CN105998083A - 一种蟾酥的提取方法及蟾酥制品 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药领域,公开了一种蟾酥的提取方法,其特征在于,提取步骤如下:先将中药蟾酥药材粉碎、研磨成蟾酥粉,所述蟾酥粉过15~25目筛后使用;以乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次,醇提液减压浓缩至无醇味后以5%盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取多次,脱脂,浓氨水碱化至pH10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得蟾酥粗提物,将蟾酥粗提物用体积比为1:1的氯仿‑甲醇溶液溶解,过LH‑20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得蟾酥提取物,并公开以蟾酥提取物做成复方,还公开了其在制备具有抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域,具体涉及一种蟾酥的提取方法及蟾酥制品。
背景技术
癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一,每年都有大量的人死于癌症。抗癌药物的研发一直是药学研究的热点。抗肿瘤药物中有74%是天然产物或其衍生物,如紫杉醇及其衍生物就是目前临床上应用效果比较好的抗肿瘤药物。因此,从天然产物中寻找抗癌化合物或先导化合物具有重要的意义。
发明内容
发明目的:为了解决上述问题,本发明的目的在于提供一种蟾酥的提取方法及蟾酥制品。
技术方案:本发明的目的是通过如下的方案实现的:
一种蟾酥的提取方法,提取步骤如下:先将中药蟾酥药材粉碎、研磨成蟾酥粉,所述蟾酥粉过15~25目筛后使用;以乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次,醇提液减压浓缩至无醇味后以5%盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取多次,脱脂,浓氨水碱化至pH10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得蟾酥粗提物,将蟾酥粗提物用体积比为1:1的氯仿-甲醇溶液溶解,过LH-20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得蟾酥提取物。
所述蟾酥的提取方法,用于浸泡的乙醇浓度为85-95%。
一种蟾酥制品,它所含的活性成分由下列重量份原料配比制备而成:蟾酥提取物1份、止咳草50份、鱼胆草60份、冬葵果55份、下果藤40份、土香薷60份,蟾酥提取物为上述方法制备而得。
上述蟾酥制品,制备方法步骤为:取上述除蟾酥提取物外其他药材合并,加水煎煮两次,合并煎液,浓缩至65℃时相对密度为1.10-1.20,加入乙醇,搅拌,使含醇量按体积百分比计算达65-85%,静置,过滤,滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.20-1.30并回收乙醇,将浓缩液喷雾干燥,所得颗粒粉碎成干浸膏粉,加入蟾酥提取物和辅料,制成所需制剂。
所述蟾酥制品,制备方法中煎煮条件为:第一次加水量为药材重量的8-12倍量,煎煮1-2h,第二次加水量为药材重量的6-10倍量,煎煮1-2h。
所述蟾酥制品,制备方法中喷雾干燥条件为:进风温度为90-110℃,出风温度为60-90℃,物料温度为60-90℃,雾化压力为0.2-0.5兆帕,喷雾速度为1-10ml/s。
所述蟾酥制品在制备抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞药物中的应用。
蟾酥是蟾蜍表皮腺体的分泌物,白色乳状液体,有毒。干燥后可以入药。
止咳草,拉丁学名Limnophila aromatica(Lam.)Merr.Limnophila gratissima Blume,以全草入药。全年可采,洗净,鲜用或晒干。清肺止咳,解毒消肿。用于感冒,咳嗽,百日咳,毒蛇咬伤,痈疮肿毒。
鱼胆草为龙胆科獐牙菜属植物鱼胆草Swertia davidi Franch.的全草。夏秋采集,鲜用或晒干。清肺热,杀虫。用于湿热黄疸,喉头红肿,恶疮疥癣。
冬葵果为锦葵科植物冬葵Malva verticillata L.的干燥成熟果实。夏、秋二季果实成熟时采收,除去杂质,阴干。清热利尿,消肿。用于尿闭,水肿,口渴;***。
下果藤为鼠李科嘴签属植物大苞嘴签Gouania leptostachya DC.var.tonkinensis Pitard.,以茎、叶入药。全年可采。凉血解毒,舒筋活络。用于肢体麻木;外用治烧烫伤,疮疡。本发明以叶入药。
土香薷为唇形科香薷属植物土香薷Elsholtzia ciliata(Thunb.)Hyland.[E.patrini(Lepech.)Garcke],以全草入药。夏、秋抽穗开花时采割,去净杂质晒干或鲜用。发汗,解暑,利尿。夏季感冒,发热无汗,中暑,急性胃肠炎,胸闷,口臭,小便不利。其余为药典品种。
有益效果:本发明中止咳草、鱼胆草、冬葵果解毒消肿为君药,下果藤、土香薷凉血解毒为臣药,蟾酥为佐使药,诸药相合,用于抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞。
具体实施方式
以下通过实施例形式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明,但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例,凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1:取蟾酥药材1kg粉碎、研磨成蟾酥粉,所述蟾酥粉过15目筛后使用;以85%乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次,醇提液减压浓缩至无醇味后以5%盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取多次,脱脂,浓氨水碱化至pH10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得蟾酥粗提物,将蟾酥粗提物用体积比为1:1的氯仿-甲醇溶液溶解,过LH-20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得蟾酥提取物。
实施例2:取蟾酥药材1kg粉碎、研磨成蟾酥粉,所述蟾酥粉过25目筛后使用;以95%乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次,醇提液减压浓缩至无醇味后以5%盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取多次,脱脂,浓氨水碱化至pH10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得蟾酥粗提物,将蟾酥粗提物用体积比为1:1的氯仿-甲醇溶液溶解,过LH-20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得蟾酥提取物。
实施例3:取蟾酥药材1kg粉碎、研磨成蟾酥粉,所述蟾酥粉过20目筛后使用;以90%乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次,醇提液减压浓缩至无醇味后以5%盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取多次,脱脂,浓氨水碱化至pH10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得蟾酥粗提物,将蟾酥粗提物用体积比为1:1的氯仿-甲醇溶液溶解,过LH-20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得蟾酥提取物。
实施例4:取止咳草50g、鱼胆草60g、冬葵果55g、下果藤40g、土香薷60g药材混合,加水煎煮两次,第一次加水为药材重量的8倍量,煎煮1.5h,第二次加水为药材重量的6倍量,煎煮1h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.10(65℃),加适量乙醇使含醇量(体积分数)达65%,搅拌,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.10(65℃)的浸膏,经喷雾干燥(条件为进风温度为100℃,出风温度为80℃,物料温度为70℃,雾化压力为0.2兆帕,喷雾速度为5ml/s。),粉碎成干浸膏粉,再加入上述实施例1制备的蟾酥提取物2g、糊精50g,用适量80%乙醇润湿,制软材,过14目筛制粒,70℃干燥,60目整粒,得颗粒剂。
实施例5:取止咳草50g、鱼胆草60g、冬葵果55g、下果藤40g、土香薷60g药材混合,加水煎煮两次,第次加水为药材重量的10倍量,煎煮2h,第二次加水为药材重量的8倍量,煎煮1h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.15(65℃),加适量乙醇使含醇量(体积分数)达75%,搅拌,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.25(65℃)的浸膏,经喷雾干燥(条件为进风温度为120℃,出风温度为90℃,物料温度为80℃,雾化压力为0.3兆帕,喷雾速度为7.5/s。),粉碎成干浸膏粉,再加入上述实施例1制备的蟾酥提取物2g、淀粉50g,混合均匀,用适量80%乙醇润湿,制软材,过30目筛制粒,于70~80℃干燥,用60目筛整粒,压片,包糖衣,分装,外包装,送检合格,得成品。
实施例6:取止咳草50g、鱼胆草60g、冬葵果55g、下果藤40g、土香薷60g药材混合,加水煎煮两次,第一次加水为药材重量的10倍量,煎煮1.5h,第二次加水为药材重量的8倍量,煎煮1.5h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.15(65℃),加适量乙醇使含醇量(体积分数)达75%,搅拌,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.25(65℃)的浸膏,经喷雾干燥(条件为进风温度为120℃,出风温度为90℃,物料温度为90℃,雾化压力为0.4兆帕,喷雾速度为7.5/s。),粉碎成干浸膏粉,过6号筛,加入上述实施例1制备的蟾酥提取物2g,再装入1号胶囊即可得成品。
实施例7:抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖的实验研究资料
实验用细胞株:大鼠神经胶质瘤C6细胞,南京医科大学实验动物中心实验室细胞库,DMEM+10%FBS常规培养。
研究药物:按实施例1方法制备。
药液储液:称取100mg本发明,溶于5ml无水乙醇中,0.2μm滤器过滤,500μl doff管分装,-20℃存储,同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
实验试剂:DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419);NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387);Trypsin(AMRESCO公司批号:2010/04);EDTA(AMRESCO公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司批号:2010242);Streptomycin Sulfate(AMRESCO公司批号:2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182);MTT(Biosharp批号:0793);PBS(实验室自配);
实验器材:莱卡倒置显微镜(德国Leica型号:DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRA MAX 190);CO2培养箱(FORMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号:S/N 020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A);冰箱(西门子公司型号:KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号:KA-1000);0.2μm滤器(MILLIPORE型号:SLGP033RB);10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司);细胞计数板;离心管、移液管、Tips若干。
实验方法:1)大鼠神经胶质瘤C6细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养(10cm培养皿),当细胞生长至对数期时,收集细胞,弃去培养液,PBS轻洗3遍,加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA,37℃消化2min后,向其中加入5ml完全培养基中和反应,吹打细胞后将其转入离心管中,1000rpm离心5min,调整细胞悬液浓度3×104个/ml。2)将细胞种入96孔培养板中,每孔加入细胞悬液180μl,培养板放入细胞培养箱中(37℃,5%CO2)常规培养。3)根据细胞生长情况,一般长至50%-70%,加入本发明溶液,继续培养24h。4)24h后加入20μl MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。5)4h后扣板法倒去上清,用吸水纸轻轻拍干,每孔加入200μl二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底(不加细胞,只加培养液),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示:
细胞增值抑制率(%)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值×100%。实验重复3次。
统计处理:采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验,数据以mean±S.D.表示。
实验结果:MTT法实验后统计结果显示,与对照组比较,当剂量达到5mg/ml时,对大鼠肾腺噬铬细胞瘤PC12细胞增殖抑制有差异(P<0.05),剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01),当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
表1本发明对大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖抑制影响研究(X±SD)
注:与对照组比较,*P<0.01;**P<0.001
实验结论:本发明可以抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖,减少大鼠神经胶质瘤C6细胞的细胞生长数目,该作用呈剂量依赖性。
Claims (7)
1.一种蟾酥的提取方法,其特征在于,提取步骤如下:先将中药蟾酥药材粉碎、研磨成蟾酥粉,所述蟾酥粉过15~25目筛后使用;以乙醇10倍量浸泡12h,然后加热煮沸2h,连续3次,醇提液减压浓缩至无醇味后以5%盐酸溶解,抽滤,酸水溶液经石油醚萃取多次,脱脂,浓氨水碱化至pH10,碱水液经三氯甲烷萃取2次,回收溶剂,即得蟾酥粗提物,将蟾酥粗提物用体积比为1:1的氯仿-甲醇溶液溶解,过LH-20凝胶柱,回收溶剂,冷冻干燥,得蟾酥提取物。
2.如权利要求1所述蟾酥的提取方法,其特征在于,用于浸泡的乙醇浓度为85-95%。
3.一种蟾酥制品,其特征在于,它所含的活性成分由下列重量份原料配比制备而成:蟾酥提取物1份、止咳草50份、鱼胆草60份、冬葵果55份、下果藤40份、土香薷60份,蟾酥提取物为上述权利要求1的方法制备而得。
4.如权利要求3所述蟾酥制品,其特征在于,制备方法步骤为:取上述除蟾酥提取物外其他药材合并,加水煎煮两次,合并煎液,浓缩至65℃时相对密度为1.10-1.20,加入乙醇,搅拌,使含醇量按体积百分比计算达65-85%,静置,过滤,滤液减压浓缩至65℃时相对密度为1.20-1.30并回收乙醇,将浓缩液喷雾干燥,所得颗粒粉碎成干浸膏粉,加入蟾酥提取物和辅料,制成所需制剂。
5.如权利要求4所述蟾酥制品,其特征在于,制备方法中煎煮条件为:第一次加水量为药材重量的8-12倍量,煎煮1-2h,第二次加水量为药材重量的6-10倍量,煎煮1-2h。
6.如权利要求4所述蟾酥制品,其特征在于,制备方法中喷雾干燥条件为:进风温度为90-110℃,出风温度为60-90℃,物料温度为60-90℃,雾化压力为0.2-0.5兆帕,喷雾速度为1-10ml/s。
7.如权利要求3所述蟾酥制品在抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞药物中的应用。
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CN108142933A (zh) * | 2018-01-09 | 2018-06-12 | 河南牧农生物科技有限公司 | 一种蟾浆的提取工艺 |
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