CN106176837B - 一种药物组合物、其制备方法及应用 - Google Patents

一种药物组合物、其制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种药物，具体涉及一种药物组合物，所述药物组合物包括南方红豆杉叶提取物和药学上可接受的载体，其中，所述南方红豆杉叶提取物的重量百分比为0.1‑99.9％。所述药物组合物来源天然，制备工艺简单，且对细胞的毒性低，具有较强的防治神经退行性疾病的作用，具有广阔的应用前景。

Description

一种药物组合物、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及药学领域，具体涉及一种药物组合物、其制备方法及应用。
背景技术
神经退行性疾病(Neurodegenerative diseases，NDD)是以神经元进行性变性、死亡为基础的一类慢性中枢神经***疾病，以影响患者的认知功能或运动功能为主，主要包括阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)、亨廷顿病病(Huntington disease)、脊髓小脑共济失调(spinal cerebellar ataxias)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)及脊髓肌萎缩症(spinalmuscularatrophy)等。这类疾病的临床表现、病变特征虽不尽相同，但它们均有的共同特征是：神经元的进行性变性坏死，神经胶质细胞显著增殖活化，至今无理想的防治药物，患者致残、致死率高。
目前该类疾病的发病机制尚不明确，老化、炎症、遗传、环境毒素等多种复合因素是该类疾病的共同致病因素，病理机制均包括神经元、神经胶质细胞功能受损、轴突传递功能障碍、谷氨酸兴奋性毒性、活性氧(ROS)水平过高、代谢通路受损、线粒体能量产生减少、错误折叠蛋白质形成增加或降解不充分等。神经退行性疾病严重危害人类健康，给患者、家属和社会带来了极大的心理和经济负担，发展防治神经退行性疾病的药物备受重视。
南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)又称美丽红豆杉，系裸子植物亚门松杉纲红豆杉目红豆杉科红豆杉属植物，特产于我国，主要分布于长江流域、南岭山脉山区以及河南、陕西(秦岭)、甘肃等省的山地或溪谷，是红豆杉属中生长最快、分布最广的植物。
南方红豆杉叶中除含紫杉醇等小分子活性物质外，还发现南方红豆杉叶中含有的活性多糖具有提高免疫、保护肝脏、抗肿瘤等活性，但目前尚未有叶中多糖防治神经退行性疾病的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种药物组合物、其制备方法及应用，所述药物组合物有免疫抑制活性的作用，对细胞的毒副作用小，具有广泛的应用前景。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括南方红豆杉叶提取物和药学上可接受的载体，其中，所述南方红豆杉叶提取物的重量百分比为0.1-99.9％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.8％、1％、2％、5％、8％、10％、13％、15％、18％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、98％、99％或99.9％。
本发明中，南方红豆杉叶提取物化学成分众多，有着传统中药复方配伍使用的效果，作为一种天然药，相比于单一的药物，毒副作用小，具有增强免疫的功效，且防治神经退行性疾病的功能是南方红豆杉叶提取物特有的功效，南方红豆杉其他部位并没有此效果。
优选地，所述南方红豆杉叶提取物的重量百分比为1-90％，优选为20-85％，进一步优选为40-80％。
优选地，所述南方红豆杉叶提取物为水提取物和/或中药浸膏。
优选地，所述药学上可接受的载体为甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠、一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐及其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司班-80、蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、植物油、磷脂、聚乙二醇磷脂及其衍生物、油酸及油酸盐、抗氧化剂、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、维生素C或离子络合剂中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述植物油为大豆油、中链油、橄榄油、茶油、棕榈油、当归油、沙棘油、莪术油、川芎油、薏米仁油、红花油、花椒油、大蒜油中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、人工合成磷脂中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述聚乙二醇磷脂为聚乙二醇-脑磷脂、聚乙二醇-胆固醇、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯、聚乙二醇-脂肪酸酯、聚乙二醇-脂肪胺或聚乙二醇-脂肪醇中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述抗氧化剂为维生素E。
优选地，所述药物组合物为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、***剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂中的任意一种或至少两种的组合。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的药物组合物的制备方法，所述南方红豆杉叶提取物的提取方法为水提、层析、真空提取、超临界流体萃取法、超声提取法、酶法提取、微波提取法、荷电提取法或半仿生提取法中的任意一种或至少两种的组合，优选为水提。
优选地，所述南方红豆杉叶提取物的提取方法包括以下步骤：
所述南方红豆杉叶提取物的提取方法包括以下步骤：
取南方红豆杉叶，加水煎煮，冷却至室温；在煎煮液中加入沉淀剂，静置后过滤得沉淀物；取沉淀物与水混合，离心，将上清液以15％三氯乙酸水溶液脱蛋白，离心得上清液；所得上清液再加入沉淀剂，过滤得沉淀物，无水乙醇洗涤后真空干燥，即得所述南方红豆杉叶提取物。
优选地，所述南方红豆杉叶与水的重量比为1：(5-15)，例如可以是1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：11、1：12、1：13、1：14或1：15，优选为1：(9-12)。
优选地，所述煎煮的次数为2-5次，例如可以是2次、3次、4次或5次，优选为3次。
优选地，所述煎煮的时间为2-5h，例如可以是2h、3h、4h或5h，优选为2h。
优选地，所述沉淀剂为甲醇、乙醇或丙酮中的任意一种或至少两种的混合，优选为乙醇。
优选地，所述煎煮液中加入沉淀剂至沉淀剂的体积比为40-70％，例如可以是40％、41％、42％、43％、45％、48％、50％、52％、55％、58％、60％、62％、65％、68％、69％或70％，优选为60％。
优选地，所述脱蛋白的温度为1-10℃，例如可以是1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃或10℃，优选为3-7℃，进一步优选为4℃。
优选地，所述真空干燥的温度为20-80℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、25℃、26℃、28℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃或80℃，优选为30-60℃，进一步优选为50℃。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的药物组合物在制备防治神经退行性疾病药物中的应用。
优选地，所述神经退行性疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩脊髓侧索硬化症、亨廷顿病、多发性硬化症、脊髓小脑萎缩症或血管性痴呆病中的任意一种或至少两种的组合。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提取的南方红豆杉叶提取物相比于南方红豆杉其他部位的提取物具有特定的防治神经退行性疾病药物的作用，对小胶质细胞活化的活性的抑制率可达50％以上，且对LPS引起的神经炎症具有抑制作用，对LPS引起的神经损伤具有保护作用；
(2)本发明的药物制备工艺简单，药效显著，显著改善神经退行性疾病模型动物的行为障碍，抑制模型动物中脑多巴胺能神经元的损伤，减轻胶质细胞的活化，具有治疗神经退行性疾病的作用，为神经退行性疾病的临床治疗提供了更多选择，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 本发明药物组合物的制备
所述南方红豆杉提取物的提取方法包括以下步骤：
取南方红豆杉叶，加10倍水量煎煮三次，每次2小时，合并煎煮液，冷却至室温；在煎煮液中加入沉淀剂至含沉淀剂体积比达60％，静置后过滤得沉淀物；取沉淀物与水混合，离心，将上清液以15％三氯乙酸水溶液在4℃下脱蛋白，离心得上清液；所得上清液再加入沉淀剂，过滤得沉淀物，无水乙醇洗涤后真空50℃干燥，即得所述南方红豆杉叶提取物。
将提取得到的南方红豆杉叶提取物与聚乙二醇混合后制作成胶囊剂药物。
实验例2 抑制小胶质细胞活化的验证
BV2细胞为小鼠小胶质细胞系；
Griess试剂：以蒸馏水配制0.1％萘乙二胺，以5％磷酸配制1％对氨基苯磺酸，两者在临用前以1:1等体积混合；
姜黄素，用DMSO配制；
脂多糖LPS，用无菌PBS配制，终浓度为300ng/mL；
实验方法：(1)BV2细胞于含10％新生牛血清的DMEM-F12培养基中培养，于37℃，5％CO2，95％空气，100％相对湿度下生长；
(2)对数生长期的BV2细胞，经消化计数后，以2×104个/孔接种到96孔板中，24小时后加入受试物，1小时后加入LPS，终浓度为300ng/mL，继续培养24小时，收集培养基上清液；
(3)取细胞培养液上液清100μL，加入等体积Griess试剂，室温静置20min，蒸馏水调零，于酶标仪上在540nm处测定OD值，同时以硝酸钠为标准品，测定OD值，计算待测样品中NO2 -的浓度反映NO的浓度。
结果如下表1所示。
表1
由表中结果可见，给药浓度100μg/mL时，本发明药物表现出了明显的抑制小胶质细胞活化的活性，抑制率>50％。
实验例3 对LPS引起的神经炎症和神经元损伤的抑制
脂多糖，用无菌PBS配制，终浓度为100ng/mL；
姜黄素用DMSO配制；
实验方法：
(1)原代海马神经元/胶质细胞混合培养体系的建立：孕18d的SD大鼠胚胎，在解剖镜下分离海马，用移液管进行吹打，直至看不到组织块为止，过滤后接种于24孔板中；
(2)细胞给药处理：上述原代细胞培养7d后，分别与受试物共孵育，3h后加入刺激剂LPS 100ng/mL，5h后取培养基用ELISA试剂盒测IL-1β和TNF-α；
(3)细胞经药物处理7d后，收集培养基用LDH检测试剂检测LDH。
结果如下表2所示。
表2
表中结果显示，本发明药物可明显抑制在LPS刺激下出现的炎症反应，降低培养基中IL-1β、TNF-α水平，在100μg/mL浓度下，对炎症的抑制程度与阳性对照药姜黄素(10-5M)相当；海马神经元/胶质细胞混合培养体系在LPS的刺激下，LDH的释放量明显增加，神经元出现了明显损伤，本发明药物可明显抑制LDH的释放，对神经元有保护作用，在100μg/mL浓度下，对LDH释放的抑制程度与阳性对照药姜黄素相当。
综上所述，本发明的红豆杉叶提取物作为一种天然药物，显著改善神经退行性疾病模型动物的行为障碍，抑制模型动物中脑多巴胺能神经元的损伤，减轻胶质细胞的活化，具有治疗神经退行性疾病的作用，为神经退行性疾病的临床治疗提供了更多选择，具有广阔的应用前景。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (13)

1.一种南方红豆杉叶提取物在制备小胶质细胞活化抑制剂或LDH释放抑制剂中的应用；
所述南方红豆杉叶提取物采用如下方法进行提取，所述方法包括以下步骤：
取南方红豆杉叶，加水煎煮，冷却至室温；在煎煮液中加入沉淀剂乙醇至含沉淀剂体积比达60％，静置后过滤得沉淀物；取沉淀物与水混合，离心，将上清液以15％三氯乙酸水溶液脱蛋白，离心得上清液；所得上清液再加入沉淀剂乙醇，过滤得沉淀物，无水乙醇洗涤后真空干燥，即得所述南方红豆杉叶提取物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述南方红豆杉叶与水的重量比为1：(5-15)。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述南方红豆杉叶与水的重量比为1：(9-12)。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述煎煮的次数为2-5次。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述煎煮的次数为3次。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述煎煮的时间为2-5h。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述煎煮的时间为2h。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脱蛋白的温度为1-10℃。
9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脱蛋白的温度为3-7℃。
10.据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脱蛋白的温度为4℃。
11.据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述真空干燥的温度为20-80℃。
12.据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述真空干燥的温度为30-60℃。
13.据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述真空干燥的温度为50℃。
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