CN106148201A - 一种双孢菇液体菌种的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食用菌菌种的制备技术领域,涉及一种双孢菇液体菌种的制备方法,该制备方法是通过斜面培养基、一级二级培养基以及发酵培养基扩繁培养而成,本发明提供的各种培养基的配方能够提供双孢菇菌种生长过程中所需的营养成分,缩短双孢菇液体菌种的生长周期,增强菌种活力;本发明通过加入少量的绿茶提取液,能够有效的防治双孢菇生长过程中的霉菌、杂菌等的产生,且促进双孢菇菌种的生长,菌丝生长速度快,品质好,纯度高。
Description
技术领域
本发明属于食用菌菌种的制备技术领域,涉及一种双孢菇液体菌种的制备方法。
背景技术
双孢菇又称白蘑菇或蘑菇,是世界上栽培面积最大、产量最多,消费最普遍的一种食用菌。双孢菇色泽洁白、质地柔嫩、营养丰富、味道鲜美,含有丰富的蛋白质、多种氨基酸和维生素及矿物质,不仅是一档高档的菌类蔬菜,而且具有清热解毒、消炎润肺、健脑、降低胆固醇等多种保健功能,是理想的保健食品。
随着木屑等价格的上涨,培养固体菌种的价格也随之上涨,且固体菌种培养时间长,发菌速度慢。由于菌丝生长旺盛、菌龄短、出菇气,转潮快,质量与产量明显高于传统的生产方式的液体菌种慢慢赢得了市场和效益。目前,双孢菇液体菌种培养过程中存在培养基各成分比例不合理、容易滋生杂菌等问题,因此,研发一种能够高产优质的生产双孢菇的液体菌种具有大的市场价值。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种双孢菇液体菌种的制备方法。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为:
本发明提供了一种双孢菇液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养5-6d,得双孢菇斜面菌种,划分成斜面菌种块;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养1-2d,然后在20-22℃下静置培养1-2d,得一级培养液;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养2-3d,得二级培养液;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养4-5d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种;
进一步的,所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入8-10mL绿茶提取液,20-28g玉米淀粉,1-2g琼脂,0.2-0.5g酪蛋白水解肽,0.8-1.2g蛋白胨,0.2-0.5g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得。
进一步的,所述一级培养基每1000mL纯净水中加入15-20mL绿茶提取液,蛋白胨7-10g,可溶性淀粉50-55g,甘油5-8g,硫酸镁0.2-0.8g,普鲁兰多糖0.2-0.3g,蔗糖8-12g,盐酸硫胺素0.06-0.08g。
进一步的,所述二级培养基每1000mL纯净水中加入20-25mL绿茶提取液,蛋白胨30-40g,麸皮45-60g,蔗糖18-20g,磷酸二氢钾1.5-2.0g,卡波姆0.06-0.08g。
进一步的,所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏12-15g,15-20g蔗糖,8-10g葡萄渣,10-15mL绿茶提取液,40-50g蛋白胨,柠檬酸锌0.02-0.05g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.8-1.2g。
本发明所使用的绿茶提取液采用以下方法制备而成:将新鲜采摘的绿茶叶加入食盐后研磨,然后用纱布包住研磨后的绿茶,然后加入占绿茶叶重量8倍的水,加入麦饭石粉,聚乙二醇,加热至90-100℃,保温搅拌2h,过滤得滤液,将滤液浓缩至原体积的一半即可。
进一步的,所述食盐的加入量占绿茶叶重量的1%;所述麦饭石粉的加入量占加入水的重量的5%。
进一步的,聚乙二醇的加入量占绿茶叶重量的1.5%。
本发明所述的斜面菌种块的长宽均为2cm。
本发明所使用的葡萄渣为葡萄果汁等加工后的皮渣废弃物,主要是葡萄皮、种子组成。
本发明培养基中含有的绿茶提取液,在制备过程中,首先加入食盐进行研磨,然后进行提取,能够加快绿茶中有效物质的溶出,麦饭石粉中含有大量的微量元素,且对细菌具有强的吸附作用,通过在培养基中加入绿茶提取液,能够防止杂菌的产生,未经发酵的绿茶含有茶多酚,儿茶素、咖啡碱、氨基酸等营养成分,加快双孢菇的出菇速度。
本发明的优点为:
(1)本发明提供的各种培养基的配方能够提供双孢菇菌种生长过程中所需的营养成分,缩短双孢菇液体菌种的生长周期,增强菌种活力;
(2)本发明通过加入少量的绿茶提取液,能够有效的防治双孢菇生长过程中的霉菌、杂菌等的产生,且促进双孢菇菌种的生长,菌丝生长速度快,品质好,纯度高;
(3)本发明提供的方法低碳、绿色环保,产量高。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行进一步的阐述,应该明白的是,下述说明仅是为了解释本发明,并不对其内容进行限定。
本发明所使用绿茶提取液采用以下方法制备而成:将新鲜采摘的绿茶叶加入占绿茶叶重量1%的食盐后研磨(研磨至无明显片状即可),然后用纱布包住研磨后的绿茶,然后加入占绿茶叶重量8倍的水,加入占水的重量5%的麦饭石粉,占绿茶叶重量1.5%的聚乙二醇,加热至90-100℃,保温搅拌2h,过滤得滤液,将滤液浓缩至原体积的一半即可。
实施例1
一种双孢菇液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养5d,得双孢菇斜面菌种,划分成长宽均为2cm的斜面菌种块;
所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入8mL绿茶提取液,25g玉米淀粉, 2g琼脂,0.5g酪蛋白水解肽,0.8g蛋白胨,0.35g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养2d,然后在20-22℃下静置培养1d,得一级培养液;
所述一级培养基每1000mL纯净水中加入20mL绿茶提取液,蛋白胨10g,可溶性淀粉50g,甘油7g,硫酸镁0.6g,普鲁兰多糖0.2g,蔗糖12g,盐酸硫胺素0.06g;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养2d,得二级培养液;
所述二级培养基每1000mL纯净水中加入23mL绿茶提取液,蛋白胨30g,麸皮56g,蔗糖18g,磷酸二氢钾1.5g,卡波姆0.08g;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养5d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种;
所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏12g,15g蔗糖,10g葡萄渣,12mL绿茶提取液,50g蛋白胨,柠檬酸锌0.03g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁1.2g。
实施例2
一种双孢菇液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养6d,得双孢菇斜面菌种,划分成长宽均为2cm的斜面菌种块;
所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入9mL绿茶提取液,20g玉米淀粉,1g琼脂,0.3g酪蛋白水解肽,1.0g蛋白胨,0.5g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养1d,然后在20-22℃下静置培养2d,得一级培养液;
所述一级培养基每1000mL纯净水中加入15mL绿茶提取液,蛋白胨9g,可溶性淀粉53g,甘油5g,硫酸镁0.7g,普鲁兰多糖0.3g,蔗糖8g,盐酸硫胺素0.07g;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养2d,得二级培养液;
所述二级培养基每1000mL纯净水中加入20mL绿茶提取液,蛋白胨35g,麸皮60g,蔗糖19g,磷酸二氢钾1.8g,卡波姆0.07g;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养5d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种;
所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏13g,18g蔗糖,9g葡萄渣,15mL绿茶提取液,46g蛋白胨,柠檬酸锌0.05g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.8g。
实施例3
一种双孢菇液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养5d,得双孢菇斜面菌种,划分成长宽均为2cm的斜面菌种块;
所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入10mL绿茶提取液, 28g玉米淀粉,2g琼脂,0.2g酪蛋白水解肽, 1.2g蛋白胨,0.2g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养2d,然后在20-22℃下静置培养1d,得一级培养液;
所述一级培养基每1000mL纯净水中加入18mL绿茶提取液,蛋白胨7g,可溶性淀粉55g,甘油8g,硫酸镁0.8g,普鲁兰多糖0.3g,蔗糖10g,盐酸硫胺素0.08g;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养3d,得二级培养液;
所述二级培养基每1000mL纯净水中加入25mL绿茶提取液,蛋白胨40g,麸皮45g,蔗糖20g,磷酸二氢钾2.0g,卡波姆0.06g;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养4d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种;
所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏15g,20g蔗糖,8g葡萄渣,10mL绿茶提取液,40g蛋白胨,柠檬酸锌0.02g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁1.0g。
对比例1
一种双孢菇液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养4-5d,得双孢菇斜面菌种,划分成长宽均为2cm的斜面菌种块;
所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入20g玉米淀粉,1g琼脂,0.3g酪蛋白水解肽,1.0g蛋白胨,0.5g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养3d,得一级培养液;
所述一级培养基每1000mL纯净水中加入蛋白胨9g,可溶性淀粉53g,甘油5g,硫酸镁0.7g,普鲁兰多糖0.3g,蔗糖8g,盐酸硫胺素0.07g;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养3d,得二级培养液;
所述二级培养基每1000mL纯净水中加入蛋白胨35g,麸皮60g,蔗糖19g,磷酸二氢钾1.8g,卡波姆0.07g;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养7d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种;
所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏13g,18g蔗糖,9g葡萄渣, 46g蛋白胨,柠檬酸锌0.05g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.8g。
对比例2
一种双孢菇液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养6d,得双孢菇斜面菌种,划分成长宽均为2cm的斜面菌种块;
所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入20g玉米淀粉,1g琼脂,1.0g蛋白胨,0.5g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养4d,得一级培养液;
所述一级培养基每1000mL纯净水中加入蛋白胨9g,可溶性淀粉53g,甘油5g,硫酸镁0.7g,蔗糖8g,盐酸硫胺素0.07g;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养3d,得二级培养液;
所述二级培养基每1000mL纯净水中加入蛋白胨35g,麸皮60g,蔗糖19g,磷酸二氢钾1.8g;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养6d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种;
所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏13g,18g蔗糖,46g蛋白胨,柠檬酸锌0.05g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.8g。
效果实施例:
1、将实施例1-3及对比例1-2的母种在不同的斜面培养基上菌丝的生长情况,具体结果见表1。
表1
上表中,++++表示菌丝浓白、粗壮;+++表示菌丝浓白,细密;++表示菌丝浓白带淡黄,细密有菌索;+表示菌丝灰白,菌索多,菌丝生长势入弱。
2、将实施例1-3及对比例1制备的双孢菇液体菌种接种于菌袋上,设置对照组,对照组接种的双孢菇液体菌种为市售,菌袋的规格均相同,接种量相同,将双孢菇总产量及残菇率进行统计,具体结果见表2。
表2
另外,经过大量的实验发现,当培养基各组分的含量超出本发明所提供的范围时,效果相差不大,过多则造成资源的浪费,低于本发明所提供的范围时,可能营养不充分,效果较差,产量降低。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神做举例说明。所属领域的技术人员应当理解:上述具体实施例并不用于限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何等同替换,改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种双孢菇液体菌种的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将双孢菇母种接种到一级斜面培养基上,24-26℃下培养5-6d,得双孢菇斜面菌种,划分成斜面菌种块;
(2)将5-6块一级杏鲍菇斜面菌种块接种到一级培养基中,在温度20-22℃下摇床培养1-2d,然后在20-22℃下静置培养1-2d,得一级培养液;
(3)将一级培养液按照体积百分含量10%的接种量接种到二级培养基中,在20-22℃下摇床培养2-3d,得二级培养液;
(4)将二级培养液按照体积百分含量15%接种到发酵培养基中培养,在25℃下培养4-5d,通气量2.5m3/h,发酵结束后即得双孢菇液体菌种。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述斜面培养基为每1000mL纯净水中加入8-10mL绿茶提取液,20-28g玉米淀粉,1-2g琼脂,0.2-0.5g酪蛋白水解肽,0.8-1.2g蛋白胨,0.2-0.5g磷酸二氢钾,搅拌均匀,杀菌处理后冷却即得。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述一级培养基每1000mL纯净水中加入15-20mL绿茶提取液,蛋白胨7-10g,可溶性淀粉50-55g,甘油5-8g,硫酸镁0.2-0.8g,普鲁兰多糖0.2-0.3g,蔗糖8-12g,盐酸硫胺素0.06-0.08g。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述二级培养基每1000mL纯净水中加入20-25mL绿茶提取液,蛋白胨30-40g,麸皮45-60g,蔗糖18-20g,磷酸二氢钾1.5-2.0g,卡波姆0.06-0.08g。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述发酵培养基每1000mL纯净水中加入酵母膏12-15g,15-20g蔗糖,8-10g葡萄渣,10-15mL绿茶提取液,40-50g蛋白胨,柠檬酸锌0.02-0.05g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.8-1.2g。
6.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法,其特征在于,所述绿茶提取液采用以下方法制备而成:将新鲜采摘的绿茶叶加入食盐后研磨,然后用纱布包住研磨后的绿茶,然后加入占绿茶叶重量8倍的水,加入麦饭石粉,聚乙二醇,加热至90-100℃,保温搅拌2h,过滤得滤液,将滤液浓缩至原体积的一半即可。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述食盐的加入量占绿茶叶重量的1%;所述麦饭石粉的加入量占加入水的重量的5%。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述聚乙二醇的加入量占绿茶叶重量的1.5%。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述斜面菌种块的长宽均为2cm。
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Date | Code | Title | Description |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
AD01 | Patent right deemed abandoned |
Effective date of abandoning: 20220614 |
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