门III;364-阀门IV;365-阀门V;37-真空泵;38-稳压器;39-压力表;40-空气过滤器;41-pH传感器;42-pH控制器;43-恒流泵;44-流量计I;44'-流量计II;45-试剂罐I;45'-试剂罐II;46-止回阀;47-打蛋器;48-卵黄分离仪;49-卵黄储罐;501-动力泵I;502-动力泵II;503-动力泵III;504-动力泵IV;505-动力泵V;506-动力泵VI;507-动力泵VII;508-动力泵VIII;509-动力泵IX;51-过滤组件;52-真空冷冻仪;53-成品储罐;54-稀释熟化罐I;54'-稀释熟化罐II;55-水解罐I;55'-水解罐II;56-调制罐;57-喷雾干燥机;58-筛分粉碎机;59-混料罐;60-分装机;61-发酵车间;62-板框过滤机;63-发酵种子罐;64-上料机。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的内容进一步详细说明:
如图1~4所示,一种中草药联合卵黄抗体提取副产物发酵制备微生态制剂的生产***:该生产***包括打蛋器47、卵黄分离仪48、卵黄储罐49、动力泵I 501、动力泵II 502、动力泵III 503、动力泵IV 504、动力泵V 505、动力泵VI 506、动力泵VII 507、动力泵VIII508、动力泵IX 509、罐体I 1(用于高免卵黄稀释和消毒)及其外界附属***、罐体II 1'(用于卵黄液酸化分层和抗体提取)及其外界附属***、过滤组件51、真空冷冻仪52、成品储罐53、稀释熟化罐I 54、稀释熟化罐II 54'、水解罐I 55、水解罐II 55'、调制罐56、喷雾干燥机57、筛分粉碎机58、混料罐59、分装机60、发酵车间61、板框过滤机62、发酵种子罐63、上料机64;罐体I 1为圆筒形罐体,材质为不锈钢,耐温≥121℃,耐压≥2个大气压强,罐体I 1的径高比范围为1/4,底部为锥形结构,锥角角度为160度;罐体II 1'为圆筒形罐体,材质为不锈钢,耐温≥121℃,耐压≥2个大气压强,罐体II 1'的径高比范围为1/4,底部为锥形结构,锥角角度为120度;
罐体I 1底部设有出口腔I 2和基架I 3;罐体I 1顶部设有封口法兰I 4,封口法兰I 4上设有固定法兰I 5,封口法兰I 4与固定法兰I 5之间设有垫片I 6,封口法兰I 4与固定法兰I 5上均布有四个螺栓孔I 7,两者之间通过螺栓I 8实现配合连接,固定法兰I 5上设有卵黄液进口9、温度表插孔I 101(内插设有温度表I 102)、罐内灯开关I 11、搅拌电机I12、蒸馏水进口13、喷淋液进口I 14和高温蒸汽进口15;罐体I 1内设有与罐内灯开关I 11配合连接的罐内灯I 16(可耐高温高压和腐蚀)、与喷淋液进口I 14配合连接的喷淋头I17、与搅拌电机I 12配合连接的搅拌轴I 18,搅拌轴I 18下端设有呈弯月状的硬质不锈钢搅拌桨I 19,搅拌桨I 19上方的搅拌轴I 18上通过不锈钢实心支杆对称连接有两层搅拌桨I' 20,搅拌桨I' 20材质为硬质不锈钢,形状为长方形且表面均匀分布有网孔,网孔孔径为5mm;罐体I 1外壁设有夹层I 21,夹层I 21上下两端分别设有夹层进口I 22和夹层出口I23,罐体I 1外壁上同时设有内窥镜I 24,内窥镜I 24一端位于夹层I 21内、另一端伸出夹层I 21;
罐体I 1的外界附属***包括罐外夹层控温装置I,所述罐外夹层控温装置I包括泵I 25和恒温水箱I 26(可控温:50~90℃),夹层出口I 23、恒温水箱I 26、泵I 25、夹层进口I 22通过管路依次串连形成一封闭循环***;
罐体II 1'底部设有出口腔II 2'和基架II 3',出口腔II 2'腔体内径为罐体II1'内径的1/5,出口腔II 2'腔体长度为出口腔II 2'腔体内径的2倍;罐体II 1'顶部设有封口法兰II 4',封口法兰II 4'上设有固定法兰II 5',封口法兰II 4'与固定法兰II 5'之间设有垫片II 6',封口法兰II 4'与固定法兰II 5'上均布有四个螺栓孔II 7',两者之间通过螺栓II 8'实现配合连接,固定法兰II 5'上设有进料口27、温度表插孔II 101'(内插设有温度表I 102')、罐内灯开关II 11'、搅拌电机II 12'、气路口28、喷淋液进口II 14'和pH耦合试剂液进口29;罐体II 1'内设有与罐内灯开关II 11'配合连接的罐内灯II 16'(可耐高温高压和腐蚀)、与喷淋液进口II 14'配合连接的喷淋头II 17'、与搅拌电机II 12'配合连接的搅拌轴II 18',搅拌轴II 18'下端设有呈弯月状的硬质不锈钢搅拌桨II 19',搅拌桨II 19'上方的搅拌轴II 18'上通过不锈钢实心支杆对称连接有一层搅拌桨II' 20',搅拌桨II' 20'材质为硬质不锈钢,形状为长方形;罐体II 1'外壁设有夹层II 21',夹层II21'上下两端分别设有夹层进口II 22'和夹层出口II 23',罐体II 1'外壁上同时设有内窥镜II 24',内窥镜II 24'一端位于夹层II 21'内、另一端伸出夹层II 21';
罐体II 1'的外界附属***包括罐外夹层控温装置II、罐内流体密度超声监测装置、罐体气压动力装置和pH耦合试剂输出装置;
所述罐外夹层控温装置II包括泵II 25'和恒温水箱II 26'(可控温:0~37℃),夹层出口II 23'、恒温水箱II 26'、泵II 25'、夹层进口II 22'通过管路依次串连形成一封闭循环***;
所述罐内流体密度超声监测装置包括超声波发射接收器30、反射板31、信号转换器32、时间继电器33和电磁阀34,超声波发射接收器30和反射板31设在出口腔II 2'中部相对两侧,电磁阀34位于出口腔II 2'末端,超声波发射接收器30通过信号线依次串连信号转换器32、时间继电器33和电磁阀34,电磁阀34则再通过两支管路分别连接有储罐I 35(用于存储卵黄抗体提取废弃副产物)和储罐II 35'(用于存储卵黄抗体前提取液),电磁阀34连接储罐I 35的管路上设有阀门I 361,电磁阀34连接储罐II 35'的管路上设有阀门II 362;
所述罐体气压动力装置包括真空泵37、稳压器38、压力表39、阀门III 363和空气过滤器40(滤孔孔径为0.2μm),真空泵37通过管路依次串连稳压器38、压力表39、阀门III363和空气过滤器40至气路口28;
所述pH耦合试剂输出装置包括pH传感器41、pH控制器42、恒流泵43、流量计I 44、阀门IV 364、阀门V 365、试剂罐I 45和试剂罐II 45',pH传感器41设在罐体II 1'外壁上,pH传感器41一端位于夹层II 21'内,另一端伸出夹层II 21'后通过信号线依次串连pH控制器42、恒流泵43,恒流泵43的输入端通过两支管路分别连接试剂罐I 45(存储酸化液)和试剂罐II 45'(存储正辛酸试剂液),试剂罐I 45连接恒流泵43的管路上设有阀门IV 364,试剂罐II 45'连接恒流泵43的管路上设有阀门V 365,恒流泵43的输出端则通过管路再串连流量计I 44至pH耦合试剂液进口29;
过滤组件51由过滤器I、过滤器II、过滤器III依次串连而成,过滤器I、过滤器II、过滤器III均为市购常规圆筒过滤器;过滤器I、过滤器II、过滤器IIII的过滤孔径分别为0.65μm、0.45μm、0.22μm;
打蛋器47通过管路依次串连卵黄分离仪48、卵黄储罐49、动力泵I 501至罐体I 1的卵黄液进口9,罐体I 1的出口腔I 2通过管路依次串连止回阀46、流量计II 44'至罐体II1'的进料口27;
卵黄分离仪48在与卵黄储罐49连接的同时,通过另一支路依次串连动力泵II502、稀释熟化罐I 54、动力泵III 503、水解罐I 55、动力泵IV 504、调制罐56、动力泵V505、喷雾干燥机57、筛分粉碎机58、混料罐59、分装机60、发酵车间61;
罐II 1'的储罐I 35通过管路依次串连动力泵VI 506、稀释熟化罐II 54'、动力泵VII 507、板框过滤机62、水解罐II 55'、动力泵VIII 508至调制罐56的顶端;罐体II 1'的储罐II 35'再通过管路依次串连动力泵IX 509、过滤组件51、真空冷冻仪52和成品储罐53;
筛分粉碎机58在与混料罐59连接的同时,通过另一支路串连发酵种子罐63至混料罐59的顶端,混料罐59的顶端同时与上料机64相连。
一种利用所述生产***制备卵黄抗体的工艺,该工艺包括卵黄抗体提取副产物的制备、卵黄抗体提取副产物的加工、卵黄抗体提取副产物联合中草药固体发酵生产微生态制剂三部分;其中,所述卵黄抗体提取副产物的制备包括蛋清液的分离获取和卵黄液酸化分层物的分离获取,所述卵黄抗体提取副产物的加工包括蛋清液的加工和卵黄液酸化分层物的加工;
所述蛋清液的分离获取包括如下步骤:
S1.1消毒和清洗处理:打蛋前利用人工将破损和有异味的鸡蛋进行挑选剔除,然后首先利用自来水将预处理的高免鸡蛋进行初洗,清除蛋壳上的杂质,再利用质量百分比浓度3%的双氧水进行蛋壳消毒处理,最后使用纯化水做蛋壳的清洗工作;
S1.2打蛋:将清洗后的高免鸡蛋置于打蛋器47进行打蛋,打蛋器47为市购常规打蛋设备,该工序中打蛋速率控制在15枚/分钟;
S1.3卵黄分离:将打蛋工序后的高免鸡蛋传输至卵黄分离仪48内,进行卵黄和蛋清的分离,分别获得卵黄和蛋清液,然后对卵黄进行搅拌获得卵黄液;卵黄分离仪48为市购常规蛋清蛋黄分离装置,操作环境洁净度为十万级;
所述卵黄液酸化分层物的分离获取包括如下步骤:
S2.1卵黄临时储存:将S1.3获得的卵黄液经管路输送至卵黄储罐49内临时储存,卵黄储罐49内温度为20℃;
S2.2卵黄稀释和消毒:
(a)关闭阀门I 361、阀门II 362、阀门III 363、阀门IV 364、阀门V 365和固定法兰I 5及固定法兰II 5'上的所有进口,打开高温蒸汽进口15,使高温灭菌蒸汽先进入罐体I1,后经出口腔I 2、管路由进料口27进入罐体II 1',进而进行罐体I 1、罐体II 1'和管路灭菌工序;
(b)灭菌工序后,待罐体I 1罐温下降至60℃时关闭出口腔I 2,由罐体I 1前工序中的动力泵I 501提供动力将卵黄液经卵黄液进口9输进(输送流速为800mL/min)罐体I 1,输入完毕关闭卵黄液进口9;
(c)仍关闭出口腔I 2,同时开启搅拌电机I 12和泵I 25,搅拌电机I 12带动搅拌轴I 18进行搅拌(转速为80 rpm/min),同步将一定体积(卵黄液体积的4倍)的弱酸性蒸馏水(pH值为4.0的无菌蒸馏水)经蒸馏水进口13输入罐体I 1内,搅拌速率由慢至快(90 rpm/min→110 rpm/min)设定转速,泵I 25同步将在恒温水箱I 26加热到预定设置温度(70℃)的热水经管路由夹层进口I 22输入进夹层I 21,再由夹层出口I 23经管路输回恒温水箱I26,控制一定时间(35min)进而达到卵黄稀释液的消毒作用;
S2.3卵黄液酸化分层和抗体提取:
(a)先开启泵II 25',泵II 25'将在恒温水箱II 26'制冷到预定设置温度(35℃)的温水经管路由夹层进口II 22'输入进夹层II 21',再由夹层出口II 23'经管路输回恒温水箱II 26';待罐体II 1'内温度下降到工艺要求(35℃)时关闭泵II 25',打开阀门III363和启动真空泵37,待罐体II 1'的上端压力表39指针指向高负压时打开罐体II 1'的出口腔II 2',稍打开卵黄液进口9,S2.2处理后的卵黄稀释液便由出口腔I 2经管路通过进料口27输入罐体II 2'内;
(b)关闭真空泵37、阀门III 363、卵黄液进口9、出口腔I 2和进料口27,开启搅拌电机II 12'和恒流泵43,打开阀门IV 364,搅拌轴II 18'匀速转动(转速为100 rpm/min),酸化液(1mol/L盐酸进行调节的无菌纯化水,酸化液终pH值为(4.0)由试剂罐I 45经管路通过pH耦合试剂液进口29恒速输入罐体II 1'内,待混合液pH值达到设定值(5.0)时,pH传感器41将信号传至pH控制器42,由pH控制器42经信号线控制并关闭恒流泵43,关闭阀门IV364和搅拌电机II 12';再开启泵II 25',泵II 25'将在恒温水箱II 26'制冷到预定设置温度(4℃)的冷水经管路由夹层进口II 22'输入进夹层II 21',再由夹层出口II 23'经管路输回恒温水箱II 26',不断调节泵II 25'使罐体II 1'内温度继续下降到工艺所需温度值(4℃)并保持工艺既定时间(20h);
(c)保持工艺既定时间结束时罐体II 1'内的流体已完成分层(下层为沉淀、上层为上清液),启动罐内流体密度超声监测装置,罐内流体密度超声监测装置可在线监测到分层的流体密度的差异,然后信号转换器32将根据监测到的不同信号转换成不同指令经时间继电器33自动控制电磁阀34进而自动控制不同密度流体从出口腔II 2'末端流出罐体II1';首先打开阀门I 361,罐内流体密度超声监测装置可在线监测到下层沉淀部分流体使得控制电磁阀34进而完成该流体经管路进入储罐I 35进行临时存储的工作,待下层沉淀部分流体排出罐体II 1'后电磁阀34会听从指令及时关闭,关闭阀门I 361,保证上清液不得排出;
(d)开启搅拌电机II 12'和恒流泵43,打开阀门V 365,搅拌轴II 18'匀速转动(转速100 rpm/min),正辛酸试剂液(正辛酸水溶液,体积浓度0.35%)由试剂罐II 45'经管路通过pH耦合试剂液进口29恒速输入罐体II 1'内,待罐体II 1'内上清液pH值达到设定值(4.0)时,pH传感器41将信号传至pH控制器42,由pH控制器42经信号线控制并关闭恒流泵43,关闭阀门V 365和搅拌电机II 12',按照工艺要求时间(10h)静止;待工艺既定静止时间结束时,罐体II 1'内的流体再次分层(下层为沉淀、中层为上清液、顶层为悬浮物),启动罐内流体密度超声监测装置,罐内流体密度超声监测装置可在线监测到分层的流体密度的差异,然后由信号转换器32将根据监测到的不同信号转换成不同指令经时间继电器33自动控制电磁阀34进而自动控制不同密度流体从出口腔II 2'末端流出罐体II 1',下层沉淀部分流体排出罐体II 1'的操作参照S2.3之(c),下层沉淀部分流体排出后及中层上清液排出前先关闭阀门I 361并打开阀门II 362,进而保障中层流体顺利进入储罐II 35'进行临时储存(该步骤已完成卵黄抗体前提取工序);同样顶层悬浮物也可根据相同原理经管路进入储罐I 35进行临时存储;;储罐I内临时存储的物料即为卵黄液酸化分层物;
(e)两罐体清洗和灭菌:两罐体清洗时,打开喷淋液进口I 14和喷淋液进口II14',将洁净水经喷淋头I 17和喷淋头II 17'进入两罐体进行清洗,待两罐体清洗结束时,开启罐体气压动力装置将罐体I 1内的洗涤水输入罐体II 1'内,再开启电磁阀34将罐体II1'内洗涤水经管路输入储罐I 35进行排出;待两罐体清洗结束后进行高温蒸汽灭菌,操作方法同S2.2之(a);
所述蛋清液的加工包括如下步骤:
S3.1蛋清液稀释和熟化:将经卵黄分离仪48获取的蛋清液由动力泵II 502提供动力经管路进入稀释熟化罐I 54内,再向其内加水稀释蛋清液,蛋清液与水的体积百分比为20%;蛋清液稀释后进行升温熟化,熟化温度为80℃,保持时间为30min;整个S3.1工序中全程搅拌(速率为90 rpm/min);
S3.2水解:将S3.1获得的蛋清液作为底物I,由动力泵III 503提供动力经管路进入水解罐I 55内,向其内加入复合酶I,而后再加1M NaOH溶液升高体系的pH值至8,在50℃下水解4h;其中,所述复合酶I为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物,木瓜蛋白酶(市购)和碱性蛋白酶(市购)的酶活力分别为80万U/g和20万U/g,木瓜蛋白酶和和碱性蛋白酶的质量比为3:1;以g/mL计,复合酶I占底物I的6%;整个S3.2工序中全程搅拌(速率为90 rpm/min);
S3.3酶灭活:升高水解罐I 55罐体温度达100℃,使复合酶I活性灭活;
所述卵黄液酸化分层物的加工包括如下步骤:
S4.1卵黄液酸化分层物稀释和熟化:将储罐I 35内的卵黄液酸化分层物由动力泵VI 506提供动力经管路进入稀释熟化罐II 54'内,再向其内加水稀释卵黄液酸化分层物,以g/mL计,卵黄液酸化分层物占水的30%;卵黄液酸化分层物稀释后进行升温熟化,熟化温度为100℃,保持时间为20min;待熟化过程结束后降温至室温,再加入1M NaOH溶液使体系pH值为中性;整个S4.1工序中全程搅拌(速率为90 rpm/min);
S4.2板框过滤:将S4.1工序获得的中性熟化液由动力泵VII 507提供动力经管路进入板框过滤机62内(输入压力达0.3Mpa)进行连续性过滤,进而获得固形物;
S4.3水解:将S4.2工序获得的固形物投料至水解罐II 55'内,加水和氯化钙,保证钙离子在水中浓度达20mM,固形物与水以g/mL计为25%,获得底物II;加入复合酶II,而后再加1M NaOH溶液升高体系的pH值至7,在50℃下水解3h;其中,所述复合酶II为木瓜蛋白酶(市购)和磷脂酶A2(市购)的混合物,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的酶活力分别为80万U/g和50万U/g,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的质量比为2:1;以g/mL计,复合酶II占底物II的6%;整个S4.3工序全程搅拌(速率为90 rpm/min);
S4.4酶灭活:升高水解罐II 55'罐体温度达100℃,使复合酶II活性灭活;
所述卵黄抗体提取副产物联合中草药固体发酵生产微生态制剂包括如下步骤:
S5.1营养培养基组分的配制:将S3.3和S4.4获得的两种水解液全部分别由动力泵IV 504和动力泵VIII 508经管路输入调制罐56内,然后以g/mL计,分别加入占混合水解液18%的红糖、7%的葡萄糖、9%的磷酸氢二钾、0.8%的七水硫酸镁、2%的氯化钠、10%的柠檬酸二铵、0.5%的氯化铵、4%的吐温-80,然后搅拌(速率90 rpm/min)混合并将pH值调至7.0;
S5.2营养培养基组分的后处理:将配制好的营养培养基组分由动力泵V 505经管路输送至喷雾干燥机57进行喷雾干燥,喷雾干燥条件为:进口温度160℃,出口温度80℃;然后再将喷雾干燥后获得的固形物送至筛分粉碎机58进行筛分粉碎,粉碎目数为100目;
S5.3菌种培养:将S5.2后处理的营养培养基组分投料进入发酵种子罐63内,加水,接种培养菌,在35℃培养36h,获得菌种培养液;其中,以g/mL计,营养培养基组分占水的5%,培养菌占水的0.3%;所述培养菌为枯草芽孢杆菌粉与酵母菌粉质量比1:1的混合菌,培养菌的总活菌数1.0×1010 cfu/g;
S5.4中草药及发酵物料混匀:同时向混料罐59内添加S5.3获得的菌种培养液和S5.2后处理的营养培养基组分,另外利用上料机64向混料罐59内添加中草药,然后搅拌(速率90 rpm/min)混合(25min);其中,以质量百分比计,营养培养基组分占中草药的10%;以ml/g计,菌种培养液占中草药的35%;所述中草药为板蓝根、黄芪、淫羊藿三味中草药的混合物,板蓝根:黄芪:淫羊藿的质量比为2:2:1;
S5.5发酵袋分装和车间发酵:将混料罐59内混匀的物料送至分装机60分装入发酵袋,所述发酵袋为市购顶部设置有气体单向阀的透明塑料袋;将已分装结束的发酵袋直接运输至发酵车间61,在发酵车间61内将发酵袋排列堆放,要求发酵车间61内37℃恒温和避光,发酵15d,发酵结束后发酵袋内容物即为微生态制剂。
上述制备工艺中还可以包括卵黄抗体的制备,步骤如下:
S6.1过滤:动力泵IX 509将储罐II 35'内临时储存的中层流体即卵黄抗体提取液经管路输送至过滤组件51内依次通过过滤器I、过滤器II、过滤器III实现粗过虑和精过滤,过滤器I、过滤器II、过滤器III的输入压力为0.2Mpa;
S6.2真空冷冻干燥:将S6.1制取的滤液经管路输送进入真空冷冻仪52内,并加入冻干保护剂,先在-40℃预冻,然后在-50℃、真空度为10Pa的条件下冻干干燥:其中,所述冻干保护剂为葡萄糖,以g/mL计,葡萄糖占滤液的5%;
S6.3卵黄抗体成品储存:真空冷冻干燥后制得成品,成品临时输送到成品储罐53内储存,成品储罐53内环境温度为4℃、置有独立干燥剂。
效果验证:
1、对S5.5制备获得的微生态制剂进行检测,结果表明:发酵结束后的固体中草药微生态制剂中的总活菌数达1.2×1010 cfu/g,枯草芽孢杆菌和酵母菌的活菌数量比为1.3:1,发酵后的微生态制剂有明显的醇香气味,各项指标符合企业标准要求。
2、动物实验:
从同一品种的发病鸡群中挑选体重均匀,症状表现程度相近,饲养管理条件相同,未曾使用任何药物治疗,经临床观察、实验室诊断确诊为鸡传染性法氏囊病的病鸡180只,随机分为6组,每组30只,其中设立使用无经过发酵的市购扶正解毒散进行治疗的为对照组,另外5组对比试验分别使用本发明S5.5制备的微生态制剂进行治疗,该5组对比试验采用的治疗量分别为对照组的1(一组)、0.9(二组)、0.8(三组)、0.7(四组)、0.6(五组)倍。本整体试验中给患病鸡统一饲喂和卫生管理,让鸡自由采食及饮水,连续治疗观察7d,对照组中扶正解毒散每天治疗使用一次,用量1g/鸡(只),拌食,对比试验组参考对照组。治疗中,将所有试验鸡转入“饲养隔离栏”中饲养,所有试验人员和饲养员进行严格的消毒和防护措施(穿戴隔离服,一次性口罩和手套)。死亡鸡、鸡粪、试验污物等均在指定区域内消毒、焚烧和掩土深埋。
诊断标准:
1、临床症状:精神不振,翅膀下垂,羽毛蓬乱,怕冷,采食下降,发病鸡排水样、米汤样白色粪便,粪便污染肛周羽毛,严重脱水,趾爪干瘪,饮水增加;
2、剖检病变:剖检后可见病死鸡脱水,胸肌和腿肌有条纹状或斑状出血;腺胃与肌胃交界处有溃疡和出血斑,肠粘膜出血,肾肿大,苍白;输尿管扩张充满白色尿酸盐;法氏囊肿大,外被黄色透明的胶冻物;内褶肿胀、出血、内有炎性分泌物或黄色干酪样物;发病后期法氏囊萎缩或法氏囊囊壁变薄。
疗效标准:
(1)死亡率:用药后,鸡只出现法氏囊病的典型症状并死亡,尸体剖检有典型特征性病变,则判定为死亡;根据每组中的死亡数占该组鸡只总数即得死亡率。
(2)治愈率:用药后鸡只精神活泼,采食、饮水正常,羽毛有光泽,粪便正常,则判定为治愈;根据每组中的治愈数占该组鸡只总数即得治愈率。
实验结果为:对照组和对比试验第一组至第五组的死亡率分别为10.1%、8.7%、9.2%、9.8%、10.4%,11.0%,其治愈率分别为87.2%、90.8%、90.0%、89.6%、87.8%、86.5%。结果表明:本发明实施例中的固体微生态制剂(发酵型扶正解毒散)能够较好地起到治疗鸡传染性法氏囊病,且0.8倍和0.9倍的对照组计剂就可以达到对照组的疗效。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。