CN106148420A - 一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法 - Google Patents

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石怀月
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Abstract

本发明涉及微生物发酵领域，具体提供了一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法。所述发酵培养基中加入1g/L～1.8g/L的胃蛋白酶，利用乳酸菌在该培养基中发酵培养，能够使得乳酸菌发酵的代谢产物的抑菌活性得到显著提高。

Description

一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法
技术领域
本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法。
背景技术
乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)是一类能在可利用的碳水化合物发酵过程中产生大量乳酸的细菌。大多数乳酸菌是兼性厌氧菌或微需氧菌，不运动也不形成芽孢，它们在人和动物体内是一类重要的微生物。主要定居在嘴、鼻、消化道、肠道和***黏膜中。在这些黏膜环境中，它们不仅不致病，相反还有益于健康，可以抑制一些腐败菌和病原菌，从而维持体内环境尤其是肠道内正常微生态平衡。益生乳酸菌被公认为安全的(generallyrecognized as safe,GRAS)微生物。干酪乳杆菌是重要的益生菌，无论在食品发酵，还是工业乳酸发酵以及医疗保健领域，乳杆菌都被广泛应用。益生乳酸菌制品可产生非特异性免疫调节因子，提高动物的免疫力。研究表明，直接饲喂益生乳酸菌可提高集体的抗体水平，产生干扰素，提高免疫球蛋白浓度和巨噬细胞的活性，增强机体免疫功能和抗病能力。
现有技术对于乳酸菌代谢途径还不清楚，而且其代谢产物对大肠杆菌亦或是金黄色葡萄球菌的抑菌效果不强，主要原因在于菌体数量达不到理想效果，因此抑菌活性有待提高。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法。
为了实现本发明目的，本发明首先提供一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法，所述方法为：在乳酸菌的发酵培养基中加入胃蛋白酶。
作为优选，所述胃蛋白酶的加入量为1g/L～1.8g/L。
进一步地，所述发酵培养基包括以下含量的成分：8-10g/L酪蛋白胨、8-10g/L牛肉膏、4-5g/L酵母粉、15-20g/L葡萄糖、1-2g/L柠檬酸二铵、5-6g/L乙酸钠、2-3g/L K2HPO4、1-2mL/L吐温80、0.5-0.58g/LMgSO4·7H2O、0.2-0.25g/L MnSO4·4H2O。
作为优选，所述发酵培养基的pH为6.5～7.0。
本发明还提供了一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵培养基，所述发酵培养基包括以下含量的成分：10g/L酪蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、2g/L柠檬酸二铵、5g/L乙酸钠、2g/LK2HPO4、1mL/L吐温80、0.58g/L MgSO4·7H2O、0.25g/L MnSO4·4H2O、1g/L～1.8g/L胃蛋白酶。
进一步地，所述发酵培养基的制备方法为：将酪蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、柠檬酸二铵、乙酸钠、K2HPO4、吐温80、MgSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、1g/L～1.8g/L胃蛋白酶溶解于蒸馏水中，得到10g/L酪蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、2g/L柠檬酸二铵、5g/L乙酸钠、2g/L K2HPO4、1mL/L吐温80、0.58g/L MgSO4·7H2O、0.25g/L MnSO4·4H2O、1g/L～1.8g/L胃蛋白酶的培养基；用氢氧化钠调节pH值至7，115℃灭菌20min，贮存备用。
需要说明的是，本发明的有益效果取决于培养基本身，与乳酸菌无关。因此，所使用的乳酸菌可为现有技术中的任意乳酸菌。在本发明的具体实施方式中，所述乳酸菌为发明人参考文献《乳酸制品中乳酸菌分离筛选方法研究》(淮海工学院学报，作者王淑军、韦友共、潘元兵)披露的方法在乳酸制品中分离得到。
本发明的有益效果在于：
本发明通过在培养基中添加适量的胃蛋白酶，使得乳酸菌发酵的代谢产物的抑菌活性得到显著提高。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
1、原料
8g酪蛋白胨、8g牛肉膏、4g酵母粉、15g葡萄糖、1g柠檬酸二铵、5g乙酸钠、2g K2HPO4、1mL吐温80、0.5g MgSO4·7H2O、0.2gMnSO4·4H2O、蒸馏水。
2、制备方法
将酪蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、柠檬酸二铵、乙酸钠、K2HPO4、吐温80、MgSO4·7H2O、MnSO4·4H2O溶解到蒸馏水中，得到含有8g/L酪蛋白胨、8g/L牛肉膏、4g/L酵母粉、15g/L葡萄糖、1g/L柠檬酸二铵、5g/L乙酸钠、2g/L K2HPO4、1mL/L吐温80、0.5g/LMgSO4·7H2O、0.2g/L MnSO4·4H2O的培养基。
按上述配方配置好后，将其pH值用氢氧化钠调节至7，棉塞封口包扎，115℃灭菌20min。
实施例2
1、原料
10g酪蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母粉、20g葡萄糖、2g柠檬酸二铵、6g乙酸钠、3g K2HPO4、2mL吐温80、0.58g MgSO4·7H2O、0.25g MnSO4·4H2O、蒸馏水。
2、制备方法
将酪蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、柠檬酸二铵、乙酸钠、K2HPO4、吐温80、MgSO4·7H2O、MnSO4·4H2O溶解于蒸馏水中，得到含有10g/L酪蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、2g/L柠檬酸二铵、6g/L乙酸钠、3g/L K2HPO4、2mL/L吐温80、0.58g/LMgSO4·7H2O、0.25g/L MnSO4·4H2O的培养基。
按上述配方配置好后，将其pH值用氢氧化钠调节至6.5，然后115℃灭菌20min。
实施例3
将乳酸菌以4％的接种量接种于实施例1所制备的发酵培养基中，37℃下静止培养16-18h即可检测菌浓。
所述乳酸菌为发明人参考文献《乳酸制品中乳酸菌分离筛选方法研究》(淮海工学院学报，作者王淑军、韦友共、潘元兵)披露的方法在乳酸制品中分离得到。
检测平板的制备：将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌两种致病菌种接种于肉汤培养基中，37℃恒温箱培养12h后，用无菌生理盐水稀释成致病菌菌液备用，浓度约为105cfu/mL。用微量移液枪取致病菌液0.1mL置于制备好的营养琼脂检测平板内，用无菌玻璃涂棒将指示菌液在平板上涂布均匀，37℃恒温干燥20min以固定菌液，使菌液渗入培养基表层内，取出后即可进行抑菌试验。
发酵液平板的检测：
采用牛津杯法进行抑菌试验。用镊子夹取无菌牛津杯轻轻放入检测平板培养皿中，在水平放置的平皿中均匀放置4只牛津杯。吸取乳酸菌上清液0.2mL至牛津杯中(注意不要将上清液溢出杯外)。每种致病菌分别做3个重复样，1个对照样，对照样只加液体MRS。然后将加好上清液的培养皿正面放置37℃恒温培养箱中培养24h，观察抑菌圈，测抑菌圈直径。
检测结果见表1。
对比例1
本对比例实验方法同实施例3，区别在于，本对比例所使用的发酵培养基未添加胃蛋白酶。
检测结果见表1。
表1加有胃蛋白酶的抑菌效果
通过对抑菌直径的测定，可计算得出加有胃蛋白酶的培养基中菌体个数为5.6×109cfu/mL。未加入胃蛋白酶的对照组菌浓为4.5～5×106cfu/mL。
可见，通过在培养基中添加适量的胃蛋白酶，能够使得乳酸菌发酵的代谢产物的抑菌活性得到显著提高。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵方法，其特征在于，在乳酸菌的发酵培养基中加入胃蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胃蛋白酶的加入量为1g/L～1.8g/L。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下含量的成分：8-10g/L酪蛋白胨、8-10g/L牛肉膏、4-5g/L酵母粉、15-20g/L葡萄糖、1-2g/L柠檬酸二铵、5-6g/L乙酸钠、2-3g/LK2HPO4、1-2mL/L吐温80、0.5-0.58g/L MgSO4·7H2O、0.2-0.25g/LMnSO4·4H2O。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的pH为6.5～7.0。
5.一种提高乳酸菌代谢产物抑菌活性的发酵培养基，其特征在于，所述发酵培养基包括以下含量的成分：10g/L酪蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、2g/L柠檬酸二铵、5g/L乙酸钠、2g/LK2HPO4、1mL/L吐温80、0.58g/L MgSO4·7H2O、0.25g/L MnSO4·4H2O、1g/L～1.8g/L胃蛋白酶。
6.根据权利要求5所述的发酵培养基，其特征在于，所述发酵培养基的制备方法为：将酪蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、柠檬酸二铵、乙酸钠、K2HPO4、吐温80、MgSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、1g/L～1.8g/L胃蛋白酶溶解于蒸馏水中，得到10g/L酪蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、2g/L柠檬酸二铵、5g/L乙酸钠、2g/LK2HPO4、1mL/L吐温80、0.58g/L MgSO4·7H2O、0.25g/L MnSO4·4H2O、1g/L～1.8g/L胃蛋白酶的培养基；用氢氧化钠调节pH值至7，115℃灭菌20min，贮存备用。
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